Volumen 41 Nmero 3 Julio - Septiembre 2010.

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Trabajo Cientfico

Evaluacin de la seguridad y embriotoxicidad

del Neotrofin C y una formulacin similar
antianmica para administracin oral
Embryotoxicity and safety of Neotrfin C and one similar antianemic
formulations for oral administration
Manuel Rendn M1, Jorge Reyes Esparza1, Eliza Aznar2, Ral Gonzlez2, Lourdes Rodrguez Fragoso1
1

Facultad de Farmacia, Universidad Autnoma del Estado de Morelos

2 Centro Nacional de Biopreparados

Resumen
El hierro es un metal bsico para la mayora de las funciones celulares, su deficiencia o exceso se asocia con diversas patologas.
Las estrategias teraputicas actuales estn dirigidas a mantener los niveles de hierro dentro de un rango que permita su
biodisponibilidad, sin producir efectos txicos. En este trabajo se evalu la seguridad y embriotoxicidad de dos formulaciones
antianmicas en clulas humanas y en embriones de pollo. Las clulas y los embriones se trataron con las Frmulas (0.5, 0.75,
1.0, 1.25, 1.5, 1.75 y 2.0 g/mL) por 24 y 48 horas, respectivamente. Los resultados mostraron que ambas formulaciones no
fueron citotxicas, ni alteraron procesos como la proliferacin y el ciclo celular; adems no alteraron el desarrollo embrionario.
Los presentes resultados mostraron que las frmulas son seguras y no producen embriotoxicidad.
Abstract
Iron is an essential metal for the most cellular functions, its deficiency or excess is associated with different pathologies. Therefore,
the therapeutics strategies should maintain the levels within a range to allow its bioavailability, with not toxic effects. In present
work was evaluated the embryotoxicity and safety of two antianemic formulations on human cell and chicken embryo. Cells
and embryos were treated with the formulations (0.5, 0.75, 1.0, 1.25, 1.5, 1.75 y 2.0 g/mL) for 24 and 48 hours, respectively.
The results showed that both products were not cytotoxics and did not alter processes as cell proliferation and cell cycle, as
well as, did not alter the development of chicken embryo. Present results showed that both formulations were safe and did
not produce embryotoxicity.
Palabras clave: hierro, Neotrofin C, citotoxicidad, proliferacin,
embriotoxicidad.
Correspondencia
Lourdes Rodrguez Fragoso Ph.D.
Chamizal 259, Fraccionamiento Insurgentes CP 62200
Cuernavaca, Morelos. Mxico
Tel/fax 01 777 329 7089
Email: mrodriguezf@uaem.mx
lorodriguez@salud.unm.edu

Keywords: iron, Neotrofin C, citotoxicidad, proliferation,

embryotoxicity.

Fecha de recepcin: 13 de abril de 2010

Fecha de recepcin de modificacin: 2 de junio de 2010
Fecha de aceptacin: 10 de junio de 2010

Introduccin
La anemia por deficiencia de hierro es uno de los problemas
nutricionales de mayor magnitud en el mundo. A pesar de que
se conoce tanto su etiologa como la forma de enfrentarla y de
que las intervenciones son de bajo costo, hoy en da hay pases
que no han podido resolver este problema de salud1,2.
El hierro es un elemento necesario para el funcionamiento
normal de todas las clulas. Este elemento interviene en
el transporte de energa en todas las clulas a travs de los
citocromos; es fundamental en la sntesis de ADN y ARN;
juega un papel importante en la funcin del sistema nervioso
central y del sistema inmune; y tiene funciones antioxidantes.
Por lo que, la falta de hierro en el organismo puede producir
expresin inadecuada de sntesis proteica, de ARN y ADN, lo
cual puede tener repercusiones importantes en el funcionamiento
del organismo3.
Todas las clulas poseen un receptor especfico para la transferrina
(protena transportadora del hierro) en su superficie, pero el
nmero varia dependiendo del tipo de clula4. Ese receptor es
constante en clulas en reposo, pero aumenta marcadamente
durante la proliferacin celular. El complejo hierro-transferrinareceptor es internalizado en la clula a travs de un proceso de
endocitosis. Una vez en el citoplasma, el hierro puede seguir
tres destinos: (1) la utilizacin, para las diferentes funciones
celulares, (2) el almacenamiento, para asegurar la homeostasis
celular y (3) la regulacin, para detectar variaciones en los niveles
intracelulares del metal. Existe tambin un sistema de captacin
de hierro independiente de transferrina 5-7. En el entorno celular,
el hierro se halla generalmente presente en estado oxidado. Sin
embargo, estudios realizados en cultivos celulares utilizando
iones frricos o ferrosos mostraron un incremento de la actividad
de transporte de hierro, lo que indica que las clulas pueden
incorporarlo en las dos formas8-10.
El complejo metabolismo del hierro y su participacin en
numerosos procesos a nivel celular, requiere disear estrategias
teraputicas para mantener los niveles intracelulares de hierro
dentro de un rango que permita su biodisponibilidad para
aquellas reacciones en las que es un componente fundamental,
y minimizar su participacin como catalizador de la produccin
de especies txicas. A este respecto, numerosos estudios han
encontrado una correlacin positiva entre el almacenamiento
de hierro y estrs oxidativo en ciertas patologas, entre ellas
algunos cnceres11. Por otro lado, la citotoxicidad por hierro
ya ha sido previamente documentada en varios reportes. Por
ejemplo, Rauen y cols. han mostrado que el hierro per se puede
inducir dao celular y apoptosis a hepatocitos en cultivo, va
una transicin en la permeabilidad mitocondrial12 . Se sabe
que el hierro es esencial para la funcin neuronal, pero en
exceso genera neurodegeneracin13. Se ha encontrado que

altas concentraciones de hierro reactivo puede incrementar la

vulnerabilidad neuronal al estrs oxidativo y, que la acumulacin
de hierro puede incrementar la toxicidad de toxinas endgenas
y ambientales14,15.
El tratamiento de la anemia ferropnica se realiza con
suplementos de hierro por va oral o parenteral. Si bien la
administracin de hierro por va parenteral se considera una
medida eficaz y segura, tambin ha sido ms asociada con
diversos efectos adversos16. Algunos estudios experimentales
y modelos animales indican que un tratamiento excesivo con
hierro parenteral podra generar citotoxicidad, estrs oxidativo,
disfuncin neutroflica, e incluso, promover la aterosclerosis 17, 18.
Asimismo, durante la exposicin oral de hierro, existe tambin
un alto potencial de presentar toxicidad puesto que muy poca
cantidad de hierro es excretado por el organismo, adems el
hierro tiende a acumularse en los tejidos y rganos cuando sus
depsitos estn saturados19.
En la actualidad se cuenta con diversos productos para
aumentar la absorcin de hierro, los cuales estn combinados
con carbohidratos, sales inorgnicas, aminocidos y vitaminas.
Sin embargo, la biodisponibilidad y, por tanto, la eficacia y
seguridad de esos productos vara de un producto a otro20.
El Trofin es un antianmico que se presenta en forma de
suspensin oral y se obtuvo a partir de hierro hemnico de
origen animal, el cual ha demostrado ser eficaz en el tratamiento
y prevencin de las deficiencia de hierro. La eficacia de este
producto ha sido demostrada en nios, ancianos, deportistas,
embarazadas, pacientes quemados en estado crtico y pacientes
cancerosos sometidos a radio y quimioterapia 21-24 . Como
ventaja fundamental, adems de su origen natural, se aprecia
la ausencia total de reacciones colaterales adversas en pacientes
que lo consumen. Recientemente se han desarrollado nuevas
formas farmacuticas empleando las mismas materias primas del
Trofin, pero en forma de polvos obtenidos por deshidratacin.
A partir del polvo se elaboraron dos formulaciones (I y II) en
forma de tabletas conformadas por compresin directa, las
cuales contienen hierro hemnico e inico, se le ha adicionado
adems otros componentes a base de protenas, carbohidratos
y vitaminas, con el objetivo de potenciar su efecto. Por lo
tanto, el objetivo de este trabajo fue evaluar la seguridad y
embriotoxicidad de las dos formulaciones antianmicas en lneas
celulares humanas y en embriones de pollo.

Material y mtodos
Formulaciones I y II en forma de tabletas
La formulacin I, conocida comercialmente como Neotrofin-C,
contiene como principios activos hierro hemnico en
concentraciones de 20 mg y cido ascrbico 100 mg por tableta
de 700 mg. La formulacin II contiene 15 mg de hierro hemnico

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y 16 mg de hierro inico en forma de Fumarato ferroso, 50 mg de
cido ascrbico y 0.2 mg de cido flico por tabletas de 500 mg.
Para los experimentos, las tabletas fueron trituradas en mortero
y resuspendidas en agua estril.
Lneas celulares
Para el estudio se utilizaron 3 lneas celulares humanas: 293Q ,
WRL-68, y KHOS. Las clulas 293-Q son clulas epiteliales
renales humanas (Catlogo ATCC No. CRL-1573), las clulas
WRL-68 son clulas hepticas humanas (Catlogo ATCC No.
CL-48) y las clulas KHOS-240S son clulas de hueso humano
(Catlogo ATCC No. CRL 1545). Las clulas se cultivaron en
platos de 100-mm (106 clulas/plato) en Medio Mnimo Esencial
(MEM) (GIBCO BRL) suplementado con 10% suero fetal
bovino (SFB) (GIBCO BRL), 2mM L-glutamina (GIBCO
BRL), 0.1mM de aminocidos no esenciales (Sigma) y 1.0 mM
de piruvato de sodio (In vitro, S.A). Las clulas se cultivaron
bajo una atmsfera de 5% CO2 y temperatura de 37 oC.
Evaluacin de la viabilidad celular
Para los estudios de citotoxicidad en clulas 293Q , WRL-68,
y KHOS-240S se emple la tcnica de bromuro de 3-(4,5dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazolio (MTT), la cual se basa
en la conversin de dicho colorante a un precipitado insoluble
llamado formazn 25. Se sembraron aproximadamente 10,000
clulas (200 L) en placas de 96 pozos (Corning Incorporated
Costar) en medio MEM suplementado durante 24 horas.
Despus de ese tiempo, las clulas fueron tratadas con una
solucin de la Formulacin I o II en una dosis equivalente a
una concentracin de 0.5, 0.75, 1.0, 1.25, 1.5, 1.75 y 2.0 g/mL
de hierro en un volumen de 200 L, durante 24h. Se incluyo
un grupo solo con medio y se considero como control. Una vez
transcurrido el tiempo, se aspir cuidadosamente el medio y
se reemplaz con 200 L de medio nuevo y se agregaron 50
L de MTT (5mg/mL) para tener un volumen total de 250
L. Posteriormente se incubaron durante 4 h a 37 C con 5%
CO2. Posteriormente, se removi cuidadosamente el medio
con MTT y se agregaron 200 L de DMSO y 25 L de una
solucin amortiguadora de Sorensor (0.1M glicina, 0.1M NaCl
a pH 10.5) a cada pozo, despus se mezcl la placa hasta que
los cristales de formazn se disolvieron, y por ltimo se ley
en un lector de placas (Microplate Limaning System Modelos
Ultramark, Biorad) a una longitud de onda de 550 nm.
Evaluacin de la proliferacin celular
Se sembraron 5000 clulas en placas de 96 pozos en medio MEM
suplementado y se cultivaron durante 24 horas. Para inducir la
proliferacin celular, las clulas fueron estimuladas con factores
de crecimiento especficos. Se emple el factor de crecimiento
epidrmico (EGF, 20 g/mL) para las clulas 293Q , el factor de
crecimiento transformante beta 1 para las clulas KHOS (TGF1, 10 ng/mL), y el factor de crecimiento del hepatocito para
las clulas WRL-68 (HGF, 10 ng/mL), concentraciones finales
Publicado en lnea:

contenidas en 200 L. Las clulas fueron tratadas con diferentes

concentraciones de las formulaciones I y II (equivalente a 0.5,
0.75, 1.0, 1.25, 1.5, 1.75 y 2.0 g/mL de hierro) en un volumen
de 200 L, durante 24 h. Se dejaron clulas tratadas solo con los
factores de crecimiento para utilizarlas como control. El anlisis
de la proliferacin celular se realizo mediante la tcnica de MTT
de (3-[4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5- bromuro difeniltetrazolio),
como se describi previamente.
Anlisis del ciclo celular
Para el anlisis del ciclo celular se utilizo el mtodo descrito
por Darzynkiewicz26. Para esto se sembraron 50,000 clulas en
placas de 24 pozos en las condiciones anteriormente descritas.
Despus de 24 horas de incubacin se trataron con las diferentes
concentraciones de las formulaciones I y II (0.5, 0.75, 1.0, 1.25,
1.5, 1.75 y 2.0 g/mL) durante 24 horas. Despus de ese tiempo
se colect el medio con las clulas y se procedi a centrifugar
a 2000 rpm durante 10 minutos para obtener las clulas. Las
clulas se fijaron con alcohol etlico al 80% a 4C. Las clulas
permanecieron a una temperatura de menos 4 C hasta su uso.
Posteriormente, las clulas fueron rehidratadas con 1.5 mL agua
destilada y centrifugadas a 2000 rpm durante 10 minutos a
temperatura ambiente, transcurrido ste se decant hasta eliminar
el sobrenadante. Las clulas fueron lavadas con una solucin de
fosfatos y resuspendidas en 1% de NP40 (Nonidet P40, Biochimica
Fluka) y 10 g/mL ARNasa (Ribonucleasa A, preparacin libre de
ADNasa). Ioduro de propidio fue adicionado (concentracin final
de 5 mg/mL) y se dej reposar durante 15 minutos en oscuridad
a 4C, posteriormente se leyeron y analizaron las muestras en un
Citmetro de Flujo (Becton Dickinson Modelo Facsc Calibur
con lasser de 480 nm de argn).
Estudios de embriotoxicidad
Se utilizaron 50 huevos de pollo frtiles obtenidos de A.L.P.E.
S.A. (Puebla, Mxico) y se almacenaron a 6 C. Los huevos se
pesaron, esterilizaron y se dividieron en 8 grupos. El primer
grupo sirvi como control no tratado. Los siguientes 6 grupos
recibieron las formulaciones I y II (0.5, 1.25 y 2.0 g/mL). El
ltimo grupo recibi cafena (10 mg/mL) y fue usado como
control positivo. Un ensayo de teratogenicidad se realizo como
fue descrito por Jelinek y Marthan 27. Para tratar los embriones
se perforo el cascaron y las soluciones a evaluar (1 mL) fueron
adicionadas al saco de aire bajo condiciones de esterilidad,
despus los hoyos fueron sellados inmediatamente con parafina
lquida. Los huevos fueron transferidos y mantenidos en una
incubadora a 37.5 C con una humedad relativa del 55% hasta
que los embriones alcanzaron la etapa de desarrollo deseada
(48 h). Para determinar el efecto de las frmulaciones I y II, se
realizo un anlisis histolgico. Para esto, los embriones fueron
fijados en una solucin amortiguadora de formol salino (pH
7.4), se deshidrataron y se embebieron en bloques de parafina.
Se cortaron secciones de tejido de 6 m y fueron teidos con
acetocarmin para hacer un examen histolgico de rutina. Los

embriones se observaron mediante un microscopio estereoscopio

y se hizo un anlisis morfolgico comparativo de estructuras
del sistema nervioso central, somitas, sistema cardiovascular,
ectodermo y endodermo, enfatizando en las estructuras
embrionarias desarrolladas de acuerdo al estadio, tanto de los
embriones control como de aquellos embriones que recibieron
los diferentes tratamientos. Los embriones se examinaron y
se determin su estadio embrionario de acuerdo a los criterios
morfolgicos establecidos por Hamburger y Hamilton 28. Las
etapas embrionarias al final del tratamiento con las formulaciones
I y II variaron de 40-45.

flavonoides36. El uso de hierro combinado con, por ejemplo,

carbohidratos y vitamina C, ya ha sido previamente descrita
para el tratamiento de pacientes con anemia y dao renal, sin
producir efectos adversos37-39.

Anlisis estadsticos
Todos los valores fueron expresados como el promedio el error
estndar de la media de los valores obtenidos en 2 experimentos
conducidos por cuadruplicado. El anlisis estadstico se hizo
utilizando la prueba de Fisher, en donde valores de p< 0.05
fueron considerados significativos.

Resultados y discusin
En la actualidad existen mltiples formulaciones a base hierro en
el mercado, y aunque, hay preocupacin relacionada a su potencial
toxicidad, no existen evidencias directas de la seguridad in vitro
de esos agentes. El presente estudio fue enfocado a evaluar la
seguridad de dos formulaciones a base de hierro y vitaminas en
forma de tabletas en modelos in vitro e in ovo.
La toxicidad por hierro ya ha sido previamente documentada 29,
particularmente en rganos como el hgado, rin y hueso.
El hgado juega un papel central en el mantenimiento de la
homeostasis del hierro en el organismo; sin embargo, un exceso
en su depsito conduce a dao celular e insuficiencia funcional
debido a la alta produccin de especies reactivas de oxgeno30,31.
Por otro lado, ha sido reportado que el exceso de hierro inhibe
la proliferacin y diferenciacin de osteoblastos32. Mientras que,
Mandalunis y Ubios han encontrado que el hierro es un factor
ms, involucrado en la prdida de la homeostasis del metabolismo
seo en pacientes con falla renal tratados con hierro33, debido a
un alto contenido de hierro por la disfuncin renal34.
Como se puede apreciar en la Figura 1 ambas formulaciones no
produjeron efectos citotxicos a las clulas renales, hepticas, y
seas. Las formulaciones I y II son dos productos farmacuticos
con hierro, aminocidos, protenas, vitamina C, cido flico,
propleos y miel de abeja. La compleja mezcla de componentes
de estos productos restaura los niveles sricos de hierro, pero
adems parecen ejercer cierta citoproteccin. Lo anterior no
es de extraar, ya que al hierro se le han atribuido efectos
citoprotectores35; adems, la miel y el propleo son productos
originados en la colmena que poseen varias propiedades
biolgicas, entre ellas antioxidantes, por su alto contenido de

Figura 1. Efecto de las formulaciones I y II sobre la viabilidad

celular. Los resultados son expresados como el promedio + D.S.,
de tres experimentos independientes.
*p < 0.05 comparado con el grupo control.

El hierro es un componente esencial de muchas protenas y enzimas

que estn involucradas en el crecimiento y replicacin celular40.
El ciclo celular de clulas de mamfero es altamente controlado,
y su alteracin puede llevar al desarrollo tumoral. El ciclo
celular es principalmente regulado por factores de crecimiento y
hormonas; sin embargo, existen nutrientes especficos, los cuales
funcionan como fuentes de energa o regulan la produccin y/o
funcin de protenas necesarias para que las clulas avancen a
travs de un ciclo replicativo, entre ellas el hierro41. El hierro es
esencial para el crecimiento celular debido a su papel como un
cofactor en protenas involucradas en la respiracin mitocondrial
y sntesis de ADN. Clulas proliferantes son particularmente
sensibles cuando hay una deplecin de hierro, debido a que este
altera la expresin de la ciclina D, la cinasa dependiente de
ciclina 2 (CDK 2) y el inhibidor p21 de CDK, los cuales estn
involucrados en la progresin del ciclo celular de la fase G1 a
S42,43. Por lo tanto, los niveles de hierro deben mantenerse en
concentraciones adecuadas para que la maquinaria del ciclo
celular funcione adecuadamente. En este estudio mostramos que
las formulaciones I y II no modificaron ninguna fase del ciclo
celular en las tres lneas celulares a las concentraciones empleadas
(Figura 2). Considerando la importancia del hierro en procesos
celulares vitales como la sntesis de ADN, no es sorprendente
que el ciclo celular sea ajustado a la disponibilidad de hierro.
Muchas protenas del metabolismo de hierro muestran un alto
grado de expresin en clulas tumorales, indicando que el hierro
juega un papel importante en la tumorignesis y desarrollo44.
Las clulas neoplsicas requieren una mayor cantidad de hierro
Publicado en lnea:

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Figura 2. Porcentaje de clulas en fases G1, S, y G2/M del ciclo

celular posterior al tratamiento con las formulaciones I y II
durante 24 h. Los resultados son expresados como el promedio
+ D.S., de tres experimentos independientes. FI= Formulacin
1; FII= Formulacin II.
*p < 0.05 comparado con el grupo control.

debido a que ellas proliferan a una mayor velocidad que su

contraparte normal45. En el presente estudio se evalu el efecto
de diferentes concentraciones de las formulaciones I y II en la
proliferacin inducida por diferentes factores de crecimiento.
Como podemos observar en la Figura 3, las formulaciones I y
II a las diferentes concentraciones evaluadas ni aumentaron ni
redujeron la proliferacin inducida por factores de crecimiento
en las lneas celulares empleadas. Aunque ha sido sealado
que el hierro causa alteraciones e inhibe la sntesis de ADN
solamente en clulas proliferantes46,47, en nuestro estudio no
indujo cambios significativos en la proliferacin celular. Este
hecho es un punto a su favor, ya que no sera contraproducente
su uso en pacientes oncolgicos.
En este trabajo se realiz tambin un estudio de embriotoxicidad
utilizando para ello el modelo de embrin de pollo para evaluar
el potencial teratognico de las formulaciones I y II. Se sabe
que en la etapa embrionaria, las clulas estn en constante
duplicacin para la formacin de tejidos, rganos y estructuras
importantes para el desarrollo, como el eje neural que guiar
al sistema nervioso central y cardiovascular, entre otros. Los
requerimientos de hierro en el desarrollo embrionario han sido
sealados previamente y est bien documentado el papel que el
hierro juega en el desarrollo embrionario y fetal48,49; asimismo,
ha sido sealado que puede ser txico si el embrin se expone a
concentraciones muy elevadas41. Nuestros resultados mostraron
que ambas formulaciones no produjeron efectos embriotxicos a
las concentraciones 0.5, 1.25 y 2 g/mL. La ausencia de efectos
embriotxicos no es raro si consideramos que otros productos
equivalentes (Trofin y Neotrofin) que estn suplementados
tambin con propleos y protenas ya han sido empleados en
mujeres embarazadas y en ratas preadas, sin producir efectos
Publicado en lnea:

Figura 3. Efecto de las formulaciones I y II sobre la proliferacin

celular inducida por factores de crecimiento. Los resultados
son expresados como el promedio + D.S., de tres experimentos
independientes.
*p < 0.05 comparado con el grupo control,
# p < 0.05 comparado con el grupo con factor de crecimiento.

embriotxicos y teratognicos21. Aunque, este grupo report

previamente la toxicidad del Trofin, utilizando el modelo de
embrin de pollo, los hallazgos previos encontrados en ratas
preadas sugieren que el organismo a travs de la barrera
digestiva no permite su incorporacin al sistema circulatorio y
ello explica que a los embriones provenientes de madres gestantes
que lo consumen por va oral no presenten alteracin alguna 50.
En la actualidad el Trofin es utilizado para consumo diario de
la poblacin Cubana, incluidas mujeres embarazadas, y no hay
reportes de teratogenicidad.
En el presente estudio se muestran evidencias de que ambas
formulaciones no produjeron efectos txicos ni alteraron el
ciclo celular de las lneas celulares humanas estudiadas; no
incrementaron la proliferacin celular inducida por factores de
crecimiento. Adems no produjeron ningn efecto txico en el
modelo de embrin de pollo. Si bien los presentes resultados
aportan evidencias de la inocuidad en los modelos estudiados,
y dado que hay antecedentes de toxicidad inducida por el hierro,
no se descarta la posibilidad de desarrollar efectos adversos
in vivo, en particular si ocurre una sobreexposicin a las
formulaciones.
Nuestros resultados mostraron que ambas formulaciones no
produjeron efectos embriotxicos a las concentraciones 0.5, 1.25
y 2 g/mL (Figura 4). La ausencia de efectos embriotxicos no es
raro si consideramos que otros productos equivalentes (Trofin
y Neotrofin) que estn suplementados tambin con propleos
y protenas ya han sido empleados en mujeres embarazadas
y en ratas preadas, sin producir efectos embriotxicos y
teratognicos21. Aunque, este grupo report previamente la
toxicidad del Trofin, utilizando el modelo de embrin de pollo,

los hallazgos previos encontrados en ratas preadas sugieren

que el organismo a travs de la barrera digestiva no permite
su incorporacin al sistema circulatorio y ello explica que a los
embriones provenientes de madres gestantes que lo consumen
por va oral no presenten alteracin alguna 50. En la actualidad
el Trofin es utilizado para consumo diario de la poblacin
Cubana, incluidas mujeres embarazadas, y no hay reportes de
teratogenicidad.

Figura 4. Apariencia morfolgica del embrin de pollo tratado

con diferentes concentraciones de las formulaciones I y II; a,
b, c: embriones tratados con la formulacin I; d,e,f: embriones
tratados con la formulacin II. Los embriones fueron tratados
con 0.5, 1.5 y 2 g/mL de la formulacin I o II durante 48 horas.
Los embriones muestran una morfologa parecida al embrin
normal. Se utiliz cafena (10 mg/mL) como control positivo
de teratogenicidad.

Conclusiones
La evaluacin de la seguridad y embriotoxicidad de las
formulaciones I y II mostr que estos compuestos fueron seguros
en las lneas celulares renales y hepticas, as como en el embrin
de pollo. Aunque los presentes resultados muestran que ambas
formulaciones no son txicas, los autores consideran importante
realizar ms estudios toxicolgicos en modelos in vivo para
corroborar la seguridad de ambas formulaciones.

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