Introduction aux techniques dhistologie et de cytologie

Histologie cest ltude des cellules sassociant pour former un tissu.

Les cellules dun tissu sont associes des molcules extra cellulaire et/ou
des liquides biologiques.
Un organe est donc constitu de plusieurs tissus. Plusieurs organes
formant un appareil (ex : digestif, urinaire, respiratoire). Ils ont donc une
fonction particulire.
Histologie vise :
Morphologie pour en dfinir lorganisation
Lorganisation renseigne sur la structure et fonction

I/ Diffrents types de microscope

1 : Microscopie photonique
Microscope de travail (transportable)
Utilise les photons comme particule nergtique.
Coupes de 5-7 micromtres sur des lames de verre.
Microscope de recherche (reli un ordi)
Perfectionn, on peut rajouter une camra
2 : Microscopie lectronique
-A transmission (MET)
Utilise les lectrons comme particules nergtiques.
Intransportable, demande des dispositions particulires.
En revanche il y a des points communs entre ces diffrents microscopes.
Coupes trs fines, puis rcupres sur des grilles de diamtre de 3 mm.
Les lectrons vont ainsi traverser ces coupes ultrafines, permettant de
rechercher lultrastructure de la particule tudie. Ces coupes sont de 60
nm dpaisseur.
En microscopie optique on voit des contrastes, cependant on verra un
cytoplasme color (en MET pas de couleur) en MO on utilise des colorants.
On verra donc une couleur plus ou moins clair ou fonc, mais on ne verra
pas dorganites, tandis quen MET, on les verra.
En MET on voit lintgralit des organites dune cellule (intrieur).
-A balayage (MEB)

Utilise les lectrons, mais ne permet que de voir la surface de lobjet

tudi (alors que MET= intrieur). On peut voir les hmaties,
lymphocytes On peut nanmoins couper lobjet, et voir la surface
intrieure, mais on ne verra que les reliefs.
II/ Prparation des chantillons biologiques avant ltape microscopique
-Prlvement : deux grands types (solide ou liquide)
-Fixation : permet de prserver et de figer la cellule au moment o
on le prlve plus cest rapide, mieux la conservation est efficace. Ds que
lon enlve un organite de son organe, une mort cellulaire sen suit, plus la
fixation est efficace moins la lyse est efficace.
- Inclusion : dans une rsine uniquement dans transmission
1 : Prlvement
Solide : on prlve un morceau dorgane. On a des tissus et cellules
Cest le plus ancien. On pratiquait la ncropsie.
Le prlvement chir dun organe = ectomie
On prend 1cm sur 1 pour lobserver. Il faut choisir lendroit le plus
appropri, cest dire o lon voit une anomalie.
On peut prlever un fragment dorgane sur patient sous anesthsie
(biopsie). On prpare un fixateur pour ainsi rapidement pouvoir le
conserver pour quil ny ait pas dautolyse. On fait ce type de prlvement
pour prvenir une tumeur.
Etude histologique
Liquide : que des cellules. Il y a aura donc moins dtapes, donc plus
rapide (il ny a pas dinclusion)
On fait une ponction laiguille : veineuse, kyste, cavit pleurale ou
pritonale, lombaire, urine Ici on ne parle plus dtude histologique, on
parle dtude chimique ou cytologique
Intermdiaire :
On fait dans tous les cas une tude cytologique.
Frottis vaginal : on racle lorgane avec une spatule ou un
couvillon. On ltale ensuite sur une lame. On peut prlever dans
le col de lutrus et dans le vagin ; on appelle cela un frottis
cervico-vaginal.
Brossage bronchique : sous endoscopie. On va prlever des
cellules pour les tudier. Ils sont principalement observ au
microscope lectronique.
2 : Prparation
Recueil
-

sur la lame de verre par :

talement
empreinte
centrifugation
cytocentrifugaton

On fixe puis on observe

a) Recueil sur lame de verre : talement dun frottis sanguin sur lame de
verre.
On utilise une lame et une lamelle de verre pour taler. On va obtenir des
franges. A partir de ces techniques on va pouvoir faire une tude du sang.
b) Empreinte : on va appliquer dune fraction dun organe sur une lame de
verre : les cellules se collent sur la lame. Ex : analyse du ganglion
lymphatique.
c) Centrifugation des liquides : le but est de sparer les cellules du liquide
pour quelles tombent au fond. On obtient un culot cellulaire, et un
surnageant. On limine ce surnageant, puis avec une poire on choppe un
peu du culot et on va ltaler sur une lame.
d) Cytocentrifugeuse : pas de tube mais accueille un systme avec une
lame de verre, on va dposer un filtre avec un trou. On place ce systme
dans la cytocentrifugeuse. Les cellules vont tre plaques sur le rond de
verre et le liquide va se diffuser autre part. On obtient donc un putain de
rond avec des putains de cellules, et a cest cool.
Fixation :
Prvient lautolyse tissulaire (si on prlve cest une ncrose, clatement
de la cellule car va dtruire via les enzymes libres, la matrice cellulaire)
Immobilise les protines in vivo
Evite la macration
Elle doit tre faite :
Rapidement aprs le prlvement
Rapport 1 5 volume chantillon/volume fixateur (dure de vie
en fonction du volume du prlvement)
Nombreux fixateurs selon techniques
Frottis sanguin fix par schage rapide (air)
Coloration :
Manuelle : (moins frquent)
Automate de coloration : bacs programms en fonction de temps
de coloration
Ex 1 : frottis talement
Coloration de May-Grunwald-Giemsa (MGG), fixe et colore les
noyeaux
Utilisation deau neutre (pH=7)
Noyeaux : violet
Cytoplasme : bleu ou rose
Ex 2 : Frottis vaginal et cervico-vaginal
Fixation et colortion cytologique

Coloration de Papanicolaou