INSTITUTO DE BOTNICA IBt

Programa de Ps Graduao em Biodiversidade Vegetal e Meio Ambiente

Curso de Capacitao de Monitores e Educadores

FUNGOS BASIDIOMICETOS
Tcnicas de coleta, isolamento e subsdios para processos
biotecnolgicos

Luciana Jandelli Gimenes

Orientador: Prof. Dr. Dcio Roberto Matheus
2010

INTRODUO
Os fungos so muito importantes para a vida humana. Esto presentes diariamente em nossas
vidas e muitas vezes esquecemos tal importncia. No entanto, no notamos essa real participao,
sendo que na maioria dos casos fungos so apenas lembrados pelo seu lado negativo, ou seja, pelos
danos que alguns deles causam (como parasitando plantas, problemas de alergias e micoses em
pessoas ou animais) e os benefcios infelizmente so esquecidos. Direta ou indiretamente, todos os
dias as pessoas so beneficiadas por produtos originados pela ao dos fungos, como exemplo, a
ao fermentativa de fungos para a fabricao de pes, massas e a sntese de lcool etlico e dixido
de carbono, processos imprescindveis na produo de bebidas como cerveja e vinho. Algumas
espcies proporcionam sabor e aroma distintos em diferentes tipos de queijos. A produo de
cogumelos comestveis, comum entre populaes de outros pases, uma prtica biotecnolgica que
vem crescendo a cada dia no Brasil. No devemos esquecer sua importncia na indstria
farmacutica e a grande descoberta da penicilina. Com o desenvolvimento da biotecnologia, muitas
espcies de fungos esto sendo estudados para aplicao no tratamento de resduos industriais txteis
e papeleiros de difcil degradao, no tratamento de esgotos e biorremediao de solos
(descontaminao de solos pela ao dos fungos).
Os fungos representam vrios grupos, sendo popularmente conhecidos como cogumelos,
mofos, bolores ou leveduras e apresentam vrios tamanhos, cores e formas. Existem milhares de
fungos em grupos distintos de acordo com caractersticas comuns entre eles.

CARACTERSTICAS GERAIS DOS FUNGOS

Desde a dcada de 60, a partir de estudos morfolgicos, bioqumicos e citolgicos, os fungos
deixaram de pertencer ao reino das plantas e passaram a ter um reino prprio chamado de Reino
Fungi. Ainda hoje utilizada essa classificao, mas os avanos da biologia molecular e estudos

bioqumicos levaram a outras propostas de classificao em que os fungos e organismos afins foram
includos em trs diferentes reinos: Protozoa, Chromista e Fungi, como apresentado na 10 edio do
Dictionary of the Fungi (Kirk et al. 2008).
Os fungos so aclorofilados (no realizam fotossntese), eucariotos, a reproduo pode ser
sexuada e/ ou assexuada por esporos, unicelulares (leveduras e quitrdias) ou multicelulares (fungos
filamentosos), so organismos heterotrficos, apresentam nutrio por absoro, a parede celular
constituda por quitina e -glucanos, o glicognio a principal forma de armazenamento energtico e
esto presentes em diferentes substratos (dependendo do grupo de fungos).
Os fungos basidiomicetos mais conhecidos formam estruturas de reproduo macroscpicas e
so conhecidos popularmente por cogumelos e orelhas de pau, alm de outros grupos que so menos
conhecidos que so os fungos gelatinosos, os gasteromicetos, as ferrugens e os carves. Esto
presentes em ambientes aquticos e terrestres, podem ser parasitas, saprbios e micorrzicos. So na
sua maioria saprfitas e participam da decomposio de folhas, galhos e troncos, sendo encontrados
em uma grande variedade de substratos e em diferentes biomas. Sua grande importncia, em termos
ecolgicos o papel que desempenham na ciclagem de nutrientes.

PROTOCOLO DE COLETA DE BASIDIOMICETOS

necessrio estabelecer um protocolo para haver uma padronizao das coletas. Pode-se
fazer uma coleta aleatria, onde buscamos em todos os substratos, abrangendo toda a rea, trilhas
pr-existentes (figura 1) e em todas as estaes do ano. J atravs do uso de parcelas, h uma
definio dos parmetros estudados, como tamanho e forma das reas, tempo de coleta e demarcao
de substratos.
Recomenda-se que a coleta seja realizada no perodo da manh para dispor do resto do dia
para a descrio e preparo do material coletado. Devem-se evitar os perodos chuvosos, pois os

cogumelos ficam muito encharcados dificultando a secagem e havendo assim uma maior
possibilidade de embolorar.

Para a coleta, o material bsico (figura 2) necessrio :

Mquina fotogrfica: para tirar fotos dos cogumelos no local de coleta, pois muitos
deles at chegarem ao laboratrio mudam algumas caractersticas como colorao, tamanho, etc.
Faca ou canivete: para auxiliar a retirada do basidioma do substrato e sempre que
possvel, trazer junto parte do substrato.
Sacos de papel pardo: colocar individualmente a amostragem para evitar a mistura de
esporos. Acondicion-los de forma a manter bastante ar no seu interior, evitando assim, danificar os
fungos coletados.
Caneta e caderneta: para anotar detalhes importantes como substrato, colorao, local
de coleta, etc.

Lupa de mo: para verificar algumas caractersticas que posteriormente possam mudar
at a chegada ao laboratrio.
GPS: para georreferenciar o local de coleta.
Sacola de plstico: para o transporte de todos os sacos de papel pardo.
Caixas diversas: para o transporte de espcimes frgeis.

Figura 2: alguns dos materiais bsicos para coleta.

Sempre devemos coletar um nmero suficiente de basidiomas para que seja possvel fazer o
isolamento, a identificao e obter material de referncia para depositar no herbrio.
A figura 3 mostra uma ficha que auxilia muito nas coletas de campo onde consta grande
parte das caractersticas que devem ser anotadas no momento da coleta. Posteriormente, no momento
da descrio dos materiais coletados, essa ficha ser de grande ajuda.

Figura 3: anotaes de campo de cada espcime coletado (retirado de Mueller et al. 2004, Biodiversity of fungi
inventory and monitoring methods).

DESCRIO DO MATERIAL
Aps a coleta, os materiais devem ser levados ao laboratrio, dado um nmero de coletor e
feitas todas as anotaes macroscpicas necessrias (figura 4). Esta anlise deve ser feita a olho nu e
tambm com auxlio do microscpio estereoscpico. As caractersticas principais a serem anotadas
so (Largent 1986):
Pleo (forma, colorao, consistncia, superfcie, margem, dimetro)
Lamelas (fixao ao estipe, colorao, distncia)
Estipe (forma, superfcie, presena ou no de anel, volva, rizomorfa, miclio na base,
comprimento)

Figura 4: desenho esquemtico de um basidioma.

OBTENO DE CULTURAS
Como j citado anteriormente, a reproduo dos cogumelos ocorre de duas maneiras: sexuada
e assexuadamente. No laboratrio a multiplicao dos fungos pode tambm ser feita por dois
processos: atravs da obteno de culturas a partir de qualquer parte do cogumelo (assexuadamente)
ou a partir dos esporos (sexuadamente).
Quando se faz opo pela obteno da cultura a partir do basidioma (assexuadamente), em
fungos carnosos, o processo consiste em retirar um pequeno fragmento do material, com o auxlio de
um bisturi e de uma pina, devidamente esterilizados. Para fungos membranceos, utiliza-se
qualquer parte do basidioma, previamente limpo em soluo de hipoclorito de sdio e gua destilada
para desinfeco e lavagem, respectivamente (Schulz et al. 2003). Em ambos os casos, trs a quatro
fragmentos devem ser dispostos em placas de Petri com meio de cultura batata-dextrose-gar (BDA)
e incubados a 28 C para que haja o crescimento micelial.
A esporada (figura 5), maneira sexuada, s deve ser realizada quando coletado mais de um
basidioma, pois, aps ficarem 24 horas em cmara mida, o fungo normalmente apodrece. A
esporada consiste em depositar o pleo com as lamelas para baixo num papel prprio (metade branca,
metade preta). Cobre-se com uma placa de Petri, formando uma espcie de cmara mida, por at 24
horas, para que os basidisporos caiam no papel. Aps este perodo, devem-se secar os papis em
slica gel, dobrar, inserir num saco de polipropileno e guard-los em geladeira. No momento que
surgir o interesse em se fazer uma cultura pura a partir da esporada, um pequeno fragmento do papel
deve ser cortado, colocado em gua destilada autoclavada e 1 mL deve ser colocado em meio de
cultura BDA. Aps o crescimento, para preservao da cultura, prepara-se pelo mtodo de Castellani
(Arora et al.1991, Smith & Onions 1994) e incorpora-se uma coleo que no caso do Instituto de
Botnica, Coleo de Culturas de Algas, Cianobactrias e Fungos (CCIBt).

Figura 5: esporada (Fonte: Gugliotta & Capelari, 1998).

HERBORIZAO E ACONDICIONAMENTO DO MATERIAL

Depois de realizadas todas as anotaes, os materiais devem ser secos em estufa entre 4550C (fungos carnosos) ou, quando os basidiomas so menos carnosos, a secagem deve ser feita em
dessecador com slica. A secagem no dessecador com slica mais interessante quando h a inteno
de se fazer extrao de DNA, pois materiais submetidos a altas temperaturas tem uma maior chance
de degradao do DNA. Aps a secagem, os materiais devem ser acondicionados em sacos de
polipropileno, e colocados nos prprios sacos de papel, onde estavam todas as anotaes da coleta.

ANLISE MICROSCPICA E IDENTIFICAO

Depois da secagem, realiza-se a identificao que baseada nos caracteres morfolgicos.
Para a anlise microscpica dos caracteres, so feitos cortes a mo livre (Largent et al. 1986), com o
auxlio de uma lmina de barbear. Para auxiliar a reidratao do material, o fragmento imerso em
lcool 70% e, posteriormente monta-se entre lmina e lamnula com KOH 4% (Martin 1934 In
Fonseca 1999). As observaes e medidas so executadas com auxlio de microscpio ptico ou

eletrnico. Faz-se o desenho das estruturas microscpicas com auxlio de cmara-clara acoplada ao
microscpio. Anota-se as caractersticas dos basidisporos, basdios, cistdios, trama da lamela e
superfcie pilear. A identificao feita utilizando-se chaves de identificao e referncias
bibliogrficas especficas para cada grupo.
Aps a identificao, montam-se exsicatas de acordo com o padro do herbrio em que sero
depositados os materiais coletados. No caso do Instituto de Botnica, o material depositado no
Herbrio Maria Eneyda P. K. Fidalgo (SP) e duplicatas podem ser enviadas a outros herbrios.

HERBRIO
Herbrio (figura 6) uma coleo dinmica de plantas, fungos ou algas secas, prensadas e/ou
montadas de uma forma especial que sirva como referncia para estudos de vrios fins, como por
exemplo, nos estudos de identificao de um material desconhecido, atravs da comparao pura e
simples com outros espcimes da coleo herborizada. Os herbrios abrigam uma grande quantidade
de informao e dados sobre a diversidade assim como tambm um centro de treinamento e
capacitao de pessoal especializado em taxonomia. Os materiais herborizados e identificados que
constituem a coleo do herbrio so chamadas exsicatas.
Herbrio de extrema importncia, pois possibilita a conservao de materiais histricos, a
avaliao de impactos ambientais e a identificao de espcies, representa a flora de uma regio e
contribui para pesquisas em outras reas da cincia.

Fotos: L. J. Gimenes

Figura 6: Herbrio com as exsicatas depositadas.

FUNGOS BASIDIOMICETOS EM PROCESSOS

BIOTECNOLGICOS

A maioria dos processos biotecnolgicos utilizando basidiomicetos baseia-se nos seus

produtos metablicos (enzimas e polissacardeos) (figura 7). A importncia do processo enzimtico
nos fungos est ligada na transformao dos resduos lignocelulsicos, para a produo de
polissacardeos utilizados nas indstrias farmacutica, alimentcia e cosmtica como tambm para a
produo de alimentos, como exemplo, o cultivo de cogumelos. Ainda, esse processo enzimtico est

relacionado tambm com os processos de biodegradao de compostos xenobiticos (compostos

orgnicos sintetizados industrialmente), como exemplo a biorremediao ambiental de solos e o
tratamento de efluentes da indstria papeleira e txtil (Bononi, 1998)

Figura 7: esquema mostrando as possibilidades de uso de basidiomicetos (Fonte: Matheus & Okino, 1998).

Grande parte das espcies de fungos basidiomicetos utiliza os componentes de madeira para
crescimento. Nos fungos degradadores de madeira, destacam-se dois grupos:

Fungos causadores de podrido branca: degradam celulose, hemicelulose e
lignina, quebrando-as em molculas menores at CO2 e H2O. Por isso so chamados de fungos
lignocelulolticos. Os fungos quando degradam a madeira causam a perda de resistncia, tornando-a
laminada, esponjosa e fibrosa e com uma colorao branca, resultando ento o nome de podrido
branca (figura 8).

Figura 8: Podrido branca (Foto: A. M. Gugliotta)

Fungos causadores de podrido parda: degradam celulose e hemicelulose. Nos

estgios finais de degradao, a madeira apresenta numa aparncia amorfa e escura (figura 9).

Figura 9: Podrido parda (Foto: A.M. Gugliotta)

BIOCONVERSO DE RESDUOS LIGNOCELULSICOS

Do ponto de vista econmico, um dos processos mais importantes utilizando fungos na
transformao de resduos lignocelulsicos a produo de cogumelos comestveis.
Estima-se que aproximadamente 2.000 espcies so potencialmente comestveis, sendo que
aproximadamente 25 so usadas na alimentao humana e menos ainda cultivadas. No Brasil, este
nmero mais reduzido ainda. O brasileiro ainda muito reticente ao consumo. Do ano de 1968 at
2004 a produo de cogumelos comestveis no Brasil passou de 20 para 5.000 toneladas. Alguns

exemplos de cogumelos cultivados no Brasil: Boletus edulis (fungi secchi), Pleurotus ostreatus,
Lentinula edodes (shiitake), Agaricus bisporus (champignon de Paris). H tambm os que no so
cultivados

comercialmente,

mas

so

nativos

comestveis:

Auricularia

fuscosuccinea,

Oudemansiella canarii, Macrolepiota procera e Polyporus tenuiculus.

Curiosidades sobre fungos txicos e venenosos: Na natureza, existem fungos txicos e

venenosos que podem provocar a morte de homens e animais. O perigo varia dependendo da
quantidade e do fungo ingerido e tambm do estado do animal e fsico da pessoa (crianas e idosos
so mais sensveis). O grau de toxicidade varia de espcie para espcie, podendo causar desde
ligeiras perturbaes estomacais e intestinais at irreparveis leses nos rins e fgado, ocasionando a
morte.
At o momento no se conhece antdotos para cogumelos venenosos. Portanto, no se
recomenda o consumo de cogumelos silvestres sem a prvia identificao por um especialista.
Cogumelos que no ocorrem naturalmente no Brasil podem ser introduzidos com mudas de
plantas trazidas de outros pases que tenham esporos ou hifas microscpicas que crescem e passam a
habitar locais distantes de suas origens. Por isso que o Ministrio da Agricultura faz o perodo de
quarentena de plantas e animais vindos de outros pases para diminuir a chance de disseminao de
doenas e pragas.
Um exemplo disso a Amanita muscaria (figura 10) que no havia no Brasil e foi
introduzida juntamente com sementes de Pinus, principalmente nos estados de So Paulo e Paran.
um cogumelo txico e venenoso, mas na maioria das vezes causa apenas perturbaes estomacais,
mas pode causar a morte no caso de pessoas debilitadas.
Mas como podemos separar um txico ou venenoso de um cogumelo comestvel? Na
verdade, no existe uma caracterstica nica e facilmente visvel que permita essa diferenciao. H

uma associao de vrias caractersticas que permite ao especialista saber qual a espcie e
determinar se ela ou no comestvel. Em determinados casos h a necessidade de realizar uma
anlise qumica do cogumelo para a verificao de substncias txicas.
Mas cuidado, existem na tradio popular algumas prticas que so utilizadas para verificar
se um cogumelo venenoso ou no. So crendices sem fundamento e no servem para tal
verificao!!
No campo, s vezes, vemos cogumelos comidos por animais e isso no nenhum indcio que
podemos ingeri-los. Comparando com as plantas venenosas, as espcies de fungos venenosos so
bem menores, mas so muito mais perigosos porque matam impiedosamente.

BIORREMEDIAO AMBIENTAL
Biorremediao o uso de microrganismos para controlar e destruir poluentes sendo uma
alternativa tecnolgica necessria, no apenas pelo baixo custo, mas tambm pela possibilidade de se
obter a completa degradao dos compostos contaminantes. Por se tratar de processo biolgico, a
biorremediao constitui uma tecnologia eficiente do ponto de vista ambiental (Machado 1998,
Matheus & Machado 2002).
As vantagens da biorremediao so: apresenta um baixo custo, pode ser realizada em
temperatura e presso ambiente, utiliza metabolismos degradativos do prprio ambiente, no h
transferncia do problema, segura do ponto de vista ambiental e h a transformao do
contaminante at a mineralizao transformando-o em CO2, H2O e sais orgnicos.
Devido capacidade de degradar lignina por meio de um sistema enzimtico inespecfico,
convertendo-a em CO2 e gua, os fungos basidiomicetos apresentam um grande potencial de
aplicao em processos de biorremediao de poluentes orgnicos persistentes (Matheus & Okino
1998, Matheus 2003). A capacidade dos fungos de podrido branca em degradar lignina torna-os o
grupo mais interessante dentre os fungos para utilizao em biorremediao de compostos
recalcitrantes.
No Brasil, diversos estudos sobre a possibilidade de uso de basidiomicetos em biorremediao
vem se desenvolvendo. Estudos recentes mostram que os basidiomicetos apresentam um grande
potencial em processos de biorremediao de solos contaminados com organoclorados e que espcies
nativas, como Trametes villosa (Sw.) Kreisel (figura 11) que uma das espcies selecionadas por
apresentar capacidade de degradao de poluentes.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
Arora, S.K., Elander, R.P. & Mukerji, K.G. 1991. Handbook of applied mycology - Fungal
Biotechnology, v.4, New York.
Alexopoulos, C.J.; Mims, C.W.; Blackwell, M, 1996. Introductory Mycology. John Wiley & Sons,
INC, New York. 4th ed, 869p.
Bononi, V.L.R. (org), 1998. Zigomicetos, Basidiomicetos e Deuteromicetos: noes bsicas de
taxonomia e aplicaes biotecnolgicas. So Paulo: Instituto de Botnica, Secretaria de Estado
do Meio Ambiente. 184p.
Bononi, V.L.R.; Capelari, M.; Mazieiro, R.; Trufem, S.F.B., 1995 Cultivo de cogumelos
comestveis. So Paulo, cone. 206p.
Fidalgo, O. & Bononi, V. L. R., 1989. Tcnicas de coleta material botnico, preservao e
herborizao de material botnico. Instituto de Botnico. So Paulo. 62p. ilustr.
Fonseca, M.P. 1999. Aphyllophorales lignocelulticos da Reserva Biolgica do Alto da Serra de
Paranapiacaba, Santo Andr, SP. Tese de Doutorado, Universidade de So Paulo, So Paulo.
Kirk, P.M., Canon, P.F., Minter, D.W. & Stalpers, J.A. 2008. Dictionary of the fungi. CAB

International, Wallingford.
Largent, D.L. 1986. How to identify mushrooms to genus. I. macroscopic features. Mad River
Press, Eureka.
Largent, D.L., Johnson, D. & Watling, R. 1986. How to identify mushrooms to genus. III.
microscopic features. Mad River Press, Eureka.
Machado, K.M.G. 1998. Biodegradao de pentaclorofenol por fungos basidiomicetos ligninolticos
em solos contaminados por resduos industriais. Tese de Doutorado. Universidade Estadual
Paulista, Rio Claro. 172 p.
Matheus, D.R. & Okino, L.K. 1998. Utilizao de basidiomicetos em processos biotecnolgicos.
In: Bononi, V. L. R. & Grandi, R. P. (eds.) Zigomicetos, basidiomicetos e deuteromicetos
noes bsicas de taxonomia e aplicaes biotecnolgicas. Instituto de Botnica, Secretaria de
estado do Meio Ambiente, 184 p.
Matheus, D. R. & Machado, K. M. G. 2002. Biorremediao: potencial de aplicao para POPs. In:
Fernicola, N. A. G. & Oliveira, S. S. (Orgs). Produtos orgnicos persistentes POPs. S.S.(Ed.).
Salvador, CRA 13: 479-500.
Matheus, D. R. 2003. Otimizao da biodegradao de HCB por fungos basidiomicetos em solos
contaminados com resduos industriais. Tese de Doutorado. Universidade Estadual Paulista,
Rio Claro. 161p.
Mueller, G. M., Bills, G. F. & Foster, M. S. 2004. Biodiversity of fungi inventory and monitoring
methods. Eds. New York, Academic Press, pp. 123-168.
Raven P. H., Evert, R.F., Eichhorn, S.E., 1992. Biologia Vegetal. Rio de Janeiro, Guanabara
Koogan S.A. 5 ed. 728p.
Schulz, B., Wanke, U., Draeger, S. & Aust, H.-J. 2003. Endophytes from herbaceous plants and
shrubs: effectiveness of surface sterilization methods. Mycological Research 97: 1447-1450.

AGRADECIMENTOS
Ao Dr. Dcio Roberto Matheus, pela orientao dedicada no trabalho de doutorado alm da
reviso desse texto;
Dra. Adriana de Mello Gugliotta, pelas inmeras sugestes e reviso deste texto;
CAPES pelo auxlio financeiro atravs da bolsa de doutorado, concedida pelo Programa de
Ps-Graduao em Biodiversidade Vegetal e Meio Ambiente do Instituto de Botnica de So Paulo;
Ao Instituto de Botnica, em razo da cesso das instalaes e pela infra-estrutura oferecida,
principalmente Seo de Micologia e Liquenologia pela utilizao de laboratrios e equipamentos.