FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

QUÍMICA DE ALIMENTOS

MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL

2009
 TEMA:
Aislamiento, selección y preservación de cepas
Azotobacter spp. obtenidas de plantaciones de
Stevia Rebaudiana usando melaza como sustrato
para la producción de un biofertilizante.
Autores:
y Andrade María José
y Correa Carina
y Cueva Patricia
y Jácome Rafael
y Simba Saskia
y Tufiño Carolina
1. INTRODUCCIÓN
En la Universidad Javeriana se realizó una investigación
sobre el aislamiento de bacterias fijadoras de nitrógeno
para emplearlas en un programa de fertilización bajo un
esquema de agricultura orgánica. El aislamiento se
realizó a partir del suelo de un cultivo de Stevia
Reubaudiana. La bacteria encontrada fue Azotobacter y
su rendimiento se determinó con base en la producción
de biomasa y concentración de glucósidos en la planta
presentando mejor estabilidad, pigmentación, mayor
velocidad de crecimiento 0,1405 h‐1 fase exponencial de
18 horas y una producción de A/A promedio de 38,4
mg/ml a las 150 horas. [1]
En la India se realizaron estudios para comparar un
fertilizante químico y un biofertilizante en una
plantación de Stevia, mediante mediciones de fósforo
soluble con bacterias de Azospirillum, y los resultados
demuestran una eficiencia incrementando la producción
de biomasa en un 53,20%. La química inorgánica del
biofertilizante cambio favoreciendo el crecimiento mas
no se demostró el aumento de glucósidos en la planta.
[2]
El Azotobacter es el género que ha demostrado tener el
rendimiento de absorción más alto (72.64%) a nivel de la
rizosfera comparado con microorganismos como
Azospirillum brasilense y Rhizobium analizados también
para la elaboración de biofertilizantes, fijan
aproximadamente 20 mg N/g de azúcar en un cultivo
de Stevia en medio libre de nitrógeno, A maximum of 30
mg.However, Azotobacter is a poor competitor for
nutrients in soil.siendo una gran fuente para obtener un
biofertilizante natural reduciendo el uso de los
fertilizantes químicos nitrogenados, tienen mayor
velocidad de crecimiento que otras cepas aisladas de
cultivos diferentes ofreciendo una mayor productividad.
El azotobacter produce fitohormonas (ácido indolacético y
citoquininas) capaces de acelerar y potenciar el crecimiento
de las plantas; promueve la formación de sideróforos,
sustancias antifúngicas y genera enzimas que favorecen a la
solubilización de fosfatos y oligoelementos facilitando la
asimilación de estos compuestos.

El uso de fertilizantes químicos constituye un daño

biológico a los suelos deteriorando la calidad de los mismos:
inducen el aumento de acidez y salinidad eliminando el
humus y suavizando los tejidos de la planta provocando que
ésta sea menos resistente y saludable, eliminan el ecosistema
natural de suelo desarrollando plantas más vulnerables.
La tierra se hace dependiente a los químicos
incrementando los daños al suelo y los costos de
fertilización. Actualmente un fertilizante químico
nitrogenado se comercializa en $380 por sacos de
19Kg, este costo es alto por la energía que se utiliza
para su elaboración. a

El objetivo de la presente investigación es realizar el

aislamiento de una cepa fijadora de nitrógeno,
Azotobacter, que pueda ser empleada para la
producción de un biofertilizante en el cultivo de
Stevia rebaudiana, mediante fermentación
discontinua.
a) 1.33.5 MBtu Æ 1 T amoniaco anhidro.

Costo de 1MBtu = 2.20 a 5.00 USD

Costo de 1 T amoniaco anhidro = 200 USD

2. OBJETIVOS
2.1. General
Aislar, seleccionar y preservar cepas Azotobacter spp. obtenidas de plantaciones de 
Stevia Rebaudiana usando melaza como sustrato para la producción de un 
biofertilizante.

2.2. Específico
y Aislar cepas de Azotobacter spp de muestras de cultivos de Stevia Rebaudiana 
proveniente de la agrícola El Edén, en el agar ashby.
y Seleccionar las mejores cepas de Azotobacter spp degradadoras de melaza 
utilizando como parámetro de medición el peso seco.
y Preservar cepas de Azotobacter spp en caldo BHI por la técnica del criovial.
y Evaluar el crecimiento de Azotobacter spp en caldo pikovskaya modificado y 
caldo alternativo con melaza y establecer el más adecuado para una producción 
a nivel industrial.
y Producir biomasa de la cepa escogida de Azotobacter spp ofreciéndoles las 
condiciones óptimas para su crecimiento.
y Controlar el desarrollo del bioproceso mediante los parámetros: pH, 
temperatura y concentración de oxígeno.
3. MARCO TEÓRICO
3.1. Stevia Rebaudiana
Es un género de plantas fanerógamas perteneciente a la
familia de las asteráceas.]
Son hierbas y arbustos de la familia del girasol (Asteraceae),
nativa de regiones subtropicales y tropicales de América del
Sur y América Central.
La especie Stevia rebaudiana Bertoni, conocida
comúnmente como dulce hoja, o, simplemente, stevia, es
ampliamente cultivada por sus hojas dulces. Como un
sustituto del azúcar.
3.2. Biofertilizante

Los biofertilizantes se caracterizan por la presencia de

microorganismos vivos que no causan daño o enfermedad al
hombre, a los animales ni a las plantas. Pueden emplearse bacterias
u hongos microscópicos, llamados micorrízicos, que se asocian en
forma natural con las raíces de las plantas, beneficiando su
crecimiento y el rendimiento de los cultivos.

Los microorganismos contribuyen con el crecimiento de las plantas

y el rendimiento de los cultivos, pero para que éstos sean
beneficiados es indispensable que las bacterias u hongos se
encuentren vivos. El biofertilizante debe contener varios millones
de bacterias por gramo de soporte sólido o por mililitro, en caso de
ser acuoso. Una vez que la semilla germina y las raíces empiezan a
desarrollarse, las bacterias se multiplicarán y colonizarán la
superficie de las raíces y promoverán el crecimiento de las plantas.
3.3. Fermentación discontinua

Una fermentación discontinua (en batch) puede ser considerada

como un "sistema cerrado". Al inicio de la operación se añade la
solución esterilizada de nutrientes y se inocula con el
microorganismo, permitiendo que se lleve a cabo la incubación en
condiciones óptimas de fermentación. A lo largo de toda la
fermentación no se añade nada, excepto oxígeno (en forma de aire),
un agente antiespumante y ácidos o bases para controlar el pH. La
composición del medio de cultivo, la concentración de la biomasa y
la concentración de metabolitos cambia generalmente como
resultado del metabolismo de las células observándose las cuatro
fases típicas de crecimiento: fase de latencia, fase logarítmica, fase
estacionaria y fase de muerte.

En los procesos comerciales la fermentación frecuentemente se

interrumpe al final de la fase logarítmica (metabolitos primarios) o
antes de que comience la fase de muerte (metabolitos secundarios).
3.4. Factores de crecimiento

3.4.1.Oxígeno

El oxígeno es el sustrato gaseoso más importante para el

metabolismo microbiano y el anhídrido carbónico es el
producto metabólico más importante. El oxígeno no es un
gas muy soluble ya que una solución saturada de oxígeno
contiene aproximadamente 9 mg / L de este gas en agua.
Debido a la influencia de los ingredientes del cultivo, el
contenido máximo de oxígeno realmente es más bajo de lo
que debería ser en agua pura. El suministro se logra
pulverizando aire en el fermentador durante el proceso.
Una vez disuelto el O2 éste tiene que transferirse desde la
burbuja de gas a cada célula individual.
 3.4.2. Temperatura

Los microorganismos que crecen a una temperatura inferior a la óptima

tienen retardado su crecimiento y por lo tanto reducida la producción
celular, es decir su productividad. Por otro lado, si la temperatura es
demasiado alta, pero no letal, se puede inducir una respuesta de estrés al
choque térmico con la consiguiente producción de proteasas celulares que
ocasionan una disminución en el rendimiento de los productos proteicos.

3.4.3. pH

La mayor parte de los microorganismos crecen óptimamente entre pH 5,5

y 8,5. Pero durante el crecimiento en un fermentador, los metabolitos
celulares son liberados al medio, lo que puede originar un cambio del pH
del medio de cultivo. Por lo tanto se debe controlar el pH del medio de
cultivo y añadir un ácido o una base cuando se necesite para mantener
constante el pH. Por supuesto que esta adición del ácido o base debe ser
mezclada rápidamente de tal manera que el pH del medio de cultivo sea
el mismo en todo el fermentador.
3.5 Bacterias fijadoras de nitrógeno
Las bacterias fijadoras de nitrógeno son componentes muy importantes
del suelo. Para desarrollar la fertilidad del suelo, debe aumentar el
contenido de nitrógeno. En las condiciones medioambientales adecuadas,
las bacterias fijadoras de nitrógeno producen enzimas que toman el
nitrógeno en su forma gaseosa de la atmósfera, y, con los azúcares que
obtienen de la planta, fijan el nitrógeno dentro de la biomasa bacteriana.
Si las bacterias satisfacen sus necesidades de nitrógeno, entonces, el
nitrógeno pasa a la planta, y pueden observarse niveles elevados de
proteína en la planta. Este nitrógeno elevado no se libera al suelo hasta
que muere parte de la planta, o se exuda al suelo en la rizósfera.
Se dividen en dos grandes grupos: las simbióticas especificas de las
leguminosas como el Rhizobium y las libres que viven en el suelo y no
necesitan la planta para su reproducción como el Azotobacter y el
Azospirillum, entre los más importantes en agricultura.
El Azotobacter y el Azospirillum, en concentraciones adecuadas, pueden
sustituir al nitrógeno químico (urea, amoníaco) sin disminuir la
producción y a menor coste.
Otras ventajas comprobadas del uso de estas bacterias como
biofertilizante son:

a) Producen fitohormonas, como el ácido indolacètico y las citoquininas,

capaces de acelerar y potenciar el crecimiento de las plantas.
b) Al permanecer vivas durante años y reproducirse en el suelo, no sólo no
lo degradan sino que contribuyen a su enriquecimiento en nitrógeno y a
su regeneración de forma ecológica y gradual, incluso en terrenos de alta
concentración salina.
c) Se ha comprobado que fertilizando los cultivos con estas bacterias y
con nitrógeno químico en un porcentaje entre el 20 y 50% del utilizado
normalmente, se consigue un aumento de producción sobre las cosechas
obtenidas únicamente con fertilizante químico al 100%. Esto es debido a
que, al liberarse la bacteria de su función fijadora de nitrógeno, produce
más factores de crecimiento vegetal, En cereales de secano, esto puede
suponer el ahorro del abonado de cobertera.
d) Crea una barrera protectora contra hongos y bacterias patógenas en la
raíz de la planta, por lo que ésta crece más sana y fortalecida.
e) Producen enzimas que solubilizan los fosfatos y los hacen más
accesibles a la planta, así como factores que facilitan la absorción de
oligoelementos.
f ) Se ha demostrado que resisten mejor las condiciones de sequía y los
climas áridos ya que se forman alginatos en las raíces de las plantas.
g) Como consecuencia de todo lo anterior, es un mayor desarrollo de las
raíces de las plantas, con el consiguiente beneficio general para ésta, así
como el peso de los frutos.
h) También se ha comprobado un mayor índice de germinación de
semillas comparada con otros sistemas de abonado.
i) Las nuevas estirpes de Azotobacter y Azospirillum son capaces de fijar
un 72,64% más de nitrógeno atmosférico, que las estirpes originales.

Hay pues un cúmulo de ventajas para el usuario, económicas, ecológicas,

A corto, medio y largo plazo en la progresiva sustitución de la fertilización
química por las bacterias naturales, totalmente inofensivas para el medio
y el ser humano.
La N2 + 16 ATP + 8e‐+ 8H+ nitrogenasa 2NH3 + 8H2 + 16 ADP+ 16 P
4. MARCO METODOLÓGICO 
4.1 MUESTREO DEL SUELO
De la plantación de la agrícola El Edén se toman
muestras de 4 hectáreas, de cada una se toman 10
puntos al azar de dos zonas de la planta: rizosfera y la
anterior a esta, el muestreo se realiza en forma de zig –
zag a lo largo del cultivo.
Las muestras se empacan en bolsas de papel que se
colocan dentro de bolsas de plásticos herméticas y
posteriormente se transportan en coolers.
4.1.1. PROCESAMIENTO DE MUESTRAS
Una vez en el laboratorio, las muestras procedentes de
la rizosfera de cada hectárea se homogenizan, lo
mismo se realiza con la zona anterior a la rizosfera.
Se extrae de cada hectárea cuatro muestras para
sembrar en cajas petri luego se tamizan en un tamiz
estándar de 4.75 mm, con el fin de obtener gránulos
uniformes, para realizar el aislamiento primario.
4.2. AISLAMIENTO 
4.2.1. AISLAMIENTO PRIMARIA
A partir de cada muestra de suelo obtenida en los
diferentes cultivos, se realiza el aislamiento primario
por triplicado, empleando la técnica de gránulos de
suelo; Se colocan 20 gránulos en cajas de Agar Ashby –
Sacarosa (medio especifico para Azotobacter spp) a
una distancia aproximada de 1 cm. Las cajas se incuban
a 28°C por 7 días hasta observar alrededor de los
gránulos colonias translucidas y mucilaginosas.
4.2.2. AISLAMIENTO SECUNDARIO 
El aislamiento secundario se realiza mediante siembra
por agotamiento en cajas con Agar Ashby – Sacarosa a
partir de las colonias obtenidas en el aislamiento
primario. Las cajas son incubadas por 7 días a 28°C,
posteriormente se observa el crecimiento en el medio
selectivo Ashby – Sacarosa, la morfología de la colonia
y de las células por medio de la coloración de Gram.
4.2.3. PIGMENTACIÓN DE LOS 
AISLAMIENTOS 
Con el fin de observar la producción de pigmentos en
medio solido, de cada aislamiento se realiza una siembra
en agar diferencial Ashby con 5 g/l de benzoato,
remplazando la fuente de carbono (sacarosa) en cajas
petri para observar la pigmentación en las colonias. La
siembra se realiza tomando una colonia de cada
aislamiento y realizando un estria en toda la caja, se
incuba a 28°C por 7 días y se observa pigmentación
4.3. IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA 
A cada aislamiento se le realiza una caracterización con
base en el comportamiento bioquímico frente a la
fermentación de glucosa, maltosa, manitol y ramnosa
también se realiza una prueba de asimilación y
crecimiento en benzoato como fuente de carbono, test
de catalasa, oxidasa y desnitrificación en caldo nitrato.
4.4. CONSERVACIÓN DE LOS AISLAMIENTOS 
MEDIANTE LA TÉCNICA DE CRIO PRESERVACIÓN 
EN GLICEROL AL 50% (V/V)

A partir de las cepas aisladas y evaluadas se realizan

cultivos en erlenmeyer de 100 ml con 50 ml de caldo
nutritivo, el cual se incuba a 28°C por 24 Horas con
agitación de 150 rpm. El cultivo se deposita en 10 viales
de 1.5 ml de 50 % V/V de glicerol puro estéril. Luego se
mantiene en congelación a ‐80°C.
4.5 SELECCIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO 
El caldo Ashby es un medio de cultivo selectivo para
Azotobacter debido a que no contiene nitrógeno. Su
ventaja es que al ser un medio selectivo el crecimiento es
lento, es observable a partir de los 3 – 5 días de realizada la
siembra lo que implica un mayor gasto de energía para la
producción.
El caldo Pikovskaya modificado es un medio no selectivo
pero permite el crecimiento rápido de las bacterias y
requiere un gasto de energía menor
En ambos casos se necesitan reactivos químicos que
implican un costo alto adecuado solo para producciones
pequeñas a escala de laboratorio, por este motivo se
formula un medio de cultivo alternativo a base de melaza
tomando al caldo Pikovskaya modificado como patrón.
4.5.1. FORMULACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO 
ALTERNATIVO (CA)
Se partió de un estudio químico de la composición de la melaza
y se procedió a sustituir los componentes del medio
químicamente definido (CPM), por el medio natural, que
constituye un medio adecuado para el crecimiento de
microorganismos.
Se toma como base la fuente de carbohidratos y proteínas
(carbono y nitrógeno), garantizando el contenido requerido por
la bacteria, según el caldo Pikovskaya modificado.
Una vez obtenida la concentración teórica de melaza necesaria
para sustituir los componentes del medio químico se realizan
pruebas de crecimiento a nivel laboratorio, para ello se
siembran cepas de Azotobacter spp en CA sólido utilizando
concentraciones menores y mayores a la obtenida
teóricamente. Las siembras se realizan por triplicado.
4.6. PRODUCCIÓN DE 
BIOFERTILIZANTE A NIVEL DE 
LABORATORIO 
4.6.1. REACTIVACIÓN DE LAS CEPAS
BACTERIANAS
Para reactivar a las bacterias se utiliza el caldo
Pikovskaya modificado liquido, ideal para el
crecimiento de Azotobacter spp. La cepa madre se
inocula en los tubos con el medio, bajo condiciones de
esterilidad y se incuba a 30°C por 24 horas.
4.6.2. OBTENCIÓN DEL PRE INOCULÓ 
Para la preparación del pre inoculó se toman en cuenta los
siguientes requisitos:
1.‐ El cultivo debe estar metabólicamente activo y libre de
contaminantes.
2.‐ El inoculo debe estar en su fase exponencial (grado
máximo de desarrollo). Para ello se evalúa el crecimiento
bacteriano durante 30 horas que es el tiempo estimado que
tarda en alcanzar la fase exponencial. Se procura obtener
pre inóculos con una concentración de biomasa del orden
de 108‐109 células/ml.
3.‐ Se debe dispones de una cantidad de cultivo suficiente
para inocular el volumen de medio liquido a utilizar en la
fermentación, el cual debe estar entre el 3 – 10 % del
volumen total a fermentar. En este caso se trabaja con un
volumen equivalente al 10% del volumen total a fermentar.
PROCEDIMIENTO 
Con las cepas reactivadas anteriormente se realiza un
pool bacteriano, 10 ml de pool se inoculan en 90 ml de
caldo Pikovskaya modificado (10% de volumen total a
fermentar) y otros 10 ml en 90 ml de caldo alternativo,
obteniéndose un volumen final de 100 ml de cultivo
por cada caldo de fermentación. Posteriormente se
incuban a 30°C por 24 horas y 150 rpm en matraces de
250 ml.
4.6.3. FERMENTACIÓN 
DISCONTINUA 
Una vez obtenidos los preinoculos, estos se inoculan en
900 ml de CPM y 900 de CA. Luego, son incubados a una
temperatura promedio de 28°C por 72 horas. El oxigeno
se suministra utilizando un aireador para pecera con un
flujo de aire aproximado de 1 m3 /h en matraces de 2000
ml.
El esquema del proceso global de producción de
Azotobacter spp a nivel de laboratorio
 4.7 EVALUACIÓN DEL    
CRECIMIENTO BACTERIANO 
Se realizan una serie de corridas cinéticas en las que se
evalúa la variación de pH, la temperatura del caldo de
cultivo y la concentración de biomasa. Además se
evalúa el consumo de sustrato en CPM con lo que se
puede obtener las variaciones cinéticas de crecimiento.
Las muestras se toman cada tres horas durante las 72
horas que dura la fermentación. Este procedimiento se
realiza tres veces
4.7.1. DETERMINACIÓN DE LA 
CONCENTRACIÓN DE BIOMASA 
Se utiliza la técnica de la determinación de biomasa
por Peso seco para el CA y CPM.
Se puede realizar la determinación por
espectrofotometría del CPM ya que por el color de la
melaza es imposible de medir la absorbancia en el CA ,
pero para obtener las mismas unidades de biomasa se
va a realizar la determinación por peso seco en los dos
casos.
4.9. TÉCNICAS MICROBIOLÓGICAS 
4.9.1. TINCIÓN GRAM
‐ Se preparan frotis del cultivo. Se secan al aire y se fijan al
calor.
‐ Se cubre el frotis con el reactivo cristal violeta durante un
minuto.
‐ Se lava el frotis con agua durante 5 segundos, y luego se
aplica el reactivo yodo de Lugol durante un minuto.
‐ Se lava y se aplica el decolorante.
‐ Se lava y se cubre con el reactivo de Safranina durante 30
segundos.
‐ Se lava, se seca y se coloca en el microscopio.
4.8.2. PRUEBA DE QUISTE 
‐ Se coloca un asas del cultivo en un portaobjetos, 
emulsionado con agua estéril
‐ Se agrega una o dos gotas de Yodo Lugol y se fija al 
aire.
‐ Se coloca al microscopio con aceite de inmersión.

4.8.3. PESO SECO CELULAR (PCS g/ml)
‐ Se toma 5 ml de cada dilución y de elimina en el 
horno el sobrenadante.
‐ Se pesa la biomasa seca y se obtiene el PCS en gr/ml.
4.8.4. Prueba de la Catalasa

El Objetivo es buscar la presencia de la enzima catalasa El peróxido de hidrógeno 
se produce al utilizar la bacteria el azúcar por vía oxidativa. Al ser éste un 
compuesto muy oxidante las bacterias la eliminan mediante la producción de la 
enzima catalasa (H2O2 ‐> H2O + ½ O2).
En un portaobjetos se toma una muestra de la bacteria, se
agrega unas gotas de 
peróxido de hidrógeno al 3% y debemos observar la reacción de esta.
La prueba se considera como positiva si observamos burbujas de oxígeno.

4.8.5. Prueba TSI (Triple Sugar Iron ó Triple Azúcar Hierro)

El TSI es un medio nutriente y diferencial que permite estudiar la capacidad de 
producción de ácido y gas a partir de glucosa, sacarosa y lactosa en un único 
medio. Tambien permite la identificación de la producción de SH2.
Inocular los tubos de TSI con punta, estriar el pico con un movimiento hacia uno 
y otro lado. Incubar a 35° durante 24 horas. Posteriormente se debe medir el pH 
de los cultivos. Pico alcalino/fondo ácido : Glucosa fermentada, lactosa ni 
sacarosa fermentadas. A estos resultados se les agrega el resultado de la 
producción de gas.
4.8.6. Indol

El Indol es uno de los productos de degradación metabólica del

aminoácido triptofano. Las bacterias que poseen la triptofanasa son
capaces de hidrolizar y desaminar el triptofano con producción de
indol, ácido pirúvico y amoníaco.
La prueba de indol está basada en la formación de un complejo rojo
cuando el indol reacciona con el grupo aldehído del p‐
dimetilaminobenzaldehído. Este es el principio activo de los reactivos
de Kovacs y Ehrlich.

4.8.7. O/F:
En condiciones aerobias las bacterias pueden oxidar la glucosa hasta
CO2 gas. El oxígeno es el aceptor final de e‐ en el metabolismo
respiratorio. en condiciones anaerobicas en ausencia de un aceptor de
e‐ como nitrato, las bacterias sólo pueden utilizar la glucosa por vía
fermentativa. En este test se evalúa la capacidad de las bacterias para
oxidar y/o fermentar produciendo ácido que se detecta gracias al azul
de bromotinol (indicador de pH)
4.8.8. Nitratos

Algunas bacterias pueden usar nitratos como aceptor final

de e‐ en la respiración. el nitrato puede ser reducido a
nitrito o en un paso más a gases (óxidos de nitrógeno).
Las bacterias se inoculan en medios conteniendo nitrato
potásico. El nitrito procedente de la reducción de células
puede detectarse añadiendo alfanalfilamina y ácido
sulfanílico produciendose un color rojo. Se puede saber si el
nitrato puede haberse reducido a más que a nitritos
produciendose gas. Si al añadir zinc en polvo no hay color
rojo es que no hay nitrato porque se ha reducido a gas
(desnitrificación).
Discusiones 
y Es necesario realizar estudios sobre la capacidad fijadora de nitrógeno y la
capacidad productora de hormonas vegetales de las bacterias para poder
seleccionar las de mejor rendimiento.
y Se recomienda seguir aislando cepas en otros terrenos con el fin de obtener un
cultivo mixto apto para todo terreno.
y Hay que considerar que la composición nutricional de la melaza va a variar de
acuerdo al origen o procedencia del mismo siendo recomendable contar con un
solo proveedor y seleccionar si es posible la melaza que posea las mejores
características nutricionales.
y La cepa S1 produjo mayor cantidad de biomasa en el medio con melaza
posiblemente por la presencia de un gen mutante, o que posee una enzima con
mayor capacidad degradadora del sustrato utilizado.
y Se recomienda hacer pruebas experimentales para ver la eficiencia de las
bacterias y la producción de la fitohormona estimulantes de crecimiento de las
plantas, puesto que por falta de tiempo no se pudo aplicar este biofertilizante
para comparar el crecimiento de una planta, con este biofertilizante y un
químico.
Conclusiones 
y Se observó que existe mayor crecimiento de bacterias Azotobacter,
cuando se aísla de la zona rizosfera de la planta.
y De acuerdo a las pruebas bioquímicas realizadas se encontró que la
bacteria aislada correspondía al género Azotobacter.
y Se comprueba que los microorganismos aislados del género
Azotobacter, 2 cepas, si degradan la melaza.
y Se verificó que existe un mayor crecimiento de biomasa en la medio
alternativo con melaza con respecto a medio picovscaya.
y Se observó que produce mayor biomasa en el medio de cultivo con
melaza la S2 que la S1, a pesar de estar sometidas a las mismas
condiciones.
y La melaza por su gran riqueza nutritiva que posee resulto ser un buen
medio alternativo de cultivo para el crecimiento de azotobacter spp.
y Al utilizar en el medio de cultivo alternativo melaza como fuente de
carbono disminuye el costo, de producción de biofertilizante.