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(19) REPUBLICA DE CUBA

(11) No de publicacin:
CU 22496 A1
(21) No. de solicitud : 37/95
(51) Int. Cl6:

A01C 1/08

Oficina Cubana de la
Propiedad Industrial

Certificado de Autor de Invencin

(12)

(71) Solicitantes: Universidad Central de las Villas; (CU)


(22) Fecha de presentacin

: 1995.04.06

(72) Inventor/es: Hernndez Prez, Ricardo (CU) ;


(30) Prioridad :

Fontanella Ros, Yoel (CU) ; Noa Carrazana, Juan C. (CU) ;


Manso Muro, Rolando (CU) ; Pichardo Moya, Tatiana
(CU); Crdenas Prez, Heriberto ; (CU)

(45) Fecha de publicacin : 1997.12.24

(73) Titular: Universidad Central de las Villas,


domiciliado en carretera de Camajuan km 5 1/2 , Santa
Clara; (CU)

(74) Agente:

Quintero Alvarez, Ana Gloria ; (CU)

(54) Ttulo: EQUIPO Y PROCEDIMIENTO DE ELECTROTERAPIA PARA EL SANAMIENTO


A VIRUS EN AJO ALLIUM SATIVUM L.

(57) Resumen:
Con el objetivo de hallar otros mtodos ms econmicos y rpidos para
obtener plantas libres del complejo viral del ajo (ALLIUM SATIVUM L.
), se desarroll un nuevo procedimiento a partir del uso de la corriente
elctrica, para obtener plantas libres de estos patgenos. Se construy un
equipo con el que se aplicaron los diferentes tratamientos, el cual est
formado por una fuente de voltaje estabilizada y regulable y una cubeta
de tratamiento. Con la aplicacin de corriente directa a los dientes de ajo y
luego la siembra "in vitro" de los pices se logra regenerar hasta el 98%
de los explantes, lo cual permite realizar el diagnstico serolgico en
menor tiempo para la determinacin de las enfermedades virales. Por otra
parte los tratamientos permiten obtener desde un 53 - 100% de plantas
sanas, comprobndose que al aumentar la corriente y/o la duracin de sta
la posibilidad de saneamiento aumenta. Hasta ahora los mtodos para la
eliminacin de virus traen como consecuencia grandes prdidas de
material
vegetal
y
de
recurso.

MEMORIA DESCRIPTIVA
37/95

EQUIPO Y PROCEDIMIENTO DE ELECTROTERAPIA PARA EL


SANEAMIENTO A VIRUS EN AJO ALLIUM SATIVUM L.
La presente invencin se relaciona con la rama agrcola y el empleo en el campo
de la virologa vegetal para el saneamiento a virus, interelacionndose con el
campo de la energa elctrica.
El cultivo del ajo Allium sativum L. se encuentra naturalmente afectado por
distintos virus. Ellos son los causantes de la enfermedad conocida como Mosaico
del Ajo, que se manifiesta en forma de estras que varan desde el verde claro
hasta el amarillo intenso. Esta enfermedad se encuentra asociada a la presencia
de dos o ms virus diferentes de caractersticas muy semejantes. Se ha logrado
aislar dos potivyrus con un largo normal de 700 850 nm, el cual produce
mosaico leve en las hojas llamado Leek Yellow Strep Virus (LYSV; Bos, 1981) y
Onion Yellow Dwarf Virus (OYDV; Bos, 1976). Adems, un carlavirus de 650
700 nm que no produce sntomas, llamado Shallot Latent Virus (ShLV; Bos et al.,
1978; Bos, 1982).
En pases donde han conseguido plantas libres de estos patgenos se han
reportado aumento en los rendimientos que van entre 30 y 70% (Marrou et. al,
1974) y 45% (Harranek, 1974).
Segn las tcnicas ms sensibles utilizadas actualmente para el diagnstico de
estos virus se emplea la tcnica ELISA segn Clark y Adams (1977) y como
comprobacin la tcnica de inmunoelectromicroscopa (IEM, Conci. 1991).
Para la obtencin de plantas libres la tcnica ms difundida es la extraccin de
meristemos menores de 0,3 mm. sembrados en medio de cultivo adecuado para
generar (Hernndez et. al., 1994), adems el uso de la termoterapia seguido de la
extraccin de meristemos logra entre 50 a 60% de plantas sanas, pero la
regeneracin del material es slo del 8% ( Conci, 1991), mientras que al utilizar
termoterapias alternas seguido del cultivo de meristemos se puede lograr un 18 %
de establecimiento y un 48 % de saneamiento (Hernndez et. al., 1995).
Una de las primeras experiencias con la aplicacin de la corriente elctrica fue
patentada por Wagele (1978) el cual la utiliz para influir en el crecimiento de
clulas, tejidos e individuos bacterianos, animales, vegetales as como sustancias
nutritivas.
En los ltimos aos Quacquarelli et. al. (1980) aplic corriente elctrica a estacas
de rboles del cultivo Cactanucia los que mostraban sntomas de mosaico
producido por infecciones virales. El mismo comprob que con los tratamientos
de 500 V/ 10 5 min. se obtienen hasta 90 % de plantas sanas. Por lo que
recomienda finalmente el efecto de los tratamientos elctricos para obtener
plantas libres de virus tales como Cacumis Mosaic Virus, Arabia Mosaic,

Grapevine Franleaf, Chicory Yellow Mottle y Tabaco Mosaic, los cuales


degradan cuando se exponen a campos elctricos.

se

Todo lo anterior constituy la base para realizar nuestro trabajo, donde se deba
comprobar el efecto de la corriente directa aplicada con un equipo construido
especialmente para obtener plantas sanas al complejo viral formado por:
(LYSV) Y (OYDV).
Para la aplicacin de la corriente elctrica directa a los dientes de ajo, se dise
un equipo el cual se describe a continuacin.
RELACION DE FIGURAS
Figura No.1 - Partes componentes del Equipo de Electroterapia para Ajo.
Figura No.2 - Cubeta de Tratamiento (Vista en Corte)
Figura No.3 - Cubeta de Tratamiento (vista lateral)
Figura No.4 - Peineta Portamuestra (Vista superior)
Figura No.5 - Peineta Portamuestra (Vista lateral)
Figura No.6 - Cubeta de Tratamiento cargada con dientes de ajo.
Figura No.7 - Gua de Montaje (Vista en corte).
Figura No.8 - Diagrama de barras de la sobrevivencia a diferentes tratamientos.
Figura No.9 Foto de las vitroplantas tratadas.
En la figura No. 1 se muestran en forma de diagframa de bloques las partes que
componen el equipo de electroterapia para dar tratamiento a los dientes de ajo.
El mismo est compuesto por una Fuente de Voltaje (1) que as su vez contiene un
Estabilizador de Voltaje (2) y un Voltmetro o Unidad de Lectura (3).
Esta Fuente suministra un voltaje estabilizado y regulable en un rango de 0 30
volt, a la Cubeta de Tratamiento (4), la cual contiene varias Peinetas
Portamuestras o Electrodos Superiores (5) cargadas con dientes de ajo a travs de
los cuales se hace circular una corriente elctrica entre el Electrodo Superior o
Peineta Portamuestra (5) y la Esponja (6) impregnada con una solucin de NaCl 1
Mol. que hace de puente elctrico entre la parte inferior del diente de ajo y el
Electrodo Inferior (7). Como accesorio para lograr uniformidad en el montaje de
los dientes de ajo en la Peineta Portamuestras (5), se construy un aditamento de
plstico llamado Gua de Montaje (8).
En la figura No. 2 que muestra una vista de un corte seccional de la Cubeta de
Tratamiento donde se aprecia la Cubeta Plstica (9) que contiene en su fondo al

Electrodo Inferior (7) y la Esponja (6). El Electrodo Inferior (7) posee en su


extremo superior un Jack o Conector Elctrico (10) que lo une elctricamente con
uno de los bordes de la fuente de Voltaje (1). La Cubeta Plstica (9) contiene por
sus dos laterales Interiores unos soportes en forma de U llamados Soporte para
Peineta (11) y que sirven, como su nombre lo indica, para sostener las cinco
Peinetas Portamuestras (5) dentro de la Cubeta de Tratamiento (4).
En la figura No. 3 se muestra una vista lateral de la cubeta de tratamiento donde
se puede ver el Electrodo colector (12) que se encarga de distribuir a travs de los
cinco Conectores de Peineta (13), el otro polo elctrico que suministra la Fuente
de Voltaje (1) y que se conecta a dicha Fuente por medio del Cable de Conexin
(14).
En la figura No. 4 se puede ver una vista superior de una de las Peinetas
Portamuestras (5), que en realidad no es ms que un conector de tarjeta
electrnica y que est compuesta por un cuerpo de la Peineta (15) de material
aislante y unos Electrodos (16) en forma de aguja para encajar los dientes de ajo
que van a ser tratados. Por el otro borde de la Peineta Portamuestra (5) se
encuentra una Lmina de Circuito Impreso (17) que hace contacto elctrico con
los electrodos (16) y que en su extremo derecho posee un Poste o Conector
Elctrico (18) que se une posteriormente con los Conectores de Peinetas (13).
En la figura No. 5 se da una vista lateral de la Peineta Portamuestra (5) donde,
adems de las partes ya descritas se puede ver ms claramente las dos hileras de
Electrodos (16), la Lmina de circuito Impreso (17) y el Poste (18).
En la figura No. 6 se representa la Cubeta de Tratamiento (4) con una Peineta
Portamuestra (5) cargada con dientes de Ajo (19) listos para ser tratados. Se
puede ver el recorrido de la corriente elctrica que entra por el Poste (18) que
est soldado a la Lmina de Circuito Impreso (17) que a su vez conecta con los
electrodos (16) que sostiene a los Dientes de Ajo (19). La parte inferior de los
dientes de ajo se apoyan en la Esponja (6) que est impregnada de una solucin
conductora elctricamente y que sirve de unin elctrica con el Electrodo Inferior
(7) el cual se conecta a la Fuente Voltaje (1) a travs del Jack (10).
En la figura No. 7 se da una vista en corte de la Gua de Montaje (8). En la parte
interior de los dos Laterales (20) se encuentran los Soportes (21) en los cuales se
inserta una Peineta Portamuestra (5) con los Electrodos (16) hacia delante y se
van montando los dientes de Ajo (19) apoyndolos contra la Mesa de Apoyo (22).
De esta forma los Dientes Ajo (19) quedan uniformemente montados, existiendo
una distancia aproximada de 1 cm. entre el Fondo del Diente (19) y la hilera
inferior del electrodo (16). Este se hace con el objetivo de que la distancia interelectrodos en el diente (19) sea la misma para todos y por ende la resistencia
elctrica que ofrecen al paso de la corriente, lo que trae como consecuencia que la
corriente elctrica que circula por cada Diente (19) sea aproximadamente de la
misma magnitud.
En la figura No. 8 se muestra un diagrama de barra donde se explica el porciento
de sobrevivencia de las vitroplantas tratadas con diferentes voltajes y tiempos.

En la figura No. 9 se muestra una foto donde se puede apreciar el efecto de los
diferentes tratamientos sobre el crecimiento de las vitroplantas.
PRECAUCIONES
Y
RECOMENDACIONES
PROCEDIMIENTO DE ELECTROTERAPIA.

DURANTE

EL

1. Al trabajar con el equipo para aplicar la tcnica no debe cortocircuitar nunca


los cables de salida de la fuente o los electrodos de la cubeta con el equipo en
funcionamiento.
2. Seleccionar siempre el voltaje deseado antes de conectar la cubeta a la fuente
para evitar voltajes inadecuados.
3. Siempre que se use la fuente para dar tratamiento a otros cultivos o
variedades de plantas comenzar con pequeas cantidades de stas y con
voltajes pequeos, aumentando ambas variables progresivamente para no
sobrecargar la capacidad de la fuente.
4. Aunque el equipo fue diseado para dar tratamiento de electroterapia al ajo,
se podra emplear en similares tratamientos a otros cultivos como papa, caa,
malanga, tomate, etc., solo abarcndose a las condiciones creadas.
5. En el caso de tratamientos al ajo se recomienda probar con voltajes bajos del
orden de 5 y 10 v para no daar la zona de crecimiento lo que inutiliza el
diente.
6. No debe emplear ms de 20 dientes como carga total de la cubeta.
7. Al terminar el trabajo debe lavar bien y secar la cubeta, los electrodos, as
como las peinetas portadientes.
PROCESAMIENTO DEL MATERIAL PARA APLICAR LA TECNICA DE
ELECTROTERAPIA.
1. Seleccionar el material de partida (Allium sativum L.) teniendo en cuenta que
los bulbos no estn afectados por plagas, enfermedades (no virales) u otras
causas. As como asegurarse que los dientes han superado la dormicin.
2. Desgranar los bulbos y eliminar la tnica que los protege si van a ser pasados
a cultivo in vitro.
3. Preparar 300 ml de NaCl 1M, para aadir a la cubeta de tratamiento.
4. Los dientes se colocarn en los peines utilizando la gua de montaje, lo que
garantiza que todos los dientes queden con el platin apoyado en la esponja a
una misma altura, quiere decir que los dientes recibirn la electricidad desde
la zona meristemtica hasta la superficie del diente a 1 cm de altura.
5. La variante a seleccionar con el ajo puede ir desde 2 volt hasta 30 volt y desde
1 a 30 min. Pero nosotros le recomendamos en este procedimiento utilizar 10
v/5. Los peines con los dientes sern ubicados en el interior de la cubeta de
tratamiento (figura 1). Se recomienda 4 dientes por peine para un total de 20
dientes.
6. El tiempo del tratamiento ser contado mediante cronmetro o reloj parando
el mismo segn lo previsto el las precauciones y recomendaciones.
7. Los dientes posteriormente al tratamiento sern desinfectados con Hipoclorito
de Sodio al 3% durante 15 min. y en condiciones de flujo laminar sern

mondados hasta encontrar la zona meristemtica y sembrados in vitro


aproximadamente de 0,7 mm. En medio de establecimiento sugerido por
(Hernndez et al., 1994). O si lo prefiere despus del tratamiento elctrico no
tiene que quitar las tnicas envolventes y puede ser llevados directamente al
campo.
8. Al cabo de 50 60 das podr realizar la comprobacin por la tcnica UMELISA, u otro mtodo adecuado para saber la sanidad del material en cuanto
a virus.
VENTAJAS DE LA SOLUCION
Las ventajas de la solucin dada son las siguientes:
Permite acelerar el crecimiento del material tratado, por lo que las vitroplantas
llegan a tener el tamao y peso adecuado para hacer el diagnstico de los
patgenos presentes, mucho ms rpido por lo que la respuesta en un programa
de produccin de semilla se hace ms aceleradamente, en condiciones in vitro
la regeneracin aumenta en por ciento con respecto a materiales que se implantan
sin tratamiento. Adems se comprueba que hay saneamiento a los virus desde un
50 100 % en dependencia al voltaje y tiempo que se emplee en el tratamiento.

REIVINDICACIONES
1. Equipo de electroterapia para el saneamiento a virus en ajo Allium sativum L.
que comprende una fuente de voltaje de corriente directa estabilizada y
regulable, caracterizado por una cubeta de tratamiento de material aislante
que comprende en su fondo una lmina o electrodo plano rectangular inferior,
sobre la cual se coloca una esponja rectangular que abarca todo el fondo de la
cubeta impregnada en solucin de CINa 1 Mol saturada, dicha cubeta tiene en
su interior a ambos lados unos soportes que sostienen y guan las peinetas o
electrodos superiores cargados con los dientes de ajo y una gua de montaje
para estandarizar la posicin de los dientes.
2. Equipo de electroterapia de acuerdo a la reivindicacin 1, se caracteriza
porque la peineta o electrodo superior compuesta de material aislante que
tiene unos salientes que permiten su colocacin en la cubeta, con unos
electrodos metlicos en forma de aguja conectados entre s elctricamente por
una barra de cobre.
3. Equipo de electroterapia de acuerdo a la reivindicacin 1 caracterizada por la
gua de montaje que comprende un soporte plstico donde se inserta la peineta
y con una mesa de apoyo inferior separada a 1 cm. de la ltima hilera de
dientes para lograr uniformidad en el montaje de las muestras vegetales en la
peineta.
4. Procedimiento de electroterapia para el saneamiento a virus en ajo Allium
sativum L. caracterizado porque a cada diente de ajo se le aplica un potencial
de voltaje directo con el objetivo de hacer circular una corriente elctrica a
travs de la zona meristemtica con voltaje de 5 30 volt y durante un tiempo
de 5 30 min.

DIBUJOS