UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSE DE CALDAS

FACULTAD DE CIENCIAS Y EDUCACION

PROYECTO CURRICULAR DE LICENCIATURA EN BIOLOGIA
BIOTECNOLOGA
JENNIFFER LOMBANA HERNNDEZ 20121140078
JUAN GUILLERMO TOVAR SALAMANCA 20072140056
GABRIEL FELIPE ANGULO LPEZ 20111140003
RESUMEN
El estudio de la sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previos para la
eficacia in vivo de un tratamiento antibitico. Para este estudio se us el
extracto de Gnaphalium pellitum, especie cuyo genero ha demostrado usos
medicinales y potencial farmacolgico en diversas aplicaciones, una de ellas la
actividad antimicrobiana. Se prepar un extracto por destilacin y se midi la
actividad antibacterial para E. coli (Gram -) y B. suptilis (Gram +),
comparndola con un antibitico que se utiliz como control, dicloxacilina. De
acuerdo a los resultados encontrados es posible determinar una actividad
antibacterial de G. pellitum especfica para bacterias Gram positivas,
demostrando su potencial farmacolgico, por lo que se requieren estudios
especficos para establecer el principio activo que acta como inhibidor de este
tipo de bacterias.
Palabras clave: G. pellitum, actividad antimicrobiana, bacterias.
ABSTRACT
The study of in vitro sensitivity is one of the prerequisites for the in vivo
efficacy of antibiotic treatment. For this study Gnaphalium extract pellitum,
species whose gender has proven medicinal and pharmacological potential in
various applications, one of which was used antimicrobial activity. A sample
was prepared by distillation and antibacterial activity for E. coli (Gram -) was
measured and B. suptilis (Gram +), compared with an antibiotic was used as
control, dicloxacillin. According to the results may determine a specific
antibacterial activity of G. pellitum for Gram positive bacteria, demonstrating
its pharmacological potential, so research is needed to establish the active
ingredient that acts as an inhibitor of this type of bacteria.
Keywords: G. pellitum, antimicrobial activity, bacteria.

INTRODUCCIN
El estudio de la sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previos para la
eficacia in vivo de un tratamiento antibitico. Tambin es importante para
realizar estudios sobre la evolucin de las resistencias bacterianas que permite
revisar los protocolos de la antibioticoterapia emprica. Las pruebas de

sensibilidad bacteriana se llevan a cabo mediante el antibiograma que sirve

para medir la sensibilidad de una cepa bacteriana a uno o varios antibiticos
dichas pruebas con estrategias para detener la expansin a la resistencia
bacteriana. En esta prctica de laboratorio se plantea que el extracto de la
planta Gnaphalium pellitum podra tener xito en la actividad de crecimiento
de la poblacin bacteriana tanto de E. coli (Gram negativas) como de basidios
(Gram positivas) contraponindolo con la reaccin frente a un antibitico de
venta comercial (Dicloxacilina).
La determinacin de la Concentracin Mnima Inhibidora (CMI) es la
medida de la sensibilidad de una bacteria a un antibitico. Es la mnima
cantidad de antimicrobiano que es capaz de impedir el crecimiento de un
microorganismo en unas condiciones normalizadas. Es el mtodo habitual
utilizado en los laboratorios de Microbiologa Clnica. Para llevarlo a cabo es
necesario utilizar cepas control (de referencia) con el fin de que los resultados
sean reproducibles y comparables. Este mtodo nos ofrece informacin sobre
la sensibilidad de las bacterias S (sensible) si existe una buena probabilidad de
xito teraputico en el caso de un tratamiento a la dosis habitual, I
(intermedia) cuando el xito teraputico es imprevisible y R (resistente) si la
probabilidad de xito teraputico es nula o muy reducida. (Picazo, J. 2000)
Existen diferentes tcnicas de laboratorio que permiten medir o calcular de
forma rutinaria, y de manera semicuantitativa, las CIM (mtodos manuales y
mtodos automatizados o semiautomatizados) (Picazo, J. 2000)
El gnero Gnaphalium conocido popularmente como vira-vira es ampliamente
reconocido por sus propiedades antineoplsicas y se usa en su mayora para
tratar problemas de la prstata, por lo cual es de gran relevancia su estudio
fitoqumico y se hace interesante indagar acerca de sus propiedades en pro de
la salud humana. (Alarcn, I & Hernndez D, 2013) Es una planta herbcea, se
caracteriza por tener un tallo carnoso, no leoso, perenne, puede medir hasta
50 cm de altura, posee tallos radiculares, es vellosa e intensamente aromtica.
Las hojas son oblongas, de unos 5 cm de longitud, gruesas y de color verde.
Las flores son amarillentas y ssiles (flores sin peciolo o pednculo, adheridas
directamente al tallo), y se agrupan en captulos reunidos en racimos. El fruto
es un vilano. (Alarcn, I & Hernndez D, 2013)
El frmaco dicloxacilina es un antibitico en polvo cristalino de tipo
semisintetico, posee dos grupos capaces de donar hidrogenos (el grupo
carboxlico y la seccin amidica enlazada a la cadena unida al anillo). Tiene un
alto punto de ebullicin debido a la presencia de la amida y el grupo carboxlico
la cual origina diferentes interacciones como lo son los enlaces de hidrogenos y
dipolo-dipolo. Se utiliza en el tratamiento de ciertos tipos de infecciones
bacterianas.
MATERIALES Y METODOS

Se aislaron tres muestras de agar nutritivo, estas se dejaron en reposo para

realizar la prctica de actividad antimicrobiana colocamos los mecheros y
realizamos la inoculacin de las bacterias con el asa esterilizada, de acuerdo a
la escala de turbidez de McFarland, que se determin cualitativamente como 5.

Con los mecheros encendidos, tomamos las tres cajas de Petri y con ayuda de
un hisopo expandimos las bacterias encima del agar, dos con bacterias Gram
positivas (Bacillus suptilis) y uno con Gram negativas (Escherichia coli).

En una hoja de papel dibujamos el contorno de la caja de Petri y realizamos

unas lneas formando una cruz la cual nos sirvi de gua para realizar cuatro
agujeros donde se coloc el agente antimicrobiano que se deseaba estudiar,
esto se hizo en las tres cajas con ayuda de una pipeta vieja la cual se puso a
calentar para despus realizar los agujeros. Finalmente se retir el sobrante.

Para el sello de cada uno de los pozos (esto evita que el inoculo no se
distribuya por la parte expuesta del vidrio), tomamos con una micro pipeta y
agregamos 20 l del mismo agar en cada uno de los orificios.
Se clasifican las tres cajas de Petri, en la primera se sembraron bacterias gram
positivas, lleva el extracto de Gnaphalium pellitum al igual que la segunda que
tena bacterias Gram negativas. La tercera caja con bacterias Gram positivas
fue la que contuvo el antibitico, en este caso fue dicloxacilina.
Cada uno de los orificios se clasifica por la cantidad de extracto o antibitico
que se le aplic el primero fue de 10 l, el segundo de 20 l, el tercero de 30 l
y el ltimo de 50 l. Para finalizar, se colocaron las tres cajas una sobre otra y
cerrando con papel vinipel, para que permanecieran durante un da en la
incubadora.
Luego de 24 horas se realiz la observacin de las cajas de Petri, tomando las
medidas de los halos formados por los agentes antimicrobianos alrededor de
cada uno de los orificios, tomando las fotografas correspondientes

RESULTADOS

Figura 1. GRAM NEGATIVA CON EXTRACTO DE Gnaphalium pellitum.

Datos 24 horas despus de la siembra.
Medidas

10
0 mm
20
2,4 mm
30
3,7 mm
50
4,6
mm

CLn

2,302
2,995
3,401
3,912

Cuadra
do del
halo
0mm
5,76mm
13,69m
m
21,16m
m

Tabla 1. Cuadrado de los valores de cada halo Versus la

concentracin en Ln de extracto en Gram negativa
Y=0,072x + 2,416
X= (ln50) 2,416
0,072
X= 20,63

C ln Gram C ln Gram -

Linear (C ln Gram - )

f(x) = 0.07x + 2.42

Grafica 1. Tendencia de crecimiento entre la Concentracin en Ln del

antibitico en bacterias gram -, en relacin con el diametro de cada halo

Figura 2. GRAN POSITIVAS CON EXTRACTO DE Gnaphalium pellitum,

datos 24 horas despus de la siembra
Medidas

10
20
30
50

C ln

2,302
2,995
3,401
3,912

cuadra
do del
halo
0,36
0,49
0,64
1,44

0.6 mm
0,7 mm
0,8 mm
1,2 mm

Tabla 2. Cuadrado de los valores de cada halo Versus la

concentracin en Ln de extracto en Gram positivos
Y=1,230x + 2,251
X= (ln50) 2,251
1,230
X= 1,35

C ln Gram +
C ln

Linear (C ln )

f(x) = 1.23x + 2.25

Grafico 2. Tendencia de crecimiento entre la Concentracin en Ln del

antibitico en bacterias Gram +, en relacin con el diametro de cada halo.

Figura 3. ANTIBITICO CON EXTRACTO DE Gnaphalium pellitum, Datos

24 horas despus de la siembra
Medidas

10
20
30
50

cuadrado
del halo
9,2
13,4
13,7
15,3

C ln
2,302
2,995
3,401
3,912

9,2 mm
13,4 mm
13,7 mm
15,3 mm

Tabla 3. Cuadrado de los valores de cada halo Versus

la concentracin en Ln de extracto en antibiotico
dicloxacilina

C ln antibiotico
C ln

f(x) = 0.25x - 0.08

Linear (C ln )

Grafica 3. Tendencia de crecimiento entre la Concentracin en Ln del

antibitico, en relacin con el diametro de cada halo

Actividad Antibacteriana Relativa en Gram negativa

C50 muestra x 100
C50 patrn

20, 63 x100 = 129,42

15,94

Actividad Antibacteriana Relativa en Gram positiva

C50 muestra x 100
C50 patrn

1,35 x 100 = 8,47

15,94

DISCUSIN DE RESULTADOS
El gnero Gnaphalium comprende ms de 1.300 especies de las cuales solo un
poco ms de un centenar han sido aceptadas como parte del gnero. Algunas
de stas son conocidas y hacen parte de la cultura gastronmica y medicinal
de pueblos orientales como la China (Ramrez y Mojica, 2014), adems muchas
especies del gnero Gnaphalium (familia Asteraceae) han sido usadas en la
medicina tradicional para el tratamiento de muchas enfermedades
respiratorias como la gripe, asma, tos, bronquitis y afecciones bronquiales
(Aguilar; et al, 1994). Aun as, los estudios de este gnero de plantas son
escasos a la fecha.
Algunos estudios han demostrado que especies de este gnero pueden
presentar propiedades como actividad citotxica frente a clulas tumorales
humanas por parte de Gnaphalium spicatum (Callacondo; et al, 2008);
actividad antibacteriana de Gnaphalium stramineum (Cceres; et al, 1990) y
Gnaphalium polycephalum (Ramrez y Mojica, 2014), pero ninguno acerca de la
actividad antibacteriana de Gnaphalium pellitum.
Al comparar los resultados obtenidos entre los halos formados por el extracto
de G. pellitum y el antibitico utilizado, podemos observar que la actividad
antibacterial que tiene el extracto de esta planta es mayor que la del
antibitico utilizado (dicloxacilina) en una cantidad de casi el 30% para la E.
coli (Gram -), mientras que es inferior a un 10% en B. suptilis (Gram +).

Aunque han existido avances en el estudio de los usos farmacolgicos,

especficamente las propiedades antibacteriales del gnero Gnaphalium,
podemos afirmar que la especie G. pellitum tiene un potencial para el
tratamiento antibacterial, especficamente de bacterias Gram negativas, pero
se requieren estudios posteriores para determinar las sustancias de la planta
que poseen este principio.

REFERENCIAS

AGUILAR A, CAMACHO, P, CHINO, S, JACKEZ P, LPEZ, M. (1994) Herbario

Medicinal del Instituto Mexicano del Seguro Social. Informacin
Etnobotnica. Mxico DF: Instituto Mexicano del Seguro Social.
ALARCN, I & HERNNDEZ D, (2013) EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD
ANTIOXIDANTE Y CITOTXICA EN HOJAS E INFLORESCENCIA DE
Gnaphalium Meridanum (Gnaphalium cf. Polycephalum Michx.)
Universidad De Ciencias Aplicadas Y Ambientales U.D.C.A Grupo De
Investigacin De Productos Naturales PRONAUDCA Bogot D.C.
Colombia.
CCERES, A; CANO, O; SAMAYOA, B; AGUILAR, L. (1990). Plants used in
guatemala for the treatment of gastrointestinal disorders. 1. Screening of
84 plants against enterobacteria. Journal of Ethnopharmacology. Vol.30.
CALLACONDO, D; QUISPE, A; LINDO, S; VAISBERG, A. (2008). Actividad
citotxica del extracto etanlico de gnaphalium spicatum keto keto en
cultivos de lneas celulares tumorales humanas. Rev. per. med. exp.
salud publica v.25 n.4 Lima.
PICAZO,
J
(2000)
Procedimientos
en
Microbiologa
Clnica
Recomendaciones de la Sociedad Espaola de Enfermedades Infecciosas
y
Microbiologa
Clnica.
(Consultado
en
lnea:
http://campus.usal.es/~micromed/Practicas_odontologia/unidades/bibliog
rafia/sensibilidad.pdf)
RAMREZ, Y; MOJICA, D. (2014). ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE
EXTRACTOS
DE
GNAPHALIUM
POLYCEPHALUM
MICHX
CONTRA
STAPHYLOCOCCUS AUREUS, ESCHERICHIA COLI Y PSEUDOMONAS
AERUGINOSA. Revista de Investigacin en Salud Universidad de Boyac.
Vol. 1, num. 1.