FACULATEA DE BIOLOGIE
SPECIALIZAREA: BIOTEHNOLOGII MICROBIENE SI
CELULARE MASTER, AN II
TRICHOTECENELE SI FUMONIZINELE
METABOLITI SECUNDARI
FUNGICI
Realizat de:
Burueana Cristina-Liliana
CUPRINS
1.
INTRODUCERE
2.
FUMONIZINELE
2.1.
Descrierea fumonizinelor
2.2.
Toxicitatea fumonizinelor
2.2.1.
2.2.2.
2.2.3.
2.2.4.
2.3.
2.3.1.
Moniliformina
2.3.2.
Luteoskirina si eritroskirina
2.3.3.
Micotoxinele tremorgene
2.3.3.1. Citreoviridina
2.3.3.2. Toxinele derivate din triptofan
2.3.3.3. Lolitremul
2.3.3.4. Paspalinina
2.3.3.5. Aflatremul
2.3.3.6. Roquefortina
2.3.3.7. Viridicatumtoxina
2.3.4.
Acidul 3-nitropropionic
3. TRICHOTECENELE
3.1.
Descrierea trichotecenelor
3.2.
Toxicitatea trichotecenelor
3.2.1.
3.2.2.
3.2.3.
3.3.
Reprezentanti ai trichotecenelor
4.
5.
5.1.
a.
Fumonizinele
b.
Trichotecenele
5.2.
a.
Fumonizinele
b.
Trichotecenele
6.
produsele alimentare
6.1.
ELISA
6.2.
6.3.
6.4.
6.5.
TRICHOTECENELE SI FUMONIZINELE
METABOLITI SECUNDARI FUNGICI
1. INTRODUCERE
Trichotecenele si fumonizinele fac parte din categoria micotoxinelor si sunt metaboliti
secundari toxici sintetizati de mucegaiuri care pot afecta grav sanatatea omului si a animalelor.
Notiunea de metabolit secundar se refera la acei compusi rezultati din metabolismul secundar
al ciupercilor, care nu sunt necesari dezvoltarii microorganismului, dar sunt o consecinta importanta
a procesului de crestere, formandu-se in stadiile finale ale fazei de crestere exponentiala a ciupercii.
Acesti compusi secundari, toxici, sunt cunoscuti sub denumirea generica de micotoxine si se
considera ca au aparut in decursul procesului evolutiei filogenetice a micromicetelor ca un mijloc de
aparare al acestora. Spre deosebire de metabolismul primar fundamental, acelasi pentru toate fiintele
vii, metabolismul secundar depinde de specie si este foarte important in cazul mucegaiurilor,
conducand la sinteza unui foarte mare numar de molecule printre care se numara si micotoxinele.
Micotoxinele sunt elaborate in cele mai diverse substraturi (cereale, masa foliacee a plantelor aflate
in faza de vegetatie, inclusiv in plantele medicinale, boabe de leguminoase, fructe, condimente etc);
ele pot fi prezente in produse de origine animala (lapte, branzeturi fermentate, oua, carne) sub forma
de reziduuri provenite de la animale hranite cu furaje contaminate sau prin contaminarea ulterioara a
acestor produse cu micromicete toxinogene. 1
Contaminarea cu mucegaiuri, dezvoltarea lor si producerea de micotoxine poate avea loc in
camp, in timpul depozitarii sau in ambele perioade. In timpul depozitarii cerealelor are loc o pierdere
a continutului de proteine, aminoacizi, vitamine etc, fapt ce conduce la scaderea valorii nutritive a
boabelor. In aceste conditii ele devin mai vulnerabile atacului fungilor si insectelor.
Prezenta mucegaiurilor nu inseamna neaparat sinteza de micotoxine, producerea acestora fiind
conditionata de mai multi factori fizici si chimici cum sunt schimbari de temperatura, umiditate,
aerare, prezenta agentilor agresivi si de stres. Mucegaiurile micotoxinogene, care se dezvolta in camp
(necesita un grad mare de umiditate) apartin genurilor Alternaria, Fusarium, Cladosporium, in timp
ce micoflora de stocaj (care necesita mai putina umezeala) este reprezentata, in principal, de genurile
Aspergillus si Penicillium. Conditiile de contaminare a unui substrat de catre o ciuperca si elaborarea
micotoxinelor sunt multiple si complexe. Cunoasterea factorilor care intervin in dezvoltarea fungilor
este esentiala pentru intelegerea mecanismelor contaminarii si poate usura prevenirea elaborarii
micotoxinelor.
www.ibna.ro
2. FUMONIZINELE
2.1. Descrierea fumonizinelor
Fumonizinele sunt cele mai recent caracterizate micotoxine produse de Fusarium moniliforme.
Sunt toxine solubile in apa si stabile la temperaturi inalte.
Cea mai comuna dintre fumonizine este fumonizina B1. (fig.1)
Fumonizinele din grupul B (B1, B2, B3, B4) sunt contaminantii cei mai abundenti ai furajelor
si au cea mai ridicata toxicitate in special pentru animalele de laborator. Fumonizinele sunt
sintetizate prin condensarea aminoacidului alanina intr-un derivat-acetat precursor.
Cele mai sensibile animale la aceste micotoxine sunt caii si porcii. La cai, magari si catari,
fumonizinele sunt cauza leucoencefalomalaciei ecvine, la porci produc edem pulmonar, iar la soareci
cancer hepatic. Aceste micotoxine afecteaza si omul, provocand cancer la esofag (cazuri descoperite
in China si Africa de Sud).
Ciupercile ce produc fumonizine apartin genului Fusarium: F. moliniforme, F. ploriferatum, F.
napiforme.
Fumonizinele au o structura asemanatoare cu lipidul sfingozina din creier. Aceste micotoxine
perturba metabolismul sfingolipidelor si au astfel actiune citotoxica si carcinogenica.
Fumonizinele sunt inhibitori ai sintezei proteinelor, inducand aberatii cromozomale in
hepatocite, ceeea ce conduce la efectul hepatocarcinogen.
La porcine, faza de toxicitate acuta a FB (fumonizine din grupul B) induce edem pulmonar.
Edemul pulmonar este indus de ingerarea zilnica a 4,5-6,3 mg FB/kg greutate corporala. In unele
cazuri, majoritatea intalnite in USA, edemul pulmonar a fost insotit de hepatoxicitate. Estimari ale
riscului intoxicarii cu FB realizate de Comitetul Stiintific pentru Alimentatie (Scientific Committee
on Food-SCF) au stabilit ca nivelul sau concentratia de FB la care nu a fost observat niciun efect
(NOAEL) este pentru porci < 4,5 mg FB/kg corp; pentru o expunere de scurta durata, 4,5 mg FB/kg
corp este nivelul la care se produce edemul pulmonar.2
www.ibna.ro
concentratii subletale de FB1 (100 mg/kg hrana) timp de 17 zile. Un alt studiu mai recent al lui
Gbore (2009) a revelat ca hrana contaminata cu FB (1) a intarziat maturarea sexuala la purceii in
crestere si a sugerat ca expunerea la furaje contaminate cu concentratii mai mari de 5 mg FB1/kg ar
trebui evitata pentru a obtine performante reproductive optime. Datele privind alte specii de animale
(sobolan, iepure si bovine) au confirmat absenta transferului placental si nivel scazut in lapte.3
3
4
www.ibna.ro
2.3.3.1. Citreoviridina
Este o toxina polienica din Penicillium citreonigrum, care produce boala cardiaca beri-beri la
om. A fost izolata din orez infectat cu P. citreonigrum.
Actioneaza asupra sistemului nervos central. Produce paralizia animalelor de laborator
(soareci), urmata de convulsii si oprirea respiratiei. Inhiba ATP-aza mitocondriala. La lumina, toxina
se izomerizeaza usor in izocitreoviridina.
2.3.3.3. Lolitremul
Este o micotoxina produsa de Acremonium lolii, ce traieste endofitic in Lolium perenne, mai
ales in Noua Zeelanda si afecteaza oile din aceasta tara. (fig.2.)
Provenirea micotoxinei cauzate de lolitrem se face prin tratarea la temperaturi ridicate a
semintelor de raigras, actiune prin care ciuperca cu dezvoltare seminala este distrusa, iar semintele
nu sunt prejudiciate sau prin cultivarea de plante pe care nu se dezvolta suse toxigene ale ciupercii.
2.3.3.4. Paspalinina
Este un indol-diterpenoid, produs de Penicillium paxilii, ca si paxilina. Ambele micotoxine sunt
apropiate de alcaloizii paspalicina si paspalina, izolati din Claviceps paspali. Acesti metaboliti se
formeaza dintr-o unitate de triptofan si cateva unitati de mevalonat.
2.3.3.5. Aflatremul
Este un compus indolic, metabolit secundar produs de Aspergillus fumigatum, care s-a dovedit
a avea actiune insecticida fata de specii de coleoptere si lepidoptere.
2.3.3.6. Roquefortina
Este produsa de Penicillium roquefortii, in cursul fermentatiei branzei care-i poarta numele, de
culoare albastra. Roquefortina este biogenetic in relatie cu oxalina, alcaloid secretat de unele tulpini
de Penicillium oxalicum.
Oxalina - contine triptofan si histidina ca unitati principale de baza, legate in cele mai diferite
moduri. In cursul aceluiasi fenomen fermentativ sunt produse o toxina (toxina PR) si doi alcaloizi
(roquefortina si isofumigaclavina).
Roquefortina are proprietati neurotoxice. A fost detectata la caini, ca urmare a consumului de
hrana mucegaita.
Toxina PR are toxicitate redusa pentru om. Se produce mai ales in conditii fermentative cu
mediul bogat in zaharoza (15%), cu pH constant (4,5), cand miceliul nu este imersat in mediu,
ramanand la suprafata acestuia.
Micotoxinele roquefortina si toxina PR sunt din punct de vedere chimic dioxipiperazine din
triptofan si histidina. Pentru acestea, limitele admise sunt de 7mg/kg.
2.3.3.7. Viridicatumtoxina
Este produsa de fungul Penicillium viridicatum. Este un pigment galben-deschis, toxic pentru
animalele de laborator, producand necroza tubilor renali si a hepatocitelor, ca si degenerarea
miocardului.
3. TRICHOTECENELE
3.1. Descrierea trichotecenelor
Trichotecenele sunt o familie mare de micotoxine, sesquiterpene tetraciclice ce sunt inhibitori
ai sintezei proteinelor si imunosupresori potentiali.
Clasificarea trichotecenelor cuprinde patru grupe chimice:
a) Grupa A care are un grup functional, altul decat cetona, la C-8. Este grupa ce cuprinde
toxina T2, neosolaniol produse de speciile de Fusarium: F. tricinctum, F. equiseti, etc.
b) Grupa B cu o functie cetona la C-8. Cuprinde deoxinivalenolul (DON), nivalenolul,
fusarenona X. Sunt produse de F. graminearum si F. culmorum.
c) Grupa C cu trichotecene macrociclice
d) Grupa D trichotecene cu inel macrociclic intre C-4 si C-5, cu doua legaturi esterice. Sunt
produse de micromicetele Myrothecium sp. Dintre aceste micotoxine fac parte: roridina,
satratoxina, verucarina, etc.
Sindromurile cauzate de trichotecene includ toxiinfectia alimentara aleukia, fuzariotoxicozele
si toxicozele porumbului mucegait. Porcinele si omul sunt foarte sensibile la trichotecene.
Trichotecenele sunt produse de multe ciuperci in acelasi timp, de aceea e destul de dificil de
identificat toxina cauzativa a unor astfel de maladii. Ele au fost puse in evidenta in urma unor
incidente majore (1970, in Japonia) cand prin consumul de grau si orz infestat cu Fusarium s-au
produs pagube foarte mari in efectivele de animale, iar din probele de nutreturi au fost izolate
nivalenolul si deoxinivalenolul.
Inca din anul 1920, in Statele Unite ale Americii si Germania era cunoscut faptul ca cerealele
infestate cu Fusarium graminearum cauzeaza fenomene de refuz al ratiei alimentare si de voma la
porci. Desi DON este considerat unul dintre trichotecenele care determina cel mai putin toxicitate
acuta, intoxicatia cu DON se manifesta prin refuzul alimentelor, greata, varsaturi si tulburari
digestive. Efectele toxice depind de specie, parametri individuali (sex, varsta, greutate corporala etc)
precum si de timpul de expunere. Porcii sunt animalele de ferma cele mai sensibile la actiunea DON,
o doza de 12g DON/kg nutret provoaca refuzul alimentului, masculii fiind mai sensibili decat
femelele.
Putine studii sunt consacrate efectelor DON asupra reproductiei. Se cunosc doar 5 studii
efectuate pe scroafe primipare in perioada de gestatie propriu zisa, unul pana la a 52- a zi de gestatie,
altul intre a 91 a zi de gestatie si fatare si ultimile trei in timpul ciclului complet de gestatie, studii in
care nu a fost constatat niciun efect pana la 6,2 mg de DON/kg de furaj in afara unui consum de
hrana scazut. Un efect similar se produce in timpul lactatiei, iar in laptele scroafelor au fost gasite
doar urme de toxina. La porci (23 kg) care au consumat timp de 7 saptamani hrana continand
aproximativ 4mg de DON/kg, examenul tubilor seminiferi la masculi sau foliculilor ovarieni la
femele nu au relevat niciun efect asupra dezvoltarii lor sexuale.
3,5 ppm de DON tinde sa reduca greutatea si lungimea fetusului de 52 de zile, se pare ca
hranirea scroafelor cu un furaj contaminat cu DON (5,7 ppm) nu a afectat efectivul si greutatea
purceilor vii la nastere, supravietuirea lor si viteza lor de crestere pana la intarcare, dar creste
numarul de purcei nascuti morti.
In general, pasarile sunt mai rezistente la trichotecene decat porcinele, dar toxina T2 si DAS
sunt mai toxice pentru pasari decat pentru porcine. Ambele toxine produc leziuni orale la doze de 1
ppm si reduc ratia alimentara si sporul in greutate la doza de 4 ppm. Rumegatoarele sunt mai
rezistente la trichotecene.
Trichotecenele pot produce si toxicoza acuta. Cel mai conun simptom este scaderea in
greutate a animalelor afectate. La porcine, primul simptom al toxicozei DON consta in scaderea
consumului de furaje si reducerea sporului de greutate. Daca animalul consuma in continuare furaje
contaminate, simptomele pot fi: voma, diaree, pierderea apetitului, letargie, inflamarea si necroza
pielii, tremuraturi, afectiuni ale tesuturilor laringofarigiene, hemoragie intestinala modificari ce duc
la moarte. Trichotecenele sunt imunosupresive, astfel ca animalele care le consuma devin mai
sensibile si la alte boli. La om, produc osteoartroza deformanta, dezvoltarea anormala a scheletului,
leucopenie, scaderea masei musculare.
In anii 1942-1947 in ex-URSS, Coreea de Nord si China s-a manifestat puternic aleukia
alimentara, toxicoza indusa de catre trichotecenele din hrana contaminata cu aceste substante.
Trichotecenele sunt produse de fungii: Fusarium graminearum, F.culmorum, F. poae, F.
avenaceum, F. tricinctum, F.equiseti. Alti fungi ce produc trichotecene sunt cele din genurile:
Cephalosporium, Trichotecium, Trichoderma, Myrothecium (roridine, verucarine), Nigrospora,
Cladosporium.
F.graminearum cu teleomorfa Gibberella zeae, producatorul major de DON cauzeaza head
scab of wheat.
DON este asociat cu boabele recoltate verzi si depozitate la temperaturi moderate sau
ridicate.Producerea de DON in porumbul recoltat este favorizata de umiditatea boabelor de 20% sau
mai mare si de temperaturi de 21-29C. Producerea de DON este inhibata numai daca boabele sunt
uscate, umiditatea fiind sub valori de 15%.
DON determina reducerea sporului in greutate si reducerea hranirii, mai ales la porcine, la
doze mai mici de 1-3 ppm. La doze peste 10 ppm se produce emeza si refuzul hranei. Doza letala
(DL50) la sobolani este 4 mg/kg. Limitele recomandate sunt: 10 ppm la bovine si pasari, 5 ppm la
porcine si 5 ppm pentru alte animale. Revenirea la micotoxicoza cauzata de DON se produce prin
indepartarea sursei de hrana contaminata.
DON este rapid metabolizat de animale, astfel ca reziduurile din carne se acumuleaza in carne
la nivele care pot afecta numai la intamplare sanatatea umana.
3.3.5. Trichotoxina A
A fost izolata din porumb castrat din Texas, puternic afectat cu Helminthosporium maydis si
cu Trichoderma viride. Trichotoxina A este o amida.
Prin injectarea micotoxinei intraperitoneal la soareci, in doze intre 18 si 24 g, animalele au
devenit letargice, ulterior survenind moartea dupa o ora pana la 3 zile (in functie de doza). Prin
administrarea orala la soareci, trichotoxina A a fost mai putin toxica.
b. Trichotecenele
DON
Cereale neprocesate altele
decat graul dur, ovazul si
porumbul
Grau dur si ovaz neprocesate
Porumb neprelucrat
Cereale destinate consumului
uman direct
Paine (inclusiv produse de
panificatie)
www.ibna.ro
curs de dezvoltare constau din alimente fermentate. LAB sunt bine cunoscute ca si culturi starter in
fabricarea produselor lactate cum ar fi iaurtul, untul, branza. Coexistenta LAB si a fungilor este de
asemenea essentiala pentru sucesul unor aplicatii biotehnologice, ex. aluatul dospit unde raportul
LAB/drojdii este de 100:1. Traditia de a utiliza LAB in hrana combinata cu cunostiintele recente
asupra efectului pozitiv asupra sanatatii determinate de ingestia de LAB, au sugerat ca ele reprezinta
o sursa alternativa la conservantii chimici. Studii recente au aratat ca LAB pot fi implicate si in
dimunarea concentratiei de micotoxine.
Ideea de a decontamina cerealele prin fermentare a fost initiata la inceputul 1980. Insilozarea
este o tehnica traditionala pentru conservarea furajelor prin fermentare acido-lactica. Fungii din
materialul insilozat pot produce micotoxine in conditii aerobe. Oricum, micotoxinele pot fi
deasemenea degradate in cursul insilozarii.
Se pare ca diminuarea concentratiei de micotoxine provine din scaderea nutrientilor,
determinand o reducere a sintezei de micotoxine sub cea a degradarii non-enzimatice. Mai mult, ei
au emis ipoteza ca degradarea enzimatica realizata de organismele producatoare in conditii de
infometare poate deasemenea contribui la degradare. In ultima perioada s-a realizat un numar mare
de studii care au investigat rolul bacteriilor acido-lactice (LAB) in reducerea concentratiei de
micotoxine.
a. Fumonizinele
Alte studii au aratat ca LAB sunt capabile sa lege fumonizinele B1 si B2 (FB1, FB2) in
tractusul gastrointestinal putand astfel contribui la decresterea iodisponibilitatii efectelor toxice
asupra animalelor de ferma si oamenilor. Niderkorn et al. (2006) au fost primii care au examinat
interactiile in vitro intre LAB si fumonisine. Ei au evaluat abilitatea a 29 de tulpini de LAB si a trei
tulpini de Propionibacterium de a inlatura fumonisina B1 si B2 din mediul MRS acidifiat (pH 4.0).
Niderkorn si colab. a demostrat ca fumonisina B1 nu a fost inlaturata in aceeasi masura ca
fumonisina B2. Majoritatea tulpinilor au fost capabile sa inlature ambele toxine, dar au fost
observate diferente considerabile intre aceste tulpini. Tulpinile de Propionibacterium au fost mai
putin eficiente in legarea toxinei decat LAB. Eficienta legarii a fost afectata de pH, intrucat pana la
pH7, LAB au fost incapabile sa lege fumonisinele B1 si B2.6
Mokoena si colab., (2005) au testat efectul fermentatiei asupra porumbului contaminat cu
fumonisina B1 si zearalenona. Dupa 4 zile, citotoxicitatea potentiala a extractelor fermentate a fost
investigata utilizand o linie de carcinoma de esofag uman si s-a observat o descrestere semnificativa
6
www.ibna.ro
de 67% si respective 75%. Autorii afirma ca fermentatia produsa de bacteriile acido-lactice poate
reduce semnificativ concentratia de micotoxine in porumb.
Alti autori considera ca fumonisinele sunt neafectate de procesele de fermentatie si procesare
enzimatica a alimentelor. Astfel Bothast si colab., (1992) a constatat ca fumonizina B1 rezista
procesului de fermentare al porumbului.7
b. Trichotecenele
El-Nezami si colab., (2002c) au investigat capacitatea bacteriilor Lb. rhamnosus GG, Lb.
rhamnosus LC-705 si Propionibacterium freudenreichii ssp. shermanii JS de a lega sapte
trichotecene: deoxinivalenol (DON), 3-acetildeoxinivalenol (3-AcDON), nivalenol (NIV), fusarenon
(FX), diacetoxiscirpenol (DAS), toxina T-2 (T-2) si toxina HT-2 (TH-2). Autorii au demonstrat ca
eficienta bacteriilor acido-lactice sa inlature trichotecenele (20 ?g/ml) variaza in functie de tulpina
bacteriana si de toxina. De fapt, formele viabile sau omorate prin caldura de Lb. rhamnosus GG au
avut o eficienta mai crescuta fata de Lb. rhamnosus LC-705. Cea mai eficienta tulpina a fost capabila
sa lege patru din cele sapte toxine testate. Procentul de toxine legate a variat intre 18% si 93%. 8
Niciuna din tulpinile testate nu a fost capabila sa lege 3-AcDON. Mai mult, toxina HT-2 a fost legata
doar de celulele non-viabile de Lb. rhamnosus GG si LC-705.
Cheng si colab. (2010), au ales din 59 de tulpini probiotice, doua tulpini de Bacillus care
poseda capacitatea de a detoxifica DON. Capacitatea de detoxificare a atins nivelul maxim cand
supernatantul de cultura al acestor bacterii a fost incubat la 370C, 180 rpm timp de 12 h, rata de
detoxificare fiind de 98% si respectiv 71.4%. Aceasta rata scade odata cu cresterea temperaturii si
potentialul de detoxificare este nul la o temperatura de 1000C. Autorii afirma ca mecanismul de
detoxificare al DON este legat de unele substante termosenzitive din supernatantul acestor bacili.
Diferite tulpini de bacterii acido- lactice (LAB) sunt capabile sa lege DON, dar modul de
actiune, nu pare a fi biodegradarea, intrucat nu a fost observata prezenta niciunui derivat al toxinei,
iar indepartarea nu a fost afectata la bacteriile nonviabile. Capacitatea de legare a tulpinilor selectate
poate fi utilizata pentru a descreste biodisponibilitatea toxinelor in furajele contaminate.
Pe de alta parte, DON nu a fost modificat in cursul procesului de fermentatie si cantitatea
originala a fost regasita in bere.
www.ibna.ro
a. Fumonizinele
Exista cateva studii asupra efectului fermentatiei berii si vinului asupra concentratiei de
fumonisine. Scott si Lawrence (1995) au analizat 41 de beri canadiene pentru continutul in
fumonisina. Majoritatea probelor au continut cantitati foarte mici de fumonisina, doar patru probe au
continut mai mult de 2 ng/ ml de fumonizina B1 si 7,6 ng/ mL fumonizina B2. Prezenta
fumonizinelor in berea spaniola a fost analizata de Torres si colab. (1995). Fumonizina a fost
detectata in 43.8% din probele analizate la concentratii mici (4.76 ng/mL) care este evaluata ca
nefiind toxica.
Intr-un alt experiment, Scott si colab. (1995) au studiat rolul fermentatiei asupra continutului
de fumonizina B1 si B2. Dupa 8 zile de fermentatie, tulpinile de Saccharomyces utilizate, au
determinat o scadere de 28% si 17% pentru fumonizina B1, respectiv fumonisina B2. Mananoligozaharidele derivate din celulele de S. cerevisiae au demonstrat o mare capacitate de legare a
fumonisinei B1.
b. Trichotecenele
puilor expusi la ochratoxina si toxina T-2, pe langa protectia oferita fata de aflatoxina si reduce
efectele toxice ale fusariotoxinelor la cabaline.
Efectele potentiale ale fermentarii etanolice realizate de catre drojdii asura fusariotoxinelor au
fost studiate de Flesch si Voight-Scheuerman (1994) care au studiat efectul fermentatiei alcoolice a
mustului asupra concentratiei de trichotecene. Au fost identificati derivati care nu au continut grupul
epoxid, sugerand prezenta unei epihidroxilaze de drojdie. A fost de asemenea sugerat faptul ca
drojdia produce probabil ligaze si de asemenea keto-enol tautomeraza. Ulterior a fost stabilit faptul
ca o cantitate semnificativa de micotoxine (aproximativ 20%) a fost preluata de drojdie. Intrucat
inelul 12, 13-epoxid al acestor compusi este responsabil de toxicitatea lor, o de-epoxidare produsa de
enzime specifice (de-epoxidaze) este responsabila pentru pierderea semnificativa a toxicitatii.
6.1. ELISA
Este o metoda imunoenzimatica de determinare a micotoxinelor.
Principiul metodei ELISA se bazeaz pe reacia antigen - anticorp.
Godeurile de microtitrare sunt acoperite cu anticorpi captura directionati impotriva
anticorpilor anti-micotoxina. In fiecare godeu se adauga conjugatul enzimatic si anticorpii antimicotoxina.
Micotoxina libera si conjugatul enzimatic concureaza pentru siturile de legare ale anticorpilor
de acoperire ale godeurilor (metoda imunoenzimatica competitiva). Conjugatul enzimatic nelegat
este indepartat in faza de spalare. Se adauga substratul/cromogen, observandu-se virarea culorii de
la rosu la albastru. Adaugarea solutiei de stopare a reactiei determina modificarea culorii albastre in
galben.
Citirea probelor se realizeaz la 450 nm. Absorbana este invers proporionala cu concentratia
micotoxinei din proba.
a. Avantaje:
Sensibilitate ridicata
Nu necesita specialisti
b. Dezavantaje:
Compuii eluati din coloan trec printr-un detector (fluorescenta sau ultraviolete), iar
detectorul determina cantitatea compusilor specifici prezenti in proba analizata.
a. Avantaje:
o Sensibilitate ridicata
o Selectivitate ridicata
o Repetabilitate ridicata
o Analiza rapida
b. Dezavantaje:
o Costisitor
o Necesita specialisti
Teste Dipstick
7. CONCLUZII
www.innofoodsee.eu
DON este cel mai cunoscut si frecvent contaminant al cerealelor si produselor cerealiere.
Prezenta in cereale si furaje reprezinta mai mult de 90% din totalul probelor si este un indicator
potential al contaminarii cu alte micotoxine.
Acesta a fost detectat in hrisca, floricele de porumb, sorg, triticale, si alte produse alimentare,
inclusiv faina, paine, cereale pentru micul dejun, fidea, alimente pentru sugari.
La animale, DON afecteaza sistemul imun si modifica multi parametri sanguini, in plus este un
important iritant gastrointestinal. Nu exista indicii in privinta unor proprietati carcinogene sau
mutagene.
In concentratii mici in hrana, DON reduce cresterea, consumul de hrana, n timp ce dozele
acute induc varsaturi (emeza).
Efectele toxice majore produse de DON la mamifere produc: dermatonecroza, gastroenterita,
refuzul hranei, coagulopatie si imunosupresie.
DON nu constituie o amenintare importanta pentru sanatatea consumatorilor. Efecte: diaree,
dureri abdominale, dureri de cap, ameteli, febra, greata, varsaturi.
Fumonisinele au fost izolate din speciile Fusarium: F. moniliforme sheldon (veticillioides), F.
proliferatum, F. nopiforme si F. Mygamar
Speciile Fusarium ataca mai ales porumbul, graul, orzul si orezul
Fumonizine cu efect toxic asupra organismului uman sunt urmatoarele: FB1, FB2, FB3 si FB4
Fumonizina B1 induce cancerul primar (carcinom esofagian - Africa de Sud regiunea
Transkei si China) la om, iar la animalele domestice cauzeaza diferite boli specifice acestora (edem
pulmonar la porcine, encefalomalacie la cabaline).
Edemul pulmonar la suine apare la concentraii mari (175 ppm). Nivelurile de sub 12 ppm
induc disfuncii hepatice.
BIBLIOGRAFIE / WEBOGRAFIE
3. www. innofoodsee.eu