Manual Bacter

MAYRA TORRES GMEZ
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA
Manual de bacter
UACH
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE
CHIHUAHUA
FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS
Bacteriologa Mdica
PRACTICA 1
CEPAS DE REFERENCIA
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNA:
Mayra Torres Gmez 190128
7mo B
Manual de bacter
UACH
RESUMEN
En este anlisis se llevo acabo la identificacin de Salmonella enteritidis, S.
typhi, Shigella sonnei, Yersinia enterocolitica y Vibrio parahemolyticus, donde se
utiliz el agar TCBS nicamente para V. parahemolyticus, el SB para salmonellas,
por el hecho de ser un agar altamente selectivo para dichas bacterias y los agares
MacConkey, XLD y SS para Salmonellas, Shigella y Yersinia, el agar XLD se utilizo
debido a que permite diferenciar a travs de la produccin de acido sulfhdrico
(H2S) a la Salmonella de la Shigella, el MacConkey fue utilizado por ser una agar
que permite el crecimiento de las bacterias Gram negativas e inhibe a las Gram
positivas.
Para la identificacin se inocularon las bacterias antes mencionadas a partir de
cepas de referencia, despus de 24 horas de incubacin a 37C se observaron las
caractersticas microscpicas y microscpicas, para posteriormente realizar las
pruebas bioqumicas de cada una de las diferentes bacterias para una identificacin
mas especifica, los resultados obtenidos en las pruebas bioqumicas tuvieron
algunas variantes con respecto a los resultados reales.
INTRODUCCION.
ENFERMEDADES GASTROINTESTINALES.
Las enfermedades gastrointestinales ocupan una de las primeras causas de
consulta mdica y son tambin una de las primeras causas de muerte en Mxico y
en el mundo.
No perdonan a nadie ni por edad ni por condicin social, aunque el grupo ms
vulnerable a sus sntomas son los nios pequeos y los ancianos.
Son ocasionadas por varios motivos que pueden ser desde orgnicos y psicolgicos,
pero principalmente son causadas por bacterias, virus o parsitos que penetran al
organismo por medio de alimentos y agua contaminada principalmente con materia
fecal que tambin se disemina por el ambiente, sobre todo en temporada de calor.
Entre los principales microorganismos que las ocasionan estn: la Salmonella, la
Escherichia coli, la Shigella, las Giardias y las temibles amibas.
Las principales manifestaciones son.
Fiebre.
Dolor estomacal o abdominal (clicos).
Nuseas.
Vmito.
Diarrea.
Constipacin o estreimiento.
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Una de las consecuencias y complicaciones ms graves cuando hay diarrea y
vmito, es la deshidratacin.
Los rganos que son afectados con mayor frecuencia son: el esfago, estmago,
duodeno, ano, recto, pncreas y los intestinos, el delgado y el grueso.
Entre los estudios para identificar exactamente el tipo de problema, estn los de
sangre, materia fecal, endoscopas, radiografas y ecografas, adems de la
exploracin fsica y la historia clnica.
La fiebre tifoidea es una infeccin bacteriana caracterizada por diarrea,

enfermedad sistmica y erupcin cutnea, causada ms comnmente por la bacteria
Salmonella typhi.
La bacteria Salmonella typhi se propaga por alimentos, agua y bebidas
contaminadas. Despus de su ingestin, la bacteria se propaga desde el intestino
hasta los ganglios linfticos del intestino, hgado y bazo por la sangre donde se
multiplica.
Puede infectar directamente la vescula biliar a travs del conducto heptico o
extenderse a otras reas del cuerpo por medio del torrente sanguneo. Los sntomas
iniciales son generalizados e incluyen: fiebre, malestar general y dolor abdominal. A
medida que avanza la enfermedad, la fiebre aumenta (por encima de 39,5 C/103
F) y la diarrea se hace ms frecuente. Se observa debilidad, fatiga profunda, delirio,
y aspecto de malestar general agudo de aparicin repentina.
Algunas personas pueden convertirse en portadores de la bacteria Salmonella
typhi y continuar expulsando la bacteria en sus heces por aos, diseminando la
enfermedad.
Salmonella enteritidis, se puede encontrar dentro de huevos en apariencia
normales, pero que si se comen crudos o insuficientemente cocidos, pueden causar
enfermedad. Esta bacteria infecta los ovarios de gallinas aparentemente sanas y
contamina los huevos antes de que se forma la cscara. Durante la evisceracin de
los animales se puede producir la contaminacin de al carne a travs de sus
intestinos.
Normalmente se transmite a los humanos por comer productos contaminados con
excrementos animales. Los alimentos contaminados huelen y tiene una apariencia
normal y son frecuentemente de origen animal, como la carne de vaca, de aves de
corral, leche o huevos, pero todos los alimentos, incluyendo los vegetales pueden
contaminarse. Esta bacteria tambin se puede encontrar en las heces de animales
domsticos, y las personas se pueden infectar si no se lavan las manos despus de
entrar en contacto con las heces de estos animales. Se debe tener mucho cuidado
en la elaboracin casera de salsas, mayonesas etc. Las principales causas de
salmonelosis son la recontaminacin de productos cocinados (por contacto con
superficies o utensilios no lavados adecuadamente tras utilizarlos con alimentos
crudos, por manipuladores infectados que no guardan correctas medidas de
higiene), y cocinado insuficiente.
Las shigelas tienen como nico reservorio al hombre y su dosis infectante
mnima es pequea, lo que permite su transmisin no slo a travs de los alimentos,
sino tambin a travs del agua y por contacto directo entre nios en las guarderas.
Sin embargo, como todos los microorganismos de transmisin fecal-oral cuyo nico
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reservorio es humano (shigelas y Salmonella bioser typhi), pueden llegar a
erradicarse con medidas de higiene personal y ambiental.
Y. enterocolitica es una bacteria pequea de forma redonda y Gram-negativa, la
cual es aislada frecuentemente de los especmenes clnicos tales como las heridas,
las heces fecales, el esputo o las glndulas linfticas mesentricas. Sin embargo, no
forma parte normal de la flora humana. Por otro lado, Y. pseudotuberculosis ha
sido aislada del apndice infectado en los humanos.
Ambos organismos han sido aislados frecuentemente de los animales, tales
como los cerdos, las aves, los castores, los gatos y los perros. Solamente la bacteria
Y. enterocolitica se ha encontrado en muestras ambientales de lagunas y lagos, y
en alimentos como la carne, los helados y la leche. La mayora de los organismos
aislados no han sido catalogados como patgenos.
Vibrio parahaemolyticus Este microorganismo es un bacilo corto, curvado, Gram
negativo, mvil por un solo flagelo polar, anaerobio facultativo y algo halfilo, ya que
cuando crece es en presencia de 3-6 % de NaCl, en un rango de temperatura entre
8 y 44C, siendo la ptima la de 37C; a esta temperatura la divisin celular ocurre a
gran velocidad (cada 10-12 minutos). Este Vibrio prefiere condiciones alcalinas
(crecimiento ptimo a pH de hasta 9,0), adems es termosensible, destruyndose
fcilmente a temperaturas mayores de 50C.
Los sntomas de la toxiinfeccin alimentara por V. parahaemolyticus,
generalmente se presentan 10-18 horas despus de ingerido el alimento
contaminado. Los sntomas principales son nuseas, vmitos, dolor abdominal y
diarrea. A veces se presenta fiebre escasa, siendo breve la duracin de la
enfermedad (1-4 das).
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RESULTADO DE APRENDIZAJE.
Identificar los diferentes microorganismos patgenos del tracto gastrointestinal
presentes en la muestra.
MATERIALES Y METODOS.
MATERIAL Y EQUIPO.
Bata de laboratorio, cubre boca, guantes ltex.
2 Mecheros.
Microscopio ptico de campo claro.
Incubadora.
Asa de nicromio redonda y asa de nicromio recta.
Portaobjetos.
Puente de tincin.
Cristal violeta.
Yodo lugol.
Alcohol acetona.
Safranina.
Solucin salina estril al 0.85%.
Reactivo de FeCl3.
Reactivo de Kovacs.
Rojo de metilo.
-Naftol
KOH al 40%
Cepas de referencia (Vibrio parahemolyticus, Salmonella typhi, Salmonella
enteritidis, Shigella sonnei y Yersinia enterocolitica).
2 Agar McConkey.
2 Agar Salmonella-Shigella.
1 Agar sulfito de bismuto.
1 Agar TCBS.
21 Agar XLD.
5 Triple azcar hierro (TSI).
5 Medio MIO.
5 Rojo de metilo.
5 Voges-Proskauer.
5 Caldo de urea.
5 Agar LIA.
5 Fenilalanina.
5 Citrato.
5 SIM.
Papel estraza.
Agua destilada.
Aceite de inmersin.
Gradilla.
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METODOS.
Sembrado de las cepas de referencia.
Vibrio parahemolyticus. Agar TCBS.
Salmonella typhi. MacConkey, Salmonella-Shigella, Sulfito de bismuto, XLD.
Salmonella enteritidis. MacConkey, Salmonella-Shigella, Sulfito de bismuto, XLD.
Shigella sonnei. MacConkey, Salmonella-Shigella, Sulfito de bismuto, XLD.
Yersinia enterocolitica. MacConkey, Salmonella-Shigella, XLD.
Se sumerge el asa de nicromio redonda en el tubo de ensaye que contenga la
cepa de referencia (Vibrio parahemolyticus, Salmonella typhi, Salmonella enteritidis,
Shigella sonnei y Yersinia enterocolitica), se toma la caja petr que contenga el agar
en el cual se va a sembrar la muestra y se descarga esta en el primer cuadrante,
despus se estra en los dems cuadrantes de modo que se puedan obtener
colonias aisladas despus del periodo de incubacin.
Despus de que se hayan sembrado cada una de las sepas de referencia se
colocan las cajas petr en la incubadora durante 24 horas a 37C, despus de este
periodo de incubacin se revisa la estructura microscpica de cada una de las
sepas.
NOTA: Este procedimiento se realiza de igual forma para cada una de las cepas
de referencia en cada uno de los agares correspondientes.
Tincin de Gram.
En un portaobjetos se coloca una gota de solucin salina al 0.85%, con el asa de
nicromio se toma una colonia del cultivo y se homogeniza la muestra sobre el
portaobjetos que contenga la solucin salina, se deja reposar a temperatura
ambiente, y se espera a que esta seque, depuse de que esta haya secado se
procede hacer lo que es la tincin de Gram:
1. Fijar el frotis con calor.
2. Cubrir con cristal violeta por un minuto.
3. Lavar con agua.
4. Cubrir con yodo lugol por un minuto.
5. Lavar con agua.
6. Decolorar con alcohol acetona de 10 -15 segundos.
7. Lavar con agua.
8. Cubrir con safranina por un minuto.
9. Lavar con agua y secar.
10.Observar en el microscopio con los objetivos de 10X y 100X.
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Pruebas bioqumicas.
TSI (Triple azcar hierro). Se esteriliza el asa de nicromio y se toma una colonia de
la caja petr que contenga la cepa de referencia, se toma el tubo de ensaye y se
inocula por picadura directa hasta el fondo y se estra en la parte de arriba, se cierra
y se incuba por 24 horas a 37C. Los resultados pueden dar de la siguiente manera:
K/K
Rojo arriba y abajo.
K/A
Rojo arriba y amarillo abajo
A/A
Amarillo arriba y abajo.
Si se presenta un precipitado negro es que es productor de cido sulfhdrico.
CITRATO. Se esteriliza el asa de nicromio y se toma una colonia de la caja de petr
que contenga la cepa de referencia, se toma el tubo de ensaye que contenga el
medio y se inocula por picadura directa hasta el fondo y se estra en la parte de
arriba, se cierra y se incuba por 24 horas a 37C. Despus del periodo de
incubacin se lee el resultado si el medio cambia de un color verde a azul Prusia es
positivo y si este queda del mismo color es negativo.
FEA (Fenilalanina). Se esteriliza el asa de nicromio y se toma una colonia de la caja
de petr que contenga la cepa de referencia, se toma el tubo de ensaye que
contenga el medio y se inocula por picadura directa hasta el fondo y se estra en la
superficie, se cierra y se incuba por 24 horas a 37C. Despus del periodo de
incubacin se revisa si hay crecimiento y se agregan de 3-4 gotas de FeCl 3 y se lee
el resultado si se presenta una coloracin verde oscuro es una fenilalanina positiva y
se forma una coloracin amarillenta es una fenilalanina negativa.
LIA (agar lisina hierro). Se esteriliza el asa de nicromio y se toma una colonia de la
caja de petr que contenga la cepa de referencia, se toma el tubo de ensaye que
contenga el medio y se inocula por picadura directa hasta el fondo y se estra en la
superficie, se cierra y se incuba por 24 horas a 37C. Despus del periodo de
incubacin se revisan los resultados, en este se revisa:
Produccin de H2S.
Color negra (+).
Desaminacin. (Arriba)
Color roja (+)
Color amarillo (-)
Descarboxilacin (Abajo)
Color morado (+)
Color amarillo (-)
MIO. Se toma una colonia con el asa de nicromio y se inocula el medio por picadura
directa hasta el fondo, se cierra el tubo y se incuba por 24 horas a 37C.
Pasado el tiempo de incubacin se agregan 4 gotas del reactivo de kovacs. Los
resultados se pueden dar de la siguiente manera:
Desaminacin: se lee en la parte de arriba del tubo, si al momento de agregar el
reactivo kovacs se presenta un anillo rojo es una desaminacin (+) e indol (+) y si se
presenta un anillo amarillo es una desaminacin (-) e indol (-).
Descarboxilacin: Si se presenta una coloracin morado-verdoso es una
Descarboxilacin (+) y si se presenta una coloracin amarillenta o blanca es una
Descarboxilacin (-).
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CALDO DE UREA. Se toma una colonia con el asa de nicromio de la cepa de
referencia y se inocula por agitacin, se cierra y se incuba por 24 horas a 37C.
Despus del tiempo de incubacin si la ureas queda de color naranja es una ureas
(-) y si cambia a color rosa es una ureasa (+).
ROJO DE METILO Y VOGES PROSKAUER. Se inoculan por agitacin los tubos
que contengan el rojo de metilo y el Voges Proskauer, despus de haberlos
inoculado se cierran los tubos de ensaye y se incuban a 37C por 48 horas.
Pasadas las 48 horas de incubacin se toman los tubos de RM y VP y se agregan
los reactivos correspondientes para cada una de estas pruebas bioqumicas.
Al tubo que contenga el RM se la agregan 4 gotas de rojo de metilo, sin agitar si se
presenta una coloracin roja es un RM (+) y si no presenta cambio alguno es RM (-).
Al tubo del VP se la agrega primeramente 12 gotas de -naftol, despus se agregan
4 gotas de KOH al 40%, se deja reposar durante 15 minutos, si se forma una anillo
color salmn o rojo es un VP (+) y si no presenta cambio alguno es VP (-).
SIM. Se toma una colonia con el asa de nicromio y se inocula el medio por picadura
hasta el fondo, se cierra y se incuba por 24 horas a 37C.
Pasado el tiempo de incubacin se agregan 4 gotas del reactivo de kovacs si se
presenta un anillo color rojo es un indol (+) y si se presenta un anillo color amarillo es
un indol (-).
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RESULTADOS.
Morfologa Macroscpica y Microscpica.
Forma
Tamao
Borde
Elevacin
Luz
transferida
Luz reflejada
Color
Consistencia
Afinidad
tintoral
Forma
Lactosa
Salmonella
typhi
Vibrio
parahemolyticus
Salmonella
enteritidis
Shigella
sonnei
Yersinia
enterocolitica
Redonda
Pequea
Entero
Convexa
Si
Redonda
Pequeo
Entero
Convexa
S
Redonda
Pequea
Entero
Convexa
Si
Redonda
Pequea
Entero
Convexa
Si
Redonda
Pequea
Entero
Convexa
Si
Si
Incolora
(McK)
Negra
(SS, XLD,
sulfito de
bismuto).
Si
Incolora
(McK)
Incolora
(SS, XLD,
sulfito de
bismuto)
Si
Incolora
(McK, SS)
Blancas
(XLD)
Si
Incolora
(McK)
Negra
(SS, XLD,
sulfito de
bismuto)
Incolora
(TCBS)
Cremosa
G (-)
Cremosa
G (-)
Cremosa
G (-)
Cremosa
G (-)
Cremosa
G (-)
Bacilos
-
Bacilos
Bacilos
-
Bacilos
-
Bacilos
-
Morfologa macroscpica.
AGAR XLD
Salmonella Typhi
Shigella sonnei
Salmonella enteritidis
Yersinia enterocolitica
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AGAR MacConkey
Shigella sonnei
Salmonella sp
AGAR SS
Shigella sonnei
Salmonella sp
AGAR TCBS
Vibrio parahemolyticus
AGAR SB
Salmonella typhi
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Morfologa microscpica.
Salmonella typhi
Shigella sonnei
Pruebas Bioqumicas.
Salmonella typhi
TSI
gas
H2S
A/A
A/A
gas
H2S
Shigella sonnei
A/A
gas
H2S
Citrato
FEA
LIA
MIO
Caldo
de
urea
RM/VP
37C
SIM
37C
Ornitina
Indol
Movilidad
Ornitina
Indol
Movilidad
Ornitina
Indol
Movilidad
RM
+
VP
-
RM
+
VP
-
RM
+
VP
-
Indol
Movilidad
Indol
Movilidad
Indol
Movilidad
TSI
Citrato
FEA
LIA
gas
H2S
K/A
+
+
-
MIO
Ornitina
Caldo de urea
RM/VP 37C
SIM 37C
+
Indol
gas
H2S
A/A
-
Movilidad
Ornitina
negativo
Indol
Movilidad
+
negativo
RM
-
VP
+
RM
+
VP
-
Indol
Movilidad
Indol
Movilidad
+ 25C
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DICUSIN DE RESULTADOS
En este anlisis se puedo observar a las diferentes cepas de referencia que se nos
proporcionaron donde se puedo confirmar que se trataba de los microorganismos
que efectivamente nos haban proporcionado, esto se logro gracias a las pruebas
metablicas que se realizaron en donde, los resultados arrojados no variaron con
respecto a los que se menciona en la referencia consultada, asi que es de dicha
importancia tener en cuenta las caractersticas bioquimicas
CONCLUSIN
El estudio de la morfologa macroscpica y microscpica es de gran importancia
debido a que a travs de este estudio se pude ir identificando que tipo de bacteria es
la que se esta estudiando y as saber cuales pruebas bioqumicas son las
adecuadas para poder confirmar si se trata de la bacteria que se sospecha, y as
poder dar un resultado confiable el cual podr ayudar a dar un tratamiento adecuado
y a tiempo.
Las pruebas bioqumicas son de gran importancia ya que estas nos permiten
determinar caractersticas especificas de la bacteria a estudiar, y estas
caractersticas nos ayudan a determinar o identificar que tipo de bacteria es la que
se esta estudiando, los resultados obtenidos en esta practica fueron los esperados
ya que al compararlos con las tablas de referencia estos coincidieron en los
resultados obtenidos en las pruebas realizadas.
BIBLIOGRAFIA.
Braude, A. (1984) Microbiologa Clnica. Captulos 31 Enterobacteriaceas,. Ed.
Mdica Panamericana S.A., pgs. 394, 395, 397, 399,451.
Cabello, R. (1999) Manual de Microbiologa Clnica. Ed. Mdica
Panamericana. 4ta edicin. Mxico, pgs. 374-376.
Forbes, Sahm, Weissfeld. (2004). Bailey & Scout Diagnostico Microbiolgico.
Ed. Panamericana. 11va edicin. Mexico. , pgs. 441-444.
Koneman E. Allen S. (2004) Diagnostico Microbiolgico. Ed. Mdica
Panamericana S.A., pgs. 197, 200,215.
http://www.esmas.com/salud/enfermedades/infecciosas/434933.html
http://docum.azti.es/RIESGOS.nsf/0/a72cd92e979db075c1256b370044bf63?
OpenDocument
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CHIHUAHUA
Laboratorio:
Bacteriologa Mdica
Prctica # 2
Anlisis de Coprocultivo
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNA:
7mo B
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15 de Febrero de 2007
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Resumen.
Se realiz el anlisis bacteriolgico de una muestra diarreica con la finalidad de
identificar al microorganismo causante de la misma. Realizando primeramente la
siembra en agares propios para enterobacterias (McK, XLD), posteriormente en
Sulfito de Bismuto, despus de haber sido preenrriquecida la muestra con Caldo de
selenito.
Posteriormente se realiz el anlisis macroscpico y microscpico, para luego
realizar las pruebas bioqumicas correspondientes. Mismas que fueron incubadas 24
horas a 37C para despus del tiempo definido se procedi a su interpretacin, para
confirmar o descartar la posible presencia de algn patgeno.
En el anlisis realizado determin la presencia de Kluyvera ascorbata o Kluyvera
georgiana, por falta de pruebas; no se pudo definir la especie.
Introduccin.
El grupo de las Enterobacterias, nombre comn utilizado para referirse a la
Familia Enterobacteriacea, incluye a bacilos Gram (-), aerobios y anaerobios
facultativos, la mayora de ellos mviles mediante flagelos pertricos, que como
caracterstica microbiolgica fenotpica comn tienen la capacidad de fermentar la
glucosa y reducir los nitratos a nitritos. (2) (3)
Tienen como hbitat el intestino de animales inferiores y del hombre. Adems
tienen una amplia distribucin en el ambiente; entre las numerosas especies que
constituyen esta familia, encontramos algunos grupos que en su relacin con el
hospedero humano son comensales, como es el caso de Escherichia coli
constituyente importante de la microbiota intestinal normal aerobia, especialmente a
nivel de la porcin distal del intestino delgado y fundamentalmente a nivel del
intestino grueso. En esta localizacin la presencia de E. coli resulta en un beneficio
para el hospedero, pues como parte de su metabolismo sintetiza vitaminas y esta
microbiota participa en la degradacin de cidos y sales biliares. Debido a la
presencia masiva de E. coli a nivel intestinal, la deteccin de E. coli se utiliza como
marcador de contaminacin fecal. (3) (5)
Otros integrantes de este grupo en cambio son patgenos intestinales como el
gnero Salmonella, Shigella, Yersinia y un subgrupo de E. coli con factores de
virulencia especficos que afectan el intestino y por ello se denominan E. coli
diarreognicos. Estos grupos o Gneros bacterianos causan infecciones
gastrointestinales que pueden expresarse clnicamente como diarrea acuosa, diarrea
con sangre (tambin denominada diarrea enteroclica o sndrome disentrico) y en
algunos casos a partir de la infeccin intestinal estas bacterias pasan al torrente
sanguneo y se puede producir una infeccin sistmica o bacteremia, como por
ejemplo la fiebre tifoidea. (5)
En 1956, hacen la primera identificacin del gnero
Kluyvera, describindolo como bacilos, gram negativos, con flagelados polares y los
clasificaron dentro de la Familia Enterobacteriaceae. Producan grandes cantidades
de cido alfa-cetoglutrico en la fermentacin de la glucosa. En 1962 se identific a
estos grmenes como pertricos. Fermentan la mayora de azcares y son sensibles
a distintos antibiticos.
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Se han aislado tres grupos de Kluyvera: K. ascorbata, K. georgiana y K. species. Las
dos primeras estn cercanas bioqumicamente aunque se diferencian, como es por
la respuesta al irgasn entre otras.
Inicialmente fue considerado el gnero Kluyvera un microorganismo comensal de
las vas respiratorias altas y del aparato digestivo. Paulatinamente van apareciendo
nuevos casos en la literatura en los que se asla este germen atribuyndosele en
muchos casos un papel patgeno como en pielonefritis agudas y trastornos
gastrointestinales en pacientes ancianos inmunodeprimidos. (1)
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Material:
Portaobjetos y cubreobjetos.
Asa de nicromio punta recta.
Asa de nicromio punta redonda.
Mechero de Bunsen.
Papel estraza.
Puente de tincin.
Gradilla y piseta.
Cajas petri.
Hisopo estril.
Equipo:
Incubadora a 37C.
Equipo de proteccin personal:
Cubreboca.
Guantes de ltex.
Bata.
Reactivos:
Tincin de Gram.
Cristal violeta.
Yodo lugol.
Alcohol acetona.
Safranina.
Solucin salina fisiolgica isotnica al 0.85%.
Aceite de inmersin.
Cloruro Frrico al 10%
Kovaks.
-Naftol.
KOH al 40%.
Rojo de Metilo.
Agares:
MacConkey.
XLD.
Sulfito de Bismuto.
Caldo de selenito.
Pruebas Bioqumicas:
TSI
MIO
SIM
Citrato
Caldo de Urea
FeA
RM-VP
LIA
Caldo de Malonato
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Metodologa:
Primera sesin
1. Descargue muestra en primer cuadrante de medios de cultivos: McK y XLD.
2. Estriar en las cajas esterilizando el asa en cada cuadrante.
3. Colocar el hisopo con muestra en el caldo de selenito.
4. Incubar los medios de cultivo incluyendo el caldo de selenito a 37C durante 24
horas.
Segunda sesin
1. Pasado el tiempo de incubacin, revisar los medios de cultivo, realizando el
anlisis microscpico y macroscpico de las colonias.
2. Realizar pruebas bioqumicas de las diferentes colonias encontradas, seleccionar
estas de acuerdo a la morfologa microscpica que se observ.
3. Tomar el hisopo del caldo de selenito y descargar en el agar de Sulfito de
Bismuto, realizar el estriado con el asa de nicromio e incubar a 37C por 24 horas.
Tercera sesin:
1. Leer pruebas bioqumicas.
2. Observar el medio Sulfito
macroscpicas y microscpicas.
de
Bismuto,
identificar
las
caractersticas
Pruebas Bioqumicas.
Se siembran con asa recta estril.
Citrato. Sembrar en el pico
FEA: Sembrar en pico
LIA: Sembrar en fondo y pico
TSI: Sembrar en fondo y pico
MIO: Sembrar con el asa recta con picadura hasta el fondo de forma derecha.
(despus en la lectura se le agrega 4 gotas del reactivo de kovacs)
SIM: Sembrar con el asa recta con picadura hasta el fondo de forma derecha.
(despus en la lectura se le agrega 4 gotas del reactivo de kovacs)
Caldos: Malonato, RM-VP y Urea. Se siembran disolviendo colonias en el caldo.
*en el VP se le agrega 3 gotas de KOH al 40% y una gota de alfa naftol al
momento de la interpretacin de resultados. En el rojo de metilo se agrega 3 gotas
del reactivo rojo de metilo. En la FeA se adicionan 3 gotas de cloruro frrico para
interpretar.
Observacin microscpica
Colocar una gota de solucin salina en un portaobjetos.
Tomar una colonia con el asa recta estril y homogenizarla en el portaobjetos,

dejar secar a temperatura ambiente.
Fijar a la flama del mechero pasando tres veces el portaobjetos de la punta

hacia la base.
Colocar el portaobjetos en el puente de tincin y aadir cristal violeta, dejar

actuar por 1 minuto.
Enjuagar y adicionar yodo lugol, esperar 1 minuto y enjuagar.
Aadir alcohol acetona y dejar actuar de 10-15 seg., enjuagar.
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Adicionar safranina, esperar un minuto y enjuagar y secar con papel estraza.

Observar al microscopio a 10x y 100x (con aceite de inmersin).
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Resultados.
Macroscpicas:
Agar XLD
Agar MacConkey
Kluyvera ascorbata
Kluyvera ascorbata
Agar SB
Kluyvera ascorbata
Agar:
XLD
MacConkey
Forma
Tamao
Borde
Elevacin
Consistencia
Luz transmitida
Redonda
Mediano
Entero
Convexa
Cremosa
Negativa
Redonda
Mediano
Entero
Convexa
Cremosa
Negativa
Sulfito de
Bismuto
Redonda
Mediano
Entero
Convexa
Cremosa
Negativa
Luz reflejada
Color
Positiva
Blancas
Positiva
Moradas
Positiva
Moradas
Microscpicas:
Bacilos cortos, Gram negativos.
Mviles, por medio de flagelos polares.
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TSI
Kluyvera ascorbata
Pruebas Bioqumicas.
Kluyvera ascorbata
Gas
H2S
A/A
-
Citrato
FEA
MIO
SIM
+
Movilidad
Indol
Ornitina
Movilidad
Indol
LIA
H2S
RM-VP
RM
VP
Caldo de Urea
Caldo de Malonato
+
(4)
Desaminacin
Descarboxilacin
Manual de bacter
UACH
Discusin.
En el anlisis de coprocultivo, se pretenda aislar las enterobacterias que causan
enfermedades gastrointestinales, como pueden ser: Salmonella, Vibrio, Shigella y
Yersinia. Los agares utilizados fueron: Agar XLD, MacConkey y Sulfito de bismuto,
donde crecieron colonias redondas, con borde entero, cremosas, convexas, en el
agar MacConkey se observaron colonias rosas por lo que indica que la bacteria
aislada, es lactosa positiva, por lo que se descarta la posibilidad de haber
encontrado alguna de las bacterias anteriormente mocionadas, ya que estas, a
excepcin de Vibrio, no fermentan la lactosa, solo que Vibrio no crece en los agares
utilizados.
As que se procedi a realizar pruebas bioqumicas, en donde se pudo diferenciar
a la bacteria aislada, cuyo genero es; Kluyvera, aunque por falta de pruebas su
especie no se pudo definir. Kluyvera es una bacteria que tambin pertenece a la
familia de enterobacterias.
Conclusin.
Se llego a la conclusin de que la bacteria aislada, es proveniente de la Familia
de las Enterobacterias, siendo por lo regular un microorganismo comensal de las
vas respiratorias altas y del aparato digestivo.
Se llego a esta por el motivo de al revisar la morfologa macroscpica y
microscpica, hubo una variable la fermentacin de la Lactosa, siendo la nica que
la fermenta el Vibrio cholerae, pero este ultimo no crece en este tipo de agar por ser
un microorganismo que necesita alcalinidad para crecer.
Bibliografa.
1.
www.actasurologicas.info/v25/n01/2501NC03.htm
2.
www.netropica.org/Presentaciones/ENTEROBACTERIAS%20FINAL.pdf
3.
www.apuntes.rincondelvago.com/microbiologia_18.html
4.
Finegold, S. Martin, W. (2002). Bailey & Scout Diagnostico Microbiolgico. Ed.
Mdica Panamericana. 11va edicin. Mxico.

5.
Lennette, E. (1987). Microbiologa Clnica. Ed. Mdica Panamericana.
edicin. Mxico.
3ra
Manual de bacter
UACH
CHIHUAHUA
Bacteriologa Mdica
Practica 3
Cepas De Referencia Que Causan
Enfermedades Del Tracto Urinario
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNA:
Manual de bacter
UACH

7mo B
22 de febrero de 2007
Resumen
En esta prctica se realiz un cultivo para identificar a las bacterias que causan
enfermedades del tracto urinario; estas son: E. coli, Enterobacter cloacae, Proteus,
Pseudomona auriginosa y Streptococcus faecalis. Para lo cual se utilizaron los
agares: sangre, MacConkey, ENDO y cetrimide, el agar cetrimide se utilizo para
identificar nicamente a la Pseudomona, as como el MacConkey, solo que en este
agar tambin se inocularon las bacterias de E. coli, E. cloacae y Proteus al igual que
el ENDO y sangre, en este ultimo tambin se inoculo el S. feacalis, una vez que
todas las cepas de referencia fueron inoculadas en los agares correspondientes se
procedi a incubar a 37C por 24 horas, trascurrido dicho tiempo se hizo la
identificacin macro y microscpicamente para luego realizar las pruebas
bioqumicas, pruebas que permiten identificar y diferenciar a las bacterias, los
resultados arrojados no variaron con las caractersticas citadas en las referencias,
solo en el Enterobacter cloacae no coincidi, por lo que se cree que la cepa fue
contaminada al momento de ser inoculada.
Manual de bacter
UACH
Introduccin
Ms los de 80% de las infecciones humanas de la zona urinaria (UTI) son debido a
la bacteria, Escherichia coli, pero tambin se encuentran infecciones urinarias
debido a Proteus, entre otras Enterobacterias que infectan el rin las ms
comnmente encontradas son E. coli y en segundo termino esta el Proteus, que
tambin pertenecen a los Enterobacteriaceae y son bacterias mviles gramnegativos. Se encuentran a menudo como organismos vivos libres en suelo y agua
pero son tambin parsitos en la zona urinaria superior de los seres humanos.
Escherichia coli Se encuentra generalmente en los intestinos animales, incluido el
humano y, por ende, en las aguas negras. Fue descrita por primera vez en 1885 por
Theodor von Escherich, bacterilogo alemn, quin la denomin Bacterium coli.
Posteriormente la taxonoma le adjudic el nombre de Escherichia coli, en honor a
su descubridor.
sta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del proceso
digestivo. Adems produce vitaminas B y K. Es un bacilo que reacciona
negativamente a la tincin de Gram, es anaerobio facultativo, mvil por flagelos
peritricos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz de fermentar la
glucosa y la lactosa y su prueba de IMVIC es ++--.
Pseudomonas aeruginosa (o Pseudomonas pyocyanea) es una bacteria Gramnegativa, aerbica, con motilidad unipolar.
Como otros Pseudomonas, P. aeruginosa secreta una variedad de pigmentos, como
piocianina (azul verdoso), fluorescena (amarillo verdoso fluorescente), y piorubina
(rojo pardo).
P. aeruginosa es frecuentemente y preliminarmente identificada por su apariencia
perlada y olor a nixtamal. La identificacin definitiva clnica de P. aeruginosa
frecuentemente incluye identificar la produccin de ambas piocianina y fluorescena
como su habilidad de crecer a 42 C.
Este es un
patgeno oportunista de individuos immunocomprometidos, P.
aeruginosa infecta el tracto pulmonar, el urinario, tejidos, heridas, y tambin causa
otras infecciones de sangre. La piocianina es un factor de virulencia de la bacteria y
se ha conocido que puede hasta causar muerte.
Streptococcus faecalis es una bacteria Gram-positiva comensal, que habita el
tracto gastrointestinal de humanos y otros mamferos. Como otras spp. Del gnero
Enterococcus, E. faecalis puede causar infecciones comprometidas en humanos,
Manual de bacter
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especialmente en ambiente de hospital. El hbitat normal de estos es el tubo
digestivo, y puede causar endocarditis, infecciones de la vejiga, prstata y epiddimo.
Enterobacter cloacae es una bacteria, gram negativa en forma de bacilo. Es

responsable de varias infecciones, incluyendo infecciones ms bajas de la zona
respiratoria, piel e infecciones suaves del tejido fino, infecciones de la zona urinaria
(UTIs). Tiene flagelos peritricos, mide 0.3-0.6 x 0.8-2.0 m, es oxidasa-negativa,
catalasa-positive, y es facultativo anaerobia. Es un patgeno oportunista al igual que
otras bacterias de la familia enterobacteria.
El gnero Proteus pertenece a la tribu Proteae de la familia Enterobacteriaceae,
junto con los gneros Morganella y Providencia. El gnero est compuesto por 8
especies: Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Proteus penneri, Proteus hauseri,
Proteus myxofaciens y las genomoespecies. Las tres ltimas y P. vulgaris forman el
complejo P. vulgaris.
P. mirabilis y con menor frecuencia P. vulgaris y P. penneri han sido reconocidos
como agentes etiolgicos de distintos procesos infecciosos, tales como infeccin
urinaria, infeccin quirrgica, neumonas, bacteriemias, septicemias e infecciones
ticas. Asimismo, genero se ha relacionado en infecciones nosocomiales.
Resultado De Aprendizaje.
Identificar los diferentes microorganismos patgenos del tracto urinario.
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Material:
Asa de nicromio punta recta.
Mechero de Bunsen.
Papel estraza.
Puente de tincin.
Gradilla y piseta.
Cajas petri.
Hisopo estril.
Equipo:
Microscopio ptico
Incubadora a 37C.
Cubre boca.
Guantes de ltex.
Bata.
Reactivos:
Tincin de Gram.
Cristal violeta.
Yodo lugol.
Alcohol acetona.
Safranina.
Aceite de inmersin.
Kovaks.
-Naftol.
KOH al 40%.
Rojo de Metilo.
Agares:
Bilis esculina
MacConkey.
ENDO.
Sangre.
Cetrimide.
Pruebas Bioqumicas:
TSI
MIO
SIM
Citrato
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Caldo de Urea
FeA
RM-VP
LIA
Caldo de Malonato
Mtodos.
Sembrado de las cepas de referencia.
E. coli Agar sangre, MacConkey y ENDO
Enterobacter cloacae. MacConkey, ENDO y Sangre
Proteus. MacConkey, ENDO y Sangre
Pseudomona aureginosa. MacConkey, y Cetrimide.
Streptococcus feacalis. Agar Sangre.
cepa de referencia (E.coli, Enterobacter cloacae, Proteus, Pseudomona aureginosa
y Streptococcus feacalis), se toma la caja petr que contenga el agar en el cual se va
a sembrar la muestra y se descarga esta en el primer cuadrante, despus se estra
en los dems cuadrantes de modo que se puedan obtener colonias aisladas
despus del periodo de incubacin.
sepas.
NOTA: Este procedimiento se realiza de igual forma para cada una de las cepas de referencia
en cada uno de los agares correspondientes.
4. Pasado el tiempo de incubacin, revisar los medios de cultivo, realizando el

anlisis microscpico y macroscpico de las colonias.( se realiza una tincin de
Gram)
5. Realizar pruebas bioqumicas (MIO, SIM, TSI, Malonato, RM-VP, FeA, LIA, UREA
y Citrato) de las diferentes colonias encontradas, seleccionar estas de acuerdo a la
morfologa microscpica que se observ.
6. Incubar las pruebas bioqumicas una vez inoculadas a 35C por 24 horas
7. trascurrido el tiempo se procede a leer.
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Resultados
Morfologa Macroscpica
bacterias
A. Sangre
A. ENDO
A. MacConkey
E. coli
Colonias
redondas,
chicas, borde entero,
grises,
cremosas,
convexas
y
no
trasmiten luz
Colonias
chicas
redondas con borde
entero, rojas metlicas
convexa no trasmite
luz
Colonias
redondas,
medianas, color rosa,
con
borde
entero,
cremosas, convexa y
no trasmiten luz.
E. cloacae
Colonias
redondas,
chicas, borde entero,
grises,
cremosas,
convexas
y
no
trasmiten luz
Colonias
redondas,
medianas,
trasparentes,
aplanadas, con borde
entero y no trasmite
luz
Colonias
redondas,
trasparentes,
chicas,
con
borde
entero,
convexa, cremosa y no
trasmite luz.
Proteus
Colonias
redondas
grises,
con
borde
entero,
convexas,
cremosas, no trasmiten
luz y producen efecto
de suarming
Colonias
redondas
chicas, trasparentes,
borde
irregular,
aplanada, cremosa y
no trasmite luz.
Colonias
redondas,
medianas, con borde
entero,
elevacin
aplanada, cremosa y
trasmite luz.
P.
aureginosa
S. faecalis
Colonias
redondas,
chicas,
trasparentes,
borde entero, convexa,
no trasmite luz y tiene
olor a nixtamal.
Colonias
redondas,
pequeas,
blancas,
borde entero, convexa,
cremosa y no trasmite
luz.
Morfologa Microscpica
bacteria
morfologa microscpica
E. coli
Bacilos gram negativos, cortos, en arreglo simple
A. cetrimide
Colonias redondas,
chicas, color verde,
borde
entero,
cremosa, convexa y
no trasmite luz.
Manual de bacter
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Proteus
Bacilos gram negativos, cortos, simples
E. cloacae
Bacilos gram negativos, cortos, simples
P. aureginosa
Bacilos gram negativos, medianos, simples
S. faecalis
Cocos en cadena, gram positivos.
Agar MacConkey
E. cloacae
E. coli
P. aureginosa
Agar sangre
Proteus
Manual de bacter
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S. faecalis
E. coli
Proteus
E. cloacae
Agar cetrimide
P. aureginosa
E. coli
E. cloacae
Proteus
P. aureginosa
Manual de bacter
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S. faecalis
Pruebas Bioqumicas
E. coli
TSI
A/A
Citrat
o
FEA
LIA
MIO
Caldo
de
urea
RM/VP
37C
Enterobacter cloacae
gas
H2S
A/A
gas
H2S
Proteus
K/A
gas
H2S
H2S
gas
H2S
gas
H2S
gas
Ornitina
Indol
Movilidad
Ornitina
Indol
Movilidad
Ornitina
Indol
Movilidad
RM
+
Indol
VP
Movilidad
RM
Indol
+
VP
+
Movilidad
RM
+
VP
-
Indol
Movilidad
Manual de bacter
UACH
SIM
37C
TSI
Citrato
FEA
MIO
SIM
+
+
Movilidad
Indol
Ornitina
Movilidad
Indol
H2S
Caldo de Urea
Oxidasa
Pseudomona aureginosa
Gas
H2S
K/K
-
LIA
RM-VP
RM
VP
Discusin De Resultados
En la realizacin de este cultivo de identificacin para las bacterias que causan
enfermedad o infeccin en las vas urinarias, se obtuvieron resultados bastante
especficos para poder diferenciar entre las enterobacterias relacionadas a las ITU
ya que todos los resultados arrojados durante su anlisis coincidan con las
caractersticas que en las lecturas no referan, solo cambio un poquito el resultado
del Enterobacter cloacae, esto debido a una contaminacin que se propicio a la hora
de inocular dicho microorganismo en las pruebas bioqumicas, esta contaminacin
se debi a la falta de esterilizar o quemar el asa de nicromio utilizada, ya que la
misma se haba utilizado para inocular a otra bacteria.
Conclusin
Para poder identificar cada una de las bacterias, es necesario utilizar las pruebas
mas especificas, en este caso las pruebas bioqumicas, ya que estas permiten
diferenciar, por medio de su metabolismo a las bacterias, debido a que cada bacteria
utiliza sus propios nutrientes para poder desarrollarse, es por ello, que aun despus
de haber realizado el cultivo se realicen estas pruebas, adems de su identificacin
macro y microscpica. Es as, como se llega ala identificacin especifica de un
microorganismo, logrando identificar su gnero y especie por lo menos. Se no ser
as, las bacterias pueden ser confundidas; por no tener las pruebas suficientes para
diferenciarlas.
Manual de bacter
UACH
Bibliografa
Braude, A. (1984) Microbiologa Clnica. Captulos 31 Enterobacteriaceas,. Ed.
Mdica Panamericana S.A.
Lennette, E. (1987). Microbiologa Clnica. Ed. Mdica Panamericana.
3ra
edicin. Mxico.
http://cienciasbiologicas.uniandes.edu.co/lema/nodo.php?id=37
http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S032575412006000300002&lng=en&nrm=iso&tlng=es
http://es.wikipedia.org/wiki/Escherichia_coli
http://www.scielo.org.pe/scielo.php?
pid=S172646342003000300002&script=sci_arttext
http://student.ccbcmd.edu/courses/bio141/labmanua/lab8/simenter.html
CHIHUAHUA
Laboratorio:
Bacteriologa Mdica
Manual de bacter
UACH
Prctica # 4
urocultivo
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNOS:
Eloy Ricardo Borjas Senz 175211

7mo B
1 de marzo de 2007
Resumen
En este anlisis, se realiz un urocultivo para determinar si el paciente, presenta una
infeccin urinaria, esta tcnica se realiz utilizando los mtodos cualitativo y
cuantitativo, as como la identificacin de la bacteria causal de la infeccin y la
resistencia que dicho microorganismo presenta ante antibiticos como: gentamicina,
oxacilina, ceftriaxone, tetraciclina. Para el mtodo cuantitativo; se utiliz solucin
salina, en la cual se realizaron diluciones de 1:10 hasta 1:10000, posteriormente se
paso 1ml de la muestra, 1ml de la dilucin 1:100 y 1ml de 1:10000 en cajas pretri,
adicionando agar plate count; luego se incubaron a 37C por 24horas.Otro mtodo
utilizado fue el de asa calibrada; donde se utiliz el agar sangre y un asa de 0.01.
Para el mtodo cualitativo se utiliz: el agar MacConkey y el Sal Manitol. Donde,
como resultado, se obtuvo; en el anlisis cuantitativo colonias mayor de 100000 o
incontable, en la identificacin; colonias redondas convexas, color rosa indicativo de
Manual de bacter
UACH
que fermentan la lactosa, y de consistencia cremosa; esto en agar MacConkey y en
el Sal Manitol no hubo crecimiento, microscpicamente fueron bacilos gram
negativos, por lo que se procedi a realizar las pruebas bioqumicas o metablicas
para determinar el tipo de microorganismo asilado. El cual resulto ser, una
enterobacteria comnmente relacionada a infecciones del tracto urinario: E.coli.
Resistente a todos los antibiticos probados.
Introduccin
Varios miembros de las enterobacterias pueden aislarse de la orina en el curso de
infecciones del aparato urinario o urogenital, como tambin en otros tipos de
afecciones.
La orina vesical normalmente no contiene microorganismos. Sin embargo, los
primeros 10 a 15 ml. de orina emitidos por personas normales de cualquier edad o
sexo, siempre presentan bacterias, las que proceden de la flora corriente de la uretra
anterior, prepucio, regin vulvovaginal o de contaminacin fecal. La flora de estas
localizaciones es variada y est constituida por estafilococos coagulasa-positivo y
negativos, estreptococos diversos, bacilos difteromorfos, enterobacterias,
lactobacilos, micoplasmas, bacterias anaerobias, levaduras y muchos
Manual de bacter
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microorganismos. En la presencia de esta flora influyen localizacin anatmica,
sexo, edad, hbitos de higiene y factores patolgicos propios del husped.
En la etiologa de las infecciones urinarias predominan los bacilos gramnegativos.
Los procesos agudos y crnicos son provocados por E. coli y por especies de los
gneros Enterobacter, Proteus, Citrobacter, Pseudomonas, etc. De estos agentes, E.
coli se asla en 80% de los casos. El examen microbiolgico de una muestra de
orina se denomina Urocultivo. ste se ha de hacer desde un punto cuantitativo y
cualitativo.
Material:
Equipo:
Asa de nicromio calibrada.

Incubadora a 37C.
Mechero de Bunsen.
Papel estraza.
Puente de tincin.
Gradilla y piseta.
Cajas petri.
Hisopo estril.
Cubreboca.
Guantes de ltex.
Bata.
Reactivos:
Tincin de Gram.
Cristal violeta.
Yodo lugol.
Alcohol acetona.
Safranina.
Aceite de inmersin.
Kovaks.
-Naftol.
KOH al 40%.
Rojo de Metilo.
Agares:
Pruebas Bioqumicas:
MacConkey.
TSI
Sangre.
MIO
Sal Manitol.
SIM
Plate Count.
Citrato
Caldo de Urea
FeA
RM-VP
LIA
Caldo de Malonato
Manual de bacter
UACH
Metodologa
Toma De La Muestra
El mtodo ms recomendado para realizar la recogida de muestra para un urocultivo
es la toma, durante el periodo medio de la miccin, siempre que el paciente sea
capaz de limpiarse y recogerla, ya que la muestra de orina requiere una cuidadosa
limpieza de los genitales externos. Esta tcnica impone los siguientes requisitos:
El paciente debe tener como mnimo de tres a cuatro horas de retencin de

orina, y la muestra ms representativa es la primera orina de la maana.
El paciente no debe haber recibido tratamiento antimicrobiano durante los tres
das anteriores a la recoleccin, exceptuando los casos de control de
tratamiento, y paciente gravemente enfermos.
Esta tcnica no es apropiada para nios que no controlan sus esfnteres, en cuyo
caso se procede a hacer limpieza de los genitales y a fijar un recolector de orina
estril (especial para bebs). Se deja en esta posicin hasta que el nio realice su
miccin; se despeja el recolector y se sella inmediatamente. No debe dejarse
colocado el recolector por tiempo prolongado. La alta probabilidad de contaminacin
en muestras de orina de lactantes, obliga a realizar el estudio en tres muestras
sucesivas de miccin espontnea.
En ciertas ocasiones se justifica el sondeo uretral o la aspiracin suprapbica. No
obstante, existe un pequeo riesgo de infeccin tras sondeo uretral, el cual vara
segn el tipo de paciente. Debido a la colonizacin por bacterias de la uretra, suele
ser difcil definir si los microorganismos aislados a partir de orina tomada con sonda
son de origen urinario o uretral.
En los pacientes con sonda uretral permanente con drenaje cerrado, la orina para
cultivo se recoge despus de desinfectar la pared de la sonda en su punto de unin
con el tubo de drenaje. Se aspira la orina por medio de puncin en la sonda con una
aguja 21. En ningn momento deber sacarse de la bolsa de drenaje material para
cultivo.
Conservacin y/o Transporte
En lo que respecta al transporte y conservacin de muestras de orina, hay que tener
en cuenta que la orina constituye un excelente medio de cultivo para casi todas las
bacterias, por lo que una vez recogida, la muestra debe enviarse de inmediato al
laboratorio, previa colocacin del envase en un recipiente que contenga cubos de
hielo. Este procedimiento permite que el nmero de bacterias permanezca
relativamente constante por un tiempo considerable.
Examen cuantitativo
Manual de bacter
UACH
Mtodo de conteo en placa o recuento de colonias. Introducido para evitar

los riesgos del cateterismo vesical y diferenciar bacteriuria verdadera de
contaminacin, se realiza de la siguiente manera:
Se homogeneiza la muestra mediante agitacin.
Se diluye la muestra al 1:100, colocando 0.1 ml. de orina en 9.9 ml. de caldo
de tripticasa o de suero fisiolgico, estriles.
Se preparan diluciones al 1:1000 y 1:10 000, a partir de la dilucin al 1:100.
Se deposita 1 ml. de cada dilucin en placas de Petri esterilizadas, sobre las

cuales se vaca un medio Plate Count, fundidos y enfriados. Mediante
rotacin suave, se favorece la distribucin homognea de la siembra.
Se incuban todas las siembras a 37 durante 24 a 48 horas.
Para calcular el nmero de colonias se eligen placas que contengan entre 30 y 300
colonias. Contadas stas, basta multiplicar su nmero por la dilucin respectiva para
obtener la cuenta total.
Mtodo del asa calibrada. Esta estimacin cuantitativa consiste en sembrar

una placa con medio de agar-sangre una muestra de orina, sin centrifugar,
empleando asa calibrada. Despus de incubar las siembras a 37 durante 24 a 48
horas, se cuenta el nmero de colonias desarrolladas y el resultado se multiplica por
100, ya que la asada contiene 0.01 ml. de orina.
Los resultados del estudio cuantitativo se informan de la siguiente manera:
No hubo desarrollo microbiano.
Menos de 10 000 colonias por ml.
Entre 10 000 y 100 000 colonias por ml.
Ms de 100 000 colonias por ml.
Examen cualitativo
El estudio cualitativo, que conduce a la identificacin del agente, se realiza mediante
la siembra de la muestra homogeneizada, en placas con agar-sangre, Sal manitol y
MacConkey. La identificacin final de los agentes se hace mediante el estudio de sus
propiedades bioqumicas y caractersticas serolgicas.
Empleando un asa estril se extiende la toma de la muestra a modo de estras en el
primer cuadrante. A continuacin se hace lo mismo en el segundo cuadrante pero en
Manual de bacter
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una direccin diferente a la anterior. En el tercer y cuarto cuadrante hacemos lo
mismo.
Resultados
Agar:
Sangre
MacConkey
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Forma
Tamao
Borde
Elevacin
Consistencia
Luz transmitida
Redonda
Mediano
Entero
Convexa
Cremosa
Negativa
Redonda
Mediano
Entero
Convexa
Cremosa
Negativa
Luz reflejada
Color
Positiva
Grises
Positiva
Rosas
Morfologa microscpica
Bacilos cortos, Gram negativos y en arreglo simple o par.
Pruebas Bioqumicas
medio
TSI
E. coli
Gas
A/A
Citrato
FEA
+
-
H2S
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UACH
MIO
SIM
Movilidad
Indol
Ornitina
Movilidad
Indol
LIA
H2S
RM-VP
RM
VP
Caldo de Urea
Caldo de Malonato
En nuestro estudio el agente que se identifico como agente causal de infeccin fue
la E.coli uno de los principales microorganismos relacionados con las infecciones del
tracto urinario, dicha identificacin se determino gracias alas caractersticas
metablicas identificadas en las pruebas bioqumicas realizadas, tambin se puedo
determinar con ayuda del antibiograma que esta bacteria es resistente a los
antibiticos como son: gentamicina oxaxilina ceftriaxone, tetraciclina y penicilina; ya
que no presento ningn alo de inhibicin donde se colocaron los cencidiscos
penetrados con dichos antibiticos.
Conclusin
Se lleg a la conclusin de que el paciente, presenta una infeccin urinaria, a causa
de la bacteria E. coli, puesto que en el anlisis cuantitativo arrojo valores por encima
de los 100000 UFC (unidades formadoras de colonias), el microorganismo fue
identificado por medio de pruebas bioqumicas, tambin se determino que el
paciente no puede ser tratado con antibiticos como son la gentamicina, oxacilina,
ceftriaxone, tetracliclina o penicilina puesto que este microorganismo es resistente a
estos antibiticos por lo que es recomendable realizar nuevamente un antibiograma
utilizando antibiticos de mayor concentracin inhibitoria.
Bibliografa
http://www.ucm.es/BUCM/revistas/med/11330414/articulos/CLUR9797110051A.PDF
http://html.rincondelvago.com/bacteriologia_2.html
www.actasurologicas.info/v25/n01/2501NC03.html
Manual de bacter
UACH
Borrows William Dr. Tratado de microbiologa, Vigsima edicin. Interamericana. Mxico
1974. pp. 376,422-427.
Garca Rodrguez JJ. Microbiologa Mdica. Tomo II.Doyma libros. Madrid 1996. pp 105117.
CHIHUAHUA
Manual de bacter
UACH
Laboratorio:
Bacteriologa Mdica
Prctica # 5
Cepas de referencia de Candida albicans y de
Streptococcus agalactiae
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNA:
7mo B
8 de marzo de 2007
Manual de bacter
UACH
Resumen.
Esta practica estuvo dividida en tres sesiones, en la primera sesin se cultivaron
las bacterias Streptococcus agalactiae y Candida albicans para despus proceder
hacer la identificacin macroscpica y microscpica y las pruebas bioqumicas
correspondientes,solo que no hubo crecimiento de Candida albicans tambin se
realizo la prueba de CAMP la cual salio negativa debido a que no se presento
crecimiento por lo que esta se repetir mas adelante par ser reportada en esta
practica y por ultimo se reviso el tubo germinativo, para la identificacin del
pseudomicelio.
Introduccin.
Las enfermedades de transmisin sexual (ETS) -tambin conocidas como
infecciones de transmisin sexual (ITS) o enfermedades venreas-, son
aquellas enfermedades infecciosas que (generalmente, aunque en algunos casos
puede ser por otras vas) se transmiten de persona a persona por contacto ntimo
(que se produce, casi exclusivamente, durante las relaciones sexuales).
Los agentes productores de las enfermedades de transmisin sexual incluyen
bacterias, virus (como el del herpes), hongos e incluso parsitos.
Aunque casi todas tienen tratamiento, algunas de ellas, como las producidas por
virus, nunca curan de manera definitiva, sino que el agente causal permanece en
estado latente, sin manifestarse, dentro del organismo al que ha infectado,
reapareciendo cclicamente. Este tipo de relacin entre el organismo y el agente
infeccioso facilita la transmisin de ste, es decir, su infectividad.
Neisseria gonorrhoeae: Es un agente etiolgico de gonococia, una enfermedad de
transmisin sexual. Es un diplococo Gram negativo, oxidasa positivo. Requiere
medios muy nutritivos para el crecimiento, como agar chocolate o Thayer-Martin
(especfico para Neisseria). Igualmente para su cultivo requiere una atmsfera
con 5% de CO2. La gonorrea se mantiene actualmente, como una de las ms
importantes enfermedades de transmisin sexual. Esta enfermedad se
manifiesta en una infeccin en los hombres como uretritis aguda y en las
mujeres como cervicitis.
Gardnerella vaginalis: Es un bacilo implicado en la produccin de una condicin
clnica llamada Vaginosis Bacteriana, que esta caracterizada por un desbalance en
la flora normal de la vagina habiendo una disminucin de lactobacillus spp y un
aumento en Gardnerella vaginalis y otros bacterias aerobias y anaerobias.
La vaginosis bacteriana es la principal causa de secrecin y mal olor vaginal
aunque el 50% de las mujeres pueden ser asintomticas.
An no se ha comprobado que sea una enfermedad de transmisin sexual, aunque
es ms comn que se presente en mujeres sexualmente activas, siendo calificada
como causa de este tipo de enfermedad.
El trmino vaginosis viene dado ya que ha diferencia de la Cndida y
Trichomona, la gardnerella no produce signos de inflamacin en la mucosa vaginal ni
migracin linfocitaria, por consiguiente no es clasificada como una vaginitis.
Manual de bacter
UACH
Candida albicans: Hongo dimorfo que forma largas seudohifas, hifas y
blastoconidios (clulas gemantes subesfricas de 3-8 x 2-7 m). Asimilan y
fermentan azcares. Numerosas clamidosporas unicelulares, redondas u ovaladas,
con gruesa pared refringente (8-16 m de dimetro), situadas al final de las hifas,
seudohifas o laterales sobre blastoconidios ovalados.
La candidiasis es una enfermedad causada por un hongo oportunista que puede
tener expresin cutnea del gnero Candida, de los cuales Candida albicans es el
ms frecuente. Se puede transmitir por ropas, objetos y tambin por contacto sexual.
Estos hongos estn siempre presentes en la piel y en el tracto digestivo de la
mayora de las personas, pero se encuentran controlados por otros microorganismos
no patgenos. Cuando se produce un desequilibrio, el aumento desmedido de la
poblacin de hongos produce esta u otras micosis.
Streptococcus agalactiae o estreptococo b-hemoltico del grupo B de
Landcefield (EGB), es un coco Gram positivo, catalasa y oxidasa negativo,
anaerobio facultativo, que se presenta formando cadenas de longitud variable,
puede crecer en medios simples, aunque los medios suplementados con sangre o
suero favorecen su crecimiento e identificacin. El Streptococcus agalactiae es
causa importante de sepsis neonatal y de infecciones en gestantes y adultos
inmunocomprometidos.
Se trata de una bacteria encapsulada cuya virulencia se atribuye a una toxina
polisacrida y se caracteriza por presentar una alta concentracin inhibitoria mnima
(CIM) a la penicilina. Su papel como patgeno potencial se ha reconocido
ampliamente en pases industrializados donde en la actualidad se desarrollan
estrategias de diagnstico y prevencin dada su alta morbimortalidad; sin embargo,
en pases en desarrollo no se informa con frecuencia la infeccin por este germen,
bsicamente debido a la circulacin de serotipos menos virulentos y la falta de una
bsqueda y diagnstico adecuados.
Resultado de aprendizaje.
Cultivar e identificar bioqumicamente las siguientes cepas Gardnerella vaginalis,
Candida albicans, Streptococcus del Grupo B.
Manual de bacter
UACH
MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS
Equipo:
Microscopio ptico de campo claro
Incubadora a 37C
Equipo de seguridad (bata para el laboratorio, guantes de ltex, lentes de

seguridad y cubre bocas)
Material:
Mechero de bunsen
Asa de nicromio circular y recta estriles
Cajas de petri
Tubos de ensayo de 13x100 mm con tapa de rosca
Portaobjetos
Puente de tincin
Pizeta
Hisopos estriles
Papel estraza
Gradilla
Vela
Frasco para carboxifilia

Reactivos:
Agar BIGGY
Agar sangre de carnero
Tubo germinativo (con 1 mL De plasma)
Cristal violeta
Yodo lugol
Alcohol-acetona
Safranina
Aceite de inmersin
Muestras:
Cepas de referencia en caldo BHI:
Candida albicans
Cepas de referencia en agar sangre:
Staphylococcus aureus 33862
Manual de bacter
UACH
Mtodos.
Primera sesin.
Sembrado de las sepas de referencia.
Streptococcus agalactiae: Agar sangre.
Candida albicans: Agar Biggy.
cepa de referencia (Streptococcus agalactiae y Candida albicans) se toma la caja
petr que contenga el agar en el cual se va a sembrar la muestra y se descarga esta
en el primer cuadrante, despus se estra en los dems cuadrantes de modo que se
puedan obtener colonias aisladas despus del periodo de incubacin.
sepas.
Segunda sesin.
1. Anlisis macroscpico y microscpico de Streptococcus agalactiae y Candida
albicans.
2. Para Streptococcus agalactiae realizar las pruebas de catalasa, hemolisinas y
prueba de CAMP (pendiente).
3. Para Candida albicans realizar la prueba de tubo germinativo y leerlo en
24horas e incubar a 37OC.
Prueba de CAMP:
1. Con el asa recta, estriar Staphylococcus (-hemoltico A) en una lnea recta
que atraviese el centro del agar sangre.
2. Estriar el Streptococcus agalactiae (-hemoltico B) a cada lado del centro del
inoculo estafiloccico en una lnea recta de 2-3 cm. de largo y perpendicular
(es decir en un ngulo recto) al inoculo del estafilococo sin tocar ste ultimo.
Prueba del KOH AL 3%.
En un portaobjetos se coloca una gota de KOH al 3% y con el asa de nicromio se
toma una colonia y se homogeniza durante un minuto, y se observa la consistencia
de esta solucin.
Si se forman hebras al levantar el asa de nicromio se trata de un Gram negativo y
si no se observa la viscosidad es Gram positivo.
Manual de bacter
UACH
Resultados.
Streptococcus
agalactiae
(agar sangre
de carnero)
Redonda
Pequeo
Plana
Entero
Positiva
Forma
Tamao
Elevacin
Borde
Luz
reflejada
Luz
Negativa
transmitida
Color
Blanquecino
Consistencia Cremosa
Hemlisis
hemoltico
No hubo crecimiento de Candida albicans

en el agar BIGGY
Catalasa: negativo
Oxidasa: negativo
Candida albicans
Manual de bacter
UACH
Discusin.
En el estudio realizado para las cepas de referencia se puede discutir que la falta
de crecimiento de la cepa de Candida albicans se pudo deber a que no habia
suficiente cepa para iniciar su crecimiento, por lo que se realizara en otra sesin su
siembra.
El Streptococcus agalactiae tubo un ptimo crecimiento en el agar sangre, y su
identificacin se hizo evidente por medio de la Tincin de Gram.
Conclusin.
Se puede concluir que en el anlisis macroscpico de Candida albicans no se
pudo observar por la falta de crecimiento en el agar BIGGY; por lo tanto no se pudo
efectuar el anlisis microscpico; mientras que en el Streptococcus agalactiae creci
bien en el agar y en las pruebas resulto negativo como era previsto para su
identificacin.
La prueba de CAMP no resulto, ya que no salio nada.
Bibliografa.
6.
Finegold, S. Martin, W. (2002). Bailey & Scout Diagnostico Microbiolgico.
Ed. Mdica Panamericana. 11va edicin. Mxico.
7.
Lennette, E. (1987). Microbiologa Clnica. Ed. Mdica Panamericana. 3ra
edicin. Mxico.
8.
Borrows. W. (1974). Tratado de microbiologa, Interamericana 20 edicin..
Mxico., pgs. 422-427.

9.
10.
www.ucm.es/BUCM/revistas/med/11330414/articulo/CLUR9797110051A.PDF
Fecha de consulta de las pginas de Internet: 6 de marzo de 2007
Manual de bacter
UACH
CHIHUAHUA
Laboratorio:
Bacteriologa Mdica
Prctica # 6
Anlisis microbiolgico de una muestra de
Exudado Cervicovaginal y Uretral
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNOS:
Manual de bacter
UACH
7mo B
15 de marzo de 2007
Manual de bacter
UACH
Resumen.
En esta prctica se realiz un cultivo de un exudado cervicovaginal de un
paciente con una posible infeccin en el aparato genital. Para su diagnostico se
sembr una porcin de la muestra en agares Casman, Sangre, MacConkey, Biggy,
Sal Manitol y Thayer Martin.
Se efectuaron dos tipos de frotis uno con Gram y otro sin teir (fresco) tomando
una porcin directamente de la muestra para su anlisis microscpico, observando
bacterias Gram + representantes de la flora normal. Pasado el tiempo de incubacin
se obtuvo un crecimiento colonial que marco la pauta de la investigacin.
Se realizo el anlisis macroscpico y microscpico de cada una de las colonias
para saber la morfologa de los posibles microorganismos, y como se obtuvo
crecimiento en agar Sangre, Casman y Sal Manitol y sabiendo que era un Gram + se
efectuaron las pruebas bioqumicas adecuadas para su identificacin, obtenindose
que se trataba de Staphylococcus aureus.
Introduccin.
Las enfermedades de transmisin sexual (ETS) -tambin conocidas como
infecciones de transmisin sexual (ITS) o enfermedades venreas-, son
aquellas enfermedades infecciosas que (generalmente, aunque en algunos casos
puede ser por otras vas) se transmiten de persona a persona por contacto ntimo
(que se produce, casi exclusivamente, durante las relaciones sexuales).
Los agentes productores de las enfermedades de transmisin sexual incluyen
bacterias, virus (como el del herpes), hongos e incluso parsitos.
Aunque casi todas tienen tratamiento, algunas de ellas, como las producidas por
virus, nunca curan de manera definitiva, sino que el agente causal permanece en
estado latente, sin manifestarse, dentro del organismo al que ha infectado,
reapareciendo cclicamente. Este tipo de relacin entre el organismo y el agente
infeccioso facilita la transmisin de ste, es decir, su infectividad.
Staphylococcus aureus es una bacteria que se encuentra en la piel y fosas
nasales de las personas sanas, que causa gran variedad de infecciones, desde
infecciones menores de la piel (forunculos, ampollas, vejigas) y abscesos cutneos
hasta enfermedades que pueden poner en peligro la vida como neumona,
meningitis, endocarditis, sndrome del shock toxico (SST) y sepsis.
Anlisis Microbiolgico de una muestra de Exudado cervicovaginal, para
determinar Enfermedades de Transmisin Sexual (ETS).
Manual de bacter
UACH
Material, Equipo y Reactivos
Equipo:
Incubadora a 37C

Material:
Mechero de bunsen.
Asa de nicromio circular estril.
Cajas de petri
Tubos de ensayo de 13x100mm.
Portaobjetos.
Puente de tincin.
Pizeta.
Papel estraza.
Frasco para anaerobios con vela.
Reactivos:
Agar BIGGY.
Agar Casman.
Agar Sal manitol.
Agar Thayer Martin.
Agar MacConkey.
Agar Sangre.
Cristal violeta.
Yodo lugol.
Alcohol-acetona.
Safranina.
Aceite de inmersin.
KOH 3%
Agua oxigenada.
Medio de transporte (Stuart).
Muestra:
Exudado Cervicovaginal.
Mtodos.
Primera sesin.
Sembrado de la muestra de Exudado Cervicovaginal.
1.
En todos los agares (Sangre, MacConkey, Casman, BIGGY, Thayer Martin,
Sal Manitol), tomar el hisopo con la muestra que se encuentra en el medio de Stuart,
y se descarga en una de los cuadrantes, despus se procede a estriar con el asa de
nicromio con el fin de obtener colonias aisladas.
Incubar a 37oC por 24horas. El agar Casman y el agar Sangre, se incuban por el
mismo tiempo y temperatura, con excepcin de que deben estar en condiciones
parciales de anaerobiosis.
Segunda sesin.
1.
Anlisis macroscpico y microscpico de las colonias crecidas en los
diferentes agares.
2.
En caso de haber crecimiento en el agar BIGGY; siendo indicio del
crecimiento de Candida albicans realizar la prueba de tubo germinativo y leerlo en
24horas e incubar a 37OC.
Realizar la Prueba del KOH AL 3%.
Realizar la prueba de la catalasa.
Realizar la prueba de la coagulasa.
NOTA: todas estas pruebas para los agares que tengan crecimiento bacteriano.
Manual de bacter
UACH
Resultados.
Forma
Tamao
Elevacin
Borde
Luz reflejada
Luz transmitida
Color
Consistencia
Hemlisis
Agar Casman
Redondas
Grandes
Aplanada
Irregular
S
No
Blancas
Cremosa
---------
Agar Sangre
Redondas
Medianas
Convexa
Entero
S
No
Grises
Cremosa
No present
-----
Agar Sal Manitol

Redondas
Chicas
Convexa
Entero
No
S
Amarillas
Cremosa
----Manitol (positivo)
Agar BIGGY
Redondas
Chicas
Convexa
Entero
No
S
Caf oscuro
Cremosa
---------
No hubo crecimiento de Candida albicans en el agar BIGGY. Pero se

agrego en los resultados, ya que en la prctica anterior no se pudo observar; y en la
prctica de este da salio negativo el crecimiento.
No hubo crecimiento en el agar Thayer-Martn.
No hubo crecimiento en el agar MacConkey.

g
r
Sal Manitol
Agar Casman
A
a
Agar Sangre
Staphylococcus aureus
Catalasa: positiva
Oxidasa: negativa
Coagulasa: positiva
Candida albicans
Manual de bacter
UACH
Discusin.
En el estudio realizado al exudado cervicovaginal se obtuvieron resultados
similares en la morfologa microscpica, dando as un menor margen de error en la
comprobacin del agente bacteriano que resulto; siendo este Staphylococcus
aureus. Comprobandos esta hipotesis por medio de las pruebas confirmatorias
para descartar otras posibilidades, entre ellas se encuentran la utilizacin del
Manitol, la Coagulasa positiva esta es especial para diferenciarse del
Staphylococcus epidermidis.
Conclusin.
La aparicin de Staphylococcus aureus en la regin cervicovaginal no es muy
frecuente pero cuando se da su aparicin, se puede deber cuando hay presencia del
Sndrome de choque txico especialmente despus del uso de tampones vaginales;
incluye fiebre, prurito, descamacin, vmito, diarrea; el choque toxico esta
relacionado con la produccin de toxinas.
Bibliografa.
11.
12.
edicin. Mxico.
13.
Mxico., pgs. 422-427.

14.
15.
www.ucm.es/BUCM/revistas/med/11330414/articulo/CLUR9797110051A.PDF
Fecha de consulta de las pginas de Internet: 6 de marzo de 2007
Manual de bacter
UACH
UNIVERSIDAD AUTNOMA
DE CHIHUAHUA
Laboratorio:
Bacteriologa Mdica
Prctica # 7
cepas de referencia
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNA:
Manual de bacter
UACH
7mo B
22 de marzo de 2007
Manual de bacter
UACH
Resumen.
Esta practica se dividi en tres secciones el la primera seccin se inocularon las
cepas (Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus
aureus, Staphylococcus epidermidis, Klebsiella pneumoniae y Corynebacterium
difteria) proporcionadas en los diferentes medios de agar, estas se pusieron a
incubar durante 24 hrs. a 37C, en la segunda seccin se hizo una revisin de la
morfologa macroscpica y microscpica de las colonias obtenidas en los diferentes
medios, adems se realizaron las pruebas bioqumicas de acuerdo a cada
microorganismo, realizando la prueba de la coagulasa entre los dos Staphylococcus.
Introduccin.
El Streptococcus pyogenes da lugar a colonias blancas o grises, de 1 a 2 mm de
dimetro, rodeadas de zonas de lisis completa de los eritrocitos presentes en el
medio de cultivo (hemlisis tipo ), aunque es posible, en raras ocasiones, aislar
cepas que no expresan la hemolisina en la superficie. Algunas cepas, las que
producen en grandes cantidades cido hialurnico capsular, crecen con la apariencia
de una gota de agua en la placa, pero esto ocurre tambin de forma excepcional.
Por lo general, las cepas menos mucosas asumen un aspecto arrugado denominado
mate, mientras que las colonias pequeas y opacas que carecen de cpsula y
protena M detectable se denominan brillantes.
Es incapaz de oxidar azcares y posee un metabolismo fermentativo de la
glucosa y otros carbohidratos produciendo cido lctico, aunque nunca gas. Produce
adems leucina-aminopeptidasa (LAP) y pirrolidonil-arilamidasa (PYR). Esta ltima
caracterstica rara vez es compartida por otros miembros de su mismo gnero.
Adems, es uniformemente sensible a la bacitracina.
Streptococcus pneumoniae. Es una bacteria Gram positiva de 1,2-1,8 m de
longitud, que presenta forma oval y la extremidad distal lanceolada, es inmvil, y no
forma endosporas, alpha-hemoltico miembro del gnero Streptococcus.
Es un comensal comn del tracto respiratorio superior humano, aislndose en un
5-70% de la poblacin adulta sana. El estado de portador sano vara con la edad,
ambiente y poca del ao. Este porcentaje es mucho ms alto durante los meses de
invierno, en los nios (30-35%) que en los adultos (18-19%) y en comunidades
cerradas (50-60%) que en la poblacin general urbana (27%).
A partir de la puerta de entrada respiratoria, S. pneumoniae es capaz de producir
diferentes cuadros clnicos que afectan al tracto respiratorio superior, como la otitis
media, mastoiditis y sinusitis, o al tracto respiratorio inferior, como la neumona.
Entre los cuadros clnicos extrarrespiratorios destaca la meningitis, que puede ser
debida a la entrada directa del microorganismo a travs de una fstula que
comunique la nasofaringe con el espacio menngeo o bien puede ser una
complicacin de la neumona bacteriemia, mastoiditis, sinusitis o endocarditis. Otras
localizaciones de la enfermedad neumoccica son el empiema, la endocarditis, la
artritis y la peritonitis espontnea.
Staphylococcus aureus. Es un coco que crece agrupado en racimos, que responde
positivamente a la tincin de Gram, es aerobio y anaerobio facultativo por lo que
puede crecer tanto en una atmsfera con oxgeno y tambin sin el mismo, no
presenta movilidad ni forma cpsula. Es capaz de crecer hasta con un 10 % de sal
comn. Por esto puede crecer en el agua del mar. Produce la fermentacin lctica.
Es catalasa positivo y coagulasa positivo.
Manual de bacter
UACH
Es un microorganismo muy resistente a las condiciones ambientales y
extremadamente difcil de erradicar. Pese a que no es esporulado (formas de
resistencia elaboradas de forma natural por algunos microorganismos), soporta bien
condiciones extremas aunque se inactiva a temperatura de congelacin y puede
eliminarse con una coccin correcta.
Staphylococcus epidermidis. Los estafilococos coagulasa-negativo son las
bacterias mas comnmente aisladas en los laboratorios microbiolgicos. Entre ellos
el S. epidermidis que se caracteriza por ser coagulasa negativo y novobiacina
sensible, fue considerado por mucho tiempo como un germen contaminante de
cultivos. Sin embargo, ahora se le reconoce como un patgeno importante y es
considerado el agente causal de diferentes entidades clnicas, entre ellas:
Infecciones urinarias intrahospitalarias, osteomielitis, endocarditis de vlvula nativa,
bacteriemia en pacientes inmunosuprimidos, infecciones de dispositivos mdicos o
cuerpos extraos (catteres endovenosos).
Otra caracterstica importante de esta bacteria es la susceptibilidad
antimicrobiana que presenta, ya que el S. epidermidis ha desarrollado resistencia a
la meticilina en forma paralela al desarrollo de resistencia del S. aureus, pero
mostrando tasas mucho mas elevadas que esta ltima, y que se ha ido
incrementando de una manera importante en los ltimos 20 aos.
Corynebacterium. El gnero Corynebacterium fue creado por Lehmann y
Neumann (1896) para clasificar taxonmicamente a los bacilos de la difteria. El
gnero fue definido en base a caractersticas morfolgicas: Corynebacteria proviene
del griego corun (bastn nudoso) y bacterion (bastoncillo). A partir de estudios de
RNAr 16S se ha agrupado a las corinebacterias en la subdivisin de eubacterias
Gram positivas de alto contenido en G+C, en estrecha relacin filogentica con
Arthrobacter, Mycobacterium, Nocardia e incluso Streptomyces.
Las caractersticas ms relevantes del gnero Corynebacterium fueron descritas
por Collins y Cummins (1986). Se trata de bacterias Gram-positivas, no esporuladas,
que carecen de movilidad, bacilos rectos o ligeramente curvados cuyo tamao oscila
entre 2-6m de longitud y 0,5n de dimetro, a menudo con la tpica forma de V (lo
que tambin se denomina forma de letras chinas), aunque tambin aparecen
formas elipsoidales, son aerobias o anaerobias facultativas, catalasa positivas,
quimioorganotrfos, con un contenido en G+C entre 5165%.
Cultivar e identificar bioqumicamente las siguientes cepas del tracto

respiratorio: Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus
aureus, Staphylococcus epidermidis, Corynebacterium spp y Klebsiella pneumoniae.
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UACH
Material, equipo y reactivos.
Equipo:
Incubadora a 37C.
Equipo de seguridad (bata para laboratorio, guantes de ltex y cubre bocas).

Material:
Mechero de bunsen.
Frasco de vidrio con tapadera para carboxifilia con vela pequea.
Asa de nicromio circular y recta estriles.
Puente de tincin y pizeta.
Hisopo estril.
Papel estraza.
Gradilla.
Reactivos:
Agar Sangre con Telurito de Potasio.
Agar Sangre de Carnero.
Agar Sal Manitol.
Caldo de Urea.
Caldo rojo de fenol con glucosa.
Caldo rojo de fenol con xilosa.
Caldo rojo de fenol con maltosa.
Caldo rojo de fenol con sacarosa.
Caldo de nitratos.
1ml de plasma estril.
Sensidisco de Bacitracina.
-Naftilamina.
cido sulfanlico.
Cristal violeta.
Yodo lugol.
Alcohol acetona.
Safranina.
Solucin salina fisiolgica al 0.85%.
KOH 3%.
-naftol.
H2O2 3%.
Aceite de inmersin.
Bactericida para limpieza.

Cepas de Referencia:
Streptococcus pneumoniae.
Streptococcus pyogenes.
Staphylococcus aureus.
Staphylococcus epidermidis.
Corynebacterium difteria.
Klebsiella pneumoniae.
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UACH
Manual de bacter
UACH
Mtodo.
Primera sesin.
Sembrado de las diferentes cepas.
Medios: Agar sangre, Agar Sal Manitol, Agar sangre + telurito de potasio.
cepa de referencia (Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae
Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis y Corynebacterium spp.), se
toma la caja petr que contenga el agar en el cual se va a sembrar la muestra y se
descarga esta en el primer cuadrante, despus se estra en los dems cuadrantes
de modo que se puedan obtener colonias aisladas despus del periodo de
incubacin.
Despus de que se hayan sembrado cada una de las cepas de referencia se
cepas.
NOTA: Esto se realiza de igual forma para cada uno de los medios.
Segunda sesin.
Anlisis macroscpico y microscpico de las colonias presentes en los medios
inoculados en la seccin anterior, as como realizar las pruebas bioqumicas
correspondientes de acuerdo al microorganismo.
Tincin de Gram.
Prueba de la Catalasa.
Prueba de la oxidasa.
Adems de las pruebas bioqumicas ya mencionas para Corynebacterium
realizar las siguientes pruebas bioqumicas:
Catalasa.
Reduccin de nitritos a nitratos.
Siembre en medios O/F con glucosa, lactosa, maltosa y sacarosa.
Rojo de metilo.
Ureasa.
Tercera seccin.
Realizar la lectura de las pruebas bioqumicas.
Leer halos de inhibicin.
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UACH
Resultados.
Forma
Tamao
Elevacin
Borde
Tipo de luz
Color
Consistencia
Hemlisis
Lactosa
Forma
Tamao
Elevacin
Borde
Tipo de luz
Color
Consistencia
Hemlisis
Manitol
Forma
Tamao
Elevacin
Borde
Tipo de luz
Color
Consistencia
Hemlisis
Manitol
Forma
Tamao
Elevacin
Borde
Tipo de luz
Color
Consistencia
Hemlisis
Corynebacterium
Corynebacterium
Klebsiella
difteria.
difteria.
pneumoniae
(agar Chocolate)
(agar Sangre c/Telurito)
(agar McK)
Redondas
Redondas
Redondas
Pequeas
Pequeas
Medianas
Convexa
Convexa
Convexa
Entero
Entero
Entero
Reflejada
Reflejada
Reflejada
Blancas
Gris
Rosa-fuschia
Cremosa
Cremosa
Cremosa
-----No presenta
---------------Lactosa positiva
Staphylococcus
Staphylococcus
Staphylococcus
aureus
aureus
aureus
(agar Sangre)
(agar Sal Manitol)
(agar S-110)
Redondas
Redondas
Redondas
Pequeas
Pequeas
Pequeas
Planas
Planas
Planas
Entero
Entero
Entero
Reflejada
Reflejada
Reflejada
Dorado
Amarillo
Negras
Cremosa
Cremosa
Cremosa
Beta hemlisis
--------------Manitol positivo
-----Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus
(agar Sal Manitol)
epidermidis (agar Sangre)
Redondas
Redondas
Pequeas
Pequeas
Planas
Planas
Entero
Entero
Reflejada
Reflejada
Blancas
Blancas
Cremosa
Cremosa
-----No presenta
Manitol negativo
-----Streptococcus pyogenes
Streptococcus pneumoniae (agar
(agar Sangre)
Sangre)
Redondas
Redondas
Medianas
Medianas
Planas
Planas
Entero
Entero
Reflejada
Reflejada
Blancas
Gris
Cremosa
Cremosa
Beta hemlisis
Alfa hemlisis
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UACH
S. pyogenes (cocos, en cadena,

gram positivos)
S. aureus (cocos, gram positivos en racimo)
Bacilos, gram positivos)

C. difteria
S. epidermidis(cocos gram positivos)
K. pneumoniae ( bacilos, gram negativos)
(cocos, gram positivos en cadena)

S. Pneumoniae.
Manual de bacter
UACH
S. pyogenes(vacitracina)
S. pneumoniae( optoquina)
S. aureus (sangre)
S. aureus (110)
S. pyogenes
S. pneumoniae
S. aureus (sal manitol)
K. pneumoniae
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C. difteria(chocolate)
S. epidermidis(sangre)
C. Difteria (sangre c/telurito)
S. aureus y S. epidermidis (sal manitol)
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UACH
Discusin.
En el cultivo de las cepas de referencia de las bacterias mencionadas al inicio, solo
se obtuvo dificultad para el crecimiento de S, pyogenes y S. pneuminiae, por o q ue
la titular realizo un cultivo de ambos que proporciono al grupo para realizarle las
pruebas necesarias para su identificacin, en donde S. pyogenes obtuvo un halo de
inhibicin a la vasitracina y el S. pneumoniae un halo para optoquina lo cual confirma
que efectivamente estabas tratando con dichas bacterias , en las pruebas
bioqumicas de Corymebacteriun se obtuvo una discrepancia con respecto a la
fermentacin y oxidacin de la xilosa debido a que esta dio un resultado negativo,
locuaz con respecto a la teora esta debi ser positiva, otra discrepancia se obtuvo
con la K. pneimoniae al dar el rojo de metilo positivo y vogues poskauer negativo, lo
cual deba de ser a la viceversa. Por lo dems todo coincidi con las caractersticas
mencionadas en las referencias.
Conclusin.
Se logro identificar a cada una de las bacterias de las cepas de referencia
proporcionadas, debido a que no hubo gran diferencia con las caractersticas
morfolgicas y metablicas de los microorganismos analizadas en la prctica, con
respecto ala teora que mencionan las referencias, es por eso de suma importancia
realizar cada una de las pruebas tanto microscpica, macroscpicas como
metablicas a cada uno de los microorganismos para poder dar un resultado
confiable, de que efectivamente, se trata de la bacteria que se sospecha, evitando la
contaminacin de otros microorganismos.
Bibliografa.
http://www.seimc.org/control/revi_Bacte/fenotm.htm
Madigan michael y Co. Brock Biologa de los microorganismos 10 edicin pearson
prentice hall. Madrid 2004.
Lennette Edwin H. Manual de
Panamericana. Buenos Aires 1987.
microbiologa
clnica
edicin,
editorial
Tay Zavala Jorge Dr. Microbiologa y Parasitologa mdicas. Segunda edicin.

Mndez editores. Mxico.1994.
Manual de bacter
UACH
UNIVERSIDAD AUTNOMA
DE CHIHUAHUA
Laboratorio:
Bacteriologa Mdica
Prctica # 8
Mycobacterium tuberculosis
TITULAR:
Norma Herrera Daz
Manual de bacter
UACH
ALUMNA:

7mo B
29 de marzo del 2007
Resumen
En esta practica se analizo una muestra de esputo, donde se pretenda hacer un
diagnostico para Mycobacteium tuberculosis, este diagnostico se realizo, mediante la
utilizacin de la basiloscopia; utilizando la tincin de Zielh-Neelsen y el cultivo en
medio de Lowes-Jensen; donde como resultado obtuvimos una muestra negativa;
posteriormente se analizo un frotis positivo proporcionado por la titular, donde; se
obtuvo un conteo de 1 bacilo por campo. En el medio de cultivo (Lowestein-Jensen),
puesto que es una bacteria de crecimiento lento; en la muestra aun no se obtiene un
resultado.
Introduccin
La tuberculosis es causada por una bacteria acido alcohol resistente
Mycobacterium tuberculosis. Este microorganismo fue aislado, descrito y
responsabilizado de la tuberculosis en 1882 por el microbilogo alema Robert Koch.
La propiedad de acido alcohol resistente es debida a la presencia en la superficie de
la Mycobacteria de unos componentes lipiditos nicos demonizados cidos
miclicos.
Esta bacteria es de crecimiento lento, de modo que las colonias se observan en la
placa despus de varios das o semanas. Cunado crecen en medio slido, forman
colonias apretadas y arrugadas que se elevan sobre la placa en lugar de extenderse,
esta formacin es debida al alto contenido lipidito y a la naturaleza hidrofobica de la
superficie celular.
Estos bacilos se trasmiten fcilmente a travs de las vas respiratorias, incluso en el
simple acto de hablar es suficiente para la trasmisin de persona a persona. La
interaccin de esta bacteria con las clulas del hospedero, es extremadamente
compleja, siendo determinada en parte por la virulencia de la cepa. Es importante
diferenciar entre dos tipos de infeccin de tuberculosis en humanos: primarias y post
primario o reinfeccin; la primaria es cuando en individuo adquiere la infeccin como
consecuencia de la inhalacin de pequeas gotitas de liquido que contiene bacterias
viables. La bacteria se localiza en los pulmones donde se multiplica, luego se forman
agregados de macrfagos activados, llamados tubrculos, caractersticos de los
tuberculosos. La postprimaria es aquella tuberculosis que se desarrolla de fuentes
exgenas o por reactivacin de bacterias que han permanecido quiescentes dentro
de los macrfagos pulmonares.
Manual de bacter
UACH
Resultado de aprendizaje.- identificar a los bacilos acido alcohol resistentes;

Material, equipo y reactivos.

Equipo:
Incubadora a 37C.
Centrifuga
Tubo de ensaye
Equipo de seguridad (bata para laboratorio, guantes de ltex y cubre bocas).

Material:
Mechero de bunsen.
Puente de tincin y pizeta.
Papel estraza.
Reactivos:
Agra Lowestein-Jensen.
Carbol fuschina
Alcohol acido
Azul de metileno
Aceite de inmersin.
Bactericida para limpieza
Metodologa
Tincin de Zielh-Neelsen
Realiza un frotis con la muestra de esputo y deja secar.
Fija al mechero pasndolo de arriba hacia abajo por la llama por tres veces.
Cubre el frotis con carbol fushina por 5 min.
Enjuaga el carbol fushina con agua destilada, permitiendo que esta corra a
travs del frotis.
Enjuaga el frotis con alcohol acido durante 1 min.
Y enjuaga con agua.
Cubre el frotis con azul de metileno durante 1min.
Enjuaga el frotis con agua.
Manual de bacter
UACH
Seca suavemente con papel estraza.

Observar en el microscopio con el objetivo de 100X.
Cultivo
El esputo se trata con 1N NaOH durante 30 min. Para eliminar las bacterias
de la flora normal.
La muestra centrifuga y se tira el sobrenadante.
Una vez neutralizada se siembra sobre el medio de aislamiento (LowesteinJensen), en una campana de extraccin con las medidas necesaria para
evitar contaminacin del medio y evitar infectarse.
Resultado
Muestra:
Baciloscopia..Negativa
Frotis: 4901
0 0 0 0
0 0 1 5
0 0 0 0
0 0 0 0
15 0 0 0
0 0 0 8
3 1 0 4
0 4 2 0
0 0 13 4
0 1 6 0
0
0
1
0
0
0
2
0
0
0
0
1
0
0
1
0
0
0
0
4
0
0
0
2
0
0
0
0
0
0
0
12
0
0 0
3 0
0 0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
14
0
0
1
3
0
0
2
4
0
forma color
bacilo Rosa(alcohol
resistente)
arreglo
Simple o agrupados
Manual de bacter
UACH
colonias tamao color
borde luz
redondas mediano Blanca/crema entero No trasmitida
En el anlisis de muestra de esputo, se obtuvo un resultado negativo, ya que no se
encontr ningn bacilo acido alcohol resistente en la baciloscopia. En el frotis
proporcionado por el titular se obtuvo como resultado mas de un bacilo por campo
lo que significa que la muestra fue obtenida de un paciente tuberculoso, ya que una
muestra de considera positiva cuando se encuentra aunque sea solo un bacilo en
100 campos.
Conclusin
Al observar los resultados obtenidos, se concluye que el paciente no tiene una
infeccin causada por Mycobacterium, debido a que no se encontr un solo bacilo
en el frotis analizado. En el frotis proporcionado por el titular se observo, una
muestra positiva a Mycobacterium tuberculosis, esto se determina debido a la gran
cantidad de bacilos acido alcohol resistentes que se observaron en el frotis por lo
que la muestra se reporta como positiva BAAR (++).
Bibliografa
http://www.seimc.org/control/revi_Bacte/fenotm.htm
http://www.monografias.com/trabajos10. html
http://es.wikipedia.org/wiki/Mycobacteium-tuerculosis
Manual de bacter
UACH
http://www.escuela.med.puc.cl/paginas/publicaciones/TemasMedicinaInterna/pdf/Enf
Tr
Fecha de consulta: 27-marzo-2007
Madigan michael y Co. Brock Biologa de los microorganismos 10 edicin pearson
prentice hall. Madrid 2004.
Lennette Edwin H. Manual de
Panamericana. Buenos Aires 1987.
microbiologa
clnica
edicin,
editorial
Tay Zavala Jorge Dr. Microbiologa y Parasitologa mdicas. Segunda edicin.

Mndez editores. Mxico.1994.
Borrows William Dr. Tratado de microbiologa, Vigsima edicin. Interamericana.
Mxico 1974.
CHIHUAHUA
Laboratorio:
Bacteriologa Mdica
Prctica # 9
Manual de bacter
UACH
Anlisis microbiolgico de una muestra de

Exudado Faringeo
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNOS:
Mayra Torres Gmez
7mo B
19 de abril de 2007
Manual de bacter
UACH
Resumen.
En esta prctica se realiz un cultivo de un exudado fraringeo. Para su
diagnostico se sembr una porcin de la muestra en agares: Sangre, MacConkey,
Chocolate y Sal Manitol.
Se efectuo un frotis con tincion Gram, para su anlisis microscpico,
observando bacterias Gram + representantes de la flora normal. Pasado el tiempo
de incubacin se obtuvo un crecimiento colonial que marco la pauta de la
investigacin.
para saber la morfologa de los posibles microorganismos, y como se obtuvo
crecimiento en agar Sangre, Chocolate y Sal Manitol y sabiendo que era un Gram +
se efectuaron las pruebas bioqumicas adecuadas para su identificacin,
obtenindose que se trataba de Staphylococcus aureus. El manitol positivo
demostrado en la caja de agra sal manitol es una prueba de identificacion que
ayudo para determinar que era dicho mocroorgamismo.
Introduccin.
Las infecciones respiratorias son estados anormales en los cuales un germen o
agente infeccioso invade el cuerpo y permanece en l provocndole algn tipo de
dao. Los agentes infecciosos pueden ser de diferentes clases: virus, bacterias u
hongos. Su entrada al cuerpo es por alguna de las "puertas" o superficies de
contacto externas del aparato respiratorio. Pueden penetrar en ocasiones estando
stas superficies intactas, aunque es ms fcil si se encuentran previamente
daadas inflamadas a travs de heridas.7
Los dos factores ms importantes que hacen posible una infeccin son: la habilidad
natural del agente infectante para pasar las barreras naturales y los tejidos, lo que se
conoce como virulencia, y por otro lado el grado de labilidad eficiencia del sistema
general de defensa del individuo durante las diversas fases del ataque del germen
(susceptibilidad).7
Los staphylococos son miembros de la flora microbiana normal en humanos.
Constituyen un genero de bacterias esfricas, sin movimiento y no esporuladas. Son
catalasa-positivo y capaces de crecer y producir cido a partir de la glucosa por va
anaerobia, se tien fcilmente en tinciones bsicas comunes y son intensamente
grampositivos. Su crecimiento es abundante, y las colonias sobre la superficie de
agar son medianas, redondas, lisas y brillantes. En forma caracterstica, se divide en
ms de un plano y pertenece en conjuntos irregulares que asemejan racimos de
uvas. 5 y 6
Staphylococcus aureus es una bacteria que se encuentra en la piel y
fosas nasales de las personas sanas, que causa gran variedad de infecciones,
desde infecciones menores de la piel (forunculos, ampollas, vejigas) y abscesos
cutneos hasta enfermedades que pueden poner en peligro la vida como neumona,
meningitis, endocarditis, sndrome del shock toxico (SST) y sepsis. 1,2,3.
Anlisis Microbiolgico de una muestra de Exudado faringeo, para determinar
Enfermedades del tracto respiratorio.
Manual de bacter
UACH
Equipo:
Incubadora a 37C

Material:
Mechero de bunsen.
Cajas de petri
Tubo de ensayo de 13x100mm.
Portaobjetos.
Puente de tincin.
Pizeta.
Papel estraza.
Reactivos:
Agar Chocolate.
Agar Sal manitol.
Agar MacConkey
Agar Sangre.
Cristal violeta.
Yodo lugol.
Alcohol-acetona.
Safranina.
Aceite de inmersin.
Agua oxigenada.
Medio de transporte (Stuart).
Muestra:
Exudado Faringeo.
Mtodos.
Toma de muestra
Toma de muestra: Se pide al paciente que se siente y coloque su cabeza hacia
atrs. Se ilumina bien la cavidad orofarngea y con un abatelenguas se empuja la
lengua hacia abajo para facilitar el acceso a la parte posterior de la faringe. Con un
hisopo de algodn se hace un raspado de las reas hipermicas, purulentas o
necrticas, as como de las membranas o manchas de Koplic, si es que las
presenta.
Medio de transporte:
Agentes virales: El hisopo con la muestra se introduce en un tubo de tapn de

rosca con 1 a 2 mL de solucin salina isotnica estril. Se rompe la varilla de
madera a la altura del tapn y se tapa hermticamente.
Agentes bacterianos: El hisopo con la muestra se introduce en un tubo de
tapn de rosca con medio de Amies o de Stuart. Se rompe la varilla de
madera a la altura del tapn y se tapa hermticamente.
Manual de bacter
UACH
Primera sesin.
Sembrado de la muestra de Exudado Faringeo.
2.
En todos los agares (Sangre, MacConkey, Chocolate, Sal Manitol), tomar el
hisopo con la muestra que se encuentra en el medio de Stuart, y se descarga en una
de los cuadrantes, despus se procede a estriar con el asa de nicromio con el fin de
obtener colonias aisladas.
Incubar a 37oC por 24horas.
El agar chocolate y sangre se incuban en condiciones de carboxifilia.
Segunda sesin.
1.
diferentes agares.
Realizar la prueba de la catalasa.
Realizar la prueba de la coagulasa.
Manual de bacter
UACH
Resultados.
Forma
Tamao
Elevacin
Borde
Luz transmitida
Color
Consistencia
Hemlisis
Agar Sangre
Agar Sal Manitol
Redondas
Medianas
Convexa
Entero
No
Blanca
Cremosa
No present
-----
Redondas
Medianas
Convexa
Entero
no
Doradas
Cremosa
----Manitol (positivo)
Agar
Chocolate
Redondas
Medianas
Convexa
Entero
no
Blancas
Cremosa
---------
No hubo crecimiento en el agar MacConkey.
agar sangre
Agar
sal
agar chocolate
manitol
Staphylo
Catalasa: positiva
Oxidasa: negativa
Coagulasa: positiva
coccus aureus
Manual de bacter
UACH
Discusin.
En el estudio realizado al exudado faringeo se obtuvieron resultados con un
menor margen de error en la comprobacin del agente bacteriano que resulto;
siendo este Staphylococcus aureus. Comprobandos esta hipotesis por medio de las
pruebas confirmatorias para descartar otras posibilidades, entre ellas se encuentran
la utilizacin del Manitol, la Coagulasa positiva.
Conclusin.
El aislamiento de S. aureus a partir del exudado farngeo no tiene importancia
diagnstica, ya que se considera parte de la flora normal de la faringe y nasofaringe,
por lo que no tiene significado clnico.
Bibliografa.
16.
17.
edicin. Mxico.
18.
Mxico., pgs. 422-427.

19.
http://www.salud.gob.mx/indre/mues.htm#M3.%20EXUDADO%20FARINGEO
20.
http://html.rincondelvago.com/bacteria-staphilococcus-aureus.html
21.
http://html.rincondelvago.com/flora-bucal.
22.
http://www.alergia.ws/ot_infecciones.htm
Fecha de consulta de las pginas de Internet: 18 de abril de 2007
Manual de bacter
UACH
CHIHUAHUA
Laboratorio:
Bacteriologa Mdica
Prctica # 10
Infecciones De La Piel
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNA:
7mo B
Manual de bacter
UACH
26 de abril de 2007
Resumen
En este anlisis, se realiz un hisopado de la herida para determinar si el paciente,
presenta una infeccin, esta tcnica se realiz utilizando cultivos de la muestra en
agares; sangre, MacConkey y en un medio para anaerobios en agar Liver Veal, as
como la identificacin de la bacteria causal de la infeccin. Donde, como resultado,
se obtuvo; en el anlisis; colonias redondas convexas, color trasparentes, y de
consistencia cremosa; esto en agar MacConkey y en el Sal Manitol no hubo
crecimiento, en sangre se observo el efecto de swarming y en agar Liver Veal fueron
colonias pequeas de color gris. Microscpicamente fueron bacilos gram negativos,
por lo que se procedi a realizar las pruebas bioqumicas o metablicas para
determinar el tipo de microorganismo asilado. El cual resulto ser, Proteus,
comnmente relacionada a infecciones de la piel en pacientes tratados con
antibiticos. La muestra fue proporcionada por el laboratorio clnico Universidad.
Introduccin
La piel representa una barrera notablemente eficaz contra las infecciones
bacterianas. A pesar de que muchas bacterias viven sobre la piel, normalmente
son incapaces de provocar una infeccin. Las infecciones bacterianas de la piel
pueden afectar a una sola zona y tener el aspecto de un grano o bien propagarse
en unas horas y afectar a un rea mucho ms extensa. Las infecciones cutneas
pueden presentar un grado de gravedad variable, desde una acn sin importancia
hasta una enfermedad potencialmente mortal, como el sndrome de la piel
escaldada producido por estafilococos.
Muchos tipos de bacterias pueden infectar la piel. Los ms frecuentes son

los Staphylococcus y los Streptococcus. En los hospitales o las residencias
pueden producirse infecciones causadas por bacterias menos comunes, al
igual que cuando se realizan trabajos de jardinera o se nada en un
estanque, un lago o en el mar.
Algunas personas presentan un riesgo especfico de contraer infecciones de
piel; por ejemplo, los diabticos, que poseen una irrigacin cutnea
disminuida, en especial la de las manos y de los pies, y los enfermos de
SIDA, que presentan un sistema inmunolgico deprimido. La piel daada por
los rayos del sol, las rascaduras u otra irritacin tambin tiene ms
posibilidades de infectarse. De hecho, cualquier lesin en la piel predispone
a una persona a sufrir una infeccin.
Por lo general, mantener la piel intacta y limpia evita las infecciones.
Resultado De Aprendizaje
Cultivar e identificar al microorganismo causal de una infeccin de la piel.
Manual de bacter
UACH
Material:
Equipo:
Asa de nicromio calibrada.

Incubadora a 37C.
Mechero de Bunsen.
Papel estraza.
Puente de tincin.
Gradilla y piseta.
Cajas petri.
Hisopo estril.
Cubreboca.
Guantes de ltex.
Bata.
Reactivos:
Tincin de Gram.
Cristal violeta.
Yodo lugol.
Alcohol acetona.
Safranina.
Aceite de inmersin.
Kovaks.
-Naftol.
KOH al 40%.
Rojo de Metilo.
Verde de malaquita
Agares:
Pruebas Bioqumicas:
MacConkey.
TSI
Sangre.
MIO
Sal Manitol.
SIM
Nutritivo
Citrato
Liver veal.
Caldo de Urea
FeA
RM-VP
LIA
Caldo de Malonato
o Nitratos
o Maltosa
Manual de bacter
UACH
o
o
o
o
Sacarosa
Glucosa
Xilosa
Manitol
Metodologa
Toma De La Muestra
HERIDAS SUPERFICIALES Y ABSCESOS ABIERTOS.
A. MATERIAL NECESARIO.
- Suero fisiolgico.
-Jeringa y aguja estriles.
-Recipientes estriles con tapa de rosca.
-Hisopos con medio de transporte tipo Stuart-Amies.
B. TECNICA.
- Lavar con suero fisiolgico estril cuidadosamente la superficie de la herida para
retirar la flora
colonizante.
- Recoger el pus mediante jeringa y aguja, aspirando preferentemente de zonas
profundas.
- Cuando la muestra sea insuficiente, instilar suero o solucin de Ringer lactato y
aspirarlo nuevamente en la jeringa.
- Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podr efectuarse un frotis
de los bordes de la herida con un hisopo.
C. NUMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN.
Para muestras lquidas se intentara obtener 1-10 ml. En el resto de las ocasiones se
enviar la mxima cantidad posible.
D. TRANSPORTE Y CONSERVACIN.
El envo al laboratorio debe ser inmediato. Se utilizar para el envo tubos estriles
con tapa rosca.
La jeringa de la extraccin ser evacuada en el recipiente en que se har el envo.
La prctica de colocar un tapn de goma en la aguja (usando la jeringa como
recipiente de transporte) debe desecharse por el riesgo para el personal de sufrir un
pinchazo con una aguja contaminada con lquidos orgnicos. No olvidar identificar la
muestra adecuadamente y si no puede procesarse antes de 2 horas usar medio de
transporte.
E. OBSERVACIONES.
Las muestras recibidas en hisopo son de escasa rentabilidad y deben obtenerse slo
en circunstancias muy excepcionales, cuando no se pueda recoger la muestra por
otros mtodos. Es importante especificar sitio anatmico de donde se realiz la
toma de muestra.
ABSCESOS CERRADOS.
Manual de bacter
UACH
Es un procedimiento mdico
A. MATERIAL NECESARIO.
- Gasas estriles.
- Alcohol etlico o isoproplico al 70%.
- Yodo povidona al 10%.
- Jeringa estril.
- Aguja IM.
- Medio de transporte para anaerobios.
B. TECNICA.
- Realizar antisepsia de la zona a puncionar con alcohol al 70%, de forma
concntrica comenzando por el centro. Abarcar una zona de unos 10 cm.
- Repetir la operacin con Yodo povidona. En pacientes con hipersensibilidad al
yodo, se utilizar alcohol 70 % dos veces consecutivas.
- Dejar secar al menos 1 minuto para que el antisptico ejerza su accin.
- Realizar una puncin-aspiracin del absceso con jeringa y aguja, la muestra ms
til es la obtenida contra la pared del absceso y puncionando en el lado superior
para evitar la fistulizacin espontnea.
- Traspasar la muestra a un contenedor estril. Si se requiere bsqueda de
anaerobios introducir en un medio de transporte para anaerobios.
C. NUMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN.
Deber enviarse un volumen de muestra entre 1-5 ml.
D. TRANSPORTE Y CONSERVACION.
Las muestras deben enviarse al laboratorio tan pronto como sea posible. Hasta que
esto suceda, mantener las muestras y el medio de transporte a temperatura
ambiente.
E. OBSERVACIONES.
Es muy importante especificar en la solicitud la localizacin del absceso con vistas a
la interpretacin de los resultados. Si se carece de recipiente para transporte de
muestra para anaerobios consultar al laboratorio.
HERIDA QUIRRGICA
La toma de muestra se realizar con tcnica asptica luego de limpieza de la zona
con suero fisiolgico para eliminar la contaminacin superficial. Se realizar por
puncin y se colocar la muestra en recipiente estril con tapa de rosca, si se
sospecha presencia de anaerobios comunicarse con el laboratorio para solicitar
medio de transporte. S la muestra es obtenida con hisopo realizar primero la
limpieza de la zona y luego embeber en el pus el mismo.
QUEMADURAS
El tipo de toma de muestra es controvertido, pero los mejores resultados se han
logrado con punch de tejido de 3 o 4 mm para realizar cultivos cuantitativos. Se
transportan en tubos con tapa rosca estriles.
Primera sesin.
Medios: Agar sangre, Agar Sal Manitol, chocolate y Agar Liver Veal.
Con el hisopo se descarga l muestra en el primer cuadrante, despus se estra en
los dems cuadrantes de modo que se puedan obtener colonias aisladas despus
del periodo de incubacin.
cepas.
Manual de bacter
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Segunda sesin.
Tincin de Gram.
Adems de las pruebas bioqumicas
Tercera seccin.
Resultados
Proteus mirabilis
Agar:
Sangre
Liver veal
MacConkey
Forma
Efecto swarming
Tamao
---Borde
-------Elevacin
------Consistencia
Cremosa
Luz transmitida
Negativa
Redonda
Pequeas
Entero
Convexa
Cremosa
Negativa
Redonda
pequeas
Entero
Convexa
Cremosa
positiva
Luz reflejada
Color
Positiva
Grises
Positiva
Grises
negativa
trasparentes
Sangre
nutritivo
irregular
Grandes
Irregular
Aplanadas
Cremosa
Negativa
irregular
Grande
Irregular
Aplanada
Cremosa
Negativa
Positiva
Grises
Positiva
Blanca
Bacillus cereus
Agar:
Forma
Tamao
Borde
Elevacin
Consistencia
Luz transmitida
Luz reflejada
Color
Manual de bacter
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Morfologa microscpica
Proteus mirabilis
Agar sangre
Agar Mc Conkey
Agar Liver Veal
Manual de bacter
UACH
Bacillus cereus
Bacilos gram positivos, en cadena.
Agar Nutritivo
Agar sangre
Pruebas Bioqumicas
medio
TSI
Citrato
FEA
MIO
SIM
LIA
Proteus mirabilis
Gas
H2S
A/A
Movilidad
Indol
Ornitina
Movilidad
Indol
H2S
Manual de bacter
UACH
+
RM-VP
Caldo de Urea
Caldo de Malonato
RM
VP
+
-
Bacillus cereus
*Los resultados obtenidos todos fueron negativos, los que se presentan a
continuacin son los valores de la referencia.
medio
Nitrato
Negativo
Maltosa
Positivo
Sacarosa Positivo
Glucosa
Positivo
Xilosa
Negativo
Manitol
negativo
En nuestro estudio el agente que se identifico como agente causal de infeccin fue
la Proteus, dicha identificacin se determino gracias alas caractersticas metablicas
identificadas en las pruebas bioqumicas realizadas. Proteus vulgaris es indol
positivo mientras que Proteus mirabilis es indol negativo. Por lo tanto mediante esta
prueba podemos hacer la identificacin presuntiva de Proteus mirabilis. Proteus
penneri y P. myxofaciens tambin son indol negativo pero raramente se encuentran
en infecciones de heridas. Por lo tanto para este anlisis, la recuperacin de una
especie de Proteus, indol negativo en una muestra de hisopado de la piel puede
identificarse como Proteus mirabilis. Podra confundirse con Proteus penneri solo
que este se diferencia por que no produce sulfuro de hidrogeno en el TSI, a
diferencia de P. mirabilis
Conclusin
Manual de bacter
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Se lleg a la conclusin de que el paciente, presenta una infeccin, a causa de la
bacteria Proteus, puesto que en el anlisis microbiolgico fue el microorganismo que
se pudo recuperar, este microorganismo es comn encontrarlo en personas que
estn tratados con antibiticos. El microorganismo fue identificado por medio de
pruebas bioqumicas.
Bibliografa
http://www.eprodig.com/dermlink/Paginas/consejos_enfermedades_bacteriana.htm
http://www.msd.es/publicaciones/mmerck_hogar/seccion_18/seccion_18_201.html
Koneman. W Elmer y Co. Diagnostico microbiolgico texto y atlas. 5 edicin. Panamericana. Buenos
Aires. 2004
Borrows William Dr. Tratado de microbiologa, Vigsima edicin. Interamericana. Mxico 1974.
Garca Rodrguez JJ. Microbiologa Mdica. Tomo II.Doyma libros. Madrid 1996.
Manual de bacter
UACH
CHIHUAHUA
Laboratorio:
Bacteriologa Mdica
Prctica # 11
Manual de bacter
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Hemocultivo
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNOS:
Eloy Ricardo Borjas Senz 175211

7mo B
3 de mayo de 2007
Resumen
Se realiz un hemocultivo, el cual se estuvo revisando por tres das para observar
como se presenta un cultivo negativo, despus de esto se le inoculo una bacteria
problema, esta tcnica se realiz utilizando cultivos de la muestra en agares; sangre,
MacConkey y Chocolate. Donde, como resultado, se obtuvo; en el anlisis; colonias
redondas convexas, y de consistencia cremosa con una pigmento verde; esto en
agar MacConkey y, en sangre se observo colonias redondas, presentando una
hemlisis beta, y colonias blancas, redondas y convexa en chocolate.
Microscpicamente fueron bacilos gram negativos, por lo que se procedi a realizar
las pruebas bioqumicas o metablicas para determinar el tipo de microorganismo
asilado. El cual resulto ser, Pseudomona, comnmente relacionada a bacteriemias.
Introduccin
Un hemocultivo es un examen para determinar si microorganismos como bacterias,
micobacterias u hongos estn presentes en la sangre. Se coloca una muestra de
sangre en una preparacin especial de laboratorio y se incuba en un ambiente
controlado por 1 a 7 das.
Manual de bacter
UACH
En este examen es importante que la muestra sangunea no se contamine con
organismos de la piel o del equipo utilizado para preparar el examen. Se debe seguir
una tcnica estricta con antispticos para obtener y preparar la muestra.
La sangre se extrae de una vena, usualmente de la parte anterior del codo o del
dorso de la mano. El sitio de puncin se limpia con un antisptico y luego se coloca
una banda elstica alrededor del antebrazo con el fin de aplicar presin y hacer que
la vena se llene de sangre. Luego, se introduce una aguja en la vena y se recoge la
sangre en un frasco hermtico o en una jeringa. Durante el procedimiento, se retira
la banda para restablecer la circulacin y, una vez que se ha recogido la sangre, se
retira la aguja y se cubre el sitio de puncin para detener cualquier sangrado.
Se examina el cultivo por varios das en bsqueda de la presencia de
microorganismos y, si stos estn presentes, se pueden realizar otros cultivos para
identificarlos. Tambin se puede realizar una tincin de gram para clasificar el
organismo de forma que se pueda iniciar la terapia con antibiticos antes de que los
resultados del cultivo final estn disponibles. Un hemocultivo se realiza cuando hay
sospecha de infeccin en la sangre (bacteriemia o septicemia) debido a sntomas
tales como fiebre, escalofros o presin sangunea.
Pseudomonas aeruginosa El trmino Pseudomona significa 'falsa unidad', procede
del griego pseudo, que significa 'falso', y monas, que significa unidad simple. El
nombre fue usado inicialmente en la historia de la microbiologa como sinnimo de
grmenes. Aeruginosa es el nombre latino para el cardenillo u 'xido de cobre'. Esto
describe el pigmento azul verdoso bacteriano, visto en los cultivos de laboratorio " de
P. aeruginosa.Es una bacteria Gram-negativa, aerbica, con motilidad unipolar. Es
un patgeno oportunista para los humanos.
Resultado De Aprendizaje
Cultivar e identificar al microorganismo causal de una bacteriemia.
Material:
Mechero de Bunsen.
Papel estraza.
Puente de tincin.
Gradilla y piseta.
Cajas petri
Cubreboca.
Guantes de ltex.
Bata.
Reactivos:
Tincin de Gram.
Cristal violeta.
Yodo lugol.
Alcohol acetona.
Equipo:
Incubadora a 37C
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Safranina.
Aceite de inmersin.
Kovaks.
-Naftol.
KOH al 40%.
Rojo de Metilo.
Agares:
MacConkey.
Sangre.
Chocolate.
Pruebas Bioqumicas:
TSI
MIO
SIM
Citrato
Caldo de Urea
FeA
RM-VP
LIA
Caldo de Malonato
Metodologa
Toma De La Muestra
La sangre se extrae de una vena, usualmente de la parte anterior del codo o del
dorso de la mano. El sitio de puncin se limpia con un antisptico y luego se coloca
una banda elstica alrededor del antebrazo con el fin de aplicar presin y hacer que
la vena se llene de sangre. Luego, se introduce una aguja en la vena y se recoge la
sangre en un frasco hermtico o en una jeringa. Durante el procedimiento, se retira
la banda para restablecer la circulacin y, una vez que se ha recogido la sangre, se
retira la aguja y se cubre el sitio de puncin para detener cualquier sangrado.
Inoculacin De Las Botellas
Se debe descontaminar el tapn de goma antes de puncionar la botella con alcohol y
esperar que se seque, ya que el fabricante no garantiza la esterilidad de ste.
Manual de bacter
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Existen controversias respecto al cambio de aguja antes de inocular la muestra en la
botella, sin embargo un meta-anlisis reciente demuestra que el cambio de aguja
disminuye el porcentaje de contaminacin se debe tener mxima precaucin en no
tocar las paredes exteriores de la botella con la aguja.
Medios: Agar sangre, chocolate y Agar Mac Conkey.

Con la jeringa se descarga la muestra en el primer cuadrante, despus se estra en
los dems cuadrantes de modo que se puedan obtener colonias aisladas despus
del periodo de incubacin.
cepas.
Tincin de Gram.
Adems de las pruebas bioqumicas
Resultados
Pseudomona aeruginosa
Agar:
Forma
Tamao
Borde
Elevacin
Consistencia
Luz transmitida
Sangre
Chocolate
MacConkey
Redondas
Grande
Entero
Planas
Cremosa
Negativa
Redonda
Mediana
Entero
Convexa
Cremosa
Negativa
Redonda
Mediana
Entero
Planas
Cremosa
positiva
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Luz reflejada
Color
Hemlisis
Positiva
Blancas
Beta
Positiva
Blancas
--------
Morfologa
negativa
Pigmento verde
---------
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Agar Mc Conkey
Agar Sangre
Agar chocolate
Pruebas Bioqumicas
medio
TSI
Citrato
FEA
MIO
SIM
LIA
pseudomona
Gas
H2S
k/k
+
-
Movilidad
Indol
Ornitina
Movilidad
Indol
H2S
Manual de bacter
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RM-VP
RM
VP
Caldo de Urea
Caldo de Malonato
Oxidasa: positiva
Con las pruebas realizadas en este anlisis se pudo identificar a la bacteria que fue
inoculada en el hemocultivo; gracias al pigmento que produjo la bacteria en agar
Mac Conkey y a el caracterstico olor a maz se hace un diagnostico presuntivo de
que es Peudomona, este diagnostico se confirma con el montaje de pruebas
bioqumicas en donde se observa que no fermenta carbohidratos y con la prueba
de oxidasa que arroja un resultado positivo.
Conclusin
Gracias a las pruebas y medios de cultivo utilizadas en este anlisis se determina al
microorganismo capaz de crecer en un hemocultivo, el cual se identifico como una
bacteria gram negativa, no fermentadora de carbohidratos, conocida como
Pseudomona aeuruginisa
Bibliografa
http://www.eprodig.com/dermlink/Paginas/consejos_enfermedades_bacteriana.htm
http://www.msd.es/publicaciones/mmerck_hogar/seccion_18/seccion_18_201.html
http://es.wikipedia.org/wiki/Pseudomonas_aeruginosa#Patog.C3.A9nesis
Koneman. W Elmer y Co. Diagnostico microbiolgico texto y atlas. 5 edicin. Panamericana. Buenos
Aires. 2004
Manual de bacter
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Borrows William Dr. Tratado de microbiologa, Vigsima edicin. Interamericana. Mxico 1974.
Garca Rodrguez JJ. Microbiologa Mdica. Tomo II.Doyma libros. Madrid 1996.
CHIHUAHUA
Manual de bacter
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Laboratorio:
Bacteriologa Mdica
Prctica # 12
Lquido Cefalorraquideo
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNA:
Mayra Torres Gomez 190128
7mo B
11 de Mayo de 2007
Manual de bacter
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Resumen.
En esta prctica se realiz un cultivo de una muestra de Lquido Cefalorraquideo.
Para su diagnostico se sembr una porcin de la muestra en agares: Sangre,
MacConkey y Chocolate.
Se efectuo un frotis con tincion Gram, para su anlisis microscpico, observando
bacterias Gram negativas. Pasado el tiempo de incubacin se obtuvo un crecimiento
colonial que marco la pauta de la investigacin.
para saber la morfologa del posible microorganismo, y como se obtuvo crecimiento
en agar Sangre, Chocolate y MacConkey; y sabiendo que era un Gram (-) se
efectuaron las pruebas bioqumicas adecuadas para su identificacin, obtenindose
que se trataba de Proteus mirabilis.
Introduccin.
El lquido cefalorraqudeo, conocido como LCR, es un lquido claro como cristal de
roca que baa al cerebro y a la mdula espinal que circula por los ventrculos
cerebrales y el canal medular y se almacena en las cisternas cerebrales. (1)
Presenta una presin de 10-20 cm de agua, un volumen total de 150 ml, un volumen
intra ventricular de 20-30 ml, est compuesto mayoritariamente por agua, por
protenas 15-45 mg/100 ml, glucosa 50-75 mg/100 ml, cloruros 120-130 nmol/l y
leucocitos < 4-5 clulas por milmetro cbico. (2)
El lquido cefalorraqudeo puede enturbiarse por la presencia de leucocitos o la
presencia de pigmentos biliares. Numerosas enfermedades alteran su composicin y
su estudio es importante y con frecuencia determinante en las infecciones
menngeas, carcinomatosis y hemorragias. Tambin es til en el estudio de las
enfermedades desmielinizantes del sistema nervioso central o perifrico.
El lquido cefalorraqudeo tiene tres funciones vitales importantes:
1. Mantener flotante el tejido cerebral, actuando como colchn o amortiguador,
dentro de la slida bveda craneal. Por lo tanto, un golpe en la cabeza moviliza en
forma simultnea todo el encfalo, lo que hace que ninguna porcin de ste, sea
contorsionada momentneamente por el golpe.
2. Servir de vehculo para transportar los nutrientes al cerebro y eliminar los
desechos.
3. Fluir entre el crneo y la medula espinal para compensar los cambios en el
volumen de sangre intracraneal, manteniendo una presion. (la cantidad de sangre
dentro del cerebro) (5)
Existen diferentes formas de obtener una muestra de lquido cefalorraqudeo. Una
puncin lumbar, comnmente llamada puncin espinal, es el medio ms comn para
recolectar una muestra de LCR y generalmente se realiza de la siguiente manera:
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El paciente debe acostarse de lado con las rodillas encogidas hacia el

abdomen y la barbilla pegada al trax. Algunas veces, este procedimiento se
realiza con la persona sentada y doblada hacia adelante.
Despus de limpiar la espalda, el mdico inyecta anestsico local en la parte
inferior de la columna.
Se inserta la aguja espinal, generalmente entre la tercera y cuarta vrtebra
lumbar.
Una vez que se ha insertado la aguja adecuadamente, se mide la presin del
lquido espinal y se recoge la muestra.
Luego, se retira la aguja, se limpia el rea y se aplica un vendaje sobre el
sitio. El paciente debe permanecer acostado por un perodo de 20 minutos a 1
hora despus del examen. (4)
Anlisis Microbiolgico de una muestra de Lquido Cefalorraquideo, para la
determinacin de algunas enfermedades, debidas al causas de un dao en el .
lquido cefalorraquideo.
Equipo:
Incubadora a 37C

Material:
Mechero de bunsen.
Cajas de petri
Tubo de ensayo de 13x100mm.
Portaobjetos.
Puente de tincin.
Pizeta.
Papel estraza.
Muestra:
Lquido Cefalorraquideo
Reactivos:
.
Agar Chocolate
Agar MacConkey
Agar Sangre.
Cristal violeta.
Yodo lugol.
Alcohol-acetona.
Safranina.
Aceite de inmersin.
Agua oxigenada.
Manual de bacter
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Mtodos.
Toma de muestra.
El paciente debe acostarse de lado con las rodillas encogidas hacia el

abdomen y la barbilla pegada al trax. Algunas veces, este procedimiento se
realiza con la persona sentada y doblada hacia adelante.
Despus de limpiar la espalda, el mdico inyecta anestsico local en la parte
inferior de la columna.
Se inserta la aguja espinal, generalmente entre la tercera y cuarta vrtebra
lumbar.
Una vez que se ha insertado la aguja adecuadamente, se mide la presin del
lquido espinal y se recoge la muestra.
Luego, se retira la aguja, se limpia el rea y se aplica un vendaje sobre el
sitio. El paciente debe permanecer acostado por un perodo de 20 minutos a 1
hora despus del examen.
Proceder con el anlisis microbiolgico.
Reportar los resultados.
Primera sesin.
Sembrado de la muestra de Lquido Cefalorraquideo.
3.
En todos los agares (Sangre, MacConkey, Chocolate), tomar el asa de
nicromio con la muestra que se encuentra en eltubo de ensaye, y se descarga en
una de los cuadrantes, despus se procede a estriar con el asa de nicromio con el
fin de obtener colonias aisladas.
Incubar a 37oC por 24horas.
El agar chocolate y sangre se incuban en condiciones de carboxifilia.
Segunda sesin.
1.
diferentes agares.
2.
Realizar las pruebas bioqumicas, dependiendo del resultado obtenido en la
Tincin de Gram. Incubar las pruebas y leer a las 24horas.
3.
Reportar los resultados obtenidos, para la determinacin de la cepa problema.
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Resultados.
Forma
Tamao
Elevacin
Borde
Luz transmitida
Color
Consistencia
Hemlisis
Agar
Sangre
Redondas
Medianas
Convexa
Entero
No
Blanca
Cremosa
No present
Agar
MacConkey
Redondas
Medianas
Convexa
Entero
no
Grises
Cremosa
-----
Agar
Chocolate
Redondas
Medianas
Convexa
Entero
no
Blancas
Cremosa
-----
Pruebas Bioqumicas
medio
TSI
Citrato
FEA
MIO
SIM
Proteus mirabilis
Gas
H2S
A/A
Movilidad
Indol
Ornitina
Movilidad
Indol
LIA
H2S
+
RM-VP
Caldo de Urea
Caldo de Malonato
RM
VP
+
-
Manual de bacter
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Agar MacConkey
Proteus mirabilis
Catalasa: positiva
Agar Sangre
Agar Chocolate
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Discusin.
En el estudio realizado a la muestra de Lquido Cefalorraquideo se obtuvieron
resultados con un menor margen de error en la comprobacin del agente bacteriano
que resulto; siendo este Proteus mirabilis. Comprobandos esta hipotesis por medio
de las pruebas confirmatorias para descartar otras posibilidades, entre ellas se
encuentran la utilizacin de la urea, ya que este microorganismo tiene la capacidad
de la reduccin de nitritos muy efectiva.
Conclusin.
El aislamiento de Proteus mirabilis, a partir de la muestra de Lquido
Cefalorraqudeo tiene importancia diagnstica, ya que no es considerada como
parte de la flora normal de esta porcin de cercana de la columna vertebral,
Bibliografa.
23.
24.
edicin. Mxico.
25.
Mxico., pgs. 422-427.

26.
http://www.umm.edu/esp_ency/article/003428.htm
27.
http://es.wikipedia.org/wiki/L%C3%ADquido_cefalorraqu%C3%ADdeo
Fecha de consulta de las pginas de Internet: 9 de Mayo de 2007
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MAYRA TORRES GMEZ

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

Norma Herrera Daz

La fiebre tifoidea es una infeccin bacteriana caracterizada por diarrea,

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

Norma Herrera Daz

Asa de nicromio punta recta.

Asa de nicromio punta redonda.

Equipo de proteccin personal:

Solucin salina fisiolgica isotnica al 0.85%.

Cloruro Frrico al 10%

Colocar una gota de solucin salina en un portaobjetos.

Tomar una colonia con el asa recta estril y homogenizarla en el portaobjetos,

Fijar a la flama del mechero pasando tres veces el portaobjetos de la punta

Colocar el portaobjetos en el puente de tincin y aadir cristal violeta, dejar

Enjuagar y adicionar yodo lugol, esperar 1 minuto y enjuagar.

Aadir alcohol acetona y dejar actuar de 10-15 seg., enjuagar.

Adicionar safranina, esperar un minuto y enjuagar y secar con papel estraza.

Bacilos cortos, Gram negativos.

Mviles, por medio de flagelos polares.

Finegold, S. Martin, W. (2002). Bailey & Scout Diagnostico Microbiolgico. Ed.

Mdica Panamericana. 11va edicin. Mxico.

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

Norma Herrera Daz

Mayra Torres Gmez 190128

Enterobacter cloacae es una bacteria, gram negativa en forma de bacilo. Es

Equipo de proteccin personal:

Solucin salina fisiolgica isotnica al 0.85%.

Cloruro Frrico al 10%

4. Pasado el tiempo de incubacin, revisar los medios de cultivo, realizando el

Bacilos gram negativos, cortos, en arreglo simple

Bacilos gram negativos, cortos, simples

Bacilos gram negativos, cortos, simples

Bacilos gram negativos, medianos, simples

Cocos en cadena, gram positivos.

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

Norma Herrera Daz

Eloy Ricardo Borjas Senz 175211

Asa de nicromio calibrada.

Asa de nicromio punta redonda.

Solucin salina fisiolgica isotnica al 0.85%.

Cloruro Frrico al 10%

El paciente debe tener como mnimo de tres a cuatro horas de retencin de

Mtodo de conteo en placa o recuento de colonias. Introducido para evitar

Se homogeneiza la muestra mediante agitacin.

Se preparan diluciones al 1:1000 y 1:10 000, a partir de la dilucin al 1:100.

Se deposita 1 ml. de cada dilucin en placas de Petri esterilizadas, sobre las

Se incuban todas las siembras a 37 durante 24 a 48 horas.

Mtodo del asa calibrada. Esta estimacin cuantitativa consiste en sembrar

No hubo desarrollo microbiano.

Menos de 10 000 colonias por ml.

Entre 10 000 y 100 000 colonias por ml.

Ms de 100 000 colonias por ml.

Bacilos cortos, Gram negativos y en arreglo simple o par.

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

Norma Herrera Daz

Microscopio ptico de campo claro

Equipo de seguridad (bata para el laboratorio, guantes de ltex, lentes de

Asa de nicromio circular y recta estriles

Tubos de ensayo de 13x100 mm con tapa de rosca

Frasco para carboxifilia

Agar sangre de carnero

Tubo germinativo (con 1 mL De plasma)