TEMA 1:

METODOLOGA ANALTICA

1.1. INTRODUCCIN
Qumica analtica: estudia el conjunto de principios, leyes y trminos cuya finalidad
es la determinacin de la composicin qumica de una muestra natural o artificial. Est
e
conjunto de leyes y trminos utilizados para dicho fin, constituyen el anlisis qumic
o.
La qumica analtica se divide en dos ramas principales:
- Cualitativa . Qu hay ?
- Cuantitativa . En qu cantidad ?
El anlisis cualitativo determina que tipo de elementos o grupos qumicos se
encuentran en la muestra analtica.
El anlisis cuantitativo se refiere a la determinacin de las cantidades de los mism
os
en la muestra.
Sern pues, mtodos de la qumica analtica, aquellos procedimientos que permitan
conseguir los fines de determinacin e identificacin.

1.2. PROCESO ANALITICO

El proceso analtico sigue una secuencia lgica de etapas:

1.2.1. Planteamiento del problema

Un primer paso que debe preceder al mtodo analtico, es una definicin clara
del problema analtico, de manera que, el mtodo de trabajo seleccionado dependa de
la
respuesta a las siguientes cuestiones:
a) Intervalo de concentracin de trabajo:
Puede limitar el nmero de mtodos posibles.
A menor concentracin ms sensible a de ser el mtodo empleado.

b) Qu grado de exactitud se requiere ?

Es preciso tener en cuenta que el tiempo necesario para llevar a cabo un
trabajo, aumenta de forma exponencial con la exigencia de mayor
exactitud, as, para mejorar la fiabilidad de un resultado desde, por

ejemplo (desde un 2 % hasta un 0 2 %), el tiempo consumido por el

analista puede aumentar en un factor de 100 o ms, lo que implica que, el
nivel de exactitud exigido, con frecuencia, determina el proceso analtico a
seguir.

c) Qu otros componentes hay en la muestra ?

Para elegir un mtodo de determinacin de una ms especies, es necesario
saber, que otros compuestos lo acompaan, a fin de identificar ciertas
interferencias, es posible que tengamos una muestra a parte de preguntar A
y B, es necesario C.

d) Qu propiedades fsico-qumicas tiene la muestra ?

El qumico tambin debe considerar el estado fsico de la muestra para
determinar se debe homogeneizarla, o si puede alterarse su composicin en
las condiciones de laboratorio, as como, el tratamiento ms adecuado para
su disolucin sin prdida de analito.

e) Cuntas muestras se analizan ?

Es un importante criterio en la seleccin de un mtodo, ya que:
- Para un gran nmero de muestras se puede emplear un tiempo
considerable. El coste de estas operaciones se repartir entre todas
las muestras.
- Para un nmero reducido de muestras, ser menos costoso un
procedimiento ms largo y tedioso, que suponga un mnimo de estas
operaciones.

Ejemplo:
Dos clientes, quieren determinar el porcentaje de Hg en la muestra de cada
uno:
A . Quiere conocer con gran exactitud el contenido en Hg en un cargamento de
mineral donde Hg es compuesto mayoritario, por lo que, podr proveer al laboratori
o muestra
en cualquier proporcin.
B . Contenido en Hg en una moneda antigua con Hg a un nivel de ppm, exigiendo
que no sea daada la moneda.

An cuando el problema es el mismo, el mtodo analtico tendr grandes diferencias:

A . Podrn utilizarse mtodos gravimtricos muy exactos, pero que destruyen la

muestra.
B . Ser necesario someter la muestra a un bombardeo de e- , seguido de
espectroscopia con rayos ., de manera que no se destruya la muestra, aunque el mt
odo es
muy costoso.

1.2.2. Obtencin de la muestra para el anlisis

Muestra: porcin pequea seleccionada para su examen, de una cantidad de
material que es mucho mayor.
A la hora de recoger la muestra es de especial atencin que esta sea
representativa de una mucho mayor. Su composicin debe reflejar lo mejor posible u
na
porcin representativa de todo el material.
Dentro de la muestra se hayan distribuidos constituyentes, es decir, las
sustancias que trataremos de determinar. Segn el porcentaje de estos en la muestr
a, hablamos
de:
-

Constituyentes
Constituyentes
A nivel traza:
Ultratrazas: a

principales: > al 1% del total.

secundarios : (0 1
1) % del total.
< al 0 1% del total.
nivel de ppm.

La cantidad disponible de un constituyente para un procedimiento analtico elegid

o,
depende tanto del nivel del constituyente como del tamao de la muestra. As, segn el
tamao de la muestra sea macroscpica, semimacroscpica, semimacroscpica, microscpica,
submicroscpica o ultramacroscopica, las cantidades del constituyente se hacen cad
a vez
menores .. se utilizan tcnicas analticas cada vez ms sofisticadas.

Mtodo
Peso de muestra (mg)
Volumen de muestra (ml)
Macroanlisis
> 100
> 10
Semimicroanlisis

10
1

100
10

Microanlisis
1

10

0 1

Ultramicroanlisis
< 1
< 0 1

Muestreo: proceso por el cual se obtiene una fraccin representativa siendo a men
udo
esta etapa la ms difcil de todo el procedimiento analtico, y la que limita la exact
itud de todo
el procedimiento.
Conceptos:
- Lote: material completo del que se toman las muestras. Ej.: todo el agua de
un lago.
A menudo, los lotes estn formados por unidades mustrales. Ej.: Cajas
individuales de un camin.
- Muestra Bruta: se obtiene del lote para anlisis o almacenamiento. Suele
seleccionarse de modo que sea representativa del lote y su eleccin es
crtica para realizar un anlisis vlido. De la muestra bruta se toma una
muestra de laboratorio.
- Muestra de laboratorio: ms reducida. Debe tener exactamente la misma
composicin de la muestra bruta. Para realizar los anlisis individuales se
emplea alicuotas o porciones de prueba de la muestra de laboratorio.

La identificacin de la poblacin de la que debe obtenerse la muestra es inmediata,

mientras que la obtencin de la muestra bruta, muestra de laboratorio, no son senc
illas, y
pueden requerir ms esfuerzo e ingenio que cualquier otra etapa del esquema genera
l de todo
el anlisis.
Cuando las muestras son homogneas (igual composicin en todas sus partes), la
variacin en los resultados debe reflejar solamente, la habilidad del analista y l
a variabilidad
inherente del mtodo.
En la realidad las muestras suelen ser heterogneas (distinta composicin en sus
partes), con lo que el problema se complica en gran medida. Cuando se analiza un
material
heterogneo, el resultado final depende de la forma en que se elijan las muestras
del material,
y de cmo se trate la muestra una vez colectada.
En cuanto a las estrategias de muestreo:
- Muestreo de caso homogneo: situacin ms fcil. Una vez obtenido, este
se divide en unidades, y aleatoriamente se analizan distintas unidades.
Se obtienen resultados ms precisos si se mezclan la n unidades, y se
realizan n anlisis de los grupos mezclados, que analizando las n unidades
separadamente.

- Muestreo de caso no homogneo: tomamos varias muestras de cada uno de

los estratos, y de cada una de ellas tomamos otro par, se mezclan y as se
obtiene la muestra representativa para el anlisis.

De modo general, se describen algunos de los mtodos de slidos, lquidos y gases:

1. Muestreo de Slidos:
Slido en fragmentos o partculas: si las muestras consisten en lotes discretos
se toman cogiendo una seleccin aleatoria de dichos lotes. Cuando existen
variaciones dentro de los lotes porque ha tenido lugar una estratificacin o
segregacin durante el transporte. Ej.: Un vagn con carbn en el que las
partculas pequeas se depositan en el fondo. Se toma una muestra
representativa del lote, o bien se convierte este lote en una corriente de
material, tomndose las muestras aleatoriamente.
Slido en forma compacta: las muestras de metales y aleaciones se obtienen
por limaduras, trituracin o taladro. En general no es seguro suponer que todos
los trozos de metal obtenidos de la superficie son representativos del total, po
r
lo que se debe muestrear el interior del slido.
En el caso de barras o lingotes, se puede serrar la pieza, y tomar el serrn
acumulado, o bien, se puede taladrar al azar, tomando como muestras las
virutas formadas. El taladro debe atravesar el bloque o llegar a la mitad desde
los lados opuestos.

2. Muestreo de Lquidos:
Homogneos: se toman aleatoriamente distintas muestras como en el caso de
los slidos.
Con materiales en suspensin: se pueden tomar muestras a distintas
profundidades manteniendo en constante agitacin el conjunto.
Frecuentemente se utiliza una sonda llamada ladrn toma muestras , la cual se
sumerge a la profundidad que se desee y se habr para recoger la muestra. De
esta forma se pueden obtener muestras a distintas profundidades, y por mezcla
de todas ellas obtener una muestra representativa, ya que a veces es difcil la
agitacin.

3 Muestreo de gases:
Gas libre en gran cantidad: llenar un tubo con el gas con desplazamiento del
aire que en principio contienen estos recipientes, que despus se cierran por
medio de llaves o sellando sus extremos.
Gas de forma inaccesible al operador: ej.: muestra de gases existente en un
horno o en una tubera: s prctica un orificio en las paredes del horno, y se
introduce en el un tubo provisto de una camisa de refrigeracin que conduce el
gas al aparato de anlisis (anlisis automtico), o que el gas valla a una ampolla
que va a contener la muestra.

4. Errores de muestreo
Los grandes errores son debidos con ms frecuencia a un muestreo incorrecto que a
una aplicacin del mtodo no adecuado.
Entre los qumicos analticos, existe un dicho popular: A menos que se conozca con
certeza la historia completa de una muestra cualquiera, el analista har bien en n
o perder su
tiempo analizndola .
La libreta del analista debe contener informacin de cmo se colecta y almacena la
muestra, antes de describir como se realiza el anlisis.
Las causas ms frecuentes de error son:
- Que el material se encuentre estratificado y la toma que se realiza no tenga
en cuenta la disposicin de los estratos, es decir, que no estn
proporcionalmente representados.
- Que la propiedad analtica que se mida, vare de forma no uniforme desde
la superficie hasta el centro.
- Que en emulsiones o suspensiones durante el transporte se produzca una
separacin de partculas, no siendo posible agitar todo el volumen para
obtener una muestra homognea.

Para errores aleatorios, la desviacin estndar global (S0), se relaciona con la

desviacin estndar del proceso analtico (Sa) y la desviacin estndar global del muestre
o
(Sm):

So2 = Sa2 + Sm2

En la mayora de los casos la varianza del proceso analtico (Sa2) se conoce a parti
r de
medidas repetidas sobre una nica muestra de laboratorio, por lo que, Sm se puede
calcular a
partir de medidas de So, de una serie de muestras procedentes de distintas muest
ras brutas.
Younden, demostr que cuando la incertidumbre de la medida Sa es menor que un
tercio de la incertidumbre del muestreo (Sm), no tiene sentido mejorar la incert
idumbre de la
medida.

Ejemplo:
Sm = 10%
- S Sa = 5% :
So = ( 0 12 + 0 052 )0 5 = 0 11 = 11%
- S Sa = 1% :
So = ( 0 12 + 0 012 )0 5 = 0 10 = 10%

1.2.3. Preparacin de materiales

La palabra reactivo se refiere a la sustancia o mezcla qumica usada para un props
ito
determinado en un procedimiento de anlisis.
En la mayora de laboratorios lo normal es emplear reactivos de grado analtico,
reactivos de gran pureza en los que el nivel de impureza es muy bajo, variando e
ntre ( 10-2 10-4 ) % , ya que la presencia de impurezas puede tener efectos serios en el anli
sis. Sin
embargo, es ms importante preocuparse del ingrediente activo utilizado, es decir,
la riqueza
de un patrn determinado en la sustancia activa.
Otros factores que deben ser considerados en la preparacin de un reactivo analtic
o
disuelto, son su exactitud y su estabilidad.
Para muchas aplicaciones no es necesario preparar una solucin con gran exactitud
.
Ej.: Reactivo en exceso, mientras que por ejemplo, en valoraciones la incertidum
bre no debe
ser mayor al 0 1 %.
En cuanto a la estabilidad, algunas soluciones de reactivos se descomponen en
cuestin de horas, por lo que, deben ser preparadas justo antes de su empleo mient
ras que
otras son estables durante aos.

Antes de llevar a cabo un anlisis se debe tener confianza en el procedimiento. P

ara
ello el procedimiento completo se ha de llevar a cabo mediante estndares de refer
encia,

similares en composicin a la muestra desconocida, y adems contienen una cantidad

exactamente conocida del constituyente a ser determinado.

1.2.4. Tratamiento de la muestra

Antes de llevar a cabo el anlisis es necesario homogeneizar la muestra bruta si
se
trata de un lquido, un polvo fino o una suspensin puede ser suficientemente homogne
a para
obtener de ella una muestra de laboratorio.
Si es un slido debe pulverizar a fin de que la muestra de laboratorio tenga la m
isma
composicin que la muestra bruta. Para ello se utiliza un mortero o molino de bola
s.
Antes del anlisis, los slidos suelen secarse a 110 C para eliminar el agua absorbi
da,
aunque en algunos casos este no es efectivo, y en otros se producen cambios en l
a
composicin de la muestra por efecto del calor. Una vez obtenida la muestra le lab
oratorio, se
disuelve para realizar el anlisis. Si la muestra no se disuelve en condiciones mo
deradas, ni
con ataques de reactivos diluidos o en condiciones de T moderada, puede recurrirs
e a la
digestin cida o a la fusin.
Los reactivos ms comunes para atacar muestras, son los inorgnicos ( HCl, HNO3) y
menos frecuente disoluciones de amoniaco y de hidrxidos de metales alcalinos.
El amoniaco concentrado mas calor, disuelve todos los metales excepto al cromo
y
aluminio, que s pasiban por la formacin de un xido superficial. Tampoco disuelve
reacciones que contengan Sn, Sb W. Muchas sustancias comunes como Si, ciertos xid
os
minerales y algunas aleaciones no se disuelven en los reactivos acuosos que acab
amos de
indicar. En este caso esta indicado el recurso de la fusin con sales slidas. Para
ello la
muestra, una vez reducida a polvo fino, se mezcla ntimamente con un exceso de una
s 10
veces de fndente, calentando hasta la fusin. Las Tas oscilan entre 300 y 1000 C,
obtenindose un producto soluble en agua, llamado fundido. Sin embargo, en la medi
da de lo
posible debe evitarse utilizar este mtodo, debido a los inconvenientes que se pla
ntean:
1. Contaminacin de la muestra con las impurezas del fndente.
2. Las disoluciones acuosas resultantes tienen alto contenido en sales que puede
n
crear dificultades en las siguientes etapas del anlisis.
3. Las altas Tas necesarias para una fusin aumentan el peligro de prdidas por
volatilizacin
4. l fndente ataca el recipiente donde se realiza la fusin, con lo que se produce
una nueva fuente de contaminacin de la muestra.

Por otra parte, la materia orgnica a veces debe destruirse a fin de liberar los
elementos inorgnicos para su anlisis. Ej.: (determinacin de Mg en vegetales).
El proceso de mineralizacin de la muestra se lleva a cabo por dos vas:
1. Mineralizacin hmeda u oxidacin hmeda utilizando agentes oxidantes lquidos
(HSO4 , HNO3 , HClO4 . concentrado y en calor, reacciona explosivamente con
la materia orgnica).
Es posible realizar la mineralizacin hmeda a elevadas presiones, trabajando en
un autoclave a presiones de 100 atmsferas y Tas entre 250
300 C.
Como reactivos oxidantes (HNO3 , HNO3 + HCl)
Un procedimiento corriente de mineralizacin hmeda a elevada presin y T, se
basa en la descomposicin por microondas con HNO3 y otros cidos minerales
dentro de recipientes hermticos de tefln. La calefaccin se lleva a cabo en
hornos de microondas (especialmente diseados), obtenindose deficiencias
espectaculares en la mineralizacin.
2. Mineralizacin seca: calcinar el componente orgnico expuesto al aire o en
corriente de O2

1.2.5. Eliminacin de Interferencias.

En el anlisis qumico, la muestra muchas veces contiene especies que pueden interf
erir
en la determinacin de los analitos de inters, bien porque producen una seal indisti
nguible
del analito o bien porque la atenan, siendo preciso eliminarlas. Pocas tcnicas ana
lticas
estn libres de interferencias, por lo que , una etapa importante en la mayora de e
stos anlisis
es su eliminacin. La eliminacin de interferencias, puede llevarse a cabo de dos ma
neras:
- Qumicamente: usando agentes enmascarantes ( sustancia que reacciona con el
interferente para formar una especie que ya no intensifica la seal del analito).S
e
consigue mediante un ajuste pH , un cambio en el estado de oxidacin ...
- Fsicamente: separndolas previamente a la determinacin. Se realiza mediante
precipitacin, extraccin , cromatografa o destilacin.

Todos estos procesos tienen en comn la distribucin de los componentes de una

mezcla entre dos fases que despus se pueden separar mecnicamente.
En este captulo estudiaremos los mecanismos de separacin por precipitacin.

Separacin por Precipitacin.

Basadas en la existencia de grandes diferencias de solubilidad entre el analito
y sus
interferencias.
La posibilidad terica de este tipo de separacin, puede determinarse mediante
clculos de solubilidad, pero otros factores como la coprecipitacin, la excesivamen
te lenta
velocidad de precipitacin, o la dificultad para la floculacin de los precipitados
coloidales
pueden hacerla, inviable.
Algunos de los agentes precipitantes ms tiles se describen a continuacin:
a) Separaciones basadas en el control de la acidez:
En la prctica:
- Separaciones en disoluciones relativamente concentradas de cidos fuertes.
- Separaciones en disoluciones tamponadas a pH intermedio.
- Separaciones en disoluciones concentradas.

b) Separaciones de sulfuros a excepcin de metales alcalinos y alcalinotrreos.

La mayora de los cationes forman sulfuros poco solubles cuyas solubilidades
difieren mucho entre s, dado que es relativamente fcil controlar la solubilidad de
una disolucin acuosa por ajuste del pH. Las separaciones basadas en la formacin
de sulfuros insolubles han sido siempre muy utilizadas.

c) Otros precipitantes inorgnicos

No existen iones de uso tan general para separaciones, como los iones hidrxido y
sulfuro. Los iones cloruro y sulfato, son tiles por presentar un comportamiento
selectivo. As, el cloruro se utiliza para separar Ag de la mayora de otros metales
.
El sulfato se utiliza para aislar Pb, Sr, Ba.

d) Precipitantes orgnicos
Existen algunos reactivos tiles para aislar varios iones inorgnicos, algunos como
la dimetilgliocsima, que se caracteriza por su gran selectividad formando
precipitados con unos pocos iones. Otros como la 8-hidroxiquinoleina forman
compuestos poco solubles con muchos cationes.
En este caso puede conseguirse la selectividad necesaria para la separacin,
mediante el control del pH y la variabilidad de los productos de solubilidad de
sus

productos.

e) Separar iones de constituyentes presentes en

La separacin cuantitativa de un elemento traza
problemas incluso cuando no son importantes las
ellas destaca la sobresaturacin porque de esta
precipitado.

cantidades traza
por precipitacin presenta varios
prdidas por solubilidad. Entre
forma se retrasa la formacin del

Es difcil la coagulacin de pequeas cantidades de una sustancia dispersa en

forma coloidal. Adems es posible que una porcin apreciable del slido se pierda
en su manipulacin. (Ej.: (Trasvase y filtrado).
Para minimizar esto, se aade a la disolucin una cantidad de otros iones que
forman un precipitado con el reactivo. El precipitado del ion aadido se llama
colector, y arrastra de la disolucin la especie minoritaria de inters. (Ej.: Para
aislar una muestra de oxido de manganeso se aade una pequea cantidad de ion
frrico a la disolucin antes de aadir NH3 como agente precipitante. As, el FeOH
arrastra incluso pequeas cantidades de MnOH.
Un colector puede arrastrar a un constituyente traza, debido a que tienen
solubilidades parecidas, o bien, a fenmenos de coprecipitacin, y el colector no
debe interferir en la determinacin del elemento traza.

f) Separacin por precipitacin electroltica

Constituye un mtodo muy til para hacer separaciones. Mediante ella se asla en
una fase aparte, la especie ms fcilmente reducible (o bien oxidable, dependiendo
del componente), ya sea el componente deseado o no deseado de la mezcla.
En este sentido el ctodo de Hg ha encontrado una amplia aplicacin en la
eliminacin de muchos iones metlicos antes del anlisis. Por lo general los iones
metlicos ms frecuentemente reducibles que el Zn, se depositan fcilmente en el
Hg, quedando en disolucin iones tales como el Al, Be y metales alcalinos.

g) Otros mtodos
- Separacin por extraccin
Se basan en el diferente grado en que los solutos (tanto inorgnicos como
orgnicos), se distribuyen entre dos disolventes inmiscibles.
- Separaciones por intercambio inico
Se basan en que las interferencias o el analito, son retenidos en un slido
intercambindose por otros iones fijados previamente en l.

- Separacin de especies inorgnicas por destilacin

Tiene lugar cuando los coeficientes de particin son muy diferentes para
una sustancia entre la disolucin y la fase de vapor.
- Separaciones cromatogrficas
Aqu los componentes se reparten o distribuyen entre dos fases, una de las
cuales es mvil (puede ser un lquido, un gas, o un fluido supercrtico, que
fluye a travs de este lecho estacionario.

1.2.6. Medida (Determinacin propiamente dicha)

La parte de la medida en general significa la determinacin propiamente dicha. La

medida dar lugar a la cantidad precisa del constituyente buscado en la muestra. P
or ello
constituye el ncleo fundamental de un anlisis.
La eleccin del mtodo se hace entre una amplia variedad de tcnicas posibles.
Las categoras principales de determinaciones analticas son las siguientes:

1.) Determinacin gravimtrica

Se convierte el constituyente en una forma que se puede pesar con precisin.
2.) Determinacin volumtrica
Se hace reaccionar el constituyente en una razn estequiomtrica conocida y
precisa, con un reactivo estandarizado.
3.) Determinacin espectroscpica
Se somete el constituyente a la absorcin o emisin de radiacin
electromagntica.
4.) Espectroscopa de masa
Los constituyentes de la muestra se examinan en espectros de masas tras hacerlos
pasar por campos elctricos y magnticos.
5.) Determinacin electroqumica
El constituyente afecta al equilibrio redox en un electrodo adecuado, aqu se
realizan medidas de magnitudes elctricas como Voltios, Amperios, Capacidades,
Resistencias, etc.

6.) Determinacin cromatogrfica

Se separa el constituyente mediante el paso a travs de una columna y se
caracteriza mediante un detector.

7.) Determinacin radioqumica

Se determina el constituyente por medicin de la emisin de partculas o rayos .
por istopos inestables.

De todos estos mtodos, tenemos mtodos volumtricos y gravimtricos entre los

clsicos, y espectroscpicos, electroqumicos y cromatogrficos entre los instrumentales
.

1.2.7. Interpretacin y conclusiones

En la interpretacin de datos analticos, debemos distinguir dos aspectos:
El primero se refiere a la confiabilidad de las mediciones, y por tanto al nivel
de confianza
en los resultados, es decir, como de bien se produjo todo el proceso cualitativo
.
El segundo es la aplicacin de los datos confiables a la resolucin del problema, po
r
ejemplo, podemos deducir valores confiables de los resultados obtenidos para los
niveles
de cloruros de agua.
Sin una interpretacin y unas conclusiones, el anlisis qumico no debera realizarse,
pues solo constituira una mera recoleccin de datos y una prdida de tiempo valioso.

1.2.8. Acciones
Se incluye en esta etapa, ya que las conclusiones del proceso analtico completo
deben
conducir a una meta. Estos resultados pueden llevar a una mejora en los niveles
de
contaminacin ambiental o en la calidad de una manufactura, condena de un criminal
, entre
otros ejemplos.

TEMA 2:
TRATAMIENTO ESTADSTICO DE LOS RESULTADOS
ANALTICOS

2.0. INTRODUCCIN
La inferencia estadstica consiste en la obtencin de conclusiones a partir de un c
ierto
nmero de observaciones experimentales de acuerdo a unas hiptesis formalizadas y co
n unas
reglas de clculo objetivas, as mediante su uso se pueden investigar posibles tende
ncias en
los datos y aplicar criterios que permitan descubrir las causas de error no alea
torias, as
mismo, el tratamiento estadstico de una serie de experimentos planificados adecua
damente
que permitan ver la influencia de diversas variables con ms eficacia y menos trab
ajo que
mediante el mtodo tradicional de mantener constantes todas las variables excepto
una de
ellas y de su influencia y as una pro una cada variable sucesiva.
Es importante sealar que las tcnicas de la estadstica clsica son solo aplicables a
un
nmero infinito de observaciones, una situacin que difiere de ser la de una serie tp
ica de
resultados cualitativos (entre 2
5 repeticiones). Sin embargo, la propia estadsti
ca ha
realizado modificaciones para adaptar los conceptos a series pequeas de datos. En
este punto
se ha establecido lo que se llama Jerarqua metodolgica.
x1 (Resultado individual) . Una alicuota
.x (Media de n resultados) . n alcuotas (n < 30)
(Media de 8 resultados) . 8 alcuotas (n > 30)

2.1. TIPOS DE ERRORES EN EL ANLISIS CUANTITATIVO

Los anlisis cuantitativos juegan un papel predominante en cualquier laboratorio
analtico, por lo que, los errores que aparezcan en ellos son de gran importancia.
Nuestro principio, ser que no existen resultados cuantitativos vlidos sino van
acompaados de una estimacin de los errores inherentes a ellos, los cientficos
experimentales harn una distincin fundamental entre tres tipos de errores:

2.1.1. Errores Accidentados o Crasos

Estos errores son tan graves que no queda otra alternativa que abandonar el
experimento y empezar de nuevo.
Ejemplos: - Prdida de parte de la muestra
- Contaminacin de la muestra
- Avera de algn instrumento

Todos estos errores que ocurren, incluso en los laboratorios mejor controlados,
se
reconocen con mucha facilidad en consecuencias en el anlisis. Solo tenemos que di
stinguir
con detenimiento entre los errores sistemticos y aleatorios.

2.1.2. Errores Sistemticos o Determinados

Son aquellos que pueden determinarse y probablemente evitarse o corregirse. Afec
tan
al resultado, siempre en el mismo sentido, bien por exceso o por defecto. Su mag
nitud puede
ser constante para todas las muestras de una serie, o ser proporcional al tamao d
e la muestra,
o bien variar de un modo ms complicado, por ejemplo el error cometido al pesar un
a muestra
higroscpica, que es siempre positivo, ya que aumenta con el tamao de la muestra y
vara
con el tiempo que se emplea en la pesada, con la humedad atmosfrica y con la temp
eratura.
El error originado por la adsorcin en las columnas cromatogrficas es negativo (ads
orcin
irreversible.
Otros errores comunes de este tipo son causados por impurezas en los reactivos,
tambin por errores instrumentales, por ejemplo: mal calibrado de las balanzas, pH
-metros.
Errores de operacin, errores del mtodo, por ejemplo: coprecipitacin de impurezas,
solubilidad de precipitados, interferencias en la muestra.
Estos errores sistemticos o determinados, afectan a la exactitud del mtodo analtico
.

2.1.3. Errores aleatorios o indeterminados

Son errores fortuitos cuya magnitud y signo no pueden predecirse ni calcularse.
Son
producidos por el efecto de variables que no se pueden controlar, y se caracteri
zan porque se
presentan por exceso o defecto con igual probabilidad.
Se revelan por las pequeas diferencias en mediciones sucesivas efectuadas por el
mismo analista.
Producen este tipo de errores los pequeos cambios en la T, P, humedad del ambient
e,
fluctuaciones en el suministro elctrico, corrientes de aire a la hora de la pesad
a en balanzas
de precisin.
Estos errores afectan a la precisin de un experimento, y si se realiza un nmero
elevado de experiencias, la exactitud puede no resultar necesariamente aceptada.
Los errores sistemticos dan lugar a una prdida de exactitud pudiendo o no afectar
a
la precisin segn que dicho error sea constante o variable.

2.2. EXACTITUD Y PRECISIN

En anlisis cuantitativo de cualquier propiedad de la materia (peso, volumen, etc

.),
esta sujeto a cierto grado de incertidumbre, por lo que jams se podr conocer el ve
rdadero

valor de la magnitud. A lo que se aspira es a obtener una estimacin de la magnitu

d que sea
satisfactoria.
La exactitud es el grado de concordancia entre el valor medido y el valor real.
Como
nunca se conoce el valor verdadero absoluto, una definicin ms realista es la conco
rdancia
entre el valor medido y el valor real aceptado.
La precisin es el grado de concordancia entre replicas de mediciones de la misma
cantidad, es decir, es la repetibilidad de un resultado.
Es necesario distinguir entre repetibilidad y reproducibilidad, para hacer refe
rencia a la
precisin de un experimento:
- Repetibilidad: estimacin del grado de dispersin en una serie de replicas
de la misma cantidad. Son experiencias llevadas a cabo por un mismo
analista en un tiempo relativamente corto sin cambiar de instrumento ni de
material de laboratorio, y usando las mismas disoluciones.
- Reproducibilidad: mide el grado de dispersin entre series de resultados, o
sea, experiencias realizadas en ocasiones distintas con disoluciones
distintas y con material de laboratorio distinto.
Segn diferentes facetas, podemos calcular la reproducibilidad de distintas
formas.

La relacin entre precisin y exactitud puede visualizarse en la fotocopia de la Ta

bla 1
(desviacin estndar):

En esta fotocopia se observa como las medidas de una serie pueden ser muy preci
sas y
sin embargo poco exactas. La precisin no es garanta de exactitud, pero son necesar
ias
medidas precisas para conseguir exactitud. Con poca precisin difcilmente se tendr u
na
buena exactitud.

2.2.1. Maneras de expresar la exactitud

Existen varias maneras y unidades para expresar la exactitud de una medida. Sie
mpre
se supone que existe un valor verdadero para establecer la comparacin:

A.) Error Absoluto: diferencia entre el valor medido y el valor verdadero con
respecto al signo. Se expresa en las mismas unidades que la medicin.

Cuando el valor medido es el promedio de varias mediciones, el error se llama

error medio.
Aqu el trmino absoluto tiene un significado distinto al significado matemtico.
Es una magnitud ignorando su signo. Aqu error absoluto es la diferencia entre el
resultado experimental y su valor aceptado incluyendo su signo.

Ea = X1 - Xv Xv = verdadero valor
S xi
Ea = .X - Xv siendo .X = ...
N

B.) Error Relativo: error absoluto o medio expresado como % del valor verdadero:

Xi - Xv
ER = ..... 100

Xv

.X - Xv
ER = ..... 100
Xv

EJEMPLO: El resultado de una anlisis es de 2 52 gr. en comparacin con el valor

real que es 2 62 gr. Calcular Ea y ER :

Ea = 2 52 - 2 62 = - 0 1 gr.

2 52 - 2 62

ER = ....... 100 = 3 8 %
2 62

2.2.2. Maneras de expresar la precisin

A.) Desviacin estndar: medida ms medida de la variabilidad de un resultado. Se

define como la raz cuadrada de la suma de los cuadrados de las diferencias, entre
los valores
medidos individualmente y la media de las mediciones dividida por (N
1):

S (xi -.x)2 0 5
S = .......
N

Este parmetro proporciona una medida de la dispersin de un conjunto de resultados

alrededor del valor medio. Tiene las mismas unidades que los datos.
Al aumentar N, la cantidad (N
1) se acerca cada vez ms a N (poblacin), por lo que
,
no tiene trascendencia usar N N
1, en el clculo de la desviacin estndar. Aunque par
a
nmeros pequeos de observaciones (caso especialmente importante en Q. Analtica), la
distincin es significativa.

S (xi -.x)2 0 5
s = ......
N
Experimentalmente, la S de la muestra constituye una estimacin de la desviacin
estndar de la poblacin (s), que es la que se desea conocer. No se puede determinar
realmente un nmero infinito de mediciones. S se aproxima a s , cuanto mayor es el
tamao
de la muestra. Anlogamente, la media de la muestra, resulta ser una estimacin tant
o ms
exacta en la medida de la poblacin, cuanto mayor es el tamao de la muestra aleator
ia.
El cuadrado de la desviacin estndar, se denomina varianza (V = S2).

B.) Desviacin estndar relativa (DER): mejor medida de la precisin para fines
comparativos:

S
CV (coef. de variacin) = DER = ... 100
.x

Sus unidades son %, y es un ejemplo de error relativo, es decir, es una estimac

in del

error dividida por una estimacin del valor absoluto de la cantidad medida.
Los errores relativos se utilizan con frecuencia en la comparacin de las precisi
ones de
los resultados obtenidos y son importantes en el clculo de la propagacin de errore
s.

2.3. DISTRIBUCIN DE ERRORES

Aunque la S proporciona una medida de la dispersin de un conjunto de resultados
alrededor del valor medio, no indica la forma en que se encuentran distribuidos
los resultados.

Consideremos los resultados obtenidos en 50 determinaciones repetidas de la conc

entracin
de ion nitrato, dada con dos cifras significativas en una muestra concreta de ag
ua. (Tabla 2.2).

En estos grficos (figura 2.1.), las medidas quedan distribuidas en forma casi si
mtrica
en torno a la media, es decir, con las medidas agrupadas respecto al centro. Los
resultados
obtenidos en las medidas, constituyen una muestra finita de una poblacin, por lo
que,
presentan los valores discretos.
En teora, una concentracin puede tomar cualquier valor de manera que la
distribucin de la poblacin se ajusta a una curva continua. El modelo matemtico
habitualmente empleado es la distribucin normal o Gausiana descrita por la ecuacin
:

Exp. .- (x - )2 / 2s2.
Y = ..........
sv2.

Un anlisis un poco ms detallado demuestra que cualquiera que sean los valores de
s
y , aproximadamente un 60 % de los valores de la poblacin caen dentro de s de la m
edia,
cerca de un 95 % se ubican dentro de 2s de la media, y cerca de un 99 7 % se encue
ntran
dentro de 3s.
La distribucin normal no solo se obtiene cuando se realizan mediciones repetidas
de
una misma muestra, tambin los resultados obtenidos a menudo se adaptan a la distr
ibucin
normal cuando se mide la misma magnitud para diferentes muestras de la misma pob
lacin.

2.4. DISTRIBUCIN MUESTRAL DE LA MEDIA O ERROR ESTNDAR DE LA

........MEDIA
Hemos estudiado que la distribucin estndar se encuentra relacionada con el error
probable de cada observacin individual. Si de una poblacin infinita se toman diver
sas
muestras aleatorias, todas de n observaciones, los valores medios de los diverso
s grupos de n
observaciones, presentarn una cierta dispersin tanto menor cuanto mayor sea n.
En el limite cuando n tiende a infinito, la media de cada muestra tiende a la m
edia de

la poblacin (), entonces su dispersin tiende a cero.

La desviacin estndar de la media o error estndar de la media, es inversamente
proporcional a la raz cuadrada del nmero de observaciones:

sm = e.e.m. = ...
v n

2.5. APLICACIONES DE LA ESTADSTICA A LOS RESULTADOS ANALTICOS

2.5.1. Intervalos de Confianza

El intervalo alrededor de la media, determinada experimentalmente, dentro del c

ual
podemos encontrar la media verdadera con cierto grado de probabilidad, se denomi
na
intervalo de confianza, y los valores extremos de este intervalo son los limites
de confianza.
Podemos expresar los limites de confianza como:

t s
= .x ...
v n

Intervalo, limite de confianza

t : Student, depende del nmero de grados de libertad, en nuestro caso (n
l
grado de probabilidad (certeza o confianza) en nuestros resultados.

1), y e

Si suponemos que la distribucin es normal, entonces el 95 % de las distribucione

s
normales se encontrarn en el intervalo dada por:

s s
.x - 1 96 .. < < .x + 1 96 ..
v n v n

Tambin se utiliza con diferencia el intervalo de confianza al 99 % que viene dad

o
por:

s s
.x - 2'58 .. < < .x + 2'58 ..
v n v n

Los limites de confianza al 95 % para la concentracin de ion nitrato, se calcula

ran:

.x = 0'500
n = 50
s

S = 0'0165

0 0165 0 0165
0 500

1 96 .... < < 0'500 + 1'96 ....

v 50 v 50

= 0 500 0 0046 gr / m

A medida que el tamao de la muestra disminuye la incertidumbre al utilizar S par

a
aproximar s aumenta, y a fin de permitir usar S, la ecuacin usada para calcular l
os limites
de confianza se puede modificar como:

S
= .x t ..
v n

EJERCICIOS:
Se determin el contenido de ClNa de una muestra de orina, utilizando un electrod
o
selectivo de iones, obtenindose los siguientes valores:
102 mM, 97 mM, 99 mM, 98 mM, 101 mM, 106 mM
.x = 100 5 mM;
S = 3 27 mM;
n

1 = S; Nivel de confianza = 95 %; t = 2 57

3 27
= 100 5 2 57 .. . = (100 5 3 4) mM
v 6

Calcular los limites de confianza al 95 y 99 %, para la concentracin de iones de

sodio:
3 27
= 100'5 4'03 .. . = (100 5 5 4) mM

v 6

Los limites de confianza se pueden utilizar como una prueba para detectar error
es
sistemticos como se muestra en el siguiente ejemplo:
Se comprueba la escala de absorbancia de un espectrofotmetro a una . concreta,
usando un patrn que da una absorbancia de 0 47. Los valores determinados fueron 10,
de los
que se obtuvieron unos valores de: .x = 0 461 y S = 0 03. Calcular el intervalo de
confianza del 95 % de la absorbancia media y decir se existe un error sistemtico.

0 003
= 0 461 2 26 ... .
v 10

0 463
. = 0 461 0 002 Rango de trabajo obtenido
0 459

Esta fuera del rango 0 47, por lo que podemos decir que existe un error sistemtico
en
estas afirmaciones.

2.5.2. Rechazo de Resultados

Con frecuencia al efectuar una serie de replicas de anlisis, uno de los resultad
os
obtenidos ser muy distinto de los otros. A este valor se le conoce como valor anma
lo. Se
han sugerido diversas pruebas estadsticas para determinar si una observacin debe
rechazarse. Una de las ms correctas desde el punto de vista estadstico es la prueb
a de la
Qumica de Pixon. Para su clculo, se ordenan los datos en orden decreciente de su v
alor, y en
la relacin que se calcula como el cociente entre la diferencia entre el valor sos
pechoso y el
ms prximo a l dividido por el Ecubito, es decir, la diferencia entre el mayor y men
or
valor:
.valor sospechoso - valor ms prximo.
Q = ..................
.valor ms grande - valor ms pequeo.

La relacin Q experimental calculada se compara con los valores tabulados de Q

para un nivel de confianza determinado. Si la relacin calculada resulta mayor o i
gual que el
valor tabulado, se puede rechazar la observacin sospechosa.

Determinar la concentracin de nitrato (NO2-) en una muestra de agua, teniendo en

cuenta los siguientes resultados:

Anlisis

1
2
3
4
[NO2] gr/L
0 403
0 410
0 401
0 320

Determinar si el valor de 0 38 es rechazable segn el nivel de confianza del 95 %:

1.) 0 401; 0 403; 0 401; 0 320

.0 380

0 401.

2.) Q = ....... = 0 70

.0 410

0 320.

3.) 0 70 < 0 831 .. valor no rechazable

La prueba Q es bastante estricta, no es aplicable en el caso de series pequeas de

datos.
En una situacin ideal, habra que tomar nuevas medidas cuando aparezca un dato
sospechoso, sobre todo si se han tomado inicialmente pocos valores. Esto podra ac
larar si
debiera rechazarse o no el valor sospechoso, o si se debiera mantener. Tambin se
reducira su
efecto sobre la media y la desviacin estndar.
En el ejemplo anterior se aaden:

0 400; 0 413; 0 411; Se debera mantener el valor de 0 380?

.0 380 - 0 400.
Q = ........ = 0 606
.0 413 - 0 380.

Para n = 7 y 95 % de confianza, obtenemos una Q terica de 0 568 < Q calculada .

. s tendramos que rechazar 0 380

Es importante tener en cuenta, que para un nivel de confianza del 95 %, existe

un
50 % de riesgo de rechazar incorrectamente un valor sospechoso.
Cuando las medidas se repitan unas cuantas veces, lo que es normal en el anlisis
qumico, el rechazo de un valor origina una gran variacin sobre la media y la desvi
acin
estndar. Adems, debe evitarse el hecho de tomar tres medidas y rechazar la que ms d
ifiere
de las otras dos. En general, se puede demostrar que se obtiene una estimacin ms c
onfiable
de la media utilizando el valor que esta en medio de los otros tres, en lugar de
utilizar la
media de los dos que no fueron rechazados. Pueden presentarse tambin valores sosp
echosos
que pueden ser los dos prximos, o uno a cada extremo del intervalo de valores.

Esto origina una reduccin en el valor calculado de Q, ya que en el primer caso s

e
produce una reduccin del numerador, y en segundo un aumento del denominador. En e
ste
caso es necesario emplear una prueba para un par de valores anmalos.

B.) Otro criterio de rechazo (Test Tn)

.xq - .x.

Tn = .....
S

Rechazo sii Tn calculada > Tn terico

Ejemplo:
El anlisis de una muestra de calcita dio unos porcentajes de CaO de:
[CaO]
55 95
56 00
56 04
56 23

El ltimo valor parece anmalo, se puede rechazar?

0 15
Q = ... = 0 54 ; QTerica = 0 710 para nivel de confianza del 95 %
0 28

Como Q < Q terica . no se rechaza

Aplicar Test Tn a estos datos:

.x = 56 06
S = 0 107 para n = 6

56 23 - 56 06
Tn = ....... = 1 59
0 107

Para un 95 % de confianza, la Tn terica = 1 67

Como Tn terico es > Tn calculado . no se rechaza

2.5.3. Presentacin de los resultados

Como ya hemos sealado, los resultados experimentales carecen de importancia si n
o
van acompaados de una estimacin de los errores que han tenido lugar durante la med
ida. Es
casual citar la media como la estimacin de la cantidad medida, y la desviacin estnd
ar como
la estimacin de la precisin.
Menos frecuente es dar el resultado en la forma de los limites de confianza al
95 % de
la media.
ts
=.x ..
v n

Redondeo de la respuesta: el nmero de cifras significativas indica la precisin de

l
experimento. El nmero de cifras significativas es el nmero de dgitos que se necesit
an para
expresar cientficamente un valor sin prdida de exactitud.

Ejemplos:
142 7 .. 4 cifras significativas (1 427 102)
1 4270102 .. 5 cifras significativas
6 30210-6 .. 4 cifras significativas (0 000006302)
92500 .. Este es un caso ambiguo, porque segn como se exprese tendr diferentes
cifras significativas:
9 25104 .. 3 cifras significativas
92500 .. 9 250104 .. 4 cifras significativas
9 2500104 .. 5 cifras significativas

Los ceros son significativos cuando se localizan en medio de un nmero, al final

de un
nmero y a la derecha de la coma decimal. En los dems casos no son cifras significa
tivas.
Este nmero de cifras significativas en un anlisis est condicionado por la medida
menos exacta:
1 6235 63 = 75
2 cifras 2 cifras

En cuanto al redondeo se hace uso de las siguientes reglas:

Si la ltima cifra significativa es menor que S, esta no sufre modificacin.
Si es mayor que 5 se incrementa en uno.
Si es igual a 5 y no hay ms cifras significativas a continuacin o son cero, la ant
erior
aumenta en una unidad si es impar la que lo precede y no se modifica si esta es
par:
63 765 0 028 = 63 77 0 03
63 665 0 028 = 63 66 0 03
2.6. PROPAGACIN DE ERRORES

Una determinacin analtica requiere de ordinario la realizacin de varias operaciones

(pesar, pipetear, etc...) cada una de las cuales puede suponer la introduccin en
el anlisis de
un error sistemtico, y cada una est sujeta a errores aleatorios.
Se puede calcular el error que afectar al resultado final, a partir de los error
es que
afectan a cada uno de los datos experimentales de partida.
La naturaleza de los clculos para tener en cuenta los errores aleatorios y siste
mticos
es diferente, ya que no se propagan de igual manera. Esto se debe a que algunos
errores
aleatorios se compensan entre s, mientras que cada error sistemtico ocurre en un s
entido
definido y conocido.
Ejemplo:
Si el resultado final de un experimento Y viene dado por la suma A y B. Si A y
B
tienen un error sistemtico de +1, es evidente que el error sistemtico ser +2. Sin e
mbargo, si
A y B tienen un error aleatorio de 1, el error aleatorio de Y no es 2. Esto se de
be a que en
ocasiones el error aleatorio de A ser positivo, y el de B negativo o viceversa, s
iendo de
esperar que ambos errores se neutralicen en cierta extensin.

2.6.l. Propagacin de Errores Aleatorios.

Si se conoce la precisin de cada observacin se pueden usar reglas matemticas
sencillas para estimar la precisin del resultado final.
Reglas:
A.1.) Combinaciones lineales.
En este caso el valor final de Y se calcula a partir de una combinacin lineal de
medidas a, b, c, :
Y = x + ka a + kb b + kc c + ...
La varianza tiene la propiedad de que la varianza de una suma o diferencia de
cantidades independientes es igual a la suma de sus varianzas, es decir:

Var Y = Sy2 = (ka Sa)2 + (kb Sb)2 + (kc Sc)2 + ....

Sy = (ka Sa)2 + (kb Sb)2 + (kc Sc)2 + .... 0 5

Ejemplo:

En una valoracin la lectura final de la bureta es 3,51 ml y la inicial es 15,67 m

l.
Ambas con una desviacin estndar de 0 02 ml. Cul es el volumen de agente utilizado y
su desviacin estndar?
Vol. (utilizado) = 15 67 - 3 51 = 12 16 ml

S = [(0 02)2 + (0 02)2]0 5 = 0 028 ml

Como puede observarse la S del resultado es mayor que la de las lecturas indivi
duales
de la bureta. Incluso el volumen utilizado se calcula a partir de una diferencia
, pero es menor
que la suma de las desviaciones estndar.

A.2.) Expresiones multiplicatvas

Si Y se calcula a partir de una expresin del tipo:

k ab
Y = ... donde a, b, c, d son cantidades medidas independientemente y k
cd

es una constante, existiendo una relacin entre los cuadrados de las desviaciones
estndar
relativas:
0 5
Sy Sa 2 Sb 2 Sc 2 Sd 2
.. = .. + .. + .. + ..
Y a b c d

El rendimiento cuntico de la fluorescencia ., se calcula a partir de la expresin:

If = Intensidad de luz fluorescente (S = 2 %)

If Io = Intensidad de la luz incidente (S = 0 5 %)
. = .... k = Cte. del instrumento
k c l Io e e = Abructividad molar (S = 1 %)
c = Concentracin (S = 0 2 %)
l = Paso ptico (S = 0 2 %)

donde los parmetros se definen como una estimacin de las desviaciones estndar relat
ivas.

d.e.r = (22 + 0 22 + 0 22 + 0 52 + 12)0 5 = 2 3 %

Puede observarse que la d.e.r. del resultado final no es mucho mayor que la may
or de
todas las d.e.r., usadas para calcularla. Esto es fundamentalmente una consecuen
cia de elevar
al cuadrado las d.e.r., y explica una cuestin general, cualquier esfuerzo por mej
orar la
precisin de un experimento, debe dirigirse a mejorar la precisin de los valores me
nos
precisos.
Cuando una cantidad se eleva a una potencia (b3), el error no se calcula como p
ara
una multiplicacin (bbb), debido a que las cantidades implicadas no son independient
es.
Entonces, si Y = bA :

Sy
Sb
.. = n ..
Y b

A.3.) Otras funciones

Si Y es una funcin general de X (Y =
siguiente forma:

(x)) la S de X e Y, estn relacionadas de la

dy
Sy = Sx ..
dx

Ejemplo:
La absorvancia de una muestra est dada por A = - log (T), siendo T la
transmitancia. Si el valor medio de T = 0 501 con S = 0 001, calcular A y su desviac
in
estndar.
A = - log 0 501 = 0 300

dA - log e - 0 434 - 0 434

.. = ... = .... = .... = - 0 866
dT T T 0 501

- log e - 0 434
sA = sT ... = 0 001 .... = 0 0008
T 0 501

Es importante observar que para este mtodo experimental se pueden encontrar las
condiciones para que sea mnima la d.e.r.
100 sA 100 sT log e
d.e.r. de A = .... = ......
A T log T

Ejemplo:
La ecuacin de Nerst aplicada a un anlisis potenciomtrico es la siguiente:

R T E = potencial del electrodo

E = E + ... ln c E = potencial estndar del ion que
n F se determina
T = T absoluta
n = n de e- que participan en la
semiclula
c = [ ] del ion
R = Cte. de los gases
F = Faraday

Obtener una expresin para la d.e.r. de la [ ] suponiendo que T = 298 K y que no

tiene error. Calcular la d.e.r. s n = 1 y la S (E) = 0 001 voltio.
c = exponencial {40 n (E

E)}

dc
.. = 40 n exponencial {40 n (E

E)}

dE

sc = 40 n sE exponencial {40 n (E

E)} = 40 n c sE

sc 40 n sE (%)
La d.e.r. de c ser = 100 .. = 100 ...... .

c c

. d.e.r. (c) = 100 0 001 40 = 4 %

2.6.2. Propagacin de Errores Sistemticos

Se distinguen grupos en funcin de cmo se calcula el resultado final. El error
sistemtico y la desviacin estndar de un resultado se calcula mediante ciertas regla
s
sencillas:

B.1.) Combinaciones lineales

Si Y se calcula a partir de cantidades mediadas usando la expresin

y = k + ka a + kb b + ..., y los errores sistemticos de a, b, c, ... se calculan
como
incrementos (.a, .b, ...) podemos decir que:

. y = ka .a + kb .b + kc .c + ...
El error sistemtico total puede ser a veces cero (s se usa una balanza con un err
or de
- 0 01 gr para pesadas utilizadas en la preparacin de una disolucin estndar). Puesto
que el
peso del soluto se calcula por diferencia entre dos pesadas, se eliminan los err
ores
sistemticos.

B.2.) Expresiones multiplicatvas

ab
Si Y se calcula de la forma y = k .. , el error sistemtico relativo ser:
cd

.y .a .b .c .d
.. = .. + .. + .. + ..
y a b c d

Si se trata de una potencia:

Y = bn , error sistemtico relativo ser:

.y .b
.. = n ..
y b

B.3.) Otras funciones

Para y =

(x), el error sistemtico ser:

dy
.y = .x ..
dx

TEMA 3:
ANLISIS INSTRUMENTAL: CALIBRACIN

1. INTRODUCCIN
Los mtodos analticos se suelen clasificar en:
1. - Mtodos clsicos: en los mtodos clsicos de anlisis cuantitativo la cantidad
de analito se determina por medidas gravimtricas o volumtricas que son
ideales para anlisis de alta precisin, especialmente cuando se analiza un
nmero pequeo de muestras que son necesarias para el anlisis de materiales
estndar.

2. - Mtodos Instrumentales: utilizan un instrumento ms o menos complejo para

evaluar una propiedad fsica o fsico-qumica del sistema objeto de anlisis. Esta
definicin es un poco ambigua, pues no existe ningn anlisis qumico
gravimtrico o volumtrico que no recurra por una parte al examen de una
propiedad fsica como la precipitacin, cambio de volumen, y por otra parte que
no emplee algn artificio experimental (buretas). Adems actualmente la
instrumentacin se utiliza tambin para otras muchos fines, entre los cuales
cabe destacar aquellas que conducen a la morfologa y estructura de las
molculas.

En definitiva, las tcnicas instrumentales implican por una parte el estudio terico
de los principios fsicos y fsicos-qumicos de los mtodos utilizados, as como el
conocimiento de tamao, forma, estabilidad y estructura de las molculas; y por otra
parte
implican la descripcin y conocimiento de los componentes bsicos de los instrumento
s
empleados.

2. GRFICAS DE CALIBRACIN EN ANLISIS INSTRUMENTAL

Segn la ISO (International Stndar Office), la calibracin se define como el
conjunto de operaciones que permiten establecer en determinadas condiciones
experimentales, la relacin existente entre los valores indicados por el aparato,
con los
valores obtenidos en la medida de un valor conocido.
El procedimiento operatorio en anlisis instrumental para la calibracin es:
El analista prepara una serie de muestras (5 6) con [ ] conocidas de analito, y
las
mide en el instrumento en iguales condiciones y seguidamente medir las muestras
problema. De esta manera, a partir de la seal obtenida para cada patrn de [ ] cono
cida

se construye la grfica de calibracin, y a partir de ella se obtiene la [ ] de anal

ito en las
muestras problema.
El procedimiento anterior generalmente presenta varias preguntas estadsticas:
- a*) Es lineal la grfica de calibracin?, y si es curva qu grfica tiene?
- Teniendo en cuenta que cada uno de los puntos de la grfica est sujeto a
errores, cul es la mejor recta que pasa por esos puntos?
- Suponiendo que la calibracin es lineal, cules son los errores estimados y
los limites de confianza para la pendiente y la ordenada en el origen?
- Cundo la grfica se usa para el anlisis de una muestra problema, cules
son los errores y los limites de confianza para una [ ] determinada?
- Cul es l limite de deteccin del mtodo, es decir, la menor [ ] de analito
que se puede detectar con un nivel de confianza predeterminado?
Antes de abordar estas cuestiones debemos considerar aspectos sobre el
trazado de las grficas de calibracin:

a.) Es esencial que los patrones de calibracin cubran el intervalo completo de [

]
requerido en los anlisis en los que se encontraron las muestras problema.
b.) La [ ] de las muestras problema se calcula por interpolacin, a excepcin del
mtodo de la adicin estndar, que se hace por extrapolacin.
c.) Es importante incluir una muestra en blanco en la curva de calibracin. Esta
muestra no contiene ningn analito, pero si contiene la misma composicin que las ot
ras
muestras estndar de referencia, y est sujeta a la misma secuencia del proceso analt
ico.
Su respuesta en la medida podra ser cero, pero por impurezas de reactivos u otras
causas
puede no ser as.
d.) La curva de calibracin se representa siempre con la respuesta del instrument
o
en el eje de ordenadas y la [ ] de los patrones en el eje de abscisas.

Tres de las tcnicas de calibracin mas comnmente usadas son la curva o

grfica analtica, el mtodo de las adiciones estndar y el mtodo de
estndar interno.

2.1. Curva o grfica analtica

En esta tcnica se prepara una serie de soluciones estndar que contienen [ ]
conocidas del analito teniendo en cuenta los puntos antes sealados. Dichas soluci
ones
deben cubrir el intervalo de [ ] de inters, as como tener una composicin matricial
tan

parecida como se pueda a la de las soluciones de las muestras problema. Tambin se

analiza una solucin en blanco de fondo.
Las respuestas netas de cada solucin estndar menos la de fondo se representan
frente a las [ ] de las soluciones estndar a fin de obtener la grfica de calibracin
.
Generalmente hay una relacin lineal entre la seal analtica Y, y la [ ] X. Por ello
,
los datos se ajustan a una recta por el mtodo de mnimos cuadrados, es decir,
minimizando la suma de los cuadrados de los residuos Y.
Una vez establecida la grfica de calibracin se puede obtener la [ ] de analito en
cualquier muestra problema por interpolacin del valor en dicha recta.

2.1.1. Coeficiente de Correlacin momento-producto

Aqu se analiza el primer problema planteado en la pregunta anterior a*.
Supongamos que la representacin de una lnea recta toma la expresin y = b x +
a, los puntos individuales sobre la recta los denotaremos como (x1, y1), (x2, y2
), etc., siendo
l primer punto el blanco. blanco
La media de los valores de x la denotaremos .x y la de y ser .y , as que el
punto
( .x,.y ) se conoce como centro de gravedad de todos los puntos.
Para estimar si los puntos experimentales se ajustan a una recta, calculamos el
coeficiente de correlacin que viene dado por R y tiene la siguiente expresin:
S .(xi -.x) (yi -.y).
r = .......... - 1 < r < +1
.(Sxi -.x)2 (Syi -.y)2.

En qumica analtica, normalmente r es > 0 99, siendo relativamente poco

comunes los valores de r < 0 9.
Es importante no despreciar cifras decimales durante los clculos, como se muestr
a,
aunque dos puntos de desven de la mejor recta, el valor de r es muy prximo a 1, si
n
embargo, se obtendr un valor de r que en algunos cosos ser prximo a 1, an cuando
la representacin no sea lineal, por tanto siempre es necesario representar la cur
va de
calibracin.
Por otro lado, un r = 0 no significa que x e y no estn relacionadas, sino que no

estn linealmente relacionadas, los valores de r obtenidos en el anlisis instrument

al son
generalmente muy altos, de manera que un valor calculado junto con la propia grfi
ca de

calibracin suele ser suficiente para asegurar al analista que ha obtenido una rel
acin
lineal til.
En ocasiones se obtienen valores de r ms bajos, siendo necesario utilizar una
prueba estadstica para establecer si r es realmente significativo. El mtodo ms simp
le es
calcular un valor de t usando la ecuacin:

.r. (n

2)0 5

t = ......
(1

r2)0 5

Este valor est tabulado y se compara usando una prueba t de dos colas y n
grados de libertad.

Si t (calculado) es mayor que t (terico), se puede asegurar que existe una

correlacin significativa. Tambin se pueden calcular los limites de confianza de la
pendiente y la ordenada en el origen, y comparar que estos parmetros estn incluido
s
dentro de estos limites.

2.1.2. Clculo de la Recta de Regresin de Y sobre X (Y/X)

Supone obtener la mejor recta a travs de los puntos de la grfica de calibracin.
Hablamos de regresin entre estas dos variables, ya que aceptamos que las desviaci
ones o
errores se producen en una de ellas, en este caso la Y, y que en la otra variabl
e posee un
valor fijo y no sometido a error. En el caso en que ambas variables estn sometida
s a error,
hablaramos de correlacin entre ellas. (Transparencia)
Aceptando que las desviaciones solo se producen en las ies, la recta buscada se
r
aquella que minimice las desviaciones o residuos (diferencia entre el valor real
y el
calculado) de la variable Y, entre los puntos experimentales y la lnea calculada.
Como los residuos de Y algunas veces sern negativos y otros positivos, se intent
a
minimizar la suma de los cuadrados de los residuos. Esto explica el uso del trmin
o de
mnimos cuadrados para este procedimiento.
La recta buscada pasa por el centro de gravedad, y su pendiente y ordenada en e
l
origen sern:

S .(xi -.x) (yi -.y).

b = .......... a =.y - b.x
S(xi -.x)

La forma de la recta calculada se conoce como recta de regresin de Y sobre X.

Ejemplo:
Calcular la pendiente y la ordenada en el origen para los datos: (Datos en
transparencia ..)

S (xi -.x) (yi -.y) = 216'2

S ( xi -.x)2 = 112
.x = 6
.y = 13'1

216'12
b = ... = 1'93
112

a = .y - .b.x . a = 1'52

y = 1 93 x + 1 52

Errores en la pendiente y ordenada en el origen

La recta de regresin calculada se utiliza para estimar la concentracin de las
muestras problema por interpolacin, y quiz tambin para estimar el limite de deteccin
del mtodo. Por ello son importantes los errores aleatorios en el clculo de la pend
iente y la
ordenada en el origen. La desviacin estndar de la pendiente y ordenada en el orige
n,
tiene las siguientes expresiones:

SY/X
Sb = .......
{ S (xi -.x)2 }0 5

0 5
S xi
Sa = SY/X ......
n S (xi -.x)2

S (yi - y )2 0 5
SY/X = ......
n

y = puntos sobre la recta de regresin calculada, correspondientes a los valores

de
X, es decir, los valores de Y ajustados. El valor de y para un valor de x dado,
se calcula a
partir de la ecuacin de regresin. Los valores de Sa y Sb se pueden utilizar para e
stimar los
limites de confianza para la pendiente y la ordenada en el origen. As, los limite
s de
confianza para la pendiente vienen dados por:

b = t Sb t . se obtiene para un nivel de confianza

deseado
y n

2 grados de libertad.

De manera similar, los limites de confianza para la ordenada en el origen son:

a = t Sa

Ejemplo:
Calcular los limites de confianza y la desviacin estndar para la pendiente y
ordenada en el origen. (Datos en la transparencia ..)

0 9368 0 5
Sy/x = ... = 0 4329
5

S ( xi -.x)2 = 112

Sy/x 0 7329
Sb = ....... = .... = 0 0409
S ( xi -.x)2 0 5 v112

n - 2 = 5
t = 2 57 . b = 1'93 2 57 0 0409 .
95 %

. b = 1'93 0 11

S x2 = 364
S x2 0 5
Sa = Sy/x ...... = 0 2950

n S ( xi -.x)2

a = 1 52 2 57 0 2950 . a = 1 52 0 76

Clculo de la Concentracin
Una vez determinadas la pendiente y la ordenada en el origen en la recta de
regresin, el fcil calcular el valor de x correspondiente al valor de y medido. Sin
embargo, cuando necesitamos estimar el error en una concentracin calculada utiliz
ando
una recta de regresin, el problema se complica, ya que tanto la pendiente como la
ordenada en el origen estn sujetas a error.
La determinacin del error en la concentracin es bastante compleja, y en muchos
casos se utiliza la siguiente frmula aproximada:
0 5
SY/X 1 1 (yo -.y)2
Sxo = ... .. + .. + .......
B m n b2 S (xi -.x)2

yo = valor experimental de y a partir del cual se determina el valor de la [ ] d

e xo.
Sxo = desviacin estndar de xo.
m = n de lecturas para obtener el valor de Yo.
n = n de puntos medidos para el calibrado.

S m = 1: 0 5
SY/X 1 (yo -.y)2
Sxo = ... 1 + . + .......
b n b2 S (xi -.x)2

Los limites de confianza pueden calcularse como:

xo t Sxo . para n

2 grados de libertad

Los resultados ms precisos se obtienen cuando yo tiende a.y.

Si deseamos mejorar (reducir los limites de confianza), podemos proceder de dos
maneras:

1.) Realizando m medidas para el valor de yo , y utilizando el valor medio

de esas m medidas en el clculo de yo. De esta manera, el primer
sumando disminuye. Por ej.: Si el valor de yo = 13 5 se hubiese
calculado como media de y determinaciones, los limites de confianza
seran: 6 21 0 36 para (Sxo = 0 14) frente a 6 21 0 62 para (Sxo
= 0 24).
Sin embargo, si se realizan muchas mediciones repetidas, en el
supuesto de que se disponga de muestra, se genera mucho ms trabajo y
se obtiene solo un beneficio adicional.

2.) Aumentando el nmero de puntos de la recta de regresin en la etapa de

calibracin. El efecto de n sobre los limites de confianza y la
determinacin de [ ] es ms complicada, ya que adems de afectar al
segundo sumando en la ecuacin de Sxo, influye en el valor de t.
Adems es necesario tener en cuenta que el uso de un gran nmero de
muestras de calibracin supone un trabajo extra considerable, pero por
otra parte no es adecuado usar pocos puntos ya que entonces el cociente
1 / n aumentar a la vez que n
2 disminuya, y aumente t, de manera
que se incrementan los limites de confianza. (Lo normal es utilizar entre
6 8 puntos).

Ejercicio:
Calcular los valores de xo y los limites de confianza a partir de los siguientes
datos:

2.2. Mtodo de adiciones estndar

Se utiliza cuando es imposible suprimir interferencias fsicas o qumicas en la
matriz de la muestra.
Supongamos que un analista desea determinar cido Acetilsaliclico en una aspirina
comercial. Si utilizamos este mtodo, podra realizar una calibracin con disoluciones
acuosas de acetilsaliclico, y utilizar la grfica de calibracin resultante para la
determinacin de la [ ] del analito en la muestra problema.
Sin embargo, utilizar soluciones puras para establecer la grfica de calibracin,
solo es vlido cuando no existen efectos matriz, es decir, no se produce aumento o
disminucin en la seal correspondiente al analito debido a la presencia de otros
componentes en la muestra.
Una primera solucin a este problema podra ser realizar la calibracin aadiendo
cantidades conocidas de analito a una disolucin de composicin semejante a la muest
ra
problema, pero exenta de analito. Sin embargo, esta disolucin en la mayora de los
casos
no se puede conseguir.
Otra solucin consiste en realizar todas las medidas sobre la muestra problema, e
sto
se consigue usando el mtodo de la adicin estndar. Este mtodo consiste en tomar
volmenes iguales de problema, aadir a cada uno por separado cantidades distintas d
e
analito, excepto a una de las muestras, y finalmente diluir todas las muestras a
l mismo
volumen final. Seguidamente se determinan las seales instrumentales para cada
disolucin y se representan los resultados. La escala de concentracin (x) se define
con las
[ ] de analito agregadas a las soluciones muestra. Por tanto, la [ ] desconocida
est dada
por el punto en el cual la lnea extrapolada corta al eje x, es decir, el valor de
x para y =
0. Este valor es igual a la razn de la ordenada en el origen y la pendiente de la
recta de
regresin establecida por mnimos cuadrados. (Transparencia . Fig. 5.9.)

a y b estn sujetos a error, as el valor calculado para la [ ], tambin lo estar. Per

o
en este caso el resultado no se obtiene a partir de medidas de una sola muestra,
por lo que,
la desviacin estndar del valor extrapolado se calcula de la siguiente forma:

0 5
- 39

SY/X 1 .y2
SxE
= ... . + ........
b n b2 S (xi -.x)2

Puede observarse que al aumentar n mejora la precisin de la cantidad estimada,

siendo necesarios al menos 6 puntos en un experimento de este tipo. Adems se mejo
ra la
precisin maximizando esta cantidad, por lo que, el intervalo de [ ] a cubrir por
las
disoluciones de calibracin debe ser lo ms amplio posible. Los limites de confianza
para la [
] vendrn dados por:
xE t SxE

Ejemplo:
La [ ] de Ag en una muestra de derechos fotogrficos se determin por absorcin
atmica por el mtodo de desviaciones estndar, obtenindose:

[Ag adicionada] mg / ml
0
5
10
15
20
25
30
Abs.
0 32
0 71
0 52
0 60

0 70
0 77
0 89

Obtener la [ ] de Ag, los limites de confianza al 95 % de esta [ ].

S [(xi -.x) (yi -.y)]

b = .......... = 0'0186
S (xi -.x)2

a
a =.y - b.x = 0 3218 .. = 17 3 mg / ml
b

Limites de Confianza:
S (yi - y )2 0 5
SY/X = ......
n

.y = 0 6014
S (xi -.x)2 = 700

- 40
0 01094 1 (0 6014)2
SxE = ..... . + ........ . =

0 0186 7 (0 0186)2 700

SxE = 0 749
xE = 17 3 2 57 0 749 .
n

2 = 5

t = 2 57 . xE = (17,3 1 9) mg / ml
95 %

Aunque este mtodo es una forma de evitar los efectos de interferencia causados po
r
la matriz, tiene dos desventajas:
1.) Es un mtodo de extrapolacin, y por tanto, menos preciso que las tcnicas de
interpolacin.
2.) Es difcil de automatizar, y requiere de mayores cantidades de muestra.

2.3. Mtodo de Estndar Interno

Una cantidad fija de una sustancia pura (estndar interno), se aade tanto a las
soluciones muestra como a las soluciones estndar. El estndar interno debe ser una
sustancia similar al analito con una seal fcilmente medible y que no interfiere co
n la
respuesta del analito.
Despus se determinan las respuestas del analito y del estndar interno, y se calcu
la
el cociente de las dos respuestas. De esta manera, si s varia algn parmetro que afe
cte a
las respuestas medidas, dichas respuestas del analito y del estndar interno, debe
n ser
afectadas por igual. Por tanto, el cociente de respuestas depende solamente de l
a
concentracin de analito.
Una representacin de la relacin o cociente de respuestas analito a estndar
interno como funcin de la [ ] del analito, da una grfica de calibracin cuyo ajuste
se
hace por mnimos cuadrados:
Respuesta analito

.........
Respuesta e. interno

[analito]

.......
[estndar interno]

3. PARMETROS CARACTERSTICOS

3.1. Limites de deteccin y cuantificacin

En trminos generales se puede definir l limite de deteccin de un analito, como
aquella [ ] que proporciona una seal instrumental significativamente diferente de
la seal
de una muestra en blanco, o la seal de fondo.
Significativamente diferente , da al analista un buen margen de libertad para
establecer la definicin exacta del limite de deteccin. De hecho, en la prctica exis
te poco
acuerdo entre los Organismos Oficiales sobre este acuerdo.
Una definicin aceptable de limite de deteccin, que ha sido sugerida recientemente
por organismos de EEUU, es que el limite de deteccin es la cantidad de analito qu
e
proporciona una seal y e igual a la del blanco ms tres veces la desviacin estndar de
l
blanco:

yLD = yB + 3 SB

El limite de cuantificacin o determinacin considerado como el limite de [ ] ms

bajo para mediciones cuantitativamente precisas, se define como la cantidad de a
nalito que
proporciona una seal y e igual a la del blanco ms diez veces la desviacin estndar de
l
blanco:

yLQ = yB + 10 SB

En la prctica, cuando se trabaja con una recta de regresin convencional, se puede

usar la desviacin estndar de residuos Sx/y en lugar de SB, y se puede emplear el v
alor de A
= (0,0) como una estimacin de la seal correspondiente al blanco. Una vez obtenido
el
valor de y obtendremos la [ ] correspondiente al limite de deteccin o cuantificac
in, a

partir de la recta de calibrado.

yLD = yB + 3 SB a + 3 Sy/x = b x + a

yLD = a + 3 Sy/x (a + 3 Sy/x - a) 3 Sy/x

x = ........ = ....
y = b x + a b b

Ejemplo: Estimar los limites de deteccin para determinar la fluorescencia del

ejemplo anterior:
a = yB = 1 52 030
b = 1 93 0 04
r = 0 9989
Sy/x = SB = 0 433
Limite de deteccin (LDD) = 0 67 pgr / ml
Sx = 0 25

3.2. Rango lineal

El intervalo de [ ] en que es aplicable un mtodo analtico va desde el limite de
cuantificacin hasta la [ ], a la cual, la curva de calibrado se desva de la lineal
idad. En el
limite de cuantificacin, la desviacin estndar relativa de las medidas es de
aproximadamente un 10 %, y disminuye con rapidez cuando aumentan las [ ].

3.3. Sensibilidad
La sensibilidad de un instrumento o mtodo se define como, su capacidad para
discriminar entre pequeas diferencias en la [ ] de un analito. La sensibilidad vi
ene
limitada por la pendiente de la curva de calibracin y la reproducibilidad o preci
sin del
sistema de medida, de manera que para dos mtodos que tengan igual precisin, el que
presente mayor pendiente en la curva de calibracin ser el ms sensible, y viceversa.
La IUPAC, define la sensibilidad como la pendiente de la curva de
calibracin a la [ ] de inters. Como la mayora de las curvas de calibracin
son lineales, en ellas la sensibilidad de calibracin es independiente de la [
], e igual a la pendiente de la recta de calibrado.
Mandel y Stichler, definen la sensibilidad analtica a una determinada [ ], tenien
do
en cuenta la precisin, como:
b m b = pendiente

. = .. . = .. donde

Ss Ss Ss = desviacin estndar de las

seales

3.4. Selectividad
La selectividad de un mtodo analtico durante el grado de ausencia de
interferencias, debidas a otras especies contenidas en la matriz de la muestra.
Desafortunadamente, ningn mtodo analtico est totalmente libre de
interferencias, y con frecuencia deben realizarse distintas operaciones para eli
minarlas.
Consideremos una muestra que contiene un analito A, as como dos especies
potencialmente interferentes (B y C), encontrndose en [ ] CA, CB, CC, con sensibi
lidad de
calibracin: ma, mb, mc. La seal medida en el instrumento vendr dada por:

S = ma CA + mb CB + mc CC + Sbl
Blanco
Se define el coeficiente de selectividad de B con respecto de A, como:
mB
KB,A= ..
mA

El coeficiente de selectividad nos da la respuesta relativa del mtodo para la es

pecie
B cuando se compara con A.
Anlogamente, el coeficiente de selectividad de C con respecto de A, ser:
mC
KC,A = ..
mA

Si sustituimos en la ecuacin anterior estos coeficientes, obtenemos que:

S = mA (CA + KB,A CB + KC,A CC) + Sbl

Los coeficientes de selectividad pueden variar desde 0 en ausencia de interferen

cias
hasta 1 ms. Un coeficiente ser negativo si la interferencia causa una reduccin en l
a
intensidad de la seal del analito y a la inversa.
Los coeficientes de selectividad son parmetros de calidad tiles para describir la
selectividad de los mtodos analticos, pero son poco usados.

Ejemplo: Anlisis por mininos cuadrados de datos de calibracin para la

determinacin de Plomo, basada en el espectro de emisin de llama,
condujo a la ecuacin:

y = 1 12 CPb + 0 312
obtenindose:

[Pb] ppm
N de replicas
.y
S
10

10
11 62
0 15
1

10
1 12
0 025
0

00

24
0 0296
0 0082

Calcular:
a) Sensibilidad de la calibracin.
b) Sensibilidad analtica a 1 y 10 ppm de Pb.
c) Limite de deteccin.

a) Sensibilidad = pendiente ==> m = 1 12

b) Para 10 ppm de Pb:

b 1 12 + discriminacin
. = .. = ... . . = 7 5 + sensibilidad
Ss 0 15 + precisin
+ selectividad

Para 1 ppm de Pb:

1 12
. = ... . . = 45
0 025

c) y = yB + 3 SB
y = 0 0296 + 3 0 0082 = 0 054
y

a 0 054

0 0296

y = b x + a . x = ... . x = ........
b 1 12

La [ ] en el limite de deteccin es x = 0 022 ppm de Pb

3.4. RELACIN SEAL - RUIDO

La seal analtica puede dividirse en dos partes: una causada por l / los analitos y
la otra, por los componentes de la matriz de la muestra y por la instrumentacin u
sada en
la medicin. En este ltimo, parte de la seal se conoce como ruido, y constituye
informacin no deseada, ya que degrada la exactitud y precisin del anlisis, a la vez
que
aumenta el limite de deteccin. El efecto del ruido sobre la seal consistente en un
a parte
del registro grfico de una pequea seal de corriente continua. (Fig. 4.1.)
En la mayora de las medidas, el valor promedio de la seal correspondiente al
ruido se mantiene cte., y es independiente de la magnitud de la seal total. As pue
s, el
efecto del ruido sobre el error relativo de una medida, aumenta a medida que baj
a el valor
de la cantidad medida. Por esta razn, para describir la calidad de un mtodo analtic
o o el
funcionamiento de un instrumento, la relacin seal
ruido es un parmetro de calidad
mucho mejor que el ruido solo.
Para una seal cualquiera, la magnitud del ruido se define como la desviacin
estndar del valor de la seal medida, mientras que la seal viene dada por la media d
e la
medida.

Media 1 .x
S / N = .... = .... = ...
Sd D.E.R Sd
desviacin estndar

Como norma general, la deteccin cierta de una seal mediante un sistema visual
resulta imposible cuando la relacin seal ruido es < 2 3. S / N < 2 3
Ej. Fig. 4. 2

S / N = 4,3 S / N = 43 . Mejor.

Conforme la [ ] disminuye hacia el nivel traza, el problema de distinguir las s

eales
respecto al ruido, se hace cada vez ms difcil, lo que ocasiona una disminucin en la

exactitud y precisin de las mediciones a la vez que se aumenta el lmite inferior d

e la
cantidad de analito que se puede detectar.
Un aumento en la relacin seal
ruido, generalmente indica una reduccin del
ruido, y por tanto, una medicin ms deseable. Los dos mtodos principales para la
reduccin del ruido, es decir, el aumento en la relacin seal
ruido en anlisis
instrumental son:
- En primer lugar, mediante el uso de dispositivos electrnicos como filtros,
para procesar seales mientras pasan a travs del instrumento o detectores
sincrnicos que atenan el ruido sin afectar de manera significativa a la
seal analtica.
- Se puede hacer un posterior tratamiento matemtico de los datos, con un
software adecuado, que permite extraer las seales de entornos ruidosos.
TEMA 4:
INTRODUCCIN A LOS MTODOS
ESPECTROSCPICOS DE ANLISIS

4.1. INTRODUCCIN
Para la determinacin de un analito hay mtodos clsicos y mtodos
instrumentales. Estos ltimos tienen unas ventajas sobre los primeros:

1.) Permiten realizar anlisis difciles o imposibles por los otros mtodos
con una elevada selectividad y sensibilidad. Adems, mientras en los
mtodos clsicos solo podemos determinar un analito por anlisis, en los
instrumentales podemos determinar simultneamente varios analitos en un
anlisis.

2.) Suelen ser ms rpidos y baratos que los clsicos. Es fcil la

automatizacin de estos mtodos instrumentales.

3.) Los instrumentos analticos pueden conectarse a ordenadores, lo

que permite un ptimo control del instrumento y manejo de datos.

4.) Desarrollo de instrumentos inteligentes.

A partir de ahora solo vamos a hablar de mtodos instrumentales.

Estos mtodos tienen ciertas desventajas:

1.) Requieren ser manejados por tcnicos expertos.

2.) Es necesario una calibracin previa del equipo. Esta calibracin

previa se hace a base de mtodos qumicos, por lo cual la exactitud del
mtodo instrumental depende de la exactitud del mtodo qumico
empleado.
Esta calibracin suele ser cara.

Existe una gran cantidad de tcnicas instrumentales. Estas pueden

clasificarse en:

Espectroscpicas
Electroqumicas
Cromatogrficas
Acopladas o conjuntadas
Diversas

4.2. MTODOS PTICOS: DEFINICIN Y CLASIFICACIN

Los mtodos pticos se definen como aquellos que miden la radiacin
electromagntica que emana de la materia o interacciona con ella.
Los mtodos pticos se dividen en:

1.) Mtodos pticos espectroscpicos: se basan en la medida de la intensidad y

longitud de onda de la energa radiante. La caracterstica comn a todos ellos es
que se basan en la medida de espectros. Estos son debidos a transiciones entre
estados de energa caractersticos.
Son los mtodos ms utilizados donde el mecanismo de extraccin es la absorcin
o emisin de la radiacin.

2.) Mtodos pticos no espectroscpicos: se basan en una interaccin entre radiacin

electromagntica y la materia que produce como resultado un cambio en la

direccin de las propiedades fsicas de la radiacin electromagntica.

En estos mtodos los mecanismos de interaccin son la reflexin, refraccin,

difraccin, dispersin, interferencias, polarizacin o la dispersin refractiva.

Los mtodos espectroscpicos van acompaados de un espectro.

4.3. PROPIEDADES DE LA RADIACIN ELECTROMAGNTICA

Radiacin electromagntica: propagacin de la energa en el espacio
sin soporte de la materia por medio de ondas transversales.
Clsicamente el comportamiento de la luz se ha atribuido a su
naturaleza ondulatoria, pero hay fenmenos (absorcin o emisin) que no
pueden explicarse con la teora ondulatoria y que requieren que la radiacin
se comporte como pequeos haces de energa, es decir, como partculas
llamadas fotones.

En la prctica, la mayor parte de la radiacin electromagntica no est polarizada,

es decir, presenta vectores elctricos y magnticos en todas las direcciones perpend
iculares
a la direccin de propagacin, aunque para explicar la interaccin de la radiacin
electromagntica de la materia puede utilizarse tanto el componente elctrico como e
l
magntico. (Resulta ms fcil representar el componente elctrico, y con l vamos a
trabajar).

Parmetros Ondulatores
- Amplitud de una onda sinusoide: longitud del vector elctrico en
el mximo de la onda.
- Periodo de la radiacin: tiempo en segundos necesario para el paso de dos
mximos o mnimos consecutivos por un punto fijo del espacio.

Los diferentes tipos de radiacin electromagntica se caracterizan generalmente por

su longitud de onda o su frecuencia:
- Longitud de onda (.):longitud de un ciclo o distancia entre dos mximos o
mnimos consecutivos.
- Frecuencia (.): nmero de ciclos que pasan por segundo por un punto fijo.

La longitud de onda y la frecuencia se relacionan mediante la expresin:

V .. velocidad de propagacin del medio

. = ..
.

Si es en el vaco, la velocidad en el medio seria igual a la velocidad de la luz

(c = 31010 m / s):
c
. = ..
.

Es importante sealar que la frecuencia es la nica caracterstica verdadera de una

radiacin dada, ya que viene determinada por la fuente y permanece invariable.
Por el contrario, la velocidad de propagacin y la longitud de onda, dependen de
la
naturaleza del medio de propagacin.
En el vaco la velocidad de la radiacin electromagntica es independiente de la
longitud de onda, y alcanza su valor mximo. La radiacin electromagntica se mueve en
el
vaco con una velocidad de 2 99791012 cm / s.
La velocidad de la luz en el aire difiere un 0 03 % de la velocidad de la luz en e
l
vaco, por lo que se puede aproximar a:
c
. = ..
.

En lugar de expresar la frecuencia en ciclos / s, Hz s-1, se utiliza frecuentem

ente el
nmero de onda (.) que es el inverso de la longitud de onda. Como la longitud de o
nda se
expresa en cm, el nmero de onda se expresar en cm-1.
El nmero de onda representa el nmero de ondas que hay por centmetro, y es
directamente proporcional a la frecuencia:
c 1 .
. = .. ; . = .. . . = .. . . = c .
. . c

Dualidad onda-partcula de la radiacin

Hasta ahora hemos comentado la naturaleza ondulatoria de la radiacin
electromagntica. Sin embargo, existen ciertos fenmenos como el efecto fotoelctrico,

el
efecto Compton la distribucin espectral del cuerpo negro, que requieren que la ra
diacin
sea considerada como un flujo de partculas o corpsculos. Esta teora fue establecida
finalmente por Newton, y la controversia entre defensores de ambas teoras se prol
ong
hasta principios del siglo XX. El dilema fue resuelto por Max Planck que en 1.90
0 unific
ambas teoras. Para ello Planck consider que la energa de las partculas en movimiento

trmicamente excitadas, est cuantizada, es decir, que nicamente estn permitidas ciert
as
energas. Posteriormente supuso que cuando un sistema pasa de un nivel de energa a
otro
de menor energa, se emite un cuanto de energa, y que esta energa est relacionada con
la frecuencia de la radiacin emitida, mediante:
h c .E . Energa del cuanto de radiacin.
.E = ... = h . . . Longitud de onda de la
radiacin.
. . . Frecuencia de la radiacin.
h . Cte. de Planck = 6 62410-27Hz / s

La ecuacin de Planck unifica las dos teoras ya que relaciona la energa de un cuant
o
de radiacin (concepto corpuscular), con la frecuencia de la radiacin (concepto ond
ulatorio).

4.4. ESPECTRO ELECTROMAGNTICO

Abarca un intervalo enorme de longitudes de onda y frecuencias. Sin embargo las
zonas de separacin entre las regiones no estn establecidas de un modo rgido.
El espectro de la figura 5.1. est casi completo, ya que le faltan algunas region
es
que estn en los extremos. En el extremo de alta energa se han omitido los rayos csm
icos
que son ms energticos que los rayos .. En el extremo de baja frecuencia se ha omit
ido la
longitud de onda perteneciente a los generadores de corriente.
Las divisiones son funcin de los mtodos que se precisan para generar y detectar
los distintos tipos de radiacin, siendo la regin visible del espectro (percibida p
or el ojo
humano) muy pequea en comparacin con otras regiones espectrales.

4.5. PRINCIPIOS EN LOS QUE SE BASAN LOS MTODOS

PTICOS NO ESPECTROSCPICOS
Existen algunas formas de interaccin entre la radiacin electromagntica y la
materia, que se explican considerando la luz como una onda. Algunas de estas
interacciones son el fundamento de un gran nmero de mtodos analticos, y la mayora de

ellas juegan un papel esencial en el diseo de los instrumentos pticos.

Mtodos Espectroscpicos:
4.5.1. Refraccin
Base de la refractometra. Se define como el cambio de direccin de la radiacin al
pasar de un medio a otro, pudiendo atribuirse a la diferencia de velocidad en lo
s dos

medios. Siempre que la luz pasa de un medio a otro es parcialmente reflejada y

parcialmente refractada o trasmitida.
La energa reflejada aumenta cuando la diferencia de velocidad entre los dos
medios aumenta y esta es superior cuanto mayor sea la diferencia de densidad ent
re los dos
medios.
Una ley de refraccin til, es la ley de Snell, que indica que el cociente entre el
seno
del ngulo de incidencia y el seno del ngulo de refraccin es una constante conocida
como ndice de refraccin. Las mismas relaciones pueden establecerse entre las veloc
idades
relativas de la radiacin en ambos medios: La velocidad de la radiacin en un medio
determinado depende de su longitud de onda, de manera que en la prctica para esta
blecer
los ndices de refraccin con un criterio absoluto se utiliza la lnea D del sodio, y
el medio
uno es la del vaco.
(589 nm)
Dado que la velocidad de la luz en el vaco es una constante, la definicin del ndice
de refraccin absoluto vendr dada como c / V2 = n2. En la prctica el medio uno es el
aire, por que n2 = Vaire / V2
El ndice de refraccin (n) se utiliza con frecuencia para la identificacin de
sustancias. La razn por la cual las mismas permiten descomponer la luz en funcin d
e sus
longitudes de onda, radica en que la velocidad de la radiacin en un medio determi
nado
depende de sus longitudes de onda.
De n = V1 /V2 pueden deducirse que los mejores prismas sern los de materiales
elevados (ndice de refraccin elevados).

4.5.2. Reflexin
Se produce siempre que incide radiacin en la interfase entre dos materiales
de ndice de refraccin diferentes. Si la superficie es lisa, el ngulo de
incidencia es igual al ngulo de reflexin. Mientras que superficies
irregulares dan lugar a reflexiones difusas con poco inters desde el punto
de vista ptico.
Se define reflexin como la refractancia o poder de reflexin entre la
intensidad de la radiacin reflejada y la de la radiacin incidentes en la
interfase. As para un ngulo de incidencia como . la refractancia (l) ser
mayor cuanto mayor sea el ndice de refraccin del medio dos, aunque
tambin interviene el medio uno:

Ir (n2

n1)2 Ir = intensidad reflejada

l = .. = ..... I0 = intensidad incidente

I0 (n1 + n2)2 n1, n2 = ndice de
refraccin del
medio 1 y 2.

Cuanto mayor sea la diferencia entre (n2

n1) mayor ser la reflectancia.

Si n1 = n2, no se producir reflexin y si una superficie de un objeto no

refleja luz esta es invisible, por tanto, los objetos invisibles lo son cuando
estn rodeados por un medio de ndice de refraccin idntico al suyo
propio.

4.5.3. Dispersin
La turbidemetra y nefelometra se basan en la dispersin.
Cuando la radiacin electromagntica interacciona con partculas de pequeo
tamao induce oscilaciones en las capas elctricas de la materia y los dipolos as ind
ucidos
emiten ondas secundarias en todas las direcciones. En este proceso parte de la e
nerga se
emite sin cambiar su longitud de onda.
Se produce dispersin cuando las partculas tienen dimensiones del mismo o menor
orden de magnitud que la longitud de onda incidente y adems se encuentran en un m
edio
con ndice de refraccin diferente al suyo propio si el tamao de las partculas es = 2
.
inicialmente se produce reflexin y refraccin.
Dispersin de la luz por los gases se observa en el aire, y es la responsable del
color
azul del cielo y del color rojo del sol en el ocaso.
TABLA: Partculas que producen dispersin en diversas regiones del espectro.

Dos tipos de dispersin:

- Dispersin Rayleigh: Es producida por partculas cuyo tamao es del 5 al
10 % de la longitud de onda de la radiacin incidente. Este tipo de dispersin da lu
gar a
una distribucin de las intensidades de la radiacin dispersada que es relativamente

simtrica en todas las direcciones.

Figura 1

10 (partculas pequeas)

- Dispersin por partculas grandes: Se produce cuando las dimensiones

de las partculas son superiores al 10 % de la longitud de onda e inferiores a 3/2
de la
longitud de onda, ya que para estos ltimos valores desaparece la dispersin.
En este caso la distribucin de intensidad no es larga y se desva en el mismo
sentido que la radiacin incidente.
Figura 1

11.

4.5.4. Interferencias
Una onda puede describirse mediante una ecuacin sinusoidal de la forma:
y = campo elctrico
A = amplitud
y = A sen (.t + .) . = ngulo de fase
. = frecuencia angular

. tambin puede escribirse como .= 2p. .. y = A sen (2p. t + .)

Cuando n-ondas electromagnticas que se diferencian en frecuencia (.), amplitud (
A)
y ngulo de fase (.), pasan al mismo tiempo por un punto del espacio, se puede esc
ribir que:

y = A1 sen (2p.1 t + .1) + A2 sen (2p.2 t + .2) + ........ + An sen (2p.n t + .

n)
siendo y el campo resultante.
Estas ondas interaccionan o interfieren de modo que la onda resultante es la
superposicin de las ondas originales. La intensidad de la onda resultante depende
de la
diferencia de fase entre las ondas que interaccionan.
Figura 1

12.

En esta figura se muestra la superposicin para dos ondas de distinta amplitud pe

ro de
igual frecuencia. Se superponen para dar una onda resultante. Puede observarse q
ue en este
caso se produce una interferencia constructiva que es la mxima situacin que se pro
duce
siempre que .1 y .2 son iguales a 0 bien 360 , mltiplos enteros.
De igual manera una interferencia destructiva mxima se produce cuando la
diferencia (.1 - .2) sea de 180 180 ms un mltiplo de 360 .

Las interferencias son la base de la interferometra.

Un aspecto importante de la superposicin de ondas consiste en que una onda
compleja puede descomponerse en componentes simples por medio de una operacin
matemtica denominada transformada de Fourier.

Fourier entre 1768

1830 demostr que cualquier movimiento peridico
independientemente de su complejidad puede describirse mediante una suma sencill
a de
trminos seno y coseno por ejemplo la forma de onda cuadrada muy usada en electrnic
a
puede describirse por medio de la siguiente ecuacin:
1 1 1
y = A sen 2p. t + . sen 6p. t + . sen 10p. t + + . sen n2p. t
3 5 n

en la que n toma los valores 3, 5, 7, 9, 11, 13, .....

Una representacin grfica de este proceso sumatorio se muestra en la transparencia
(figura 5

6)

En la parte:
a) la lnea continua representa la suma de tres ondas sinusoides con distinta
amplitud (5:3:1) y de frecuencia (1:3:5). Se observa que la resultante empieza a
aproximarse
al perfil de una onda cuadrada.
b) resultado de incorporar nueve ondas. Se aproxima ms a una onda cuadrada.
Esta descomposicin es tediosa si se realiza manualmente pero con un ordenador y
un
programa adecuado se convierte en tarea de rutina.

4.5.5. Difraccin
Es un proceso por el cual un haz paralelo de radiacin electromagntica se curva
cuando pasa por un obstculo puntiagudo o a travs de una abertura estrecha. Este fe
nmeno
es de gran importancia para la comprensin de las rendijas y redes de difraccin usa
das en los
instrumentos pticos. La difraccin se demuestra con facilidad en el laboratorio cua
ndo se
generan mecnicamente en un depsito de agua, ondas de frecuencia constante. Observa
ndo
las ondas antes y despus de pasar a travs de una abertura o rendija. Cuando la ren
dija es
ancha en comparacin con la longitud de onda del cuanto, la difraccin es insignific
ante y
difcil de detectar. Sin embargo, cuando la longitud de onda y la abertura de la r
endija son del
mismo orden de magnitud, la difraccin llega a ser intensa. En este caso la rendij
a se
comporta como un nuevo origen a partir del cual las ondas se irradian en una ser

ie de arcos de
cerca de 180 , de manera que la direccin del frente de onda parece como si se curv
ara al
pasar entre los bordes de la rendija.

La difraccin est relacionada con la interferencia como puede demostrarse

considerando el experimento realizado por Thomas Young en 1800, en el que se dem
uestra
de modo inorgnico la naturaleza de la luz. (Figura 5
7 y 5
8)
Cuando un haz paralelo atraviesa una rendija u orificio pequeo, se difracta e il
umina
casi por igual a las dos rendijas b y c que hay prximas entre s. La difraccin que s
ale de
estas rendijas se observa entonces en una pantalla en el plano x y y si la radia
cin era
monocromtica, se observar una serie de imgenes oscuras y luminosas que son
consecuencia de la existencia de interferencias destructivas mximas y constructiv
as
mximas.
La banda central presenta un mximo de intensidad en el punto Po debido a que la
interferencia entre las ondas es mxima in la direccin . = 0, mientras que la inter
ferencia
destructiva entre las ondas da lugar a mnimos de intensidad.
Esta difraccin de Fraunhober implica la utilizacin de lentes, las cuales se utili
zan
en la mayora de los trabajos pticos. Si no se utilizan lentes se emplea el trmino
difraccin de Fresnel.
En esta figura se muestra un diagrama de difraccin de Frenchouse en el que puede
observarse la existencia de un mximo central en Po y mnimos en P1, P2, P3. El ngulo
al
cual aparece el mnimo en la figura se puede calcular a partir de la longitud de o
nda y la
anchura de la rendija:

.
Sen . = ..
b

de manera que . disminuye cuando la anchura de la rendija (b) aumenta, o cuando

la
longitud de onda (.) disminuye. Se deduce que cuando la rendija es grande en
comparacin con la longitud de onda, la difraccin no tiene importancia.
En los instrumentos pticos en general presentan ventajas utilizando nicamente la
banda central de intensidad mxima, sacrificando la pequea cantidad de energa de los
mximos secundarios.

Anchura ptima de rendija

Para obtener el mximo rendimiento al utilizar un prisma o una red de difraccin
para descomponer la radiacin electromagntica en sus longitudes de onda, es conveni
ente
iluminar toda la cara del prisma o toda la longitud de la radiacin.
Del estudio realizado se deduce que existe una anchura ptima de rendija que
permite enfocar la banda central y la banda de mxima intensidad sobre toda la lon
gitud
del prisma o la red.
Puede demostrarse que la anchura ptima viene dada por:
2.d . = longitud de onda
bptica = ... d = distancia entre la rendija y el prisma
w w = anchura del prisma que debe
iluminarse

4.5.6. Dispersin Refractiva

Separacin de un haz de radiacin en las longitudes de onda que lo componen. Esta
separacin se puede conseguir mediante un prisma utilizando el fenmeno de la refrac
cin o
mediante una red utilizando el fenmeno de la difraccin.

Dispersin mediante un prisma

Si una radiacin incide sobre un dielctrico que posea caras paralelas, los rayos
que emergen son paralelos a los rayos incidentes. En cambio, si las caras del ma
terial no son
paralelas cambiar la direccin del haz refractado por segunda vez o emergente. Adems
debido a que la velocidad de la luz en cualquier medio diferente al vaco depende
de la
longitud de onda, cada componente de una mezcla de longitudes de onda seguir su p
ropio
camino, y por tanto, el grado de desviacin depender de su longitud de onda, dando
lugar a
la dispersin refractiva del haz.
La capacidad de un prisma para dispersar la radiacin se caracteriza con
frecuencia por su dispersin angular, que es una medida de la separacin angular ent
re dos
rayos de luz que difieren en sus longitudes de onda en una cantidad d.:
d. .. .2 - .1
.. = .. = ....

d. .. .2 - .1

Esto es vlido sii .. y .. son pequeos.

Tambin podemos expresar la dispersin angular como:

d. d. dn
.. = .. ..
d. dn d.

4.5.7. Polarizacin
La mayor parte de las fuentes de radiacin producen perturbaciones
electromagnticas en las cuales las vibraciones de los vectores elctrico y magntico
tienen
lugar en todas las direcciones perpendiculares a la direccin de propagacin de la
radiacin, es decir, las direcciones de estos vectores se distribuyen igual en una
serie de
planos centrados a lo largo de la trayectoria del haz, tal como se muestra en la
figura: 1
25 (dispersin de la luz).
Esta radiacin no polarizada puede representarse convirtiendo hipotticamente y
mediante una suma de vectores, los infinitos planos direccionales en dos planos
principales
perpendiculares. La eliminacin de uno de los dos planos de vibracin resultantes, d
a lugar
a la luz polarizada en un plano.
La polarizacin es la base de la polirametra y de la dispersin ptica rotatoria.
Se puede obtener radiacin polarizada en un plano mediante reflexin, dicroismo,
doble difraccin y dispersin.

4.6. TIPOS DE ESPECTROS Y MECANISMOS DE INTERACCIN

Todos los aspectos pueden dividirse en tres tipos fundamentales: de absorcin, de
emisin y rama:
4.6.1. Espectros de Absorcin
La absorcin es el fundamento de mtodos espectroscpicos en todo el espectro
electromagntico.
El proceso de absorcin puede representarse de modo sencillo:
x + h . . x*
x* . x + Q

La primera ecuacin engloba todos los procesos de absorcin de importancia. La

segunda representa la disipacin posterior de la energa absorbida, generalmente deb

ida a la
colisin con otros tomos o molculas. En general esta disipacin no se considera cuando
se
estudian procesos de absorcin debido a que la cantidad de calor liberado es gener
almente

despreciable. Sin embargo su consideracin es importante para comprender su espect

ro de
absorcin y para distinguirlo del de fluorescencia y el de otros espectros.
Para que una radiacin electromagntica sea absorbida por la materia deben cumplirs
e:
1.) Debe haber una interaccin entre el campo elctrico de la radiacin
electromagntica y alguna carga elctrica de la sustancia.
2.) La energa de la radiacin incidente a de ser exactamente igual a la
diferencia de energas entre el estado fundamental y uno de los estados excitados
de la especie
absorbente.
Si no se cumple la condicin 2, la energa ser trasmitida sin absorcin.
Por otro lado la energa o frecuencia del fotn incidente para que pueda ser absorb
ido,
viene dado por la ecuacin de Bohr:
Ei = energa de la especie absorbente en el estado fundamental
h . = Ef

Ei

Ef = estado permitido de energa superior

A.) Absorcin Atmica

El paso de la radiacin policromtica ultravioleta o visible a travs de un medio
constituido por partculas monoatmicas (Na, Hg) da lugar a espectros de absorcin
constituido por lneas definidas que corresponden a las transiciones de los estado
s de energa
permitidos del tomo.
La simplicidad de tales espectros se debe al pequeo nmero de posibles estados
energticos de las partculas absorbentes. As por ejemplo el vapor de Na presenta dos
picos
agudos de absorcin muy prximos entre s en la regin del visible (589
589 7).

Picos: corresponden
a la excitacin del e- desde el 3s a los estados 3p, que difieren muy poco en su e
nerga.

B.) Absorcin Molecular

Los espectros de absorcin de radiacin poliatmicos son ms complicados, ya que
el nmero de estados de energa es mucho mayor que el que corresponde a los tomos
aislados, adems las transiciones electrnicas vienen acompaadas de cambios simultneos

en los estados vibracionales o rotacionales de la molcula, de modo que se obtiene

n
espectros de bandas.
Este hecho puede explicarse mediante los diagramas de niveles de energa. (Figura
1 6).

Los niveles de energa principales n son los niveles de energa electrnicos, los
cuales solo se indica en la figura y se designan por el nmero electrnico n, siendo
n = 1,
2, 3, ....
Asociados a cada uno de los niveles energticos electrnicos se encuentran
los diferentes subniveles vibracionales que se designa por el nmero
cuntico . = 0, 1, 2, 3,.... y cada uno de los niveles vibracionales se
encuentra subdividido en diferentes niveles rotacionales que se designan
por el nmero cuntico rotacional t = 0, 1, 2,...
Esta representacin de la figura esta simplificada ya que en realidad la difraccin
de energa entre los niveles energticos electrnicos es muy grande, los niveles
vibracionales tienden a converger a energas elevadas y por otro lado, los niveles
rotacionales tienden a divergir a energas elevadas.
Las reglas de seleccin permiten generalizar qu transiciones estn permitidas y
cuales no. Algunas de estas reglas para molculas simples lineales tienen lugar en
:
1.) Las transiciones rotacionales puras solo pueden tener lugar entre niveles
rotacionales adyacentes: .t = 1
2.) Las transiciones vibracionales deben ir acompaadas de transiciones
rotacionales simultaneas: .. = 1 .t = 1
3.) Las transiciones elctricas van generalmente acompaadas de transiciones
vibracionales y rotacionales, aunque esto no es imprescindible:
.n = 1 .. = 1 .t = 1

Segn acabamos de ver, el espectro electrnico contiene siempre superpuestos a las

transiciones electrnicas, transiciones vibracionales y rotacionales, dado que un
gran
nmero de molculas que se encuentran en el estado electrnico fundamental se pueden
encontrar en estados vibracionales excitados, se pueden obtener un gran nmero de
transiciones distintas, pero de parecida energa.
Por esta razn, los espectros de absorcin en radiaciones tanto en el ultravioleta
como en el visible, se caracterizan por presentar varias ondas de absorcin.

4.6.2. Espectros de emisin

Los espectros de emisin se deben a un proceso que es exactamente el inverso a la
absorcin:
x*
. x + h.

de manera que la sustancia pasa de un estado exaltado de elevada energa a uno de

baja
energa y emite radiacin.
Pueden distinguirse tres clases distintas de procesos de emisin que definen como
la
sustancia alcanza el estado excitado.
Emisin del ncleo radiactivo
Los ncleos de las sustancias radiactivas naturales o producidas por bombardeo de
neutrones, se pueden desintegrar de manera espontnea emitiendo rayos ., y as el es
pectro de
rayos . que se obtiene es caracterstico del ncleo emisor.
Emisin despus de la absorcin de radiacin electromagntica
La sustancia puede pasar de un estado excitado al estado fundamental perdiendo
el
exceso de energa en forma de calor. Sin embargo, algunas sustancias pueden desact
ivarse por
otros mecanismos de emisin como son la resonancia, fluorescencia, fosforescencia:
Resonancia: fenmeno poco frecuente que tiene lugar cuando un tomo o
molcula que ha absorbido una determinada radiacin vuelve al estado fundamental emi
tiendo
radiacin de la misma frecuencia que la absorbida. Este tipo de emisin se da casi
exclusivamente en sistemas con tomos aislados en los cuales no existe posibilidad
de
choques con otra sustancia antes de la emisin.
Fluorescencia y Fosforescencia: son reemisiones de radiacin de longitudes de
onda superior, es decir, de menor energa que la radiacin absorbida. Esto es debido
a que
parte de la radiacin absorbida se pierde generalmente por desactivacin vibracional
antes de
la emisin.
En la fluorescencia el tiempo transcurrido entre la absorcin y emisin de radiacin
oscila entre 10-4 y 10-8 segundos, de modo que la reemisin parece instantnea y ces
a cuando
se elimina la fuente de radiacin.
En la fosforescencia el tiempo transcurrido entre la absorcin y la emisin es much
o
mayor, variando entre 10-4 y 10 segundos o ms.
Emisin a partir de una excitacin no electrnica
Tambin puede usarse energa no electromagntica para llevar a un tomo o molcula
al estado excitado capaz de producir emisin de radiacin. Esta energa puede ser elctr
ica o
trmica, pudiendo describirse el proceso:
x + (energa elctrica o trmica) x*

x* x + h.

La excitacin elctrica se produce bsicamente mediante el bombardeo con electrones

de mayor energa, por ejemplo en tubos de rayos X y en la fuente de chispa de corr
iente
alterna, y son ejemplo de excitacin trmica la utilizacin de la espectrofotometra de
llama y
las fuentes de arco de corriente continua.

4.6.3. Espectro Raman

En la espectroscopia Raman interviene un proceso nico, en el cual la molcula es
excitada a un nivel de energa que no pertenece a la molcula, sino que corresponde
a la
radiacin de excitacin. (Figura 1
5).

4.7. LEYES DE ABSORCIN DE LA RADIACIN

Al interaccionar la radiacin electromagntica con la materia se produce absorcin si
la frecuencia de la radiacin es tal que su energa coincide con la necesaria para q
ue el sistema
pase al nivel de mayor energa y permitido.
Las dos leyes fundamentales que rigen el comportamiento de la fraccin de la
radiacin incidente absorbida al pasar a travs de una muestra dada, son la ley de L
AMBERT
BEER:

1.) Ley de LAMBERT: formulada por Bouguer en 1.729 y restablecida por

Lambert en 1768 se conoce como Ley de Lambert, y predice el efecto que produce e
l espesor
de la muestra sobre la fraccin de radiacin que se absorbe.

2.) Ley de BEER: establecida en 1852 y llamada Ley de Beer, establece el

efecto de la concentracin.
La forma combinada de las dos leyes se conoce como Ley de Beer, ya que la
concentracin de la especie absorbente es el factor ms importante en la aplicacin de
estas
leyes.
Aunque la Ley de Beer se usa en la zona central del espectro electromagntico
(ultravioleta a infrarrojo), se cumple tambin para procesos de absorcin en cualqui
er zona
del espectro, y de hecho constituye la base de las aplicaciones cuantitativas de
la absorcin.

4.7.1. Ley de Lambert

Este autor lleg a la conclusin intuitiva y razonada de que cada unidad de longitud

del material a travs del cual pasa la radiacin absorbe la misma fraccin de radiacin.

Si dado un haz monocromtico y paralelo de intensidad Io que pasa a travs de un

espesor db del material absorbente, la perpendicular de la intensidad puede esta
blecerse
mediante la expresin: anchura de la cubeta o espesor del material absorbente
dI = - k I db
variacin de intensidad constante de `proporcionalidad
el signo menos de la expresin indica que la intensidad disminuye al aumentar b.
Reordenando esta ecuacin tenemos:
dI
.. = - k db
I
lo cual establece que la fraccin de radiacin absorbida es proporcional al espesor
atravesado.
Si Io es la intensidad incidente, si integramos obtenemos:
I dI b
.. = - k db teniendo en cuenta los lmites de
integracin
I I 0

I I k
Log .. = - k b . lg .. = ... b
I0 I0 2 303

Esta ecuacin constituye la forma definitiva de la Ley de Lambert que es una ley
exacta y aplicable a cualquier medio homogneo y no dispensivo (gas, lquido, slido o
en
disolucin), y por otro lado la constante de proporcionalidad k depende para una s
ustancia
absorbente dada de la longitud de onda y de la temperatura. Adems para una disolu
cin, la
concentracin a de permanecer constante.
Esta ley aunque es exacta no es de gran aplicacin en qumica.

4.7.2. Ley de Beer

Beer encontr que un aumento de la concentracin del soluto absorbente produce el
mismo efecto que un aumento proporcional en la distancia que recorre el haz a tr
avs de la
muestra.
La constante de proporcionalidad (k) es a su vez proporcional a la concentracin d
el
soluto absorbente:
Io k

Log .. = ... b
I 2 303
Segn Beer:
K concentracin
... = a c
2 303 nueva constante de proporcionalidad

Teniendo en cuenta la Ley de Lambert:

Io
Log .. = a b c
I

La Ley de Beer es fundamental en los mtodos pticos de anlisis, ya que nos permite
calcular la concentracin de una sustancia a partir de la medida de la radiacin abs
orbida por
una disolucin de la misma.
La relacin I / Io se conoce como trasmitancia, y no tiene unidades.
b es el espesor de la cubeta en centmetros, siendo constante en la mayora de los
casos.
a es una constante caracterstica de la sustancia absorbente y de la longitud de
onda de
la
radiacin utilizada.
Si c se expresa en moles por litro, la constante a se transforma en e, que se l
lama
absortividad molar o coeficiente de extincin molar.
Frecuentemente se usa en el trabajo experimental:
I
% T = .. 100 T = Transmitancia
Io

Io

A = log ..
I

La absorbancia tambin se llama densidad ptica.

Todas estas definiciones se resumen en la Tabla 1
Beer)

5 (Nomenclatura de la Ley de

Ejemplo:
La intensidad de un haz de luz disminuye en un 20 % al atravesar 1 cm de un
medio absorbente. Cul ser la disminucin despus de atravesar 5 cm del mismo medio?

% T = 100 % - 20 % = 80 %
Io
log .. = - log T = a b c . (1)
I
b = 1 cm . a c = - log T = - log 0 80 = 0 096
b = 5 cm . - log T = a b c = 0 096 5 =
0 48
(1) . T = 0 331 . % T = 33 1
% de disminucin = 100 - 33 1 = 67 %
Ejemplo:
La absortividad molar de un soluto es igual a 110104. Hallar la absorbancia y
el tanto por ciento de transmitancia a travs de una disolucin de concentracin igual
a 3 10-5
M, en una cubeta de 0 5 cm:

A = e b c = (110104) (0 5) (310-5) = 0 165 = - log T .

. T = 0 685 . % T = 68 56

La Ley de Beer tambin se aplica a disoluciones que contengan ms de una especie

absorbente, y as suponiendo que no existen interacciones entre las distintas espe
cies, la
absorbancia total para un sistema multicomponente se expresara:
ATOTAL = A1 + A2 +.......+ An
Propiedad importante
ATOTAL = e1 b c1 + e2 b c2 +.......+ en b cn
Aditividad

Curvas Espectrales
La Ley de Beer es la base de anlisis cuantitativo, ya que pone de manifiesto que
la
absorbancia es directamente proporcional a la concentracin de un soluto. Para apl
icar la Ley
de Beer es necesario seleccionar la longitud de onda optima, y por esta razn se d
etermina la
curva espectral. Esta se obtiene representando la absorbancia el % de T en funcin
de la
longitud de onda, mantenindose la concentracin de la disolucin y la longitud b de l

a cubeta
constantes. (Figura 1

35).

Estas curvas reciben el nombre de espectro de transmitancia y espectro de trans

icin.
Las curvas espectrales son caractersticas de la sustancia absorbente, y por tant
o
pueden utilizarse para el anlisis cuantitativo de soluto.

Para el anlisis cuantitativo se elige una longitud de onda a la cual el soluto a

bsorba
fuertemente y no presente absorbancia otras sustancias presentes.

Aplicacin de la Ley de Beer

Debe comprobarse siempre antes de utilizarla para un anlisis cuantitativo exacto
. Para
ello se preparan una serie de disoluciones de concentracin perfectamente conocida
s en el
intervalo en el cual se supone que se encuentra la concentracin de la muestra pro
blema, y se
mide la absorbancia de estas disoluciones a una longitud de onda dada y con un p
aso de
cubeta de longitud determinada.
Las absorbancias medidas se representan en funcin de las concentraciones segn la
Figura 1
36.

4.7.3. Limitaciones de la Ley de Beer

Las causas que llevan a que no se cumplan pueden dividirse en dos grupos princip
ales:
4.7.3.1. Limitaciones propias de la Ley de Beer
Aunque en la deduccin no lo hemos considerado la absorbancia
medida es funcin de la absorbancia real y del ndice de refraccin, mediante la expre
sin:
a = areal - acalculada
Debido a que el ndice de refraccin varia con la concentracin tambin lo hace la
absorbancia.
Sin embargo, en la prctica el ndice de refraccin (n) se considera constante para
concentraciones menores o iguales a 10-2 M, por tanto, puede considerarse exacta
a estas
bajas temperaturas. Esto hace que la ley de Beer sea una ley limite que solo es
estrictamente
vlida a bajas concentraciones.

4.7.3.2. Limitaciones debido al incumplimiento de

las premisas de la Ley de Beer

Se puede dividir en cuatro premisas que implcitamente se han aceptado en la

deduccin de la ley de Beer son:
1.) El nico mecanismo de interaccin entre la radiacin electromagntica y
la muestra es la absorcin.

2.) Se utiliza radiacin monocromtica.

3.) Las especies problema actan independientemente unas de otras.
4.) La absorcin estudiada corresponde a un volumen de seccin transversal
uniforme.
Interacciones de la luz con el analito debido a mecanismos distintos de la radi
acin.
Existen mecanismos diferentes que influyen en la intensidad de la luz trasmitid
a, que
son:
- Emisin por Resonancia:
x + h. . x*

x* . x + Q
Sin embargo h. se emite en todas las direcciones, por lo que la absorbancia apa
rente
es menor que la absorbancia real, en una cantidad que es igual a la emisin por re
sonancia que
emite en la direccin de la radiacin incidente.
La emisin por resonancia se produce casi exclusivamente en sistemas que contiene
n
tomos aislados.

- Fluorescencia o Fosforescencia:
x + h. . x*

x* . x + h.

+ Q

. = frecuencia de la emisin fluorescente o fosforescente que menor que la de la

radiacin incidente.
La radiacin h. tambin se emite en todas las direcciones dando lugar a una
absorbancia aparente menor que la absorbancia real.

- Dispersin:
x + h. . x*

x* . x + h.
.

= frecuencia igual a la radiacin incidente, pero emitida en todas las direccione

s a
partir de la partcula que causa la dispersin.
La dispersin se produce para frecuencias de la radiacin de absorcin mayores que la
probabilidad de dispersin al aumentar la frecuencia de la radiacin incidente.
La dispersin es generalmente insignificante en presencia de

Utilizacin de radiacin no monocromtica

El cumplimiento estricto de la ley de Beer solo tiene lugar cuando se utiliza u

na
radiacin monocromtica. Sin embargo, en la prctica no es posible utilizar radiacin
monocromtica (radiacin de una sola longitud de onda), ya que los dispositivos
instrumentales aslan una banda ms o menos simtrica de longitudes de onda en torno a
l
valor deseado. El efecto de la radiacin policromtica sobre la Ley de Beer lo podem
os ver en
la trasparencia siguiente:

4.8. ERRORES COMETIDOS AL APLICAR LA LEY DE BEER

Vamos a considerar tres tipos de errores:
- Errores qumicos
- Errores instrumentales
- Errores personales

4.8.1. Errores Qumicos

1. Efecto del disolvente:

El efecto que produce el cambio de disolucin en un soluto no puede predecirse de

manera general aunque a menudo origina corrimientos espectrales, ensanchamientos
de
bandas y desviaciones de la Ley de Beer.

2. Efectos debidos a sistemas en equilibrio:

Se producen desviaciones de la Ley de Beer cuando un analito se disocia, asocia
o
reacciona con le disolvente para originar un producto con un espectro de absorcin
diferente.
Ejemplos:
Cr2O72 - tiene un mximo de absorcin a 4500 nm
Cr2O72 - + H2O I 2HclO4- I 2H+ + 2CrO4
2 -

Estos productos de cromato dicido y el cromato tienen propiedades de absorcin

distintas del dicromato.

3. Efectos debidos a impurezas en el agua destilada o de los reactivos as como

sustancias interferentes en la muestra.

4.8.2. Errores Instrumentales

- Desviaciones debidas al uso de radiacin no monocromtica.

- Desviaciones debidas a la presencia de radiacin parsita.

Se conoce como radiacin parsita a toda radiacin extraa que llega al detector, pero
que no proviene de la muestra. Puede producirse por la presencia de polvo, defec
tos en el
sistema ptico (rayaduras, etc.). Aunque esta radiacin parsita existe siempre sus ef
ectos son
ms importantes a valores elevados de absorvancia tal como se puede demostrar en l
a
ecuacin:

I0 I

Is Is
Intensidad de la radiacin parsita que
llega
al detector

I + Is
Iabsorbida = ....
I0 + Is

I0 + Is
A = log ....
I + Is

De esta forma, por el uso de radiacin no monocromtica, los errores instrumentales

llevan siempre a desviaciones negativas de la Ley de Beer.

4.8.3. Errores Personales

Se pueden producir un gran nmero de estos errores, aunque nos centraremos en:

- Cuidado de las cubetas de absorcin: deben de estar limpias y sin huellas. Si

trabajamos en el ultravioleta, hay que limpiarlas con cido ntrico concentrado, o
bien con agua regia. No se limpiara con cido sulfrico concentrado o caliente,
porque podra atacar a la cubeta.

- Control de Temperatura: en la mayor parte de las medidas cuantitativas de

absorcin se realizan a temperatura ambiente. Pero si el soluto absorbente
interviene en una reaccin de equilibrio, el control de la temperatura puede ser
crtico y por ello en algunos casos debe de controlarse. En general, un aumento de
la temperatura, lleva consigo un desplazamiento de los mximos de absorcin (o
de las bandas de absorcin) a longitudes de onda mayores en regiones del Ultra
Violeta y del visible, ocurriendo lo contrario en el infrarrojo.

TEMA 5:

ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN MOLECULAR UV - VIS

1. INTRODUCCIN
La espectroscopia de absorcin UV
Visible fue uno de los primeros mtodos fsicos que
se aplic al
anlisis cuantitativo y a la determinacin de estructuras. Si bien la espectroscopia
del Infrarrojo y Radiacin
Monocromatica, son las tcnicas ms idneas para el anlisis cuantitativo y estructural.
La espectroscopia UV
ucturas.

Visible es una tcnica auxiliar til para la elucidacin de estr

La regin de longitud de onda que estudiaremos ser:

200 400 750 . (nm)

vaco vaco
lejano prximo
Visible
UV

El UV se divide en UV de vaco (10

200) nm y el UV prximo (200

400) nm.

El UV de vaco se llama as porque en estas longitudes de onda, el oxgeno absorbe y

lo debemos
eliminar de la disolucin si vamos a medir en esta zona. Para eliminarlo hacemos b
urbujear una corriente de
nitrgeno.
La radiaciones UV Visible tienen en comn que la absorcin en ambas regiones provoc
a la excitacin
de electrones a niveles de energa superiores.

2. TEORA DE LA ABSORCIN
La energa y la variacin de energa de una molcula es:

.. = ..Elctrico + ..Vibracional + ..Rotacional + ..Translacional

El proceso que requiere mayor cantidad de energa es la excitacin del electrn a un
nivel electrnico superior, siendo la diferencia energtica entre dos estados vibrac
ionales
aproximadamente diez veces menor que la requerida entre dos estados electrnicos.
La ..Rotacional
(entre dos estados rotacionales) es del orden de 10
100 veces menor
que la diferencia de energa entre dos estados vibracionales.
Aunque la .Translacional tambin est cuantizada, estos .. son tan pequeos que no
influyen en la radiacin absorbida en el UV Visible.

2.1. Estructura fina vibracional rotacional de espectro

electrnico
La excitacin electrnica va acompaada de cambios vibracionales y rotacionales, y por
ello lo que
debera de ser una lnea fina de absorcin, aparece como una banda ancha pero que sin
embargo, debido a estos
cambios vibracionales y rotacionales, posee una estructura fina.
En la fase gaseosa, el espectro observado es debido a tomos o molculas aisladas y
generalmente, es
posible resolver la estructura fina vibracional / rotacional.
En disolucin, las molculas se encuentran solvatadas por molculas de disolvente que
frenan la
rotacin y desaparece la estructura fina.
Esto mismo ocurre en gases a alta presin. Adems, los campos de disolvente modifica
n irregularmente
los niveles de energa vibracionales y si tenemos un nmero de molculas grande, los n
iveles de energa sern
poco definidos y el resultado es una banda ancha.
En general, un aumento en la polaridad del disolvente provoca una disminucin en l
a resolucin de las
bandas vibracionales, mientras que una disminucin de la temperatura, incrementa l
a resolucin de los niveles
vibracionales. (Transparencia: Fig. 2.2.).

2.2. Tipos de bandas de absorcin

Todos los compuestos orgnicos son capaces de absorber radiacin, ya que contienen e
lectrones de
valencia que pueden ser excitados a niveles superiores de energa.
Las energas necesarias para excitar los electrones que forman los enlaces ms senci
llos son elevadas, y
caen dentro de la regin del UV de vaco (810 185) nm.

La absorcin de radiacin UV
Visible de longitud de onda mayor que 185 nm se restrin
ge a un
nmero limitado de grupos funcionales llamados cromforos, que contienen electrones
de valencia con energas
de excitacin relativamente bajas.
Los electrones que contribuyen a la absorcin por parte de una molculas pueden ser
de dos tipos:
1.) Aquellos que participan directamente en la formacin del enlace entre tomos y qu
e adems se
encuentran asociados a mas de un tomo.
2.) Los electrones no enlazantes o externos que no participan en el enlace y estn
localizados alrededor
de tomos como oxgeno, nitrgeno, azufre y halgenos.

Cuando se combinan dos orbitales aparece un orbital molecular enlazante

de baja energa o uno antienlazante de energa superior.
Los orbitales moleculares asociados a los enlaces sencillos (C
H) se
designan como orbitales s y los electrones correspondientes son los
electrones s.
El doble enlace en una molcula orgnica contiene dos tipos de orbitales
moleculares:
1) Un orbital s correspondiente a un par de electrones enlazante s.
2.) Un orbital enlazante p correspondiente a dos electrones p.

Adems de los electrones s y p, muchos compuestos orgnicos poseen tambin electrones

n que son
no enlazantes, es decir, que no participan en el enlace.
Ej.: Formaldehido.
H .

= s

C x.
x.C O
x = p
H
.
.

= n

El doble enlace tiene un par de e- s y un par de e- p.

Para comprender e interpretar los espectros electrnicos es preciso tener en cuen
ta los
tipos de transiciones que pueden ocurrir cuando una molcula absorbe radiacin. En e
sta
regin pueden darse cinco tipos de transiciones electrnicas:
-

Bandas
Bandas
Bandas
Bandas
Bandas

de
de
de
de
de

absorcin
Absorcin
absorcin
absorcin
absorcin

p . p* y n . p*
s . s*
n . s*
de transferencia de carga
de campo ligando

Los distintos tipos de transiciones se pueden distinguir en funcin de la zona del

espectro donde

aparecen por sus intensidades relativas, y en algunos casos por los desplazamien
tos observados al vaciar el
disolvente.
Las intensidades de absorcin suelen expresarse en trminos de la absortividad molar
:
A
A = e b c . e = ...
b c
Dependiendo del valor de e, del tamao de la especie absorbente y de la probabilid
ad de la transicin.
Para que haya una interaccin, la radiacin debe de chocar con la molcula dentro de u
n espacio de
dimensiones aproximadas al tamao de la molcula y la probabilidad de la transicin es
proporcional al nmero
de impactos que producen absorcin.

P : probabilidad de la transicin (varia entre 0 y 1)

e = 0 87 1020 P A A : superficie transversal de la molcula absorbente
(se mide con rayos x y tiene valores

1015 cm2)

Para una transicin cuya probabilidad sea la unidad, tendremos una e = 105. En ge
neral, valores de e
entre 105 y 104, se consideran procesos de absorcin de intensidad muy fuerte y so
n debidas a transiciones con
probabilidad de transicin (P) muy elevada (0 1
1).
Los procesos con e del orden de 104 - 103, son procesos de intensidad fuerte y
P varia entre 0 01 y
0 1.
Los procesos con e inferior a 103, son procesos de baja intensidad y una P < 0 01
.
A veces, a estos procesos se les llama procesos de transiciones prohibidas.

2.2.1. Bandas de absorcin p . p* y n . p*

Las estudiaremos de manera conjunta.
Son muchas las molculas orgnicas que las contienen a ambas. Todos los enlaces C=C,
C=C, C=N
poseen electrones p, y todos los tomos situados a la derecha del C en la tabla po
seen electrones n (electrones
no enlazantes).
Ej.: N2, S, halgenos x
..
> C: .O:
..
> C: :O: x
.
> C: : O:

Los mximos de absorcin corresponden a transiciones p . p*, son independientes de

la naturaleza
de los tomos que intervienen en el enlace mltiple, mientras que en el caso de las
transiciones n . p*, si tiene
mucha influencia la naturaleza de los tomos. Esto se debe a que los electrones p
estn deslocalizados y por
tanto son relativamente independientes de los tomos que forman el enlace, mientra
s que los electrones n estn
asociados cada uno a su tomo respectivo y un aumento en la electronegatividad del
tomo implica que estos
electrones sean ms atrados por el tomo, lo que supone un desplazamiento hacia longi
tudes de onda ms cortas,
es decir, se necesita ms energa para excitar a los electrones que se encuentran at
rados a tomos mas
electronegativos.
En las bandas de absorcin tienen influencia los sustituyentes que puedan acompaar
a la molcula.
Por otra parte los sistemas con electrones p* son ms fcilmente accesibles y dan t
ransiciones p .
p* en el ultravioleta prximo.
Estas adsorciones constituyen la base ms importante de las aplicaciones en espec
trofotometra UV /
Visible.
C

C = C

C = C

C = C

C = O

Estos sistemas presentan una mayor intensidad de absorcin y adems la conjugacin pr

oduce el
desplazamiento de los mximos de absorcin hacia longitudes de onda mayores. (Transp
arencia: Tablas 2-2, 23).

Definicin de algunos trminos espectrales

- Cromforo: Son grupos de tomos responsables de bandas de absorcin en las regiones
del UV
Visible. De forma general, los sistemas con electrones p son cromforos en la regin
del UV Visible, y los
sistemas con electrones s son cromforos en la regin del UV lejano UV de vaco.

- Auxocromo: Son grupos saturados que cuando se unen a los cromforos desplazan u
n mximo de
absorvancia a longitudes de onda mayores a la vez que aumenta la intensidad de a
bsorcin.
Entre los grupos auxocromos, estn los grupos - OH, - SH, - NH2 y halgenos. Todos
estos grupos
tienen electrones n (electrones no enlazantes) y su efecto se atribuye generalme
nte a transicin n . p*.
Ej.: El benceno tiene una . = 254 nm con una e = 204 nm, pero cuando le sustitu
imos un H del
benceno por un grupo OH:
. = 270 nm e = 1450 nm

- Efecto batocrmico o desplazamiento hacia el rojo: Es el desplazamiento del mxim

o de absorcin
hacia longitudes de onda mayores. Los espectros de iones y radicales libres sufr
en este efecto en relacin a las
molculas no disociadas, por ello es frecuente que iones y radicales libres presen
ten valor cuando las molculas
neutras inicialmente eran incoloras.

- Efecto hipsocrmico: Es el desplazamiento del mximo de absorvancia hacia longitu

des de onda
menores.

- Efecto hipercrmico: Es un aumento en la intensidad de absorcin.

- Efecto hipocrmico: Supone una disminucin en la intensidad de absorcin.

Influencia del disolvente en las transiciones (p . p* / n . p*)

En general, un aumento en la polaridad del disolvente produce un efecto hipsocrm
ico de las bandas
n . p*, y un gran efecto batocrmico en las bandas p . p*. Esto puede explicarse t
eniendo en cuenta que en las
transiciones p . p*, el estado excitado es ms polar que el estado fundamental, y
por tanto, las interacciones
dipolo
dipolo disminuyen la energa del estado excitado.
Por otra parte, los enlaces por puentes de hidrgeno o las interacciones electros
tticas con disolventes
polares estabilizan los electrones n del estado fundamental ms que a los electron
es del estado excitado.

2.2.2. Bandas de Absorcin s . s*

Los electrones s, son los electrones enlazantes de los enlaces sencillos y las t
ransiciones s . s* se
producen a causa de la absorcin en el UV
Visible lejano. Para trabajar en el UV
isible lejano, hay
dificultades instrumentales porque es necesario eliminar el O2 de las disolucion
es, porque absorbe. Se ha
trabajado poco en esta regin y no tiene mucha aplicacin.

Se da en los enlaces sencillos C

2.2.3. Bandas de absorcin n . s*

Se producen en compuestos saturados que contienen en su molcula, sustituyentes co
n electrones no
compartidos.
Ejemplo: tomos de S, N, Br, J .. absorben a .

200 nm

tomos de Cl, O .. absorben a . < 200 nm

Cuanto mayor es la electronegatividad del sustituyente, se requiere mayor energa
para excitar al
electrn, debido a la mayor energa de unin entre el electrn no enlazante del tomo.
El hecho de que la mayora de los compuestos que tienen O2 absorba a . < 200 nm, p
ermite el uso de
disolventes tales como H2O, alcoholes y teres en la zona del UV prximo. (200
400 n
m)
Si el compuesto posee dos sustituyentes y existe solapamiento entre los orbitale
s con pares de electrones
libres, el mximo de absorcin se desplaza a . mayores.

. mxima
_ (nm)
CH3 . .. 259
_
CH2 . 2 .. 292
_
CH . 3 .. 349
_
La presencia de ms de un sustituyente (como el . ) hace que se desplace el mximo d
e absorcin hacia
. mayores.

2.2.4. Bandas de absorcin de transferencia de carga

La absorcin de transferencia de carga, es un tipo de absorcin muy
importante en la regin UV, y a veces, tambin en el V, para muchos
compuestos orgnicos e inorgnicos.

En este proceso, se produce la transferencia de un electrn de una parte a

otra parte del sistema.
Ejemplo:
M

L+ hV .... M- - L-

Se ha producido la transferencia del electrn del metal al ligando, pero puede ocu
rrir al revs.
En estos procesos hay dos componentes, un aceptor y un dador de electrn, y la abs
orcin de la
radiacin implica la transferencia de un electrn desde el dador hasta el aceptor. E
n consecuencia, el estado
excitado es el producto de un proceso redox o un proceso redox interno.
En la mayora de los complejos de transferencia de carga que implica un ion metlico
, ste acta como
aceptor del electrn. Una excepcin es el complejo que forma la o
fenantrolina con F
e2+ y Cu2+
donde el ion metlico es el dador y el ligando es el aceptor. ( la o fenantrolina)
.

hV
Fe3+ - SCN- . ... Fe2+ - SCN

En estos procesos de transferencia de carga, implican la absorcin en el UV de muc

hos iones
hidratados.
hV
Cl- (H2O)n ..... Cl (H2O)-

hV
Fe2+ (H2O)n ..... Fe3+ (H2O)-

hV
Fe3+ - OH- .....Fe2+OH

En la molcula orgnica tambin puede producirse la absorcin por transferencia de carga

intramolecular.

h. .
NR2 = NR2

h. C

0 = C

R R

2.2.5. Bandas de absorcin de campo de ligando

Los iones y compuestos
ros. Junto a las
bandas de absorcin de
103
104 presentan
bandas de absorcin de

de los metales de transicin, presentan dos tipos de espect

transferencia de carga, con valores de absortividad molar e
tambin
campo de ligando con valores de e
10-1 - 102.

Mientras que las bandas de absorcin de transferencia de carga aparecen fundamenta

lmente en el CV, y
alguna vez en el V, las bandas de campo de ligando aparecen en el V, aunque rara
vez llegan hasta el UV
prximo e infrarrojo prximo.
Generalmente, estas bandas de absorcin de campo de ligando, son bandas anchas deb
ido a que la
excitacin electrnica lleva asociada mltiples excitaciones vibracionales.
La coloracin caracterstica de iones y compuestos de transicin generalmente pueden a
tribuirse a
absorciones de campo de ligando. El nombre de campo de ligando proviene del hech
o de que un tomo o metal
de transicin posee orbitales degenerados con igual energa y la presencia de un lig
ando crea un campo
electrosttico que desdobla estos niveles en diferentes niveles de energa o subnive
les.
Si los subniveles d o f no estn completos, pueden producirse transiciones electrni
cas entre estos
niveles de energa mediante la absorcin de radiacin de . adecuada.
Ejemplo: Complejo octadrico del titanio.
Ti (H2O)6
3+

El titanio posee un orbital d con un solo electrn: Ti . 3d1 (Transparencia: Fig.

2
5).
Al unirse las seis molculas de agua al titanio se produce una repulsin de la part
e negativa del agua (de
un H) con el electrn del orbital d del titanio. Se produce una degeneracin de esto
s niveles resultando que los
orbitales dz2 y dx2y2 tienen mayor probabilidad que los otros tres.
Este incremento representa la amplitud del desdoblamiento de estos orbitales y
es una medida de la
fuerza del campo de ligando, es decir, una medida de la extensin con que un grupo
complejante desdoblar los
niveles de energa, en este caso, los niveles de energa d.
El valor de este incremento es . = 20400 cm- 1. Esto corresponde a una longitud
de onda de 490 nm.,
como observamos en el espectro de absorcin de la figura 2
1 (Transparencia).
La magnitud de este incremento depende de varios factores:
1. ) La carga del ion metlico; aumentando este valor a la vez que aumenta la car
ga del ion metlico.
2. ) La posicin del elemento en el sistema peridico, para un determinado elemento
,
este incremento aumenta con el nmero cuntico principal del orbital del ion metlico.
3. ) La naturaleza del ligando. Este incremento es la funcin de la distribucin de
su
densidad de carga y de su polarizabilidad.

Con pocas excepciones, los ligandos se suelen ordenar en valores crecientes de

este incremento,
obtenindose la serie espectroqumica:
I- < Br- < Cl- < F- < OH- < C2O42- < C2H2OH < H2O < SCN- < NH3 < < etilendiamina
< NO2- < o

fenantrolina

Un efecto visible de la serie espectroqumica es por ejemplo en el cobre:

Cu (H2O)42+ ... azul plido
Cu (NH3)42+ ... azul intenso
debido al efecto del aumento del campo de ligando cuando sustituimos el agua po
r el amoniaco.
Los lantnidos y los actnidos, poseen subniveles 4f y 5f incompletos, y por tanto,
presentan bandas de
absorcin de campo de ligando.

3. INSTRUMENTACIN

Existen dos tipos de instrumentacin para medidas de absorcin UV:

Filtros
- Fotmetros
Fototubos

Monocromadores
- Espectrofotmetros

Fototubos o tubos multiplicadores

Los fotmetros, son instrumentos sencillos que permiten medir la intensidad de

radiacin, ya que van provistos de filtros para seleccionar un rango estrecho de l
ongitudes de
onda, y como detectores, usan fototubos.

Los espectrofotmetros, son instrumentos ms o menos sofisticados que usan

monocromadores para seleccionar estas bandas estrechas de longitud de onda. El
monocromador permite una variacin continua al seleccionar las longitudes de onda,
y
tambin permite realizar un barrido en una zona amplia de longitud de onda. Como d
etectores
usan fototubos o tubos multiplicadores.

3.1. Componentes bsicos de los fotmetros y

espectrofotmetros
Los componentes bsicos son:
1.
2.
3.
4.
5.

Fuentes de energa (lmpara)

Seleccionador de longitud de onda (filtros, monocromadores)
Recipiente porta muestras (cubeta)
Detector
Procesador de seales

La muestra la colocamos entre el seleccionador de longitud de onda y el detector

.
1. Fuente de energa
Una fuente de radiacin ideal debe ser continua en una amplia zona del espectro, t
ener
una intensidad elevada y que no vare esta intensidad con la longitud de onda.
Las fuentes de radiacin que emiten en el UV
Visible pueden dividirse en tcnicas
(en las que la radiacin es debida a la temperatura) y fuentes cuya radiacin es deb
ida a
descargas elctricas a travs de gases.
a.) Fuentes trmicas: La lampara ms usada es la lmpara de filamento de Wolframio,
que es una fuente trmica que emite en el visible. Presenta el inconveniente de qu
e
la mayor energa la emite en la regin del IR. (Transparencia Fig. 2.8)
Si trabajamos a alta temperatura la lmpara se fatiga, es decir, la vida de la
lmpara se acorta. Si queremos conseguir altas intensidades en el Visible, podemos
usar una lmpara de arco de carbono que trabaja a altas temperaturas (llega a los
4000 K)

Cualitativamente, un aumento en la temperatura de la lmpara, provoca la

excitacin
en un nmero mayor de tomos a mayores niveles de energa, y ello debe de
traducirse en una mayor I de radiacin y un desplazamiento de las bandas hacia .
menores.

La . de mxima emisin puede calcularse a partir de la ley de

.max T (K) = 3 106

b.) Fuentes de descarga elctrica: En esta regin del UV- Visible, se utilizan vario
s
tipos de lmparas, en donde estn:
- Lmpara de H
- Lmpara de ..H (Deuterio)
- Lmpara de descarga de Xe
- Lmpara de arco de Hg
En todos los casos, se hace pasar una corriente de electrones a travs de un
gas y las colisiones entre ellos provocan la excitacin electrnica, vibracional y
rotacional.
El espectro emitido por gases a bajas presiones es de lneas o rayas,
mientras que los de gases a altas presiones, son de bandas o continuos.
La lmpara de H, es la fuente ms sencilla utilizada en el UV;
generalmente, se usa a bajo voltaje (aproximadamente a 40 V), aunque existen
lmparas de alto voltaje. En estas lmparas de H, trabajan a una presin de 0,2 y 5
milmetros de Hg. (Transparencia. Figura 2.9)
Esta lmpara es muy adecuada para trabajar con ella en el UV prximo.
La lmpara de 2H, abarca una zona de . similar a la de H, pero su
intensidad es de 3 a 5 veces superior.
La lmpara de descarga de Xe, presenta buenas cualidades como fuente de
radiacin en el UV. Posee dos electrodos de Wolframio separados unos 3 mm, que
forman un cubo. Esta lmpara posee una intensa radiacin al pasar una corriente a
travs de una atmsfera de Xe.
El espectro de esta lmpara es continuo entre 250 y 600 nm, con un
mximo en 500 nm. Su intensidad en el UV prximo, es muy superior a la de H,
pero en el V presenta problema de radiacin parsita. (Transparencia. Figura
2.10)
La lmpara de arco de Hg, es una fuente patrn para muchos trabajos en el
UV, pero en general, es poco adecuado para estudios espectrales continuos, ya qu
e
presenta bandas estrechas superpuestas a un fondo continuo a elevada presin.
(Transparencia. Figura 2.11)
Esta lmpara se utiliza ms, para el calibrado de instrumentos. La
estabilidad de las fuentes es importante, especialmente cuando se trabaja con
instrumentos de haz sencillo. La energa emitida por estas fuentes depende del

potencial aplicado a
e
la lmpara elevado a
la fuente de voltaje
es
o transformadores de

la lmpara y la seal del detector es proporcional al voltaje d

una determinada potencia, generalmente mayor de 1, por ello,
ha de ser muy estable, y ello se consigue usando acumulador
voltaje constante y reguladores electrnicos de voltaje.

2. Seleccin de .

Para conseguir medidas de absorbancia exactas, selectivas y sensibles, es

importante poder seleccionar una banda estrecha de . del amplio espectro que pro
porciona la
fuente de radiacin.
La importancia de este factor sobre la sensibilidad de las medidas de absorcin
puede ponerse de manifiesto con un sencillo ejemplo: (Transparencia. Figura 2.12
)

T (%) A (%)

80 20
35 65

Bsicamente, se utilizan dos clases de filtros:

- Filtros de absorcin
- Filtros de interferencia
Los filtros de absorcin, se basan en la absorcin selectiva de . que no interesan y
generalmente, son de vidrio, en el cual se ha dispersado o disuelto un pigmento
adecuado que
permite esta absorcin selectiva.
Estos filtros slo operan en el V.
La mayor parte de estos filtros de absorcin tienen anchuras de banda entre 35
50
nm y su transmitancia son slo de un 5 a un 20 %, disminuyendo esta transmitancia
a medida
que mejora el aislamiento espectral.

Los filtros de interferencia, se basan en el fenmeno de interferencia ptica, es de

cir,
una parte de la radiacin que llega es absorbida y otra, se refleja. Proporciona a
nchuras de
banda ms estrechas que los de absorcin y transmitancias de tipo mayores.
Estos filtros operan en el UV / V / IR. (Transparencia. Figura 2.14)
Un monocromador es un dispositivo que genera un haz de radiacin de gran pureza
espectral (anchura de banda estrecha) y que permite ir variando la . de manera c
ontinua.

Hay dos tipos de monocromador:

- Monocromador tipo prisma.
- Monocromador tipo red.
Los elementos esenciales de un monocromador, son una rendija de entrada
(determinando el haz de radiacin policromtica entrante), un elemento dispersante (
que
puede ser un prisma o una red de difraccin) y una rendija de salida.
El prisma o red, dispersa la radiacin policromtica en las . que la componen, y la
rendija de salida transmite la . correspondiente al mximo de intensidad junto a u
na banda de
.
a ambos lados. (Transparencia. Tabla 2.8)
Cuanto menor sea la rendija, menor ser la banda de . considerada. Pero si se
disminuye demasiado (< 0 01 nm), se producen fenmenos de refraccin.
Cuanta mayor resolucin tenga el espectrofotmetro, menor ser la banda de .
que pueda tomar.
3. Recipiente porta muestras.
Se llaman tambin cubetas, y tienen paralelas y rectangulares, y se
fabrican en diversos materiales, de manera que, permitan el paso de luz pero no
absorban
radiacin. Por ello, en el UV y V utilizamos cubetas de cuarzo y en el V tambin de
plstico o
vidrios de silicato para V e IR.
Las hay de diferente recorrido ptico, pero lo normal es de 1 cm de paso de luz.
4. Los detectores.
Son elementos que convierten la radiacin en un flujo de electrones y posteriormen
te,
en una corriente o voltaje en el circuito de lectura. El detector ideal debera te
ner un amplio
intervalo de . con una elevada sensibilidad, una relacin seal
ruido grande, un tie
mpo de
respuesta rpido, mnima seal de salida en ausencia de iluminacin, as como tener una
respuesta constante.
Los tres tipos de detectores usados en el UV / V son:
- Clulas fotovoltaicas
- Fototubos (Tubos fotoemisores)
- Tubos fotomultiplicadores
La caracterstica comn a todos estos detectores es que tienen una superficie activa
capaz de absorber radiacin, de manera que, la energa absorbida causa la emisin de
electrones y el desarrollo de una fotocorriente.

- Clulas fotovoltaicas, en ellas, la energa radiante genera una corriente en la

interfase entre una capa semiconductora y un metal, y se usan fundamentalmente
en el V.
Consisten en un electrodo plano (nodo) de un metal (Cu, Fe o Al) en el
que se deposita un material semiconductor como es el Selenio, y despus se
recubre por una fina pelcula de Ag o Au. Esto sirve como electrodo colector.
Cuando al Se llega una corriente o una radiacin, se produce la excitacin
de electrodos de la interfase Se Ag (o Se
Au), los cuales pasan al electrodo
colector (Ag). Los electrodos liberados migran a travs del circuito hacia el meta
l,
resultando una corriente de electrodos proporcional al nmero de fotones que
inciden sobre el semiconductor.
Entre las desventajas estn:
- Es difcil amplificar la seal de salida, debido a la pequea resistencia
interna de la clula; por esto se usan en fotmetros de filtro.
- Manifiestan fatiga (sobre una radiacin continuada, la respuesta no siempre
es constante)
- Fototubos o tubos fotoemisores, consisten en un ctodo semicilndrico (capa de met
al recubierta de
otra capa de xido alcalino) que es sensible a la luz, y un nodo que es un alumbre
metlico.
Ambos estn encerrados hermticamente en un recipiente cilndrico con vaco. Cuando la r
adiacin
llega al ctodo, ste emite electrones que son atrados hacia el nodo, el cual a travs d
el circuito
los devuelve al ctodo. Esta corriente fotovoltaica producida, causa una cada de po
tencial a lo
largo de la resistencia que es proporcional a la intensidad de corriente.
La resistencia es normalmente, la resistencia de entrada en un circuito amplific
ador, y por ello, la
cada de potencial puede amplificarse.
La seal del fototubo es aproximadamente unas diez veces menor a la de las clulas f
otovoltaicas,
pero debido a la posibilidad de amplificar la seal de estos, stos resultan ms sensi
bles que las
primeras.
La sensibilidad del fototubo depende de la naturaleza de la sustancia que recubr
e el ctodo y puede
variarse utilizando diferentes metales alcalinos o variando el mtodo de recubrimi
ento.
- Tubos fotomultiplicadores, son una combinacin de un ctodo fotoemisivo y una cade
na interna de
dnodos fotomultiplicadores de electrones. Cuando la radiacin llega al ctodo de comp
osicin
similar a la de los fototubos, provoca la emisin de electrones (electrones primar
ios), de manera
anloga a la de un fototubo, pero en este caso, los electrones son acelerados, por
la aplicacin de un
potencial positivo hacia una segunda superficie sensible, de forma que al incidi

r cada electrn
primario es capaz de producir la emisin de 4 5 electrones secundarios. Estos elec
trones son
acelerados de nuevo hacia otra superficie sensible que se encuentra a un potenci
al posiblemente
superior, de forma que el nmero de electrones emitidos vuelve a multiplicarse por
4 5.

Este proceso se puede repetir tantas veces como queramos, pero en general los ap
aratos no llevan
ms de 10 12 dnodos. La seal de salida puede a su vez amplificarse. Por tanto, es el
detector
ms sensible en el UV
V.

5. Procesador de seales.
En general, es un dispositivo electrnico que amplifica la seal elctrica del detecto
r;
as mismo, permite eliminar componentes indeseados. Puede tambin alterar la seal de
la
corriente, cambiarla de fase, filtrarla. Tambin puede realizar operaciones matemti
cas con la
seal como diferenciales, derivadas, integral...

3.2. Diseo de los instrumentos para medidas de

absorcin UV Visible
Existen dos tipos de instrumentos:
- Fotmetros
- Espectrofotmetros

De los dos tipos hay de:

- Haz simple
- Doble haz
Y a su vez, estos pueden ser:
Lectura directa
- Haz simple
Compensacin

Lectura directa
- Doble haz
Compensacin

En el instrumento de haz simple, la radiacin pasa slo a travs de una disolucin,

mientras que en los de doble haz, un haz pasa a travs de la disolucin de un blanco
, mientras
que el otro pasa a travs de una disolucin que contiene la muestra. (Transparencia.
Figura
7.14) (Instrumento de haz simple)
Las etapas para el calibrado del instrumento son:
- Poner un obturador de manera que no llega radiacin al detector, se ajusta el
detector a cero (en unidades de transmitancia) o mxima (en unidades de
absorbancia).
- Con la disolucin del blanco, ajusto a cero la absorbancia.

- Con otra cubeta de disolucin incgnita, mido la absorbancia.

Si trabajamos a ms de una . estas tres etapas se deben repetir para cada .
Este instrumento requiere que la fuente y el sistema electrnico tengan un
comportamiento constante durante el tiempo necesario para realizar estas tres et
apas.
Estos problemas se resuelven con los instrumentos de doble haz. Las etapas para
la
calibracin seran:
- Ponemos el blanco en ambas cubetas; ajustamos a cero la absorbancia.
- Quitamos la cubeta de la muestra, cerramos este obturador para ajustar de nuev
o a
cero la transmisin o al mximo la absorbancia.
- Colocamos la muestra y medimos la absorbancia.
Los de lectura directa utilizan un medidor para medir la absorbancia o transmita
ncia.
En cambio, los de compensacin, en la etapa de medida utilizan un dispositivo que
permite
comparar la seal a medir con un haz de referencia.
Los primeros son ms sencillos que los segundos, pero los de compensacin presentan
una mayor exactitud fotomtrica
Existe un tercer tipo de instrumento que utiliza como detector, una serie de dio
dos; en
stos, la muestra se coloca entre la fuente y el selector de . (monocromador)
3.3. Instrumentos caractersticos (comerciales).
Los fotmetros son ms sencillos que los espectrofotmetros, y ms baratos. Se utilizan
en el V y su
exactitud es bastante buena.
Existen fotmetros para V, y otros para UV, y tambin fotmetros tipo sonda, donde en
estos, la
absorbancia se mide sumergiendo la sonda en la disolucin analito.
Existen espectrofotmetros de un solo haz para el V. Son equipos sencillos que uti
lizan
monocromadores tipo red, como fuente o lmpara, aunque de W como detector fototubo
; la anchura de banda es
de unos 20 nm y una exactitud en la . 2,5 nm.
Existen tambin espectrofotmetros de haz simple para medidas en UV, como en V. En e
stos, la
anchura de banda es menor (entre 2 y 8 nm) y la exactitud en la . es de 0,5 y 0,
2 nm. Estos tienen lmparas
intercambiables de W e H; utilizan redes para la dispersin y tubos fotomultiplica
dores como detectores.
Hay espectrofotmetros de un solo haz controlados por ordenador. En stos, se realiz
a un barrido con la

solucin de referencia, y la seal de sta se almacena en el ordenador. A continuacin,

se mide la absorbancia de
las muestras, de manera que, la absorbancia leda tiene ya restada la seal de la re
ferencia previamente
almacenada. La exactitud fotomtrica oscila entre 0,005 nm y la anchura de la rend
ija 0,5
2 nm.
Existen tambin espectrofotmetros de doble haz (son ms caros que los de haz simple).
Hay otros instrumentos de doble dispersin, para mejorar la resolucin espectral y l
ograr una reduccin
notable de la radiacin dispersada; se disean instrumentos con dos prismas o dos re
des dispuestos en serie con
una rendija interpuesta entre ambos.

Existen finalmente, los instrumentos multicanal; en stos, la radiacin de la fuente

pasa a travs de la
muestra y, a continuacin, sta radiacin se enfoca en una rendija de entrada que pasa
luego a una red de
reflexin. El detector consiste en una serie de 316 diodos, obtenindose una resoluc
in espectral de 2 nm en toda
la regin (200
820) nm.
La estabilidad de la fuente y del sistema electrnico es tal que, la seal del blanc
o necesita ser
almacenada cada diez minutos aproximadamente. Estos instrumentos tambin van acopl
ados a ordenadores.
Debido a los pocos instrumentos pticos que poseen, el rendimiento de la radiacin e
s ms elevado que
en los espectrofotmetros tradicionales. (Transparencia. Figura 7.20)

4. APLICACIONES

4.1. Aplicaciones de las medidas de absorcin al anlisis

cualitativo
En este campo, las aplicaciones son muy limitadas; algunos efectos son los sigui
entes:
- Efecto del disolvente
Disolventes pobres (agua, alcoholes, cetonas y teres) tienden a eliminar la estru
ctura fina vibracional
del espectro. Sin embargo, los disolventes apolares (hidrocarburos) tienden a ma
ntenerla. Adems, las posiciones
de los mximos de absorcin dependen de la naturaleza del disolvente. Por ello, para
comparar e identificar
espectros, es necesario conocer el disolvente en el que estn registrados. (Transp
arencia. Figura 8.8 / Tabla 8.6)
Esto da la . a partir de la cual el propio disolvente dara la seal.
- Deteccin de grupos funcionales
Esta tcnica de espectrofotometra en UV/V, no permite una identificacin inequvoca de
un
componente orgnico, pero sin embargo, los espectros de absorcin UV/V son tiles para
detectar la presencia
de ciertos grupos funcionales que actan como cromforos.

4.2. Aplicaciones de las medidas de absorcin al anlisis

cuantitativo
Esta tcnica es una de las ms utilizadas para el anlisis cuantitativo; las caracterst
icas ms importantes
de estos mtodos espectrofotomtricos son:
- Tienen una amplia aplicabilidad tanto a sistemas orgnicos como inorgnicos.
- Sensibilidades en torno a 10-4 - 10-5 M, pudiendo en algunos casos llegar a 10
-7M.
- Tienen, de moderada a alta selectividad.
- Tienen una buena precisin.
- Tienen una fcil y adecuada adquisicin de datos.
- Son mtodos relativamente baratos.
Las aplicaciones de las medidas de absorcin al anlisis cuantitativo, son muy numer
osas.

4.2.1. Anlisis de especies absorbentes

Los componentes que contienen grupos cromforos, son susceptibles de esta determin
acin (alquenos,
alquilos, cetonas).
As mismo, se pueden determinar tambin componentes inorgnicos como nitratos, nitrito
, ozono, iones
de los metales de transicin, yodo, etc.

4.2.2. Anlisis de especies no absorbentes

Numerosos reactivos reaccionan selectivamente con especies no absorbentes origin
ando productos
fuertemente absorbentes en esta regin. El uso de tales reactivos exige que la rea
ccin de formacin de los
compuestos sea completa.
Por otra parte, los reactivos que toman color se forman a menudo para la determi
nacin de especies
absorbentes como los iones de los metales, ya que la absortividad molar del prod
ucto es varios rdenes de
magnitud mayor que la de la especie no combinada.
Ejemplo de agentes complejantes para la determinacin de especies inorgnicas:

SCN- . Fe3+, Mo6+

H2O2 . Ti4+, V5+, Cr3+

Ejemplo de agentes formadores de complejos:

fenantrolina . Fe3+

Dimetilglioxima . Ni2+
Dimetilditiocarbonato . Cu2+

Para la determinacin de estas especies en anlisis cuantitativo, el procedimiento

operatorio que

llevamos a cabo es:

- Seleccin de la longitud de onda donde vamos a realizar medidas de absorvancia.
Las longitudes de
onda sern las correspondientes a mximos de absorcin del compuesto, ya que aqu se alc
anza una mayor
sensibilidad:

En estas zonas de los mximos tenemos un intervalo de . donde la absorvancia no s

e modifica
demasiado, por lo que las fluctuaciones a la hora de la medida no crean muchos e
rrores.

- Conocer las variables que afectan a la absorvancia natural del disolvente, pH

de la disolucin,
temperatura, [electrolitos] y la presencia de sustancias interferentes.
Los efectos de todas estas variables se deben de conocer, y las condiciones para
el anlisis se eligen de
manera que la absorvancia no este afectada por variaciones incontroladas de esto
s parmetros.

- Medida de la muestra: hay que tener en cuenta la limpieza y manipulacin de las

cubetas.

- Determina la relacin entre absorbancia y concentracin. Una vez seleccionadas la

s condiciones
ptimas pasamos a construir la curva de calibrado usando patrones de [ ] conocidas
, y que abarquen el intervalo
de [ ] esperado en las muestras problema:

A
Y = mx + a
m = e

[ ]

El valor de la pendiente m es igual a la absortividad molar:

A = e b c + a
y = m x + b
Cuando hay interferencias en la matriz de la muestra es necesario aplicar el mto
do de adicin de patrn
( adicin estndar) lo cual por extrapolacin:

*
C

4.2.3. Anlisis de mezclas de sistemas absorbentes

La absorvancia de una disolucin a una longitud de onda determinada es igual a la
suma de la
absorvancia de los compuestos individuales:

ATotal = A1 + A2 + ... + An
ATotal = e1 b c1 + e2 b c2 + ... + en b cn

Esta relacin hace posible la determinacin cuantitativa de los compuestos de una m

ezcla incluso si sus
espectros se superponen. (Transparencia Figura 6
10).
Es posible resolver estos dos componentes simultneamente presentes en la misma d
isolucin. Para ello
la absorbancia a .' es:
Compuesto N
A = e M b cM + e N b cN
compuesto M

y a .'' .. A'' = e''M b cM + e''N b cN

Es posible llevar a cabo la determinacin simultanea sin conocemos laos valores d

e la absortividad
molar a estas dos longitudes de onda. Esto se determina utilizando rectas de cal
ibrado construidas a partir de
estndares individuales de cada una de ellas.
Conocidos los valores de la absortividad molar, medimos las absorvancias A' y A
'', por lo que solo
tenemos que despejar la [ ] de cada uno de ellos.
Para la eleccin de estas longitudes de onda, lo ideal es usar aquellas longitude
s de onda donde aquellos
de los compuestos presenten una seal mxima y la otra mnima o despreciable. Esto se
puede aplicar siempre
que no haya interacciones entre los compuestos.
Tericamente, se puede aplicar a sistemas con ms de dos componentes, sin embargo,
las
indeterminaciones en los datos se hacen mayores a medida que el nmero de medidas
aumenta.

4.2.4. Espectroscopia de derivada y longitud de onda dual

En la espectroscopia de derivada, los espectros se obtienen en la derivada de or
den n, en funcin de la
longitud de onda. A menudo, esta representacin muestra detalles que no se aprecia
n en un espectro ordinario
(o de orden cero). Adems en ocasiones, es posible eliminar las interferencias deb
idas a compuestos no
deseados en cuanto determinamos algn analito de inters. Es decir, podemos medir la
seal del componente de
inters donde la del otro componente, es cero.
Esta tcnica se denomina, la tcnica del zero-crossing. ( Fig. 3)

En general, para ver las mezclas de los dos componentes, se suelen

encontrar ceros. Pero es ms difcil en mezclas de ms de dos componentes.
Existe tambin la posibilidad de transformar el espectro de una mezcla en
otro independiente de la [ ] de uno de los componentes.
Am = eM b cM + eN b cN

Si dividimos esta expresin por un espectro de [ ] conocida del

componente CM. As, la absorvancia resulta:

d Am d em b CM d em b CN
.. .... = .. .... + .. ....

d. eM b CM d. em b CM d. em b CM

Si derivamos esta expresin con respecto a .:

d Am CN d eN
.. .... = .. .. ..
d. eM b CM CM d. eM

Esta expresin solo depende de la [ ] del otro componente y de la [ ]

utilizada como divisor.
En general, la tcnica de derivadas se ha usado para la resolucin de
mezclas de analitos con seales solapadas.
Una desventaja de los espectros derivados es que se produce una
degradacin en la relacin seal/ruido al derivar. Sin embargo, en esta
regin del ultravioleta
visible, no hay un factor serio.
Para obviar esta relacin seal/ruido utilizamos filtros analgicos.
En cuanto a la espectroscopia de longitud de onda dual, sabemos que
tienen un elemento dispersante, de manera que, dos haces de longitud de
onda ligeramente diferente (l 2 nm) se hacen incidir alternativamente
sobre la muestra pasando la radiacin transmitida seguidamente al detector
y sin tener un haz de referencia. (Fig. 8.ll)
El parmetro generador, es la diferencia entre las seales alternas y da
una buena aproximacin de las derivadas de la absorvancia en funcin de la
longitud de onda. Esta tcnica es adecuada para la obtencin de espectros
de analitos presentes en disoluciones turbias.
Otra aplicacin de esta tcnica, es en el anlisis de un analito en
presencia de una interferencia espectral. El procedimiento consiste en
medir la absorvancia a 2. en que la interferencia tiene una absortividad
molar (e) parecida o similar, mientras que el analito presenta una gran
diferencia en los valores de e. Entonces, la absorvancia diferencial es
directamente proporcional a la [ ] de analito.

e'2
- 89

Interferencia
e'1
e1 e1

.1 .2 .

..
.. = a [.]
..

4.3. Valoraciones fotomtricas

Las medidas fotomtricas, pueden utilizarse para la localizacin del punto de
equivalencias en una valoracin siempre que el analito, los reactivos o productos
absorban
radiacin.
Alternativamente un indicador absorbente puede proporcionar este punto de equiv
alencia.

4.3.1. Curvas de valoracin

Consiste en representar la absorbancia en funcin del volumen de valorante aadido.
Las curvas de valoracin fotomtricas, presentan dos tramos rectos con diferentes pe
ndientes; uno al
principio de la valoracin y otro, pasado el punto de equivalencia formndose el pun
to final como la interseccin
entre las dos rectas extrapoladas.
La valoracin (por ej.) de una especie no coloreada con un valorante coloreado que
se decolora en la
reaccin, da lugar a una lnea horizontal en las etapas iniciales, seguido por una rp
ida absorbancia pasado el
punto de equivalencia. (Fig. 2.40)
Con objeto de obtener el punto de equivalencia fotomtrico de manera satisfactoria
, es
necesario que el sistema absorbente cumpla la Ley de Beer.

4.3.2. Aplicaciones de las valoraciones fotomtricas

Estas valoraciones presentan resultados ms satisfactorios que los obtenidos media

nte anlisis
fotomtrico directo, ya que se utilizan los datos de varias medidas para determina
r el punto final y adems, la
presencia de otras especies absorbentes pueden no interferir.
Algunos ejemplos concretos son valoraciones son EDTA y otros agentes complejante
s, muchos de los
reactivos usados en reacciones redox que presentan espectros de absorcin caracters
ticos o valoraciones de
mezclas de cationes con un mismo reactivo mediante la formacin de complejos por d
iferente absortividad
molar.

A (340nm)

Cu2+

P.F.

Bi3+
P.F.

V (EDTA)

TEMA 6:

ESPECTROSCOPIA DE FLUORESCENCIA Y FOSFORESCENCIA MOLECULAR

1. INTRODUCCIN
La mayor de las sustancias que absorbe radiacin ultra
violeta
visible, pierden exceso de energa en forma de calor
mediante choques con otros tomos o molculas. Existen algunas
sustancias que solo pierden una parte de la energa absorbida en
forma de calor y otra emitida en forma de radiacin
electromagntica de mayor longitud de onda, por tanto, de menor
energa que la radiacin absorbida.

Este proceso de emisin se conoce con el nombre de luminiscencia, trmino que englo
ba la
fluorescencia y fosforescencia.
La diferencia entre estos dos trminos se basa en el mecanismo en el
que la molcula vuelve a su estado fundamental y por el tiempo
transcurrido entre la absorcin y la emisin.

2. FUNDAMENTO DE LOS PROCESOS LUMINISCENTES

En general, cuando una molcula absorbe radiacin desde el estado electrnico y vibrac
ional
fundamental hasta un estado electrnico y vibracional excitado para que se produzc
a luminiscencia, es necesario
que la sustancia absorba previamente radiacin de longitud de onda adecuada.
Cuando esto ocurre la radiacin es absorbida a unos 10- 15 segundos. Una molcula en
estado excitado
tiene una vida de (10- 7 - 10- 8) segundos y durante ese tiempo pierde toda part
e de su exceso de energa
mediante tres procesos:

1.) Remitir un fotn de la misma frecuencia que el absorbido . emisin de Resonancia.

2.) Perdiendo su energa vibracional emitiendo un fotn de radiacin infrarroja y que
pase al nivel
vibracional mas bajo del estado electrnico excitado.
3.) Perdiendo su energa vibracional y que pase al estado vibracional mas bajo del
estado electrnico
excitado sin emitir radiacin por colisiones.

Las dos primeras alternativas son poco probables y solo ocurren en gases a presi
ones muy bajas.
Cuando la molcula se encuentra en el nivel vibracional ms bajo del estado electrnic
o excitado, puede perder
el exceso de energa para volver al estado fundamental de tres maneras:
1.) Sin omitir radiacin perdiendo la energa electrnica mediante choques o interacci
ones, es decir,
en forma de calor.
2.) Emitiendo un fotn de radiacin ultra violeta o visible . Fluorescencia.
3.) Pasando a un nuevo estado excitado metaestable llamado triplete, y volviendo
al estado
fundamental despus de un cierto tiempo emitiendo un fotn de radiacin ultravioleta visible
. Fosforescencia.
Estados Singletes y Tripletes

En la mayora de las molculas que estn en estado fundamental cada orbital molecular
est ocupado
por un par de electrones que como consecuencia del Principio de Exclusin de Pauli
, tendrn espines opuestos, y
por tanto, el espn neto ser cero, tal estado es conocido como Singlete.
Cuando un electrn de un estado singlete es promovido a un nivel de energa superio
r, su espn puede
mantenerse apareado ante el electrn, ante el orbital original, (Fotocopia), obten
indose un singlete excitado o
bien en el estado excitado puede alinearse con dicho espn, dando lugar a un Tripl
ete. En este caso los espines
sern iguales.
Segn la regla de Hund, la energa asociada a espines paralelos es menor que la aso
ciada a espines
opuestos, y por tanto, el estado triplete en estado excitado tiene menor energa q
ue el singlete excitado, ya que

una transicin singlete

triplete o viceversa es menos probable que una transicin si
nglete singlete, puesto que
supone un cambio ms profundo en el estado electrnico.
La vida media de un estado excitado triplete ser siempre ms larga que la de un si
nglete, pudiendo
oscilar desde 10- 4 seg. a varios segundos.

Procesos en molculas en estado excitado: los principales procesos que implican e

stado excitados son:
1.) Absorcin
Cuando una molcula absorbe energa de una longitud de onda determinada, una de los
electrones
acoplados pasa del nivel vibracional ms bajo del estado fundamental a cualquier n
ivel ms bajo del primer
singlete excitado o tal vez si la energa es la adecuada al segundo singlete excit
ado. Estas transiciones son
altamente especificas, de manera que la radiacin de una determinada energa es abso
rbida por solo una
estructura caracterstica y son las responsables del espectro de absorcin ultraviol
eta de la sustancia en cuestin.
Por otro lado, la excitacin directa a un estado triplete por absorcin
generalmente no ocurre por tratarse de una transicin prohibida. Sin
embargo, un triplete puede originarse a partir de un singlete excitado de
mayor energa. La molcula en estado excitado puede volver a estado
fundamental por varios caminos.
Estado favorecido: aquel que conduzca al mnimo la vida del estado excitado.
La interpretacin de la luminiscencia requiere adems considerar estos procesos.

2.) Relajacin Vibracional

Una molcula puede ser excitada a cualquier nivel vibracional de un estado electrni
co excitado, sin
embargo en disolucin la energa vibracional excesiva se pierde rpidamente sin emisin
de radiacin a
consecuencia de choques entre las molculas de la especie excitada y otras molculas
presentes como el
disolvente,... resultando un pequeo aumento de la temperatura de la disolucin.
Este proceso ocurre en un tiempo de 10- 13 - 10- 10 segundos, siendo suficientem
ente rpido para que
otros procesos no compitan con l. Por ello todos pos dems procesos del estado exci
tado pueden considerarse
como originados desde el nivel vibracional ms bajo de un estado electrnico excitad
o.
Una consecuencia de la relajacin vibracional es que la emisin fluorescente tiene l
ugar a una longitud

de onda mayor que la de la radiacin excitante. Fig. (Diagrama de energa).

3.) Conversin Interna

Trmino que se designa a la transicin desde el nivel vibracional inferior de una es
tado electrnico de
energa superior a uno de los niveles vibracionales superiores de un estado electrn
ico de energa inferior. Esto
implica que esta transcurre sin emisin de radiacin. La conversin interna se produce
ms fcilmente cuando
dos niveles de energa se encuentran suficientemente prximos como para que se de un
solapamiento entre sus
niveles vibracionales. Este proceso que tiene lugar es inmediatamente seguido de
una relajacin vibracional al
estado inferior del nivel energtico. La conversin interna tambin proporciona un mec
anismo para ir de estados
excitados al estado fundamental.

4.) Cruzamiento entre sistemas

Implica la transicin desde el nivel vibracional ms bajo de un singlete a uno de lo
s niveles paralelos
superiores de un triplete, o viceversa, sin emisin de radiacin. Este proceso impli
ca un cambio en el espn y por
ello su velocidad es menor que la de la conversin interna, aumentando a medida qu
e baja la diferencia de
energa entre el singlete y el triplete implicados en el mismo y cundo ocurre tamb
in es inmediatamente seguido
de relajacin vibracional.
5.) Fluorescencia
Se observa que cuando la transicin desde el primer singlete excitado al estado fu
ndamental va
acompaado por la emisin de un fotn, en el proceso inverso de la absorcin existe una
relacin inversa sencilla
entre la vida de un estado excitado y la absortividad molar del pico correspondi
ente . aumentando la
absortividad molar se deriva que la vida del estado estacionario es menor que la
vida del estado excitado .
aumenta la probabilidad de que el camino fluorescente sea ms rpido que otros proce
sos.
La fluorescencia implica tambin transiciones desde el nivel vibracional inferior
del primer singlete a
distintos niveles vibracionales del estado fundamental. Una consecuencia es que
los fotones fluorescentes van a
tener menor energa, y por tanto, mayor longitud de onda que los fotones absorbido
s para producir el estado
excitado.

6.) Fosforescencia
Cuando la transicin desde un estado excitado triplete al estado fundamental es ac
ompaada por la
emisin de un fotn, como es un proceso de espn prohibido, una transicin triplete
lete es mucho menos
probable que una transicin singlete singlete.
La vida media del estado triplete excitado respecto a la desactivacin por emisin,
es siempre menor
que la de un singlete.

7.) Conversin Externa

sing

Consiste en la desactivacin de un estado electrnico excitado por transferencia de

energa entre las molculas excitadas del disolvente y otros solutos.
Una evidencia de este fenmeno es el efecto que ejerce el disolvente sobre la
intensidad de fluorescencia.

3. VARIABLES QUE AFECTAN A LA FLUORESCENCIA

Una sustancia ser fluorescente o no, dependiendo de su estructura y del medio qumi
co, aunque el
rendimiento cuntico y el tipo de transicin influyen en la intensidad de la fluores
cencia.

3.1. Rendimiento cuntico y tipo de transicin

La intensidad de fluorescencia va a estar determinada por un factor conocido co

mo eficacia o
rendimiento cuntico de la fluorescencia, que es la razn entre el nmero de molculas q
ue se desactivan por
emisin de fluorescencia y el nmero total de molculas excitadas. (Fotocopia)

3.2. Factores estructurales

a) Extensin del sistema electrnico:
El aumento en la estructura del sistema electrnico p de forma conjugada forma el
efecto de aumentar
la velocidad de absorcin de la fluorescencia y disminuir la diferencia de energa e
ntre el estado fundamental y
el primer singlete excitado.
La conjugacin efectiva entre los enlaces p es mayor si estos se encuentran en el
mismo plano, y por
ello las sustancias mas intensamente fluorescentes son aquellas que poseen menor
nmero de grupos funcionales
sobre anillos aromticos en su molcula. As en los hidrocarburos aromticos no sustitui
dos, la eficacia cuntica
aumenta conforme la hace el nmero de anillos. (Fotocopia).
En cuanto a los sistemas heterociclos ms simples como furano, piridina...... no
presentan fluorescencia,
pero la fusin de stos con un anillo bencnico hace que aumente la absortividad molar
y la probabilidad de
absorber fluorescencia.

b) Efecto de los sustituyentes

Las sustancias en el anillo bencnico originan cambios en la longitud de onda del
mximo de absorcin,
el de la emisin y tambin el la eficacia cuntica. Las sustancias aceptoras de electr
ones como el grupo
carboxilo, nitro y los haluros, disminuyen la fluorescencia, mientras que los da
dores como amino e hidroxilo la
intensifican.

c) Efecto de la rigidez estructural

Experimentalmente se observa que la fluorescencia se favorece en aquellas molcula
s que poseen
estructuras rgidas o que tienen anillos o forman quelatos. As por ejemplo, el bife
nilo es poco fluorescente
mientras que el fluoreno lo es mucho. (Estructuras)

d) Efecto del impedimento estrico

En general, fomenta la desactivacin sin emisin de radiacin. Ej.: Estilbeno . fotoco
pia

3.3. Efectos ambientales

a) Efecto de la temperatura:
La eficacia cuntica decrece con el aumento de la temperatura, ya que esta contrib
uye al aumento de las
colisiones entre molculas, y por tanto a la desactivacin mediante colisin.

b) Efecto del disolvente:

La eficacia cuntica de la fluorescencia aumenta con la viscosidad del disolvente
debido a que
disminuye las colisiones.

Sin embargo, la prdida del disolvente y la capacidad para la formacin de enlaces p

or puentes de
hidrgeno son crticos, ya que afecta a la naturaleza del estado excitado.

c) Efecto del pH:

El pH ejerce un marcado efecto sobre la fluorescencia de los compuestos aromticos
con sustancias
cidas o bsicas en el anillo, afectndose normalmente tanto la longitud de onda como
la intensidad de emisin.
Esto es debido a que el pH afecta principalmente a la carga y formas resonantes
del fluorforo. Ej.: la anilina
presenta fluorescencia en la regin visible en medio neutro o alcalino, pero no en
medio cido.
Algunas sustancias presentan una fluorescencia tan sensible a los cambios del pH
que pueden usarse
como indicador cido
base.

d) Efecto del oxgeno disuelto y de los iones paramagnticos:

La presencia de oxgeno disuelto a menudo reduce la intensidad de emisin de una sol
ucin
fluorescente.
A veces este efecto es debido a la oxidacin de la sustancia fluorescente, pero la
mayor frecuencia se
debe al carcter paramagntico del oxgeno molecular que puede esperarse que favorezca
el autocruzamiento
entre sustancias y la conversin de las molculas excitadas al estado triplete.

e) Relacin entre intensidad de fluorescencia y concentracin:

La ltima variable que consideraremos es la concentracin y precisamente la relacin e
ntre la intensidad
de fluorescencia observada.
La concentracin es la base de las aplicaciones cuantitativas de esta tcnica de int
ensidad de
fluorescencia, que va a ser proporcional al nmero de estados excitados fluorescen
tes que se forman, y este a su
vez ser proporcional a la intensidad de la radiacin excitante absorbida. (Fotocopi
a).
Cuando la concentracin de una muestra es muy alta o es muy absorbente, tienen lug
ar
unos procesos de autoabsorcin de la radiacin de excitacin y de la emisin
fluorescente, a lo largo de su recorrido a travs de la cubeta, como consecuencia
de
ella, las rectas de calibrado:

Sf = f (c)
Esta relacin que se ve modificada produce una inversin de la seal de fluorescencia.
A este fenmeno
se le conoce como Inversin de la Fluorescencia por concentracin, y es debido a lo
que se conoce como
efecto de filtro interno. La concentracin de inversin depende de las caractersticas
de absorcin de la
disolucin y de la geometra del sistema, siendo independiente de y0.

4. INSTRUMENTACIN Fig. (8
7)
Los fluormetros (anlogos a los fotmetros de absorcin en los que se usan filtros para
seleccionar la
longitud de onda de los haces de excitacin y emisin) y los espectrofluormetros (que
utilizan
monocromadores).
1.) Fuente:
Normalmente en los fluormetros se emplea una lampara de arco de Hg y en los espec
trofluormetros se
usa una lampara de arco de Xe, siendo el espectro de esta lampara continuo desde
300 a 1300 nm.

2.) Filtros:
Los monocromadores utilizan filtros de interferencia y absorcin en fluormetro y cr
omatografa en
espectrofluorimetros.
En cuanto a los monocromadores, actualmente se usan los de tipo red, ya que prop
orcionan rejas de
separacin de longitud de onda como en los prismas, y dispersan linealmente la rad
iacin.

3.) Celdas portamuestras:

Se utilizan tanto cubetas cilndricas como rectangulares de 1 cm de lado, puede se
r de cuarzo o slice
fundida. Para el ultravioleta ya que el cuarzo presenta una fluorescencia nativa
por enzima de 320 nm, mejor
usar vidrio Pyrex.

4.) Detectores:
Para amplificar la seal se usan tubos fotomultiplicadores, en espectofluorimetros
tambin se han usado
detectores con diodos (componente electrnico que permite el paso de la corriente
en un solo sentido) alineados.

5.) Dispositivo de salida de detectores o registradores:

El instrumento de lectura ms simple es un medidor que se emplea en fluormetros.
Equipos superiores suelen estar equipados con registradores.
Los espectrofluormetros incluyen microprocesadores para la adquisicin de datos.
Se han desarrollado comercialmente una gran variedad de aparatos cuya complejida
d y costes difieren
mucho.
Los fluormetros son una herramienta simple y de menor coste, los espectrofluormetr
os van equipados
con dos monocromadores y usa como detector los tubos fotomultiplicadores con los
que se consiguen grandes
factores de amplificacin de la seal, adems los espectros fluormetros suministran tan
to los espectros de
excitacin como la emisin. El espectro de excitacin se obtiene registrando la variac
in de la intensidad de
fluorescencia manteniendo el monocromador de emisin a longitud de onda fija, gene

ralmente suele ser la del

mximo de emisin del compuesto y se varia la longitud de onda de excitacin.
El espectro
escencia,
manteniendo
l mximo de
compuesto y

de emisin se obtiene registrando la variacin de la intensidad de fluor

el monocromador de excitacin a una longitud de onda fija generable de
absorcin del
se varia la longitud de onda de emisin.

El espectro de excitacin de una molcula debe ser idntico al de absorcin. Los espectr
os de emisin
obtenidos con diferentes instrumentos no son comparables, ya que la intensidad d
e fluorescencia depende en
gran medida de las caractersticas de la lampara, detector y monocromador. Se han
desarrollado mtodos para
obtener el espectro corregido, que es el espectro verdadero libre de efectos ins
trumentales aunque los
instrumentos modernos lo corrigen automticamente, en cuanto a la fosforescencia.
Modificacin en la
intensidad para medir fosforescencia.
Al relacionar la intensidad de fosforescencia con la concentracin, es preciso hac
er las mismas
consideraciones que en el caso de fluorescencia.

Ip = K fp I0 (2 3 ebc)

no sea superior a 0 05 que es mejor

al disminuir 0 01, aunque el intervalo de concentracin para el
que la curva es lineal suele ser mayor que en el caso de la
fluorescencia. (Fig. 9 7).
La fosforescencia debe realizarse a la temperatura del nitrgeno lquido, que es de
1 77 K, mientras que
las medidas de la fluorescencia se realizan a temperatura ambiente.

5. APLICACIONES
Los mtodos de fluorescencia y fosforescencia son ms sensibles,
selectivos y aplicables a intervalos de concentracin ms bajos que los
espectrofotomtricos. Por otro lado la exactitud y precisin de los mtodos
fotoluminiscentes es normalmente peor que la de los espectrofotomtricos.
Generalmente los mtodos fosforescentes son menos precisos que los fluorescentes.
Los campos de aplicacin pueden incluirse en dos grandes grupos:
- Anlisis cualitativo y estructural
- Anlisis cuantitativo
Si bien es usada tambin la fluorescencia como tcnica auxiliar de otras tcnicas.
5.1. Anlisis cualitativo y estructural

Entre los procedimientos base de la identificacin tenemos la

formacin de un quelato fluorescente, el cambio de fluorescencia
de un compuesto orgnico, la fluorescencia nativa. Sin embargo
esta tcnica tiene solo un valor limitado para identificacin de
compuestos, no alcanzando los resultados obtenidos por otras
tcnicas como infrarrojos o de RMN ( Radiacin Magntica Nuclear
).

5.2. Anlisis cuantitativo

La concentracin de analito necesaria para producir
fluorescencia medible es normalmente muy pequea, por lo que

esta tcnica es til en la determinacin de trazas tanto de

compuestos inorgnicos, como orgnicos o biolgicos.
En cuanto al anlisis de iones inorgnicos, existen dos tipos
de mtodos:
- Mtodos directos: implican la formacin de un
quelato fluorescente y la medida de su emisin, por
ej. Cationes Al3+ con rojo de alizarina.

- Mtodos indirectos: se basan en medidas de mnimos

de intensidad de fluorescencia que resulta de la
accin alternadora, lo que se llama quenching de la
sustancia que se va a determinar. Ej. Aniones, F- con
complejo Al3+ con alizarina.
Anlisis de compuestos orgnicos y biolgicos

Las aplicaciones ms importantes de la fluorescencia se

encuentran en este campo y los mtodos se basan en la medida de
la fluorescencia directa o bien de la fluorescencia inducida por
reaccin qumica.
Entre los compuestos orgnicos fluorescentes de inters estn
los hidrocarburos aromticos policclicos PDH5.
Existe tambin un nmero elevado de compuestos biolgicos
. fluorescencia en aminocidos, enzima...
Entre las reacciones qumicas empleadas para crear
compuestos luminiscentes, podemos sealar:

a) Reacciones de marcaje en las que un fluoroforo se une

directamente al analito con el fin de hacerlo ms
detectable. Ej. Cl- (Cloro densilo con aminas secundarias).

b) Reacciones basadas en la formacin de complejos

metlicos. Los iones metlicos pueden servir para hacer
fluorescente a un analito. Ej. Anlisis de tetraciclina.

5.3. Aplicacin de fotoluminiscencia como tcnica

auxiliar de otras tcnicas
En otras ocasiones, el fenmeno de la fluorescencia se emplea como
auxiliar en otras tcnicas.

Casos:
.

Uso de indicadores fluorescentes en volumetras cido-base, precipitacin y complejacin

Deteccin fluorescente en cromatogrfia de papel y capa fina . preparado de derivado

s
fluorescentes de compuestos no fluorescentes antes o despus de la separacin.
As igual es un mtodo sensible para la deteccin en HPLC la derivatizacin postcolumna.

Tambin se puede usar para seguir reacciones catalizadas por enzimas y determinar
la actividad
de la enzima. Ej. Tomamos una sustancia no fluorescente sobre la cual acta la enz
ima para
producir fluorescencia o concentracin de la misma.
Mtodos fosforimtricos. Aplicaciones

Los mtodos fosforescentes y fluorescentes suelen ser complementarios ya que los

compuestos que son
fuertemente fluorescentes presentan una dbil o nula fosforescencia y viceversa. L
a fosforescencia ha sido usada
para la determinacin de una gran variedad de especies orgnicas u bioqumicas, pero d
ebido a la necesidad de
trabajar a bajas temperaturas y a la generalmente pobre precisin de esta tcnica no
ha tenido una utilizacin tan

amplia como la fluorometra. Resulta atractiva su selectividad potencial.

TEMA 7:

ESPECTROSCOPIA ATMICA BASADA EN LA ATOMIZACIN CON LLAMA Y

ELECTROTRMICA

1. ESPECTROSCOPIA ATMICA: FUNDAMENTOS Y CLASIFICACIN

La espectroscopia atmica se basa en la absorcin, emisin o fluorescencia por tomos o
iones
elementales. Existen dos regiones del espectro que dan informacin atmica: ultravio
leta
visible y rayos x,
siendo la primera, la que se estudia aqu.
Los espectros atmicos ultravioleta
visible, se obtienen mediante un adecuado tra
tamiento trmico
que convierte los componentes de una muestra en tomos o iones gaseosos.
El proceso por el cual la muestra se convierte en un vapor atmico se denomina AT
OMIZACION.
Depende la precisin y exactitud de estos mtodos, en gran medida de esta etapa. (T
abla 10
1)
Entre estos mtodos se han aplicado con xito a la determinacin de ms de setenta elem
entos con
sensibilidades de entre ppm
ppb.

2. ATOMIZACIN DE LA MUESTRA
Los atomizadores son de dos tipos:

- Continuos.
- Discretos.

2.1. Atomizadores continuos

La muestra se introduce en el atomizador a una velocidad constante y la seal espe
ctral es, por tanto,
constante en el tiempo. Los tres primeros mtodos de atomizacin . (Tabla 10 1, son
de este tipo).

En cada uno de ellos, la disolucin de la muestra se transforma en una niebla de

pequeas gotas firmemente
divididas mediante un flujo de gas comprimido. Este proceso se denomina NEBULIZA
CION.
A esta nebulizacin le sigue la etapa de disolvatacin en la que el disolvente se e
vapora para producir un
aerosol molecular slido, firmemente dividido. La disociacin de las molculas conduce
luego a la formacin de
un gas atmico, y a su vez, los tomos pueden disociarse en iones y electrones y se
producen as, espectros de
emisin molecular, y dos tipos de espectros de emisin atmicos . (Todo esto, en diagr
ama bloque resumen)

2.2. Atomizadores discretos

En estos, una cantidad medida de la muestra, se introduce en el dispositivo com
o un bolo de lquido o
slido. La disolvatacin tiene lugar al subir la temperatura hasta el valor en que t
iene lugar la evaporacin rpida
del disolvente. A continuacin, la temperatura se eleva de forma drstica, de tal ma
nera que las otras etapas de la

atomizacin se producen en un breve periodo de tiempo. En estas circunstancias, la

seal espectral adquiere la
forma de un pico bien definido. Los atomizadores electrotrmicos son de este tipo,
as como la atomizacin con
chispa elctrica. Mientras que, en un arco elctrico se emplean tanto el modo contin
uo como el discreto,
dependiendo del tipo de muestra que se analiza.

3. ESPECTROS ATMICOS
Cuando una muestra se atomiza por cualquiera de los procedimientos anteriores,
una importante fraccin de
los constituyentes metlicos se transforman en tomos gaseosos y adems, segn la temper
atura del atomizador,
una cierta fraccin de estos tomos se ioniza originndose as una mezcla gaseosa de tomo
s e iones elementales.

3.1. Diagramas de niveles de energa

Los espectros de absorcin, emisin o fluorescencia de las partculas atmicas gaseosas
, estn
constituidas por lneas estrechas que son bien definidas y que provienen de las tr
ansiciones de los electrones ms
externos. En el caso de los metales, las energas de esas transiciones son tales q
ue implican a la radiacin
ultravioleta
visible y al infrarrojo
cercano.
Los diagramas de energa de los electrones externos proponen un mtodo adecuado par
a la descripcin de
los procesos en los que se basan los distintos tipos de espectroscopia atmica. As,
el diagrama del Na+ es un
diagrama caracterstico. (Figura 10
2)
Las energas correspondientes a las distintas orbitales atmicas, se indican median
te lneas horizontales. Las
orbitales p, se desdoblan en ms niveles, que difieren ligeramente en energa, pudie
ndo justificarse este hecho
mediante las interacciones entre el movimiento orbital del electrn alrededor de s
u propio eje y el espn. Con las
orbitales d y f, se producen diferencias similares, pero sus magnitudes son norm
almente tan pequeas que
resultan indetectables. El desdoblamiento de las orbitales p, d y f de elevada e
nerga en dos estados, es
caracterstico de todas aquellas especies si tienen un nico electrn externo. As, el d
iagrama de niveles de
energa para Mg+ tiene la misma apariencia que el correspondiente Na+. A medida qu
e sube el nmero de
electrones fuera de las capas ms internas, los diagramas de niveles de energa se h
acen cada vez ms complejos,
de manera que para los metales pesados, y particularmente para metales de transi
cin, existe un gran nmero de
niveles de energa muy poco espaciados, y en consecuencia, el nmero de lneas de abso
rcin o emisin puede
ser muy alto.

Hay que tener en cuenta, que las transiciones que producen radiacin se observan
solamente entre ciertos
estados de energa. Por ejemplo: no se dan las transiciones de los estados 5s 4s a
l 3s ni entre los distintos estados
p, o en los de d. Estas transiciones se llaman prohibidas, y existen reglas de s
eleccin que permiten la
prediccin de cules son las transiciones ms probables y cules no.

3.2. Espectros de emisin atmica

A temperatura ambiente, todos los tomos de una muestra se encuentran esencialmen
te en el estado
fundamental. En estas circunstancias, por ejemplo, el nico electrn externo del Na
metlico ocupa el orbital 3s.
La excitacin de este electrn a orbitales ms altos, se puede conseguir mediante el c
alor de una llama, una
chispa o un arco elctrico. El tiempo de vida de un tomo excitado es breve y su vue
lta al estado fundamental va
acompaada de la emisin de un fotn de radiacin. Las dos lneas que presenta el Na son 5
890 y 5896 , y son

las ms intensas y las responsables del color amarillo que se observa cuando se in
troducen las sales del Na en
una llama. (Figura 10
5).
Adems, este pico ms ancho corresponde a las transiciones de 3p a 3s y el pico que
aparece a 5700
corresponde a dos picos no resueltos . a las dos transiciones 4d a 3p. El poder
de resolucin del monocromador
es insuficiente para poder separar los picos.

3.3. Espectros de absorcin atmica

En un medio gaseoso a elevada temperatura, los tomos de los metales son capaces
de absorber radiacin de
. (longitud de onda), caracterstico de transiciones del estado fundamental a nive
les superiores. De este modo,
un espectro de absorcin atmica est constituida por lneas de resonancia, que son el r
esultado de transiciones
del estado fundamental a niveles superiores. As, por ejemplo, en el caso de Na, s
e observan experimentalmente,
picos de absorcin aguda a 5890, 5896 y 3302, 3302 .
Cada par adyacente de estos picos corresponden a transiciones desde el nivel 3s
a 3p y desde 3s a 4p.

3.4. Espectros de fluorescencia atmica

En una llama, los tomos pueden presentar fluorescencia cuando se irradian en una
fuente intensa que
contiene las longitudes de onda que son absorbidas por el elemento. Los espectro
s de fluido resultante, se miden
adecuadamente a un ngulo de 90, con respecto a la trayectoria luminosa y la radiac
in que se observa. Es por
lo general, el resultado de la fluorescencia de resonancia.
Cuando los tomos de Mg se exponen a fuente ultravioleta, se absorbe la radiacin d
e 2852 que
corresponde al salto de 3s a 3p, emitindose posteriormente, fluorescencia de reso
nancia a esa misma longitud de
onda.
Sin embargo, cuando los tomos de Na absorben radiacin de longitud de onda de 3303
, los electrones
pasan al estado 4p, producindose a continuacin, una desactivacin no radiante hacia
estados 3p mucho ms
rpidamente que la fluorescencia de resonancia como consecuencia de la fluorescenc
ia que se observa y se
presenta a 5890 y 5890 .
Y un tercer mecanismo para la fluorescencia atmica, en que los tomos de Talio exc
itados en una llama,
vuelve al estado fundamental en dos etapas: una de ellas es fluorescente y produ
ce lneas a 5350 , y a
continuacin se produce rpidamente una desactivacin no radiante hasta el estado fund
amental. Adems se

puede observar fluorescencia de resonancia a 3776 . (Figura 10

6)

3.5. Anchura de las lneas espectrales

En espectroscopia atmica, la anchura de lneas espectrales es de gran importancia,
as como las lneas
estrechas son muy convenientes tanto en absorcin como emisin, ya que as se reducen
las posibles
interferencias debidas al solapamiento de espectros. Las lneas de absorcin y emisin
atmica presentan
generalmente, una distribucin de longitud de onda simtrica alrededor de una longit
ud de onda media, que
coincide con la longitud de onda del mximo de absorbencia de la radiacin absorbida
o la mxima intensidad de
la radiacin emitida.
La observacin de diagramas de energa sugiere que, una transicin entre dos niveles
discretos de energa
dara lugar a una lnea, a una longitud de onda nica. Sin embargo, distintos fenmenos
como el efecto doppler,

efecto del campo magntico o elctrico, y efectos de presin, debido a colisiones del t
omo, dan lugar a que
estos efectos generen el ensanchamiento de las lneas espectrales.

4. ATOMIZACIN CON LLAMA

Una disolucin de muestra se pulveriza en una llama mediante nebulizador, el cual
transforma la disolucin
en un aerosol constituido por diminutas gotitas de lquido. A continuacin, tiene lu
gar una serie de procesos que
dan lugar a una mezcla de tomos de analito, iones de analito, molculas de muestra,
molculas de xido de
analito y una variedad de especies moleculares y atmicas que se forman por reacci
ones entre el combustible, el
oxidante y la muestra, debido a la gran variedad de procesos complejos que se da
n en la llama. La atomizacin
es la etapa ms crtica en la espectroscopia de llama, y la que limita la precisin de
estos mtodos. Por ello, es
importante conocer las caractersticas de las llamas y las variables que les afect
an.

4.1. Tipos de llamas (Tabla 10

2)

En el caso de usar O2 en el aire, se obtienen temperaturas entre 1700 - 2400C ha

ciendo mezclas con gas
natural, H2 y acetileno. A estas temperaturas, slo los metales ms fcilmente excitab
les como los alcalinos y
alcalinotrreos, producen efectos de emisin adecuados.
Los metales pesados se excitan con oxido nitroso, ya que estos oxidantes produc
en temperaturas entre 2500
3100C con los combustibles ms comunes.
Tambin son de considerable importancia, las velocidades de combustin, ya que las l
lamas slo son estables en
ciertos intervalos de caudal; si el caudal no sobrepasa la velocidad de combustin
, la llama se propaga hacia atrs
en el interior del quemador, Cuando el caudal y velocidad de combustin se encuent
ren ajustados, la llama sube
hasta alcanzar un punto por encima del quemador, donde el caudal y la velocidad
de combustible son iguales. En
esta regin es donde la llama es estable; a caudales ms altos, la llama sube y al f
inal alcanza un punto donde se
aparta del quemador. El caudal de la mezcla combustible
oxidante, depende mucho
del combustible y del
oxidante que se usan y es una importante variable que es preciso controlar rigur
osamente.

4.2. Estructura de la llama

La zona de la combustin primaria se conoce por su luminiscencia azul, debido a l
a presencia de radicales

C2, CH.
En esta zona no se alcanza el equilibrio trmico y rara vez se usa en espectroscop
ia de llama.
El rea interconal puede alcanzar varios centmetros de altura en llama rica de ace
tileno
O2 o, acetileno
xido nitroso. Esta zona es rica en tomos libres, y es la que ms se usa en espectros
copia.
El cono externo es zona de reaccin secundaria, dados los picos formados, una reg
in interna se transforma
en xidos moleculares libres, estables. El perfil de la llama proporciona una info
rmacin til respecto a los
procesos que tienen lugar en las distintas partes de la llama. (Figura 10
11)
Tambin tenemos los perfiles de absorbancia (figura 10 12). El perfil de absorban
cia, por ejemplo para
Mg, presenta a la mitad de la llama un mximo, debido en primer lugar, al aumento
inicial de la absorbancia al
aumentar la distancia a la base de la llama y que se debe a que se produce un au
mento en el nmero de tomos
de Mg, debido al mayor tiempo de exposicin a la llama. Sin embargo, al acercarse
a la zona externa, comienza
una apreciada oxidacin del Mg, lo que origina una disminucin en la absorbancia.

El comportamiento de la plata es que no se oxida con facilidad; es distinta, ob

servndose un aumento en la
absorbancia debido a que se produce un aumento continuo de tomos desde la base ha
sta la periferia de la llama.
Disminuye el Cr, que forma xido fcilmente, y muestra una disminucin continua de la
absorbancia desde la
zona cercana al quemador, lo que sugiere la formacin de xidos desde el principio.
Por tanto, por el anlisis de cada uno de estos elementos, se debe usar una zona
distinta de la llama. Por otro
lado, el perfil de emisin, que es un perfil tridimensional muestra la intensidad
de emisin de una lnea. Por
ejemplo: produccin en una llama.

4.3. Perfiles de la llama (temperatura, absorbancia y

emisin)
(Ver figuras 10

10 y 10

11)

4.4. Atomizadores de llama

Se aplican para medidas de absorcin, emisin y fluorescencia atmica. Un atomizador
de llama consiste
en un nebulizador neumtico que transforma la disolucin de muestra en una niebla o
aerosol que se introduce en
un quemador. (Figura 10
14)
En trminos de reproducibilidad, la atomizacin en llama resulta ser superior a tod
os los dems mtodos
hasta ahora desarrollados para la introduccin de nuestros lquidos con la posible e
xcepcin ICP. (Figura 10
15)
En trminos de sensibilidad, otros mtodos de atomizacin son claramente mejores, pud
iendo darse dos
razones:
- Una gran porcin de la muestra se pierde por drenaje.
- El tiempo de residencia de los tomos individidos en el camino ptico, es breve.

5. ATOMIZACIN ELECTROTRMICA
Los atomizadores electrotrmicos proporcionan mayor sensibilidad, debido a que to
da la muestra se atomiza
en un periodo muy breve y el tiempo de residencia de los tomos en el camino ptico
es de un segundo o ms.
Los atomizadores electrotrmicos se usan para las medidas de absorcin atmica y fluor
escencia atmica, pero
no se han aplicado en los mtodos de emisin

Con estos atomizadores, se evaporan primero unos pocos microlitos de muestra a

baja temperatura, y luego
se calcina a una temperatura alta, en un tubo o cubeta de grafito calentado elctr
icamente.
Despus de la calcinacin, la corriente se incrementa a varios cientos de amperios,
lo que hace que la
temperatura suba aproximadamente a 2500C, producindose la atomizacin de la muestra
en un tiempo que va
de unos pocos milisegundos a un segundo. Es estas condiciones, se mide la absorc
in o la fluorescencia de las
partculas atomizadas en la zona situada inmediatamente encima de la superficie ca
lentada. (Figura 10
16)
(Figura 10 17)
Los atomizadores electrotrmicos presentan la ventaja de su elevada sensibilidad.
La precisin relativa de
estos mtodos est entre el 5
10% en comparacin del 1% o menos, que se puede obtener
en la atomizacin
con llama o plasma. Adems estos mtodos son cortos.

Una desventaja es el intervalo analtico en el que se puede trabajar, pues es peq

ueo, siendo por lo general,
mayor de dos rdenes de magnitud. En consecuencia, la atomizacin electrotrmica se us
a slo cuando la
atomizacin con llama o plasma no proporciona los lmites de deteccin adecuados.

6. ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN ATMICA

Ha sido el mtodo ms usado de los mtodos espectrales atmicos, debido a su simplicida
d, efectividad y
bajo coste relativo.

6.1. Fuentes de radiacin para los mtodos de absorcin

atmica
Los mtodos analticos basados en la absorcin atmica son muy especficos debido a que la
s lneas de
absorcin atmica son considerablemente estrechas, y la energa de transicin electrnica
es nica para cada
elemento. Sin embargo, esta limitacin en la anchura de las lneas crea un problema,
ya que para que se cumpla
la Ley de Beer, es necesario que la anchura del borde de la fuente sea mayor que
la del pico de absorcin. El
principal inconveniente para solventar este problema es cambiar la lmpara para ca
da elemento que se analiza.

1) Lmparas de ctodo hueco.

Es la fuente ms comn para las medidas de absorcin comn, y consiste en un nodo o ctodo
cilndrico
cerrados hermticamente en un tubo de vidrio lleno de Ar o Ne.
El ctodo est constituido por un metal cuyo aspecto se desea obtener o bien sirve
de soporte para una capa
de dicho metal. Cuando se aplica un potencial suficientemente entre los electrod
os, se produce la ionizacin del
gas y los cationes electrones migran hacia los electrodos, de manera que los cat
iones son capaces de arrancar
algunos de los tomos metlicos de la superficie del electrodo y producir una nube a
tmica. A este proceso se le
denomina Chisporreteo.
Una parte de los tomos metlicos desprendidos se encuentran excitados y al volver
al estado fundamental
emiten su radiacin caracterstica.
Finalmente, los tomos metlicos se vuelven a depositar en la superficie del ctodo o

en las paredes del

vidrio del tubo. La eficacia de la lmpara del ctodo hueco depende de su geometra y
del potencial aplicado.
2) Lmparas de descarga sin electrodos.
Son buenas fuentes de espectros atmicos de lneas, y producen intensidades radiant
es que son una o dos
rdenes de magnitud superiores a los del ctodo hueco. Una lmpara con estas caracterst
icas, se construye en un
tubo de cuarzo hermticamente cerrado, que contiene una pequea cantidad del metal c
uyo espectro se desea
obtener de su sal y un gas inerte como el Ar. La lmpara no contiene electrodos y
para su activacin, se usa un
campo intenso de radiofrecuencias o de microondas produciendo as, la ionizacin del
Ar. Existen lmparas
comerciales de descarga sin electrodos para quince o ms elementos, aunque su func
ionamiento no parece ser tan
fiable como el de las lmparas del ctodo hueco.

- Modulacin de la fuente

Es un instrumento de absorcin atmica para eliminar las interferencias producidas

por la emisin de
radiacin de la llama. La mayor parte de la radiacin emitida por la llama se elimin
a mediante el monocromador,
pero la radiacin emitida correspondiente a la longitud de onda seleccionada por e
l monocromador, est siempre
presente en la llama, debido a la excitacin y emisin de los tomos del analito.
A fin de eliminar los efectos de la emisin de la llama, es necesario modular la
salida de la fuente para que
su intensidad oscile a una frecuencia constante. Una forma, es ir interponer ent
re la fuente y la llama un
contador. De este modo, el detector recibe dos tipos de seales, una alterna de la
fuente y otra continua de la
llama.

6.2. Instrumentos para la espectroscopia de

absorcin atmica
El instrumento ha de proporcionar una anchura de banda lo suficientemente estre
cha como para evitar la
medida de la lnea elegida de entre otras que pueden interferir, o que disminuyan
la sensibilidad de los anlisis.
Para ello, pueden usarse filtros de interferencias, pero la mayora de los instru
mentos usan un
monocromador ultravioleta
visible. Los detectores y sistemas de lectura son simi
lares a los descritos para la
espectroscopia de absorcin molecular ultravioleta visible. Se usan detectores fot
omultiplicadores, siendo
necesarios sistemas electrnicos que pueden discriminar entre la seal modulada de l
a fuente y la continuacin
de la llama.
La mayora de los instrumentos van equiparados con ordenador, para el control de
los parmetros
instrumentales y para la adquisicin y manipulacin de datos. En cuanto a los espect
rofotmetros de un solo haz,
consisten en varias fuentes de ctodo hueco, un contador, o una fuente de alimenta
cin para impulsar un
atomizador y un espectrofotmetro sencillo de red o difraccin con un fotomultiplica
dor. En los
espectrofotmetros de doble haz, el haz que proviene de la fuente de ctodo hueco, s
e divide mediante un
contador reflectante, de manera que la intensidad pasa a travs de la llama y la o
tra mitad, por fuera de ella.
Posteriormente, los dos haces lo recombinan mediante un espejo semiplateado y ll
ega a un monocromador de red
y al tubo fotomultiplicador.
A continuacin, pasa a un amplificador donde se amplifica la relacin entre las seal
es de referencia, y la

muestra mayor pasa al sistema de adquisicin.

6.2. Interferencias espectrales
Se produce cuando la absorcin o emisin de una especie que interfiere, se solapa o
aparece muy prxima
a la absorcin o emisin del analito, de modo que, su resolucin por el monocromador r
esulta imposible. Dado
que las lneas de emisin de las fuentes de ctodo hueco son muy estrechas, es rara la
interferencia que se
produce por superposicin de ellas. Tambin se producen interferencias espectrales d
ebido a la produccin de
combustin que poseen bandas de absorcin anchas, o de aerosoles que dispersan la ra
diacin, y as, ambos
bajan la intensidad del haz transmitido, dando lugar a resultados analticos con e
rrores.
Cuando la nica fuente de estos productos es la mezcla de combustible y oxidante,
se puede realizar
fcilmente la correccin, midiendo la absorbancia de un blanco.
Cuando la absorcin o dispersin se debe a la matriz de la muestra, con frecuencia
se puede evitar
modificando parmetros analticos, tales como temperatura, relacin combustible
oxidan
te, si se conoce la

causa de la interferencia. Se puede aadir un exceso de la sustancia interferente,

tanto a la muestra como a los
patrones, de manera, que si el exceso es elevado con respecto a su concentracin e
n la matriz de la muestra, la
contribucin de sta ltima ser despreciable. La sustancia aadida se denomina Amortiguad
or de la radiacin.

6.3. Interferencias qumicas

Se producen como consecuencia de diversos procesos qumicos que ocurren durante l
a atomizacin y que
alteran las caractersticas de absorcin del analito. Son ms comunes que los espectra
les, y afectan pudiendo ser
mnimos si se eligen condiciones de trabajo adecuadas.
Los procesos de mayor inters son:
- La formacin de componentes de baja volatilidad.
- La reaccin de disociacin y,
- Las reacciones de ionizacin
En cuanto a la formacin de compuestos poco voltiles, el tipo ms comn de interferenc
ia es el producido
por aniones que forman compuestos de baja volatilidad con el analito, y por tant
o reducen su velocidad de
atomizacin, originando errores negativos. Este tipo de interferencias pueden elim
inarse o atenuarse de tres
formas:
- a elevada temperatura
- empleando agentes liberadores
- empleando agentes protectores que forman con el analito, especies estables volt
iles.
En cuanto a los equilibrios de disociacin, son los xidos e hidrxidos de los metale
s alcalinos, los que se
disocian con mucha mayor facilidad, por lo que las intensidades de las lneas son
elevadas, incluso a temperatura
relativamente baja.
La ionizacin en las llamas se da en las que contienen aire, como oxidante, y la
ionizacin de tomos y
molculas, aqu es pequea, y por lo general, puede despreciarse. Sin embargo, en las
llamas en las que el
oxidante el O2 o No, la ionizacin es ms importante y hay una concentracin notable d
e electrones libres.
El grado de ionizacin del metal, se encuentra fuertemente influido por la presen
cia de otros metales
ionizables en la llama. Los efectos de estos desplazamientos se pueden eliminar
con la adicin de un supresor de
ionizacin, el cual proporciona una concentracin relativamente alta de electrones e
n la llama y como
consecuencia, se suprime la ionizacin del analito.

6.4. Procedimiento analtico en espectroscopia de

absorcin atmica
a) Preparacin de la muestra.
La muestra ha de introducirse disuelta en agua sin que intervengan muchos de lo
s materiales de inters,
como pueden ser muchos tejidos animales, plantas, derivados de petrleo y minerale
s no solubles en agua y con
frecuencia se requiere un tratamiento previo laborioso.
Las etapas de descomposicin y disolucin de la muestra, a menudo introducen ms erro
res que las propias
medidas espectroscpicas. Adems, los reactivos que se usan, introducen los tipos de
interferencias qumicas y
espectrales.

Para la descomposicin y disolucin de la muestra, alguno de los precedentes ms habi

tuales es el de los
tratamientos con cidos minerales y oxidacin con reactivos lquidos . sulfrico HNC, pe
rclrico .
mineralizacin por va hmeda, adems de combustin en banda de O2. Tambin la mineralizacin
a elevada
temperatura . mineralizacin por va seca; y finalmente, fusin a elevada temperatura
con reactivos con xido
brico y carbonato sdico.
Una de las ventajas de la atomizacin electrotrmica, es que algunos materiales se
pueden atomizar
directamente, evitando de este modo, la etapa de disolucin.
b) Patrones de calibracin.
Idealmente, los patrones de calibracin para el anlisis de absorbancia atmica, debe
ran contener no slo el
analito, sino que tambin debera parecerse lo ms posible a la muestra en cuanto a la
matriz.

c) Efectos que se producen por el empleo de disolventes en la espectroscopia de

llama.
La altura de los picos de absorcin se elevan en presencia de alcoholes de bajo P
n, y se atribuye el aumento
en la eficacia del nebulizador, ya que la baja tensin superficial origina gotas d
e pequeo tamao, y as se
produce la evaporacin del disolvente de forma ms rpida.

d) Tcnicas de generacin de hidruros.

Proporcionan un mtodo para la introduccin de As, Sn, Se, Bi y Pb, como gases en u
n atomizador.
La generacin rpida de hidruros voltiles se produce normalmente por adicin de una dis
olucin de la
muestra en medio cido, a un pequeo volumen de una disolucin acuosa de Borohidruro Sd
ico al l%,
contenido en una cubeta de vidrio. Despus de mezclarse las disoluciones durante u
n breve periodo de tiempo, el
hidruro que se forma se arrastra a la cmara de atomizacin mediante un gas inerte.
Esta cmara, por lo general,
consiste en un tubo de slice, calentado a unos cientos de grados en un horno o en
la llama, a travs del cual, la
radiacin de la fuente pasa hacia el monocromador y al detector.
La seal es un pico similar al que se obtiene con la atomizacin electrotrmica, aumen
tando la sensibilidad
en un factor de 10
100.

e) Curvas de calibracin.
Peridicamente, debe prepararse una curva de calibracin en el intervalo de concent
racin donde se
encuentra la muestra. Adems, debido a que en la atomizacin y en la medida de absor
bancia existe un gran
nmero de variables incontroladas, cada vez que se realiza un anlisis, es necesario
medir dos patrones,
cubriendo un rango de concentracin que englobe la concentracin del analito en la m
uestra.

d) Mtodo de la adicin estndar.

Se usa para la absorcin atmica, para contrarrestar las interferencias qumicas y es
pectrales producidas por
la matriz de la muestra.

6.5. Aplicaciones de la espectroscopia de absorcin atmica

Constituyen un medio sensible para la determinacin cuantitativa de ms de sesenta
elementos.
Las lneas de resonancia de elementos no metlicos, se localizan por debajo de 200m
m y slo es posible su
determinacin por los espectrofotmetros que operan en el vaco.

Para muchos elementos, las lneas de deteccin en espectroscopia de absorcin, en la

atomizacin con llama,
se encuentran en el intervalo de 1
20 microlitos ppb 10-3
2 10-2 ppm, y con la at
omizacin electrotrmica,
los valores correspondientes son 2 10-3 10-2 ppb o 2 10-6
10-5 ppm.
En cuanto a la exactitud, en condiciones normales, el error relativo asociado a
l anlisis de absorcin con
llama, es del orden de l 2 %, pudiendo disminuir estas cifras cuando se toman pr
ecauciones especiales, y los
errores que se muestran con la atomizacin electrotrmica son de 5
10 veces ms altas
que los obtenidos con la
atomizacin con llama.

7. ESPECTROSCOPIA DE EMISIN DE LLAMA

Tiene como principal aplicacin, la determinacin de Na, K, Li y Ka, especialmente
en fluidos biolgicos y
en tejidos. Por razones de conveniencia, rapidez y por la relativa falta de inte
rferencias, se ha convertido en el
mtodo ms adecuado para el anlisis de estos elementos que suelen ser difciles de dete
rminar por otras
tcnicas.

7.1. Instrumentacin
Los instrumentos para trabajar con la emisin de llama, son parecidos a los de ab
sorcin, excepto por el
hecho de que en los primeros, la llama acta como fuente de radiacin, y en consecue
ncia, la lmpara de ctodo
hueco y el contador, son necesarios. Para los anlisis que no son de rutina, resul
ta ms conveniente usar un
espectrofotmetro ultravioleta visible. Con un registrador de una resolucin aproxim
ada de 0,5 . El
registrador constituye un medio sencillo para realizar correcciones de fondo.
Para el anlisis de rutina para metales alcalinos y alcalinoterreos, es suficient
e la utilizacin de fotmetros
simples de filtros; en estos casos se usa una llama a baja temperatura, para evi
tar la excitacin de los dems
metales, por lo que los espectros obtenidos son simples y pueden usarse filtros
de interferencia para aislar la
lnea de emisin que se desee. Algunos fabricantes construyen fotmetros de llama disea
dos especficamente
para el anlisis de Na, Ka, Li en suero sanguneo y otras muestras biolgicas. En ello
s, la radiacin que proviene
de la llama, se divide en tres haces de aproximadamente la misma intensidad, y c
ada uno de ellos pasa a travs
de la superficie fotomtrica independiente, constituido por un filtro de interfere
ncias, un fototubo y un
amplificador.
7.2. Interferencias

- Interferencias de banda
En muchas ocasiones, se observa que las lneas de emisin aparecen superpuestas sobr
e bandas emitidas
por xidos y otras especies moleculares de la muestra, combustible u oxidante, y e
s posible corregir el fondo
tocando datos, es decir, unos pocos nm (nanmetros) a cada lado del pico del anali
to. En instrumentos que no
tienen registrador, se realiza una medida a cada lado del pico, aumentando el pr
omedio de las dos medidas, y se
resta de la altura total del pico.

- Interferencias qumicas
Son esencialmente las mismas que se encuentran en los mtodos de absorcin de llama.
Se evitan mediante la eleccin de la temperatura y el uso de agentes protectores,
liberadores y
supresores de ionizacin.

- Autoabsorcin
El centro de una llama est ms caliente que su parte externa, y por ello los tomos q
ue emiten en la
zona central, estn rodeados por una regin ms fra que contiene una elevada concentrac
in de tomos no
excitados, de manera que se produce la autoabsorcin de la longitud de onda de res
onancia por los tomos de la
capa ms fra.
En una situacin extrema, el centro puede resultar menos intenso que los bordes, o
incluso desaparecer,
y el resultado es el desdoblamiento por autoinversin del mximo de emisin en lo que
aparentemente son dos
picos. La autoabsorcin resulta molesta cuando el analito est a elevada concentracin
. En estas circunstancias,
es preferible emplear para el anlisis, una lnea no resonante, la cual, no puede ex
perimentar autoabsorcin.
La autoabsorcin y la ionizacin, producen a veces, unas curvas de calibracin de emis
in con forma de
S en tres segmentos distintos, y as en concentraciones intermedias.
Por ejemplo; de K se observa una relacin lineal entre intensidad y concentracin, p
ero la baja
concentracin aparece una curvatura que se debe al elevado grado de ionizacin en la
llama y a concentracin
elevada, la autoabsorcin provoca desviaciones negativas de la linealidad.

8. COMPARACIN ENTRE LOS MTODOS DE ABSORCIN ATMICA Y DE EMISIN

ATMICA
En cuanto a los instrumentos, la principal ventaja de los procedimientos de emi
sin, consiste en que la llama
acta como fuente. Los mtodos de absorcin necesitan, por el contrario, una lmpara dis
tinta para cada llama.
Por otra parte, la calidad del monocromador de un instrumento de absorcin, no tie
ne que ser tan alta para
alcanzar el mismo grado de selectividad debido a la estructura de las lneas emiti
das por la lmpara de ctodo
hueco.
En cuanto a la habilidad del operador, los mtodos de emisin requieren un elevado
grado de habilidad,
debido a la naturaleza de emisin de ajuste, tales como la la zona de la llama esc
ogida y la relacin
combustible
oxidante.
Correccin de fondo . En los espectros de banda que provienen de los constituyent
es de la muestra, se
realiza con facilidad y por lo general, y con ms exactitud, en los mtodos de emisin
.

Precisin y exactitud
La incertidumbre obtenida por los operadores expertos, es ms o menos la misma pa
ra ambos procedimientos.
Los mtodos de absorcin atmica presentan menos problemas. Los procedimientos de abso
rcin atmica, estn
menos sujetos a interferencias de lneas espectrales, aunque los mtodos de emisin de
este tipo de interferencias
se reconocen y se pueden evitar fcilmente.