LA VALIDACIN DE MTODOS ANALTICOS

F. Xavier Rius, Alicia Maroto, Ricard Boqu, Jordi Riu

Departmento de Qumica Analtica y Qumica Orgnica.
Instituto de Estudios Avanzados
Universitat Rovira i Virgili.
Pl. Imperial Trraco, 1. 43005-Tarragona. Espaa.

Inauguramos con este primer trabajo una serie de artculos de divulgacin que
va a tener como denominador comn la validacin de las metodologas en el
laboratorio de anlisis. El concepto general de validacin que se presenta hoy va
a ir desarrollndose sucesivamente en sus aspectos ms particulares. Vamos a
tratar de la exactitud, precisin, selectividad, sensibilidad, linealidad, intervalos
de aplicacin, lmites de deteccin y cuantificacin o robustez de los mtodos
analticos, entre otros aspectos. Especial atencin van a merecer los apartados
de trazabilidad e incertidumbre que, por su importancia prctica, van a tratarse
con mayor extensin y profundidad.
El concepto de validacin

Debemos resaltar el hecho que

se valida con respecto a un uso
especfico
determinado
de
antemano. Esta nocin amplia de lo
que implica la validacin equivale al
concepto de adecuacin a la
finalidad o propsito perseguido fitfor-purpose. La validacin sera
pues el proceso de verificar que un
mtodo es adecuado para su
finalidad, esto es, adecuado para
resolver un problema analtico
particular. Como sucede con muchas
definiciones,
es
necesario
desarrollarlas para extraer todo su
contenido. Hay unas cuantas
preguntas
que
surgen
inmediatamente y que requieren
respuestas prcticas: Porqu es
necesario validar los mtodos?
Cundo y cuantas veces se debe
validar un mtodo?Cmo se lleva a
cabo? Quin establece estos
requisitos? Cuantos requisitos
existen?Cules son?

Validar un mtodo de anlisis

consiste en verificar y documentar su
validez, esto es, su adecuacin a
unos
determinados
requisitos
previamente establecidos. De hecho,
la definicin que proporciona la
norma ISO 8402 [ISO, 1994] (ver
Cuadro 1) es muy semejante.

Cuadro 1: Concepto de validacin segn ISO

Validacin:
confirmacin mediante examen y
provisin de evidencias objetivas
que se cumplen los requisitos
particulares para un uso especfico
determinado ISO 8402

Porqu es necesario validar los

mtodos de anlisis?
El anlisis se considera hoy en
da un proceso mediante el cual
obtenemos informacin. Se realizan
millones de anlisis cada da en el
mundo en los mbitos ms variados:
anlisis
de
productos
manufacturados,
anlisis
medioambientales, anlisis clnicos,
forenses, qumico y fsicos,... En
todos ellos se requiere una
confianza
en
los
resultados
obtenidos. La validacin de las
metodologas analticas, junto con
otras actividades englobadas en la
gran rea del aseguramiento de la
calidad, permiten conseguir calidad,
otorgando la confianza necesaria a
la vez que confieren un grado
elevado de comparabilidad entre los
resultados de los anlisis qumicos
(ver Figura 1).

Figura 2: Pilares fundamentales para para

conseguir la calidad en los anlisis fsicos.

Desde la vertiente econmica,

los costes asociados al proceso
analtico suelen ser elevados y
surgen costes adicionales ligados a
las decisiones que se toman sobre la
base de los resultados obtenidos. No
nos podemos permitir el lujo, por
ejemplo, de que nos devuelvan un
lote de producto expedido en funcin
de unos resultados analticos que
errneamente
expresaban
conformidad a la normativa vigente.
Una correcta validacin del mtodo
debera
haber
detectado
la
presencia de error en los resultados
emitidos.

Los requisitos analticos

Delante de un problema
analtico determinado, idealmente el
laboratorio debera acordar con el
usuario de los resultados los
requisitos analticos que se precisan.
Por ejemplo, si el laboratorio de una
empresa realiza el control de un
parmetro de un producto, dado que
la compaa est bajo las normas de
la serie ISO 9000, existe un nivel
minino permitido. El responsable de
expedicin debe exigir que el
resultado sea trazable y con un nivel
de precisin suficientemente elevado
para asegurar que el parmetro
cumple con la normativa. El
responsable del laboratorio sabe, a

Figura 1: Pilares fundamentales para

conseguir la calidad en los anlisis
qumicos.

Si las medidas que se realizan son

en el mbito del anlisis de
magnitudes fsicas, la calibracin de
aparatos e instrumentos adquiere un
papel determinante (ver Figura 2)

su vez, que deber utilizar un

mtodo analtico que tenga un lmite
de cuantificacin por debajo del valor
mnimo permitido. As mismo, el
responsable sabe la rapidez con la
que debe dar el anlisis i el coste
que representa.

selectividad, sensibilidad, lmites de

identificacin y cuantificacin o
robustez. La representatividad es,
asimismo, un parmetro de calidad
importante
que
est
ligado
fundamentalmente a la toma de
muestras. Entre los criterios de tipo
operativo/econmico se encuentran
la facilidad de comprensin del
mtodo
y
manejo
de
la
instrumentacin, la rapidez del
anlisis, su coste, la inversin, el
mantenimiento, etc.

Por tanto, los requisitos

analticos para un uso determinado
determinan los parmetros o criterios
de calidad del mtodo a utilizar para
resolver el problema (Cuadro 2).
Estos criterios de calidad, llamados
performance
characteristics
o
figures of merit en ingls, pueden
ser de tipo estadstico o de tipo
operativo/econmico.
Entre
los
primeros figuran los parmetros
fundamentales
de
exactitud
(relacionado con la trazabilidad) y
precisin (relacionado con la
incertidumbre) y los secundarios de

Cuadro 2: Parmetros de calidad de un

mtodo
Tipo matemtico-estadstico Tipo operatorio-econmico

Exactitud, Trazabilidad
Precisin, Incertidumbre
Representatividad
Sensibilidad
Selectividad
Lmites
Robustez

Inversin
Mantenimiento
Rapidez
Facilidad de uso
Simplicidad
Gastos directos
Gastos indirectos

La Gua EURACHEM titulada

The fitness for Purpose of Analytical
Methods. A Laboratory Guide to
method Validation and Related
Topics
[EURACHEM,
1998]
proporciona el siguiente esquema
bsico (Figura 3) que relaciona los
requisitos
analticos
con
los
parmetros de calidad que debe
poseer el mtodo seleccionado para
la
resolucin
del
problema
planteado.

En la realidad, muchas veces

no est bien definido quin es el
usuario de los resultados analticos.
El usuario puede ser un cliente
externo, personal de la misma
empresa que requiere resultados, la
administracin que se gua por la
legislacin vigente, una cierta
normativa
de
cumplimiento
voluntario o algn otro ente no
definido. En otras ocasiones, el
usuario no est capacitado para
definir los requisitos analticos. Sabe
que quiere el resultado lo ms
rpidamente posible y a bajo coste
pero difcilmente puede definir un
cierto
nivel
de
precisin
o
trazabilidad. El responsable del
laboratorio, en numerosas ocasiones
debe suplir al usuario en estas
funciones a la vez que debe realizar
cierta labor pedaggica para asignar
el valor que tienen sus resultados.

El problema requiere
un anlisis qumico:
Conjunto de
requerimientos

Desarrollar
mtodo

SI

SI

Identificar un mtodo
existente o desarrollar
uno nuevo

Evaluar mtodo. Es adecuado para el

Es posible
desarrollos
posteriores
?

laboratorio?

Relajar
requerim
ientos?

N
Notas:
La validacin de un mtodo consiste
en una etapa de evaluacin, donde
algunos parmetros escojidos
son evaluados bajo las condiciones
del mtodo.
Sea cual sea la calidad de los datos
disponibles para el mtodo, la
adecuacin a la finalidad o propsito
perseguido, Fit for purpose ser
determinada por el funcionamiento
del mtodo cuando se usa por el
analista designado con el material
disponible.

SI

Realizar trabajo
analtico

Imposible
realizar el trabajo
subcontratar?

Replantear los requisitos

analticos en funcion
de los resultados

FIN

Figura 3: Eleccin, desarrollo y evaluacin de mtodos

Cundo es necesario validar los
mtodos de anlisis?

Existen muy buenas recetas que han

sido previamente probadas y que se
describen con todo lujo de detalles.
Basta ello para obtener un buen
plato en nuestra cocina? Todos
sabemos que no. Ocurre lo mismo
con los mtodos previamente
validados. Sin duda, con ellos
podemos
alcanzar
buenos
resultados pero hace falta demostrar
que funcionan en nuestro mbito de
trabajo. Por tanto, un mtodo
siempre debe validarse cuando es
necesario
verificar
que
sus
parmetros de calidad se adecan al
problema analtico particular que
debemos resolver en nuestro
laboratorio. Por ejemplo, debe
validarse:

Muchas analistas consideran

que un mtodo estndar o de
referencia, que ha sido validado por
algn organismo que posee una
cierta reputacin, puede aplicarse
directamente en nuestro laboratorio.
La validacin del mtodo ya
realizada
se
considera,
errneamente,
una
garanta
suficiente para obtener resultados de
calidad.
La razn es fcil de entender.
Dado que existe cierto paralelismo
entre el laboratorio de anlisis y la
cocina, vamos a
utilizar la
semejanza entre un procedimiento
analtico ya validado y una receta
descrita en un buen libro de cocina.

Un nuevo mtodo desarrollado

para una aplicacin especfica

Un mtodo establecido que se

utiliza en un laboratorio diferente,
con instrumentacin y/o analistas
distintos
Un mtodo establecido que se ha
adaptado a un nuevo problema
Un mtodo en el que el control
de calidad interno indica cambios
con el tiempo

Las normas
validacin

bsicas

de

agua de consumo puede

cometer errores al analizar
aguas residuales. Este ejemplo
sencillo
ilustra
sobre
la
importancia
de
considerar
durante la validacin las
distintas matrices que nos
encontraremos en las muestras
de rutina.
Quin debe validar los mtodos
analticos?

la

La validacin constituye la
ltima etapa del desarrollo de un
nuevo mtodo analtico. Si el mtodo
se
presenta
como
novedad
cientfica,
es
decir,
cuando
normalmente se publica en una
revista
de
resultados
de
investigacin,
no
suele
ir
acompaado de esta ltima etapa o
sta es muy sucinta. Si el mtodo se
desarrolla por una empresa para su
uso interno, debe llevarse a cabo un
cierto grado de validacin para
asegurar
que
funciona
correctamente. Sin embargo, cuando
alguna organizacin (como por
ejemplo AOAC, ASTM, ...) desea
adoptar un mtodo como mtodo de
referencia, y va a ser utilizado por un
cierto nmero de laboratorios, se
requiere un proceso de validacin
completo. La organizacin debe
asegurar la calidad del mtodo
llevando a cabo una serie de
ensayos dentro del laboratorio y
entre distintos laboratorios.

Hay tres normas bsicas que

deben cumplirse cuando se ha de
validar un mtodo en nuestro
laboratorio:
1.
Debe
validarse
el
procedimiento completo. A
menudo se tiene la tendencia a
considerar la etapa de medida
instrumental como la ms
importante. En realidad, debido
al avance de la instrumentacin
analtica, esta etapa es la que
suele introducir menos error.
Por el contrario las etapas
previas,
que
requieren
frecuentemente
una
intervencin
humana
ms
elevada, son susceptibles de
incorporar mayor sesgo y/o
componentes
de
la
incertidumbre mayores.
2.
Debe validarse todo el intervalo
de
concentraciones.
Todo
analista experimentado conoce,
por ejemplo, que la precisin
del mtodo vara con la
concentracin del analito. No
es lo mismo analizar un
componente que se encuentra
a niveles traza o subtraza que
a niveles de componente
mayoritario o minoritario.
3.
Debe validarse teniendo en
cuenta la variedad de matrices.
Parece
evidente que un
laboratorio que domina la
determinacin de cloruros en

Sin embargo, desde la ptica

del usuario, es importante remarcar
que el laboratorio que desea utilizar
para el anlisis de rutina un mtodo
analtico previamente validado es el
responsable de asegurar que dicho
mtodo es vlido para el uso
propuesto en las condiciones de
anlisis rutinario. Por tanto, se
precisa una cierta verificacin del
mtodo en las condiciones en las
5

que va a utilizarse. Ahora bien, como

se describe a continuacin, el grado
de verificacin puede ser muy
distinto segn la situacin en la que
nos encontremos.

mtodo (pendiente de la recta de

calibrado), o la selectividad en
algunos ensayos cromatogrficos,
son algunos ejemplos de estos
ensayos que normalmente se
especifican en los procedimientos
normalizados de trabajo.

Cul es el grado de verificacin

para utilizar de forma rutinaria un
mtodo previamente validado?

Tambin existe la validacin

retrospectiva que permite calcular la
precisin a lo largo de un perodo de
tiempo prolongado o las acciones
que forman parte del control de
calidad interno [IUPAC, 1995].

La validacin interna de un
mtodo es el proceso de verificar,
dentro de un laboratorio, que un
mtodo previamente validado en otro
mbito conduce a resultados fiables.
Existen distintas posibilidades.

La documentacin de los mtodos

validados

Los ensayos de adecuacin se

aplican cuando se quiere transferir
un mtodo desde un laboratorio
(donde se ha validado de forma
completa) a otro que quiere
adoptarlo como mtodo de rutina. En
estos
ensayos,
relativamente
sencillos, dado que previamente se
ha validado la ausencia de sesgo,
bias, en el mtodo de anlisis, debe
verificarse solamente que no se
introduce sesgo por parte del
laboratorio. As mismo el laboratorio
debe estimar sus propios valores de
precisin (repetibilidad, precisin
intermedia) para poder asignar la
incertidumbre correspondiente al
resultado. En caso de realizar
determinaciones que se encuentran
cerca del lmite de deteccin, dado
que ste depende, entre otros
factores,
tambin
de
la
instrumentacin y de la pericia del
analista, el laboratorio debe verificar
tambin este parmetro.

Una vez que se ha completado

el proceso de validacin, es muy
importante
documentar
el
procedimiento de tal forma que el
mtodo analtico pueda reproducirse
sin ninguna ambigedad. El uso de
los procedimientos especficos o
normalizados de trabajo, PNTs, que
reflejan los detalles concretos de la
metodologa analtica, aseguran que
el mtodo se aplica siempre del
mismo modo.
La norma ISO 78-2 [ISO, 1982]
proporciona una gua sobre la
informacin que debe incluirse
cuando se documenta un mtodo
analtico. As mismo, ENAC [ENAC,
1996] o la gua EURACHEM
[EURACHEM, 1998] proporcionan
indicaciones sobre este tema.

Conclusin

Otros ensayos de verificacin

se realizan rutinariamente para
comprobar
que
todo
el
procedimiento analtico funciona
correctamente antes de empezar
una nueva serie de determinaciones.
Comprobar la sensibilidad del

La
validacin
de
mtodos
proporciona una idea de las
capacidades y limitaciones que
posee un mtodo analtico cuando
se utiliza para el anlisis rutinario. El
concepto de validacin expresado es
muy similar a lo que se ha
6

de los laboratorios de ensayos,

Madrid, 1996.

denominado la aproximacin basada

en criterios. En algunos mbitos se
obliga, an hoy en da, a utilizar un
mtodo
oficial
para
producir
resultados. Dado que la legislacin
se queda frecuentemente obsoleta
ante el avance cientfico, esta
aproximacin puede perjudicar la
bondad de los resultados alcanzados
e incluso el avance de las
metodologas. Por ello, algunos
comits recomiendan la prescripcin
de criterios que deberan cumplirse
para determinada aplicacin en lugar
de la prescripcin de metodologas
analticas especficas.

Los autores agradecen todos los

comentarios relacionados con los
contenidos de este artculo. Pueden
dirigirse,
mediante
mensaje
electrnico,
a
la
direccin:
quimio@quimica.urv.es.
Una
versin en soporte electrnico de
este artculo puede leerse en:
http://www.quimica.urv.es/quimio

Referencias bibliogrficas
EURACHEM, The fitness for
Purpose of Analytical Methods. A
Laboratory
Guide
to
method
Validation and Related Topics
EURACHEM
Secretariat,
Teddington,
Middlesex,
1998.
(http://www.vtt.fi/ket/eurachem)
ISO, International Organization for
Standardization, ISO Guide 78-2:
Layouts for standards. Part 2:
Standard for chemical analysis,
Ginebra, 1982.
ISO, International Organization for
Standardization, ISO Guide 8402:
Quality- Vocabulary, Ginebra, 1994.
IUPAC, Guidelines on Internal
Quality Control in Analytical
Chemistry Laborato-ries. Edited M.
Thompson y R. Wood, Pure Appl.
Chem. 1995, 67, 649.
ENAC, Criterios generales de
acreditacin. Competencia tcnica