CICLO DE KREBS

Material elaborado por: J. Monza, S. Doldn y S. Signorelli.

En las clulas aerobias distintas vas catablicas convergen en el ciclo de

Krebs

El ciclo de Krebs (de los cidos tricarboxlicos o del cido ctrico) es una va
metablica presente en todas las clulas aerobias, es decir, las que utilizan
oxgeno como aceptor final de electrones en la respiracin celular. En los
organismos aerobios las rutas metablicas responsables de la degradacin
de los glcidos, cidos grasos y aminocidos convergen en el ciclo de Krebs,
que a su vez aporta poder reductor a la cadena respiratoria y libera CO2
(figura 1).

Figura 1. Visin panormica de la convergencia de las vas catablicas de

glcidos, aminocidos y cidos grasos al ciclo de Krebs. Los hidrgenos
presentes en esas molculas son los que abastecen a la cadena respiratoria
desde el NAD o FAD, hasta combinarse con el oxgeno y formar agua. Los
carbonos se eliminan como CO2.
El catabolismo oxidativo de glcidos, cidos grasos y aminocidos puede
dividirse en tres etapas, de las cuales el ciclo de Krebs es la segunda. En la
primera etapa, que incluye a las vas catablicas de cidos grasos y a la
gluclisis se genera acetil-CoA (2C). Los aminocidos pueden dar
indirectamente acetil CoA , o directamente intermediarios del ciclo de Krebs.
En la tercera etapa el poder reductor aportado por el ciclo de Krebs es
drenado hasta el oxgeno a travs de los transportadores de cadena
respiratoria (NADH.H, FADH2, CoQ y citocromos) y parte de la energa
liberada se emplea en la sntesis de ATP por fosforilacin oxidativa (figura
1).

El ciclo de Krebs es una ruta anfiblica: participa en procesos catablicos y

anablicos. El ciclo proporciona -cetoglutarato y oxalacetato para la
sntesis de glutamato y aspartato respectivamente, entre otras molculas
fundamentales para la clula.
CICLO DE KREBS
18

El piruvato genera la principal molcula abastecedora del ciclo: la acetil

coenzima A
La reaccin de oxidacin - decarboxilacin del piruvato es el nexo entre la
gluclisis y el ciclo de
Krebs. Esta reaccin irreversible es catalizada por un complejo enzimtico
(piruvato deshidrogenasa) localizado en la matriz mitocondrial de
eucariotas, y en el citosol de procariotas (figura 2).
El piruvato pierde el grupo carboxilo como CO2, y los dos carbonos
restantes unidos a la CoA conforman la acetil-CoA (figura 2). En la reaccin
se reduce un NAD a NADH.H que a su vez cede los H a los otros
transportadores de cadena respiratoria, con la consecuente formacin de 3
ATP.

Figura 2. Reaccin resumen de la descarboxilacin oxidativa del piruvato.

PDH (piruvato deshidrogenada).
Una visin panormica del ciclo de Krebs
La acetil-CoA generada por los diferentes catabolismos se condensa con el
oxalacetato y genera citrato. A travs de 7 reacciones de oxidacin y
descarboxilacin sucesivas (de la 2 a la 8, figura
3) se regenera oxalacetato, capaz de iniciar un nuevo ciclo.

Figura 3. Representacin del ciclo de Krebs. Cada reaccin se indica con un

nmero. CICLO DE KREBS
19

En cuatro reacciones del ciclo ocurren oxidacin de intermediarios y

reduccin de coenzimas de cadena respiratoria: tres NAD y un FAD (figura
3). Esas molculas reducidas que integran la cadena respiratoria se
reoxidan, y parte de la energa liberada se usa para fosforilar el ADP a ATP.
En el ciclo propiamente dicho se produce una fosforilacin a nivel de
sustrato que produce un GTP, que equivale energticamente a un ATP.
El ciclo se puede resumir en la siguiente ecuacin:
Acetil-CoA + 3NAD + FAD + GDP + Pi CoA-SH + 3 NADH.H + FADH2 + GTP
+ 2 CO2
Las reacciones del ciclo

 Reaccin 1: condensacin del oxalacetato con la acetil CoA

La enzima citrato sintasa condensa a la acetil-CoA (2C) con el oxalacetato
(4C) para dar una molcula de citrato (6C). Como consecuencia de esta
condensacin se libera la coenzima A (HSCoA). La reaccin es fuertemente
exergnica: es irreversible.

Reaccin 2: isomerizacin del citrato a isocitrato

La isomerizacin del citrato en isocitrato ocurre por dos reacciones, que se
resumen en una.

Reaccin 3: oxidacin y decarboxilacin del isocitrato

El isocitrato es sustrato de la isocitrato deshidrogenasa, enzima que tiene
como cofactor un NAD, que forma parte de la cadena respiratoria. En la
reaccin 3 se resumen dos reacciones a partir de las cuales el isocitrato
forma -cetoglutarato (5C). Para lograr ese producto ocurre una
decarboxilacin, es decir la liberacin de una molcula de CO2, y la
reduccin de un NAD que permite la formacin de 3 ATP.
CICLO DE KREBS
20
Reaccin 4: el -cetoglutarato se transforma en succinil-CoA
Este paso implica la segunda decarboxilacin oxidativa, catalizada por la cetoglutarato deshidrogenasa, que lleva a la formacin de succinil-CoA (4C).
El NAD es la coenzima de la deshidrogenasa, de manera que se formarn 3
ATP como consecuencia de la actividad de cadena respiratoria.

Reaccin 5: la succinil-CoA rinde succinato y GTP

La succinil-CoA, es un tioster de alta energa con un G de hidrlisis de
-33.5 KJ.mol-1 aproximadamente. La energa liberada por la ruptura de ese
enlace se utiliza para generar un enlace fosfoanhidro entre un fosfato y un
GDP para dar 1GTP por fosforilacin a nivel de sustrato. En la reaccin se
libera HSCoA.

El GTP se puede convertir en ATP segn la siguiente reaccin:

GTP + ADP GDP + ATP G = 0 KJ.mol- 1

 Reaccin 6: el succinato se transforma en fumarato

El succinato es oxidado a fumarato por la succinado deshidrogenasa,
enzima que tiene como cofactor al
FAD: se producen 2ATP en la cadena respiratoria. La enzima usa FAD porque
la energa asociada a la reaccin no es suficiente para reducir al NAD.

El complejo enzimtico de la succinato deshidrogenasa es el nico del ciclo

que est asociado a la membrana mitocondrial de eucariotas, y en la
membrana plasmtica de procariotas.

CICLO DE KREBS
21

Reaccin 7: el fumarato se hidrata y genera malato

La fumarasa cataliza la adicin de agua, es decir la hidratacin del
fumarato. El producto de la reaccin es el malato.

Reaccin 8: el malato se oxida a oxalacetato

Dada la naturaleza cclica de la va, las reacciones en su conjunto conducen
a la regeneracin del oxalacetato. La malato deshidrogenasa cataliza la
oxidacin del malato a oxalacetato, con la reduccin de un NAD: se forman
3 ATP en la cadena respiratoria.

Regulacin del Ciclo de Krebs

La regulacin del ciclo hace posible la produccin de molculas de acuerdo
a las necesidades celulares, y asegura que no ocurra sobre o sub produccin
en un momento dado. La regulacin del ciclo se da en diferentes puntos,
porque puede alimentarse o ser abastecido a travs de cualquiera de sus
intermediarios. La regulacin es compleja en comparacin con la de vas
catablicas como la gluclisis, y se considerarn situaciones de regulacin
relacionadas al estado energtico celular.
La regulacin de las enzimas es por modulacin alostrica, por
modificacin covalente y por acumulacin de productos. La lgica de la

regulacin se rige principalmente por la relacin ATP/ADP y NADH.H/NAD, as

como por las concentraciones de algunos intermediarios del ciclo.
Las relaciones entre ATP/ADP y NADH.H/NAD estn relacionadas entre s a
travs de la fosforilacin oxidativa que ocurre en la cadena respiratoria, y
ambas son seales del estado energtico de la clula.
A continuacin se presentan tres situaciones regulatorias, relacionadas a la
energa celular momentnea.
Situacin 1: regulacin de la principal reaccin abastecedora del ciclo
El complejo piruvato deshidrogenasa (PDH) de vertebrados, que cataliza la
transformacin de piruvato en acetilCoA, es un punto de regulacin clave
porque la acetilCoA es la principal molcula abastecedora del ciclo. La
regulacin se logra por dos mecanismos: alosterismo y modificacin
covalente de la enzima. CICLO DE KREBS
22
Figura 4. Esquema de la regulacin de la actividad de la piruvato
deshidrogenasa (PDH) a travs de la fosforilacin/desfosforilacin de serinas
de la subunidad E1 de esta enzima. La quinasa es inhibida alostricamente
por el ATP, de manera que cuando los niveles de este son elevados el
complejo PDH es inactivado por fosforilacin.
Cuando desciende la concentracin de ATP celular, la actividad quinasa
decrece y la actividad fosfatasa se incrementa y elimina el fosfato de la
subunidad E1 convirtiendo a la enzima en su estado activo.
Cuando las relaciones ATP/ADP, NADH.H/ NAD y acetil-CoA/ HSCoA son
altas la enzima PDH es modulada negativamente. Cualquiera de las tres
relaciones indican que en la clula hay un estado metablico rico en
energa. Cuando esas relaciones descienden la enzima se activa, se
incrementa entonces la oxidacin del piruvato y se sintetiza acetil CoA.
La regulacin de la PDH a travs de la subunidad E1 (figura 4) es por
modificacin covalente de la enzima, a la que una quinasa fosforila y una
fosfatasa desfosforila residuos especficos de serinas. Para que la quinasa
fosforile a E1 debe haber alta concentracin de ATP, que es un modulador
positivo de la quinasa, que est regulada entonces alostricamente. Cuando
aumenta la concentracin de ADP la actividad quinasa desciende y se
incrementa la fostatasa, que desfosforila a la enzima que pasa a su forma
activa (figura 4).
Adems, la actividad del complejo PDH est modulada negativamente a
nivel de la subunidad
E2 por alta concentracin de acetilCoA y a nivel de la subunidad E3 por alta
concentracin de

NADHH. Es decir, tambin est regulado alostricamente a travs de

distintos moduladores con diferentes subunidades.
Situacin 2: regulacin de la enzima citrato sintasa
La actividad de la citrato sintasa (reaccin 1, figura 3) est regulada por
disponibilidad de sus sustratos: la acetil-CoA y el oxalacetato, cuya
concentracin vara y determina la velocidad de formacin de citrato. El ATP
es un modulador alostrico negativo de la citrato sintasa, que aumenta la
KM de la enzima por el acetil CoA. As, cuanto mayor sea la concentracin
de ATP menor ser la actividad de la enzima. Lo mismo produce el aumento
de la concentracin de NADH.H (figura 5).
Situacin 3: regulacin de las deshidrogenasas NAD
Los pasos catalizados por las deshidrogenadas NAD dependientes
(reacciones 3, 4 y 8, figura 3) regulan la velocidad del ciclo segn la relacin
NADH.H/NAD. Cuando la concentracin de NADH.H aumenta la actividad de
las deshidrogenasas desciende. El ATP tiene el mismo efecto inhibidor sobre
las enzimas, mientras el ADP es un activador (figura 5).
En resumen, si bien no es el nico, hay un principio unificador en la
regulacin: cuando a nivel celular se dan condiciones de alta energa, la
clula es capaz de reducir la eficiencia del proceso de produccin de ATP, y
viceversa (figura 5). CICLO DE KREBS
23
Figura 5. Esquema general de regulacin del ciclo de Krebs. Tomado de
Bioqumica, Mathews y van Holde,
Editorial McGraw Hill Interamericana.

Un balance posible de la degradacin total de la glucosa

Para calcular la energa que se obtiene de la glucosa se pueden establecer
cuatro instancias en su degradacin: gluclisis, decarboxilacin oxidativa del
piruvato, ciclo de Krebs y cadena respiratoria.
La cantidad de ATP generado difiere segn las lanzaderas implicadas y el
tipo de clula (procariota o eucariota). En el cuadro 1 se plantea un balance
en una clula eucariota, en la que oper slo la lanzadera del glicerol
fosfato.
Tabla 1. Resumen del balance energtico en ATP de la degradacin total de
la glucosa. Se us para este balance la lanzadera del glicerol fosfato.
CICLO DE KREBS

24
El cido propinico generado en el rumen ingresa al Ciclo de Krebs como
succinil CoA

En los rumiantes, los microorganismos del rumen producen por

fermentacin cidos grasos voltiles (AGV) a partir de los alimentos
ingeridos.
El AGV producido mayoritariamente es el cido propinico (3C). Esta
molcula mediante dos reacciones produce succinil CoA (figura 6). A partir
de esta molcula el hgado puede generar glucosa por glucognesis.
Figura 10. Produccin de succinil-CoA a partir del propinico.
La succinil-CoA ingresa al ciclo de Krebs (figura3) y mediante 3 reacciones
(5, 6 y 7) es transformada en malato, que puede salir de la mitocondria por
transportadores especficos. Una vez en el citoplasma el malato es
convertido en oxalacetato que, mediante el rodeo metablico saltea la
reaccin irreversible de Piruvato a PEP, y puede sintetizar glucosa por
glucognesis.
Este proceso incluye otras dos reacciones irreversibles en la etapa de
hexosas (ver Gluclisis).

Fosforilacin oxidativa

Esquema actual del sistema mitocondrial de la fosforilacin oxidativa. Los equivalentes reducidosque se
generan en el metabolismo (NADH, FADH2) son oxidados por la cadena de transporte de electrones.
La energa libre generada en estareaccin se emplea para bombear protones (puntos rojos) desde
la matriz mitocondrial hasta el interior de las crestas mitocondriales, para dar lugar a la fuerza protnmotriz. Cuando ste se disipa a travs del retorno a la matriz de los protones a travs de la ATP sintasa,
la energa almacenada se emplea parafosforilar el ADP con un grupo fosfato para formarATP.

El modelo actual cubre algunos problemas suscitados por el anterior. En primer lugar, todos los
componentes activos de la cadena de transporte de electrones se encuentran exclusivamente en
lascrestas mitocondriales y formando supercomplejos, en la imagen representado por el supercomplejo
I1III2IV1. Esto permite canalizar de unos complejos a otros las molculas de transferencia de electrones.
Previamente se pensaba que difundan libremente. En segundo lugar, la diferencia de pH, uno de los
componentes de la fuerza protn-motriz junto con elpotencial de membrana () es de tan slo 0,55
unidades, equivalente a 32 mV, insuficiente para impulsar la fosforilacin. Sin embargo, existen
circunstancias locales que aumentan este pH en un factor de 2 unidades. En primer lugar, la ATP sintasa
forma dmeros y filas que comban y dan forma a la cresta mitocondrial, haciendo que el espacio interno
tenga tan slo 20 4 nm. El espacio entre la membrana interna y externa es menor, de 12 2,5 nm, pero
cuenta con poros lo suficientemente grandes como para estar en equilibrio con el citoplasma. Los
protones se concentran gracias al "efecto superficie" y al rpido flujo desde las fuentes de protones a los
sumideros.

La fosforilacin oxidativa es un proceso metablico que utiliza energa liberada por

la oxidacin de nutrientespara producir adenosina trifosfato (ATP). Se le llama as para
distinguirla de otras rutas que producen ATP con menor rendimiento, llamadas "a nivel de
sustrato". Se calcula que hasta el 90% de la energa celular en forma de ATP es producida
de esta forma.1
Consta de dos etapas: en la primera, la energa libre generada mediante reacciones
qumicas redox en varioscomplejos multiproteicos -conocidos en su conjunto como cadena
de transporte de electrones- se emplea para producir, por diversos procedimientos como
bombeo, ciclos quinona/quinol o bucles redox, un gradiente electroqumico de protones a
travs de una membrana asociada en un proceso llamado quimiosmosis. Lacadena
respiratoria est formada por tres complejos de protenas principales (complejo I, III, IV), y
varios complejos "auxiliares", utilizando una variedad de donantes y aceptores
de electrones. Los tres complejos se asocian en supercomplejos para canalizar las
molculas transportadoras de electrones, la coenzima Q y elcitocromo c, haciendo ms
eficiente el proceso.
La energa potencial de ese gradiente, llamada fuerza protn-motriz, se libera cuando se
translocan los protones a travs de un canal pasivo, la enzima ATP sintasa, y se utiliza en
la adicin de un grupo fosfato a unamolcula de ADP para almacenar parte de esa energa
potencial en los enlaces anhidro "de alta energa" de la molcula de ATP mediante
un mecanismo en el que interviene la rotacin de una parte de la enzima a medida que
fluyen los protones a travs de ella. En vertebrados, y posiblemente en todo el reino
animal, se genera un ATP por cada 2,7 protones translocados. Algunos organismos tienen
ATPasas con un rendimiento menor.
Existen tambin protenas desacopladoras que permiten controlar el flujo de protones y
generar calor desacoplando ambas fases de la fosforilacin oxidativa.
Aunque las diversas formas de vida utilizan una gran variedad de nutrientes, casi todas
realizan la fosforilacin oxidativa para producir ATP, la molcula que provee de energa
al metabolismo. Esta ruta es tan ubicua debido a que es una forma altamente eficaz de
liberacin de energa, en comparacin con los procesos alternativos defermentacin, como
la gluclisis anaerbica.
Pese a que la fosforilacin oxidativa es una parte vital del metabolismo, produce una
pequea proporcin deespecies reactivas del oxgeno tales como superxido y perxido
de hidrgeno, lo que lleva a la propagacin deradicales libres, provocando dao celular,
contribuyendo a enfermedades y, posiblemente, al envejecimiento. Sin embargo, los
radicales tienen un importante papel en la sealizacin celular, y posiblemente en la
formacin de enlaces disulfuro de las propias protenas de la membrana interna

mitocondrial. Las enzimas que llevan a cabo esta ruta metablica son blanco de muchas
drogas y productos txicos que inhiben su actividad.