PRCTICA N.

2
PRUEBA DE GERMINACIN Y DETERMINACIN DE VIGOR
1. OBJETIVO: conocer, e identificar las variables crticas y diferentes factores
relacionados con la germinacin y el vigor de las semillas, lo cual permitir al
estudiante obtener conclusiones y hacer inferencias sobre comportamientos de
las semillas y resultados esperados en la
etapa de
germinacin ante
determinadas condiciones de siembra.
2. INTRODUCCION
Al iniciar el presente curso es preciso hacer claridad entre dos acepciones: grano y
semilla.
Aunque estructuralmente la semilla sexual es el mismo grano, existen diferencias
funcionales importantes entre un grano comn y una semilla. Los granos se usan
en la alimentacin y en la industria; las semillas en cambio son usadas con fines
de multiplicacin o propagacin sexual de las especies. Por tanto la semilla debe
mantener su pureza varietal y dar origen a plantas sanas, vigorosas y productivas;
as la semilla debe cumplir con atributos claves que son: genticos, fisiolgicos,
fitosanitarios, y fsicos. En consecuencia, no todo grano es apto para semilla.
Hablar de fisiologa de la semilla es adentrarse en un tema muy amplio, puesto
que involucra todo un proceso de transformaciones biolgicas, que comienza con
la fusin de los gametos masculino y femenino, mediante una doble fertilizacin
para formar las primeras clulas, el zigoto y el endospermo, las cuales en forma
sincronizada inician rpidamente su divisin celular, siguiendo procesos
bioqumicos secuenciales que conllevan al desarrollo y madurez de la semilla,
sus cambios, su metabolismo, la latencia, la germinacin y morfognesis, la
deterioracin y por ltimo la muerte.
As, la presente prctica involucra solamente aspectos muy especficos, como
son la identificacin de estructuras bsicas de la semilla, de su eje embrionario y
modificaciones o transformaciones de dichas estructuras durante el proceso
germinativo, procesos bioqumicos involucrados en el proceso, la incidencia de
factores ambientales, biolgicos y edficos. Igualmente se evaluar el vigor de
las semillas, para lo cual se har uso de algunos mtodos recomendados por la
FAO.

Germinacin de las Semillas

Para conocer el potencial de un grano como semilla es preciso efectuar una
prueba de germinacin. Las semillas pueden tener una excelente apariencia y

estar muertas o mostrar mala apariencia y tener buena geminacin y vigor. La

evaluacin de germinacin constituye por tanto una verificacin necesaria.
Cuando la semilla est seca se encuentra en estado de reposo, cuando se coloca
sobre un sustrato apropiado (suelo, arena, papel de germinacin), bajo
condiciones apropiadas de humedad, temperatura, luz y oxgeno, la semilla que
est viva germina. As, para que la germinacin ocurra, adems de que el
embrin este vivo y sano la semilla necesita cuatro condiciones fsicas
ambientales adecuadas: humedad, temperatura, aire (oxgeno), y un sustrato.
En condiciones de laboratorio la germinacin se simula usando diferentes
sustratos como papeles de germinacin, arena o tierra.
Un mtodo sencillo para evaluar la germinacin consiste en humedecer el sustrato
hasta la capacidad de campo: si se utiliza suelo o arena se agrega agua al
sustrato hasta que al apretarlo con la mano se forme una pelota que se puede
partir con facilidad al presionarla con los dedos; si se utiliza papel se agrega 2.5 a
3 veces su peso en agua. Cuando se utiliza como sustrato suelo o arena, se
preparan bandejas con una capa de sustrato de 4 cm de espesor y se siembran
las semillas a una profundidad de 1-2 cm , dependiendo del tamao de la semilla.
Las bandejas se ubican en un rea protegidas del sol, la lluvia y los vientos fuertes
y se mantiene la humedad del sustrato cubrindolo con plstico transparente y/o
por medio de riegos peridicos de acuerdo con la necesidad.
Se aconseja que las bandejas charolas de germinacin no sean de acero
galvanizado, porque contienen sales de zinc txicas; para tal fin se pueden usar
bandejas de plstico, bandejas de cartn encerado o las cpsulas de Petri
cubiertas.
En condiciones normales la mayora de las semillas de leguminosas estarn
suficientemente desarrolladas para la evaluacin a los 7-10 das despus de la
siembra. Se recomienda que las plntulas se desarrollen con luz natural indirecta
para que adquieran su color verde normal. Entre las plntulas que han emergido,
se diferencian las normales de las anormales para saber el porcentaje de
germinacin.
Otra forma de evaluar la germinacin de las semillas es sembrndolas
directamente en mini parcelas en el suelo, donde las condiciones de estrs son
similares a las condiciones de emergencia en el campo, 14 das despus de la
siembra se evala la germinacin.
Se ha considerado que un lote es bueno para semilla cuando tiene una
germinacin superior al 80%. Semillas que germinan en forma rpida y uniforme,
que generan plantitas sanas y que alcanzan niveles superiores al 90% de
germinacin total, se pueden considerar como semillas de alta calidad.
Una forma de medir la viabilidad de las semillas sin hacerlas germinar es utilizar la
actividad bioqumica de las semillas para producir reacciones con determinadas

sustancias que permitan distinguirlas de las semillas muertas.; as se ha probado

la utilizacin de las diversas enzimas existentes en los tejidos vivos de los
embriones, siendo las enzimas deshidrogenasas las que han ofrecido los mejores
resultados.
Las deshidrogenasas transfieren hidrgenos a diversas sustancias que se
encuentran oxidadas, dando lugar a un proceso qumico de reduccin que se
manifiesta por un cambio de color. Este cambio de color es una indicacin de la
viabilidad de los embriones. Unas de las sustancias qumicas ms utilizadas son
las sales de tetrazolio, cloruro y bromo de 2,3, 5 trifenil tetrazolio.
As, la prueba de tetrazolio se fundamenta en la actividad de las dehidrogenasas
que son indicadores del grado de respiracin de los tejidos del embrin y por
tanto de su vitalidad; esta actividad se mide por la extensin, distribucin, e
intensidad de coloracin roja que adquieren los tejidos embebidos en la solucin
incolora de tetrazolio que al ser reducidos por las deshidrogenasas, se convierte
en trifenil formozan que tiene color rojo y que es estable y no difusible. Las
semillas cuyos embriones estn totalmente coloreados (coloracin roja), estn
vivas, y aquellas en donde los embriones no lo estn, estn muertas indicando la
falta de viabilidad o incapacidad de desarrollar plntulas normales.
VIGOR DE LAS SEMILLAS
Segn reportes de la FAO, ha sido la preocupacin de muchos investigadores
encontrar una definicin universal sobre vigor; existen muchas propuestas sin
que haya sido aceptada en su totalidad una de ellas. La siguiente definicin sobre
vigor pretende resumir en un concepto el mayor nmero de variables consideradas
por algunos autores sin pretender cubrir todos los componentes inmersos en la
amplitud del concepto. El vigor puede considerarse como la suma de todos
aquellos atributos positivos de la semilla que le permiten una germinacin rpida y
completa generando plntulas robustas y saludables, bajo condiciones
desfavorables o sub-ptimas. La deterioracin de la semilla, es la prdida de ese
vigor, y los procesos detrimentales pueden ser acelerados por un mal manejo
poscosecha.
La viabilidad de las semillas, su capacidad germinativa o concretamente el vigor
de ellas es influenciado por diversos factores, que actan desde la cosecha hasta
el momento de la siembra. Entre los factores ms importantes que afectan el vigor
de las semillas se pueden citar: condiciones climticas, madurez de la semilla,
condiciones de almacenamiento, daos mecnicos, edad de las semillas,
composicin gentica, microorganismos, e insectos, manejo inadecuado durante
y despus de la cosecha.
Pruebas de vigor

Todos los mtodos utilizados para determinar el vigor de las semillas, son
parmetros comparativos entre lotes. Para las pruebas de vigor han sido
propuestas varias metodologas; a continuacin se transcriben algunas pruebas
directas e indirectas propuestas:
Pruebas directas
Stand o poblacin final: la capacidad de diferentes lotes de semillas de producir
plntulas en condiciones de campo, y de que ellas sobrevivan hasta que se tornen
en plantas autotrficas, es utilizada como ndice de vigor. Las semillas se plantan,
segn recomendaciones para la especie objeto de estudio y es hecho un contaje,
generalmente a los 21-28 idas despus de la siembra. Los resultados son
expresados en porcentajes.
Peso verde medio: las semillas son plantadas y a los 21 28 idas despus de la
siembra se colocan en bolsas plsticas para evitar prdidas de humedad y se
pesan. El peso de las plantas de cada parcela o unidad de ensayo se divide por el
nmero de plantas y, de ese modo el peso medio por planta es comparado entre
lotes de semillas.
Prueba de fro: se basa en someter a la semilla a factores adversos de baja
temperatura (10 C), alta humedad (60% de capacidad de campo) y exposicin a
agentes patognicos. Luego del tratamiento de baja temperatura, la germinacin
es conducida a 3 C.
Pruebas indirectas
Primer montaje:
es realizado en la prueba normal de germinacin, como ndice
de vigor, se basa en la premisa de que las plntulas que presentan mayor
velocidad de crecimiento provienen de semillas ms vigorosas.
ndice de vigor: se basa en la prueba de germinacin y consiste en retirar
diariamente las plntulas normales que alcancen una longitud preestablecida. El
ndice de vigor es obtenido por la sumatoria de los productos del nmero de
plntulas normales retiradas cada da, dividido por el nmero de das despus de
la siembra.
Inmersin en agua caliente: en esta prueba, las semillas se sumergen en agua
caliente por algunos segundos. Por ejemplo para la soya, se someten las semillas
a 70 C por un tiempo de 60 segundos. El tiempo de inmersin debe ser
rigurosamente cronometrado. Luego del tratamiento, las semillas se someten a
prueba estndar de germinacin. Los lotes menos vigorosos presentan un
acentuado decrecimiento de la germinacin,
3.

MATERIALES

3.1 Prueba de viabilidad de la semilla. Prueba de tetrazolio

Semillas
Sal de tetrazolio
Placas de Petri y vasos de precipitado
Hojilla o bistur
Pinzas y lupa
Papel toalla.
3.2 Prueba de germinacin: fisiologa e identificacin de estructuras
Semillas
Sustrato (papel de germinacin o arena o suelo)
Ambiente con temperatura adecuada (20-30 C)
Caja o bandeja para colocacin de sustrato
3.3 Prueba de vigor
Los necesarios para el tipo de prueba objeto de ensayo, segn eleccin.
4. ACTIVIDADES
4.1 Prueba de viabilidad de la Semilla. Prueba de tetrazolio
4.1.1 Prepare una solucin de tetrazolio al 1.0% con agua destilada y hirvala
durante 15 minutos para obtener un pH entre 6 y 8. La anterior solucin se
puede almacenar en un frasco oscuro.
4.1.2

Colocar las semillas a remojar durante 3 a 4 horas a una temperatura de

30 C. entre papeles hmedos para que embeban agua durante toda la
noche.

4.1.3

Sumerja la semilla en la solucin de tetrazolio a temperaturas entre 20 y

45 C. (el proceso de tincin se acelera a mayor temperatura) durante el
tiempo estipulado para cada especie, segn se indica a continuacin:

Especie
Alfalfa (Mediacago sativa)
Arroz (Oyza sativa)
Arveja (Pisum sativa)
Avena (Avena sativa)
Cebada (Hordeum vulgare)
Frjol (Phaseolus vulgaris)
Haba (Vicia faba)
Lenteja (Ervum lens)
Lino (Linum usitatissimum)

Preparacin

Concentracin
Solucin (%)

Tiempo (h) de
tincin (35C)

No requiere
Corte longitudinal
Corte longitudinal
Corte longitudinal
Corte longitudinal
No requiere
No requiere
No requiere
No requiere

1.0
0.1
1.0
0.1
0.1
1.0
1.0
1.0
1.0

6-7
2-3
3-4
0.5-1
0.5-1
3-4
6-7
6-7
3-4

Maz (Zea mayz)

Man (Arachis hipogea)
Sorgo (Sorghum vulgare)
Soya (Glycine max)
Trigo (Triticum estivum)

Corte longitudinal
Remover la testa
Corte longitudinal
No requiere
Corte lateral
Corte longitudinal

0.1
1.0
0.1
1.0
1.0
0.1

0.5-1
3-4
0.5-1
4-6
2-3
0.5-1

4.1.4 Haga una observacin de las estructuras esenciales de la semilla, y

deduzca su viabilidad segn la coloracin presentada, conforme al
fundamento bioqumico.
4.2 Prueba de germinacin fisiolgica e identificacin de estructuras
4.2.1 Tome 100 semillas de un tipo de leguminosa u oleaginosa (frjol, garbanzo,
lenteja, haba, soya, etc.) y 100 semillas de un tipo de cereales (arroz, maz,
avena, trigo, etc.) y pngalas a germinar ofrecindoles las condiciones
adecuadas de sustrato, temperatura, humedad y aireacin y luz.
4.2.2 A partir del tercer da de sembradas, empiece a observar los cambios que
ocurren da a da tanto en leguminosas como en cereales (cada da efecte
la observacin en 5 semillas de cada ensayo), repita el ejercicio durante el
tiempo que sea necesario hasta que las plntulas tengan de 5-7cm de
altura. Registre cada cambio en forma descriptiva y grfica. Segn sus
propias observaciones establezca comparaciones sobre el desarrollo y
morfologa entre leguminosas, oleaginosas y cereales.
4.2.3

Haga un conteo del nmero de plantas que germinaron en cada ensayo e

indique cul fue el porcentaje de germinacin, tenga en cuenta que el
nmero de semillas retiradas y utilizadas como objeto de observacin
deben ser descartadas dentro de sus clculos.

4.2.4

Compare sus resultados con los de los dems grupos y plantee

conclusiones.

4.2.5

Durante la germinacin identifique tanto en leguminosas y oleaginosas

como en los cereales las siguientes estructuras, dibjelas y haga una
descripcin de cada parte identificada.

Leguminosas: Testa, hilo, micrpilo y endospermo, eje embrionario, plmula o

picotilo, nudo cotiledonar, radcula, hipoctilo, y cotiledones.
Cereales: Pericarpio (envoltura), aleurona, radcula, escutelo, plmula,
endospermo.
4.2.6 Consulte sobre la naturaleza y funcin del cido giberlico, de las auxinas
y sobre la funcin bioqumica del embrin, la aleurona o endospermo
proteico y el endospermo amilceo durante la germinacin.

4.3

Prueba de vigor

4.3.1 Elija con su grupo de trabajo una prueba de vigor directa y una indirecta y
aplquela a un nmero no menor de 20 semillas de un mismo tipo y
variedad, haga tres rplicas por prueba (se deben considerar idnticas
variables para cada replica). Para las replica elija semillas de la misma
especie y variedad pero de diferente lote (ejemplo: el frjol bola roja
comprado en tres sitios diferentes). Siga la metodologa descrita en la
introduccin para las pruebas seleccionadas.
4.3.2 Registre grficamente el crecimiento (cada tres das) durante el tiempo que
dura el ensayo y establezca el respectivo coeficiente de correlacin
(crecimiento Vs tiempo), igualmente registre el nmero de hojas (promedio)
por plntula contra el tiempo que dura el ensayo. Compare los valores
obtenidos entre replicas y saque conclusiones.
4.3.3 Iniciada la germinacin haga observaciones del desarrollo fsico y apariencia
de las plntulas en cada replica y establezca conclusiones.
4.3.4 Tabule y grafique todos los datos registrados y finalmente analice
crticamente los resultados obtenidos. Que conclusiones puede plantear.
4.3.5 Investigue acerca de los principales factores que afectan el vigor de las
semillas y que fueron enunciados en la introduccin de la presente gua.
Especificaciones varias

Elija semillas cuyas caractersticas permitan un buen grado de confiabilidad

para la prueba.
Proporcinele a la semilla las condiciones ambientales, biolgicas y de sustrato
apropiadas, que le permitan medir los parmetros a evaluar.
El monitor del rea har observaciones frecuentes sobre el seguimiento de su
prctica y verificar su ejecucin.
Presente informe final de la prctica pasados 35 das contados a partir del
momento del montaje del ensayo.

BIBLIOGRAFIA
AGUIRRE R., PESKE T. S., 1.992. Prueba de tetrazolio en Manual para el
beneficio de semillas, Centro Internacional de Agricultura Tropical, CIAT.

BECK, J.M., 1969. Systems for controlling relative humidity and temperature.
Proceedings, short course for seeds men, seed technology laboratory, Mississippi
State University, Mississippi State.
Centro internacional de Agricultura Tropical (CIAT), 1983. Desarrollo y morfologa
de la semilla. Gua de estudio. Cali, Colombia.
GARAY, A. y Col, 1992. Tecnologa poscosecha para pequeas empresas de
semillas. Centro internacional de Agricultura Tropical (CIAT). Cali, Colombia.
SNCHEZ, D. 1991. Vigor de las Semillas, trabajo presentado en el primer
curso FAO/ Noruega en Tecnologa de Semillas de Cultivos de la Zona Andina.
Quito, Ecuador.
www.puc.cl/sw educ/cultivos legumino/frejol/vainas.htm