1.

OBJETIVO
Describir los criterios que deben aplicarse para realizar el control de calidad de los
Medios de cultivo que se usan en los ensayos Microbiolgicos.
2. ALCANCE
rea de Microbiologa.
3. DEFINICIONES
3.1. ICA: ndice de crecimiento absoluto
4. REFERENCIAS
4.1. Organizacin Panamericana de la Salud: Gua tcnica para el estudio, Evaluacin
del
riesgo microbiolgico de los alimentos vendidos en la va publica en ciudades de Amrica
Latina. Edic.Revisada Abril 1994, Pg.32-38.
4.2. MERCK Microbiology Manual 12 Th Edition.
5. RESPONSABILIDAD
5.1. El analista de control microbiolgico es el responsable de la correcta ejecucin del presente
instructivo.
5.2. La Jefatura de Control de Calidad es responsable de la supervisin del cumplimiento del
presente instructivo.
6. INSTRUCCIONES
6.1. CONTROL DE MEDIOS SLIDOS
6.1.1. El control de los medios de cultivo slidos se realizar cada vez que ingrese
un nuevo lote, y para medios de cultivo en uso, 1 vez cada 2 meses.
6.1.2. Obtener cultivos frescos de las cepas deseadas y no deseadas (ver anexo
1).
6.1.3. Preparar placas Petri con el medio a ensayar. El medio no debe tener
menos de 4 mm de espesor. Secar las placas en posicin invertida.
6.1.4. Dividir las placas en cuadrantes.
6.1.5. Empleando los cultivos deseados y no deseados y un asa de siembra en
aro, trazar sobre la superficie del medio 5 estras paralelas en cada
cuadrante y una estra central, de forma progresiva sin recargar ni torcer el
asa (ver anexo 2).
6.1.6. Incubar las placas en posicin invertida por el tiempo y temperatura
adecuada segn el microorganismo.
6.1.7. ndice de Crecimiento Absoluto (ICA) :Asignar un valor de 0.2 (precisin del
mtodo) a cada estra. Multiplicar por el nmero de estras en las cuales se
observa crecimiento. Por ejemplo, si hay crecimiento en las cinco estras
de un mismo cuadrante, el valor es 1; si se produce crecimiento completo
en las cinco estras de los cuatro cuadrantes y en la estra central (valor 1),
el ndice de crecimiento absoluto (ICA) es igual a 5.
6.1.8. Calcular el ICA con la suma de los valores obtenidos.
6.1.9. Evaluar los medios de cultivo slidos
segn su productividad y
selectividad. Un medio presenta una productividad aceptable cuando el ICA
de todas las cepas en un medio de cultivo no selectivo sea por lo menos
igual a 3. Para hallar la Selectividad, utilizar medios en los cuales el ICA de
las cepas no deseadas en los medios selectivos no sea superior a 2. El ICA
de las cepas deseadas no debe ser inferior a 2,5.(Ver Anexo 1).
6.1.10. El ndice ecomtrico buscado es el que est mas cerca posible a 5 para los
microorganismos deseados y ms cercanos a 0 para los no deseados.
Cuando el ICA se encuentra muy cerca de los lmites de aceptabilidad,
verificar si no hubo problemas en la preparacin del medio de cultivo, en
la ejecucin del ensayo, en la incubacin en el secado de placas, etc.
6.1.11. En el caso de Agar tripticasa de soya se evaluar la productividad.

6.1.12. En el caso de que un frasco de un nuevo lote no cumpla con lo especificado

en este instructivo, ser considerado como NO CONFORME, se informar
inmediatamente al Jefe de Seccin y/o Supervisor para que ste sea
inmediatamente devuelto al proveedor .En el caso de que un medio de
cultivo en uso no cumpla con lo especificado en este instructivo, ser
considerado como NO CONFORME, del mismo modo se informar al Jefe
de Seccin y/o Supervisor y ste ser descartado. Se considerar que un
medio de cultivo es aceptable CONFORME si cumple con lo especificado
en este instructivo.
6.2. CONTROL DE MEDIOS LQUIDOS.
6.2.1. Para el caso de medios lquidos, solo se observar crecimiento de los
microorganismos por formacin de turbidez en el medio (ver anexo 3).
6.2.2. Reportar los resultados en el registro de control de medios (ver anexo 4).
6.2.3. En el caso de que un frasco de un nuevo lote no cumpla con lo especificado
en este instructivo, ser considerado como NO CONFORME, se informar
inmediatamente al Jefe de Seccin y/o Supervisor para que ste sea
inmediatamente devuelto al proveedor .En el caso de que un medio de
cultivo en uso no cumpla con lo especificado en este instructivo, ser
considerado como NO CONFORME, del mismo modo se informar al Jefe
de Seccin y/o Supervisor y ste ser descartado. Se considerar que un
medio de cultivo es aceptable CONFORME si cumple con lo especificado
en este instructivo.
7. REGISTRO
7.1. Registro de Control de Medios de Cultivo
8. ANEXOS
8.1. ANEXO
8.2. ANEXO
8.3. ANEXO
8.4. ANEXO

1
2
3
4

:
:
:
:

Diagrama del Mtodo Ecomtrico

Esquema de trazo de estras en placa
Cepas deseadas y no deseadas segn el medio de cultivo a evaluar
Registro de Control de Medios de Cultivo F-CC-I-027-001

ANEXO 01
Diagrama del Mtodo Ecomtrico

ANEXO 02
Esquema de trazo de estras en placa

4
1

5
3
2

ANEXO 03
Cepas deseadas y no deseadas segn el medio de cultivo a evaluar

EVALUACION MICROBIOLOGICA
MEDIO DE
CULTIVO

CEPA DESEADA

CEPA NO
DESEADA

CARACTERISTICAS DE
CEPAS DESEADAS

T./TIEMPO

Agar XLD

Salmonella enterica

Staphylococcus
aureus

Colonias incoloras con o

sin centro negro

30-35C/24h

Agar V.Brillante

Salmonella enterica

Staphylococcus
aureus

Colonias rosas, medio

rojo

30-35C/24h

Agar TBX

Escherichia coli

Staphylococcus
aureus

Colon.celeste

30-35C/24h

-----------

Buen crecimiento

30-35C/24h

S. aureus
Agar R2A

E.coli
P. aeruginosa

Agar Mc. Conkey

Escherichia coli

Staphylococcus
aureus

Colonias rojas/rosadas
con precipitado rosado

30-35C/24h

Agar Manitol Sal

Staphylococcus aureus

Escherichia coli

Colonias amarillas
redondas

30-35C/24h

-----------

Buen crecimiento

30-35C/24h

Escherichia coli

Pigmento Azul / verdoso

30-35C/24h

-----------

Turbidez

30-35C/24h

S. aureus
Agar tripticasa de
soya

E.coli
P. aeruginosa

Agar Cetrimide

P. aeruginosa
S. aureus

Caldo Tripticasa
soya

E.coli
P. aeruginosa

Caldo Rappaport

Salmonella enterica

------------

Turbidez

30-35C/24h

Caldo MacConkey

Escherichia coli

------------

Turbidez

30-35C/24h

Agua Peptonada
Tamponada

Salmonella enterica

------------

Turbidez

30-35C/24h

Caldo Presencia
Ausencia

Escherichia coli

------------

Turbidez con viraje de

medio a color amarillo

30-35C/24h

ANEXO 04