Guí

UNIVERSIDAD DE TALCA
Instituto de Ciencias Biolgicas
Tecnologa Mdica
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!!!!!!!!!!!ESTRUCTURA!Y!FISIOLOGA!CELULAR!I!
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!!!!!!!GUA!DE!TRABAJOS!PRCTICOS!Y!TALLERES!
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Profesores:!
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Ctedra:!! Orlando!Alva!Glvez!
Prcticos:!!Alejandro!Vega!Santander!
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!!!!!!!!:!!Olga!Contreras!Prez!
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2015!
REGLAMENTO DEL LABORATORIO

LA BIOSEGURIDAD es el conjunto de medidas, normas y procedimientos destinados a minimizar
y/o controlar los diferentes tipos de riesgos presentes no slo en el laboratorio.
INGRESO AL LABORATORIO
1. Los alumnos debern esperar fuera del laboratorio hasta que llegue el profesor o ayudante. Una
vez dentro debern solicitar permiso para salir de este.
2. Una vez que el profesor ingrese al laboratorio se cierran las puertas y no se permitir el acceso de
alumnos.
MEDIDAS DE SEGURIDAD
1. Los alumnos deben usar delantal blanco, limpio y planchado para entrar al laboratorio.
2. Al laboratorio se ingresar con el delantal puesto, sin mochila. Est permitido el ingreso
solamente del material necesario para desarrollar la actividad (cuadernos, lpices, calculadora y
libros si corresponde).
3. Los alumnos no pueden comer, beber, masticar chicle, fumar, ni llevarse objetos a la boca dentro
del laboratorio.
4. No est permitido el uso de telfonos celulares, notebooks, MP3, tablets etc. .
5. Los alumnos no pueden colocar sobre los mesones materiales que no sean necesarios para el
desarrollo de la actividad prctica (ropa, bolsos de mano, mochilas, bufandas, etc).
6. Los alumnos que tengan pelo largo deben mantenerlo recogido para evitar accidentes.
7. Los alumnos deben cooperar en el mantenimiento de la limpieza de su mesn de trabajo, material
y equipos de laboratorio. Debern limpiar el rea de trabajo ANTES de empezar y al TERMINAR
la actividad prctica.
8. Los alumnos sern responsables de que llaves de agua y gas queden debidamente cerradas al
finalizar cada trabajo.
9. El material sucio debe colocarse en recipientes identificados los que estarn en una zona
designada para la recoleccin de los mismos.
10. La basura debe colocarse en los basureros y no ser guardada en cajones.
11. No deben tirarse residuos o desperdicios a los lavamanos.
12. En caso de accidente, con material de vidrio, reactivos qumicos o cualquier contaminacin
accidental se debe notificar de inmediato al profesor.
13. Los alumnos deben lavarse las manos con agua y jabn al finalizar cada prctica (y/o antes de
salir del laboratorio).
14. Los alumnos no pueden permanecer dentro del laboratorio despus que el profesor haya salido al
terminar la actividad prctica.
EXIGENCIAS PARA LAS ACTIVIADES PRCTICAS
1.- La asistencia a estas actividades es obligatoria en un 100%. No obstante, si el estudiante no asiste a

una actividad, justificadamente, deber recuperarla en una fecha que el profesor encargado
establezca.
2.- No se aceptar atrasos a las actividades de prctico bajo ninguna circunstancia.
3.- En cada trabajo prctico el alumno debe traer delantal blanco y los materiales que le ha indicado su
profesor encargado.
4.- Para cada actividad prctica el alumno(a) debe tener consigo este Cuadernillo de guas y debe
completar las preguntas, hacer esquemas y realizar los trabajos aqu indicados. El profesor puede pedir
este cuadernillo para revisarlo y evaluarlo si lo estima conveniente
5.- La forma y valoracin de las evaluaciones para estas actividades ser comunicada al inicio de
stas, por el profesor encargado
6.- En todas las actividades de laboratorio el alumno deber mantener un adecuado comportamiento,
que prevenga y evite situaciones de riesgo innecesarias, tanto para l, como para el resto de la clase y
los instrumentos y la sala donde se encuentre. El alumno debe tener muy claro que NO DEBE
MOVER NI TOCAR NINGN INSTRUMENTO, HERRAMIENTA O APARATO que se
encuentre ubicado en el laboratorio. Primero debe preguntar al profesor o un ayudante, si puede
hacerlo y demostrar que sabe manipularlo en forma correcta.
7.- El alumno(a) NO DEBE MOVER NI TOMAR NINGN MATERIAL O REACTIVO, sin
haber recibido previamente las instrucciones del profesor encargado.
8.- El profesor a cargo de estas actividades podr, EN CASO DE CONDUCTA INADECUADA,
ordenar al alumno que abandone la sala, considerndose ello como inasistencia a esa actividad
prctica.
9.- El alumno deber emplear la debida diligencia y cuidado en el uso y manejo de los instrumentos y
materiales de trabajo.
10.- El estudiante debe dejar en orden el mesn de trabajo y debe eliminar desechos y suciedades en
los contenedores indicados en cada caso.
REGLAMENTO INTERNO DE LABORATORIO:

Asistencia: La asistencia a los prcticos ser absolutamente obligatoria.
Horario: Los prcticos se realizarn los das Martes en el Laboratorio de Biologa Experimental.
Pruebas de entrada: Sern realizadas durante los primeros 10 minutos del prctico.
Entrega de informes: Los informes debern ser entregados al inicio del prctico siguiente.
Consultas: Oficina Profesor Alejandro Vega Santander.
INFORMES DE TRABAJOS PRACTICOS
El informe deber cumplir con los siguientes requisitos: Escrito en formato texto justificado,
espacio sencillo, letra arial o times n 12. Ttulos y subttulos en negrita.
CONTENIDO DEL INFORME
Una gua de confeccin de informes estar disponible en Educandus. El contenido mnimo de
estos ser:
- INTRODUCCION: Exponer brevemente en qu consiste el fundamento terico del mtodo a
utilizar (antecedentes tericos) y tambin mencionar el resultado esperado. El o los problemas, los
objetivos de trabajo e hiptesis. Mximo 2 planas.
- MATERIALES Y METODOS: Mencionar los materiales, mtodos y equipos utilizados. Se
responde a las preguntas dnde?, cundo?, con qu? y cmo?. Mximo 2 planas.
- RESULTADOS: Presentar los protocolos empleados, resultados obtenidos en tablas grficos o
esquemas con una descripcin de los mismos. Mximo 3 planas
- DISCUSION y CONCLUSIN: Discusin breve de los mismos, esto implica una interpretacin
de sus resultados a la luz de los resultados tericos o resultados esperados. En el caso de obtener
resultados negativos, stos debern ser justificados. Conclusin final. Mximo 2 planas
- BIBLIOGRAFIA: Listado en orden alfabtico de textos o fuentes de informacin utilizados para
documentar su trabajo.
HORARIOS
Talleres:
Lunes Bloque 6
(14:20 15:20) Sala: 811
Laboratorios: Martes Bloques 6-7 (14:20 16:30) Laboratorios de Biologa
CALENDARIO ACTIVIDADES
Fecha
Tema
Lun. 16 de Marzo
Prueba de Diagnstico.
Mar. 17 de Marzo
Libre.
Lun. 23 de Marzo
Libre
Mar. 24 de Marzo
Libre
Lun. 30 de Marzo
Trabajo Autnomo 1: Clasificacin de los seres vivos.
Mar. 31 de Marzo
Trabajo Autnomo 2: Bioelementos.
Lun. 06 de Abril
CONTROL 1
Mar. 07 de Abril
Lab 1: Instrucciones generales de uso de laboratorio. Uso del

microscopio ptico.
Lun. 13 de Abril
Sorteo de temas de seminario. Instrucciones.
Mar. 14 de Abril
Lab. 2: Reconocimiento Bioelementos, Carbohidratos y Lpidos.
Lun. 20 de Abril
Taller 1: Macromolculas.
Mar. 21 de Abril
Lab. 3: Reconocimiento de protenas.
Lun. 27 de Abril
Taller 2: Membrana y citoesqueleto.
Mar. 28 de Abril
Lab. 4: Observacin microscpica de clulas procariotas y eucariotas
Lun. 04 de Mayo
Taller 3: Organelos de membrana.
Mar. 05 de Mayo
Lab. 5: Transporte de membrana
Lun. 11 de Mayo
Control 2
Mar. 12 de Mayo
Lab. 6:. Observacin y funcin de mitocondrias y peroxisomas
Lun. 18 de Mayo
Taller 4: Energtica celular.
Mar. 19 de Mayo
Taller 5: Instrumentalizacin y absorciometra.
Lun. 25 de Mayo
Taller 6: Enzimas.
Mar. 26 de Mayo
Lab. 7: Aplicacin prctica de la Ley de Lambert-Beer.
Lun. 01 de Junio
Taller 7: Metabolismo carbohidratos.
Mar. 02 de Junio
Lab. 8: Determinacin actividad enzimtica de la Amilasa salival.
Lun. 08 de Junio
Control 3.
Mar. 09 de Junio
Lab. 9: Determinacin actividad enzimtica de la Invertasa de levadura.
Lun. 15 de Junio
Taller 8 Respiracin celular.
Mar. 16 de Junio
Revisin de Informes.
Lun. 22 de Junio
Seminarios de investigacin.
Mar. 23 de Junio
Lun. 29 de Junio
Mar. 30 Junio
Lun. 06 de Julio
Lun. 13 de Julio
LABORATORIOS!
Pag.!
Lab 1: Instrucciones generales de uso de laboratorio. Uso del microscopio ptico.!
!!!1!
Lab. 2: Reconocimiento Bioelementos, Carbohidratos y Lpidos.!
!!!9!
Lab. 3: Reconocimiento de protenas!
16!
Lab. 4: Observacin microscpica de clulas procariotas y eucariotas!
21!
Lab. 5: Transporte de membrana!
24!
Lab. 6:. Observacin y funcin de mitocondrias y peroxisomas!
27!
Lab. 7: Aplicacin prctica de la Ley de Lambert-Beer.!
30!
Lab. 8: Determinacin actividad enzimtica de la Amilasa salival I).
32!
Lab. 9: Determinacin actividad enzimtica de la Invertasa de levadura.
35!
TALLERES
Trabajo Autnomo 1: Clasificacin de los seres vivos.
39!
Trabajo Autnomo 2: Bioelementos.
40!
Taller 1: Macromolculas.
43!
Taller 2: Membrana y citoesqueleto
45!
Taller 3: Organelos de membrana
48!
Taller 4: Energtica celular
50!
Taller 5: Instrumentalizacin y absorciometra.
51!
Taller 6: Enzimas.
60!
Taller 7: Metabolismo carbohidratos.
62!
Taller 8: Respiracin celular.
64!
Tecnologa Mdica
Estructura y Fisiologa Celular I
Prctico N 1
USO DEL MICROSCOPIO PTICO
I. INTRODUCCION.
La biologa es una ciencia netamente experimental, la que ha avanzado gracias a la
implementacin tecnolgica, el xito de esta disciplina depende de varios factores tales como la
observacin, el empleo de instrumentos y tcnicas especiales; para lo cual es necesario apoyar las
explicaciones tericas con prcticas de laboratorio; en donde cada persona puede realizar sus
propias observaciones e investigaciones y de esta forma llegar a lograr las competencias
relacionadas con el mtodo cientfico; adquirir una forma de pensar con la lgica y razonamiento
del mtodo en s, ello le permitir en estos primeros pasos lograr un desarrollo bsico para la accin
de investigar en cualquier disciplina relacionada con las ciencias. En segundo lugar y no menos
importante es la adquisicin de conocimiento bsico para construir aspectos bsicos y
fundamentales en el ejercicio de aprendizaje de las disciplinas que sustentan la prctica mdica y
por ende el logro de perfiles que orientan al profesional.
De la Observacin en Biologa
Los seres vivos presentan variedad en tamao, forma, estructura, funcin, etc. Con
relacin al tamao ste vara, el ojo humano logra identificar objetos hasta de 200 micras, por lo
que se hace necesario recurrir a instrumentos pticos que faciliten la observacin de objetos de
menor tamao, este instrumento es el microscopio, que consiste en conjuntos de lentes que
agrandan la imagen.
Al principio, el microscopio surgi como una lente que agranda la imagen (lupa), luego se
desarroll el microscopio ptico compuesto, que consiste en varios lentes (parte ptica), sostenida
por estructuras metlicas (parte mecnica).
Para observar los objetos a travs del microscopio ptico compuesto, es necesario
colocarlos sobre una lamina de vidrio (Porta objetos) y generalmente, si es necesario, se incorpora
una lamina de vidrio ms delgada que cubre la preparacin (Cubre objetos); en esta forma se
obtiene la preparacin microscpica; la que puede durar poco tiempo (preparacin temporal), o
puede ser guardada (preparacin permanente).
En esta prctico se darn los lineamientos generales para el uso del microscopio, as como
para hacer preparaciones microscpicas y efectuar el informe de laboratorio.
Tecnologa Mdica
El alumno deber desarrollar las siguientes capacidades:

1.
2.
3.
4.
Identificar las partes pticas y mecnicas del microscopio.

Realiza preparaciones microscpicas temporales.
Elabora adecuadamente sus informes de laboratorio.
Conoce el uso adecuado de cada una de las partes del microscopio ptico compuesto.
III.
MATERIALES:
Microscopio ptico compuesto

Frascos gotero con agua destilada
Porta Objetos y Cubre Objetos
Papel impreso (peridico) con letra pequea*
Tijeras y hoja de afeitar nueva*
Papel y lpiz*
Corcho*
Papel limpialentes*
Pao amarillo de limpieza*
Solvente para limpieza
Xilol
Pipeta Pasteur
El material marcado con asterisco (*) lo aportan los estudiantes en forma individual.
PROCEDIMIENTO.
I PARTES Y FUNCIN DEL MICROSCOPIO PTICO:
A) El alumno identificar las partes pticas y mecnicas del microscopio ptico
PARTES OPTICAS:
- Oculares
- Objetivos
- Condensador
- Filtros de luz
- Prismas
PARTES MECANICAS:
- Pie, base o soporte
- Columna o brazo
- Platina
- Carro y tornillos del carro
-Tornillo macromtrico y Tornillo micromtrico
- Mecanismo de revolver
- Tubo del ocular
- Diafragma
Tecnologa Mdica
http://www.biologycorner.com/resources/microscope-boxed.gif
Tecnologa Mdica
b) ENFOQUE DEL MICROSCOPIO

1. Baje completamente la platina del microscopio.
2. Haciendo uso del mecanismo del revolver, coloque frente a la preparacin el objetivo de menor
aumento (seco dbil 10 X).
3. Coloque la preparacin microscpica sobre la platina sujetndola con las pinzas del carro y
centre la preparacin haciendo uso de los tornillos del carro.
4. Regule la luz mediante el uso del mecanismo del diafragma.
5. Haciendo uso del tornillo macromtrico suba al mximo la preparacin hasta que encuentre tope
sin observar por los oculares.
6. Observando a travs del ocular, accione el tornillo macromtrico hasta que visualice la imagen
en el campo microscpico.
7. Una vez enfocada la imagen, afine el enfoque microscpico, haciendo uso del tornillo
micromtrico.
8. Si desea mayor detalle, cambie de aumento rotando el mecanismo del revolver a un objetivo que
le proporcione el aumento deseado, corrigiendo el enfoque de imagen moviendo el tornillo
micromtrico, y graduando la intensidad de luz con el diafragma.
9. Despus de haber realizado la observacin, se limpian las lentes con papel limpia lentes o
siguiendo instrucciones del profesor, se coloca el objetivo de menor aumento en posicin de
enfoque, se baja la platina, se desconecta y se tapa. El microscopio queda listo para la prxima
observacin.
c) PARA OBSERVAR EN UN MICROSCOPIO
Correctamente, se debe poner la mano derecha en los tornillos que mueven la platina y la
mano izquierda en los tornillos macro y/o micromtricos se deben graduar los oculares a nuestros
ojos si el microscopio es binocular, si es monocular la observacin se debe hacer con los dos ojos
abiertos.
d) DESCRIPCION DEL MICROSCOPIO.
PARTE MECANICA.
Est compuesta por el pie, la platina y el tubo.
EL PIE. Es una pieza maciza y pesada, para asegurar la estabilidad del aparato y servir de soporte a
sus dems partes.
LA PLATINA:Es una pieza metlica donde se colocan las preparaciones; tiene en el centro una
abertura circular por la que pasarn los rayos luminosos procedentes del sistema de iluminacin. En
los microscopios corrientes puede ser fija o estar endosada a un carro con dos tornillos y cremallera
que permitan dos movimientos de translacin, para centrarla, y tambin, si los tornillos estn
graduados, para medir sus desplazamientos.
Tecnologa Mdica
La preparacin se sujeta, en las platinas fijas, con dos sujetadores mviles, y en las platinas
de carro, por un reborde, en forma de escuadra y pestillo, que le impide cualquier movimiento
imprevisto.
El pie se prolonga por encima de la platina, en arco ms o menos curvo. La parte superior
de este arco es la que sostiene el tubo y su mecanismo de traslacin vertical. Esta tiene suma
importancia, pues permite enfocar el objetivo mediante dos movimientos uno rpido, gracias a una
cremallera, y otro lento, con un tornillo micromtrico.
EL TUBO:
En l est instalado el sistema ptico. Est constituido por dos tubos. Uno de ellos,
externo, en el que se encuentran la cremallera y el ocular,
y otro, interno, adosado al anterior, donde est el objetivo. En la parte superior hay una divisin
milimtrica que permite modificar la distancia entre objetivo y ocular. Son corrientes en los
aparatos modernos los binoculares, que facilitan la visin con los dos ojos, y los revlveres
portaobjetivos, con los cuales se pueden cambiar los objetivos instantneamente, sin desenfocar la
preparacin.
PARTE OPTICA.
OBJETIVOS.
Estn formados por la unin de varios lentes para corregir las aberraciones. Deben tratarse
con mucho cuidado, pues cualquier golpe puede variar la posicin de las lentes y averiarlas. Se
atornillan a la parte inferior del tubo o al revlver portaobjetivos.
La lente inferior del objetivo se denomina lente frontal. De ella depende principalmente la
mayor o menor ampliacin. Es siempre plano-convexa, de foco muy corto y de dimetro tanto
menor cuanto mayor sea el aumento.
Detrs de esta lente hay otras, que son las que corrigen las aberraciones cromticas y
esfricas.
OBJETIVOS EN SECO:
Son los que se emplean ms corrientemente. Entre la lente frontal y
el cubreobjetos slo hay aire. A este grupo pertenecen los objetivos de menores aumentos. Las
lentes frontales tienen de 3 a 10 milmetros de dimetro. Poseen gran profundidad de foco, lo cual
permite observar diferentes planos paralelos del objeto.
OBJETIVOS DE INMERSION:
Se llama as a aquellos en los cuales, para la observacin,
deben interponerse entre la lente frontal y la preparacin un lquido que, por su ndice de refraccin
apropiado, permita una mayor luminosidad. Este lquido puede ser agua, aceite, monobromuro de
naftaleno, etc. Son, estos objetivos, de gran aumento y de gran poder definidor. Se emplean en
Bacteriologa y Parasitologa. Requieren gran luminosidad y empleo de condensador.
Tecnologa Mdica
OBJETIVOS APOCROMATICOS:
Todos los objetivos, secos o de inmersin, estn
acromatizados slo para dos rayos del espectro, el rojo y el azul. Son los llamados cromticos, pero
si conseguimos corregir este defecto para tres rayos, se elimina casi completamente el llamado
espectro secundario, y tenemos los objetivos apocromticos. Estos lentes corrigen adems la
esfericidad.
Para una visita virtual a los laboratorios productores de lente tiene la siguiente direccin:
http://www.zeiss.de/C12567A8003B58B9/allBySubject/34D946E306AF131DC1256A2A00436472
Para conseguir datos histricos se encuentra la siguiente direccin:
http://www.ko-be.com/articuloMicroscopio.htm
http://iessuel.org/salud/micro.htm
http://teleformacion.edu.aytolacoruna.es/FISICA/document/fisicaInteractiva/OptGeometrica/Instru
mentos/Microscopio/Hist_microscopio.htm
CUALIDADES DE LOS OBJETIVOS:
Los objetivos deben poseer tres cualidades: poder definidor, poder penetrante y poder
resolvente. El primero consiste en la propiedad de presentar con limpieza y correccin los
contornos de la imagen. El poder penetrante es la propiedad de presentar, sin variar el enfoque,
perfectamente detallados varios planos del espesor de una preparacin. El poder resolverte permite
apreciar delicados detalles de estructura.
SISTEMA DE ILUMINACION:
Se encuentra situado bajo la platina y tiene la misin de iluminar los objetivos por medio
de luz transmitida, a causa de que la mayora de las observaciones se realizan por transparencia.
Consta de un espejo y de un diafragma. El espejo, redondo y adaptable a las ms variadas
posiciones, tiene una superficie plana y otra cncava, que pueden intercambiarse a voluntad. Es
espejo plano, para objetivos de escaso aumento, y el cncavo, para grandes aumentos. La fuente
luminosa puede ser natural o artificial. Esta ltima es idnea cuando proviene de una lmpara
especial para estos aparatos.
El diafragma va montado bajo la platina. Es de sistema iris, y permite, por medio de una
palanca, obtener a voluntad conos luminosos de distinto tamao y, mediante condensadores, conos
luminosos muy grandes. Los condensadores constan de un sistema de lentes de gran abertura
sujetos a una montura y colocados entre la platina y el espejo, pueden subirse y bajarse a voluntad y
tienen un diafragma unido al conjunto.
Tecnologa Mdica
REGLAS GENERALES DE OBSERVACION

Es regla general enfocar la preparacin de abajo arriba: se aproxima el objetivo a la
preparacin de modo que la distancia entre ambos sea menor que la distancia focal. Se mira por el
ocular y se hace retroceder el tubo lentamente mediante el tornillo rpido, hasta conseguir ver la
preparacin ms o menos enfocada. Seguidamente, practique el enfoque exacto con el tornillo
micromtrico.
El objetivo de inmersin requiere ms cuidado: Toda vez que es depositada la gota de
lquido sobre la preparacin, bjese el objetivo hasta que la toque. Para enfocar se utiliza el tornillo
micromtrico, pero sin perder contacto con la gota y sin tocar la preparacin.
LIMPIEZA. Una vez terminada la observacin debe limpiarse el objetivo con papel limpia
lentes, empapado de xilol o de tolueno.
CUIDADO DEL MICROSCOPIO.
El microscopio es un instrumento costoso. Debemos
darle el mejor cuidado posible. Siga siempre estas instrucciones generales cuando lo utilice.
Transporte el microscopio sujetndolo con las dos manos: una por debajo de la base y la otra en
el brazo.
Colquelo alejado del borde de la mesa. Si hay una lmpara unida al microscopio, tenga cuidado
con los cables. Cuando trabaje con el microscopio quite de la mesa de laboratorio aquellas cosas
que no sean absolutamente necesarias.
Las lentes del microscopio cuestan casi tanto como todas las dems partes juntas. NUNCA LAS
LIMPIE CON OTRA COSA QUE NO SEA PAPEL LIMPIALENTES).
Cuando termine su trabajo guarde el microscopio, NO SIN DESMONTAR LAS
PREPARACIONES MICROSCOPICAS QUE HA OBSERVADO Y COLOQUE EL OBJETIVO
DE MENOR AUMENTO EN LA POSICION DE ENFOQUE, CON LA PLATINA EN SU
POSICIN MAS BAJA. Realice la devolucin de material al ayudante.
Tecnologa Mdica
II. PREPARACIONES MICROSCOPICAS TEMPORALES.

El profesor explicar la tcnica correcta de hacer las preparaciones microscpicas
temporales, con los materiales que el estudiante aporte utilizando agua destilada como medio de
montaje.
1. PREPARACIN DE CORCHO:
Haga varios cortes delgados de corcho utilizando la hoja de afeitar nueva y escoja el ms fino.
En un porta objetos coloque una gota de agua destilada y coloque en l el pedazo de corcho
seleccionado, y pongal un cubre objetos, procurando que no lo quede burbujas de aire. Proceda
a su observacin microscpica. Haga su esquema correspondiente utilizando los objetivos de
aumento menor y aumento mayor.
2. LETRA IMPRESA:
Busque en el peridico la letra e ms pequea que encuentre, crtela y colquela en un porta
objetos que tenga una gota de agua destilada, cbrala con el cubre objetos y obsrvela en el
microscopio usando los objetivos de aumento mayor y menor.
Tecnologa Mdica
Prctico N2
BIOELEMENTOS
I. INTRODUCCIN
Como toda la materia del universo, los organismos vivos estn compuestos por elementos
fundamentales que los constituyen. Dichos elementos, al igual que en el resto de la materia, estn
formados por tomos, los que se pueden encontrar en forma de iones o combinados ente s
formando molculas. Las molculas que forman parte de estos son conocidas como molculas
orgnicas.
Entonces, qu distingue a los seres vivos de la materia no viva?. La diferencia est en la
forma en que estos componentes se organizan entre s para formar un tipo de materia u otra. Se ha
definido a los seres vivos como Sistemas Autopoyticos (auto= as mismo y poytico= generacin);
es decir, que se generan a s mismos. Considerando que la clula es la unidad estructural, funcional
y de reproduccin bsica de todo organismo vivo, debemos conocer y distinguir sus componentes
qumicos. Entre ellos, los Bioelementos (que se encuentran a la forma de iones o constituyendo las
molculas orgnicas), el agua (que permite las reacciones qumicas celulares) y las macromolculas,
que se asocian y organizan formando diferentes estructuras tales como: membranas, canales,
receptores, bombas, esqueletos, vesculas, ncleo, organelos, citoplasma, cromatina, cromosomas,
ribosomas, etc..
La organizacin molecular de estas estructuras determina sus funciones y como resultado del
operar entre ellas (reacciones bioqumicas), se obtienen nuevos iones, nuevas molculas, nuevas
estructuras, etc.; es decir, nuevos componentes, los que a su vez van a construir nuevas clulas.
Los organismos pluricelulares estn formados por diferentes tipos de clulas que se
organizan para formar tejidos, los tejidos para formar rganos y los rganos para formar sistemas de
rganos. En el desarrollo de los organismos pluricelulares se generan nuevas clulas, nuevos
tejidos, nuevos rganos, nuevos sistemas y nuevos organismos.
De este modo, aunque un ser vivo no produzca otro ser vivo como resultado de su operar (es
decir que no se reproduzca), est constantemente generando a los componentes que lo constituyen;
es decir, los seres vivos nos estamos haciendo en forma permanente. Por ello muchas de las
molculas y clulas que los organismos vivos tienen en un momento determinado no son las
mismas del pasado ni sern las mismas en el futuro.
Desde el punto de vista biolgico, los seres vivos son sistemas determinados
estructuralmente. Por lo tanto, todo lo que les ocurre en cada instante es producto de su estructura y
es determinado por ella, de modo que si la estructura falla o se altera, pierde su capacidad de
trabajo.
Tecnologa Mdica
II. PROCEDIMIENTO
1.- Reconocimiento del bioelemento Calcio (Ca2+)
a) Inducir la formacin de cristales de oxalato de calcio mediante la siguiente reaccin:
- Sobre un porta objetos coloque 2 gotas de una solucin de cloruro de calcio.
- Sobre lo anterior agregue 2 gotas de cido oxlico al 3%.
- Espere 8 minutos.
- Agregue 2 gotas de Etanol absoluto.
- Espere 15 minutos.
- Escuche las recomendaciones del Profesor y luego evapore el exceso de alcohol pasando el porta
por la llama de un mechero.
- Observe los cristales formados con un microscopio ptico, a menor aumento, y dibuje.
b) Repita la formacin de cristales de calcio empleando ahora un extracto de tejido de msculo
animal (carne de vacuno) en vez de la solucin de cloruro de calcio.
Conteste las siguientes preguntas:
Por qu se emplea msculo para determinar presencia de Calcio?
Qu clulas o tejidos empleara para hacer una reaccin que permita identificar Fierro (Fe)?
Este tipo de test es, cuantitativo o cualitativo? Explique
2.- Complete la informacin requerida a continuacin:

a.- Bioelementos considerados esenciales para un determinado organismo o clula son aquellos que:
b.- Los bioelementos se clasifican en:

MACROELEMENTOS: aquellos que se requieren en cantidad relativamente altas (1 mg/g o ms,
de materia seca) y son:
MICROELEMENTOS: aquellos que se necesitan en cantidades ms reducidas (0,1 mg/g materia
seca) y son:
10
Tecnologa Mdica
ELEMENTOS TRAZA: aquellos que se necesitan en cantidades nfimas. Estos son:
c.- En general, todos los bioelementos que se encuentran a la forma de iones en una clula pueden
cumplir la funcin de:
- Seale dos ejemplos:
d.- A continuacin se entregan diferentes bioelementos y algunas de las estructuras qumicas en que
pueden encontrarse en las clulas. Seale las funciones que realizan los siguientes bioelementos, e
identifique molculas celulares en las cuales se presentan.
ELEMENTO
ESTRUCTURA
QUMICA
PO4H2- , PO4=
NO3-, NO4+
SO4=
Ca
Ca++
Fe
Fe+2 , Fe+3
K+
FUNCIONES
BIOLGICAS
11
MOLCULAS
Tecnologa Mdica
e.- En la sangre, el bioelemento Carbono se encuentra constituyendo un tipo especial de molcula

que es el cido carbnico H2CO3., el que se disocia de acuerdo a la siguiente reaccin:
H+ + HCO3-
H2CO3
Qu funcin(es) cumple este cido en la sangre?
Planifique un experimento que le permita observar la formacin de cristales de hidroxiapatita

que se forman durante la mineralizacin del hueso.
a)
b)
c)
d)
e)
f)
Seale reactivos necesarios

Calcule concentraciones de los reactivos a utilizar
Entregue lista de materiales y reactivos a emplear
Metodologa a emplear
Resultados esperados
Identifique grado de peligrosidad de los reactivos solicitados
12
Tecnologa Mdica
IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS Y LIPIDOS

I. INTRODUCCION.
Los compuestos qumicos de la clula se clasifican en dos grandes grupos: substancias
inorgnicas y substancias orgnicas, las primeras se caracterizan por la ausencia de uniones
carbono-carbono en su estructura qumica; pudindose mencionar entre este grupo: agua, gases y
sales disueltas, las segundas se caracterizan por presentar uniones carbono-carbono y carbonohidrgeno y tomos de oxgeno en su estructura qumica, adems de estos elementos, pueden existir
tomos de nitrgeno, fsforo, azufre y algunos metales.
Las principales substancias orgnicas responsables de las caractersticas estructurales y
funcionales del protoplasma son: carbohidratos, lpidos, protenas y cidos nucleicos, dichas
substancias pueden ser identificadas por una gran variedad de pruebas qumicas y fsicas. En esta
prctica se efectuarn algunas de estas pruebas qumicas para identificar carbohidratos y lpidos, en
forma cualitativa.
II. CAPACIDAD A DESARROLLAR
1. Identificar carbohidratos y lpidos a travs de reacciones qumicas y microscopa de luz.
2. Utilizar correctamente el microscopio ptico compuesto.
III. EQUIPO Y MATERIALES NECESARIOS.
Microscopio compuesto
Porta y cubre-objetos
8 tubos de ensayo, resistentes al calor
8 pipetas de 2 a 5 ml o goteros
Gradilla para tubos de ensayo
Una hoja de afeitar nueva
Solucin de lugol (3 frascos)
Solucin de Sudn III IV (3 frascos)
Solucin de Benedict u otra para reconocimiento de H de C
Solucin de Glucosa al 1%
Solucin de Sacarosa al 1 %
Solucin de Almidn al 1%
Una papa*
Un trozo pequeo de grasa animal*
Aceite de cocina
Agua destilada
Pinzas
Tripode, anillo lmina de asbestos
13
Tecnologa Mdica
Vasos de precipitados
Bao Mara
Mechero
8 Agitadores de vidrio
Lpiz marcador de vidrio*
El material marcado con asterisco (*) lo aportan los estudiantes por grupo.
IV.
PROCEDIMIENTO.
IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS: El almidn se identifica con lugol (solucin de

I2/KI) dando un azul o morado intenso y los azcares reductores se identifican con la solucin de
Benedict, los cuales despus de calentarse en bao mara durante 3 minutos, dan un precipitado
color rojo ladrillo.
OBSERVACION MACROSCOPICA.
1.
2.
3.
4.
Numere 6 tubos de ensayo de 1 a 6, a los tubos 1 y 2 agregue 1 ml de almidn.

A los tubos 3 y 4 agregue 1 ml de sacarosa
A los tubos 5 y 6 agregue 1 ml de glucosa
A los tubos 1,3 y 5 agrgueles una gota de solucin de lugol, observe y anote resultados en el
cuadro
5. A los tubos 2,4 y 6 agregue aproximadamente 10 gotas de solucin de Benedict, y
6. Colquelos en bao mara por 3 minutos o usando e mechero de alcohol llvelo a ebullicin,
evite quemarse), observe y anote resultados en la tabla correspondiente, en el cuadro que se
adjunta.
TUBO
PRUEBA DE BENEDICT
Color Inicial
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Color Final
PRUEBA DE LUGOL
Color Inicial
Color Final
Almidn
Almidn
Sacarosa
Sacarosa
Glucosa
Glucosa
IDENTIFICACION DE LIPIDOS. Los lpidos son identificados usando el reactivo Sudn III
IV, los cuales al mezclarse dan un color rojo brillante.
Coloque en un tubo de ensayo 1 ml. de aceite de cocina y 1 ml. de agua destilada; agrguele unas
gotas de Sudn; agtelo, observe inmediatamente y anote los resultados; deje reposar el tubo y al
cabo de 5 minutos obsrvelo y describa los resultados.
14
Tecnologa Mdica
OBSERVACION MICROSCOPICA.
1. Observacin de grnulos de Almidn.
Por medio de la hoja de afeitar haga un corte muy fino del tubrculo de papa y colquelo
sobre un porta objetos, haga una preparacin utilizando lugol diludo como medio de montaje y
obsrvela al microscopio usando el objetivo 40X para hacer el esquema de lo observado.
2. Observacin de tejido adiposo.
Usando una hoja de afeitar obtenga un corte delgado de la grasa animal. Mntela
en el
portaobjetos y agrguele una gota de Sudn IV cbrala con el cubreobjetos y presione suavemente,
coloque la preparacin sobre la platina del microscopio enfoque y observe con el objetivo de
aumento menor (10X), y luego con el objetivo de aumento mayor (40X); construya un esquema de
lo observado y descrbalo
15
Tecnologa Mdica
Prctico N 3
RECONOCIMIENTO DE PROTENAS
I. INTRODUCCIN
Las protenas constituyen la base estructural de las clulas, son abundantes en las
membranas biolgicas, en el citoplasma y en el contenido interno del ncleo. Adems, algunas de
ellas cumplen roles funcionales como ENZIMAS (biocatalizadores de los procesos bioqumicos) en
los seres vivos, lo que permite aumentar mucho la velocidad de las reacciones qumicas que se
llevan a cabo al interior de las clulas.
Las protenas se definen qumicamente como polmeros lineales, cuyas unidades
estructurales (o monmeros) son los -aminocidos (aa), los cuales se unen entre s mediante un
tipo de enclace covalente llamado enlace peptdico. As se forman las cadenas peptdicas o
pptidos.
Los aminocidos son compuestos orgnicos de bajo peso molecular que se caracterizan por
tener en su estructura un grupo carboxilo (COOH-) libre y un grupo amino (-NH2) . Estos dos
grupos van unidos, covalentemente, a un carbono central alfa. (-C-). (ver figura). Este carbono
lleva, adems, un tomo de hidrgeno y una cadena lateral R, con lo que completa sus cuatro
enlaces simples. Existe una gran variedad de tipos de aminocido pero slo veinte de ellos son
utilizados, frecuentemente, en los sistemas vivos, para construir cadenas peptdicas.
La secuencia de aminocidos de una protena est determinada por el cdigo gentico de un
determinado gen. Dicho gen define, adems, la conformacin espacial que tendr la molcula, al
interior de la clula (conformacin nativa). De esta estructura o conformacin depende la funcin
que cumple esa protena en la clula y en el organismo en general. La estructura tridimencional o
conformacin de una protena se debe a los diferentes tipos de interacciones que pueden darse entre
los radicales aminoacdicos que presenta.
De acuerdo a su constitucin qumica, las protenas pueden clasificarse en: simples y
complejas.
! Las Protenas simples son aquellas que, como resultado de su hidrlisis se obtiene slo
aminocidos libres.
! Las conjugadas son esas que, despus de una hidrlisis, adems de obtenerse aminocidos, se
obtienen otros componentes inorgnicos (como cationes o aniones) o de tipo orgnicos como
nucletidos, hidratos de carbono, lpidos, vitaminas, etc.
De acuerdo a su forma las protenas se clasifican en:
Protenas Fibrosas: tienen cadenas peptdicas con plegamiento o estructura secundaria. Se ordenan
como fibras en el espacio alrededor de un eje imaginario. Son insolubles en soluciones acuosas y de
gran resistencia mecnica, por lo que se encuentran cumpliendo funciones de proteccin. Ej:
queratina y colgeno.
16
Tecnologa Mdica
Protenas Globulares: tienen cadenas peptdicas con plegamiento o estructura terciaria y de forma
ms o menos esfrica, son solubles en agua y por ello realizan funciones de dinamismo dentro de la
clula y/o del organismo. Ej: enzimas, citocromos, etc.
Protenas Mixtas: tienen una zona con plegamiento secundario y otra con plegamiento globular.
II. PROCEDIMIENTO
A.- Reconocimiento de protenas: Test de Biuret.
Se requiere:
- 2 tubos de ensayo
- Solucin de albmina 0,5%
- Solucin de almidn 0,5%
- Reactivo de Biuret.
En el Tubo (1) dispense 2 ml de solucin de albmina.
En el Tubo (2) dispense 2 ml de solucin de almidn
A cada tubo agregue 1 ml de reactivo de Biuret.
Observe en qu tubo se forma el color violeta o prpura caracterstico.
B.- Desnaturalizacin de protenas.
B-1) Efecto de la temperatura
En un tubo de ensayo ponga 2 ml de solucin de albmina.
Caliente, suavemente, y flameando por el mechero.
Anote sus observaciones y explique
B-2) Efecto del pH
En un tubo de ensayo (1) ponga 2 ml de solucin de albmina.
Deje escurrir por las paredes del tubo 1 ml de cido ntrico (HNO3)*.
En el tubo de ensayo (2) ponga 2 ml de albmina y deje escurrir por las paredes del tubo 2 ml de
hidrxido de sodio 10% (NaOH)**
Anote lo observado y explique.
* Acido fuerte;
** Base o lcali fuerte
III. PREGUNTAS:
1. En la reaccin de Biuret qu ocurre entre el reactivo y las protenas?
2. El test de Biuret es un excelente test cualitativo (no permite cuantificar la concentracin de
protenas presentes en la muestra) para identificar protenas pero no se puede utilizar para
reconocer aminocidos A qu se debe esto?
17
Tecnologa Mdica
3. Qu efecto habra observado en la solucin de albmina si se agrega una solucin de Mercurio

o de Nitrato de Plata (sales de metales pesados)? Explique.
4. Qu efecto habra observado en la solucin de albmina si se agrega fenol-cloroformo, benceno
u otro solvente orgnico? Explique
5. Si el tubo (2) que contiene NaOH es puesto a calentar a la llama qu reaccin ocurrir?
IV. COMPLETACIN
1.- Cul es el monmero que constituye las protenas y mediante que tipo de enlace se unen entre
s?
2.- Cuntos aminocidos, como mnimo debe tener una protena?
3.- Qu diferencia existe entre una cadena peptdica (o pptido) y una protena?
4.- Qu se entiende por protena desnaturalizada?
5.- Cmo afecta la temperatura la estructura de las protenas?
6.- Cmo afecta la presencia de los cidos y bases fuertes a las protenas?
7.- Se dice que las enzimas hidrolticas del lisosoma son enzimas cidas A qu se refiere este
concepto? Qu les ocurre a estas enzimas cuando al interior del lisosoma baja el pH a 5,2?
8.- Qu se entiende por protena hidrolizada? En qu se diferencia de la protena desnaturalizada?
18
Tecnologa Mdica
ANEXO: ENZIMAS
Las enzimas son molculas que tienen la capacidad de catalizar una reaccin qumica. La
gran mayora de las enzimas son de naturaleza protica y por tanto, su estructura y caractersticas
son dependientes de esta condicin protica. Unas pocas enzimas son qumicamente, molculas
de cido nuclico RNA, y sus caractersticas son dependientes de esta condicin.
Sin embargo, ambos tipos de enzimas son especficas para un determinado sustrato, y
tambin, ambos son afectadas por temperaturas extremas y pH extremos, producindoles una
alteracin de su estructura y finalmente, la desnaturalizacin y prdida de funcin.
En cuanto a la nomenclatura, su nombre tiene relacin con la reaccin que catalizan o con
la funcin que cumplen en esa reaccin, y luego se agrega el sufijo asa. Por ejemplo, la hidrlisis
del almidn (catlisis de la destruccin de la molcula) en glucosas y maltosas, la enzima recibe el
nombre de amilasa. Otra enzima, la que acta sobre la degradacin de ATP se llama ATPasa, etc.
Fundamentos de la reaccin del Test de Biuret.
Este test es especfico para reconocer enlaces peptdicos. En l se utilizan los reactivos
NaOH y CuSO4. En condiciones alcalinas, (solucin en presencia de NaOH) el in Cu2+ es capaz de
reaccionar con los Nitrgenos del enlace peptdico (originalmente, de los grupos NH2) formando un
complejo color violeta. (Ver figura de enlace peptdico). Cada tomo de Cu2+ reacciona con 2
tomos de N (enlace covalente) y adems, establece una resonancia de electrones con otros dos N,
por lo tanto para que se forme el complejo se necesitan a lo menos 4 enlaces peptdicos.
Figura 1: Esquema de la reaccin de Biuret
H
NH2
COOH
R
Figura 2 Esquema estructural de un aminocido
19
Tecnologa Mdica
Ejemplos de aminocidos: nmbrelos e identifique cul es el grupo cido, el grupo amino y el

grupo R en cada uno de ellos.
COO("
H3N+"
H3N+"
COO("
H3N+"
C" H"
C" H"
H"
CH2OH"
COO("
COO("
H3N+"
C" H"
C" H"
CH2"
CH2"
COO("
Figura 3: Plegamientos de las protenas. El plegamiento alcanzado determina la forma final

(conformacin).
Protenas fibrosas
Protenas globulares
20
Tecnologa Mdica
Prctico N 4
OBSERVACIN MICROSCOPICA DE CELULA
PROCARIONTE Y EUCARIONTE
I. INTRODUCCIN.
Los seres vivos presentan diversidad en forma, dimensin y estructura, caractersticas que
dependen de las clulas que lo integran, de la actividad que realizan y del entorno que les rodea.
La clula como unidad morfolgica lleva un patrn general de estructura, pero existen
variantes que establecen diferencia entre ellas, como son, ausencia o presencia de material gentico
rodeado por una envoltura lo cul permite la clasificacin en dos grandes grupos: clulas
procariontes (presentan nucleoide) y clulas eucariontes (presentan ncleo verdadero).
Es importante caracterizar que an dentro de las clulas eucariontes existen diferencias
estructurales que permiten dividirlas en clula animal y vegetal. La clula vegetal presenta pared
celular, vacuolas prominentes y plastidios y la clula animal carece de ellos, presentando centrolos
y lisosomas.
II. El alumno debe lograr el desarrollo de las siguientes capacidades
a) Diferenciar por microscopa de luz, clulas procariontes de eucariontes y clulas animales de
vegetales.
b) Utilizar correctamente las partes del microscopio.
III.
MATERIALES.
Cebolla
Palillos de dientes de punta roma*
Frasco gotero con lugol
Frasco gotero con agua destilada
Porta y Cubre objetos (una caja)
Hoja de afeitar nueva
Pao o papel limpialentes*
Pinzas
Frotis bacteriano coloreado con Gram
Guantes desechables*
21
Tecnologa Mdica
IV. PROCEDIMIENTO
A) OBSERVACION DE CELULAS PROCARIONTES (OBSERVACION DE FROTES
BACTERIANOS CON TECNICA DE GRAM):
El alumno en trabajo previo de investigacin bibliogrfica deber explicar que es un
frotis coloreado con tcnica de GRAM, y cual es su utilidad en la medicina antes de iniciar su
observacin microscpica.
TINCIN DE GRAM:
- Aplique una capa delgada del espcimen en el portaobjetos, djelo secar fjelo con calor
utilizando un mechero.
- Cbralo con cristal violeta durante 1 minuto, lvelo con agua destilada
- Aplique solucin yodada durante 1 minuto, lvelo con agua destilada
- Cuidadosamente decolore la laminilla con alcohol-acetona hasta que el color azul se torne en
celeste claro.
- Aplique solucin de safranina por un minuto, lvelo con agua, secando la laminilla con papel
filtro.
Las bacterias Gram positivas se tien de color azul violeta.
Las bacterias Gram negativas se tien de color rosado.
Coloque el frotis en la platina del microscopio, enfoque primero con aumento menor y
luego con aumento mayor. Qu otros detalles ve con seco mayor? Agregue una gota de aceite de
inmersin en el frote y observe ahora con el objetivo de inmersin. El aceite forma un medio
continuo entre el vidrio y el sistema de lentes del objetivo, lo cual permite un mayor aumento de la
imagen del objeto observado. Haga esquemas y complete su informe de laboratorio.
B) OBSERVACION DE CELULAS EUCARIONTES:
1. CELULA VEGETAL.
Tome la cebolla y con la hoja de afeitar cubierta por uno de los constados con cinta adhesiva,
proceda a cortar la cebolla separando la parte radical y la caulinar.
b) La parte que queda del bulbo, divdala en dos, haciendo un corte ecuatorial de tal forma que
obtenga dos partes iguales.
c) De los segmentos obtenidos, haga cortes radiales para obtener trozos pequeos, levante
cuidadosamente la epidermis de la parte cncava del trocito del catafilo.
d) En una gota de lugol sobre la parte central del portaobjetos, coloque la epidermis de la cebolla,
cbrala con el cubre objetos y coloque la preparacin en la platina del microscopio. Enfoque y
observe ncleo, pared celular y nuclolos. Haga esquemas de sus observaciones con objetivo
mayor.
a)
22
Tecnologa Mdica
2. OBSERVACION DE CELULA ANIMAL.

Con un palillo de dientes de punta roma, raspe cuidadosamente la parte interna de la
mejilla y coloque la muestra sobre el portaobjetos en el que previamente ha agregado una gota de
lugol, cubrindola con un cubreobjetos, colquele en la platina y proceda a enfocar y observar.
Haga esquemas de sus observaciones con objetivo mayor.
23
Tecnologa Mdica
Prctico N 5
TRANSPORTE DE MEMBRANA
I. INTRODUCCIN.
Las membranas que rodean a las clulas y a algunos organelos de ella, poseen
permeabilidad diferencial, lo cual significa que la membrana celular deja pasar unas sustancias y
otras no, sirviendo de barrera para el paso de una sustancia disuelta (soluto) dndose el fenmeno
llamado DIALISIS, y la difusin del solvente (agua) dndose el fenmeno llamado OSMOSIS.
Las clulas responden en diferente forma segn el medio que las rodea; si se encuentran
ante una solucin diluida, con una concentracin de soluto menor al contenido interno de la clula
se dice que la solucin es HIPOTONICA o HIPOOSMOTICA, y habr difusin neta de agua
(solvente) a travs de la membrana hacia el interior de la clula: ENDOSMOSIS; al entrar agua a la
clula, esta aumentar de volumen hasta llegar a romperse, (si no posee pared celular): CITOLISIS;
en caso que sea el eritrocito el que se rompe, se libera la hemoglobina y el fenmeno se denomina
HEMOLISIS.
Por el contrario, si se coloca a una clula en una solucin de mayor concentracin de
soluto que la concentracin interna de la clula, se dice que la solucin es HIPERTONICA O
HIPEROSMOTICA, y la difusin del solvente ser en sentido contrario, al anterior, con la difusin
del agua de adentro hacia afuera de la clula: EXOSMOSIS, la clula perder lquido del
citoplasma y se encoger, el fenmeno se denomina CRENACION.
En las clulas vegetales, frente a soluciones hipertnicas o hiperosmticas, puede verse el
efecto de la salida de lquido porque la membrana se contrae hasta poderla apreciar separada de la
pared celular, a este fenmeno se le llama PLASMOLISIS. El caso contrario, la CITOLISIS, no se
aprecia porque la pared celular protege a la membrana.
Si la clula es colocada en un medio ISOTONICO o ISOOSMOTICO, la clula no sufre
ningn cambio visible ya que la difusin del solvente a ambos lados esta equilibrada.
En est prctica pondr de manifiesto el comportamiento de clulas eucariontes ante
soluciones HIPO, ISO e HIPERTONICAS.
MATERIALES.
- Microscopio ptico compuesto
- Portaobjetos y cubreobjetos (1 caja)
- Soluciones de cloruro de sodio (al 0.2% = hipotnica, al 0.9% = isotnica y al 5% =
hipertnica)
- Agua destilada
- Cajas de Petr
- Goteros
- Jeringa hipodrmica desechable de 5 c.c.*
- Guantes desechables*
- Frasco con anticoagulante (Tarea de ayudante)
24
Tecnologa Mdica
PROCEDIMIENTO.
a) Extraer 2 c.c. de sangre, y verterlo en el frasco que contiene el anticoagulante
b) Numerar tres tubos de ensayo
c) Al tubo nmero 1 colocar 3 ml. de solucin de NaCl 0.2%
d) Al tubo nmero 2 colocar 3 ml de solucin de NaCl 0.9%
e) Al tubo nmero 3 colocar 3 ml. de solucin de NaCl 5%
f) Agregar 5 gotas de sangre a cada uno de los tubos numerados.
g) Mezcle el contenido de los tubos y describa las observaciones macroscpicas de cada uno de
ellos, indique en que tubo hay hemlisis.
h) Haga una preparacin microscpica del contenido de cada tubo, obsrvelos al microscopio con
objetivo de aumento mayor y anote resultados respecto a la hemlisis, la crenacin y las clulas
que no se han modificado en su morfologa.
i) Analice en qu casos se han dado los fenmenos de endosmosis y exosmosis.
j) Complete su reporte de laboratorio con anlisis y conclusiones.
FUNDAMENTOS DE LA DIALISIS
La Dilisis es una tcnica que permite separar soluciones verdaderas (que tienen solutos de
muy pequeo tamao) de las soluciones coloidales (que tienen solutos de tamao similar al de las
protenas) cuando ambas se encuentran juntas. Esta tcnica se basa en el fenmeno de difusin y se
realiza con una membrana artificial que tiene un determinado tamao de poro que permite, slo el
paso de los solutos pequeos.
1. En un vaso precipitado mezcle 2 ml de ovoalbmina 2%, 2 ml de glucosa 2% y 2 ml de NaCl
al 2%.
2. Prepare una bolsa construida con una membrana artificial, amarrando firmemente un extremo,
vierta en la bolsa la mezcla preparada y cierre el extremo abierto.
3. Suspenda esta bolsa con la mezcla en un soporte universal y sumrjala en un vaso precipitado
que contiene agua destilada.
4. Deje la bolsa sumergida durante 20 minutos. Luego retire la bolsa y tome 2 alcuotas de 5 ml
del agua contenida en el vaso precipitado y colquela en tubos de ensayo separados.
5. En una alcuota verifique la presencia de Cloruro, en la otra verifique la presencia de
ovoalbmina y en una tercera verifique la presencia de glucosa.
Qu test debe realizar para reconocer cada uno de estos compuestos?
Cul es el resultado encontrado? Explique.
Qu ocurrir al pinchar la bolsa sumergida con la punta de un alfiler, y esperar otros 10 minutos?
Explique.
25
Tecnologa Mdica
- En el esquema a) represente las partculas de soluto y de solvente presentes en este experimento

en la condicin inicial. En b) represente la condicin final, e indique la direccin del transporte de
el(los) solutos(s) que se han translocado.
a)
b)
Porqu los pacientes diabticos deben utilizar mquinas de dilisis?
26
Tecnologa Mdica
Prctico N 6
OBSERVACIN Y FUNCIN DE MITOCONDRIAS Y PEROXISOMAS
I. INTRODUCCIN.
Al proceso de produccin de energa en presencia de O2 a partir de un sustrato se le llama
respiracin, la cual se realiza en las clulas en tres fases fundamentales: la primera fase concluye
con la formacin del cido Pirvico si el sustrato es glucosa; luego entra a una segunda fase donde
ste es metabolizado en el ciclo de Krebs, dando como producto electrones o equivalentes
reductores, los cuales pasan a la cadena respiratoria, llamada tambin cadena de transporte de
electrones donde finalmente se produce el nucletido adenosin-trifosfato o ATP.
Estas dos ltimas fases se producen solo si el medio es aerbico. En todo el proceso
participa gran cantidad de enzimas y se verifican muchas reacciones de xido reduccin. El cclo
de Krebs y la fosforilacin oxidativa se desarrollan en las Mitocondrias en eucariontes.
II. MATERIALES.
Solucin de glucosa al 5%
24 horas antes de la prctica, agregar 10 granos de levadura a 5 cc de solucin de glucosa al 5%
en temperatura ambiente* dejarlo sin cubrir (ambiente aerbico). Transportarla de igual
manera.
Porta y cubre objetos
Verde de Janus al 0.001 P/V
Aceite de inmersin
Agua destilada
Caja de Petr (3 por laboratorio)
El material marcado con asterisco (*) lo aporta el estudiante por grupo.
PROCEDIMIENTO.
A. Observacin Microscpica de Levaduras:
1. Coloque sobre un portaobjetos bien limpio dos gotas de agua y agregue un granito de levadura.
Agite suavemente la suspensin hasta que la levadura est bien repartida en toda el agua.
2. Observe al microscopio con lente de aumento menor primero, luego con aumento mayor y
finalmente con objetivo de inmersin. Construya esquemas de lo observado y complete su
informe de laboratorio.
27
Tecnologa Mdica
B. Observacin de Mitocondrias:
1. Coloque en una caja de Petr 5 gotas de levadura en incubacin y agregarle una gota de
colorante verde de Janus, dejarlo actuar durante 2 minutos; luego de hacer una preparacin
microscpica y obsrvela con el objetivo de inmersin; selecciones de preferencia levaduras
grandes donde pueda observar las mitocondrias y el ncleo de las clulas.
2. Haga esquemas de lo observado y complete su informe de laboratorio.
2. ACTIVIDAD DE CATALASA
El trmino peroxisoma fue introducido por De Duve para identificar cualquier microcuerpo
que presente la secuencia flavn oxidasa-catalasa. Los peroxisomas son cuerpos delimitados por
una membrana y contienen algunas enzimas. Son abundantes en las clulas hepticas y en la de los
tbulos renales, pero muy escasos o ausentes en otros tipos de clulas.
Los peroxisomas contienen enzimas que actan catalizando reacciones utilizando oxgeno
molecular con formacin de agua oxigenada:
RH2 + O2
Flavin-Oxidasa
R + H2O2
El agua oxigenada es un producto txico, que se degrada rpidamente dentro del propio
peroxisoma por la enzima oxidativa CATALASA, en agua y oxgeno. Esta enzima constituye
alrededor de 40% del total de protenas del peroxisoma.
2H2O2
Catalasa
2H2O + O2 (gas)
Los peroxisomas adems de compartir con las mitocondrias la utilizacin de oxgeno

molecular en la clula, tambin realizan -oxidacin de cidos grasos, en especial aquellos de
cadena larga, para su completa oxidacin en las mitocondrias.
MATERIALES.
! Cpsula petri
! Papa y rbano*
! Agua oxigenada (Perxido de hidrgeno)
! Trozo de hgado y rin de cerdo o ave.
! Hojas de afeitar (dos)
El material marcado con asterisco lo aporta el estudiante por grupo
28
Tecnologa Mdica
PROCEDIMIENTO:
Para poder estimar la velocidad de reaccin considere una escala entre 0 y 5 (0 = no hay
reaccin; 1 = muy lento; 5 = muy rpido). Registre los datos en una tabla.
A. Actividad de la Catalasa de Tejido Vegetal sobre Agua Oxigenada.
Haga un corte fino de rbano y uno de papa, cuyas dimensiones sean iguales. Coloque cada
uno en diferente cajas Petri. Agregue sobre cada trozo tres gotas de H2O2. Qu observa?.
B. Actividad de la Catalasa de tejidos animales sobre Agua Oxigenada.
Hacer un corte fino de tejido heptico y renal, cuyas dimensiones sean iguales. Colquelos
sobre diferentes placas Petri y agregue tres gotas de agua oxigenada.
COMPLETE
TEJIDO/ESCALA
Papa
Rbano
Hgado
Rin
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
Cul es el tejido con mayor actividad y cul el que tiene menor actividad?
Qu tienen en comn y en qu se diferencian?.
Mencione algunos procesos metablicos de la clula que producen H2O2.
El H2O2 se usa frecuentemente, como antisptico. Por qu? .
Cuando es agregado a heridas produce burbujas. Qu indica esto?
29
Tecnologa Mdica
Prctico N 7
APLICACIN PRCTICA DE LEY DE LAMBERT-BEER
El objeto del presente trabajo prctico, es estudiar los diferentes pasos que habitualmente
se siguen en el montaje de una tcnica fotocolorimtrica, y que son:
a) Determinar el espectro de absorcin de la sustancia.
b) Escoger una longitud de onda en el espectrograma donde la sustancia presenta un
mximo de absorcin.
c) Construir la curva de calibracin (comprobar si se cumple la ley de Lambert-Beer)
d) Determinar la concentracin de la sustancia problema considerando los siguientes aspectos:
1. Interpolando la lectura de A en la curva de calibracin.
2. Usando el factor de calibracin, o constante k.
Con este fin y de acuerdo a lo establecido, se proceder a determinar el espectro de
absorcin de una vitamina, la riboflavina, con el objeto de construir una curva de calibracin para
dicha sustancia.
MUESTRA:
Preparacin de la solucin coloreada. A partir de una solucin patrn de riboflavina 1 x 10-4
M, mediante el coeficiente de extincin, calcule la concentracin de riboflavina requerida para que
el espectrograma resultante, presente un valor de absorbancia no superior a la unidad en su
mximo de absorcin. Prepare 5 ml de la solucin.
I. REALIZACIN DE UN ESPECTROGRAMA
1. Encienda y deje estabilizar el instrumento (15 min).
2. Efecte lecturas entre 330 y 560 nm. (cada 10 nm). En todas las lecturas use agua destilada
como blanco.
3. En las zonas de mxima absorcin, vuelva a leer en intervalos ms pequeos (cada 5 nm) para
definir adecuadamente la curva en estas regiones.
4. Anote la naturaleza de la solucin, su concentracin original, coeficiente de extincin molar, la
concentracin calculada y el espesor de la cubeta.
5. Anote en forma tabulada la longitud de onda, el % de transmitancia (%T) y la absorbancia
correspondiente.
6. Grafique en papel milimetrado el espectrograma, colocando A en la ordenada y
abscisa.
30
en la
Tecnologa Mdica
7. Calcule el coeficiente de extincin experimental a la longitud de onda de trabajo y antelo.

Compare el valor obtenido experimentalmente con el de la literatura.
II. CURVA DE CALIBRACIN
Las curvas de calibracin se obtienen graficando A (ordenada) en alguna expresin de
masa del cromforo (abscisa), para un mismo sistema, manteniendo constante la longitud de onda
y la cubeta de medicin.
1. Preparacin de soluciones.
a) Prepare una serie de tubos que contengan: 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 y 0,5 moles de riboflavina por
tubo. Complete cada tubo con agua bidestilada hasta un volumen final de 10 ml.
b) Utilizando el espectrofotmetro, mida la absorbancia de cada muestra, a la longitud de onda
experimental de mayor absorbancia para la roboflavina.
c) Grafique en papel milimetrado el espectrograma, colocando A en la ordenada y
abscisa.
en la
DISCUSIN
Cuando se monta un mtodo fotocolorimtrico, pueden existir 3 posibilidades:
a) Que la sustancia sea coloreada y que presente un mximo de absorcin caracterstico slo para
ella y, por lo tanto, sta podra usarse para su determinacin fotocolorimtrica.
b) La sustancia en solucin es incolora, y por lo tanto, se aprovecha alguna propiedad qumica de
ella (poder reductor, oxidante, de sustitucin de grupos, etc.) para desarrollar una reaccin
coloreada que sirve entonces para determinar su concentracin. Este tipo de reacciones
colorimtricas deben ser lo ms especficas posibles.
c) La sustancia en solucin, a pesar de ser incolora, presenta un mximo de absorcin
caracterstico, generalmente a cortas (UV) que puede ser usada para su determinacin
fotocolorimtrica. Ej. de este ltimo caso lo constituyen las protenas, la gran mayora de las
cuales, presenta un mximo de absorcin a 280 nm. A pesar de dar soluciones incoloras, lo que se
aprovecha corrientemente en su determinacin. Los cidos nucleicos presentan un absorcin
mxima a 260 nm, por lo que se aprovecha para la determinacin de estas sustancias.
31
Tecnologa Mdica
Prctico N 8
DETERMINACIN ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA AMILASA SALIVAL
Las enzimas son catalizadores proteicos que aceleran la velocidad de las reacciones
metablicas que ocurren tanto a nivel celular como fuera de ellas, sin sufrir ellas cambios en su
estructura y/o funcin. La accin de las enzimas, por sus caractersticas fsico-qumicas, puede
verse afectada por las condiciones presentes en el lugar de accin de stas. Entre los principales
factores que pueden modificar la accin enzimtica tenemos:
a) La temperatura: Todas las enzimas muestran cierta termolabilidad, aunque para muchas de ellas
el aumento de la temperatura, hasta cierto lmite, acelera la velocidad de la reaccin. Sin
embargo, dado que son estructuras proteicas, pueden ser desnaturalizadas a medida que se
aumenta la temperatura y perder su actividad biolgica. La temperatura a la cual se observa la
mxima actividad enzimtica se denomina Temperatura ptima.
b) El pH: Por su caracterstica proteica, muchas enzimas por el pH de donde se encuentran pueden
cambiar desde un estado ionizado a uno no ionizado, afectando as la actividad biolgica de las
mismas. Cada enzima posee un pH caracterstico donde puede realizar su funcin (pH ptimo)
y cualquier variacin del mismo puede afectar la velocidad de la reaccin qumica catalizada.
c) Inductores e inhibidores: Existen sustancias qumicas que pueden afectar la interaccin del
sustrato y la enzima, ya sea aumentando la actividad enzimtica (Inductores) o disminuyndola
(Inhibidores). Los inhibidores tienen gran utilidad en bioqumica, ya que ayudan a determinar
la especificidad de la enzima por el sustrato, la naturaleza de los grupos funcionales en el
mantenimiento de la estructura activa de la enzima. Estos compuestos no son alterados
qumicamente por la enzima.
Otros factores que pueden afectar la accin enzimtica son: Cantidad de sustrato,
hidratacin de la enzima, regulacin alostrica, regulacin por producto, etc.
La -amilasa es una enzima proteica que se encuentra en la saliva humana y que degrada el
almidn. El almidn, principal polisacrido de reserva de las plantas, est compuesto por dos tipos
diferentes de molculas: amilosa y amilopectina. Ambas tienen como monmero la glucosa (Glu).
La amilosa est formada por largas cadenas de glucosa, donde el C1 de una glucosa est unido al
C4 de la siguiente. Son cadenas lineales y se arrollan en forma helicoidal. La amilopectina est
formada por cadenas de glucosa unidas en C1 con C4 (como la amilosa) pero con mltiples
ramificaciones (uniones C1 con C6). La -amilasa rompe uniones entre C1 y C4 de dos glucosas.
Por lo tanto, usando almidn como sustrato, libera como productos dextrinas lineales y
ramificadas. Las dextrinas son oligosacridos compuestos, en este caso, por unas pocas unidades
de glucosa.
La actividad de las enzimas puede evidenciarse ya sea detectando la aparicin de producto
o bien la desaparicin del sustrato. Para esto pueden usarse tests colorimtricos, absorbancia de la
luz de determinada longitud de onda, sustratos marcados radiactivamente, etc., segn convenga en
cada caso. En este prctico, para medir la actividad de la -amilasa, vamos a usar un conocido test
colorimtrico que permite revelar la presencia de almidn en una solucin. Por lo tanto, vamos a
seguir la reaccin detectando la desaparicin del sustrato (evidenciada por el test colorimtrico)
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Tecnologa Mdica
para determinar la actividad de la enzima. Adems, analizaremos cmo afectan las distintas
condiciones en que acta la enzima (pH, temperatura, concentracin de NaCl).
Para esta experiencia se contar con una solucin de iodo/ ioduro de potasio (I2/KI)
denominada lugol o solucin de Lugol. El almidn en presencia de esta solucin adquiere una
coloracin azulada caracterstica. Esto tiene una explicacin fsica: el iodo se coloca en el interior
de la hlice que forma la amilosa (en las regiones hidrofbicas), formando un complejo de color
azul. Cuando la a-amilasa acta, degrada la amilosa, se desintegra la hlice y por tanto en
presencia de I2/KI ya no dar una coloracin azul.
Materiales:
- 1 Gradilla.
- 10 tubos de ensayo.
- 2 Micropipetas (200 y 1000 l)
- 3 vasos de precipitado ( 50 o 100ml)
- Bao de Hielo (0C).
- Bao termoregulado (90C).
- Estufa a 37C
- Cubetas para espectrofotometra
- Espectrofotmetro
Soluciones y reactivos:
- Solucin de almidn al 2%
- Lugol
- Solucin salina fisiolgica (0,9%).
- Agua destilada.
- Saliva humana.
Metodologa:
1. Un voluntario de cada grupo debe juntar aproximadamente 5 ml de saliva en un vaso de
precipitado pequeo y diluirla con solucin salina fisiolgica hasta obtener 15 ml de solucin
enzimtica.
2. Con los datos de la tabla siguiente, realizar la dilucin del sustrato, realizar las lecturas de
absorbancia y construir la curva de calibracin para el complejo yodo-almidn.
Tubo
1
2
3
4
5
Almidn 2% [l]
0
250
500
1.000
1.500
Concentracin
Absorbancia 590 nm
NOTA: A cada tubo se le debe de agregar 500 l de lugol y completar hasta 5 ml con agua
destilada.
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Tecnologa Mdica
Experimento 1: Determinacin de la Actividad Enzimtica

1) Tome 2 tubos de ensayo con 1 ml de solucin neutra de almidn 2 % (p/v). Coloque el tubo en
un bao trmico a 37C durante por lo menos 2 min.
2) Manteniendo los tubos con el almidn (sustrato) a 37C agregarle 1 ml de la saliva diluida
(enzima) al primer tubo y 1 ml de suero fisiolgico al segundo tubo; mezclar suavemente.
3) Incubar por 10 min a 37C.
4) Aadir 500 l de lugol y completar volumen a 5 ml con agua destilada.
5) Realizar la lectura de la absorbancia en el espectrofotmetro a 590 nm.
6) Determinar la concentracin de almidn en cada tubo.
Experimento 2: Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimtica

1) Tome 4 tubos de ensayos. Aada a cada uno 1 ml de solucin saliva diluida.
2) Incube por 5 minutos cada tubo a la temperatura correspondiente:
Tubo 1: 0 grados.
Tubo 2: Temperatura ambiente.
Tubo 3: 37 grados.
Tubo 4: 90 grados.
3)
4)
5)
6)
7)
.
Agregue a cada tubo 1 ml de solucin de almidn 2%, mezclar suavemente.

Incubar por 10 min a la temperatura correspondiente.
Aadir 500 l de lugol y completar volumen a 5 ml con agua destilada.
Realizar la lectura de la absorbancia en el espectrofotmetro a 590 nm.
Determinar la concentracin de almidn en cada tubo.
Con los datos colectados construir curva de calibracin y utilizando esta calcular
concentraciones de cada ensayo de modo de poder evaluar y comentar la influencia que ejerce el
cambio de temperatura en el ensayo.
Preguntas
1.- Es la amilasa una enzima del tipo Hidrolasa?.
2.- Es la amilasa una enzima proteica simple o compleja?.
3.- Se afirma en internet que La enzima humana de las amilasas alfas es una metaloenzima de
calcio, totalmente incapaz de funcionar en ausencia de calcio Es correcta esta afirmacin?.
Cmo podra verificarlo?.
4.- A un Tecnlogo mdico le piden detectar y medir niveles de amilasa en el plasma. Busque
informacin respecto de que diagnstico de enfermedades puede apoyar este test.
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Tecnologa Mdica
PRACTICO N 9
DETERMINACIN ACTIVIDAD ENZIMTICA INVERTASA DE LEVADURA
I. INTRODUCCIN
Las enzimas catalizan las reacciones disminuyendo la energa libre de activacin necesaria
para que las mismas ocurran. La molcula sobre la cual la enzima acta se denomina sustrato, esta
molcula se transforma obtenindose el producto. La molcula de enzima no se modifica al
trmino de la reaccin y puede continuar catalizando la misma repetidas veces.
La conformacin de una enzima es mantenida por las interacciones que se establecen entre
las regiones especficas de los aminocidos que componen la cadena polipeptdica. Debido a ello
la misma es susceptible ante cambios en el ambiente en el cual se encuentra, siendo dos de los
factores ms importantes la temperatura y el pH. Cuando estos varan de forma tal que la
conformacin de la protena es alterada, la enzima pierde su actividad. Esto provoca que cada
enzima tenga sus condiciones ptimas de funcionamiento tanto de pH como temperatura.
Invertasa de levadura
La sacarosa, comnmente conocida como azcar de mesa, es un disacrido
compuesto por -D-glucosa y -D-fructosa unidos mediante enlace glicosdico -1,2. Cuando este
enlace es roto en la reaccin de hidrlisis, se genera una mezcla equimolar de glucosa y fructosa.
La sacarosa puede ser hidrolizada en presencia de una enzima comnmente denominada
invertasa o sacarasa (Figura 1):
Sacarasa&
Sacarosa''''''''''+''H2O'''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''Glucosa''''''+'''''Fructosa'
Invertasa&
Figura 1. Estructuras qumicas generadas por la hidrlisis de sacarosa, catalizada por la enzima
invertasa (o sacarasa).
La denominacin sistemtica de la invertasa es -fructofuranosidasa, (-Dfructofuranosidasa, -D-fructofuransido fructohidrolasa), debido a que la reaccin catalizada por
esta enzima es la hidrlisis del residuo terminal -fructofuransico. Existe otra enzima, la -Dglucosidasa, que tambin cataliza esta reaccin, escindiendo la unidad terminal de la glucosa.
La sacarosa tambin puede ser hidrolizada de manera no enzimtica en medio cido.
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Tecnologa Mdica
La invertasa es una enzima muy utilizada en la industria alimenticia ya que debido a su

sabor ms dulce y a que no cristaliza tan fcilmente, se prefiere a la fructosa sobre la sacarosa. Un
amplio rango de microorganismos sintetizan invertasa pudiendo, por lo tanto, emplear la sacarosa
como nutriente. A escala comercial es biosintetizada por las cepas de levadura Saccharomyces
cerevisiae y Saccharomyces carsbergensis. El estudio de la actividad invertasa presenta un gran
inters tanto desde un punto de vista acadmico como de investigacin aplicada, siendo uno de las
enzimas ms conocidas. A modo de ejemplo podemos referir que la invertasa fue el primer enzima
cuya cintica se estudi en profundidad (estudios clsicos de Michaelis-Menten) y que fue
utilizado industrialmente.
A diferencia de otras enzimas, la invertasa presenta actividad relativamente elevada en un
rango amplio de pH (desde 3,5 a 5,5) con el ptimo en pH= 4,5. En cuanto a la
temperatura, el mximo de actividad se registra alrededor de los 55C. El valor de la
constante de Michaelis-Menten vara segn las diferentes isoformas entre 2 mM y 5 mM.
La actividad de la invertasa es inhibida en presencia de metales pesados, por ejemplo los
iones Ag1+ atacan a la histidina de la cadena peptdica inactivndola. El sulfato de cobre en
concentraciones elevadas tambin presenta un efecto inhibidor.
II. OBJETIVO:
En el presente trabajo prctico se realizar la extraccin de la invertasa de levadura y,
posteriormente, se verificar su accin sobre una solucin de sacarosa. La misma se comprobar
mediante el test de Fehling, el cual permite detectar la presencia de los productos de la
hidrlisis de este disacrido (glucosa y fructosa).
III. PROTOCOLO DE TRABAJO:
A- Obtencin de la enzima
1. Coloque 4 a 5 g de levadura de cerveza (Saccharomyces cerevisiae) en un mortero y
homogeneice en 15 ml de bicarbonato de sodio 0,1M (buffer de extraccin). Mezcle e incube a
temperatura ambiente durante 10 min., agitando peridicamente.
2. Transfiera el homogenizado a un tubo falcon de 15 ml y centrifugue a 2.000 rpm. Recupere el
sobrenadante, el cual contiene la enzima. Este ser el extracto enzimtico (EE) a utilizar en el
prctico.
3. Tome una alcuota de 2 ml del EE y hervirla, calentando directamente al mechero. Este ser el
extracto enzimtico hervido (EEH).
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Tecnologa Mdica
B- Proceso enzimtico
4. Prepare una batera de tubos de ensayo siguiendo las indicaciones de la siguiente tabla:
Tubo
Vsacarosa
Vsucralosa
VAlmidn VNaOH
1% (mL) 0,5% (mL)
0,02 M (mL)
0,5% (mL)
1
2
2
2
0
0
0
0
3
4
5
6
7
8
2
2
2
2
2
2
0
0
0
0
0
0
9
10
0
0
11
12
0
0
VCuSO4
VEE
VEEH
0,25%(mL)
(mL)
(mL)
0
0
0
0
0
0,5
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0,25
1
0
0
0
0
0
0
0,25
1
1
0
1
1
1
1
0
1
0
0
0
0
2
2
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
2
2
0
0
0
0
0
1
0
0
5. Coloque los tubos en la gradilla y mantngalos a 37 C durante 10 min para que la reaccin
proceda.
C- Deteccin de los productos de la catlisis
1. Agregue a cada tubo 1 ml del reactivo A de Fehling y 1 ml del reactivo B de Fehling.
2. Caliente los tubos directamente al mechero, por aproximadamente 1 min. Finalizado el
procedimiento, coloque los tubos en la gradilla para facilitar su enfriamiento.
3. Observe y anote los resultados.
D- Resultados
Los productos de la hidrlisis de la sacarosa (fructosa y glucosa) dan resultado
positivo para el test de Fehling, lo cual es evidenciado por la aparicin de un precipitado rojo
ladrillo.
Compare los resultados obtenidos en los distintos tubos -aparicin o no del
precipitado y cantidad del mismo- y trate de explicarlos en base a los reactivos agregados en cada
uno.
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Tecnologa Mdica
Inicio de la reaccin Si da positivo: Ejemplos (dos positivos y uno NEGATnegativo)
Soluciones y Reactivos
Levadura (Saccharomyces cerevisiae)

Sol. Sacarosa 0,02 M
Sol. Sucralosa 0,5 %
Sol. Almidn 1 %
Sol. Sulfato de cobre (CuSO4)
Reactivo de Fehling A y B
Materiales:
Mortero
Tubos para centrfuga 15 mL
Centrfuga
Gradilla
Tubos de ensayo
Micropipeta 5.000 L
Puntas micropipeta
Mechero
Pinzas madera
Actividades complementarias
1.
2.
3.
4.
5.
Qu es el reactivo de Fehling y que es lo que reconoce?.

Por qu la reaccin de Fehling es negativa con sacarosa y positiva con los productos de la
hidrolisis por invertasa?.
En el protocolo experimental realizado, cul es el rol del NaOH agregado a algunos de los
tubos?.
Cul es el objeto de realizar el primer tubo de la serie, el cual contiene slo sacarosa?.
Cul es la estructura de la sucralosa y que esperabas que ocurra con la invertasa?.
38
Tecnologa Mdica
Trabajo Autnomo 1
CLASIFICACIN DE LOS SERES VIVOS
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
De qu sirve clasificar a los seres vivos?

Cmo clasificaban los griegos a los seres vivos?
Cules son las ramas de la biologa que se encargan de estudiar la clasificacin de los seres
vivos?
En qu sustentan su clasificacin cada una de estas ramas?
Qu propuso Ernst Haeckel (1834-1949) en la clasificacin de los seres vivos?
Cmo fue la clasificacin propuesta por Robert Whittaker a finales de la dcada de 1950?
Explica la clasificacin propuesta por Carl Woese y por qu utiliz criterios moleculares.
Qu clasificacin proponen Lynn Margulis y Karlene Schwartz para los seres vivos?
En qu consiste el sistema de clasificacin binomial?
Qu es una especie?
Qu es la raza, variedad o subespecie?
Nombra los reinos y dominios en que se clasifican los seres vivos.
Qu organismos se incluyen en el Reino Protista?
Indica las principales caractersticas de los seres vivos que pertenecen al reino plantas.
Es correcto decir que todos los microorganismos son perjudiciales? Razona tu respuesta.
Indica las principales caractersticas de los vertebrados detallando el reino y domino al que
pertenecen.
Cul es la caracterstica fundamental para separar a las cianobacterias de las bacterias?
Qu diferencias hay entre clulas procariotas y eucariotas?
Qu diferencias hay entre las clulas eucariotas animal y vegetal?
Qu organelos hay en las clulas animales?
Cmo se originaron las clulas eucariotas?
Cul es el origen de mitocondrias y los cloroplastos?
Por qu es tan importante el microscopio para la biologa?
Qu tipos de microscopios hay? Qu se puede observar con cada uno?
Ordena los distintos taxones de mayor a menor.
SUPERCLASE: Tetrpodos
REINO: Animal
CLASE: Mamferos
TIPO: Cordados
GNERO: Felis
FAMILIA: Flidos
39
ORDEN: Carnvoros
ESPECIE: Felis catus
SUBTIPO: Vertebrados
Tecnologa Mdica
Trabajo Autnomo 2
LOS BIOELEMENTOS
1.
2.
3.
4.
5.
Qu caracterstica debe poseer un elemento qumico para ser considerado bioelemento?

Qu diferencia existe entre los bioelementos primarios y secundarios?
Qu propiedades del agua fueron importantes para el desarrollo de la vida?
Por qu se solubiliza el NaCl?
En la tabla siguiente se presentan las proporciones
en las que se encuentran los distintos elementos
en los seres vivos y en los seres inertes
(atmsfera, hidrosfera y litosfera).
a) Grafica los datos de la tabla utilizando el
sistema grfico que permita resaltar las
diferencias.
b) Cita los 4 elementos predominantes en cada
uno de los sistemas y realiza un grfico de
barras con ellos.
c) Indaga y explica las posibles causas de la
abundancia de estos cuatro elementos.
d) Observas coincidencias en cuanto a la
abundancia relativa de alguno de ellos? Da
una posible explicacin.
e) Qu conclusiones puedes obtener de estos
datos?
6. Es correcto afirmar que la cantidad en la que se encuentra un bioelemento en el organismo

refleja su importancia biolgica? Cita algn ejemplo que demuestre tu respuesta.
7. Explica razonadamente los datos de la siguiente tabla, en la que se expresa el porcentaje de
agua en peso en distintas edades.
Estado de desarrollo
Feto humano de tres meses
Recin nacido
Adulto de 25 aos
Adulto de 65 aos
Porcentaje de agua en peso

94%
70%
65%
56%
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Tecnologa Mdica
8. A partir de la observacin de la siguiente tabla, podras decir algo acerca del grado de
actividad metablica de los diversos tejidos?. Razona tu respuesta.
TEJIDO
Corazn
Cerebro
Pulmn
Msculo
Huesos
PORCENTAJE DE AGUA EN PESO

79%
84%
70%
76%
22%
9. Explica brevemente si la proposicin que sigue es verdadera o falsa: Todas las clulas viven
en un medio acuoso, excepto las de los reptiles, que prefieren el ambiente seco.
10. Diferentes organismos vivos presentan composiciones elementales similares. Qu significado
puede tener este grado de uniformidad entre los diferentes seres vivos?
11. A partir de la observacin de la siguiente tabla, qu puedes deducir acerca del contenido en
agua de los distintos organismos?.
ORGANISMO
Algas
Espinacas
Persona adulta
Medusa
Semilla
Tabaco
%
98%
93%
62%
95%
10%
92%
12. Seala lo incorrecto en relacin a las funciones biolgicas del agua: es disolvente,
termorreguladora, tiene funcin esqueltica en estado slido, acta como medio de transporte
y aporte hidrgeno y oxgeno.
13. Indica si son verdaderas o no las siguientes afirmaciones: EXPLICA
a) Las sales minerales aportan energa a la clula.
b) Las sales en solucin estn disociadas en iones.
c) Las sales minerales realizan una funcin cataltica.
d) Las sales solubles slo se encuentran en clulas con funcin de sostn.
e) Las sales minerales son molculas inorgnicas que se ionizan en medio acuoso.
f) Las molculas de agua se unen por puentes de hidrgeno.
g) El agua alcanza su mxima densidad al convertirse en hielo.
14. Resuelve las siguientes cuestiones:
a) Cuando se cuece un huevo en agua es frecuente que estalle. Para evitarlo, se suele echar sal
al agua de coccin. Explica este hecho.
b) Qu ocurrira si introducimos un pez marino en agua dulce? Y qu pasa con un pez de
agua dulce en el mar? Explica.
41
Tecnologa Mdica
c) Las plantas poseen rganos para tomar del medio el agua que necesitan. Sus races
presentan los llamados pelos absorbentes, desprovistos de sber para facilitar la
permeabilidad. Explica el proceso de entrada de agua en las races.
15. El salado de algunos alimentos es una tcnica de conservacin. En qu se basa?
16. Seale las funciones generales de dos oligoelementos en algn sistemas viviente.
17. El titular de un peridico de circulacin nacional seala: 3 personas sufren intoxicacin
aguda por Zinc como consecuencia del consumo (por varios das) de alimentos o bebidas
contaminadas en contacto con recipientes galvanizados. Puede deducirse de esta
informacin que el Zinc es txico para nuestro organismo? De qu depende su toxicidad?
18. Qu diferencia existe entre el fsforo y el fosfato? Represente qumicamente cada
componente y destaque si alguno presenta funciones en los seres vivos.
42
Tecnologa Mdica
Taller 1
MACROMOLCULAS
1. Qu caracteriza a las molculas de los carbohidratos?
2. Cules son los grupos funcionales que podemos encontrar en una aldosa? y si fuese una
cetosa?
3. Por qu todos los monosacridos y disacridos son solubles en agua?
4. Indicar cuando un azcar es reductor y con que prueba se determina.
5. Indique el nombre y caractersticas de la ruptura de los enlaces entre monmeros de un
polisacrido.
6. Cul es el contenido normal de azcar en la sangre humana?
7. Que significa la hipoglicemia? Y la hiperglicemia?
8. Cul es la importancia de la glucosa en el metabolismo?
9. Qu tejidos humanos usan predominantemente glucosa como fuente de energia?
10. Cul es la diferencia entre los carbohidratos y los lpidos?
11. Es un heteropolisacarido que tiene mltiples empleos en la medicina que incluyen su uso en
transfusiones de sangre para impedir a la sangre coagularse antes de la administracin, as
como en la terapia anticoagulante profilctica y el tratamiento de trombosis venosa, en
embolias pulmonares y en otras situaciones similares.
12. Un paciente afroamericano de 15 aos indica que ltimamente despus de la ingesta diaria
experimenta hinchazn, calambres, flatulencia y a veces diarrea. Con esta informacin, es
razonable de pensar que el paciente es intolerante a. Sugiere algn mtodo para tratarlo.
13. Qu caracteriza la molcula de cidos grasos y por qu es anfiptica?
14. Que caracteriza los lpidos saponificables? Dar ejemplos.
15. Cules son las molculas base de los acilglicridos?
16. Cul es la diferencia entre triglicridos saturados e insaturados?
17. Qu tipo de triglicrido estn presentes en las grasas y cules en los aceites?
18. Explicar la funcin biolgica de las ceras.
19. En un glicerolpido qu molculas forman la zona hidrofbica y cules la hidroflica.
20. Dar ejemplos de esfingolpidos y dnde se encuentran?
21. Explica por qu algunos lpidos son insaponificables.
22. Qu cualidad hace a los isoprenoides pigmentos fotosintetizadores?
23. A qu tipo de lpidos pertenecen las vitaminas A, E y K?
24. Cul es la molcula precursora de las hormonas sexuales?
25. A qu llamamos grupo CHON? Por qu ser importante?
26. Cuntas uniones peptdicas posee un octapptido y por qu?
27. Describe brevemente dos funciones de la glicoprotenas
28. Cul es el resultado probable de una alimentacin deficiente en uno o ms aminocidos
esenciales?
29. Analice el siguiente prrafo: De todas las conformaciones posibles, una protena adopta una
nica conformacin denominada conformacin nativa y es la conformacin fisiolgica ms
estable. Se est afirmando en dicho prrafo que la estructura nativa de una protena es rgida
y que no sufre variacin alguna mientras la misma es funcional? Respecto a las dems
conformaciones posibles, todas sern inestables?
30. Por qu con solo 20 aminocidos pueden sintetizarse millones de protenas diferentes?
31. Qu relacin existe entre vitaminas y enzimas?
43
Tecnologa Mdica
32. A qu llamamos nucletido?

33. Indica todas las diferencias que existen entre las molculas de ADN y ARN
34. Escribe la secuencia de bases de la hebra complementaria de una hebra de ADN cuya
secuencia es la siguiente: 5-ATCCTAATGGAATGTCA-3
35. Qu tipos de ARN conoces? Explica brevemente la funcin de cada uno de ellos.
36. Todas las clulas tienen ADN? Hay "cosas" que no sean clulas que tengan ADN?
37. Realiza un cuadro comparando hidratos de carbono, lpidos, protenas y acidos nucleicos
respecto a:
1.
2.
3.
4.
Caractersticas Qumicas.
Funciones Biolgicas
Ubicacin en la clula
Ejemplos.
44
Tecnologa Mdica
Taller 2
MEMBRANA Y CITOESQUELETO
1. Nombre 4 molculas o estructuras
componentes de las membranas
plasmticas.
2. Mencione 4 propiedades de las
membranas plasmticas.
3. Qu molculas constituyen las
membranas plasmticas?
4. Mencione 3 funciones de las protenas
integrales de las membranas.
5. Qu es la difusin? Qu fuerza la
conduce?
6. Qu entiende por Osmosis?
7. Cuando se introduce una clula en un
medio hipertnico, Qu ocurre? Si
es hipotnico o isotnico?
8. Por qu todas las clulas vivas de los organismos estn rodeadas por un medio lquido?
9. Qu tipo de protenas contiene la membrana y cul es su funcin?
10. Qu tipo de molculas no difunden por la membrana plasmtica?
11. Qu tipo de movimientos realizan los fosfolpidos?
12. Qu clulas generan potencial de accin?
13. Indicar si las siguientes afirmaciones son verdaderas o falsas justificando todas las respuestas:
a. ____ Una molcula polar atravesar libremente la membrana plasmtica
b. ____ Una molcula pequea atravesar libremente la membrana plasmtica
c. ____ Los iones solo atraviesan la membrana por transporte activo
d. ____ Todos los mecanismos de transporte a travs de protenas implican gasto de energa
14. Por qu son necesarias las protenas canal para el transporte de iones a travs de la
membrana plasmtica? Por qu resulta funcional que los canales sean protenas transmembranales de "mltiples pasos"?
15. Haga un esquema de la membrana plasmtica e indique la concentracin de Na+, K+ y Ca2+ en
los compartimentos intra y extra celular.
16. Qu indica el ndice de hidrofobicidad en la cadena de aminocidos de una protena? Cmo
espera que sea el perfil de hidrofobicidad en una protena que tiene cuatro regiones
transmembranales?
17. Es activo o pasivo el transporte de K+ a travs de los canales de K+ de fuga en la membrana
plasmtica?
18. Los cationes Na+ y K+ estn:
a) en concentraciones iguales en el lquido infra y extracelular
b) hay ms Na+ en el lquido intracelular
c) el Na+ no puede penetrar a la clula
d) el K+ est en mayor concentracin en la clula
e) en cantidades iguales en el lquido intracelular
19. Cul/es de las siguientes molculas difunden a travs de la bicapa lipdica sin una protena de
membrana que medie el proceso? ATP, CO2, serina, agua, glucosa, Na+.
45
Tecnologa Mdica
20. Qu son los RAFTs (dominios de membrana resistentes a detergente)?

21. El transporte Na+/glucosa acopla la captacin de Na+ con la de glucosa en el dominio apical
de una clula epitelial. El movimiento de Na+ es a favor o en contra del gradiente
electroqumico? El transporte del Na+ es activo o pasivo? Y en el caso de la glucosa?
Discutir en base a la respuesta dada si este proceso de transporte es activo o pasivo.
22. Cuando una sustancia es muy grande, una parte de la membrana celular la rodea para
transportarla al citoplasma. A qu proceso le corresponde esta descripcin?
23. La endocitosis es el proceso por el cual una clula animal ingiere partculas de alimento y las
digiere en el interior de una vacuola que forma cuando la membrana celular engloba la
partcula; a este proceso se le conoce como digestin intracelular. Los hongos por el contrario
secretan enzimas al exterior de la clula para degradar el material que, posteriormente
absorvido, sirve de alimento; a este proceso se le conoce como digestin extracelular. Las
clulas de los vegetales no realizan ninguno de los dos procesos. Por qu? Cmo obtienen
sus alimentos?
24. Qu diferencia existe entre membrana citoplasmtica y pared celular?
25. Defina que se entiende por citoesqueleto de clulas eucariticas y discuta que caracterstica
estructural fundamental renen sus componentes.
26. Qu funciones cumple el citoesqueleto en las clulas?
27. Nombre y describa brevemente los principales organelos
de una clula animal tpica (ej. hepatocito).
28. Cules son las protenas especficas que componen los
distintos tipos de filamentos? Sealen como estn
formados los microfilamentos; filamentos intermedios y
microtubulos.
29. Explique se entiende por la polimerizacin y dinmica del
citoesqueleto
30. Describa las diferentes estructuras que se forman a partir
de los microtubulos.
31. Esquematice un corte transversal de un flagelo. Qu
diferencias observas entre el tallo o axonema de un
flagelo y su corpsculo basal?
32. Cmo se inicia la contraccin muscular, y como es terminada?
33. Compare a los polmeros de actina y tubulina, presente sus principales semejanzas y razona
porque se necesitan aproximadamente 10 veces ms tubulina que actina para obtener un
filamento de la misma longitud.
34. Defina a los componentes del centro organizador de microtubulos de una clula animal y
explique el proceso de crecimiento dirigido y maduracin de microtubulos.
35. Qu caractersticas presenta el citoesqueleto de eritrocitos?
36. Seale la importancia de las siguientes molculas: actina, queratina, nexina, miosina,
espectrina.
37. Qu elementos del citoesqueleto participan en el transporte de organelas? Explica
38. Qu son las protenas motoras? Qu propiedades enzimticas poseen? Qu tipo de energa
utilizan? Qu ejemplos conoce?
39. Existen protenas motoras especficas para cada tipo de filamento del citoesqueleto? Existen
protenas motoras que utilizan ms de un tipo de filamento?
46
Tecnologa Mdica
40. Qu entiende por polaridad de los microtbulos, cul es el polo positivo y negativo de ellos y
hacia donde estn orientados en los distintos tipos celulares?
41. Qu caractersticas de los microtbulos utilizan las protenas motoras para poder viajar en un
sentido u otro del microtbulo?
42. Qu participacin tiene los microtbulos en el transporte y formacin de vesculas que
participan en la sinapsis?
43. Cmo participan los microtbulos en la distribucin de las organelas y en la formacin de la
nueva membrana nuclear?
44. Explique qu sucede en la distrofia muscular de Duchene respecto al citoesqueleto
45. Esquematice el mapa del trfico proteico intracelular de una clula eucaritica tipo. Resalte
las rutas que necesitan seales activas y explique brevemente las caractersticas de las
mismas.
46. Las protenas pueden transportarse a travs de los diferentes compartimientos de una clula
eucaritica de dos maneras fundamentalmente diferentes. Discuta ambas.
47. Qu funciones cumplen las inclusiones en las clulas animales?
48. Menciones inclusiones citoplasmticas de reserva en clulas animales, vegetales y bacterias.
47
Tecnologa Mdica
Taller 3
ORGANELOS DE MEMBRANA
1.
2.
3.
4.
5.
Cules son los principales organelos de una clula Animal?

Qu organelos caracterizan a una clula vegetal?
Por dnde circulan las protenas formadas por el RER?
Qu consecuencias puede tener el alcohol y otras drogas en las clulas hepticas?
Qu relacin puede tener la presencia de un aparato de Golgi muy desarrollado en las
glndulas mamarias?
6. Dnde se forman los Lisosomas?
7. Qu le puede pasar a una clula si se le rompen sus lisosomas?
8. Qu relacin se puede establecer entre una vacuola que almacena nutrientes y los lisosomas?
9. En qu partes de las plantas encontramos clulas con cloroplastos? Recuerda y escribe en que
consiste la fotosntesis.
10. Qu organelos participan en los procesos que generan ATP?
11. Cul o cules organelos debern estar muy desarrollado en una clula heptica que produce
lpidos?
12. Cul organelo deber estar muy desarrollado en una clula que necesita protenas?
13. Qu organelos y estructuras estn presentes solo en las clulas animales?
14. Qu organelo presente en las clulas eucariticas est presente en la procariotas?
15. Que organelos y estructuras celulares participan y como lo hacen en las siguientes situaciones:
a) A la clula ingresa una compleja molcula de carbohidrato
b) En el citoplasma se encuentra una sustancia extraa que debe ser desalojada.
c) Un espermatozoide debe fecundar lo antes posible el ovocito.
d) Un leucocito (glbulo blanco) debe atrapar y comerse a un virus.
e) Una protena es sintetizada y colocada en la membrana externa.
16.
Correlacione las funciones principales de cada organelo o estructura:
a) Membrana plasmtica
b) Ribosomas
c) Mitocondrias
d) Cloroplastos
e) Vacuolas
f) Lisosomas
g) Centrosoma
h) Retculo Rugoso
i) Retculo Liso
j) Peroxisomas
k) Aparato de Golgi
Formacin de las fibras del Huso mittico

Sntesis y glicosidacin de protenas
Transporte activo y pasivo
Sntesis de protenas celulares
Sntesis de fosfolpidos, colesterol y otros lpidos
Respiracin celular aerobia
Depsito de agua, pigmentos y sales hidrosolubles
Digestin intra y extracelular
Descomposicin del H2O2 en agua y O2
Depsito de protenas, empaquetacin
Fotosntesis
16. Analiza la imagen de la derecha y conteste a las siguientes preguntas:

a) Qu proceso celular es el que est representado por la flecha hacia arriba?
b) Cules son los componentes celulares indicados con nmeros?
c) Enuncie la funcin que realiza cada organelo o estructuras que participa en
este proceso.
48
Tecnologa Mdica
17. Describa la estructura de los ribosomas eucariticos. Indique el lugar en el que se forman, su
composicin qumica, su funcin, localizacin celular y nombre dos orgnulos celulares que
contengan ribosomas en su interior.
18. Las clulas del pncreas tienen gran nmero de ribosomas, mientras que las clulas del corazn
tienen gran nmero de mitocondrias. D una explicacin razonada a estos hechos.
19. Las clulas vegetales tienen cloroplastos y mitocondrias. Teniendo en cuenta que los
cloroplastos generan energa, para qu necesitan mitocondrias las plantas? Razone la
respuesta.
20. Si se inhibe la cadena transportadora de electrones en la mitocondria, cmo se afectaran la
difusin simple, la difusin facilitada y el transporte activo?
21. Los eritrocitos de mamferos son clulas que al madurar pierden su ncleo. Su vida media es de
unos 120 das. Explique razonadamente por qu estas clulas viven sin ncleo y tienen
protenas.
22. En un tubo de ensayo se ha aislado un orgnulo celular. De qu orgnulo se trata si se
desprenden burbujas de oxgeno cuando se aade agua oxigenada al tubo? Razone la respuesta.
23. En otro tubo de ensayo se ha aislado otro orgnulo que desprende burbujas de oxgeno al
aadirle agua y luz. De qu orgnulo se trata? Razone la respuesta.
24. Completa:
49
Tecnologa Mdica
Taller 4
ENERGTICA CELULAR
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
Seala las principales diferencias entre catabolismo y anabolismo.

De qu depende que una reaccin transcurra espontneamente?
Cmo se forma el ATP en las clulas?
Principales mecanismos de la regulacin metablica.
Qu son las rutas metablicas?
A qu se llama sistema termodinmico? Seala los principales sistemas termodinmicos que
conozcas.
Cules son los principales compuestos que intervienen como transportadores de electrones
en el metabolismo?
Seala cinco compartimentos celulares e indica los procesos metablicos que ocurren en ellos.
Cuntos tipos de clulas se diferencian atendiendo a la fuente de carbono que utilizan?
Cules son los principales intermediarios que participan en el metabolismo y qu papel
desempean?
Qu condiciones debe cumplir la regulacin metablica?
Qu se entiende por metabolismo? Qu procesos comprende?
Enuncia los dos principios fundamentales de la termodinmica.
Qu caractersticas tienen en comn los intermediarios transportadores que intervienen en el
metabolismo?
Qu ventajas representa la compartimentacin celular en el metabolismo?
Cul es la composicin del ATP? A qu debe su papel de intermediario energtico?
Qu es el recambio metablico?
Qu diferencia existe entre un organismo aerobio y uno anaerobio? Cul obtiene mayor
cantidad de energa?
En qu proceso obtiene una clula ms energa a partir de una molcula de glucosa, en la
respiracin o en la fermentacin? Razona la respuesta.
Diferencia entre organismos anaerobios estrictos y anaerobios facultativos.
Qu es un proceso de oxidacin?
Qu es una molcula altamente energtica?
50
Tecnologa Mdica
Taller 5
INSTRUMENTALIZACIN Y ABSORCIOMETRIA
I. INTRODUCCIN
Principios de absorciometra de UV/visible
La absorciometra aprovecha la propiedad de ciertos compuestos de absorber radiacin
electromagntica.
Los diferentes tipos de radiacin electromagntica: rayos X, luz ultravioleta (UV), luz
visible, luz infrarroja, ondas de radio, etc., se propagan a la misma velocidad, pero difieren en
longitud de onda y frecuencia. Para estas radiaciones se cumple la siguiente expresin matemtica
de la energa.
E=h x = h c
h
c
= constante de Planck
= velocidad de la luz en el vaco
= longitud de onda
= frecuencia
El ojo humano detecta la radiacin en un rango de longitudes de onda de 400 a 800 nm,
llamada luz visible (1 nm=10-9m).
La luz del espectro visible y del UV cercano (200 a 400 nm) posee la energa necesaria
para producir transiciones de electrones desde un orbital molecular de menor energa a otro de
mayor energa de ciertos compuestos, llamados cromforos. Las sustancias coloreadas absorben
luz visible, su color corresponde a la radiacin no absorbida. La luz solar es blanca, ya que
contiene radiacin de todo el espectro visible, aparte de otras radiaciones.
Ley de Lambert-Beer
La ley de Lambert-Beer es la ley fundamental de la absorciometra, ya que relaciona la
absorcin de la luz con la concentracin de las soluciones. Consideremos un haz de luz
monocromtica (luz de una sola longitud de onda) que atraviesa una solucin de un compuesto
contenido en un recipiente de vidrio. El siguiente esquema ilustra la situacin:
Intensidad luz
incidente
Io
Lmpara
Intensidad luz
transmitida
Monocromador
Cubeta que contiene una
solucin de una muestra
que absorbe luz
51
Tecnologa Mdica
Si el compuesto absorbe a la longitud de onda dada, I es menor que Io. Cuanto

mayor es el nmero de molculas de este cromforo encontradas por el haz de luz en su
camino, menor ser la intensidad de la luz transmitida. Dicho nmero de molculas
depende de la distancia recorrida a travs de la solucin (camino ptico = b) y de la
concentracin (c). El coeficiente de extincin molar () depende de la naturaleza de la
muestra. La relacin entre estos parmetros est dada por la ley de Lambert-Beer.:
I = Io x 10- bc
(1)
La forma de esta ley que se usa en la prctica es ms sencilla y se obtiene aplicando

logaritmos y reordenando:
log Io/ I = bc
Se define como absorbancia (A) de la solucin:
A = log Io / I
(2)
A = bc
(3)
Luego:
Ley de Lamber-Beer
Por convencin se usa el siguiente sistema de unidades:

b = camino ptico en cm.
c = concentracin en M
= coeficiente de extincin molar, en cm-1 x M-1
Sinnimos de absorbancia: Densidad ptica, extincin
Se define como transmitancia (T) de la solucin:
T = I / Io
(4)
es decir, la transmitancia es la fraccin de la intensidad incidente transmitida por la solucin.

T se suele expresar como porcentaje (%T)
% T = I / Io x 100
Aplicando logaritmos a (4) y reemplazando con (2) se obtiene:
A = -log T
52
(5)
Tecnologa Mdica
El coeficiente de extincin molar,, a una longitud de onda dada, es una caracterstica

propia del cromforo y representa la probabilidad de que el cromforo absorba la radiacin. Para
explicar el significado de se suele sealar que es igual al valor numrico de la absorbancia que
tendra una solucin 1 M del cromforo si el camino ptico es igual a 1 cm. Es importante
recalcar el carcter hipottico de esta afirmacin, ya que normalmente no es posible preparar
soluciones de concentracin 1 M de los cromforos (si el PM es alto, 1 M es una concentracin
extremadamente alta). Los coeficientes de extincin pueden tomar valores hasta 100.000 cm-1 M-1
e incluso mayores.
La ley de Lambert-Beer indica que la absorbancia aumenta en forma lineal con la
concentracin (con un paso ptico constante, b=cte), mientras que la transmitancia disminuye en
forma exponencial:
Camino'p*co'
Camino'p*co'
El grfico de la absorbancia de un cromforo en solucin en funcin de la longitud de onda

() se denomina espectro de absorcin o espectrograma de absorcin.
Un espectro de absorcin se obtiene variando la para el camino ptico (b) y la
concentracin (c) constantes, y por lo tanto representa la variacin de A con .
Espectro de absorcin de riboflavina (22 M en fosfato de sodio 0.1 M, pH 7,06, en un camino

ptico de 1 cm).
53
Tecnologa Mdica
El espectro de absorcin de UV/visible es caracterstico para cada cromforo, por

lo que puede ser usado para su identificacin. Las caractersticas espectroscpicas se
pueden resumir indicando la posicin de los mximos de las bandas de absorcin (mx)
con los correspondientes coeficientes de extincin molar. Por ejemplo, para riboflavinas
a pH 7.0:
mx
(M-1 cm-1 )
266
373
445
31.800
10.400
12.500
La riboflavina tiene color amarillo, debido a que su nica banda en la regin del visible a
445 nm, corresponde a absorcin de luz azul.
INSTRUMENTOS DE MEDICIN
Los componentes bsicos de todos los instrumentos que se usan en absorciometra de
UV/visible son:
! Fuente de luz
! Parte del instrumento o dispositivo que permite seleccionar la longitud de onda (filtros o
monocromadores )
! Portador de muestra
! Detector
! Dispositivo que permite la lectura de la medida directamente o inscriptor
Se pueden distinguir dos tipos de instrumentos:
a) Fotmetros de filtro: la seleccin de la longitud de onda se realiza mediante filtros
intercambiables
b) Espectrofotmetros: poseen un monocromador; son ms sofisticados que los fotmetros de
filtro. Por otra parte se distinguen instrumentos que operan en el rango visible solamente y otros
que abarcan el UV y el visible (tienen 2 fuentes de luz).
Fuente de Luz:
No existe una fuente de luz que proporcione radiacin de todo el rango espectral
UV/visible de suficiente intensidad, por consiguiente, se usan fuentes diferentes:
Fuente de luz visible: lmpara de tungsteno. Sirve para 340 - 850 nm aproximadamente.
54
Tecnologa Mdica
No proporcionan luz realmente monocromtica sino que permiten el paso de un cierto

rango de longitudes de onda alrededor de la longitud de onda de mxima transmitancia del filtro.
Monocromadores:
Poseen un elemento dispersor, que puede ser un prisma o una red de difraccin. El
elemento dispersor separa los haces de luz de diferente longitud de onda. Un sistema de espejo
permite dirigir el haz de luz de la longitud de onda deseada hacia la ranura de salida. Al cerrar ms
la ranura aumentar la monocromaticidad de la luz, pero siempre pasar un cierto rango de
longitudes de onda. En la prctica se considera que un espectrofotmetro opera con luz
prcticamente monocromtica. La calidad de un espectrofotmetro depende, en parte importante,
de esta caracterstica.
Un monocromador permite variar la en forma continua, condicin necesaria para obtener
espectros de absorcin. Con un fotmetro de filtro no es posible obtener espectros de absorcin.
Portador de muestra:
All se ubica la o las cubetas con las soluciones de muestra y de referencia (blanco). Las
cubetas son de vidrio o plstico (para el visible) o cuarzo (para el UV).
Detector:
Los detectores son de tipo fotoelctrico: al incidir luz producen corriente elctrica, de
intensidad proporcional a la intensidad de la luz. Se distinguen celdas de capa barrera (solamente
para fotmetros de filtro), fototubos y tubos fotomultiplicadores.
Lectura o registro:
La mayor parte de los instrumentos indican o registran el valor de la absorbancia. si el
instrumento informa la transmitancia se calcula A usando la ecuacin (5). La absorbancia se mide
en 3 cifras despus de la coma. El rango de A medible es de 0,000 hasta 1,500 o hasta 2,000
(dependiendo del instrumento).
En este trabajo prctico y en los subsiguientes se usar un fotocolormetro Metertech SP830, un pequeo fotocolormetro con red de difraccin. El instrumento posee dos diferentes
fototubos intercambiables: un fototubo sensible en el rango de 340 a 650 nm (fototubo azul) y un
fototubo sensible en el rango de 650 a 350 nm; este ltimo requiere de un filtro de bloque azul.
Las instrucciones del manejo del instrumento sern entregadas al inicio del trabajo prctico
55
Tecnologa Mdica
APLICACION DE LA ABSORCIOMETRIA EN EL ANALISIS CUANTITATIVO

1. DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE UN CROMOFORO PURO
Midiendo la absorbancia de la solucin problema en un espectrofotmetro y conociendo el
coeficiente de extincin correspondiente se puede calcular la concentracin. Normalmente, se usa
la longitud de onda del mximo de una banda, cuyo valor se encuentra en la literatura.
Un mtodo alternativo es construir una curva de calibracin de A en funcin de masas
conocidas del cromforo disuelto en un cierto volumen. Si se cumple la ley de Beer - Lambert, se
obtendr una recta. Interpolando en la recta la absorbancia de una solucin problema, se puede
determinar su concentracin. Sin embargo, se aconseja graficar A versus masa, ms bien que
concentracin (recordar clase terica).
2. DETERMINACIONES A TRAVES DE UNA REACCION QUIMICA O "TEST"
Compuestos que no pueden ser determinados en forma directa, porque no absorben
convenientemente, se hacen reaccionar con un reactivo especfico, formndose un cromforo.
Se realiza en paralelo el test con la muestra problema y con una o varias soluciones del
compuesto a determinar, de concentracin conocida (soluciones patrn). Posteriormente, se mide
la absorbancia.
Esta absorbancia ser proporcional a la concentracin del compuesto que se va a
determinar dentro de cierto rango de concentraciones. Si se us solamente una solucin, se calcula
la concentracin por proporcin directa:
C!(problema)!!!!!!!"""A"(problema)!
="
C!(estndar)!!!!!!!!!!!!A!(estndar)!
Si se usaron varias soluciones estndar se construye la curva de calibracin del test, y se

interpola en sta. Este grfico ser una recta cuya pendiente se ha llamado factor de calibracin,
k:
A = k ."C
En forma alternativa a interpolar en la recta, se puede calcular C a partir de la absorbancia
medida, dividiendo por el factor de calibracin.
56
Tecnologa Mdica
Casos en los cuales se realiza un test:

1. El compuesto no absorbe en todo el espectro UV - visible:
Se realiza el test, generndose un cromforo el cual generalmente absorbe en el visible (se
genera un color) o excepcionalmente solamente en el UV. Ejemplo: Determinaciones de
azcares.
2. El compuesto absorbe en una regin espectral (generalmente UV) en la cual no se puede
efectuar la determinacin porque:
La solucin problema es una mezcla que contiene otros compuestos que absorben la misma
regin que el compuesto a determinar o/y el instrumento de medida permite medir solamente en el
rango visible. Ejemplo: determinacin de protenas.
BIBLIOGRAFIA
1. H.Willard, L.Merrit, J.Dean "Instrumental Methods of Analysis"
2. G.Ewing "Instrumental Methods of Chemical Analysis"
3. A.Strobel "Instrumentacin Qumica"
4. S.B.Brown, Ed. "An Introduction to Spectroscopy for Biochemists"
57
Tecnologa Mdica
EJERCICIOS CON RESPUESTA

1. Convertir los siguientes valores de absorbancia en tanto por ciento de tramitancia:
a. 0.375
b. 1.325
c. 0.012
R: a. 2,37; b. 21,13; c. 1,02
2. Convertir los siguientes valores de tanto por ciento de tramitancia en valores de absorbancias:
a. 33.6
b. 92.1
c. 1.75
R: a. 1,526; b. 1,964; c. 0,243
3. Una solucin acuosa de KMnO4 (pM 157) de concentracin 7.5 x 10-5M tiene una absorbancia
de 0.502 medida a 485 nm en celda de 1.5 cm. Calcule cual sera el porcentaje de tramitancia
medido en una celda de 10 cm.
R: 0,045%T
4. Del anlisis de los siguientes resultados experimentales, compruebe si hay o no cumplimiento
de la ley de Beer. Explique:
[M]$
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
%$T$
30
40
50
60
70
R: no hay
5. Una solucin de una muestra coloreada que responde a la ley de Beer, muestra una
transmitancia de 80.0% cuando se mide en una celda de 1,00 cm de longitud.
a. Calcule el % T para una solucin de doble concentracin en la misma celda.
b. Cul debe ser la longitud de la celda para obtener la misma transmitancia (80%) en el
caso de una solucin cuya concentracin es dos veces la original?
c. Si la concentracin original era 0,005% (p/v), cul es el valor de la absortividad a?
R: a) 64% T; b) 0.5 cm y c) a = 1,938 L / g.cm
6. Se realiza una curva de calibracin utilizando seis muestras de concentracin conocida de
protenas segn se indica en la tabla adjunta. Diluciones de muestra stock de protenas gener
las concentraciones que se indican. Mediciones de absorbancia fueron realizadas a 280nm.
a. Con los datos obtenidos construir una curva de calibracin.

b. Se analizaron 4 muestras de concentracin desconocida que presentaron absorbancias
de (i) 0,107 (ii) 0,721 (iii) 1,538 y (iv) 0,325. Utilizando la curva de calibracin
construida determinar la concentracin en mg/ml de estas cuatro muestras.
R: b) (i) 0,0223; (ii) 0,0702; (iii) 0,1340 y (iv) 0,0394 en mg/ml
58
Tecnologa Mdica
EJERCICIOS PROPUESTOS
Entregar al final del Taller
1. Convertir los siguientes valores de absorbancia en tanto por ciento de transmitancia:
a. 0,754
b. 1,865
c. 0,008
2. Convertir los siguientes valores de tanto por ciento de transmitancia en valores de
absorbancias:
a. 13,8
b. 89,9
c. 4,56
3. Una solucin acuosa de KMnO4 (pM 157) de concentracin 3,8 x 10-7 M tiene una
absorbancia de 0.458 medida a 480 nm en celda de 2 cm. Calcule el porcentaje de
transmitancia medido en una celda de 5 cm.
4. Se realiza una curva de calibracin utilizando seis muestras de concentracin conocida de
protenas segn se indica en la tabla adjunta. Diluciones de muestra stock de protenas
gener las concentraciones que se indican. Mediciones de absorbancia fueron realizadas a
280nm
a. Con los datos obtenidos construir una curva de calibracin.

b. Se analizaron 4 muestras de concentracin desconocida que presentaron
absorbancias de (i) 0,205 (ii) 0,541 (iii) 0,978 y (iv) 1,256. Utilizando la curva de
calibracin construida determinar la concentracin en mg/ml de estas cuatro
muestras.
59
Tecnologa Mdica
Taller 6
ENZIMAS
I. Explique el significado de los siguientes trminos:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
Apoenzima
Catalizador
Coenzima
Cofactor
Complejo enzima-sustrato
Constante de michaelis, Km
Ecuacin de Michaelis-Menten
Especificidad de la reaccin
Estereoespecificidad
Grfica de Lineweaber-Burk
Grupo prosttico
Hidrolasa
Holoenzima
Inhibicin competitiva
Inhibicin acompetitiva
Inhibicin no competitiva
Inhibidor
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27.
28.
29.
30.
31.
32.
33.
Isomerasa
Liasa
Ligasa
Modificacin covalente
Modulador alostrico
Nivel de afinidad
Nmero de recambio
Oxidorreductasa
Producto
Sintasa
Sintetasa
Sitio activo
Sitio regulador
Sustrato
Transferasa
Velocidad mxima, Vmax
II. Responda brevemente cada situacin planteada:

34. Dibuje un grfico de la velocidad de reaccin en funcin de la temperatura explicando qu
pasa a baja temperatura y alta temperatura.
35. La hexoquinasa cataliza la fosforilacin de la glucosa y la fructosa utilizando ATP. Siendo el
Km para la glucosa 0,13 mM, mientras que para la fructosa es 1,3 mM. Indicar por cul de ambos
sustratos la enzima tiene mayor afinidad. Considere que ambas Vmx son muy similares para
ambos sustratos.
36. El metabolismo del etanol se produce fundamentalmente en el hgado en dos pasos: en
principio el etanol se oxida a acetaldehdo por la enzima alcohol deshidrogenasa (ADH) que
consume NAD+. El acetaldehdo es medianamente toxico, dado que normalmente es oxidado por
la aldehdo deshidrogenasa (ALDH) a acetato. El Metanol tambin es sustrato de la etanol
deshidrogenasa, pero el producto formado que se acumula es muy toxico.
ADH
Etanol + NAD+
Acetaldehido + NADH + H+
Acetaldehido + NAD+
ALDH
Acetato + NADH + H+
60
Tecnologa Mdica
a. A un hombre de 43 aos se le prescribi disulfiran pero se le advirti que no consumiera alcohol

durante el tratamiento. El disulfiran inhibe en forma irreversible a la enzima aldehdo
deshidrogenasa y no presenta toxicidad en ausencia de alcohol. El paciente bebi una gran
cantidad de etanol en una fiesta y tuvo que ser trasladado al hospital, donde muri esa misma
noche. Por qu el frmaco resulto txico para este paciente?
b. Una persona ingiri vino adulterado con metanol. Posteriormente debi ser hospitalizada. Como
parte del tratamiento, el mdico le suministr un exceso de etanol. Cul es el fundamento de este
tratamiento?
c. Los orientales son muy sensibles a las bebidas alcohlicas. Esto se debe a que la forma
mitocondrial de la enzima aldehdo deshidrogenasa de bajo Km est ausente. Estas personas solo
poseen la enzima citoslica de alto Km.
i. En base a esta informacin explique la mayor susceptibilidad al alcohol en estos
individuos.
ii. Qu son entre s las formas mitocondrial y citoslica de la enzima aldehdo
deshidrogenasa?.
61
Tecnologa Mdica
Taller 7:
METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS
I. Observa el esquema siguiente, que representa la cadena de reacciones de la gliclisis y contesta
a las preguntas que se formulan (Use una hoja adicional de ser necesario):
1. Las reacciones que tienen lugar hasta
llegar a la fructosa 1,6-difosfato
constituyen la fase de preparacin de la
gluclisis.
Qu
transformaciones
qumicas tienen lugar durante esta fase y
cul es el balance energtico de la
misma?.
2. Las dobles flechas representan la
reversibilidad de las reacciones que se
producen en la gluclisis. Las
transformaciones que tienen lugar en
sentido contrario a la gluclisis, desde el
cido pirvico hasta la glucosa,
representan una parte del proceso de
sntesis de los polisacridos. Cmo se
llama este proceso? Qu tipo de
organismos, y en qu rganos, llevan a
cabo la sntesis de polisacridos, y con
qu finalidad?
3. La mayora de las reacciones
representadas estn controladas por una
sola enzima, que acta en las dos
direcciones.
Sin
embargo,
la
transformacin de glucosa en glucosa 6fosfato, la transformacin de fructosa 6fosfato en fructosa 1,6-difosfato y la
transformacin de fosfoenolpirvico en
pirvico utiliza dos enzimas diferentes,
segn la reaccin se produzca en un
sentido u otro. Qu finalidad tiene este
doble control en relacin con el
equilibrio homeosttico?
4. Si un ATP produce una energa final de 7,3 kcal/mol, y sabiendo que la oxidacin total de una
molcula de glucosa produce 688 kcal/mol:
a. cul es el balance energtico final de la gluclisis representada?
b. cul es la eficiencia energtica de la gluclisis, en tanto por ciento, con relacin a la
oxidacin de la glucosa?
62
Tecnologa Mdica
5. Observa nuevamente las reacciones representadas. Supn que un organismo que realiza la
gluclisis slo dispone de seis molculas de NAD+ al iniciar las reacciones catablicas para
degradar la glucosa. Qu ocurrir cuando se agoten todas las molculas de NAD+? De qu
forma se pueden recuperar las molculas de NAD+?
6. De acuerdo con las conclusiones de la respuesta anterior, cuando decimos que la gluclisis
anaerobia es el mecanismo ms comn de obtencin de energa en el mundo vivo y que est
presente en todas las bacterias, nos estamos refiriendo a las reacciones representadas en el
esquema inicial?
7. Qu diferencias estructurales y funcionales presentan los complejos prostticos ATP y
NAD+?
8. Haga una lista de los glcidos ms comunes de la dieta humana. Especifique en cada caso si es
disacarido, oligosacrido o polisacrido y seale los monosacridos constituyentes.
9. Haga una lista de las distintas enzimas digestivas de los glcidos y especifique localizacin y el
tipo de enlace que hidrolizan.
10. Teniendo en cuenta las caractersticas de los glcidos:
a) Justifique por qu son los nutrientes ms importantes desde el punto de vista cuantitativo.
b) Indique por qu son los nutrientes menos importantes desde el punto de vista cualitativo.
c) Explique la ventaja biolgica del almacenamiento de glucosa en forma de polisacrido.
11. De la va glicoltica:
a) Indique en el esquema anterior la vinculacin de los intermediarios: Glucosa 6-P, Fructosa
6-P, Gliceraldehido 3-P, 3 Fosfoglicerato, Fosfoenolpiruvato y Piruvato de esta va con
otras rutas metablicas.
b) Haga el balance energtico en moles de ATP para la oxidacin de 1 mol de glucosa en
condiciones aerbicas y anaerbicas.
c) Indica los mecanismos de regulacin alostrica de la ruta mtabolica.
12. Establezca una comparacin entre los procesos de glucognesis y glucogenlisis en cuanto a:
a) localizacin
b) consideraciones energticas
c) etapas
d) enzimas participantes
13. Compare la importancia del metabolismo del glucgeno en hgado y msculo y explique la
ventaja biolgica del almacn de glucgeno en forma de grnulos.
14. Seale las caractersticas generales del ciclo de las pentosas y su importancia biolgica.
15. En una dieta carente de glcidos, pero abundante en aminocidos se afectar la glicemia?
Explique.
63
Tecnologa Mdica
Taller 8
RESPIRACIN CELULAR
I. Determinar la produccin total de ATP (o sus equivalentes energticos) y el nmero de
molculas de CO2, obtenidos durante la hidrlisis completa de _________: (Resolver
utilizando las rutas metablicas entregadas y considerando las siguientes equivalencias
energticas donde en la mitocondria a partir de 1 NADH produce 2,5 ATPs y a partir de
FADH2 produce 1,5 ATPs).
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Una molcula de glucosa, cuando la clula utiliza la lanzadera de malato/aspartato.

Una molcula de glucosa, cuando la clula utiliza la lanzadera de glicerol/fosfato.
Una dextrina de limite formada por 6 monmeros (usa la lanzadera de malato/aspartato).
Una cadena de glicgeno de 6 monomeros (usa la lanzadera de malato/aspartato).
3 molculas de sacarosa, cuando la clula utiliza la lanzadera de malato/aspartato.
2 molculas de lactosa, cuando la clula utiliza la lanzadera de glicerol/fosfato.
6 molculas de ribosa 5fosfato, cuando la clula utiliza la lanzadera de glicerol/fosfato.
4 molculas de gliceraldehido 3fosfato, cuando la clula utiliza la lanzadera de
malato/aspartato.
9. 3 molculas de cido lctico, cuando la clula utiliza la lanzadera de malato/aspartato.
10. Una molcula de Acetil Coenzima A.
II. Responda brevemente cada situacin planteada:
11. Explica las ventajas que tiene para la clula, cada una de las siguientes reacciones
reguladoras:
a. El complejo piruvato deshidrogenasa es inhibido por ATP.
b. La isocitrato deshidrogenasa es estimulada por ADP.
c. La piruvato carboxilasa es estimulada por acetil-CoA.
d. La citrato sintasa es inhibida por NADH.
e. El complejo piruvato deshidrogenasa es inhibido por cidos grasos.
f. La isocitrato deshidrogenasa es estimulada por Ca2+
12. El hongo Bipolaris maydis ocasiona grandes prdidas en agricultura. La enfermedad que
causa en las plantas es debida a una toxina que hace la membrana interna mitocondrial resulte
permeable a iones y a molculas pequeas.
a. Qu proceso afecta esta toxina? Explcalo en un esquema.
b. Cmo es posible que esta toxina afecte a las plantas, que sintetizan ATP en el cloroplasto
durante la fotosntesis?
13. La enfermedad beriberi se debe a una deficiencia de tiamina. Estos enfermos tienen elevados
niveles de piruvato y -cetoglutarato en sangre. Qu enzimas y reacciones metablicas se
volvern ms lentas en un individuo que padece beriberi?
14. La glicolisis puede operar bajo condiciones anaerobias y aerobias, mientras que el ciclo del
cido ctrico es estrictamente aerbico. Por qu?
64
Tecnologa Mdica
15. Tras un ejercicio muscular intenso la concentracin de lactato en sangre aumenta mucho.
a. Cul es la causa de esto?
b. Al cabo de un periodo corto de tiempo, dicho lactato vuelve el nivel normal. Cul es su
destino?
16. Explica que significan los trminos de Anaplertico y Anfiblito y como se aplican en el
contexto del ciclo de Krebs.
17. El dinitrofenol (DNP) es un agente desacoplante, porque tiene la capacidad de aislar el flujo
de los electrones y el bombeo de H+ de la sntesis de ATP. Esto significa que la energa de la
transferencia de electrones no se puede usar para la sntesis de ATP. Hace 50 aos, se
suministraba DNP como un frmaco para ayudar a los pacientes a perder peso.
a. Por qu tendr ese efecto el DNP?
b. Por qu ser peligroso su uso?
18. El trematol es un veneno metablico derivado de una planta venenosa llamada raz blanca de
serpiente. Las vacas se comen esta planta concentrando el veneno en su leche. El veneno
inhibe las enzimas hepticas que convierten el cido lctico en otros compuestos metablicos.
a. Por qu el ejercicio fsico aumenta los sntomas del envenenamiento por trematol?
b. Por qu desciende el pH de la sangre en las personas que han ingerido trematol?
19. Si se aslan mitocondrias y se sitan en un tampn de pH muy bajo, las mitocondrias
comienzan a producir ATP. Por qu?
20. Explique por qu las clulas en condiciones anaerbicas la relacin piruvato/ lactato es mucho
menor que 1 mientras que bajo condiciones aerbicas la razn piruvato/ lactato es mucho
mayor que 1.
21. Aspartame es un popular endulzante conocido habitualmente como Nutrasweet u otros
nombres comerciales. Este compuesto es 200 veces ms dulce que la tpica azcar granulada.
Si consideramos que tanto aspartame como la azcar tienen un aporte energtico similar (1g
aspartame = 4 kilocalorias; 1 g de azcar granulada = 3.9 kilocalorias)
a. Es correcto su uso como diettico?
b. Si es correcto Cmo se justifica su uso como endulzante de bajas caloras?
65

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UNIVERSIDAD DE TALCA

Instituto de Ciencias Biolgicas

REGLAMENTO DEL LABORATORIO

EXIGENCIAS PARA LAS ACTIVIADES PRCTICAS

1.- La asistencia a estas actividades es obligatoria en un 100%. No obstante, si el estudiante no asiste a

REGLAMENTO INTERNO DE LABORATORIO:

(14:20 15:20) Sala: 811

Laboratorios: Martes Bloques 6-7 (14:20 16:30) Laboratorios de Biologa

Trabajo Autnomo 1: Clasificacin de los seres vivos.

Trabajo Autnomo 2: Bioelementos.

Lab 1: Instrucciones generales de uso de laboratorio. Uso del

Sorteo de temas de seminario. Instrucciones.

Lab. 2: Reconocimiento Bioelementos, Carbohidratos y Lpidos.

Lab. 3: Reconocimiento de protenas.

Taller 2: Membrana y citoesqueleto.

Lab. 4: Observacin microscpica de clulas procariotas y eucariotas

Taller 3: Organelos de membrana.

Lab. 5: Transporte de membrana

Lab. 6:. Observacin y funcin de mitocondrias y peroxisomas

Taller 4: Energtica celular.

Taller 5: Instrumentalizacin y absorciometra.

Lab. 7: Aplicacin prctica de la Ley de Lambert-Beer.

Taller 7: Metabolismo carbohidratos.

Lab. 8: Determinacin actividad enzimtica de la Amilasa salival.

Lab. 9: Determinacin actividad enzimtica de la Invertasa de levadura.

Taller 8 Respiracin celular.

Lab 1: Instrucciones generales de uso de laboratorio. Uso del microscopio ptico.!

Lab. 2: Reconocimiento Bioelementos, Carbohidratos y Lpidos.!

Lab. 3: Reconocimiento de protenas!

Lab. 4: Observacin microscpica de clulas procariotas y eucariotas!

Lab. 5: Transporte de membrana!

Lab. 6:. Observacin y funcin de mitocondrias y peroxisomas!

Lab. 7: Aplicacin prctica de la Ley de Lambert-Beer.!

Lab. 8: Determinacin actividad enzimtica de la Amilasa salival I).

Lab. 9: Determinacin actividad enzimtica de la Invertasa de levadura.

Trabajo Autnomo 1: Clasificacin de los seres vivos.

Trabajo Autnomo 2: Bioelementos.

Taller 2: Membrana y citoesqueleto

Taller 3: Organelos de membrana

Taller 4: Energtica celular

Taller 5: Instrumentalizacin y absorciometra.

Taller 7: Metabolismo carbohidratos.

Taller 8: Respiracin celular.

El alumno deber desarrollar las siguientes capacidades:

Identificar las partes pticas y mecnicas del microscopio.

Microscopio ptico compuesto

b) ENFOQUE DEL MICROSCOPIO

REGLAS GENERALES DE OBSERVACION

II. PREPARACIONES MICROSCOPICAS TEMPORALES.

Este tipo de test es, cuantitativo o cualitativo? Explique

2.- Complete la informacin requerida a continuacin:

b.- Los bioelementos se clasifican en:

ELEMENTOS TRAZA: aquellos que se necesitan en cantidades nfimas. Estos son:

e.- En la sangre, el bioelemento Carbono se encuentra constituyendo un tipo especial de molcula

Planifique un experimento que le permita observar la formacin de cristales de hidroxiapatita

Seale reactivos necesarios

IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS Y LIPIDOS

IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS: El almidn se identifica con lugol (solucin de

Numere 6 tubos de ensayo de 1 a 6, a los tubos 1 y 2 agregue 1 ml de almidn.

** Base o lcali fuerte

3. Qu efecto habra observado en la solucin de albmina si se agrega una solucin de Mercurio

Figura 1: Esquema de la reaccin de Biuret

Ejemplos de aminocidos: nmbrelos e identifique cul es el grupo cido, el grupo amino y el

Figura 3: Plegamientos de las protenas. El plegamiento alcanzado determina la forma final