Tcnicas de Diagnstico Microbiolgico

Su funcin es identificar el agente causal de una enfermedad, en otras

palabras identificar la bacteria.

Mtodos de Identificacin de Microorganismos

Observacin directa del agente

Cultivo (Mtodo estndar que es pauta para cualquier otro test)
Deteccin de agentes estructurales y metabolitos
Agentes estructurales
Enzimas, toxinas o metabolitos (Ej: Staphylococcus aureus)
Deteccin de cidos nucleicos
Cito-histopatologa (No se ocupa por ser un mtodo invasivo)
Serologa (Elisa, ltex para pesquisar anticuerpos contra microorganismo
o los antgenos)

Nota:
El cultivo est por encima de otros test, por ejemplo el ltex. En un caso
hipottico, aadimos LCR en una prueba ltex y da negativo pero en el cultivo
da positivo, se deduce que si tiene una infeccin en el LCR. Caso opuesto si en
el ltex sale positivo y en el cultivo negativo, se debe repetir el proceso.

Diagnostico
Principios bsicos

Identificacin del microbio especifico que lo causa

El microorganismo debe haberse cultivado de forma pura
Este microorganismo debe producir la enfermedad cuando es inyectado
en animales (tcnica antigua y mtodo experimental)
El microorganismo debe ser aislado de los animales a los que se le
administra.

Tinciones
1. Tincin de Gram
Cubrir el frotis con cristal violeta por 1 (minuto)
Se lava con agua y se agrega lugol por 1
Se decolora rpidamente con alcohol-acetona y se lava con agua
Safranina al 1% por 1. Se lava y se deja secar
Permite revelar la afinidad tintorial, forma y naturaleza
Conocer la disposicin bacteriana

2. Tincin de Ziehl Neelsen (para ver y diagnosticar tuberculosis)

Se cubre el frotis con fucsina (colorante bsico) concentrada
Se calienta el frotis hasta que emita vapores (2 o 3)
Se decolora escurriendo alcohol-acido
Se tie de contraste con azul de metileno por 30 (segundos)
3. Tincin de Capsula
Uso de tinta china para evidenciar presencia de capsula
Tie de negro todo el frotis excepto la capsula
El microorganismo se puede teir con safranina

Cultivo
Es una tcnica de referencia para los otros test.

Requiere de microorganismos vivos

Su rendimiento depende de que la muestra sea obtenida del sitio
anatmico donde est ocurriendo la infeccin.
Que el paciente no est usando antibiticos (para evitar negativos)
La muestra debe depositarse en recipientes estriles

Medio Cultivo
Consisten en mezclas de elementos nutritivos de distinta naturaleza que
utilizan las bacterias para su crecimiento
El agar: Es un polisacrido que sirve de soporte para el crecimiento bacterial.
Se extrae de algunos tipos de algas. El extracto se filtra, luego se concentra y
se deseca (deshidratar) para posteriormente disolverlo en agua caliente en una
placa de 15 cm de dimetro. El producto final se solidifica al enfriarse.
Salvo excepciones, no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es
atacado por aquellas que crecen en l.
No olvidar: Todo cultivo debe tener nutrientes, pH, temperatura y niveles de
oxgeno favorables para el crecimiento bacteriano.

Consistencia adecuada del medio

Nota:

Presencia o ausencia de oxgeno y otros gases

Condiciones adecuadas de humedad
Luz ambiental
Temperaturas entre 35C a 38C, principalmente 37C

Algunos microorganismos crecen en ausencia de oxigeno como es el caso del

Clostridium perfringens, para su cultivo se genera una anaerobiosis a travs de
productos qumicos que consumen oxgeno. El cefadroxilo es eficaz para tratar
infecciones bacterianas del tipo anaerobias.
Algunas bacterias presentan sensibilidad a la presencia de luz, como la Serratia
un microorganismo que en presencia de luz por 24 horas cambia su tonalidad
blanquecina a anaranjada.
Por ultimo dentro de las bacterias hay quienes crecen en temperaturas desde
los 20C hasta los 37, como la Listeria monocytogenes que se encuentra en
verduras y carne, este patgeno es peligroso por inducir el aborto en las
mujeres.

Esterilidad del Medio

Se logra usualmente por autoclave

Clasificacin de los Medios de Cultivo

Estado
Fsico
Solidos

Presentaci
n
Tubo

Contenido de
nutriente
Enriquecidos

Lquidos

Placa (15cm
de dimetro)

Comunes/Corrie
ntes
(Agar)

Semisolidos

Utilidad
Aislamiento primario
Selectivos
Diferenciados
Selectivos/Diferenciad
os
Pruebas Bioqumicas

Los medios semi-slido y lquidos bsicamente permiten medir la motilidad

de las bacterias.
En el caso de los Selectivos/Diferenciados existe el Agar McConkey, consistente
en:

pH rojo neutro: En el caso de los G+, para diferenciar si el

microorganismo utiliza lactosa o no. Si lo utiliza dejar puntos negros,
caso contrario dejara puntos blancos.
Cristal violeta y sales biliares.

En el caso de los Tubos tenemos: Tsi, Lia y Mio (Para estas dos ltimas
consultar bibliografa abajo)

Agar Hierro Tres Azucares (Tsi o Tri sugar iron)

Es una prueba usada para la fermentacin de la glucosa, lactosa y sacarosa y

la produccin de H2S por parte de la bacteria sumndole produccin de gas. El

cambio de color rojo-anaranjado (color inicial del medio) a amarillo indica

fermentacin. Si se fermenta nicamente la glucosa el cambio de color del
medio ocurre solamente en el fondo debido a que se encuentra 10 veces
menos concentrada que la sacarosa y la lactosa, adems los radicales libres no
son suficientes para hacer virar el medio.
Si se fermentan los 3 azucares hay cambio de color tanto en la superficie como
en el fondo. La presencia de burbujas que rompen el medio y a veces tienden
a expulsarlo indica presencia de gas como producto final de la fermentacin.
La produccin de H2S se manifiesta por la aparicin de un precipitado color
negro debido a la reduccin de la sal de hierro presente en el medio.
Inocular el medio realizando siembra mixta del microorganismo en estudio,
incubar a 37 grados C por 24 horas.

INTERPRETACION

A: Reaccin acida. Color amarillo

A/A: Fermentacin 3 azucares
K: Reaccin alcalina. Color roja naranja
K/A: Fermentacin de la glucosa
Burbujas: Produccin de gas
K/K: No hay fermentacin de los 3
Precipitado negro: Formacin H2S

Nota bibliogrfica: TSI (Tres Azucares-Hierro) Complemento para la clase de

Agentes Patgenos, sacado de http://dianayjulian.galeon.com/bioquimicas.htm

Deteccin de Antgenos y Productos Bacterianos

Permite un diagnstico rpido y son de utilidad en bacterias de difcil
desarrollo, no reemplaza la tincin de Gram y el cultivo.

Bacteria
Streptococus
peumoniae
Neisseria meningitidis
Chlamydia trachomatis

Test Rpido
Latex

Muestra
LCR, liquido pleural

Latex
Elisa

LCR
Secrecin uretral,
vaginal y ocular

Cito-histopatologia

Secreciones
Fluidos corporales estriles (LCR, articular, peritoneal)
Orina
Lavados endoscpicos

Las muestras son tejidos, por lo que es un procedimiento invasivo.

Deteccin de anticuerpos especficos (Estudiar la clase de inmunologa:
Antigeno-anticuerpo)

Determinacin de IgM e IgG

Tipo de respuesta

Importante:
Una bacteria contaminante (ambiental) es carne de perro crecen con poco. Al
contrario de una bacteria infecciosa (patgena) que son de crecimiento lento