Universidad Tcnica Federico Santa Mara.

Departamento de Ingeniera Qumica y Ambiental

Laboratorio de Introduccin a la Microbiologa

Practico N 8
TRATAMIENTO DE RILES CONTAMINADOS CON METALES PESADOS:
BIO-REDUCCIN DE SELENIO
Introduccin

El inters por un proceso de remocin de metales pesados es creciente en el mundo de la

ingeniera, esto debido a que muchas veces la adicin de coagulantes y floculantes, ms all
de generar una solucin para slidos disueltos o slidos suspendidos, crean un problema
mayor al dejar trazas de contaminacin en los residuos industriales lquidos. Por dicha
razn es que se buscan procesos limpios en los que la remocin del reactivo a utilizar
para remover el elemento contaminante sea lo ms simple, barata y del menor impacto
posible. La biorremediacin es una tecnologa que utiliza el potencial metablico de los
microorganismos (fundamentalmente bacterias, pero tambin hongos y levaduras) para
transformar contaminantes orgnicos en compuestos ms simples poco o nada
contaminantes, y, por tanto, se puede utilizar para limpiar suelos o aguas contaminadas.
El selenio es un metaloide que tiene 4 estados de oxidacin: -2, 0, +4 y +6. En soluciones
acuosas puede ser encontrado como selenito (SeO3-2) y selenato (SeO4-2) en estado de
slido disuelto. Este elemento presenta un problema ambiental severo debido a su
toxicidad, y es uno de los componentes de mucho de los residuos industriales lquidos de
diferentes plantas, incluyendo operaciones y procesos de cobre y uranio, industria petroqumica y produccin de alimentos. En Chile, la concentracin de selenio como especie
qumica est regulada por ley en el DS N 90 Norma de Emisin para la Regulacin de
Contaminantes Asociados a las Descargas de Residuos Lquidos a Aguas Marinas y
Continentales Superficiales y el lmite es de 0,03[mg/L].

Cintica
A travs de la oxidacin de un sustrato y la reduccin de otro se obtiene energa y poder
reductor para mantener las actividades celulares, estas reacciones son usualmente
aceleradas por la accin de las enzimas producidas dentro de las clula. La velocidad dada
a la cual un determinado contaminante es removido depende de dos concentraciones, la
primera corresponde a la concentracin del catalizador, en este caso de la biomasa activa.
La segunda corresponde a la concentracin de los sustratos primarios que sirven de donador
de electrones.

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La ecuacin de Monod es la ms utilizada para describir la cintica del crecimiento

microbiano. En ella se relaciona la velocidad especfica del crecimiento microbiano con la
concentracin de un sustrato donador de electrones limitante:

MX

S
KS S

Siendo:

: tasa de crecimiento
MX : tasa de crecimiento mxima
S
: concentracin de sustrato (nutrientes)
KS
: constante (concentracin de sustrato a la que se alcanza la mitad de la tasa
mxima).

Etapa Prctica
Se estudiar el caso particular de la contaminacin de selenato, es decir, el selenio en su
estado de oxidacin +6 (Se(VI)), verificando la capacidad de distintos microorganismos de
reducir dicha especie qumica para transformarla en selenio como metal Se(0), el cual se
presenta de color rojo. Adems se estudiar cmo afecta la concentracin de nutrientes en
la reduccin de selenato a selenio.

Esta gua se bas en el trabajo de Laboratorio de Investigacin Bio-reduccin de Selenato a Selenio

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UTILIZACION DE LOS MICROORGANISMOS EN LA INDUSTRIA

ALIMENTARIA
No todos los microorganismos son patgenos o alterantes, sino que algunos de ellos
pueden ser aprovechados por el hombre en la fabricacin de diferentes productos. ste es el
caso de las levaduras, que se emplean, por ejemplo, en la elaboracin de pan y bebidas
alcohlicas como vino y cerveza. Tambin se utilizan bacterias en la fabricacin de
productos lcteos, embutidos, etc.
La fermentacin lctica es producida por bacterias capaces de transformar azcares
en cido lctico disminuyendo de tal manera el pH del medio, que impiden el crecimiento
de otros microorganismos. De este modo, la fabricacin de yogur y de otros productos
lcteos fermentados tuvo su origen como un mtodo de conservacin de la leche. La leche
fresca tiene un pH de aproximadamente 6.6. A este pH la casena (protena de la leche) est
formando una suspensin coloidal de caseinato clcico. Conforme las bacterias lcticas van
fermentando los azcares con produccin de cido lctico, el pH disminuye y, al llegar a
4,6, la casena se desnaturaliza y la leche se coagula formando un producto semislido que
es el yogur.
La cerveza es el producto que se obtiene de una fermentacin alcohlica llevada a
cabo por levaduras sobre distinto cereales: cebada, maz, arroz.
Estos cereales contiene almidn que no es fermentable por las levaduras, por lo que
previamente debe ser hidrolizados a azucares ms sencillos: glucosa y maltosa. La harina
de malta es la cebada germinada y contiene gran cantidad de amilasas, enzimas
responsables de la hidrlisis del almidn. La activacin de estas enzimas se produce a
75C, actuando sobre el almidn para hidrolizarlo en sus azucares fermentables. De esta
forma, la levadura puede llevar a cabo la fermentacin alcohlica para dar CO2 y etanol.
Preparacin de yogur
1.- Aadir con pipeta estril 5 ml de leche pasteurizada a 2 tubos estriles
2.- Uno de los tubos es inoculado mediante el asa de siembra con el cultivo iniciador de la
fermentacin.
3.- Incubar los 2 tubos durante 16 horas a 46-48C para favorecer el crecimiento de estas
bacterias, ya que son termfilas. Tambin se pueden incubar a 37C durante 24 horas.
4.- Comprobar que se ha producido una fermentacin lctica si la leche ha coagulado en el
tubo inoculado. Mediante tincin de Gram se confirma la presencia de bacilos y cocos
responsables de la fermentacin. En el tubo control no inoculado se mantiene las
caractersticas iniciales: la leche es lquida y al realizar tincin de Gram no se observan
bacterias.

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Preparacin de cerveza
1.- Preparar en un vaso de precipitado una suspensin en agua de harina de malta al 5%. Es
necesario mantener la suspensin en agitacin, ya que la harina no es perfectamente soluble
en agua.
2.- Llenar dos tubos con tapn de rosca prcticamente hasta el borde, de manera que se
genere una atmosfera microaerfila.
3.- Incubar los tubos a 75C durante 1 hora para que se activen e hidrolicen el almidn
4.- Al cabo de este tiempo esterilizar en autoclave a 121C durante 10 minutos para
eliminar los posibles microorganismos presentes y asegurar que la fermentacin se debe
nicamente a la levadura.
5.- Una vez enfriados los tubos a temperatura ambiente, inocular uno de ellos con
saccharomyces cerevisiae, mientras que en otro tubo no se modifica en absoluto (tubo
control). El inculo puede preparase con 20 mg de levadura en 1 ml de solucin salina.
6.- Incubar los 2 tubos a temperatura ambiente durante varios das. En funcin del inculo
aadido vara el tiempo necesario para la produccin de cerveza.
7.- Solamente en el tubo que contiene la levadura se producir la fermentacin alcohlica,
que se visualiza por la aparicin de burbujas de CO2. Mediante una tincin simple se
comprueba que la fermentacin se debe a levaduras. El tubo en el que no habido
fermentacin permanece estril.