Instituto federal de educao cincia e tecnologia do serto pernambucano.

Priscila Ramos, Rafaela Cruz.

Caracterizao de enzimas

Petrolina, dezembro de 2012.

Introduo:
Enzimas so protenas especificas para catalisar reaes qumicas, principalmente
reaes biolgicas, elas aceleram significativamente as reaes e no sendo consumidas
durante o processo. As enzimas so bem especificas, interagem com um ou alguns
poucos substratos e catalisam apenas um tipo de reao qumica.
Essa especificidade se explica pelo modelo de Emil Fischer, proposto em 1984,
chamado modelo chave fechadura.

Objetivo:
Demonstrar a natureza proteica das enzimas.
Determinar qualitativamente a atividade enzimtica, usando a urase como exemplo.
Exemplificar inibio enzimtica.
Demonstrar a especificidade da ao enzimtica.

MATERIAIS:

REAGENTES:

Tubos de ensaio

Soluo de urase

Estante para
tubos
Pipeta

Reativo de biureto

Bico de bunsen

Tampo fosfato 0,001M, pH 7,0 (contendo 1% de tioureia).

Pina de madeira

Soluo vermelho de fenol

Piceta

Soluo de cloreto de mercrio a 0,01%

Pera

cido ntrico concentrado

Tampo fosfato 0,001M, pH 7,0 (contendo 1% de ureia).

gua destilada

Procedimentos:
Reao de Biureto:
Colocou se em um tubo marcado A, 2 gotas da soluo de urase, juntou se 2 ml de
gua. Agitou se e adicionou se 2 ml de reativo de biureto. Misturou se. Em tubo
marcado B, colocou se 2 ml de gua destilada e 2 ml do reativo biureto. Misturou se. E
em seguida comparou se a cor nos dois tubos.

Reao de Heller:
Em um tubo de ensaio colocou se 4 gotas de soluo de urase e 2 ml de gua destilada.
Agitou se. Mantendo o tubo inclinado juntou se pela parede 1 ml de cido ntrico
concentrado, sem agitar e de modo que se formem fases.

Teste de atividade da enzima:

Usou se dois tubos de ensaio marcados A e B. No tubo A colocou se 3 ml de tampo
fosfato 0,001M, pH 7,0 (concentrado 1% de ureia) e 2 gotas de urease. No tubo B
colocou se 3 ml de tampo fosfato pH 7,0 (sem ureia) e 2 gotas de urease. A ambos os
tubos adicionou se 1 gota de soluo vermelho de fenol. Agitou se e observou se
mudana de cor.

Desnaturao da enzima pelo calor:

Em um tubo colocou se 2 ml de gua destilada e 2 gotas de urase. Agitou se e ferveu se
por 2 minutos. Em outro tubo colocou se 3 ml de tampo fosfato 0,001 M, pH 7,0
(contendo 1% de uria), adicionou se 1 ml da soluo de urase fervida anteriormente e
1 gota de soluo de vermelho de fenol. Misturou se, aps 5 minutos observou se
mudana de colorao.

Inibio da enzima por sais de mercrio:

Em um tubo de ensaio colocou se 2 ml de gua destilada, 2 gotas da soluo de urase,
agitou se e adicionou se 1 gota de cloreto de mercrio a 0,01%. Agitou se e adicionou se
3 ml de tampo de fosfato contendo ureia e 1 gota de soluo vermelho de fenol.
Misturou se aps 5 minutos observou se mudana de colorao.

Especificidade da enzima
Tomou se dois tubos de ensaio e identificou os 1 e 2. No tubo 1 colocou se 3 ml de
tampo fosfato 0,001M, pH 7,0 (contendo 1% de ureia) e 2 gotas de urase. No tubo 2
juntou se 3 ml de tampo fosfato 0,001 M, pH 7,0 (contendo 1% de tioureia) e 2 gotas
de urease. A ambos os tubos adicionou se 1 gota de soluo vermelho de fenol.
Misturou se aps 5 minutos observou se mudana de colorao.

Resultado e Discusses:
Reao de Biureto:
Sendo o biureto um indicador prottico, depois de adicionado ao tubo que continha
urase a soluo adquiriu a colorao violeta, indicando presena de ligaes peptdicas.
No tubo que continha apenas o biureto e a gua no houve mudana significativa de cor,
apenas a cor azul proveniente do biureto, mostrando que a soluo no apresentava
ligaes peptdicas.

Reao de Heller:
Com adio de cido ntrico ao tubo contendo urase, ocorreu uma precipitao da
protena por um cido forte. Formando um anel branco e abaixo soluo de cor amarela.

Teste de atividade da enzima:

No tubo que continha a soluo tampo com ureia, quando colocado o vermelho de
fenol, aps cerca de 5 minutos apresentou colorao avermelhada, proveniente da
liberao de amnia e indicando a basicidade da reao.
No tubo contendo a soluo tampo sem ureia apresentou tonalidade alaranjada, que
caracterstica de solues com pH neutro ou cido.

Desnaturao da enzima pelo calor:

Durante o aquecimento houve a desnaturao da enzima e a soluo apresentou uma
colorao rosa brilhante, caracterstica de solues com pH elevado.

Inibio da enzima por sais de mercrio:

Com a adio da soluo de cloreto de mercrio no tubo a soluo adquiriu uma cor
alaranjada, devido inibio da enzima causada pelo mercrio, tornando-a com pH ente
neutro e cido.

Especificidade da enzima:
No tubo contendo a soluo tampo com ureia, apresentou tonalidade rosa, j que a
urase catalisa a reao promovendo a liberao de amnia e torna a soluo alcalina.
No tubo com a tioureia, no ocorreu mudana de cor, uma vez que a urase especfica
para catalise de reaes com ureia e no reagem da mesma forma com tioureia.

Concluso:
As enzimas em geral tem uma aplicabilidade muito diversificada em vrios ramos da
indstria, pois so protenas que permitem uma interferncia na matria prima de forma
desejvel e prtica.
Com a prtica realizada conclui-se que, para a aplicao de enzimas em processos
indstrias requer tambm um total controle das condies e aplicao dos mtodos
enzimticos, j que em condies extremas como de pH, temperatura, e a presena de
inibidores influenciam significadamente no processo, na qualidade e na quantidade do
produto.

Bibliografia:
KIELING, D. D.; Enzimas aspectos gerais; Universidade Federal de Santa Catarina;
Departamento de Engenharia Qumica e Engenharia de Alimentos; Florianpolis; 2002