Deficiencia de clulas B Antigen-Specific ocasiona una disminucin en Trypanosoma cr

uzi sistmica pero no inmunidad mucosa debido a clulas T CD8 Agotamiento

Esta informacin est actualizada al 16 de Febrero, 2015. Nicole L. Sullivan, Christ
opher S. Eickhoff, John Sagartz descargado de descargado de Hoft y Daniel F.
J Immunol 2015; 194:1806 ; Prepublished online 2015 Enero 16 ; doi: 10,4049 /jimm
unol. 194/1303163/4 http://www.jimmunol.org/ http://www.jimmunol.org/
http://www.jimmunol.org/content/suppl/2015/01/16/jimmunol.130316 Material comple
mentario 3.DCSupplemental.html
Referencias Este artculo cita los artculos 42, 26 de los cuales se puede acceder d
e forma gratuita en:
http://www.jimmunol.org/content/194/4/1806.full#ref-list-1 en Universidad China
de Hong Kong el 16 de febrero de 2015 Universidad China de Hong Kong el 16 de fe
brero de 2015
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550-6606.

El Journal of Immunology
Antigen-Specific Deficiencia de clulas B da lugar a una disminucin sistemtica Trypa
nosoma cruzi pero no inmunidad mucosa debido a clulas T CD8 Agotamiento
,1 Nicole L. Sullivan, Christopher S. Eickhoff, John Sagartz y Daniel F. Hoft
mucosally invasiva vacunas contra patgenos intracelulares, debe inducir a una mira
da de respuestas inmunitarias para proporcionar la mejor
+ + la mucosa y sistmica, incluyendo las clulas T CD4, clulas T CD8 + y Ab las clula
s B productoras. En general, las clulas T CD4 se sabe que descargar de
+ proporcionan importantes funciones auxiliares para los linfocitos T CD8+ y B l
as respuestas de las clulas. Sin embargo, la importancia relativa de las clulas T
CD4
+ CD8 las clulas T y las clulas B proteccin de la mucosa es menos claramente defini
das. Hemos estudiado detenidamente estas cuestiones utilizando el modelo murino
de infeccin por Trypanosoma cruzi. A pesar de nuestra hiptesis inicial que la muco
sa Abs sera importante, que nos muestran que las clulas B son esenciales para sistm
icos, pero no la mucosa, T. cruzi + inmunidad protectora. De las clulas B normale
s desarrollados ratones deficientes niveles de CD8 clulas T efectoras mucosa resp
uestas poco despus infeccin por T. cruzi y T. cruzi trans-sialidasa vacunacin. Sin
embargo, altamente virulentas despus reto sistmico, T. cruzi inmune T. cruzi raton
es que carecan de las clulas B parasitemia fracasado en su intento de controlar o
evitar la muerte. http://www.jimmunol.org/
mecnicamente, + T. cruzi especficos de las clulas T CD8 generado en la ausencia de
clulas B expresan una mayor PD-1 y Lag-3 y se convirti despus funcionalmente agotad
o de alto nivel T. cruzi reto sistmico. T. cruzi no + suero inmune clulas T CD8 ag
otamiento funcional y la reduccin de la mortalidad en ratones que carecan las clula
s B. En general, estos resultados demuestran que el T. cruzi de clulas B son nece
sarios durante sistmico, pero no la mucosa, parsito. El Journal of Immunology, 201
5, 194:1806 -1818.

rypanosoma cruzi es un protozoario parsito y la etiologi- las clulas T y las clulas

B se ha demostrado que juegan papeles crticos en cal agente’ enfermedad de
Chagas. Prevencin y control de vectores + proteccin contra T. cruzi. Las clulas T C
D8 son importantes tanto en T prcticas en toda Amrica Latina han reducido el curinmunidad.
alquiler nmero de personas infectadas to8 –11 millones de personas (1).
(2) y secundaria (3, 4) proteccin
+ T. cruzi en Universidad China de Hong Kong el 16 de Febrero, 2015
hay varios muy inmunodominante eptopos quienco CD8 Sin embargo, el desplazamiento
de las personas infectadas a zonas no end ico ded en el T. cruzi trans-sialidasa (T
S) familia de genes. En el plantea un problema emergente de salud pblica. Hasta e
l 40% de infectados + ratones BALB/c antecedentes, hasta un 30 – 40% de las
clulas T CD8 durante la fase aguda los individuos desarrollan cardacas graves y/o
gastrointestinal prob- d infeccin son sensibles a las inmunodominante H-2K &#150
;regina 1 –restringido 30 aos despus de la infeccin, lo que lleva a una import
ante morbilidad y TS IYNVGQVSI eptopo (TSKd1) (5, 6). Las clulas T CD4 han sido m
ortalidad. T. cruzi se transmite a los seres humanos y los animales por demostra
do que sea necesario (7 – 9) pero no es suficiente (10) para la generacin fa
milia reduvidae insectos de la subfamilia Triatominae. Parsitos infecciosos de in
munidad protectora contra infeccin por T. cruzi. Las clulas B tambin estn presentes
en los excrementos de insectos triatominos infectados y se ha demostrado que pue
de desempear un papel importante en T. cruzi sistmica- transmitir mediante ruptura
s en la piel, los tejidos asociados con la mucosa proteccin. Primeros trabajos de
mostraron que T. cruzi–Abs especficos puede el ojo y en el tracto gastrointe
stinal, transmisin congnita de proporcionar proteccin sistmica mediante activacin del
complemento y la lisis madre a hijo, as como donaciones de sangre y tejidos infe
ctados (11 – 13), opsonizacin (14), y Ab citotoxicidad celular dependiente d
e las personas. (15). Estos primeros resultados demostraron que las clulas B jue
gan un papel importante en T. cruzi proteccin sistmica a travs de la produccin de T.
cruzi–Abs especficos (16). Adems, infeccin sistmica de
* Departamento de Microbiologa Molecular e Inmunologa, Saint Louis University mMT
clulas B knock-out (KO) ratones con T. cruzi en Centro Mdico inicial, St. Louis, M
O 63104; †Departamento de Medicina Interna, Saint Louis University Medical
Center, St. Louis, MO 63104; y ‡departamento de control comparativo de repl
icacin parsito pero los ratones finalmente muri debido
Medicine, Saint Louis University Medical Center, St. Louis, MO 63104 para mayor
parasitemia (16). Trabajos previos de nuestro laboratorio
1direccin actual: Departamento de Microbiologa/Inmunologa y vacunas Emory ha demost
rado que T. cruzi induce infeccin de la mucosa protectora
Centro, a la Universidad de Emory, Atlanta, GA. inmunidad contra posteriores (17
, 18). Esta mucosa
recibido para publicacin 27 de noviembre de 2013. Aceptado para su publicacin dici
embre proteccin se asoci con un aumento de los niveles de T. cruzi– 13, 2014.
las IgG e IgA Ab clulas secretoras de la mucosa gstrica en
este trabajo fue apoyado por los Institutos Nacionales de Salud otorga AI040196
R01 y R56A104019 (D. F. H. ). (17), el sitio inicial de la invasin parasitaria d
espus las exposiciones orales.
Sin embargo, un papel causal de las clulas B en T. cruzi mucosa protec- dirigir l
a correspondencia y reimprimir las solicitudes al Dr. Daniel F. Hoft, Divisin de
Enfermedades Infecciosas, Inmunologa y alergia, Saint Louis University Medical Ce
n- mecnicamente no ha sido definida.
ter, Edward A. Doisy Centro de Investigacin, 1100 South Grand Boulevard, DRC&#150
; 8 En el presente estudio, hemos examinado la importancia
Piso, St. Louis, MO 63104. Direccin de E-mail: hoftdf@slu.edu de clulas B de la mu
cosa y T. cruzi inmunidad sistmica. En primer lugar,
la versin en lnea de este artculo contiene material suplementario. nos demuestran q
ue, a diferencia de lo que en un principio las hiptesis,
las abreviaturas utilizadas en este artculo: ASC, Ab-clula secretora; ATN ROJO, la
sangre de forma trypo- las clulas B no son necesarios para proteger la mucosa T.
cruzi. Nos pre- mastigote, CMT, la cultura derivada de tripomastigotes metac, HEL

, huevo de gallina lyso-zyme; i.g. , intrag(aliado); KO, knock-out; LCMV, coriome

ningitis linfoctica suponer que las clulas B producen la IgA secretora sera muy imvirus; PD-1, muerte programada 1; Tc inmune, infeccin por Trypanosoma cruzi–
portant la mucosa inducida por proteccin contra un parsito extracelular vida
inmune; TS, trans-sialidasa; TS inmune, TS–inmune inducida por la vacuna; T
SKd1,trans- etapa que invade a travs epitelios nasal y gastrointestinal, pero sia
lidasa IYNVGQVSI eptopo, WT, tipo salvaje. se encontr que no haba sido el caso. Por
el contrario, demostramos que
+ Copyright 2015 por la Asociacin Americana de inmunlogos, Inc. 0022-1767/ 15/ $25
.00 las clulas T CD8 son importantes para proteger la mucosa T. cruzi. Nos confir
me
www.jimmunol.org/cgi/doi/10.4049/jimmunol.1303163

el Journal of Immunology 1807

que las clulas B son importantes para T. cruzi sistmica proteccin tanto en similare
s a los utilizados en la encefalomielitis autoinmune experimental estudios:
KO modelos de agotamiento y transitorios. Despus sistmica virulenta- 0, no hay cam
bios evidentes en las funciones motoras; 1 extremidades, debilidad; 2, completa
parlisis de extremidades traseras; 3, extremidades y parlisis parcial selas pata d
elantera, clulas B–deficiente agotar los ratones son incapaces de controlarparlisis; 4, de la muerte. Morbilidad y mortalidad fueron evaluados semanalmente
por 60 – sitemia y desarrollan una mayor morbilidad y mortalidad. Tenemos
ms de 200 d de BFT reto sistmico.
demostrar que T. cruzi–las clulas B especficas son necesarias para proteccin s
istmica, produciendo especfica del parsito Abs parsito Adoptivos que reducen las tra
nsferencias
y carga, lo que produce una disminucin de los linfocitos T CD8 agotamiento y la m
ortalidad para determinar si los linfocitos totales del sistema inmune
en ratones podran transferir clulas B ratones KO. Por ltimo, hemos demostrado que l
as clulas B jugar una mucosa proteccin T. cruzi, un ratn equivalente (4-83 7 10 ) d
e bazo
papel crtico en el desarrollo y mantenimiento de las clulas multifuncional y vacia
do ganglionar inmune de las clulas Tc e ingenuo BALB/c
+ ratones fueron trasladados i.v. en ratones SCID. Tanto as como el drenaje linfti
co bazo clulas T CD8 +, as como en el de la prevencin de los linfocitos CD8 T cell
ex- nodos se utilizaron para la transferencia experimentos, como carnicero y sus
colegas + haustion. En general, nuestros nuevos datos sugieren que la memoria l
as clulas T CD8 (22) han demostrado que hay ms Ag-Ab especfica de clulas secretoras
(ASC)
con aparejo en ratones que carecan T. cruzi–especfica las clulas B son suficie
ntes para en el bazo tras infeccin por rotavirus. Por otra parte, tambin se ha dem
ostrado que
los niveles bajos de control + tejido de parasitismo. Sin embargo, estas clulas C
D8T esplenocitos de ratones contienen linfocitos inmune con capacidad inicio la
mucosa ( finalmente se agoten despus de alto nivel reto sistmico debido a la expos
icin prolongada a altos niveles de Ag.
a4b7) que se pueden transferir la mucosa proteccin contra el rotavirus en- tinal
infeccin (22, 23). Para determinar si las Clulas B eran necesarias para descargar
de
la transferencia de la mucosa proteccin T. cruzi, las clulas B se han agotado con
anti-CD19 microbolas (Miltenyi biotec, Auburn, CA) resultante in.93%
Materiales y Mtodos
+ CD19 + agotamiento (Supplemental Fig. 2). CD19 -agotadas las clulas (2,43 7 10
) de Tc inmune o ingenuo ratones BALB/c fueron trasladados i.v. en inocularon r
atones, a los parsitos y las infecciones/reto protocolos + SCID mice. Para determ
inar si las clulas T CD8 eran suficientes por s mismas para ratones BALB/c, SCID r

atones BALB/c, JhD clulas B KO ratones BALB/c y huevo de gallina la lisozima tran
sferencia T. cruzi mucosa + proteccin, las clulas T CD8 fueron seleccionados posit
ivamente (HEL) –BCR transgnicos especficos y ratones C57BL/6 en todos los cas
os se utilizaron
+ .98% CD8 en este estudio. En algunos casos, ratones hembras balb/c fueron agot
adas o clulas B con anti-CD8 (Miltenyi biotec Microbeads)
+ 6 de pureza. Las clulas T CD8 (5,2 –6,953 10 ) del Tc inmune e ingenuo rat
ones BALB/c http://www.jimmunol.org/
no con anti-CD20 (18B12) o IgG2a (2B8) mab (siempre por Biogen ratones fueron tr
asladados i.v. en ingenuo SCID mice. Un da despus de la transferencia,
7 Idec). Los ratones fueron tratados con 250 mg Ab en PBS i.p. –3 cada 2 s
emanas. Ratones ratones receptores fueron desafiadas con 1,23 10 T. cruzi (CMT)
i.g. Doce de ellos fueron alojados bajo condiciones libres de patgenos. Todos los
estudios se llevaron a cabo das despus, ratones receptores se sacrificaron yt. cr
uzi DNA fue evaluado con la aprobacin institucional del cuidado de los animales y
el uso Comit/
+ + la mucosa gstrica mediante PCR en tiempo real En algunos casos, CD8Tu1.2 Comi
t De Cuidado Animal en una Asociacin Americana para la Acreditacin
+ T cells(.95% CD8 ) fueron purificados de clulas B KO, WT ratones BALB/c Tc- Cui
dado de los Animales de Laboratorio acreditado–instalaciones de Saint Louis
University.
+ Ci, e ingenuo ratones BALB/c y transferidos a ingenuo BALB/c tu1.1 Tulahue'n c
epa cultura derivada de tripomastigotes metac (CMT) fueron
+ + + + ratones. Para normalizar el nmero de CD1 T8TSKd clulas transferidas, purif
icada para infecciones de las mucosas/desafos y la sangre de tripomastigotes
+ CD8 las clulas T se tie con un tetrmero TSKd1 y se analiza en la LSR (BFT) fueron
utilizados para problemas sistmicos como se describe (18, 19) y detallada II citm
etro de flujo (BD Biosciences) y software FlowJo citometra de flujo en la Fig. 1.
Brevemente, la CMT puede infectar tanto mucosally (por va oral, intranasal, conj
untivas rutas) y ATN ROJO mientras que sistmica slo puede infectar sistema+ + + + + (rbol Estrella, Ashland, OR). Nmeros equivalentes de CD8TSKd1 tetrmero e
n Universidad China de Hong Kong, el 16 de febrero
de 2015 clulas clulas B KO y ratones WT Tc inmune intravenosa se transfirieron a r
a. Estas diferencias de infectividad son debido a glicosilacin diferencial ingenu
o BALB/c tu1.1 ratones. Un da despus de la transferencia, ratones receptores, lo q
ue da lugar a una mayor inflamacin inducida por las granjas de atn rojo etapa de l
a vida, que es gracias a los ingenuos ratones de control, fueron desafiados con
importancia sistmica 5000T. cruzi hiptesis para la prevencin de la infeccin a nivel
de las mucosas (20, 21) .T. cruzi en- (BFT), s. c. y seguido de parasitemia y su
pervivencia.
apopto–inmune inducida por los ratones (lo que se conoce como Tc ratones in
munes a lo largo de este estudio) los ratones fueron generados por las reiterada
s dosis bajas de infeccin (1 –33 6 10 transferencias pasivas
CMT forma intragstrica suero [i.g. ] ). Para i.g. infeccin de los ratones, los ra
tones fueron primero suero fue recogida de ingenuo y WT Tc inmune ratones BALB/c
en 0,5 ml 1,5 % bicarbonato de sodio en HBSS i.g. utilizando una bola de 1.5 (generado por repetidas dosis bajas de infeccin oral con CMT i.g. ). Clulas B KO
pulgadas, 22-gauge alimentacin animal aguja y descans durante 15 minutos con el fi
n de neutralizar BALB/c Tc inmune los ratones recibieron 300 ml WT ratones BALB/
c Tc estmago tel. Los parsitos se diluido en PBS y 1% de glucosa, y 0,1 ml suero i
nmune, WT ratones BALB/c ingenuo suero, o PBS i.p. cada semana se entreg i.g. Est
os ratones se conoce como Tc inmune ratones en todo comienza bien 2 wk antes o a
l momento de T. cruzi (MPC) s. c. este estudio sistmico. desafo. T. cruzi IgG srica
especfica–extremo se determinaron los t ulos –2 cada 1 semanas. Vacunas c
ontra T. cruzi–ELISA IgG srica especfica para generar inmunidad mucosa, ingen
uo ratones BALB/c (anti-CD20/IgG2a mab tratados) fueron vacunados con 50 mg reco
mbinante TS plus 10 mg suero fue recogido en distintos momentos y evaluarse para
TS de CpG de oligodeoxinucletido fosforotioato 1826 (InvivoGen, San Diego, CA) r
espuestas IgG srica mediante ELISA como se describe (24). En algunos casos, 8 M
intranasalmente dos veces, 2 wk aparte (TS/CpG). Para generar inmunidad sistmica

, la urea fue aadido para evaluar la presencia de Abs de alta afinidad. Siguiente
ingenuo salvaje (WT), clulas B KO, o anti-CD20/IgG2a mab–suero tratado incu
bacin, la placa ELISA se lav con PBS plus 0.05 % ratones BALB/c fueron vacunados c
on la vacuna heterloga TS- Tween 20. Urea (8 M) fue agregado por 5 min a temperat
ura ambiente, lavado cribe (100 mg TS-ADN en los das 0 y 14 i.m. , e impulsado en
los das 44 y cuatro veces con PBS con Tween 20–del ltimo lavado incubados du
rante 5 min a 58 con 1 3 8 10 UFP adenovirus de TS s. c. (Base de la cola) y la
temperatura de la habitacin antes de la extraccin. Punto final fueron calculadas m
ediante ttulos intranasalmente (4). Estos ratones se conocen como TS–inmune
inducida por la vacuna Unitwin ELISA software (PhPlate, Estocolmo, Suecia).
Inmunolgico (TS) ratones a lo largo de este estudio.
T. cruzi especficos–IFN-g, IgG e IgA ELISPOT Evaluacin de inmunidad protector
a Millititer HA 96-bien las placas de microtitulacin con nitrocelulosa bases (Mil
lipore, mucosa protectora para evaluar inmunidad, los ratones fueron retados con
1 –23 Bedford, MA) fueron revestidos con una rata purificada anti-ratn IFNg (clon
7 10 CMT i.g. Doce das ms tarde, que es la hora pico para T. cruzi rep- R46A2; BD
Pharmingen, San Diego, CA) o recombinante lication TS como se describe en la muc
osa gstrica (17), los ratones fueron sacrificados y ADN gstrica (25). Por IFN-g a
nlisis ELISPOT, clulas de bazo (2,53 5 10 clulas/pocillo) y fue utilizado para PCR
cuantitativa como se describe (18). En resumen, 100 vehculos blindados –200
ng (13 5 10 A20J las clulas [control A20; American Type Culture gstrico ADN purif
icado con Qiagen anlisis DNeasy kits la sangre y los tejidos se aadi Coleccin], A20J
las clulas transfectadas establemente con el TS gen [A20-TS], o a cada reaccin de
PCR en tiempo real que contiene 900 nM cada cebador (59-AAC- A20J clulas estimul
adas con 2,5 m + g/ml inmunognica CD8 H-2Kd–restringido CACCACGACAACCACAA-39
y 59-TGCAGGACATCTGCACAAAG TS IYNVGQVSI pptido [A20-TSKd1]) se cultivaron una noc
he a 37 Oc.
TA-39), 250 nM sonda TaqMan (FAM/TAM 59-TGCCCCAGGACCGTC - TS-Ab especfica ELISPOT
se hicieron anlisis como se ha descrito previamente (24).
CCCA-39), y 13 TaqMan PCR master mix. Envejecimiento condiciones brevemente, 1 &
#150;53 5 10 clulas de bazo se agregaron a TS-revestido las placas ELISPOT.
usando un rpido Applied Biosystems 7500 instrumentos de PCR en tiempo real, tras
una noche incubacin a 37 Oc, anti-IgG de ratn o la IgA la biotina fue de 95 Oc dur
ante 10 minutos, seguido de 40 ciclos de 95 Oc por 15 s y 60 Oc para mayor para
detectar T. cruzi IgG especfica–Ab e IgA secretora de las clulas, respectivam
ente- 1 min. una curva estndar fue generada usando ADN purificado a partir de una
mente (SouthernBiotech). Los resultados son representados como el nmero de punt
os de epimastigotes de T. cruzi, formando clulas por milln o ASC clulas de bazo o nm
ero absoluto por evaluar proteccin inmunidad sistmica, los ratones fueron retados
con 5000 bazo. Las respuestas a un Fondo20J se dedujeron de las clulas- mulario T
. cruzi (MPC) s. c. Extremidades parlisis parlisis se evalu mediante puntuaciones c
abo Ag respuestas en los resultados que se muestran de IFN-g ensayos ELISPOT.

1808 T. cruzi–ESPECFICOS EVITAR Abs CD8 T CELL AGOTAMIENTO

+ + citometra de flujo y CD8 in vitro TSKd1
Abs + Todos los resultados han sido comprados en BD Biosciences (San Diego, CA)
con el CD8 linfocitos T, pero no las clulas B, son necesarios para proteccin
anti–excepcin de PD-1, anti–Lag-3, anti-CD62L (eBioscience, San mucosa
inmunidad T. cruzi
IYNVGQVSI d Diego, CA). El TS /H-2K –APC (TSKd1) tetrmero se prest a travs de
los Institutos Nacionales de la Salud tetrmero de trabajos anteriores ha demostr
ado que T. cruzi repetidas infecciones de las mucosas
(Atlanta, GA). A fin de evaluar in vitro TSKd1 expansin, clulas de bazo fueron re
sultado de ratones infectados crnicos concomitantes que se desarrollan imcon la etiqueta CFSE (Vybrant CFDA SE celda trazador, Invitrogen) y culta comuni

dad mucosa protectora contra las dificultades (Tccon 13 5 10 irradiados (12.500 rad) vehculos blindados (A20-control negativo o A2
0- ci) (17). Estos Tc inmune ratones desarrollaron un alto nmero de TS) de 6 a 3
7 Oc d. Las clulas se cuentan entonces con guayaba ViaCount re- T. cruzi ASC&#150
;especficos en la mucosa gstrica, lo que sugiere que las clulas B y el agente EasyC
yte citmetro de flujo (Millipore, Billerica, MA). Mitad de las clulas se utilizan
para tincin de la superficie celular directo y la otra mitad se desempe un papel i
mportante en la mucosa proteccin T. cruzi (17). Estamos
estimulados con PMA (10 ng/ml), ionomycin (500 ng/ml), y de culto en primer luga
r trat de abordar directamente el potencial papel causal de clulas B
con la monensina (GolgiPlug; 1 ml/ml) y brefeldina A (GolgiStop; mucosa protecto
ra de T. cruzi inmunidad. Tc inmune clulas B KO
0,67 ml/ml) durante 3 h a 37 Oc. Las clulas se tien como se describe (4) y ana- (J
hD) y WT ratones BALB/c fueron generados como se muestra en la Fig. 1A. analiz co
n LSR II citmetro de flujo (BD Biosciences) y FlowJo v7 software (rbol de estrella
). Un mes despus de la ltima infeccin, Tc inmune e ingenuo B clulas
CD8+ + estimulacin TSKd1 se calcularon los ndices de primor- KO y WT ratones BALB/
c fueron desafiadas con un alto descargado de
lad 2 nmero de live CD19 + CD3 CD42+ CD8+ lo tetrmero CFSE clulas presentes dosis de
T. cruzi. Proteccin mucosa se evalu 12 d ms tarde a travs
de A20-TS estimulacin dividido por el nmero presente tras UN20- PCR en tiempo real
, como hemos demostrado anteriormente que el ms alto nivel de control negativo in
cubacin. Los porcentajes y nmeros absolutos de ADN de T. cruzi puede ser medido en
la mucosa gstrica el punto CD8+ + + + + TSKd las clulas T1 citoquinas se calcular
on los porcentajes de
2 o el nmero de live CD19 CD3+ 2 CD4 CD8 + + + CFSE tetrmero baja inicial de citoc
inas invasin mucosa oral despus parsito inoculacin, 10 –14 d
las clulas presentes despus de la estimulacin con A20-TS resta el nmero postchalleng
e (17) (Fig. 2A). Clulas B ratones KO era considerablemente mayor
presente tras UN20-control negativo incubacin. niveles ADN de T. cruzi en la muco
sa gstrica en comparacin con WT ratones http://www.jimmunol.org/
mucosa despus de la infeccin parasitaria (p = 0,0006 ; Mann Whitney–Histopato
loga U test), lo que sugiere que las clulas B son importantes en el control princi
pal de
msculo esqueltico y cardaco inflamacin se evalu en 30 o 87 das parsito replicacin. Si
mbargo, ms relevante para vacunasistmica despus T. cruzi (MPC) desafo. El corazn y los msculos esquelticos es la funci
de las clulas B en la memoria las respuestas inmunes. Tc de los ratones fueron f
ijados en formol al 10 %, incluido en parafina, sec- inmune celular B ratones KO
no desarrollar inmunidad mucosa, como que fuera, y tie con H&E. Patologa dia
positivas fueron clasificados por un patlogo ciego de la siguiente manera: 1, mnim
o; 2, moderado; 3, moderado; 4, marcado. se proteccin significativa en comparacin
con el principal desafi ratones KO clulas B (Fig. 2A, p 0,0005 ; Mann Whitney&#150
;U test).
Anlisis estadstico
anlisis estadstico se realiz con prisma software v4 (GraphPad
adems, Tc B de clula inmune desarrollado ratones KO niveles similares de proteccin
con respecto a la mucosa WT Tc inmune en ratones Universidad China de Hong Kong
el 16 de febrero
de 2015, La Jolla, CA). Mann Whitney U–pruebas o no las pruebas t de Stude
nt (p = 0,1719 ; Mann Whitney–U test). Tambin evaluamos la freeran utilizadas para comparar las respuestas entre los grupos. De Log-rank asidu
idad se utilizaron pruebas de T. cruzi–las clulas T especficas de clulas B KO
y WT Tcpara comparar entre los grupos. ci ratones. Hay frecuencias similares de las clul
as T especficas total
FIGURA 1. Infeccin por T. cruzi y TS–– inducida por vacuna modelos de m
emoria. Se muestran los principales modelos utilizados en este estudio para demo
strar inmunidad inducida por mltiples dosis bajas de infeccin por T. cruzi (Tc mod
elo inmune) y por la inmunizacin con vacunas diferentes TS (TS inmune modelos).

(A) generacin de ratones Tc inmune.

Los ratones son dosis de 0 y 6 –8 wk con dosis bajas de T. cruzi tripomasti
gotes metac (MT) i.g. Por lo menos 4 semanas ms tarde, estos ratones estn listos pa
ra ser utilizados en los estudios, de las fuentes de las clulas del sistema inmun
e para su uso en modelos de transferencia adoptiva, mucosa final desafo con altas
dosis de MT i.g. , o sistmica con T. cruzi BFT. (B) Generacin de mucosa inmunitar
io TS ratones.
Los ratones son vacunados a los 0 y 2 wk con CpG-TS recombinante adyuvada intran
asalmente (i.n. ), y 4 semana despus ratones estn listos para su uso en diversos e
studios como se indica en el punto (A).
(C) Generacin de sistema inmune ratones TS. Los ratones son vacunados a los 0 y 2
wk con ADN-TS (i.m. ) y con adenovirus de TS (s. c. e intranasales) en las sema
nas 6 y 8. Por lo menos 4 semanas ms tarde, los ratones estn listos para su uso en
diversos estudios como se describe en el punto (A). Sobre todo, tenga en cuent
a que los ratones Tc inmune crnicamente infectadas con niveles bajos de parsitos y
tener lo que se conoce como concomitante apopto- inmunidad natural inducida por
. En el contrato, TS im- ci ratones no son infectados hasta que luego con T. cru
zi.

El Journal of Immunology 1809

FIGURA 2. Las clulas B no son necesarios para la proteccin mu- cosal T. cruzi inmun
idad. (A) y (B) Tc inmune clulas B JhD KO y WT ratones BALB/c fueron generados po
r repetidas dosis bajas de i.g. Infeccin por T. cruzi como se describe en la Fig.
1. Un mes despus de la ltima i.g. infeccin, ingenuo y Tc im- ci clulas B WT ratones
KO y fueron impugnadas i.g. de altas dosis de T. cruzi. Doce das ms tarde (el pun
to en el que T. cruzi DNA es mayor en la mucosa gstrica) (17), los ratones fueron
sacrificados y (A) gstrico se aisl ADN para evaluar el nivel de T. cruzi ADN medi
ante PCR cuantitativa (n = 7 –8 ratones/grupo). Los datos provienen de dos
ensayos independientes agrupadas. (B y D) esplenocitos (SC) fueron aisladas y l
a frecuencia de IFN-g–de TS o TSKd1-las clulas T especficas se midi mediante E
LISPOT.
Antecedentes las respuestas se restar de la expe- descargado de
los valores ambientales. (C) y (D) La mucosa inmunitario TS ratones fueron gener
ados por la vacunacin intranasal recombinante con TS plus CpG 1826 dos veces, 2 w
k. Los ratones fueron clulas B agotado (anti-CD20) o no (IgG1k) 2 wk antes de la
vacunacin. Un mes despus de la vacunacin, ingenuo y TS inmune los ratones fueron im
pugnadas i.g. con una alta dosis de http://www.jimmunol.org/ T. cruzi. Doce das ms
tarde, los ratones fueron sacrificados y (C) gstrico se aisl ADN para evaluar el
nivel de T. cruzi ADN mediante PCR cuantitativa (n = 5 ratones/grupo). * P, 0,0
5 , ** p , 0.01 , *** p , 0,0005 de Mann Whitney U–prueba.
SFC, el spot de celda; TcME molecular, T. cruzi vando. Barras de Error represent
an SEM.
de T. cruzi protena TS (A20-TS respuesta) y las clulas T reactivas inmunodominante
s de clulas T CD8 epitope (A20-TSKd1 re- rgimen (TS ADN heterlogo con aparejo, aden
ovirus-TS impulsado) en Universidad China de Hong Kong el 16 de febrero
de 2015 podra proteccin mucosa, como no se ha demostrado que esto compo) en WT y cl
ulas B ratones KO (Fig. 2B). Anteriormente hemos medido inmune. Debido a la esc
asa cantidad de clulas recuperadas por las respuestas en el bazo, como se ha most
rado anteriormente que im- gstrico los ganglios linfticos, las poblaciones mixtas d
e esplenocitos plus comunidad gstrico mucosa patgenos pueden ser medidos en forma
eficiente los ganglios linfticos se utilizaron clulas de transferencia mximo nmero de
bazo (22, 23). Ag-clulas especficas generadas en los ganglios linfticos parsito muc
osa de clulas especficas. Trabajos anteriores realizados por otros autores han dem
ostrado que el trfico a travs de la bazo antes de migrar a tejidos mucosos. esplen
ocitos de ratones inmunes por rotavirus contienen linfocitos con Adems, el mayor
nmero total de rotavirus de autoguiado siga ASC la mucosa que pueden transferir c

apacidad proteccin mucosa (22, se han recuperado de bazo de tejidos mucosos (22),
23). Tanto las Tc inmune (Fig. 3A) y TS inmune (Fig. 3B) los donantes
esplnica + y CD8 de las clulas T por rotavirus puede inmune eficaz ratones clulas f
ueron capaces de transferir la mucosa proteccin a ratones SCID ingenuo.
transferencia proteccin mucosa (22, 23). En general, nuestros resultados demuest
ran Siguiente, se estudi si las clulas B son necesarias y/o suficientes que las Clul
as B no son necesarios para T. cruzi inmunidad mucosal. para la proteccin de la m
ucosa. Nos hemos trasladado muy pu- al lado, queramos para determinar si las Clulas
B desempean un importante CD19 + horrorizados las clulas B de ingenuas o Tc inmun
e ratones BALB/c en TS–vacuna inmunidad mucosa (Fig. 1B). TS es un ratones
en ratones SCID. Sin embargo, no hemos podido confirmar si enzima en la superfi
cie de T. cruzi que parsito es importante para las clulas B son suficientes, como
SCID ratones que recibieron las clulas B purificada infectividad, ya que tiene ne
uraminidasa y cido silico transferencia adicional (Fig. 1A) por s solo no desarroll
ar T. cruzi–Ab especfica actividad. Ya hemos demostrado que los ratones vacu
nados con TS respuestas (IgG por ELISA o ASC detectado por ELISPOT, adems del TLR
9 agonista CpG 1826 estn protegidos contra los mu- Complementaria Fig. 1C y 1D, r
espectivamente), aunque las clulas B cosal y T. cruzi desafos sistmicos (25). Las
clulas B fueron los primeros eran claramente presente (Supplemental Fig. 1B). Po
r lo tanto, hemos decidido agotadas en ingenuo WT ratones BALB/c con anti-CD20 (
mab Biogen agotamiento de las clulas B realizar estudios para determinar si las Clu
las B Idec). Ratones TS inmune (Fig. 1B) fueron vacunados intranasalmente fuero
n necesarios para la transferencia de la mucosa. Las clulas B recombinante dos ve
ces con TS plus CpG 1826 dos semanas aparte, el descanso se agotaron desde Tc in
mune e ingenuo BALB/c esplenocitos de 1 mo, desafiadas con la dosis alta oft. cr
uzi 7 oral (10 ), y los ganglios linfticos y clulas gstricas (suplementarios Fig. 2
). Estas clulas B– mucosa de proteccin a travs de PCR en tiempo real Similar
a la agotada fracciones fueron transferidos al ingenuo SCID ratones y los result
ados en ratones Tc inmune, las clulas B no son necesarios en TS ratones receptore
s fueron desafiado oralmente al da siguiente con una vacuna–inmunidad induci
da por la mucosa protectora (Fig. 2C). TS y altas dosis de T. cruzi i.g. Doce da
s despus del desafo, el destinatario TSKd1-T las respuestas de las clulas fueron co
mparables entre clulas B– ratones fueron evaluados para la presencia de las
clulas B y T. cruzi–- y empobrecido–isotipo control tratados TS-ratones
vacunados (Fig. 2D), IgG srica especfica e IgG ASC. Supplemental Fig. 2 Muestra q
ue en la demostracin de que las clulas B no son necesarios para el desarrollo, SCI
D en ratones CD19-agotadas las clulas, las clulas B eran detectables.
mantenimiento y/o recuperacin de TS o TSKd1-las clulas T especficas de Fig. 3C demu
estra que las clulas B no son necesarios para la transferencia la mucosa T. cruzi
. Por lo tanto, las clulas B no son necesarios para que TS- proteccin de la mucosa
, como los ratones que recibieron SCID total o inducida por la vacuna especfica i
nmunidad mucosa. Clulas B–esplenocitos empobrecido ms clulas ganglio linftico gs
trico del Tc para confirmar que las clulas B no son crticas para la mucosa inmunit
ario T. cruzi los ratones fueron protegidos de igual forma (p, 0.05 , Mann Whitn
ey–proteccin, hemos realizado estudios de transferencia adoptiva. En primer
lugar debemos evitar- U prueba en comparacin con la transferencia de clulas indife
renciadas de ratones). Si se extraen las clulas inmunes del Tc ratones o ratones
TS inmune no diferencia significativa en la proteccin total transferido por inge
nuo o que se han generado como se muestra en la Fig. 1C, con una vacunacin ms pote
ntes clulas B ingenuo empobrecido–poblaciones celulares (p = 0.22 , Mann Whi
tney–

1810 T. cruzi–Abs ESPECFICOS EVITAR CD8 T CELL AGOTAMIENTO

FIGURA 3. + T. cruzi–CD8 especficos generados por las clulas T infeccin o vacu
nacin puede transferir la mucosa proteccin T. cruzi. (UN–D) subconjuntos de cl
ulas inmunitarias de Tc im- ci TS inmune sistmica o ratones fueron transferidos a

l ingenuo SCID mice. Ratones receptores fueron puestos en entredicho al da siguie

nte con una alta dosis de T. cruzi i.g. , y 12 d despus ratones fueron sacrificad
os y T. cruzi DNA se evalu en la mucosa gstrica mediante PCR cuantitativa (A) Una
celda del bazo del ratn ms vaciado ganglionar clula inmune del Tc equivalente o ing
enua ratones BALB/c fue trasladado i.v. en ingenuo SCID mice (n = 9 –10 rat
ones/grupo). Los datos presentados se derivan de dos experimentos independiente
s agrupados a los traba- jadores. ** P , 0.01 mediante el test de la t de Studen
t. (B) Un ratn equivalente de esplenocitos de ratones TS inmune (TS ADN primer, a
denovirus-TS boost) o ingenuo ratones BALB/c se descarg de
transferencia ingenua i.v. en ratones SCID (n = 9 –10 ratones/grupo). * P
, 0.05 mediante el test de la t de Student. Los datos presentados se derivan de
dos experimentos independientes agrupados a los traba- jadores. (C) Un ratn de es
plenocitos o CD19-agotadas las poblaciones de esplenocitos Tc inmune o ingenuo r
atones BALB/c fueron trasladados i.v. en ingenuo SCID mice (n = 5 ratones/grupo)
. * P, 0,05 , ** p, 0,01 de Mann
Whitney U– http://www.jimmunol.org/ prueba. Los datos son representativos d
e dos ensayos independientes. (D) Un ratn bazo plus
+ nodo linftico gstrico equivalente altamente purificada de las clulas T CD8 (.98%
+ CD8 ) del Tc inmune o ingenuo ratones BALB/c fueron trasladados i.v. en ingenu
o SCID mice (n = 11 ratones/grupo).
*** P 0.0001–de Mann Whitney U prueba. Los datos presentados se derivan de
dos experimentos independientes agrupados a los traba- jadores. Barras de Error
representan SEM. TcME, T. cruzi molec- cientemente equivalente. en Universidad C
hina de Hong Kong el 16 de Febrero, 2015
U test). Estos resultados confirman nuestros resultados anteriores detectados e
n los ratones sistmicamente con ATN ROJO, que son las ms virulentas e inducen clulas
B KO modelo que las Clulas B no son necesarios para T. cruzi mucosa mayores nivel
es de parasitemia en ingenuo ratones (25, 27). Clulas B KO Tc proteccin inmune. r
atones sobrevivan significativamente ms largo que sus ingenuos desde las Clulas B no
son crticas para T. cruzi proteccin mucosa, cohortes, pero finalmente sucumbi a la
infeccin (Fig. 4A),
+ hemos examinado si las clulas T CD8 Tc inmune de los ratones en desarrollo mayo
r parasitemia (Fig. 4B), prdida de peso (Fig. 4C),
+ podran transferir proteccin mucosa. Investigaciones anteriores han mostrado que
TS y disminucin y TSKd1-CD8
+ T las respuestas de las clulas T CD8 Tc inmune clulas de ratones podran transferi
r proteccin (Fig. 4D, 4E). Sobre todo, las frecuencias y nmeros absolutos normalm
ente letales contra parsito desafos sistmicos (4, 26). Cmo de IFN- + g–producir
TSKd1-specific CD8 fueron las clulas T+ nunca, para las clulas T CD8 para mediar proteccin mucosa, estos significativame
nte reducido. Estos resultados indican que las clulas B son importantes las clulas
deben ser capaces de migrar en el tejido gstrico y proveer al mantenimiento de +
T. cruzi–especficos, T CD8
+ clula funcional funciones efectoras. Altamente purificado las clulas T CD8 (supl
ementarios Fig. las respuestas sistmicas cuando Ag niveles son altos. Trabajo pre
vio de 3A) de Tc inmune e ingenuo ratones BALB/c fueron transferidos a nuestro l
aboratorio ha demostrado que WT ratones BALB/c5000
+ ingenuo require SCID mice 1 d antes de provocacin oral. SCID ratones que re- TSK
d1-specific IFN-g–producir clulas T CD8
+ protegido de mita Tc inmune clulas T CD8 fueron significativamente protegido de
la muerte (C. S. Eickhoff, N. L. Sullivan, y el D. F. Hoft, manu- contra T. cru
zi reto oral en comparacin con ratones que recibieron script en preparacin). Como
se muestra en la Fig. 4E, B de clula inmune KO Tc
+ ingenuo control las clulas T CD8 (Fig. 3D), a pesar de la ausencia de ratones d
esarrollaron nmero significativamente menor de TSKd1-specific
tectable + T. cruzi IgG srica especfica–suplementario (Fig. 3B). Por lo tant
o, el IFN-g–producir clulas T CD8 por bazo (6 738 198) com+ las clulas T CD8 son los nicos capaces de conferir proteccin mucosalT. cruzi. com
parada con ratones WT Tc inmune (11,3746 1.764 ). Por lo tanto, B de clula inmun
e ratones KO Tc probablemente no estaban protegidas por las clulas B son importan

tes para T. cruzi inmunidad sistmica o no desarrollar o mantener suficiente nmero

de IFN-g–, investig la capacidad de las clulas B para contribuir a + produccin
sistmica, TSKd1-CD8 clulas T. Coherente con el T. cruzi proteccin en nuestros sist
emas. Trabajos anteriores por Kumar niveles ms altos de la parasitemia, Tc inmune
los ratones que carecen las clulas B y Tarleton (16) demostraron que ratones KO
clulas B podra inicialmente desarrollado niveles significativamente ms altos de inf
lamacin en control cardaco despus parasitemia infeccin sistmica con T. cruzi y los te
jidos seos, caractersticas de la patologa inducida por acab sucumbiendo a la infeccin
. En primer lugar, hemos comprobado si crnica infeccin por T. cruzi (Fig. 4F, 4G).
En general, estos resultados B de clula podra desarrollar ratones KO proteccin si
stmica. Clulas B KO y demostrar que las clulas B juegan un papel crtico en T. cruzi
proteccin WT ratones BALB/c fueron oralmente infectados con una dosis baja de T.
cruzi inmunidad sistmica.
dos veces, 2 mo, Tc inmunolgico para generar ratones (Fig. 1A). Estos ratones no
sucumben a infecciones o medicamentos antiparasitarios especficos requieren las
clulas B no puede reconstituir T. cruzi inmunidad (datos no mostrados). Por el c
ontrario, hemos demostrado previamente que los ratones las clulas B proporcionan
muchas funciones importantes, tales como produccin Ab, deficientes en IL-12, IFNg, orb2-microglobulina son incapaces de sur- Ag presentacin, coestimulacin y produ
ccin de citocinas. Por lo tanto, vive de dosis baja las infecciones por parsitos i
ncluso con enclavamiento ascariano en clulas B deficiencia no slo se traduce en la
ausencia de Abs, pero tambin deman (19). A continuacin, hemos cuestionado clulas
B KO y WT Tc inmune podra afectar al desarrollo de las respuestas de las clulas T.
Para determinar

el Journal of Immunology

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en Universidad China de Hong Kong el 16 de Febrero, 2015
FIGURA 4. Las clulas B son importantes para T. cruzi inmunidad sistmica en respues
ta a infeccin parasitaria. JhD clulas B KO y ratones WT Tc inmune se generaron com
o se describe en la Fig. 1. Por lo menos 1 mes despus de la ltima infeccin de la mu
cosa, Tc inmune celular e ingenuo B KO y WT ratones BALB/c fueron desafiados con
virulenta sistmica T. cruzi BFT s. c. (A) La supervivencia se evalu durante un mxi
mo de 100 d. * P, 0,05 por log-rank test (n = 5/grupo). (B) fue evaluado antes
y hasta 28 d despus T. cruzi sistmicas (BFT) desafo. ** P, 0,01 , el rea bajo la cur
va se evalu para cada ratn y que se usa para comparar grupos de Mann Whitney U de&
#150; (n = 5/grupo). (C) El peso se midi antes y hasta el da 85 tras reto sistmico
. * P, 0,05 , ** p, 0,01 de Mann Whitney U–prueba. Los datos de (A) –
(C) son representativas de dos experimentos independientes con resultados simila
res. Treinta das despus reto sistmico, algunos ratones fueron sacrificados para eva
luar las respuestas inmune e inflamatoria. (D) La frecuencia y (E) nmero absoluto
de IFN-g–de TS y TSKd1-las clulas T especficas fueron medidos a travs de ELIS
POT esplenocitos total. Segundo plano las respuestas se restar de los valores exp
erimentales.
+ La lnea discontinua en (E) representa 5000 TSKd1-specific CD8 clulas T, un nmero
que se encuentra en trabajos anteriores para proporcionar proteccin sistmica (C. S
. Eickhoff, N. L. Sullivan, y el D. F. Hoft, manuscrito en preparacin). * P, 0,0
5 de Mann Whitney U de– (n = 4 ratones/grupo). Los datos son representativ
os de dos experimentos independientes con resultados similares. (F) Inflamacin ca
rdaca y (G) msculo esqueltico se evalu a 30 –87 d despus reto sistmico: 1, mnimo;
2, moderado; 3, moderado; 4, marcada. Ingenuo clulas B WT ratones KO y no muestra
signos de inflamacin (datos no mostrados) (n = 12 –13 ratones/grupo).
** P, 0.005 , *** p, 0,0005 de Mann Whitney U–prueba. Los datos presentados
se derivan de dos experimentos independientes agrupadas en los resultados.
Barras de Error representan SEM.

si T. cruzi–las clulas B especficas son esenciales para proteccin sistmica- HEL

Tc sueros inmunes no tener algunos antecedentes en nuestra reactividad, HEL-espe
cfico estudiado ratones transgnicos BCR. TS recombinante ventajas especficas de ELI
SA, pero muy poco de esta reactividad de estos ratones son que, a diferencia de
una clula B KO persisten en la presencia de 8 M urea, demostrando que mnimo si los
ratones, el tejido linfoide desarrollo y produccin de citocinas son las T. cruzi
–especfico de alta afinidad Abs estaban presentes (Fig. 5A). En relativamen
te normal. Sin embargo, estos ratones no pueden generar las clulas B contraste, W
T Tc sueros inmunes haba mucho ms que producir reactividad cruzada con alta afinid
ad especfica–T. cruzi del Abs, que podra ser recombinante TS y mucho de esto
persisti a pesar 8 M urea importante tanto para efectos de proteccin directa, as co
mo una mejor Ag tratamiento.
presentacin. HEL y WT Tc inmune los ratones fueron generados por incluso antes de
la fase de alto nivel T. cruzi BFT reto sistmico, repetidas dosis bajas de T. cr
uzi infecciones orales (Fig. 1A). Antes de niveles de parasitemia y se incremen
taron en el HEL Tc inmune sistmica ratones siguiente T. cruzi (BFT) desafo (al men
os 1 mes despus (Fig. 5B). Estos resultados podran interpretarse en el sentido de
que sugieren que la segunda infeccin oral), ratones fueron evaluados para T. cru
zi–ausencia especfica de alta afinidad, T. cruzi–clulas B especficas las
IgG Abs, parasitemia, prdida de peso, y a la muerte (Fig. 5). en una deficiencia
en la mucosa protectora memoria inmunidad, a pesar

1812 T. cruzi–Abs ESPECFICOS EVITAR CD8 T CELL AGOTAMIENTO

descargado de
LA FIGURA 5. Depresion no puede reconstituir las clulas B T. cruzi–inmunidad
inducida por. HEL Tc inmune especfica de transgnicos BCR o el control ratones C57
BL/6 fue generada por repetidos de baja dosis intrag infecciones por T. cruzi. Po
r lo menos 1 mes despus de la ltima infeccin, Tc inmune e ingenuo HEL y WT ratones
fueron
impugnadas http://www.jimmunol.org/ sistmicamente con T. cruzi virulenta BFT s. c
. (A) Total y alta afinidad TS–recombinante IgG especfica en suero se midier
on las respuestas 50 d despus reto sistmico mediante ELISA. (B) parasitemias fuero
n evaluadas en distintos momentos antes y despus del ltimo reto sistmico (n = 7 &#1
50; 10/grupo). ** P 0.01 , *** p, 0.005 de Mann Whitney U–prueba. (C) prdid
a de peso evaluadas en distintos puntos despus reto sistmico (n = 7 – 10/grup
o). ** P, 0,01 U Mann Whitney–prueba. (D) Los ratones fueron seguidos para
la supervivencia de 100 d, tras reto sistmico (n = 4-7 ratones/grupo). * P, 0,0
5 por test de log-rank. Los datos son representativos de dos experimentos indepe
ndientes con resultados similares. Barras de Error representan SEM.
nuestros resultados anteriores se muestra en las Figs. 2 Y 3 demuestra que isoti
po control inmunolgico–ratones tratados TS (Fig. 6D). Anti-CD20
+ las clulas B – no eran importantes para cualquier infeccin o inducida por l
a vacuna tratamiento inmunolgico ratones TS las frecuencias de los linfocitos CD8
en Universidad China de Hong Kong el 16 de febrero de 2015 + TSKd clulas T1 T. c
ruzi mucosa–inmunidad protectora especfica. Sin embargo, parasitemia similar
a ratones de control antes de reto sistmico (4,626 1,5 %; es un extremo sistmica
controlada en gran parte por inmunidad sistmica. Despus Fig. 6C). Sin embargo, es
tas clulas no ampliar oral ptima despus T. cruzi desafos, el parsito gstrico drenajes
linfticos en el T. cruzi sistmica (Fig. 6D), lo cual se traduce en mucho
+ nodo y difunde por todo el cuerpo, provocando menos sistmica TSKd CD8 + T1 las
clulas despus del desafo de TS
+ control de infeccin. Todos los ratones Tc inmune crnica infeccin sistmica inmune r
atones. La cantidad de CD8 + TSKd clulas T1 inmunidad sistmica que requiere contro
l de parasitemia. El hecho de que en anti-CD20 –tratamiento inmunolgico TS l
os ratones fueron asociados con HEL Tc inmune parasitemias ratones tenan mayor an
tes de la alta- mayor parasitemia (Fig. 6E) y la muerte (Fig. 6F). Aunque nivel

reto sistmico ATN ROJO indica que estos ratones tienen + niveles similares de inm
unodominante las clulas T CD8 desarrollado en profunda defectos en inmunidad sistm
ica, dando como resultado la imposibilidad de TS + respuesta a la vacunacin en la
ausencia de las clulas B, estos CD8 control infeccin parasitaria sistmica incluso
despus de dosis baja las clulas T T. cruzi fueron funcionalmente deficiente y no h
a logrado proteger contra la mucosa. T. cruzi + reto sistmico. Por lo tanto, memo
ria las clulas T CD8 que se desarrollan conforme a los resultados que se presenta
n en la Fig. 4, Niveles de parasitemia en la ausencia de las clulas B se alteraba
n en su capacidad de responder aument ms en ratones HEL Tc inmune sistmica despus- y
proteger contra T. cruzi virulentos problemas sistmicos.
selas (Fig. 5B), lo que resulta en una mayor prdida de peso (Fig. 5C) y las clulas
B son importantes para T CD8 multifuncional muerte celular (Fig. 5D). Estos re
sultados demuestran que el T. cruzi– + respuestas y la prevencin de los CD8
de los linfocitos T especficos agotamiento las clulas B son esenciales para T. cru
zi proteccin sistmica.
+ Como lo hemos mostrado en las Figs. 4 –6, en la ausencia de las clulas B,
los ratones son similares niveles de memoria las clulas T CD8 en la ausencia inca
paz de desarrollar inmunidad que impide que muerte violenta despus de la infeccin
pero no protegen de T. cruzi reto sistmico reto sistmico. Curiosamente, estos rato
nes son capaces de nuestro modelo Tc inmune, los ratones son infectados crnicamen
te, lo + CD8 desarrollar las respuestas de las clulas T y sobreviven por ms tiempo
que sus
+ es difcil de estudiar el desarrollo de memoria celular T CD8 ingenuos cohortes
(Fig. 4A). Sin embargo, parasitemia aumenta con el paso del tiempo las respuest
as en la ausencia de altos niveles de T. cruzi en estas clulas B–inmunitario
deficiente ratones virulenta sistmica despus
+ Ag. Por lo tanto, se analiza el desarrollo de los linfocitos CD8 + TSKd1 las cl
ulas T reto, con resultado final de muerte. Estos datos sugieren que en nuestro
modelo de memoria inmune TS (TS ADN heterlogo con aparejo, aunque nmeros similares
de + T. cruzi–CD8 especficos las clulas T podra adenovirus-TS impulsado; Fig.
1C). Tal como se describi anteriormente, las clulas B + ser inducida en clulas B&
#150;ratones deficientes, estas clulas T CD8 fueron agotadas en vivo con anti-CD2
0 Ab (o isotipo control) funcionalmente deficiente, especialmente cuando se enfr
entan con elevada Ag en la vacunacin/tratamiento. TS inmune celular B– carga
s. Para probar esta hiptesis, se examin en primer lugar la capacidad de
control + agotado y ratones desarrollaron niveles similares de inmuno- TSKd1-CD8
clulas T para ampliar y producen citoquinas
+ CD8 + dominante TSKd1 las clulas T detectables en la sangre (Fig. 6A–C). d
espus restimulation ex vivo. Clulas B KO y ratones inmunes WT Tc
+ Por lo tanto, Ag-especfica las clulas T CD8 se puede cebar normalmente en clulas
B– sistmica fueron desafiados con altas dosis de T. cruzi y ratones empobrec
ido. Estos ratones se impugn sistemticamente con las respuestas inmunes fueron eva
luados 30 d despus. Esplenocitos eran de T. cruzi y evaluarse para las respuestas
inmunitarias y proteccin. La etiqueta de CFSE y cocultured con control negativo
+ porcentajes del total CD8 poblaciones que fueron TSKd CD8 + o1 Vehculos blindad
os vehculos blindados que se estable trasducidas con TS (27). Complemenampliar + las clulas T5.36 from 1,0 % a 4 meses despus (Fig. 6C) reducciones signif
icativas en la Ag-specific CD8+ T cell1 TSKd proliferativa 38,5 6 4,4 % 15 d, lu
ego de que el T. cruzi sistmica reto de capacidad (Fig. 7A) y produccin de citocin
as (IFN-g y TNF-a,

el Journal of Immunology
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en Universidad China de Hong Kong el 16 de Febrero, 2015
FIGURA 6. Las clulas B son importantes para TS–vacuna inmunidad sistmica indu

cida. Clulas B–agotadas (anti-CD20) y isotipo–control tratados ratones

BALB/c fueron vacunados con nuestro ADN heterlogo TS, adeno-TS de rgimen de vacuna
cin (TS inmune sistmica ratones). Los ratones fueron tratados con anti-CD20 o iso
tipo control Ab cada 2 –3 wk para la duracin de los estudios y de agotamient
o de las clulas B por citometra de flujo y T. cruzi IgG srica especfica–
+ + (datos no mostrados). Los porcentajes de los linfocitos CD8 TSKd1 las clulas
T en la sangre se midieron mediante citometra de flujo en (A) 1, (B) 2, y (C) 4
meses despus de la ltima vacunacin TS. TS inmune e ingenuo ratones BALB/c fueron de
safiados con virulentT sistmica. cruzi BFT s. c. 4.5 mo queel ltimo TS vacunacin (n
=
+ 7 – 10/grupo). (D + ) quince das despus reto sistmico, los porcentajes de l
os linfocitos CD8 TSKd las clulas T1 se mide en la sangre mediante citometra de fl
ujo (n = 7/ grupo). * P, 0,05 de Mann Whitney U–prueba. (E) fue medido med
iante da 17 tras reto sistmico (n = 7/grupo). * P, 0,05 , ** p, 0,01 de Mann Whit
ney U–prueba. (F) La supervivencia se evalu mediante da 60 tras reto sistmico
(n = 5 – 7/grupo). ** P, 0.01 , *** p, 0.005 mediante el log-rank test. Ba
rras de Error representan SEM.
Fig. 7B, 7C) se detectaron en los ratones que carecen las clulas B en comparacin c
on estrategias que las clulas B juegan un papel fundamental tanto para la induccin
de
+ + WT ratones. Para evaluar CD8 + TSKd1 en vivo expansin ptima, el equivalente fu
ncional de los linfocitos T CD8 las respuestas y la prevencin de
+ + + + + nmero de CD8 Tu1.2 + TSKd1 -las clulas T especficas de clulas B KO CD8 T c
ell agotamiento.
inmunolgico y ratones WT Tc (sobre la base de tetrmero tincin) fueron + suero inmun
e transferencia pasiva evita T CD8 + en clulas ingenuas Tu1.1 ratones BALB/c con
clulas B normales agotamiento y aumenta la supervivencia despus del desafo nmero y f
uncin (Fig. 7D–H). Ratones receptores fueron
impugnadas sistmica + + + + 1 d ms tarde. Tu1.2 CD8 clulas T de trabajos anteriores
por otros, ha demostrado que las transferencias pasivas suero clulas B ratones K
O Tc inmune normalmente no han conseguido ampliar Tc in vivo de ratones inmunes
al ingenuo puede transferir sistmicos
en comparacin con proteccin + WT infeccin-inmune clulas T CD8 (Fig. 7E), 11 – 1
5). Nosotros planteamos la hiptesis de que la falta de T. cruzi–Abs especfic
o en lo que resulta en una reduccin de la capacidad para controlar parasitemia (F
ig. 7F). B de clula inmune ratones KO Tc dio como resultado una mayor parasitism
o tejido estos resultados identificar defectos funcionales intrnseca de T. cruzi&
#150;
+ y la muerte debido a la incapacidad de funcionalmente agotado CD8
+ CD8 especficos clulas T generadas en la ausencia de las clulas B. Las clulas T a c
ontrolar adecuadamente infeccin por T. cruzi. Para poner a prueba este hy+ a examinar ms detenidamente el mecanismo responsable de clulas T CD8 pothesis pa
siva, se realiza transferencias suero. Antes y despus de clulas B disfuncin–ra
tones deficientes, es decir, evaluar expresin sistmica T. cruzi reto, clulas B KO T
c inmune
+ + los ratones recibieron los receptores inhibidores de la PD-1 y Lag-3 el tetrm
ero CD8 WT Tc suero inmune, ingenuo suero, o cartilla. Como se muestra en la Fig
. 8A, las clulas T. Se registraron aumentos significativos en los porcentajes T.
cruzi–Ab especfica las respuestas estaban presentes en clulas B
+ + ratones KO (Fig. 7G) y nmeros absolutos (Fig. 7H) de los linfocitos CD8 TSKd1
PD- despus de la transferencia de WT Tc suero inmune. El suero inmune pro+ + 1 Lag-3 las clulas T en el bazo de clulas B ratones KO Tc inmune clulas B sejos
ratones KO de aumento de la morbilidad y la mortalidad en comparacin con los rat
ones WT Tc inmune. Tambin encontramos importantes (Fig. 8B y 8C). Esta proteccin
se ha asociado con un incremento
+ + + + + + aumentos de CD8 TSKd1 Lag-3 las clulas T en la sangre de TS- TSKd1-CD
8 clulas T (Fig. 8D) y TS total de clulas B vacunados y empobrecido–ratones 1
5 d despus T. cruzi sistmicas especficas y TSKd1-especfica funcin de las clulas T (Fig
. 8E). Por ltimo, desafo suplementario (Fig. 4). En general, estos resultados de
monio- Tc suero inmune transferencia result en la disminucin de la expresin de

T. cruzi 1814 Abs EVITAR–ESPECFICOS CD8 T CELL AGOTAMIENTO

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FIGURA 7. Evitar las clulas B + T. cruzi–CD8 T cell agotamiento. Por lo meno
s 1 mes despus de la ltima mucosa subletales infeccin por T. cruzi, Tc inmune celul
ar e ingenuo B KO y WT ratones BALB/c fueron desafiados con virulenta sistmica T.
cruzi BFT. Treinta das despus, los ratones fueron sacrificados y T. cruzi–
+ CD8 especficos las respuestas de las clulas T se midieron. (UN–C) esplenoci
tos se tieron con CFSE y cocultured con ningn control A20 o A20-TS vehculos blindad
os de 6 d.
Algunas de estas clulas se utilizan para evaluar CD8+ + + + + proliferacin TSKd1 m
ediante citometra de flujo (A). CD8 + estimulacin TSKd1 se calcularon los ndices p
or el nmero
2 del live CD19 CD3+ 2 CD4 + CD8 + baja TSKd1 CFSE clulas presentes despus de un20
-TS estimulacin dividido por el nmero de control A20 incubacin. (B y c) PMA/onomyci
n, GolgiStop y GolgiPlug se agregaron a las celdas restantes y volver a colocar
en la cultura por 3 h antes de superficie y citoquinas intracelulares. Los porce
ntajes (B) y nmeros absolutos ( + + + + + C) de los CD8 citoquinas TSKd1 2 las clu
las T se calcula tomando el nmero de live CD19 + 2 CD3 CD4 CD8+ + bajo + TSKd1 CF
SE citoquinas despus de la estimulacin de las clulas A20-TS dividido por el nmero pr
esente tras incubacin A20 control. En (A) – (C), * p, 0,05 de Mann Whitney U
+–prueba. Los datos son representativos de dos experimentos independientes
con resultados similares. (D) las clulas T CD8 fueron purificados por el bazo de
clulas B Tc inmune KO y WT ratones BALB/c 87 d despus T. cruzi sistmicas + (BFT) r
eto, y luego TSKd nmeros equivalentes de las clulas T1 fueron trasladados i.v.
+ En ingenuo Tu1.1 ratones BALB/c. Un da ms tarde, estos ratones fueron desafiados
con virulenta sistmica T. cruzi BFT s. c. (E) tres y 10 d despus
+ + reto sistmico, ratones receptores fueron sangrados para evaluar el porcentaje
de CD8 Tu1.2 las clulas T en la sangre mediante citometra de flujo (n = 4 –7
ratones/grupo). ** P, 0,01 de Mann Whitney U–prueba. (F) diez y 14 d desp
us reto sistmico, parasitemia se evalu en ratones receptores (n = 5 –7 ratones
/grupo). * P, 0,05 por alumno
+ t de student. (G y H) esplenocitos se tie directamente el da 30 tras BFT reto y
para evaluar los porcentajes (G) y en el nmero absoluto (H) de los linfocitos CD8
+ + + + + TSKd1 Lag PD-1 las clulas T-3 mediante citometra de flujo (n = 4 ratones
/grupo). Los datos son representativos de dos experimentos independientes con r
esultados similares. Barras de Error representan SEM.
Agotamiento de los linfocitos T + marcadores PD-1 y Lag-3 en TSKd1-CD8 eran impo
rtantes para T. cruzi proteccin mucosa. Resultados anteriores las clulas T (Fig. 8
F). En general, estos resultados demuestran thatta. cruzi– sugiere que las
clulas B se juegan un papel crtico en la mucosa T. cruzi
Abs + especficos podra evitar la muerte y CD8 T cell agotamiento. proteccin (17, 25
). De hecho, las clulas B se ha demostrado que juegan un papel muy importante en
la mucosa mucosa proteccin contra varios
patgenos como debate helmintos (28, 29) y el rotavirus (30, 31).
En este estudio, que evala la importancia de las clulas B en la mucosa y aunque no
nos ha sido posible identificar un papel fundamental para las clulas B en la muc
osa proteccin sistmica T. cruzi. En primer lugar debemos examinar si las Clulas B T.
cruzi proteccin, esto no excluye la posibilidad de que clulas B

El Journal of Immunology
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FIGURA 8. Tc suero inmune puede rescatar CD8-proteccin sistmica mediada por clulas
B en ratones KO. JhD B de clula inmune ratones KO Tc se generaron como se describ
e en la Fig. 1 Y Materiales y mtodos. Comenzando por lo menos 1 mes despus de la lt
ima infeccin de la mucosa, los ratones fueron inyectados i.p. semanalmente con 30
0 ml de WT WT Tc ingenuo o suero inmune. (A) las transferencias pasivas suero re
constituir T. cruzi TS de los niveles de IgG especfica. Suero inmune de clulas B T
c ratones KO se impugn sistemticamente con virulenta ATN ROJO T. cruzi y la vigilan
cia de morbilidad (B) y la mortalidad (C). (B) Extremidades parlisis fue medido
en das 30 y 87 de T. cruzi reto sistmico; ver Materiales y Mtodos de sistema de pun
tuacin (n = 10 ratones/grupo). ** P = 0,0115 de Mann Whitney U–prueba; los
datos son representativos de dos experimentos independientes con resultados simi
lares. En (C), n = 5 ratones/grupo; los datos son representativos de dos experim
entos independientes con resultados similares. * P, 0,05 por test de log-rank. (
D) cinco semanas despus reto sistmico, clulas de bazo de suero de clulas B rescatado
s fueron ratones KO
+ evaluada por citometra de flujo y ELISPOT. (D) el porcentaje de CD8 + TSKd clula
s T1 mide a travs citometra de flujo. (E) de la frecuencia de IFN-g–de TS y T
SKd1-las clulas T especficas medido por ELISPOT. Segundo plano las respuestas se r
estar de los valores experimentales. (F + + ) frecuencias de PD-1 LAG-3
+ TSKd1-CD8 clulas T. Barras de Error representan SEM.
las respuestas podran proporcionar un cierto nivel de proteccin mucosa. La parasit
emia en el tiempo en comparacin con los ratones WT Tc inmune, re- nunca, tanto co
n clulas B ratones deficientes–transferencia adoptiva y asesoras en important
e morbilidad y eventualmente la muerte. Tambin hemos de+ los estudios, hemos demostrado que las clulas T CD8, pero no las clulas B, que s
on de importancia crtica da T. cruzi–clulas B especficas, no policlonal inespe
cfica de T. cruzi inmunidad mucosa. Las clulas B, son de importancia crtica para T.
cruzi proteccin sistmica siguiente, hemos analizado la importancia de las clulas B
en sistmica- HEL BCR utilizando ratones transgnicos. Disminucin de la supervivenci
a de clulas B KO
2/2 proteccin inducida por mltiples dosis bajas de las infecciones por parsitos o a
ltamente mMT ratones de T. cruzi reto sistmico ha demostrado potente vacuna regmen
es (TS ADN primer/adenovirus-TS refuerzo). anteriormente (16, 25). Adems, nuestr
os resultados son similares a clulas B infectadas–ratones deficientes verbal
mente con T. cruzi desarrollado recientemente publicado datos que demuestran que
tras difundir mayores niveles de parasitemia en comparacin con WT ratones, pero
este no infeccin por el virus (virus de la coriomeningitis linfoctica (LCMV] -t1b)
, que no resultan en un aumento de la morbilidad y la mortalidad. Estos resultad
os de mMT KO y anti-CD20 –ratones tratados no poda controlar viral que compu
tan las clulas B no son necesarios cuando Ag carga sistmica es baja replicacin, lo
que se traduce en prdida de peso y disminucin de LCMV
+ despus de una infeccin oral. En cambio, nos muestran que B clulas CD8 T funcional
idad celular (32). En general, estos resultados anteriores respuestas son absol
utamente necesarios para la proteccin sistmica despus + junto con la nueva memoria
datos sugieren que las clulas T CD8 con el ATN ROJO ms virulenta que se traduce en
una mayor aparejo sistmica en ratones que carecan–T. cruzi especfica las clulas
B son suficientes para Ag cargas. Tc inmune celular B ratones deficientes–
sobrevivi ms de control bajo los niveles de parasitismo tisular, pero eventualment
e convertirse en su ingenua cohortes sistmica despus parsito desafo virulento. agota
do tras reto sistmico debido a la exposicin prolongada a Sin embargo, el Tc inmune
celular B ratones deficientes–desarrollaron un alto nivel de Ag. Estos res
ultados son consistentes con los datos anteriores

1816 T. cruzi–Abs ESPECFICOS EVITAR T CD8

+ AGOTAMIENTO CELULAR que carga elevada Ag resultados en clulas T CD8 agotamiento
(33– + las clulas B en la prevencin de los linfocitos CD8 T cell agotamiento
. A nuestros
+ 35). La funcin de las clulas B en la prevencin de los linfocitos T CD8 agotamien
to es el conocimiento, estos resultados son los primeros en aplicarla mecnicament
e como demonio+ + muy bien demostrado al examinar el CD8 de los linfocitos T TS respuesta desp
us demuestran la importancia de las clulas B para la prevencin de T. cruzi CD8 la v
acunacin. Clulas B–desarrollados ratones deficientes frecuencias similares de
linfocitos T agotamiento.
+ De TSKd1-specific CD8 en comparacin con las clulas T WT ratones despus de unos po
cos estudios han evaluado el papel de las clulas B en el desarrollo
+ TS heterloga rgimen de vacunacin. Estos resultados confirman que de clulas T CD8 m
emoria. En la primera las respuestas a una aguda
+ + + + las clulas B no son necesarios para el cebado inicial de clulas T CD8 LCMV
Armstrong infeccin, CD8 las respuestas de las clulas T memoria en ratones. Sin em
bargo, tras reto sistmico (lo que resulta en una alta Ag no eran normales las clul
as B en los primeros puntos del tiempo (36), pero
+ carga), CD8 + TSKd1 las clulas T de clulas B TS–inmune deficiente se reduje
ron a 154 d despus de la infeccin (36, 37). En una vacunacin
+ ratones no ampliar, as como las clulas T CD8 con aparejo en WT modelo usando la
Listeria monocytogenes, las clulas B no son necesarios en
+ ratones. Este ptimo TSKd CD8 + T1 + expansin secundario de la celda la activacin
inicial y la expansin de Ag-especfica de los linfocitos T CD8 en clulas B capacidad
–deficientes, TS-ratones vacunados fue asociado respuestas (38). Sin embar
go, en la ausencia de las clulas B, una ms pro- con mayor parasitemia y la muerte.
Por lo tanto, aunque se ha encontrado T. cruzi– fase de contraccin se produ
jo una tendencia a la baja cantidad de
+ + CD8 especficos las clulas T se puede cebar en ausencia de las clulas B, que per
sisten Ag-especficas de la memoria CD8 funcionalmente deficiente, afectando grave
mente mi protector de las clulas T (38). Otro grupo Descargar de demostr que la f
alta de clulas B afectados el mantenimiento a largo plazo de
comunidad + cuando el Ag es elevada (Fig. 9). CD8 memoria de las clulas T (39).
T. cruzi estudios anteriores tambin han
+ para determinar si el defecto en la memoria de los linfocitos T CD8 sec- indic
que las clulas B podra ser importante para T. cruzi–especficas
expansin secundaria /2 Tc inmune presentes en clulas B ratones KO se debi 2 desarro
llo de las clulas T de memoria, ya que la falta de clulas B maduras (mMT a pobres
de cebado o deficiente apoyo a re-expansin, hemos estudiado los ratones) dio luga
r a un aumento de la susceptibilidad a los parsitos en+ TSKd1-memoria especfica las clulas T CD8 en clulas B KO y WT Tc inmune subsiguien
te transferencia ratones despus de inmuno apopto- y la ausencia de una slida prote
ccin inducida por las vacunas http://www.jimmunol.org/ (16, 25). Sin embargo, ni
nguno de estos estudios previos investigaron los
+ competentes ratones BALB/c (Fig. 7D–H). Memoria las clulas T CD8 papel es
pecfico de clulas T CD8 agotamiento en la ausencia de clulas B y
clulas B de ratones KO no ampliar en respuesta sistmica a nuestro presente resulta
dos confirman estas datos anteriores y alemanes- parsito reto despus de la transfe
rencia en normal que gir hosts que contienen las clulas B son muy importantes tan
to para el desarrollo
+ + + + las clulas B policlonales, demostrando un defecto intrnseco en el CD8 de C
D8 completamente funcional las respuestas de las clulas T, as como las clulas T las
respuestas generadas en ratones que carecan las clulas B. Esta falta de + prevenc
in de clulas T CD8 agotamiento.
+ Expansin produjo una significativa disminucin. A continuacin, las clulas B pueden
proporcionar ayuda para una ptima T CD8 memoria de las clulas examinadas expresin d
e la inhibidora PD-1 y Lag-3 respuestas por varios mecanismos. En primer lugar,
las clulas B pueden presentar Ag

+ por CD8 + T1 TSKd clulas despus de la vacunacin y TS T. cruzi rezones. Despus reto
sistmico de Tc y TS inmune inmune
+
y producen citoquinas. Antes de de alto nivel reto sistmico, el
+ + en Universidad China de Hong Kong el 16 de febrero
de 2015 frecuencias TSKd1 CD8 las clulas T son similares en Tc inmune
celular + B–ratones deficientes, aumentos significativos de TSKd1 CD8 clulas
B KO y WT ratones, lo que sugiere que la clula T
+ + cebado las clulas T que expresan PD-1 y Lag-3 se observaron. En general, el +
no afectado por la ausencia de clulas B. Sin embargo, los CD8 + TSKd1 falta de d
irecta ex vivo e in vivo, ampliacin de la capacidad de las clulas T inducida en la
ausencia de clulas B y debe reactivar el rayito de produccin de citoquinas, recep
tor inhibitorio mayor ex- presencia de alta carga Ag sistmica funcional in vivo d
e depresin, y una menor proteccin asociada a linfocitos T de memoria suficiente, p
roduciendo citoquinas multifuncionales reducido
+ cebado en la ausencia de las clulas B indican un importante papel para (IFN- +g
TNF-a ). Se ha informado previamente, en el sentido de que las clulas B
FIGURA 9. Modelo propuesto de T. cruzi–
+ CD8 especficos disfuncin de las clulas T en ausencia de clulas B. En WT y clulas B
JhD ratones KO, T. cruzi TSKd1+ CD8 las clulas T se genera despus de dosis baja T. cruzi la mucosa. Antes de T.
cruzi sistmica BFT reto, hay una parasitemia en la sangre de clula B ratones KO Tc
inmune, lo que sugiere la pronta
+ etapas de CD8 T disfuncin de la clula. Despus T. cruzi sistmicas BFT, multifuncion
ales TSKd1-specific
CD8 + ampliar las clulas T en grandes nmeros en WT Tc im- ci ratones de 15 d postc
hallenge. Estas clulas T con- y se mantienen en un nmero superior a 50 das tras ret
o sistmico. Esta memoria tpica respuesta de los linfocitos T en el documento WT in
feccin de ratones inmunes resultados en cifras ms altas y mejor calidad las clulas
T asociadas con limitada parsito persistencia. En clulas B KO Tc
+ inmune ratones, sin embargo, los CD8 expansin de clulas T es afectada de forma s
ignificativa. Despus de 15 das sistmica+ bio, TSKd1-especficas las clulas T CD8 son muy re- presenta en clulas B–rato
nes deficientes, asociado con el aumento niveles de parasitemia. En 50 das, la ma
yora TSKd1-specific
T CD8+ clulas parecen ser funcionalmente agotado debido a la limitada capacidad a
ntiproliferativa y capacidad de produccin de citoquinas, y expresan un aumento en
los niveles de los receptores- hibitory PD-1 y Lag-3. Este funcional
+ + + + agotamiento de los linfocitos CD8 TSKd1 las clulas T en los ratones que c
arecen las clulas B producen un aumento de parasitemia y la muerte.

El Journal of Immunology 1817

ampliar IFN-g produccin de clulas T en un contacto dependientes de la ADN-encoding
IL-15 mejora proteccin a largo plazo de una vacuna gentica contra el Trypanosoma
cruzi. PLoS Negl. Trop. Dis. 5:983. (40). Nuestros datos tambin indican que la p
roduccin de Ag- 5. Vasconcelos, J. R. , O. Brun˜a-Romero, A. F. Arau'jo, M.
R. Domnguez, Abs es otra de las funciones de las clulas B de proteccin crtica J. Ers
ching, B. C. de Alencar, A. V. A. Machado, R. T. Gazzinelli, K. R. Bortoluci,
T. cruzisystemic inmunidad. Por lo tanto, ante la ausencia oft. cruzi–especf
icos Amarante-Mendes G. P. , et al. 2012. Patgeno inducido por fenotipo pro-apoptt
icos
y alto + CD95 (Fas, por sus siglas en ingls) junto con una ptima expresin CD8 T-cel
l respuesta: IgG, aumentos de la parasitemia y los consiguientes aumentos de inv
ersin global adenoviral vacuna. PLoS Pathog. 8:1002699. Ag se carga. Adems, transf
erencia pasiva oft. cruzi inmune + 6. Rosenberg, C. S. , D. L. Martin y R. L. Ta
rleton. 2010. Las clulas T CD8

+ especficas sera conocido por reducir carga parasitaria sistmica tambin redujo CD8
inmunodominantes de trans-sialidasa eptopos contribuir al control de tripano- so
ma cruzi pero no son necesarios para el movimiento de resistencia. J. Immunol. 1
85:560 – Agotamiento de linfocitos T y la mortalidad en clulas B ratones KO
Tc inmune tras 568. virulento reto sistmico. 7. Tarleton, R. L. 1995. El papel de
las clulas T en las infecciones por Trypanosoma cruzi.
Aunque no tenemos estudio + T. cruzi–especficos las clulas T CD4, Parasitol.
Hoy (Inter. Ed.) 11:7 –9.
+ 8. Rottenberg, M. E. , M. Bakhiet, T. Olsson, K. Kristensson, T. Mak, H. Wigze
ll, no creo que las clulas T CD4 son irrelevantes para inducir proteccin y A. Orn.
1993. Susceptibilidad del diferencial de los ratones genmicas eliminado del + clu
las T CD8 +. Nosotros y otros han demostrado que los CD4 de los linfocitos T CD4
es ayudar a CD8 y a las infecciones con Trypanosoma cruzi y Trypanosoma brucei.
+ Necesarios para una eficaz clulas T CD8 memoria (10, 41) y puede infectar resca
te. Suspension. 61:5129 –5133.
+ 9. Tarleton, R. L. , M. J. Grusby, M. Postan y L. H. Glimcher. 1996. Tripano a
got las clulas T CD8 (42). Trabajo publicado recientemente demostr que soma cruzi
+ clulas T CD4 + son disfuncionales en la ausencia de las clulas B en la
infeccin en MHC-ratones deficientes: ms pruebas para el papel de tanto descargadas
de la
clase I y clase II de las clulas T en el sistema inmune resistencia y la enfermed
ad. Int.
LCMV modelo (32). Estos datos apoyan la importancia de nuestra Immunol. 8:13 &#
150;22.
10. Hoft, D. F. , A. R. Schnapp Eickhoff, C. S. y S. T. Roodman. 2000. De trabaj
o, que, a nuestro conocimiento por primera vez, lo que demuestra la participacin
de + CD4 Th1 de las clulas de inmunidad sistmica proteccin contra
principio fundamental que las respuestas de las clulas B son importantes para la
prevencin secundaria y los retos con Trypanosoma cruzi. Infectar. Suspension. 68:
197 –204.
agotamiento de las clulas T contra un importante patgeno humano. 11. Mota, I. , y
L. F. Umekita. 1989. El efecto de C3 agotamiento sobre la liquidacin de Trypanoso
ma cruzi inducida por anticuerpos IgG. Immunol. Lett. 21:223 –225. Nuestro
trabajo demuestra claramente que haba activado memoria
+ clulas T CD8 slo la mucosa puede proteger contra T. cruzi.
12. Brodskyn, C. I. , A. M. Silva, H. A. Takehara y I. Mota. 1989. Responsable d
e las subclases de IgG de inmunoaclaramiento en ratones infectados con Trypanoso
ma cruzi. http://www.jimmunol.org/
+ Immunol. Cell Biol. 67:343 –348. Sin embargo, altamente virulentas de T.
cruzi problemas sistmicos, CD8 13. Spinella, S. , P. Liegeard, y M. Hontebeyrie-J
oskowicz . 1992. Trypanosoma las clulas T no para ofrecer una proteccin ptima en la
ausencia de trypanosoma cruzi: predominio de IgG2a en la respuesta inmune humor
al en expe+ B las clulas CD8 porque las clulas T se convirti prcticamente agotado. Nos’ C
hagas enfermedad mental. Exp. Parasitol. 74:46 –56.
14. Scott, M. T. , y L. Moyes. 1982. 75Se-metionina + etiqueta Trypanosoma cruzi
mostr, adems, que HEL-especfico no puede evitar las clulas B CD8 tripomastigotes sa
nguneos: opsonizacin por infeccin crnica suero facilita matar y agotamiento de los l
infocitos T, lo que indica que el T. cruzi–especfica las clulas B/Ab- en bazo
y en el hgado. Clin. Exp. Immunol. 48:754 –757.
es necesario para su proteccin. Utilizando tanto la infeccin y inducida por la vac
una 15. Lima-Martins , M. V. , G. A. Snchez, A. U. Krettli y Z. Brener. 1985.
Anticuerpo-dependiente citotoxicidad celular contra el Trypanosoma cruzi es slo m
edi- La memoria inmune los modelos, demuestran que la ausencia de
+ por anticuerpos protectores. Parsito Immunol. 7:367 –376. Las clulas B cond
uce a clulas T CD8 agotamiento en ratones con carga elevada Ag.
En general, estos datos muestran que las clulas B son importantes por dos de
16. Kumar, S. , y R. L. Tarleton. 1998. La contribucin relativa de anticuerpo
+ en Universidad China de Hong Kong el 16 de Febrero, 2015
CD8 produccin y funcin de las clulas T de control inmunitario del Trypanosoma cruzi

.
+ Parsito Immunol. 20:207 –216. estn interrelacionados desde aspectos de Ag-e
specfica de los linfocitos T CD8 respuestas. En primer lugar, 17. Hoft, D. F. , P
. L. Farrar, K. Kratz-Owens , y D. Shaffer. 1996. Invasin gstrica Ag-especfica las
clulas B son de importancia fundamental para el ptimo desarrollo de Trypanosoma cr
uzi y la induccin de respuestas inmune de la mucosa protectora.
+ Desarrollo de multifuncional T CD8 memoria de las clulas. En segundo lugar, T.
cruzi– infectar. Suspension. 64:3800 –3810.
18. Giddings, O. K. , C. S. Eickhoff, T. J. Smith, L. A. Bryant y D. F. Hoft. 20
06, El Abs puede reducir directamente la carga parasitaria, anatmicos prevencin ru
ta de invasin y de proteccin de inmunidad mucosa Trypanosoma + CD8 T cell agotamie
nto. En conclusin, nuestros resultados demuestran cruzi infeccin conjuntival. Infe
ctar. Suspension. 74:5549 –5560.
que, aunque las clulas B no son directamente la mucosa importante para im- 19. Ho
ft, D. F. , y C. S. Eickhoff. 2005. Tipo 1 proporciona una ptima inmunidad y sistm
ica de la mucosa mucosally proteccin contra un invasor, ruta intracelular de la c
omunidad, desempean una funcin decisiva para la induccin y funcional ogen. Infectar
. Suspension. 73:4934 –4940. + Las respuestas de los linfocitos CD8 linfoci
tos T de memoria, que son absolutamente esenciales 20. Eickhoff, C. S. , L. tipo
Eckmann, y el D. F. Hoft. 2003. La interleuquina-8 y del diferencial
de la mucosa y sistmica T. cruzi inmunidad protectora. Estos produccin del xido ntri
co en las clulas epiteliales inducida por mucosally invasiva y no invasiva tripom
astigotes. Infectar. Suspension. 71:5394 –5397. estudios identifican un imp
ortante papel de las clulas B en la prevencin de los 21. Camargo, M. M. , I. C. Al
meida, M. E. Pereira, M. A. Ferguson, L. R. Travassos, + CD8 T cell agotamiento,
proporcionando nueva informacin crtica y R. T. Gazzinelli. 1997. Glucosilfosfatid
ilinositol mucina-como
diseo de vacunas. glicoprotenas de tripomastigotes iniciar la sntesis de citoquinas
proinflamatorias por parte de los macrfagos.J. Immunol. 158:5890 – 5901.
Agradecimientos 22. Williams, M. B. , J. R. Rose', L. S. Rott, M. A. Franco, H.
B. Greenberg y E. C. Carnicero. 1998. La memoria subconjunto B de clula responsab
le de la IgA secretora, gracias Robert Dunn y Biogen Idec para proporcionar el a
nti-CD20/ respuesta humoral inmunidad y proteccin al rotavirus intestinales expre
sa el
isotipo control Abs, Pablo Garside en la Universidad de Glasgow para pro- homing
receptor, un
b HEL ratones transgnicos BCR Eslick, alegra, Sherri Koehm, Erin 23. Rose'
4b7. J. Immunol. 161:4227 –4235.
, J. R. , M. B. Williams, L. S. Rott, E. C. carnicero, y H. B. Greenberg.
Touchette, Kelly O’Shea, y Stella Hoft para asistencia tcnica, Andreas 1998.
Expresin de la mucosa homing receptor a
+ 4b7 se correlaciona con la capacidad de los CD8 linfocitos T de memoria de inf
eccin por rotavirus. J. Ez-Schael y col. detectaron. 72:726 – Wieland en la
Universidad de Emory de lectura crtica de este manuscrito, y 730. los Institutos
Nacionales de la Salud tetrmero de 24 en la Universidad de Emory. Sullivan, N. L.
, C. S. Eickhoff, X. Zhang, O. K. Giddings, T. E. Lane, y
IYNVGQVSI d para proporcionar el TS /H-2K –APC tetrmero. D. F. Hoft. 2011. I
mportancia de la CCR5-CCL5 eje de Trypanosoma cruzi mucosa proteccin y activacin d
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http://www.jimmunol.org/
en Universidad China de Hong Kong el 16 de Febrero, 2015