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aireacin (concentracin de oxgeno en el

gas, solubilidad del oxgeno). La limitacin


de oxgeno se refleja en la fermentacin
con Lactococcus lactis cepa IBUN 34.1, en
que presenta una baja disponibilidad de
Evaluacin de la transferencia de

oxgeno desde muy temprano en la fase

oxgeno en cultivos con lactococcus lactis


empleando un sistema de fermentacin
con aireacin externa

exponencial del cultivo. Para superar estas


limitaciones se dise y desarroll un
sistema de suministro de oxgeno de alta
tasa de transferencia, consistente en un

Evaluating oxygen transfer in a

sistema de fermentacin con aireacin

Lactococcus lactis cultures using an

externa (SFAE), el cual es comparado en

external aeration fermentation system


(EAFS)

fermentador

con

dos

En este trabajo se evala la operacin del

En fermentaciones aerobias el oxgeno,


como aceptor terminal de electrones en el
proceso de respiracin, comnmente se
constituye en limitante debido entre otros
factores al diseo del biorreactor (factores
a
de

las
los

condiciones

de

fermentadores

(condiciones ambientales requeridas en el


cultivo, potencia transferida al cultivo por
el sistema de agitacin, propiedades del
medio lquido), demanda de oxgeno por
parte del microorganismo, sistema de

dotado

difusor interno.

RESUMEN

operacin

agitado

turbinas tipo Rushton y aireacin por

Andrea Soler Gustavo Buitrago H

geomtricos),

este trabajo con el sistema tradicional de

Ingeniera qumica Msc., Instituto de


Biotecnologa, Universidad Nacional de
Colombia. apsolerg@unal.edu.co
*
Ingeniero qumico Msc., Instituto de
Biotecnologa, Universidad Nacional de
Colombia. gbuitragoh@unal.edu.co

SFAE, se seleccionan y estudian algunas


variables operacionales y su efecto sobre la
transferencia de oxgeno gas-lquido. Los
resultados indican que las variables que
tienen

efecto

coeficiente

significativo

volumtrico

sobre
global

el
de

transferencia de masa kLa son la agitacin


y el flujo de medio de cultivo que circula
por el aireador externo denominado flujo
de recirculacin. Los valores de kLa
obtenidos indican que con el fermentador
convencional con aireacin interna el
mayor valor de kLa alcanzado fue de 40,68
(h-1), en tanto que con el SFAE se
alcanzaron valores de 63,18 (h-1).

Palabras clave: biorreactores, kLa,

and culture medium flow through the

transferencia de oxgeno, fermentaciones

aerator (called external recirculation flow)

aerbicas, transferencia de masa gas-

were the variables having the main effect

lquido.

on

overall

volumetric

mass

transfer

coefficient (kLa). The highest kLa value in


ABSTRACT

the conventional bioreactor having internal


aeration was 40.68 kLa (h-1), while the

In

aerobic

fermentations,

oxygen

as

EAFS reached 90 (h-1).

terminal electron acceptor in respiration


process, is commonly a limiting due to

Key words: Bioreactor, kLa, oxygen

factors like its low solubility in aqueous

transfer, aerobic fermentation, gasliquid

solutions, bioreactors geometric factors

mass transfer.

and operating characteristics, liquid media


properties, oxygen concentration in gas
supply, microorganisms characteristics,

INTRODUCCIN

environmental culture conditions, power


supply by agitation system, etc. Oxygen

En cultivos con Lactococcus lactis cepa

limitation is present in cultures using the

IBUN 34.1 se presenta limitacin de

IBUN 34.1 Lactococcus lactis strain where

oxgeno (Vanegas, 2006; Galaction et al.,

oxygen availability is low some minutes

2004) a las condiciones de operacin que

after the exponential phase starts. A high

proveen fermentadores convencionales. En

transfer rate oxygen supply system was

estos

thus

such

volumtrico global de transferencia de

limitations; it consisted of an external

masa (kLa) es el parmetro de mayor

aeration

(EAFS)

relevancia en el diseo y la operacin,

which was compared in this work with a

dependiendo de una gran cantidad de

conventional

fermenter

factores, por ejemplo, de la velocidad de

equipped with two Rushton turbines and

agitacin que modifica el rgimen de

internal diffuser aeration flute mechanism.

turbulencia y disminuye el tamao de

designed

to

fermentation
agitated

overcome
system
tank

biorreactores

el

coeficiente

burbuja. Sin embargo, el consumo de


This paper evaluates the EAFS; some

energa es proporcional a la velocidad a la

operational variables were selected and

tercera potencia y al dimetro del agitador

studied as well as their effect on oxygen

a la quinta potencia (Calderbank y Moo-

transfer. Our results showed that agitation

Young, 1961; Bandaiphet y Prasertsan,

2006; Rushton et al., 1950), incidiendo en

de

el costo de operacin. Adicionalmente,

poblacin microbiana. La concentracin de

debe

tenerse

demanda

en

la

altas

oxgeno disuelto en los medios de cultivo

tienen

una

depende de la velocidad de consumo

influencia negativa en la productividad de

(oxygen uptake rate, OUR) de las clulas y

complejos enzimticos, debido al efecto de

de la velocidad de transferencia del mismo

los esfuerzos de corte sobre el cultivo

(oxygen transfer rate, OTR). La OTR

(Bandaiphet y Prasertsan, 2006; Kwon et

depende del coeficiente de transferencia de

al., 1996). Otros factores que afectan la

oxgeno kLa y del gradiente entre la

transferencia

concentracin

de

cuenta

dicha

que

velocidades

en

satisfacer

agitacin

de

oxgeno

son

las

de

equilibrio

la

caractersticas geomtricas y operacionales

concentracin actual en el lquido, e incide

de los recipientes de fermentacin, la

sobre los ndices de productividad y los

composicin del medio de cultivo, la

rendimientos (Zhang y Thomas, 1996;

viscosidad,

Kawase et al., 1992; Garca y Gmez,

la

tensin

superficial,

la

concentracin de oxgeno en la corriente

2005).

de gas, la morfologa del microorganismo


y el rea superficial que proveen las

METODOLOGA

burbujas. Es por esto que el kLa es un

Microorganismo

parmetro que determina tanto el escalado


de las fermentaciones aerobias como la
estructura de costos en fermentadores
convencionales (Gaddis, 1999). En estos
biorreactores, el kLa se puede calcular por
un gran nmero de ecuaciones empricas y
por ecuaciones tericas (Galaction et al.,
2004; Kawase et al., 1992), unas y otras
muestran

que

la

viscosidad

incide

drsticamente sobre los valores de kLa.

El microorganismo empleado en este


estudio es el Lactoccoccus lactis, bacteria
gram positiva, mesfila, perteneciente a la
familia

Streptococaceae,

catalogado

como

cepa

aislado
IBUN

34.1,

depositada en el banco de germoplasma del


Instituto

de

Universidad

Biotecnologia
Nacional

de

de

la

Colombia

(IBUN).
Medio de fermentacin e inculo

La eficiencia en la aireacin de un sistema

El medio de cultivo utilizado en los

fermentativo depende de la solubilidad del

ensayos (Vanegas, 2006) contiene sacarosa

oxgeno, la velocidad de difusin en los

30 g/L, extracto de levadura 20 g/L,

medios de cultivo, la demanda de oxgeno

K2HPO4 20 g/L, CaCl2.H2O 0,066 g/L,

del cultivo y la capacidad del biorreactor


3

MgSO4.H2O 0,023 g/L, MnSO4.H2O 0,011

oxgeno disuelto (electrodo polarogrfico

g/L y agua destilada c.s.p 1 litro. Para la

InPro6800/12/220,

caracterizacin hidrodinmica tanto de la

controlador de temperatura y controlador

configuracin tradicional del reactor, como

de

para el sistema con el aireador externo, se

fermentador se inocula con 50 mL de

emple agua como medio.

inculo, el cultivo se mantiene a 30 C y el

El inculo se prepar en 50 mL de medio

pH inicial se ajusta en 7,0. El pH y el

de cultivo contenidos en un Erlenmeyer de

oxgeno disuelto (OD) no se controlan

250 mL al cual se adicionan 40 L de la


cepa suministrada. El inculo se mantuvo a
30 C y 200 rpm por 12 h, al cabo de las
cuales

se

microbiano

verific
que

un

crecimiento

corresponda

nm (Vanegas, 2006).
Biorreactor
En este trabajo se comparan los valores de
obtenidos

en

un

velocidad

de

Toledo),

agitacin.

El

durante el cultivo. La agitacin y aireacin


se fijan segn el rgimen por experimentar.
Tabla 1. Caractersticas del biorreactor y el
impulsor

una

densidad ptica mayor a 0,6, medida a 600

kLa

la

Mettler,

fermentador

DIMENSIONES
Dimetro impeler Da
Dimetro del tanque Dt
Altura del impeler E
Ancho hoja del impeler L
Alto hoja del impeler W
Sin bafles J
Altura lquido H

VALOR (mm)
56
117
56
19
16,5
0
88 (1 litro);
110 (1,2 litros)

convencional con aquellos obtenidos en el


SFAE propuesto.

Sistema de fermentacin con aireador


externo.

Fermentador convencional. Se emple un


fermentador Biolab con un recipiente de
vidrio de 1,6 L de volumen de operacin y
dimetro 117 mm, equipado con dos

fermentador

Se elimina el difusor interno.

Se adaptan puertas de entrada y


salida

de

fermentador

medio,
hacia

desde
el

el

aireador

externo y el retorno al fermentador.

recipiente a la primera turbina; cuenta con


-

El medio es impulsado por una


bomba peristltica.

5 orificios al que se suministra aire a


est equipado con medidores de pH,

el

adaptaciones (figura 1):

separadas 56 mm entre s y del fondo del

presin y filtrado (tabla 1). El biorreactor

emple

convencional Biolab, con las siguientes

turbinas Rushton de 56 mm de dimetro

un difusor de gas del tipo flauta en L con

Se

El aireador externo (figura 2)


consta de un difusor de micro

burbujeo de 17 cm de largo y 1 cm

recirculacin y la lnea de suministro de

de dimetro fabricado en acero

aire. En el aireador externo se puede

sinterizado, en este dispositivo se

incrementar la presin por encima de la

pone en contacto la fase lquida con

presin atmosfrica, de esta manera se

la corriente de aire, en circulacin

incrementa la concentracin de equilibrio

paralela, y retorna al fermentador

del oxgeno en el medio lquido. El

agitado.

incremento de presin est limitado por la


capacidad del microorganismo de soportar

El uso de microburbujeadores en tanques

estas presiones.

agitados

para

El SFAE evaluado es un sistema de

estrs

fermentacin con una alta velocidad de

mecnico, debido a que incrementa el rea

transferencia de oxgeno que no presenta

entre las fases gas-lquido, reflejndose en

limitacin del mismo en la fermentacin

posibles reducciones en el flujo de aire y

con el Lactococcus lactis IBUN 34.1,

en las velocidades de agitacin (Cockx et

diferencindose sustancialmente de los

al., 1995). Se seleccion este tipo de difusor

sistemas de fermentacin convencionales,

en el sistema de fermentacin con aireador

agitados y con difusor de aire del tipo

externo (SFAE) por proveer tamaos de

burbujeador. Por las caractersticas del

burbuja

SFAE, presenta ventajas que lo hacen

se

microorganismos

recomienda
sensibles

reducidos

al

grandes

reas

superficiales de contacto con la fase

promisorio

lquida, caractersticas que pueden ejercer

fermentaciones extractivas, en cultivos

un efecto favorable.

altamente sensibles a esfuerzos de corte, en

El diseo del (SFAE) tiene como propsito

cultivos con clulas inmovilizadas, entre

aumentar la transferencia de oxgeno,

otras aplicaciones potenciales.

descrita

del

Teniendo en cuenta las caractersticas del

de

SFAE, en este trabajo se plantea estudiar

transferencia de masa (kLa). El SFAE

tres condiciones de operacin con el fin de

diseado (figura 1) incorpora un aireador

alcanzar

externo que emplea un microburbujeador

oxgeno:

y analizada

coeficiente

por medio

volumtrico

de acero sinterizado

global

para

ser

una mayor

utilizado

transferencia

en

de

que provee una

amplia rea interfacial gas-lquido, el cual

1. Empleo de SFAE bajo condiciones

se instala en una unidad de contacto a la

controladas de flujo y presin (Soler,

que

2009).

llega

una

lnea

de

flujo

de

2. Incrementos de la presin en el aireador

Microburbujeador

Aireador externo

externo para modificar la solubilidad del


oxgeno en el medio de cultivo (Pinheiro y
Mota, 2000), la solubilidad y la difusividad
son funcin directa de la presin en el
sistema.

La

determinacin

de

las

condiciones de operacin en el aireador


externo propuesto estn afectadas por la
capacidad de las clulas de soportar estrs
oxidativo o mecnico (Kwon et al., 1996),
factor que se evaluar experimentalmente.
3. Variacin del tiempo de contacto entre el
aire y el medio de cultivo (Soler, 2009).

Figura

Rotmetro aire

Filtro

2.

Rotmetro
agua
Prefiltro
Aireador
Externo
Aire
Medio de
cultivo

Bomba
peristltica

Tanque de
fermentacin

Aireador externo, despiece y ensamble.


Figura 1. Configuracin del sistema de
fermentacin con aireador externo.

Evaluacin de los cultivos


El seguimiento de la fermentacin se
realiza determinando biomasa por densidad
ptica a 600 nm, tomando lecturas de pH y
de OD como porcentaje de saturacin
(Vanegas, 2006; Soler, 2009).

Determinacin del kLa cuando se emplea

Determinacin

agua como medio. En esta caracterizacin

empleando la tcnica dinmica (Kawase

del SFAE se emple el mtodo esttico en

et al., 1992; Zhang y Thomas, 1996;

la estimacin de los valores de kLa

Montes et al., 1998). Cuando el cultivo se

(Gaddis, 1999; Galaction et al., 2004). Este

encuentra

mtodo presenta como ventaja que puede

crecimiento, se suspende el suministro de

aplicarse para diferentes medios de cultivo

aire permitiendo

concentracin de oxgeno disuelto hasta un

condiciones en que no hay consumo de

valor cercano a la concentracin crtica, en

oxgeno. El mtodo esttico consiste en

este momento se permite la reaireacin

medir la velocidad de incremento de la

bajo

concentracin de oxgeno disuelto en el

evaluadas, obteniendo curvas como la

medio;

esta

descrita en la figura 3. Las curvas

concentracin hasta valores cercanos a

obtenidas fueron modeladas en la zona I

cero, haciendo pasar nitrgeno gaseoso por

para la determinacin de la demanda de

el sistema durante al menos 20 min. Se

oxgeno OURx, y en la zona II, integrando

suspende el flujo de nitrgeno y se inicia la

la expresin para la zona de reaireacin

aireacin a las condiciones de operacin

para calcular el kL a en una ecuacin de la

establecidas (velocidad de agitacin y

forma:

velocidad

CL= A+B exp(t) = %OD

los

resultados

previamente

de

corresponden

se

aireacin).

reduce

El

oxgeno

disuelto se midi empleando un electrodo

las

del

en

kLa

fase

en

cultivos

exponencial

de

que se reduzca la

condiciones

de

operacin

(2)

polarogrfico con cartucho de membrana

En esta ecuacin A y B son constantes,

reemplazable InPro6800/12/220 (Mettler,

es una constante que corresponde a -

Toledo).

kLa. El ajuste de los datos experimentales a


la ecuacin se realiz con ayuda del
programa Data Fit 9 (Oakdale Engineering,

ajustan a la ecuacin (1), de velocidad de

versin libre, 2002).

Concentracin
de oxgeno disuelto

Las curvas obtenidas por este mtodo se


transferencia, y se determina el coeficiente
volumtrico de transferencia de oxgeno
kLa para cada condicin experimental.
C * C
exp(k L a * t ) (1)
C * C t o

C*

CL

Suspensin flujo
de aire

CL

dC L
k L a C * C L OURx
dt

OURx

Aireacin de nuevo
Zona I

Zona II

Ccrit
t0

OURx
kLa

t1

7
Tiempo

un total de 128 ensayos, por lo que se opta


por

sesgar,

partiendo

de

algunas

combinaciones iniciales de FR y FA y
haciendo la variacin de los parmetros de
Figura 3. Curva caracterstica para la

las covariables una a la vez. La tabla 2

determinacin del valor de kLa por el mtodo

corresponde las condiciones evaluadas en

dinmico para cada condicin de fermentacin

los experimentos realizados de acuerdo con

evaluada.

la metodologa de diseo experimental.

Esta tcnica presenta algunas restricciones


tales como la dependencia del tiempo de
respuesta

del

electrodo

de

oxgeno

disuelto, el cual debe ser menor a 1/kLa, en

Tabla 2. Diseo experimental para

el presente trabajo se verifica que el

evaluar el SFAE: factores (FR y FA) y


covariables (agitacin, presin

electrodo cumpla esta condicin.

manomtrica en el difusor y la
temperatura)

Diseo experimental
Para el desarrollo de la evaluacin
hidrodinmica del sistema de aireacin

FR

FA

Agitacin

Presin

Temperatura

externo se plante el modelo factorial no

(CPM)
1,73
1,30
0,87
0,45
1,73
1,30
0,87
0,45
0,45
0,87
0,45
0,45
0,45
0,45
0,45

(vvm)
0,65
0,65
0,65
0,65
1,00
1,00
1,00
1,00
1,00
1,00
0,65
0,65
0,65
0,65
0,65

(CPM)
154
154
154
154
154
154
154
154
283
283
154
154
154
154
154

(psi)
3
2
0
0
4
3
0
0
0
0
10
15
20
0
10

(C)
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
30
30

balanceado de efectos fijos (Montgomery,


1997) correlacionando las variables que
afectan las condiciones de trasferencia de
oxgeno con el kLa. Se seleccionaron dos
factores, el flujo de recirculacin del
lquido (FR) y flujo de aire (FA), y tres
covariables, la presin manomtrica en el
difusor (PA), la agitacin (A) y la
temperatura (T). Para emplear este modelo
se establecen las combinaciones totales
posibles de los niveles en los factores FA y
FR. Para la evaluacin de las covariables

RESULTADOS Y ANLISIS

(PA, A y T) se tiene en cuenta que


desarrollar el modelo completo implicara
8

Determinacin del kLa en el fermentador


convencional empleando agua

Determinacin del kLa en cultivos con


Lactococcus lactis IBUN 34.1 realizados

En la tabla 3 se presentan valores

en el fermentador convencional

obtenidos para el kLa, empleando el


fermentador convencional y agua como

Para determinar el efecto de la aireacin y

medio. Los resultados indican que el valor

la

de kLa presenta una alta dependencia con

convencional de tanque agitado y difusor

las condiciones de aireacin y agitacin. El

interno, se evalu la cintica de produccin

valor mximo alcanzando corresponde a

de biomasa en estas fermentaciones y el

las condiciones extremas de 1 volumen de

comportamiento del pH. En la figura 4 se

aire/volumen de mediominuto (vvm) y

presentan

300

condiciones,

rpm,

con

un

coeficiente

de

agitacin

los

en

el

fermentador

resultados
estos

para

indican

estas

que

las

transferencia de 40,68 (h-1). Se determin

condiciones de estandarizacin del inculo

el tiempo muerto (0,419 s) y el tiempo de

resultaron

respuesta del electrodo de medicin de

concentracin inicial de biomasa similar en

oxgeno disuelto con el fin de evaluar el

los cultivos. Los resultados muestran que

criterio de aceptabilidad. Se escogieron las

la biomasa final es dependiente de los

condiciones extremas entre un tiempo de

parmetros

respuesta de 75 (s) y un kLa de 1,13*10-2 s-

agitacin y aireacin), en los ensayos

(40,68 h-1). La respuesta se considera

realizados el mayor valor que se alcanz

adecuada si: ( < 1/ kLa), condicin que se

corresponde a una velocidad de aireacin

cumple por ser = 75 (s) y 1/ kLa = 82 (s).

de 1,75 vvm (volumen de aire por volumen

adecuadas

evaluados

al

obtener

(velocidades

una

de

de medio por minuto) y una velocidad de


agitacin de 250 rpm (figura 4). El
Tabla 3. Valores de kLa obtenidos para el

comportamiento del pH en el transcurso de

fermentador convencional

las fermentaciones no se ve afectado para

al emplear agua y la tcnica de

los niveles de aireacin y agitacin

desgasificacin con nitrgeno

evaluados,

manteniendo

un

comportamiento similar en todos los


ENSAYO
0,5 vvm - 200 rpm
1 vvm - 200 rpm
0,5 vvm - 300 rpm
1 vvm - 300 rpm

kLa (h-1)
20.16
32.4
28.44
40.68

ensayos (figura 4).


En todos los cultivos con Lactococcus
lactis

IBUN

34.1

realizados

en

la
9

fermentacin convencional, la limitacin


de

oxgeno

persiste

an

bajo

las

condiciones extremas, como se observa en


la figura 5, donde el porcentaje de oxgeno
disuelto llega a cero en la tercera hora de
fermentacin, que corresponde a la etapa
inicial de la fase exponencial del cultivo.
Bajo las condiciones de experimentacin
evaluadas

para

el

fermentador

convencional, no se logra satisfacer la


demanda de oxgeno en el cultivo.
Los resultados indican que hay mayor
incidencia en la transferencia de oxgeno
por cambios en la agitacin al compararlos
con cambios en la aireacin. El aumento de
la concentracin de biomasa debido al
incremento en los niveles de aireacin,
indica que efectivamente al mejorar las
condiciones de oxigenacin se incrementa
la productividad del cultivo.

Figura 4. Cinticas de crecimiento y variacin de pH en cultivos con Lactococcus lactis IBUN


34.1 para diferentes niveles de oxigenacin en el fermentador convencional.

10

Figura 5. Variacin del porcentaje de saturacin de oxgeno disuelto en cultivos con


Lactococcus lactis IBUN 34.1 realizados en fermentador convencional.

Evaluacin del sistema de fermentacin con aireador externo (SFAE)


Diseo del aireador externo. En la figura 2 se presenta el aireador externo en despiece y
ensamblado y en la figura 1 el diagrama del SFAE. Los factores que se tomaron para
caracterizar este sistema fueron:
- Flujo de gas (FA) medido en vvm.
- Flujo de lquido recirculado (FR) medido como nmero de veces que circula el medio
contenido en el fermentador por el aireador externo por minuto (CPM).
Las covariables seleccionadas fueron:
- Agitacin (rpm).
- Presin en el aireador externo (psi).
- Temperatura (C).
Las variables respuesta fueron:
- pH
- Oxgeno disuelto.

11

- Biomasa.
- Coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno kLa.
El volumen de medio se mantuvo constante durante los ensayos y la variable independiente
fue el tiempo.
Caracterizacin hidrodinmica. Esta etapa del trabajo se realiz empleando agua como
medio en el fermentador. El error experimental se determina al realizar la tcnica de medicin
del kLa por triplicado en el punto central, correspondiendo a FR (Re/m) 0,87; FA (vvm) 0,65;
agitacin (rpm) 176 y temperatura (C) 18, con lo cual se obtuvo un porcentaje de error relativo de
0,6%, suficientemente bajo para asegurar la estabilidad del sistema, en particular durante la etapa de
desgasificacin (zona 1 en la figura 3).

La figura 6 muestra la variacin del kLa con el flujo de recirculacin (FR) y con el flujo de
aire (FA), y la figura 7 muestra el efecto de la velocidad de agitacin sobre el coeficiente de
trasferencia de oxgeno.

100

kLa (h-1)

90
80
70
60
50
40

FA (v,v,m,) 0,65

30

FA (v,v,m,) 1

20
10
0
0,00

0,50

1,00

1,50

2,00

Flujo de Recirculacin
(C.P.M.)

Figura 6. Variacin del kLa con el flujo de recirculacin y la velocidad de aireacin.

12

70
kL
a
(h
1)

60
50
40
30
20
FR (C.P.M.) 0,45; FA (v,v,m,) 1

10
0
100

FR (C.P.M.) 0,87; FA (v,v,m,) 1


150

200
Agitacin (rpm)

250

300

Figura 7. Variacin del kLa con la agitacin cuando el flujo de aire es de 1 vvm.

Figura 8. Variacin del kLa con cambios de presin en el aireador externo para un flujo de
recirculacin de 0,45 CPM y un flujo de aire de 0,65 vvm.

En la figura 8 se muestra el efecto del cambio en la presin manomtrica sobre el kLa, se


observa una tendencia a incrementar el coeficiente hasta obtener un mximo a una presin
manomtrica de 15 psi. Cuando el sistema opera a una presin manomtrica de 20 psi se
presenta una disminucin en el kLa que puede explicarse por inestabilidad del sistema,
originada en la relacin entre el flujo de recirculacin y el flujo de aire, ya que este ltimo se
incrementa con la presin afectando la interfase gas-lquido, indicando que el flujo del
lquido es insuficiente para el flujo de aire disponible.

13

La figura 7 muestra el efecto significativo que tiene la agitacin sobre el kLa, indicando la
importancia de este factor en el SFAE. Lo observado indica que la disponibilidad de oxgeno
en el cultivo depende de la capacidad del fermentador de homogeneizar en la masa contenida
el flujo de recirculado que retorna del aireador externo. La tendencia de los resultados en las
figuras 6 y 7 indican que el efecto de la agitacin es independiente del flujo de recirculacin.
Teniendo en cuenta que en los ensayos con el SFAE se emple un nuevo medidor de oxgeno
disuelto, se evala nuevamente el criterio de aceptabilidad por tiempo de respuesta en las
condiciones extremas, entre un tiempo de respuesta = 25,9 (s) y el mayor kLa obtenido bajo
las condiciones de FR (CPM) 1,73; FA (vvm) 1; agitacin (rpm) 154 y temperatura (C) 18,
fue de 0,0251 s-1 que corresponde a un valor de 1/ kLa = 39,84 s; el tiempo muerto medido
experimentalmente para el electrodo fue de 1,8 s. La respuesta se considera adecuada si: ( < 1/
kLa), condicin que se cumple.

Evaluacin del sistema de fermentacin con aireador externo en el cultivo con el


Lactococcus lactis IBUN 34.1
Anlisis estadstico
La tabla 4 presenta el anlisis de varianza que permite determinar los efectos que son
estadsticamente significativos. Esta tabla muestra la fuente de variabilidad, los grados de
libertad asociados (DF), las sumas de cuadrados del error (Seq SS) ajustadas (Adj SS), y el
error cuadrado medio ajustado (Adj MS). Una variable tiene efecto estadsticamente
significativo, al 10% de significancia, si su valor p es menor a 0,1. Bajo las condiciones de
experimentacin se encontr que los dos factores, agitacin (FA) y flujo de recirculacin
(FR), afectan significativamente el valor de kLa.
Tabla 4. Anlisis de varianza para kLa (h-1), usando el ajuste de las sumas de cuadrados del error SS para
los ensayos

DF
Fuente de variabilidad
Agitacin (rpm)
Presin (psi)
Temperatura (C)
FR (CPM)

1
1
1
3

Seq SS
220,73
152,04
416,81
4369,60

Adj SS
325,96
129,26
29,62
4110,31

Adj MS
325,96
129,26
29,62
1370,10

F
4,77
1,89
0,43
20,04

p
0,065
0,211
0,531
0,001

14

FA (vvm)
Error
Total

1
7
14

90,28
478,51
5727,97

90,28
478,51

90,28
68,36

1,32

0,288

Comportamiento de los cultivos en el SFAE


Las fermentaciones en el SFAE, realizadas de acuerdo con el diseo experimental, presentan
curvas de crecimiento caractersticas para el cultivo y niveles de biomasa final similares a los
alcanzados en cultivos realizados en el fermentador convencional.
En la tabla 5 se presentan los resultados obtenidos para los cultivos, as como los valores
obtenidos para la demanda de oxgeno y el kLa. La demanda de oxgeno aumenta a medida
que se incrementa la concentracin de biomasa. Los experimentos se realizaron en dos
cultivos, los ensayos 1 al 6 en el primero, y en el segundo la rplica del ensayo 6 y los
ensayos 7 y 8. La disminucin en la demanda de oxgeno que se presenta en los ensayos 4 y
5, puede obedecer a la muerte de parte de la biomasa debida a las sucesivas disminuciones en
la concentracin de oxgeno y/o a los cambios en las condiciones de operacin a que se
someti el cultivo. El ensayo 6 corresponde a la mayor concentracin de biomasa alcanzada
en este primer cultivo, en un valor ubicado en el extremo superior de la fase exponencial.
Esta carga acumulativa no afecta la determinacin de cada coeficiente volumtrico de
transferencia de oxgeno, puesto que en el modelamiento puntual de la zona de reaireacin la
demanda de oxgeno y el kLa son respuestas dependientes de la eficiencia en la transferencia
de oxgeno del SFAE. Con el fin de verificar la reproducibilidad entre los ensayos de un lote
y el siguiente, se realiza una rplica del ensayo 6 para una concentracin de biomasa que
corresponde a la etapa inicial de la fase exponencial, obtenindose un error del 1,6% en la
determinacin del kLa, lo que indica que el modelo experimental presenta aceptable
reproducibilidad.
Tabla 5. Demanda de oxgeno y kLa determinados por la tcnica dinmica en el SFAE
Ensayo

1
2
3
4
5

Condiciones de operacin
FR
FA
Presin
(CPM)
0,45
0,87
1,30
0,87
1,30

(vvm)

0,65
0,65
0,65
1,00
1,00

(psi)
1
1
3
3
3

Biomasa
(mg/ml)
0,8
1,25
1,9
2,3
2,8

Zona I
OURx

R2

Zona II
B

(%OD/s)

0,2428
0,4892
0,5527
0,3294
0,3968

0,9958
0,9958
0,9986
0,999
0,9993

59,9
87,88
70,47
61,77
74,43

-52,15
-77,08
-60,18
-53,55
-65,54

kLa
(h-1)
28,54
46,88
48,84
36,53
45,97

15

6
6
7
8

0,87
0,87
1,30
0,87

0,65
0,65
0,65
0,65

10
10
10
14

3,25
0,75
2,2
3,46

0,5424
0,4458
0,4373
0,5315

0,995
0,996
0,998
0,997

68,33
68,42
81,75
75,15

-64,89
-48,99
-63,53
-56,79

48,10
49,75
63,18
52,92

Los valores de kLa obtenidos por el mtodo dinmico concuerdan con los resultados de la
etapa anterior, las variables que tienen mayor incidencia sobre este coeficiente son el flujo de
recirculacin FR y la presin. Con el propsito de validar este resultado se realiza una
fermentacin con el SFAE, seleccionando como condiciones de operacin un nivel medio que
aporte un valor de kLa mayor a los obtenidos en el fermentador convencional. De esta manera,
se seleccionaron las condiciones que corresponden al ensayo 6 y se desarroll la
fermentacin. Adicionalmente, se desarroll una fermentacin con los niveles ms bajos en
las variables estudiadas (FR y FA).
Como se observa en la figura 9, los resultados obtenidos para estos ensayos presentan curvas
de crecimiento similares a las obtenidas con el sistema convencional, y no presentan
diferencias significativas para las condiciones evaluadas. Con los niveles de las variables en
el menor valor, en el cultivo se presenta limitacin de oxgeno a partir de la hora dos,
mientras que con la condicin propuesta se logra mantener el oxgeno disuelto en
concentraciones cercanas al 60% de saturacin durante toda la fermentacin, eliminando la
limitacin de oxgeno durante el cultivo.

16

Figura 9. Cinticas de crecimiento microbiano y variacin del porcentaje de saturacin de oxgeno en el


SFAE con FA de 0,65 vvm; FR de 0,45 CPM y 0,87 CPM; presin de 10 psi; agitacin de 154 rpm y
temperatura de 30 C.

CONCLUSIONES
Para las condiciones evaluadas en los ensayos realizados con el fermentador convencional, de
tanque agitado y difusor interno, se present en todos los ensayos limitacin de oxgeno en los
cultivos. Sin embargo, se comprob que cuando se incrementa la transferencia de oxgeno se
presentan incrementos en los parmetros de evaluacin del cultivo. Asimismo, se corrobor
que se presentan mayores incrementos en el kLa por aumento en la agitacin en comparacin
con los obtenidos con incrementos en la velocidad de aireacin.
En la caracterizacin hidrodinmica del sistema de fermentador con aireacin externa (SFAE)
las variables determinantes en la transferencia de oxgeno son el flujo de recirculacin (FR) y
la velocidad de agitacin en el reactor, aumentando el kLa de un mximo obtenido en el
fermentador convencional de 40,68 (h-1) hasta valores de 63,18 (h-1) con el SFAE.
El SFAE es un modelo de fermentador de alta tasa de transferencia de oxgeno si se compara
con el sistema convencional, logrando mayores valores de kLa.
En la fermentacin con el SFAE operando con un flujo de recirculacin de 0,87 (CPM), una
aireacin de 0,65 vvm y una presin de 10 psi, se logra una condicin de operacin que
elimina la limitacin de oxgeno en los cultivos con el Lactococcus lactis IBUN 34.1.

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Interese conexe