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UNIVERSIDADE ESTADUAL DO OESTE DO PARAN

CENTRO DE ENGENHARIAS E CINCIAS EXATAS


CURSO DE ENGENHARIA QUMICA

DENISE APARECIDA ZEMPULSKI


JSSI CAUANA HECK
MAYARA CEREJA PASTORIZA
VANESSA LIZRIA ALFLEN

MEIOS DE CULTURA

TOLEDO
2008
DENISE APARECIDA ZEMPULSKI
JSSI CAUANA HECK
MAYARA CEREJA PASTORIZA
VANESSA LIZERIA ALFLEN

MEIOS DE CULTURA
Relatrio

apresentado

como

requisito

parcial de avaliao da disciplina de


Laboratrio de Engenharia Qumica I, do
curso

de

Engenharia

Qumica,

UNIOESTE Campus Toledo.


Professor: Srgio Luiz de Lucena.

da

TOLEDO
2008
SUMRIO
LISTA DE FIGURAS...................................................................................................iii
LISTA DE TABELAS..................................................................................................iv
RESUMO.....................................................................................................................v
1 NUTRIO E METABOLISMO BACTERIANOS1
1.1 FONTES DE ENERGIA1
1.2 FONTES DE MATERIAL PLSTICO2
1.2.1 Fontes de carbono2
1.2.2 Fontes de nitrognio2
1.2.3 ons Inorgnicos Essenciais3
1.2.4 Fatores de crescimento4
1.3 GUA4
1.4 OXIGNIO ATMOSFRICO4
2 MEIOS DE CULTURA5
2.1 COMPOSIO DOS MEIOS DE CULTURA5
2.2 ESTADOS FSICOS DOS MEIOS DE CULTURA8
2.2.1 Aplicaes de acordo com os estados fsicos 9
2.2.1.1 Meios slidos9
2.2.1.1.1 Gelose Simples (Columbia)9
2.2.1.1.2 Gelose Sangue9
2.2.1.1.3 Gelose Chocolate9
2.2.1.1.4 Gelose Tripcase Soja9
2.2.1.1.5 Isolamento seletivo e diferenciao de Salmonella e Shigella
2.2.1.1.6 Gelose Sabouraud10
2.2.1.1.7 Portagerm10
2.2.1.2 Meios Lquidos11
2.2.1.2.1 Meio de Todd-Hewitt11
2.2.1.2.2 Meio de Tioglicolato11
2.2.1.2.3 Meio de Carne11

2.2.1.2.4 Meio de Tetrationato (meio de Muller-Kauffmann)11


2.2.1.2.5 gua de Peptona Alcalina11
2.3 TIPOS DE MEIOS12
2.3.1 Meios para o cultivo de bactrias12
2.3.2 Meios para o cultivo de Fungos16
2.3.3 Meios de Cultura de Protozorios17
2.3.4 Meios para Cultivo de Algas18
2.4 MEIOS SELETIVOS E DIFERENCIAIS19
2.4.1 Meios Com Finalidades Especiais Meios Especiais19
2.4.1.1 Meios para Anaerbios19
2.4.1.2 Meios Seletivos
2.4.1.3 Meios Diferenciais
2.4.1.4 Meios Seletivos/Diferenciais
2.4.1.5 Meios de Enriquecimento
2.5 CONSERVAO DE MEIOS DE CULTURA
2.5.1 Tcnicas de Assepsia
2.5.2 Manuteno e Conservao de microrganismos viveis no laboratrio
2.5.2.1 Manuteno em Meio Slido
2.5.2.2 Congelao ou Criogenia
2.5.2.3 Recobrimento Com Camada de leo Mineral Estril
2.5.2.4 Liofilizao
3 QUESTES............................................................................................................
CONCLUSO............................................................................................................ 12
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS..........................................................................13

LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Bactria Thiobacillus2
Figura 2 (a) Bactrias Azotobacter, (b) Rhizobium3
Figura 3 - No meio de MacConkey em: (a) Escherichia coli, (b) Pseudomonas
aeruginosa6
Figura 4 Sistema de microcpsulas API 20E7
Figura 5 - Escherichia coli.13
Figura 6 - Lactobacillus acidophilus.14
Figura 7 - Treponema pallidum.15
Figura 8 - Fungos na Laranja16
Figura 9 - Fungos na carne17
Figura 10 - Tetrahymena pyriformis17
Figura 13 - Ansa de inoculao.
Figura 14 Tubos de ensaio rolhados contendo uma determinada cultura em meio
slido.
Figura 15 Tubos de ensaio rolhados.
Figura 16 Incubadora (espcie de geladeira) para conservao de
microrganismos em meios de cultura.
Figura 17- Frasco com substrato areno-orgnico, contendo microesclerdios de
Macrophomina phaseolina, e pronto para ser armazenado em temperatura de
geladeira (5 2C).
Figura 18 Botijes criognicos para armazenar culturas a baixas temperaturas.
Figura 19 Equipamento de liofilizao.
Figura 20 Modelo de ampolas utilizdas na liofilizao.

LISTA DE TABELAS
Tabela 1 - Meio quimicamente definido para uma bactria quimioautotrfica.12
Tabela 2 - Meio quimicamente definido para uma bactria heterotrfica.14
Tabela 3 - Composio do caldo nutriente, um meio complexo para o crescimento de
uma bactria heterotrfica.15

RESUMO

1 NUTRIO E METABOLISMO BACTERIANOS


Todos os seres vivos possuem as mesmas necessidades nutritivas que,
para renovarem seu protoplasma, que o conjunto de estruturas vivas presentes
nas clulas; e exercerem suas atividades, exigem fontes de energia e fontes de
material plstico (TRABULSI e ALTERTHUM, 2005).
H apenas dois tipos nutritivos para os seres superiores: os vegetais que
so fotossintticos, ou seja, obtm energia da luz solar, e autotrficos, cuja nutrio
exclusiva de substncias inorgnicas; e os animais que so quimiotrficos, obtm
energia custa de reaes qumicas, e heterotrficos, necessitam de fontes
orgnicas de carbono. Entre os microorganismos h uma variedade de tipos
intermedirios (BORZANI, 2001).
1.1 FONTES DE ENERGIA
Nas algas o principal pigmento fotossinttico a clorofila, assim como nas
plantas, durante o processo, a gua usada como doadora de eltrons com
desprendimento de oxignio. Este processo muito importante e aproximadamente
50% do oxignio presente na atmosfera provm dele. Nas bactrias o pigmento
fotossinttico a bacterioclorofila e no h produo de oxignio, pois a gua no
utilizada como fonte de eltrons. As bactrias que utilizam compostos inorgnicos,
como o H2S, so chamadas litotrficas; as que exigem doadores orgnicos de
eltrons so chamadas de organotrficas (TRABULSI e ALTERTHUM, 2005).
As litotrficas oxidam compostos inorgnicos e as organotrficas oxidam
compostos orgnicos. No entanto, a maioria das bactrias quimiotrfica, as quais
obtm energia custa das reaes qumicas onde substratos adequados so
oxidados. Neste grupo so encontradas bactrias de grande importncia, como as
do gnero Thiobacillus (Figura 1) que conseguem oxidar enxofre, produzindo cido
sulfrico. Sendo ento, utilizadas na lixiviao de metais e minrios pobres, como o
cobre e o urnio, pois o processo qumico usual de extrao no seria muito
econmico (TRABULSI e ALTERTHUM, 2005).

Figura 1 Bactria Thiobacillus


1.2 FONTES DE MATERIAL PLSTICO
Para que a matria viva seja renovada, os elementos mais importantes,
quantitativamente, so o carbono, o hidrognio, o oxignio, o nitrognio, o enxofre e
o fsforo.
1.2.1 Fontes de carbono
Para sintetizar todos os compostos orgnicos de que necessitam as
autotrficas utilizam como nica fonte de carbono o CO 2 ou o on bicarbonato. A
maioria das bactrias so heterotrficas e as fontes de carbono mais comuns so os
carboidratos, em particular D-glicose, aminocidos, cidos monocarboxlicos,
lipdios, lcoois e polmeros como amido e celulose. O fato de que qualquer
composto orgnico natural e muitos sintticos poderem ser usados por algum
microorganismo, de grande importncia, pois permite o emprego destes
microorganismos numa srie de transformaes para o homem (TRABULSI e
ALTERTHUM, 2005).
1.2.2 Fontes de nitrognio
Com relao s necessidades de nitrognio, algumas bactrias retiram o
nitrognio diretamente da atmosfera e o convertem a nitrognio orgnico. Essa
fixao de nitrognio exercida por bactrias dos gneros Azotobacter e
Rhizobium (Figura 2), que executam esta atividade em simbiose com plantas

leguminosas, contribuindo de maneira significativa na fertilidade e produtividade do


solo. A grande maioria das bactrias utiliza compostos inorgnicos de nitrognio, em
especial sais de amnio. Algumas exigem fontes orgnicas de nitrognio, como uma
variedade de aminocidos. Em geral o crescimento das bactrias heterotrficas
favorecido com a adio de aminocidos ou hidrolisados de protenas (TRABULSI e
ALTERTHUM, 2005).

(a)

(b)

Figura 2 (a) Bactrias Azotobacter, (b) Rhizobium


1.2.3 ons Inorgnicos Essenciais
As bactrias exigem uma srie de elementos sob a forma de compostos
inorgnicos, alm do carbono e nitrognio. Alguns, os macronutrientes, so
necessrios em quantidades considerveis, como o fsforo, sob a forma de fosfatos,
que importante no metabolismo energtico e na sntese de cidos nuclicos: o
enxofre, necessrio por fazer parte de aminocidos como cistina e cistena e para a
sntese de vitaminas como biotina e tiamina; o potssio, um ativador de enzimas e
regulador de presso osmtica; o magnsio, um ativador de enzimas extracelulares
e fator de grande importncia na sntese de protenas e unio das fraes
ribossmicas; o ferro, necessrio para sntese dos citocromos e de certos
pigmentos. Tm-se tambm os micronutrientes que, pela dificuldade de estudo, eles
no so to conhecidos. Em alguns casos especficos, h a necessidade de cobre,
cobalto, zinco, mangans, milibidenio, sdio, entre outros (BORZANI, 2001).

1.2.4 Fatores de crescimento


Os

compostos

orgnicos

indispensveis

para

um

determinado

microorganismo, mas ele no consegue sintetizar, so chamados de fatores de


crescimento. Esses fatores devem estar no meio para que o microorganismo possa
crescer. Estes fatores podem ser as vitaminas, principalmente as do complexo B, ou
aminocidos, nucleotdeos e cidos graxos (BORZANI, 2001).
Um aspecto importante que quando um microrganismo exige um fator
especfico, seu crescimento ser limitado quantidade deste fator presente no meio,
ou seja, seu crescimento ser proporcional ao teor de composto limitante. Assim,
permite que um mtodo de dosagem de certos compostos seja elaborada, como as
vitaminas e aminocidos, baseado na medida do crescimento microbiano. Este
fundamento chamado de dosagem microbiolgica (BORZANI, 2001).
1.3 GUA
A gua no um nutriente, mas indispensvel para o crescimento
microbiano. As bactrias tm sua nutrio pela passagem de substncias em
soluo atravs da membrana citoplasmtica e a gua exerce a funo de regular a
presso osmtica e presso trmica, por ter elevado calor especifico. Grande parte
das bactrias quando no esporulada, morre rapidamente por dessecao
(TRABULSI e ALTERTHUM, 2005).
1.4 OXIGNIO ATMOSFRICO
O oxignio tambm no nutriente, mas receptor final de hidrognio nos
processos de respirao aerbica. As bactrias aerbias exigem pequena
quantidade de oxignio livre e no toleram as presses normais de oxignio
presente na atmosfera, so as microaerfilas. As anaerbias estritas no toleram a
presena de oxignio livre e morrem rapidamente nessas condies; as anaerbias
no-estritas no utilizam o oxignio atmosfrico. E por fim as facultativas que podem
crescer tanto na presena quanto na ausncia do oxignio atmosfrico (TRABULSI e
ALTERTHUM, 2005).

2 MEIOS DE CULTURA
Em laboratrio, com condies artificiais, o crescimento de bactrias
conseguido atravs da semeadura das mesmas em meios de cultura, cuja
composio deve atender as necessidades nutritivas dos microorganismos. Pela
grande variedade de tipos nutritivos, no h um meio de cultura universal. Muitas
vezes, o que exigido por uma determinada bactria inibe totalmente o crescimento
das outras; e o que acontece com a matria orgnica necessria ao crescimento
de heterotrficas, que na maioria das vezes inibe o crescimento das autotrficas.
Ento para compor um meio adequado, se faz necessrio conhecer a fisiologia das
bactrias em questo (TRABULSI e ALTERTHUM, 2005).
2.3 COMPOSIO DOS MEIOS DE CULTURA
Os meios de cultura so divididos basicamente em dois grandes grupos: os
meios sintticos e os meios complexos.
Os meios sintticos so aqueles cuja composio qualitativa e
quantitativa. Tem-se como exemplo o seguinte meio: NH 4Cl, 1,0g; K2HPO4, 1,0g;
MgSO4.7H2O, 0,2g; FeSO4.7H2O, 0,01g; CaCl2, 0,02g; MnCl2.4H2O, 0,002g;
NaMoO4.2H2O, 0,001g; gua em quantidade suficiente para 1,0 L.. Este meio
tambm est de acordo com os princpios citados anteriormente, no que se refere
fonte de nitrognio e ons inorgnicos, no entanto no contm uma fonte de carbono
em de energia, mas isto acontece porque o meio foi planejado para a cultura de
fotolitotrficas, que s contem material inorgnico, a fonte de carbono o CO 2 que
vem do ar e a fonte de energia a luz solar. Para o desenvolvimento das bactrias
nesse meio elas devem ser incubadas em presena de luz e em condies de
aerobiose (TRABULSI e ALTERTHUM, 2005).
Se fosse adicionado 0,5g de glicose a esse meio, ele ainda seria
considerado sinttico, mas contendo uma fonte de orgnica de energia e carbono
(glicose), permitindo o crescimento de bactrias como a Escherichia coli (Figura 3),
habitantes normal do intestino de mamferos. Essas bactrias tm excepcionais
capacidades de sntese, pois a partir da glicose e dos sais minerais do meio
consegue fabricar todos os componentes do protoplasma. Se forem acrescentados
outros tipos de aminocidos, poder haver o crescimento de um numero cada vez

maior de microorganismos, e o meio ainda ser considerado sinttico (TRABULSI e


ALTERTHUM, 2005).
Para o cultivo de microorganismos mais exigentes, pode-se enriquecer o
meio com substncias capazes de fornecer uma grande variedade de aminocidos e
vitaminas. A partir desse momento o meio passou a ser complexo (TRABULSI e
ALTERTHUM, 2005).
Os meios complexos so quimicamente indefinidos, pois so preparados a
partir de produtos naturais, mas eles tm a funo de simular e at mesmo melhorar
o ambiente natural dos microorganismos em questo. Os exemplos de produtos
naturais adicionados ao meio so extratos de carne, peptonas, extrato de levedura,
sangue, soro, leite, extrato de solo e fluido de rmen de bovino. Estes substratos so
substncias qumicas complexas que contm acares, aminocidos, vitaminas e
sais e sua composio exata indefinida. Os produtos naturais que so adicionados
estimulam o crescimento de uma variedade grande de heterotrficos. Como
exemplo, os extratos de leveduras contem vitaminas do complexo B que permitem o
crescimento bacteriano (PELCZAR et al, 1996).
Diversos meios diferentes esto disponveis comercialmente, como
exemplo, a Figura 4, desde os que permitem de muitos microorganismos at
aqueles que permitem o crescimento de apenas um tipo de microorganismo. Alguns
at possuem indicadores qumicos para detectar mudanas de pH devido ao
metabolismo da substratos (PELCZAR et al, 1996).

(a)

(b)

Figura 3 - No meio de MacConkey em: (a) Escherichia coli, (b) Pseudomonas


aeruginosa
Na Figura 3 em (a), no meio MacConkey, a Escherichia coli forma colnias
vermelhas, esta colorao vermelha devida reao de um corante vermelho

neutro com o cido formado a partir da fermentao da glicose pela E. coli. A


Pseudomonas aeruginosa, no forma colnias coloridas(PELCZAR et al, 1996).
Alguns fabricantes produziram microcpsulas de plstico, para uma rpida
identificao dos microorganismos, cada uma delas contento um meio de cultura
desidratado diferente, como mostra a Figura 4 (PELCZAR et al, 1996).

Figura 4 Sistema de microcpsulas API 20E


Este sistema da Figura 4 serve para a identificao das bactrias Gramnegativas, sendo uma verso em miniatura dos procedimentos bioqumicos
convencionais. um sistema de microtubos pronto para uso destinado realizao
de testes bioqumicos padres nas colnias isoladas de bactrias retiradas do meio
de uma placa (PELCZAR et al, 1996). Os microtubos contm os substratos das
reaes bioqumicas na sua forma desidratada, sendo estes hidratados pela adio
da suspenso bacteriana salina, para criar uma atmosfera de anaerobiose, que
fundamental para a realizao de reaes fermentativas. As galerias so ento
incubadas de 18 a 24 horas e de 35 a 37C. A leitura dos testes bioqumicos da
galeria feita pela observao da modificao da cor, aps os vrios sistemas
indicadores terem sido afetados pelos metablicos bacterianos ou pelos reagentes
adicionados. A identificao de bactrias desconhecidas ento feita recorrendo a
tabelas ou sistemas automatizados, fornecidos pela casa comercial [1].
Existem tambm instrumentos que permitem a semeadura de mltiplas
amostras de uma suspenso bacteriana nos meios de uma nica etapa, em vez de
semear uma a uma. Outros sistemas eficientes oferecem uma placa de Petri dividida
em vrios compartimentos, e cada um contm um meio solidificado diferente, que
pode ser semeado com uma gota de suspenso microbiana. Com um programa

computacional pode-se comparar os resultados obtidos nestes meios com os


resultados obtidos de um microorganismo conhecido. Os meios podem ser
preparados a partir de matrias-primas ou ps desidratados. (PELCZAR et al, 1996).
2.4 ESTADOS FSICOS DOS MEIOS DE CULTURA
Os meios de cultura podem ser constitudos simplesmente por solues de
nutrientes. Geralmente os microrganismos tm maior facilidade de iniciar o seu
crescimento nesse tipo de meio, principalmente se o seu nmero de incio
pequeno. Quando, todavia, existe mais de um tipo de microrganismo no material
semeado, o crescimento final ser constitudo de uma mistura destes, o que impede
que se tirem concluses a respeito da natureza e da atividade de cada um. Para que
as caractersticas de um microrganismo possam ser reconhecidas ou para que sua
atividade possa ser devidamente aproveitada, ele deve-se encontrar em culturapura, isto , no deve ser misturado a outros. (BORZANI et al, 2001)
Porm, quando existe mais de uma espcie de microrganismo se
desenvolvendo no meio liquido no final teremos uma mistura deles. Para que
possamos trabalhar com os mesmos separadamente necessrio fazer o
isolamento, o que normalmente conseguido, semeando-os num meio slido,
normalmente na superfcie. Assim, se a mistura de germes for convenientemente
diluda e espalhada na superfcie do meio slido cada microorganismo estar
separado de seu vizinho e se multiplicar formando colnias de indivduos da
mesma espcie e assim essas colnias podem ser isoladas e cultivadas em
separado, o que permite o estudo de cada espcie individualmente. (TRABULSI e
ALTERTHUM, 2005)
Os meios slidos so preparados adicionando um agente solidificador s
solues com nutrientes. O agente mais utilizado o Agar que um polissacardeo
extrado de algas que funde a cerca de 100C e se solidifica a cerca de 40C. a
adio de 1,5 a 2% de Agar suficiente para a solidificao dos meios (BORZANI et
al, 2001).
Como o Agar um material orgnico, ele poder inibir o crescimento de
alguns microrganismos autotrficos. Neste caso podemos utilizar slica gel como
agente solidificante. Outra substncia que pode ser utilizada para solidificar meios
a gelatina, no entanto tem o inconveniente de se fundir a temperatura relativamente

baixa e assim s pode ser utilizada com microrganismos que se desenvolvem em


temperaturas relativamente baixas (<20C). (BORZANI, 2001)
2.2.1 Aplicaes de acordo com os estados fsicos
2.2.1.1 Meios slidos
2.2.1.1.1 Gelose Simples (Columbia)
Utilizada no isolamento de bactrias comuns. Contm uma mistura de
peptonas particularmente adaptada cultura dos microrganismos mais freqentes
em amostras humanas. Pode tornar-se enriquecida pela adio de sangue (de
carneiro ou de cavalo) permitindo o crescimento de bactrias mais exigentes.
Pode tornar-se seletiva pela adio de misturas antibiticas.
2.2.1.1.2 Gelose Sangue
Utilizada no isolamento de bactrias mais exigentes. uma gelose simples
adicionada com sangue de carneiro ou cavalo. Permite o crescimento de bactrias
mais exigentes e permite a leitura da hemlise.
2.2.1.1.3 Gelose Chocolate
Utilizada no isolamento de Haemophilus e Neisseria. uma gelose-sangue
aquecida para provocar a hemlise dos glbulos vermelhos que assim libertam
fatores intracelulares fundamentais para o crescimento das bactrias do gnero.
Chama-se chocolate porque a placa fica com uma cor acastanhada igual do
chocolate.
2.2.1.1.4 Gelose Tripcase Soja
Utilizada no isolamento de microrganismos no exigentes. Meio de isolamento
que se destina os microrganismos que no apresentam exigncias especficas para
o seu desenvolvimento.

Pode ser utilizada sozinha ou adicionada com sangue (neste caso permitindo
o crescimento de bactrias mais exigentes e a leitura da hemlise).
2.2.1.1.5 Isolamento seletivo e diferenciao de Salmonella e Shigella
um meio de isolamento seletivo e de diferenciao destinado pesquisa de
Salmonella e Shigella a partir de amostras de fezes. Permite evidenciar colnias que
fermentam a lactose e que reduzem o tiosulfato por produo de H 2S.
Os microrganismos que fermentam a lactose originam colnias rosa, os que
no fermentam originam colnias incolores. Os microrganismos que produzem H 2S
reduzem o tiosulfato e originam colnias com centro negro. A presena de colnias
incolores ou fracamente coloridas com ou sem centro negro representa uma forte
presuno de Salmonella ou Shigella.
2.2.1.1.6 Gelose Sabouraud
Utilizada no isolamento de fungos. Permite o isolamento de todo o tipo de
fungos (leveduras e bolores).
2.2.1.1.7 Portagerm
Meio de transporte que mantm viabilidade de aerbios e anaerbios. Meio
slido para transporte de amostras. O agar do meio inibe a difuso de oxignio
presente quando se insere a amostra. Agentes redutores presentes no meio
combinam-se com o oxignio livre mantendo assim a atmosfera de anaerobiose.
Tem um indicador (resazurina) que indica a presena ou ausncia de
oxignio:
Meio de cor azul = presena de oxignio (bactrias anaerbias j inviveis)
Meio incolor = ausncia de oxignio.

2.2.1.2 Meios Lquidos


2.2.1.2.2 Meio de Todd-Hewitt
Usado no enriquecimento de Streptococcus.Caldo glicosado e tamponado
que permite o crescimento abundante de bactrias do gnero Streptococcus. Pode
ser enriquecido com sangue.
2.2.1.2.2 Meio de Tioglicolato
Enriquecimento de aerbios, anaerbios e microaerfilos. um caldo de
enriquecimento onde se desenvolvem as bactrias aerbias, anaerbias e
microaerfilas.
utilizado para semear amostras biolgicas cujos microrganismos possam
estar presentes em baixas concentraes. suprfluo incubar os tubos em
anaerobiose. Tambm se utiliza para controle de esterilidade.
2.2.1.2.3 Meio de Carne
Utilizado no enriquecimento de aerbios e anaerbios. Caldo peptonado
contendo carne de corao cozida. Permite o crescimento de aerbios e anaerbios.
2.2.1.2.4 Meio de Tetrationato (meio de Muller-Kauffmann)
Caldo de enriquecimento de Salmonella. Caldo contendo tetrationato, blis e
verde brilhante que inibem o crescimento da maioria das bactrias entricas.
Destina-se ao enriquecimento de Salmonella a partir das fezes.
A sua composio favorece o crescimento da Salmonella no meio de uma
flora polimicrobiana.
2.2.1.2.5 gua de Peptona Alcalina
Enriquecimento de Vibrio cholerae. Utiliza-se na sementeira de fezes quando
se suspeita de clera.

um caldo composto por gua peptonada contendo 10% cloreto de sdio e


com pH hiperalcalino (8.8).
Permite o crescimento de vibrios (e tambm plesiomonas e aeromonas)
inibindo o seu pH a maioria das outras bactrias entricas.
2.3 TIPOS DE MEIOS
2.3.1 Meios para o cultivo de bactrias
Para o cultivo de bactrias especficas, o meio escolhido em geral imita
o habitat natural das mesmas. As bactrias multiplicam-se em meios de cultura
apropriados, desde que sejam respeitadas as condies de temperatura, pH,
umidade e composio. Por exemplo, se uma bactria prefere nutrientes
encontrados no sangue, ento se pode adicionar sangue ao meio, ou se outra
prefere glicose, pode-se adicionar acar ao meio. As bactrias sendo autotrficas
ou heterotrficas, o meio pode refletir suas caractersticas. As bactrias fototrficas
requerem luz para produzir energia e dixido de carbono, gua e alguns ons
inorgnicos simples. A Tabela 1 mostra a composio de um meio quimicamente
definido para bactrias quimioautotrficas (PELCZAR et al, 1996).
Tabela 1 - Meio quimicamente definido para uma bactria quimioautotrfica.
Ingredientes
(NH4)2SO4
NaHCO3
Na2HPO4
KH2PO4
MgSO4.7H2O
FeCl3.6H2O
CaCl2.2H2O
gua

Funo
Fonte de nitrognio bem como de energia
Fonte de carbono na forma de CO2 em soluo aquosa
Tampo e ons essenciais
ons essenciais
ons essenciais
ons essenciais
ons essenciais
Solvente

Quantidade
0,5 g
0,5 g
13,5 g
0,7 g
0,1 g
0,0014 g
0,18 g
1000 ml

Os compostos orgnicos exigidos pelas bactrias heterotrficas variam em


tipo e nmero, de um grupo de bactrias para outro. Alguns, tais como a Escherichia
coli (Figura 5), podem crescer muito bem em meio contendo um nico composto
orgnico, tal como um acar, mais os ons inorgnicos (PELCZAR et al, 1996).

Figura 5 - Escherichia coli.


A frmula de um meio quimicamente definido para bactrias heterotrficas
est descrita na Tabela 2. Por outro lado, certas bactrias heterotrficas necessitam
de cerca de 20 aminocidos e vrias vitaminas para crescer. Os microrganismos
com tais exigncias nutricionais so descritos como fastidiosos. Comumente, os
meios complexos (meios de composio indefinida) so utilizados para cultivar estas
bactrias, uma vez que produzir o meio quimicamente definido (meio sinttico),
apropriado demanda tempo e trabalho manual. Os meios complexos contm uma
grande variedade de substncias orgnicas preparadas a partir de materiais naturais
e, portanto, no so quimicamente definidos. A Tabela 3 mostra a composio de um
meio complexo tpico utilizado no cultivo de bactrias heterotrficas (PELCZAR et al,
1996).

Tabela 2 - Meio quimicamente definido para uma bactria heterotrfica.


Ingredientes
Glicose
NH4H2PO4
KH2PO4

Funo
Fonte de energia e de carbono
Fonte de nitrognio, tampo e ons essenciais
Tampo e ons essenciais

Quantidade
1g
5g
1g

NaCl
MgSO4.7H2O
gua

ons essenciais
ons essenciais
Solvente

5g
0,2 g
1000 ml

Os ingredientes da Tabela 2 representam os constituintes mnimos em um


meio para uma bactria no fastidiosa tal como o tipo selvagem de Escherichia coli.
Para uma espcie fastidiosa, como a Lactobacillus acidophilus (bactria que se
estabelece no intestino humano e protege contra a entrada e proliferao de
organismos ruins que podem causar doena), substncias adicionais tais como
aminocidos e vitaminas tm sido acrescentadas ao meio (PELCZAR et al, 1996).

Figura 6 - Lactobacillus acidophilus.

Tabela 3 - Composio do caldo nutriente, um meio complexo para o crescimento de


uma bactria heterotrfica.
Ingredientes
Extrato de carne

Funo
Substncias hidrossolveis de tecido animal:
carboidratos, compostos de nitrognio
orgnico, vitaminas e sais

Quantidade
3g

Peptona
Cloreto de Sdio
gua

Nitrognio orgnico, algumas vitaminas


ons e requerimentos osmticos
Solvente

5g
8g
1000 ml

As bactrias mais fastidiosas podem exigir a adio de sangue, de soro


animal

ou

de

outras

substancias

ricas

nutricionalmente,

ao

meio

de

cultivo(PELCZAR et al, 1996).


Existem algumas bactrias que no podem ser cultivadas in vitro em meios
laboratoriais, no importando qual meio utilizado. Um exemplo o Treponema
pallidum, a bactria que causa a sfilis. Embora esta bactria tenha sido cultivada em
coelhos e em culturas de clulas de coelhos, ela no tem sido cultivada em meios
laboratoriais na ausncia de clulas hospedeiras (PELCZAR et al, 1996).

Figura 7 - Treponema pallidum.

2.3.2 Meios para o cultivo de Fungos


Assim como as bactrias, os fungos absorvem nutrientes, em vez de ingerilos. A absoro auxiliada por enzimas secretadas no meio, que quebram as
molculas orgnicas em pores menores que podem ser transportadas mais
facilmente para dentro da clula. Todos os fungos so heterotrficos. Em um
laboratrio, muitos fungos podem crescer em uma mistura simples contendo acar,

uma fonte de nitrognio inorgnico ou orgnico e alguns minerais. Alguns


necessitam de vitaminas. Outros podem crescer somente em um meio complexo
que contenha uma grande variedade de compostos orgnicos providos pela peptona
e extratos de carne (PELCZAR, et al, 1996).
Em geral, os meios para cultivo de fungos tm uma concentrao maior de
acar (4%) em pH menor (3,8 a 5,6) que o meio para cultivo bacteriano (geralmente
pH, 6,5 a 7,5). Isto se verifica em meios naturais, particularmente quando se observa
que as bactrias freqentemente contaminam a carne e o leite, enquanto os fungos
crescem em frutas ctricas (Figuras 8 e 9), produtos de padaria, gelias e compotas
de frutas. Em um meio complexo para o cultivo de fungos saprfitas, aqueles que
vivem em matria orgnica morta, nota-se alta concentrao de glicose (4%) e o pH
relativamente baixo (5,6). Esta combinao favorece o crescimento do fungo, mas
inibe o crescimento da maioria das bactrias. Alguns fungos parasitas, que vivem em
ou sobre um hospedeiro, tm sido cultivados in vitro. (PELCZAR, et al, 1996).

Figura 8 - Fungos na Laranja

Figura 9 - Fungos na carne

2.3.3 Meios de Cultura de Protozorios


A maioria dos protozorios requer um pH que pode variar de 6 a 8 para um
crescimento timo. Os protozorios so heterotrficos aerbicos com exigncias
nutricionais complexas. Muitos no tem sido cultivadas in vitro. Aqueles que podem
ser cultivadas in vitro exigem uma variedade de aminocidos e vitaminas mais
carboidratos. Por exemplo, Tetrahymena pyriformis (Figura 10) pode ser cultivada
em um meio contendo 10 aminocidos, 7 vitaminas, os compostos guanina uracila e
alguns sais inorgnicos. Algumas amebas podem crescer em um caldo peptonado
relativamente simples; outros protozorios requerem suplementos tais como
emulses de tecidos cerebrais, soro fetal de vitelo ou infuso de fgado. Alguns
protozorios podem crescer em um caldo nutriente ou gua solidificada com gar
contendo clulas bacterianas que so ingeridas como alimento (PECZAR et al,
1996).

Figura 10 - Tetrahymena pyriformis


2.3.4 Meios para Cultivo de Algas
As algas utilizam luz para produzir energia e requerem somente dixido de
carbono, gua e vrios ons inorgnicos para crescer. Assim, elas so
fotoautotrficas. Entretanto, certas algas, tais como algumas espcies de Euglena,
so capazes de crescer heterotroficamente no escuro utilizando uma pequena
variedade de substratos. Algumas algas programam-se mais facilmente in vitro do
que outras, especialmente se um meio complexo utilizado. Os meios complexos
para algas normalmente contm suplementos tais como extrato de soja, uma rica

fonte de nutrientes. Ao contrrio para dos meios para bactrias e fungos, existem
poucos meios prontos e padronizados, comercialmente disponveis para algas. Os
meios podem ser preparados a partir de seus ingredientes individuais. Ao preparar
um meio definido para algas marinhas, est poder se tornar uma tarefa tediosa se
todos os sais existentes na gua do mar tiverem de ser adicionados individualmente.
(PELCZAR et al, 1996)
2.4 MEIOS SELETIVOS E DIFERENCIAIS
2.4.1 Meios Com Finalidades Especiais Meios Especiais
So

utilizados

quando

se

quer

isolar,

identificar

ou

contar

os

microrganismos, eles fornecem informaes especficas sobre os mesmos. Nestes


meios encontram-se os meios para microorganismos anaerbios, meios que
possibilitam o crescimento de organismos especficos e meios que so utilizados
para ajudar na classificao de microorganismos baseada nas suas caractersticas
de crescimento (PELCZAR et al, 1996).
2.4.1.1 Meios para Anaerbios
Microorganismos

anaerbios

so

organismos

que

toleram

baixas

concentraes ou nenhum oxignio livre e no o utilizam para obteno de energia.


Os primeiros cultivos de bactrias anaerbias foram em camadas profundas
de meios solidificados, assim podiam crescer, pois a camada de gar da superfcie
exclui o oxignio atmosfrico. Mais tarde, desenvolveram-se tcnicas refinadas,
como a adio de um agente redutor ao meio que removeria o oxignio, produzindo
um meio reduzido. Um exemplo de agente redutor o tioglicolato de sdio, que
combina quimicamente com o oxignio dissolvido em um meio e o torna no
disponvel para os microorganismos (PELCZAR et al, 1996).
Anaerbios estritos so os que no toleram nenhuma concentrao de
oxignio. Exemplo: arqueobactrias produtoras de metano. Anaerbios estritos
podem ser cultivados quando tomadas as seguintes precaues especiais ao
preparar os meios (PELCZAR et al, 1996):
- ferver o meio para que a maior parte do oxignio dissolvido seja retirado;
- adicionar gs nitrognio, livre de oxignio, nos tubos contendo o meio;

- adicionar um agente redutor, normalmente cistena, que remove os ltimos


traos de oxignio;
- esterilizao do meio em autoclave, na completa ausncia de oxignio.
Para autoclavar, recomendvel a utilizao de vlvula de selagem no topo do
frasco para prevenir a entrada de oxignio (PELCZAR et al, 1996).
2.4.1.2 Meios Seletivos
Permitem o crescimento de um tipo de microrganismo ou suprimem o
crescimento de outros microrganismos. Assim, possvel selecionar um certo
microorganismo. Exemplos: gar sabouraud para fungos; gar verde brilhante para
Salmonella; o corante verde brilhante adicionado ao meio inibe as bactrias Gram +
comuns do trato intestinal; o gar feniletanol inibe o crescimento de Gram-negativas,
mais no das Gram-positivas. Recentemente os antibiticos vem sendo adicionados
aos meios, tornando-os seletivos para os microrganismos resistentes estes
agentes antimicrobianos(PELCZAR et al, 1996).
2.4.1.3 Meios Diferenciais
Servem para diferenciar os vrios tipos de microrganismos em uma placa
com gar. Por exemplo: se uma amostra de secreo da garganta semeada numa
placa de gar sangue, algumas bactrias podem produzir enzimas que dissolvem as
clulas vermelhas do sangue, enquanto outras no. Assim, pode-se diferenciar as
bactrias hemolticas (produzem enzimas que lisam as clulas vermelhas formando
uma zona clara ao redor da colnia) das no hemolticas (que no dissolvem as
clulas vermelhas, e portanto no formam este halo ao redor das colnias)
(PELCZAR et al, 1996).
2.4.1.4 Meios Seletivos/Diferenciais
Agem tanto como seletivos como diferenciais, so particularmente teis em
microbiologia de sade pblica, como na determinao da qualidade da gua ou na
identificao de causas de infeco alimentar (PELCZAR et al, 1996).

Um destes meios o gar MacConkey que contm sais biliares e corante


cristal violeta, os quais inibem o crescimento das bactrias Gram-positivas e
permitem o desenvolvimento de bactrias Gram-negativas. Ainda h a presena da
lactose, que distingue as bactrias Gram-negativas que produzem cido a partir
deste acar as quais passam a ter uma colorao vermelha, das bactrias Gramnegativas que no produzem cido (PELCZAR et al, 1996).
2.4.1.5 Meios de Enriquecimento
Utilizados

para

selecionar

microrganismo

que

est

presente

em

determinado local, em pequenas quantidades com relao populao. O meio


favorece o crescimento da espcie desejada, mas no o crescimento das outras
espcies presentes em uma populao mista. Ao contrrio do meio seletivo, nenhum
agente inibido utilizado para prevenir o crescimento de microrganismos
indesejveis (PELCZAR et al, 1996).
Um exemplo so as bactrias que oxidam o fenol - que podem ser isoladas
de amostras do solo, utilizando um meio de enriquecimento, constitudo de sais de
amnia, e fenol como nica fonte de carbono e energia - assim somente os
microrganismos capazes de oxidar o fenol estaro presente em grande nmero
depois de vrios cultivos seletivos (PELCZAR et al, 1996).

2.5 CONSERVAO DE MEIOS DE CULTURA


Os meios de cultura so utilizados com a finalidade de cultivar e manter
microrganismos viveis no laboratrio, sob a forma de culturas puras (LIMA et al,
2001).
Os meios de cultura devem ter na sua composio, os nutrientes
indispensveis ao crescimento do organismo em questo, sob forma assimilvel e
em concentrao no inibitria do crescimento. Alm disso, aps a sua preparao,
cada meio de cultura deve ser submetido esterilizao durante seu manuseio, e a
mtodos eficazes de estocagem, por forma a evitar qualquer organismo vivo
contaminante e manter ento, a cultura pura (TRABULSI e ALTERTHUM, 2005).

2.5.1 Tcnicas de Assepsia


Para a preveno de contaminaes durante a manipulao de culturas puras
recorre-se a tcnicas de assepsia, que so um conjunto de medidas simples e
importantes, feitas no laboratrio, que permitem manter um ser vivo ou um meio
inerte, isento de organismos contaminantes (LIMA et al, 2001).
As tcnicas de assepsia envolvem os procedimentos responsveis pela
esterilizao de instrumentos a serem utilizados e os procedimentos responsveis
pela manuteno da condio de esterilidade, ou seja, pelo impedimento dos
materiais com objetos ou superfcies no estreis como os dedos, a superfcie da
bancada, etc. Dessa forma, frascos esterilizados, vazios ou no, devem ser
mantidos sempre fechados, sendo abertos pelo menor tempo necessrio para a sua
utilizao (LIMA et al, 2001).
Um recipiente que contenha uma dada cultura deve ser aberto perto da
chama do bico de Bunsen, de forma a impedir uma contaminao devido entrada
de ar exterior contaminado. A transferncia de uma poro da cultura contida num
tubo ou balo para outro recipiente (inoculao) realizada normalmente com uma
ansa (instrumento laboratorial utilizado em microbiologia para a inoculao de meios
de cultura de microorganismos, que consiste de um arame, geralmente de platina ou
nquel-cromo, enrolado de modo a ter numa extremidade um crculo, estando a outra
extremidade ligada a uma haste) previamente esterilizada pela passagem pela
chama do bico de Bunsen (e posteriormente arrefecido) ou atravs de uma
micropipeta com pontas de plstico previamente esterilizadas, por exemplo, em
autoclave (LIMA et al, 2001).

Figura 13 - Ansa de inoculao.

Os passos que possibilitam a manuteno de condies de assepsia durante


a inoculao de um meio de cultura lquido, so descritos a seguir:
- Passar a ansa pela chama do bico de Bunsen at a extremidade ficar
incandescente; deixar arrefecer ao ar, mantendo a ansa sempre perto da chama;

- Destapar a placa de Petri que contem a cultura a usar como inculo, perto
da chama;
- Remover uma poro da cultura com a ansa arrefecida;

- Destapar o recipiente contendo o meio de cultura lquido a inocular e passar


o gargalo pela chama;

- Transferir a cultura para o meio de cultura e passar o gargalo do balo


novamente pela chama;

- Esterilizar a ansa, passando-a novamente pela chama at ficar


incandescente;

- Colocar a ansa esterilizada em um suporte (LIMA et al, 2001).


2.5.2 Manuteno e Conservao de microrganismos viveis no laboratrio
Vrias metodologias permitem a manuteno e a conservao de culturas
viveis no laboratrio durante perodos de tempo mais ou menos longos, conforme a
natureza do organismo em questo, para estudo ou uso futuro. Todos esses
processos envolvem um trabalho intenso e constante, principalmente quando o

nmero de organismos na coleo grande. Estas metodologias so nomeadas a


seguir (TRABULSI e ALTERTHUM, 2005).
2.5.2.1 Manuteno em Meio Slido
A tcnica mais comum de conservao de culturas consiste em semear os
microrganismos em meio slido distribudos em tubos e, periodicamente, transferilos para novo meio, pois estes vo perdendo a eficcia de conservao ao longo do
tempo. O tempo decorrido de uma transferncia para outro depender da resistncia
do microrganismo (TRABULSI e ALTERTHUM, 2005).
Em geral, a cultura semeada com o auxlio de uma ansa em meio agarizado
(meio contendo gar) apropriado, contido em tubos de ensaio rolhados e, em
seguida, incubada em condies timas de crescimento para o microrganismo em
causa. Os tubos so depois guardados a 4 C durante semanas ou meses (LIMA et
al, 2001).

Figura 14 Tubos de ensaio rolhados contendo uma determinada cultura em meio


slido.

Figura 15 Tubos de ensaio rolhados.


Nesta metodologia de conservao, conveniente que o metabolismo
microbiano seja reduzido tanto quanto possvel, pois, nessas condies, ele
permanecer vivel por tempo mais prolongado (LIMA et al, 2001).
2.5.2.2 Congelao ou Criogenia
Uma das tcnicas mais simples de conservao de microrganismos consiste
em se conservar as culturas temperatura de geladeira; h germes que
permanecem viveis durante meses (TRABULSI e ALTERTHUM, 2005).

Figura 16 Incubadora (espcie de geladeira) para conservao de


microrganismos em meios de cultura.

Figura 17- Frasco com substrato areno-orgnico, contendo microesclerdios de


Macrophomina phaseolina, e pronto para ser armazenado em temperatura de
geladeira (5 2C).
A maioria dos microrganismos necessita de baixssimas temperaturas para se
garantir sua conservao, logo, so preparadas suspenses de uma cultura pura do
microrganismo em causa, em meio estril, e armazenadas em arcas congeladoras
especiais, tambm chamadas de botijes criognicos (que permitem uma
temperatura igual ou inferior a -70C, no caso do nitrognio lquido, -196C)
(TRABULSI e ALTERTHUM, 2005).
Muitos microrganismos podem ser mantidos viveis durante anos, se
congelados temperatura de -70 C ou a temperaturas inferiores.

Figura 18 Botijes criognicos para armazenar culturas a baixas temperaturas.


Azoto lquido (nitrognio lquido), ou ocasionalmente hlio lquido, alm de
glicerol, retido em um botijo criognico (dewar). Tubos de plstico contendo
material a ser preservado so resfriados por imerso no lquido ou so mantidos na
fase de gs ou vapor, resultante da ebulio do lquido (TRABULSI e ALTERTHUM,
2005).
O tamanho do dewar no somente determina quantas amostras podem ser
acomodadas, como tambm o tipo de material a partir do qual ele ser construdo.
Dewars de laboratrio menores so fabricados a partir de alumnio, enquanto que
vasilhames ou refrigeradores maiores so geralmente feitos de ao inoxidvel. Em
ambos os casos, a estrutura do dewar muito similar de uma garrafa trmica
(www.scielo.br).

Um recipiente interno envolto com fita isolante, que utilizada para evitar a
perda condutvel. Para tal, a fita isolante de papel alumnio nunca deve entrar em
contato com outra parte da fita, que tambm de alumnio. Este contato poderia
causar perda condutvel ou escapamento de congelamento. Ao invs disso, o papel
alumnio entra em contato apenas com papel (www.scielo.br).
Os nicos pontos de contato entre o recipiente interno e o recipiente externo
so o pescoo e um pino pequeno na parte inferior. O pino, que geralmente
construdo de fibra de vidro, oco e evita que o recipiente interno balance dentro da
pele externa. O pescoo ento o maior ponto de contato entre as duas camadas.
Tambm construdo de fibra de vidro, o pescoo sustenta todo o peso do nitrognio
lquido, amostras e os organizadores de amostras. o calcanhar de Aquiles de
todos os botijes criognicos. Quanto maior o pescoo, maior a perda condutvel
(www.scielo.br).
O espao entre os recipientes interno e externo evacuado para menos de
10 mTorr. Mas a quantia exata que est abaixo de 10 mTorr varia entre os diferentes
fabricantes e determina o desempenho do dewar. Este desempenho refletido no
tempo de reteno esttico do recipiente ou no tempo que leva para um tanque
cheio esvaziar com a tampa no lugar. O desempenho do vcuo determinado pelo
tempo em que um fabricante deseja deixar o recipiente conectado a uma bomba de
vcuo. O bombeamento de dois dias normal para recipientes de laboratrio
(www.scielo.br).
Recipientes criognicos tendem a romper-se tanto quanto garrafas trmicas.
Apesar da disponibilidade dos acessrios com rodas, os recipientes duram mais
quando permanecem no lugar. A acelerao do nitrognio lquido e amostras por
movimento do dewar criam um torque no pescoo frgil, que eventualmente permite
a passagem de gases atmosfricos ou nitrognio lquido (se o dewar estiver muito
cheio) no espao entre os recipientes interno e externo. Quando o vcuo afetado,
o desempenho diminui rapidamente e as amostras instveis colocam-se em risco.
Esta possibilidade a razo para a popularidade de monitores de nvel que medem
o nvel do nitrognio lquido no interior do dewar sem a necessidade de remover a
tampa (www.scielo.br).
Sem considerar se as amostras so mantidas em uma fase lquida ou gasosa,
o objetivo manter os agentes bioqumicos ativos ou as clulas dos microrganismos

viveis. Recentemente, h certo enfoque na cincia relacionada como o modo em


que o congelamento afeta a viabilidade ou a estabilidade (www.scielo.br).
2.5.2.3 Recobrimento Com Camada de leo Mineral Estril
Outra tcnica consiste em se recobrir a cultura com uma camada de leo
mineral

estril,

reduzindo

dessa

forma

suprimento

de

oxignio

e,

consequentemente, o metabolismo microbiano, fazendo com que este continue


vivel por tempo mais prolongado (LIMA et al, 2001).
2.5.2.4 Liofilizao
Um problema importante na conservao de microrganismos decorre do fato
de que, com o passar do tempo, muitos microrganismos podem sofrer mutaes e,
com

isto, terem

suas caractersticas alteradas.

Para

se

contornar esse

inconveniente, recorre-se ao processo de liofilizao, o qual exige um equipamento


especial (LIMA et al, 2001).

Figura 19 Equipamento de liofilizao.


As culturas de microrganismos podem ser conservadas temperatura
ambiente no laboratrio durante anos, aps o seu tratamento por liofilizao. Este
processo consiste no rpido congelamento em ampolas, da suspenso de
organismos em um meio adequado (leite ou albumina, por exemplo) a temperaturas
muito baixas (tipicamente, 30C), seguida da sua sujeio a presso muito

reduzida (por exemplo, 0,005 atmosferas), o que permite a sublimao da gua


(passagem do estado slido ao estado gasoso) e assim a desidratao dos
microrganismos. Aps isso, as ampolas so fechadas hermeticamente. A aplicao
do vcuo elevado na liofilizao faz com que o gelo sublime muito mais rapidamente
(TRABULSI e ALTERTHUM, 2005).

Figura 20 Modelo de ampolas utilizdas na liofilizao.


Com a sublimao da gua, as propriedades nutritivas dos germes no so
destrudas, pois as membranas celulares se mantm intactas, as quais seriam
destrudas caso ocorresse evaporao. O ndice de gua extremamente reduzido
resultante, inibe a ao dos microorganismos e das enzimas que normalmente
estragam ou degradam a substncia (TRABULSI e ALTERTHUM, 2005).

www.scielo.br

Questes:
1) Qual a necessidade do estudo dos meios de cultura?

R- Na maior parte das vezes, o estudo da morfologia, disposio relativa e a


interpretao das propriedades de colorao so insuficientes para a identificao
microrganismo. Ocorre-se ento cultura, para se conseguir um elevado nmero de
microorganismos, para estudar as caractersticas culturais deste, como a
capacidade de crescer em meio seletivo e o aspecto das colnias, para se efetuar
seu isolamento, para a obteno de produtos a partir de determinado microrganismo
de interesse e para quantificar o nmero destes por unidade de volume de produto
patolgico.
2) cite um exemplo em que se faz importncia a solidificao de um meio de
cultura.
R- algumas vezes na microbiologia, de primordial importncia o conhecimento de
determinadas caractersticas e atividades de um determinado microrganismo. Mas
para que isso acontece, este deve estar em cultura-pura, isto , no deve ser
misturado a outros. Porm, quando existe mais de uma espcie de microrganismo
se desenvolvendo no meio liquido no final teremos uma mistura deles. Para que
possamos trabalhar com os mesmos separadamente necessrio fazer o
isolamento, o que normalmente conseguido, semeando-os num meio slido,
normalmente na superfcie. Assim, se a mistura de germes for convenientemente
diluda e espalhada na superfcie do meio slido cada microorganismo estar
separado de seu vizinho e se multiplicar formando colnias de indivduos da
mesma espcie e assim essas colnias podem ser isoladas e cultivadas em
separado, o que permite o estudo de cada espcie individualmente.

3) Quando existe a necessidade da solidificao do meio de cultura, pode-se


sempre utilizar como agente solidificante o Agar?
R- nem sempre o gar a melhor opo. A escolha do melhor agente
solidificante depender de qual tipo de microrganismo em que se est
trabalhando. O gar um polissacardeo extrado de algas, rico em substncias
orgnicas, podendo assim, inibir o crescimento de alguns microrganismos
autotrficos. Neste caso, o mais aconselhvel seria a utilizao de slica gel
como agente solidificante. Outra substncia que pode ser utilizada para solidificar

meios a gelatina, no entanto tem o inconveniente de se fundir a temperatura


relativamente baixa e assim s pode ser utilizada com microrganismos que se
desenvolvem em temperaturas relativamente baixas.

AQUARONE, E.; BORZANI, W.; LIMA, U. A.; SCHMIDELL, W. Biotecnologia:


Conceitos. Vol 1. 1 ed, So Paulo: Edgard Blcher Ltda, 2001.

TRABULSI, L.R.; ALTERTHUM, F. Microbiologia. 4 ed. So Paulo:


Atheneu, 2005.
PELCZAR JR, M.J.; CHAN, E.C.S.; KRIEG, N.R. Microbiologia: Conceitos
e Aplicaes. Vol 1. 2 ed, So Paulo: Makron Books, 1996.

[1] INSTITUTO SUPERIOR DE CIENCIAS DA SADE EGAS MONIZ


http://www.egasmoniz.edu.pt/ficheiros/alunos/anos_anteriores/microbiologia/pratica/
CAPITULO08.pdf

PELCZAR JR, M.J.; CHAN, E.C.S.; KRIEG, N.R. Microbiologia: Conceitos e


Aplicaes. Vol 1. 2 ed, So Paulo: Makron Books, 1996.
Disponvel em:
www.fcf.usp.br/Ensino/Graduacao/Disciplinas/Exclusivo/Inserir/Anexos/LinkAnexos/in
troducaoapratica.pdf. Acesso em: 04/08/08.

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