dicroismo circular

Toda la instrumentacin para DC utiliza la tcnica de modulacin, la luz de un monocromador es

polarizada linealmente, luego pasa a travs de un dispositivo de modulacin, un modulador
fotoelstico (PEM), que convierte la luz polarizada linealmente a luz polarizada circularmente,
alternando entre luz polarizada circularmente a la izquierda (lcpl) y luz circularmente polarizada a la
derecha (lcpr) a la frecuencia de modulacin. La luz incidente en la muestra se modula entre
polarizacin circular derecha e izquierda, entonces si la muestra presenta DC, la intensidad de la
luz detectada por el fotomultiplicador tambin se va a modular a la misma frecuencia. La corriente
en el circuito del fotomultiplicador consistir, por tanto, de una pequea corriente alterna (ac) y una
corriente directa larga (dc).
Se requiere un conjunto de celdas de cuarzo de alta calidad con buena transmisin en el UV lejano
(ya sean rectangulares o cilndricas) con longitudes de trayectoria que van de 0.1 a 10 mm. Las
micro o semimicro celdas con longitud de trayectoria de 10 mm se utilizan particularmente para
mediciones de DC en el UV cercano empleando volmenes pequeos (0.25 ml). Las celdas se
deben limpiar inmediatamente despus de usarlas para evitar la acumulacin de depsitos de
protena difciles de eliminar.
Todas las muestras deben de ser de la ms alta pureza posible. Se pueden obtener resultados
errneos incluso cuando existan niveles relativamente bajos de impurezas, si estos tienen seales
de DC fuertes. Por ejemplo, seales dbiles de protenas en el UV-cercano pueden saturarse por
seales fuertes de niveles relativamente pequeos de cidos nucleicos contaminantes.
Uno de los principales problemas en las medidas de DC es que las seales se distorsionan
significativamente si no llega la suficiente luz al fotomultiplicador y, en trminos prcticos, esto
quiere decir que no se pueden hacer medidas confiables en muestras con una absorbancia
(muestra + solvente) mayor a 1.
Siempre se debe verificar el espectro de absorcin de una muestra para comprobar que no se
supere este lmite de absorbancia. En el UV-lejano, las mediciones de absorbancia de la muestra
por s misma son generalmente bastante pequeas, y el principal problema surge de la absorcin
de los componentes del amortiguador, casi todos los cuales limitarn la penetracin del UV-lejano
en cierta medida.
La calibracin del instrumento debe verificarse peridicamente. Aunque hay diversos estndares de
DC disponibles, uno de los ms usados es el acido sulfnico de alcanfor d10 (d10-CSA). La
concentracin exacta de una solucin de d10-CSA en agua (a ~2.5 mM) se debe determinar de un
espectro de absorcin (usando 285=34.5 M-1 cm-1) y no de su masa porque este compuesto en
estado slido es altamente higroscpico.
Dispositivo de salida
El modulador utilizado generalmente consiste de un piezoelctrico de cristal de cuarzo y de una
placa delgada de material isotrpico (por ejemplo, cristal de silicio) firmemente acoplada al cristal.
El campo elctrico alternante induce cambios estructurales en el cristal de cuarzo; esto hace que la
placa transmita luz polarizada circularmente en los extremos del campo. Como la radiacin
transmitida cambia entre los componentes L y R, estos se detectan a su vez por un
fotomultiplicador.