Manual Bacteriologia

CONTENIDO
Pg.
SUBCOMPETENCIA 1 ................................................................................................................ 1
PRCTICA 1. COPROCULTIVO E INFECCIONES GASTROINTESTINALES ........................ 1
PRACTICA 2. UROCULTIVO E INFECCIONES DE LAS VAS URINARIAS ........................ 13
PRCTICA 3. EXUDADO FARNGEO Y NASOFARNGEO ................................................. 23
SUBCOMPETENCIA 2 ............................................................................................................. 29
PRCTICA 4. SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS (ANTIBIOGRAMA) .............. 29
PRCTICA 5. INFECCIONES DE VAS RESPIRATORIAS BAJAS (CULTIVO DE ESPUTO)
................................................................................................................................................... 33
PRCTICA 6. BSQUEDA E IDENTIFICACIN DE Mycobacterium tuberculosis
................................................................................................................................................... 39
PRCTICA 7. DIAGNSTICO DE ENFERMEDADES MENNGEAS
(CULTIVO DE LCR).................................................................................................................. 46
PRCTICA 8. HEMOCULTIVO Y CULTIVO DE MDULA SEA ........................................ 51
PRCTICA 9. INFECCIONES DEL APARATO GENITAL: EXUDADO CERVICO VAGINAL Y
EXUDADO URETRAL .............................................................................................................. 57
PRCTICA 10. CULTIVO DE EXUDADO OCULAR, INFECCIONES OCULARES.............. 66
PRCTICA 11. EXUDADO TICO (ODO MEDIO) INFECCIONES TICAS .................... 71
PRCTICA 12. CULTIVO DE HERIDAS ................................................................................ 75
BIBLIOGRAFIA GENERAL.......................................................................................................80
ANEXOS
ANEXO I. INSTRUMENTOS DE EVALUACIN ................................................................ 82
ANEXO II. LINEAMIENTOS GENERALES EN MATERIA DE SEGURIDAD E HIGIENE A
SEGUIR EN LOS LABORATORIOS .................................................................................... 86
SUBCOMPETENCIA 1
PRCTICA 1. COPROCULTIVO E INFECCIONES
GASTROINTESTINALES
1.1 GENERALIDADES
El estudio de las bacterias responsables de cuadros clnicos gastrointestinales se
realiza fundamentalmente mediante el cultivo de la materia fecal (coprocultivo).
Las enfermedades diarreicas agudas representan una de las principales causa de
defuncin en nuestro Pas. Las vas gastrointestinales son el hbitat natural de
una extensa variedad de microorganismos, la mayora de las bacterias de la flora
entrica residente corresponden a miembros de la familia Enterobacteriaceae,
(Escherichia coli, Proteus etc.) aunque tambin son abundantes Enterococcus
faecalis, diversas especies de Staphylococcus, Mvcobacterium y especies

anaerobias. Siendo de mayor relevancia diagnstica las enterobacterias
patgenas como: Shigella, Salmonella, Yersinia, Escherichia coli, esta ltima
aunque se considera parte de la flora algunos serotipos denominados
enteropatgenos son capaces de producir gastroenteritis, principalmente en
lactantes en forma de brotes epidmicos. Adems de otros gneros de
importancia mdica como Vibrio, Campylobacter y Helicobacter que pertenecen a
otras familias.
1.2 OBJETIVO
Realizar el coprocultivo correctamente para que ste sirva como apoyo al
diagnstico clnico en caso de gastroenteritis.
1.3 MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS
Gradillas
Bao mara
13x100 con medio de: TSI LIA,
Porta y cubre-objetos
MIO, urea de Christensen, Citrato
Marcador de vidrio
de Simmons.
Placas de Petri con Agar: Mac
Colorante de Azul de Metileno
Conkey, S.S, XLD, Sulfito de
Antisueros para la Serotipificacin
de Salmonella, E. coli y Shigella
Bismuto, Entrico de Hektoen,

EMB, Campy-BAP, TCBS. Gelosa
Solucin salina isotnica en tubos

de 13x100 con 2mL
sangre de Carnero
Pruebas bioqumicas en tubos de
Caldo selenito o tetrationato
Aceite de Inmersin.
en tubos de 13x100 con 2 mL.
Frasco con Benzal
Tubos
soya
Buffer de PBS
Peptonada
Solucin de Iodo
Juego de colorantes de Gram
Taxos de Oxidasa
con:
tripticasa,
Caldo
Agua
alcalina (APA) a pH 9.0
1.4 PROCEDIMIENTO
Toma y transporte de muestra para coprocultivo
1. Obtener las muestras al inicio del cuadro clnico antes de iniciar el
tratamiento antimicrobiano.
2. Tomar la muestra de heces directamente en un frasco limpio de boca
ancha y con tapa hermtica, de preferencia debe usarse estril y
desechable.
3. Cuando se trate de lactantes tomar la muestra directamente del recto
usando sonda K31 conectada a una jeringa estril e introducindole
solucin salina isotnica.
2
4. Sembrar de inmediato, si la muestra se toma en el mismo laboratorio

donde se va a procesar el aislamiento, no es necesario usar medio de
transporte.
5. En estudios de campo o cuando el laboratorio no est cercano, tomar la
muestra con un hisopo que debe quedar bien impregnado de materia
fecal.
6. Colocar el hisopo en un medio de transporte como el de Cary-Blair o el de
Stuart-Amies.
7. Refrigerar la muestra slo en ocasiones extremas.
Manejo de las heces fecales
1. La observacin directa de las heces es de suma importancia dado que se
debe observar s presenta moco, sangre, y si son liquidas, pastosas, o
diferente color.
2. La observacin directa de la muestra con una gota de azul de metileno nos
orienta para saber si existen leucocitos polimorfonucleares, si existen
parsitos, eritrocitos y el tipo de flora la nica excepcin es el diagnstico
presuntivo de Campylobacter el cual puede lograrse si la preparacin se
observan dentro de las dos primeras horas de haber obtenido las
muestras, como formas vibrinicas y helicoidales.
3. La tincin de Gram en frotes de materia fecal es importante para
corroborar la presencia de Campylobacter en sus formas vibrinicas y
helicoidales, comprobar la presencia de clulas indicativas de inflamacin,
eritrocitos etc.
4. En el diagrama No 1 y 2 se muestran los pasos a seguir para el aislamiento
de enterobacterias. (Con nfasis en Salmonella, Shigella, E. coli, Yersinia
enterocolitica, adems de Vibrio y Campylobacter.)

5. La materia fecal se siembra directamente con un asa y la cantidad de
muestra depende el tipo de medio de cultivo usado. El mtodo usado es
por la tcnica de estra cruzada esterilizando el asa en cada seccin de la

placa y separando la estra.
6. Las placas se incuban a 37 C durante 18-24 Hrs.
7. Al mismo tiempo que las placas sembrar el tubo de enriquecimiento con
muestra fecal usando una cantidad pesada de inoculo, la proporcin ideal
es de 10% peso/volumen, este puede ser caldo tetrationato o caldo
telurito. S se sospecha de Vibrio sembrar la muestra en un tubo con agua
peptonada alcalina (APA) Despus se incuba a 37C durante 12-18 hrs.
8. A partir de la siembra directa de los medios diferenciales y selectivos
seleccionar por lo menos dos o tres colonias no fermentadores de lactosa
Lac
(-)
productoras
de
H2S
morfolgicamente
acorde
las
enteropatgenas
9. A partir de una sola colonia aislada en los medios que se indicaron, se
siembran los tubos de bioqumicas y se incuban de 18-24 h a 37 C.
10.La interpretacin de estos resultados se hace de acuerdo al diagrama 2
11.Realizar la prueba de Oxidasa de la colonia sospechosa, la cual se hace con
el crecimiento del tubo de LIA.
12.Del tubo de enriquecimiento despus de incubado se siembran las placas
de los medios ya mencionado y se incuba de 18-24 h.
13.Pasado este tiempo se escogen colonias sospechosas Lactosas (-) y se
siembra el set de pruebas bioqumicas.
14.Nuevamente la interpretacin de resultados se hace de acuerdo al
diagrama.
Figura 1. Identificacin de bacterias patgenas gastrointestinales.
Figura 2. Identificacin de Salmonella, Shigella y E. coli.

Serotipificacin de Salmonella
1. Una vez que se ha determinado la presencia de Salmonella en la muestra
clnica, se serotipifica primero los grupos somticos B, C1, C2 D O E. (que son
los ms frecuentes en Mxico) Se utilizan los antisueros correspondientes.
2. Si hay reaccin cruzada, la suspensin bacteriana se hierve por 10 min en
bao mara, se centrifuga a 3,500 rpm por 10 min y se desecha el sobrante. El
sedimento se resuspende en solucin salina y se repite el punto 1.
3. Una vez determinado el grupo somtico se busca el grupo flagelar al que
pertenece la cepa. A partir de la de una suspensin en solucin salina o del
6
tubo de TSI, se siembra un tubo con caldo Soya tripticasa se incuba 37 C del
8-24 h.
4. Se agrega un volumen igual de solucin salina formalizada al 0.6% y se deja
reposar cuando menos 2 o 24 horas .Este es el antgeno formalinizado.
5. En un tubo se colocan 0.1 mL de antisuero flagelar que corresponde al grupo
somtico y se agrega 0.9 mi del antgeno formalinizado. Se agita
vigorosamente, se incuba una hora a 50C en bao mara y con cuidado se
sacan los tubos procurando no agitarlos y leer.
POSITIVA = Aglutinacin con formacin de un inoculo que se deshace al
agitar.
NEGATIVA = Sin aglutinacin.
6. La mayora de los cultivos de Salmonella presentan dos niveles y para
identificar al serotipo que pertenecen es necesario identificar ambos.
Serotipificacin de Shigella
1.- El serotipo de las cepas de Shigella se determina utilizando los antisueros
siguientes:
Polivalente A 1-7: S. dysenteriae
Polivalente B 1-5: S. flexneri
Polivalente C 1-7: S. boydii
Monovalente B-6: S. flexneri tipo 6
Monovalente S. sonnei I-II
Monovalente S. dysenteriae 8, 9 y 10
2.- Se utiliza el mtodo descrito de aglutinacin bacteriana.
Serotipificacin de cepas de Escherichia coli enteropatgena
Con las cepas de Escherichia coli aisladas de nios con diarrea con moco y
sangre, especialmente los menores de un ao, se hace una suspensin bacteriana
en PBS a partir del tubo con TSI y se realiza una prueba de aglutinacin
bacteriana con un antisuero polivalente contra los tipos A, B o C de E. coli (cepas

de E. coli enteropatgenas o EPEC).
Identificacin de Campylobacter jejuni
La identificacin de Campylobacter es posible realizarla presuntivamente de la
materia fecal con observar al microscopio su morfologa, en el diagrama No 1 se
puede observar.
Identificacin de Vibrio cholerae
Proceder como la siguiente figura:
Figura 3. Aislamiento de Vibrio cholerae
Reporte del coprocultivo

Realizar un informe del estudio para el mdico incluyendo los siguientes datos:
1. Nombre completo del Paciente.
2. Edad y sexo del mismo.
3. Tipo de cultivo
4. Si la muestra contena microorganismos de la flora normal, o las bacterias
patgenas a nivel intestinal.
5. Las caractersticas principales de la muestra
6. Sus observaciones con las diferentes tinciones.
7. Si existe algn comentario se le realiza al mdico con sus respectivas
sugerencias.
8. Firmar el resultado de responsable de los datos
9. Se aisl Flora Intestinal Normal.
Preparacin de un frotis y de un fresco fecal
Tambin en un coprocultivo no se debe descartar la observacin de protozoos y
otros microorganismos, realizando una preparacin en fresco de las heces
fecales, como se muestra en el diagrama 4. Para la bsqueda de
polimorfonucleares se realiza un frotis de moco fecal.
Figura 4. Procedimiento para Amiba en fresco y frotis de moco fecal.
1.5 CUESTIONARIO
1.- Cules son las caractersticas en la morfologa colonial de Salmonella y
Shigella en los diferentes medios de cultivo que les diferencia de la mayora de

las bacterias de la familia Enterobacteriaceae?
2.- Qu cuidados debe tener un paciente a la hora de recolectar su muestra
fecal para coprocultivo?
3.- Qu es infeccin intestinal y cmo se puede diagnosticar?
4.- Qu otras cepas de E. coli son consideradas patgenas?
10
1.6 TRATAMIENTO Y DISPOSICION DE RESIDUOS
Figura 5. Diagrama ecolgico: aislamiento e identificacin de bacterias.
D1. Inactivar con Hipoclorito de sodio al 5% durante 10-15 min y desechar en

el retrete.
D2. Esterilizar en autoclave 121C, 15 min y deschar como residuo orgnico.
D3. Inactivar con Hipoclorito de sodio al 5% durante 10-15 min. Lavar y secar
para su reuso.
D4. Esterilizar en autoclave 121C, 15 min y desechar como residuo orgnico.
D5. Colectar los residuos en recipientes, etiquetar y confinar en almacen
temporal hasta su desecho final como RP.
D6. Esterilizar en autoclave 121C, 15 min y deschar como residuo orgnico,
lavar y secar los tubos para su reuso.
1.7 EVALUACIN
Ver Anexo I: Instrumentos de evaluacin.
11
1.8 BIBLIOGRAFA
1.- Koneman EW, Allen SD, Jamda WM, Scneckenherger PC, Win W.
(1999).Diagnstico Microbiolgico. Texto y Atlas color. 5 Edicin. Ed. Mdica
Panamericana, SA de CV. Buenos Aires Argentina.
2.- Molina J. Manjarrez M. Tay J. (2010) Microbiologa, Bacteriologa y Virologa.
Mndez editores. Mxico DF.
12
SUBCOMPETENCIA 1
PRCTICA 2. UROCULTIVO E INFECCIONES DE LAS VAS
URINARIAS
2.1 GENERALIDADES
Las vas urinarias normalmente son estriles por encima del nivel de la uretra
distal, se entiende la aparicin de bacterias definindose la infeccin de stas
como la presencia de un gran nmero de bacterias en la orina. Las infecciones de
las vas urinarias son muy frecuentes, y presentan una marcada resistencia al
tratamiento y muchas de ellas con tendencia a recidivar especialmente en las
personas del sexo femenino, considerndose riesgosas porque pueden
evolucionar a enfermedades renales graves, como pielonefritis, presentndose
en algunos casos de manera asintomtica, o como enfermedad aguda o crnica.
Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo,
las infecciones crnicas por varios microorganismos.
Las bacterias que con mayor frecuencia se aslan de la orina de pacientes son:
E. coli, Staphylococcus, Proteus, Enterococcus faecalis, Salmonella, Pseudomonas,

Mycobacterium, ocasionalmente Neisseria gonorrhoeae, Candida albicans.
2.2 OBJETIVO
Realizar correctamente un urocultivo para que ste sirva como apoyo al
diagnstico clnico en caso de infecciones de vas urinarias.
13
2.3 MATERIALES, EQUIPOS, Y REACTIVO

Placas de Petri con Agar:
Tubos de 13 x 100 con medio de
MacConkey, Sal y Manitol,
Biggy,
Gelosa sangre de carnero,
LIA, MIO, Urea y C. Simmons.
Thayer, Martn, Dnasa.
pruebas bioqumicas: TSI,
Cuenta colonias
Asa calibrada.
Juego de colorantes de Gram
Taxos de catalasa, oxidasa,
Porta-objetos y cubreobjetos.
PN, ESD, Bacitracina 0.04 U

. Matraz de Agar Nutritivo
Pipetas estriles
Solucin Salina Isotnica.
estril.
2.4 PROCEDIMIENTO
Requisitos de la toma de muestra
Para lograr que el cultivo de orina sea veraz es de suma importancia que las
muestras sean obtenidas en forma correcta, as como en condiciones ptimas
para un buen resultado confiable. Como se ver ms adelante.
Tcnica del chorro medio
Debido que la uretra est contaminada por bacterias, especialmente cerca del
orificio externo, es importante hacer una desinfeccin local antes de tomar la
muestra para eliminar todo tipo de contaminacin, este mtodo es importante en
pacientes que tiene control de su vaciamiento vesical. En recin nacidos y
ancianos est tcnica se dificulta por su edad.
Indicar al paciente que se realice un aseo escrupuloso de genitales con agua y
jabn o con cloruro de benzalconio diluido 1:1000.
Se prefiere obtener la primera orina de la maana (la parte media de la miccin
desechando el primer chorro as como la ltima parte de la miccin).
14
La muestra de orina se recoge en un frasco de boca ancha estril y desechable, en

los bebes se usan bolsas recolectoras estriles.
No deben pasar ms de dos horas, entre la toma de muestra y su proceso, ya que
la orina es un excelente medio de cultivo.
El paciente no debe estar ingiriendo medicamentos antimicrobianos.
La muestra al llegar al laboratorio se debe identificar en forma correcta con los
datos del paciente como nombre, edad, sexo.
Es importante seguir los pasos de los esquemas ms adelante para la toma de
muestra tanto para el sexo femenino como masculino.
Aspiracin suprapbica
Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal Mdico. Se usa
para obtener el diagnstico exacto en los recin nacidos y en los nios pequeos,
es una forma de demostrar el origen de la infeccin de la vejiga y la bacteriuria
con microorganismos que se originan ms all de la vejiga, as como la bsqueda
de bacterias anaerobias.
Hacer una puncin directa en la vejiga a travs de la pared abdominal con aguja y
jeringa.
Este tipo de mtodos se considera muy agresivo.
Cateterismo
Es poco recomendable por el peligro de acarrear agentes infecciosos, por lo cual
debe hacerse en forma muy cuidadosa.
Utilizar un catter estril, que se introduce por el meato urinario, el cual debe ser
desinfectado escrupulosamente.
Aspirar la orina y se coloca en un frasco estril.
15
Transporte de la muestra
Dado que la orina es un excelente medio de cultivo y las bacterias se multiplican
rpidamente s la muestra se deja a temperatura ambiente durante un tiempo
corto.
En caso que el laboratorio no est cerca las muestras se deben transportar
inmediatamente en menos de una hora o en su defecto en refrigerantes que
obtengan una temperatura de 4C para que la cuenta bacteriana se mantenga con
el nmero de bacterias en forma constante.
Pueden utilizar sistemas de transporte de orina que hay en el mercado.
Asilamiento e identificacin
1,. Inocular la muestra en los medios de cultivo seleccionados
2.- incubar a 37C durante 24 hrs
3.- Tomar una colonia susceptible de ser la causante de infeccin y realizar una
tincin de Gram.
4.- Inocular la Pruebas bioqumicas con la o las colonias sospechosas.
5.- Interpretar los resultados de la Pruebas bioqumicas.
Mtodo del asa calibrada
1. Inocular un volumen conocido de orina en la placa basndose en el uso del asa
calibrada.
2. Agitar la orina, y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que
solo entre la rueda y se descarga en lnea rectas en el centro de la placa y se
estra.
3. Incubar las placas a 37C por 24 hrs.
4. Contar el nmero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las
unidades formadoras de colonias por mL. UFC/mL.
5. Identificar el microorganismo segn sus caractersticas.
16
Mtodo de dilucin con pipeta

1. Se coloca 0.1 mi de orina en 9.9 mL de solucin salina isotnica (dilucin 10)
se homogeneiza el tubo perfectamente.
2. Con una pipeta estril se toman 0.1 mL de esta dilucin y se transfiere a un
segundo tubo conteniendo 9.9 mL de solucin salina isotnica (dilucin 10 a)
3. Se toman 0.1 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios
de cultivo seleccionados.
4. La suspensin bacteriana se extiende rotando las placas suavemente, se incuba
a37C de 18-24hrs.
5. Se cuenta el nmero de colonias de acuerdo al factor de dilucin
correspondiente.
Mtodo de vaciado en placa
Se coloca 1 mL. de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas
de Petri estriles.
Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45C se rota suavemente la
placa para que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio.
3. Se incuba las placas a 37C de 18-24 h.
4. Se cuentan el nmero de colonias.
5. De acuerdo al factor de dilucin se calcula las UFC/ ML
En el siguiente esquema se muestra la forma correcta de recolectar las muestras
de orinas para un urocultivo.
Recoleccin de muestras de orina en Varones:
1.- Realice un aseo del rea pbica con jabn y abundante agua. Cualquier
residuo de jabn puede causar errores en el anlisis. Seque perfectamente el
rea pbica.
2.-En pacientes no circuncidados se retrae la piel que cubre la cabeza del glande
con un movimiento hacia atrs para exponer el meato uretral (figura 6).
17
Figura 6. Exposicin del meato urinario en

pacientes no circuncidados.
3.- Debe realizar una limpieza con una gasa (de preferencia estril) empezando
por la punta y recorriendo hacia la base. La limpieza se repite empleando una
segunda gasa (figura 7).
Figura 7. Limpieza del meato uretral.
4.- Se inicia la miccin sin recolectar la primera fraccin, la cual se desecha en el

excusado.
5.-En el recipiente que se le proporciono en el laboratorio. Recolecte la fraccin
del chorro medio.
6.- Retire el vaso recolector del chorro y termine de orinar desechando la
fraccin final en el excusado.
Recoleccin de muestras de orina en mujeres
1.- Realice un aseo del rea pbica con jabn y abundante agua. Cualquier
residuo de jabn puede causar errores en el anlisis. Seque perfectamente el
rea pbica.
18
2.- Debe sentarse en el excusado con las piernas separadas y con los dedos
separar los labios mayores que cubren la vagina. Al separar los labios mayores
con los dedos pulgar e ndice quedara al descubierto el orificio urinario (figura 8).
Figura 8.Exposicion del meato urinario.
3.- Con una gasa (de preferencia estril) se realiza una limpieza en la parte
interna de los labios genitales (meato urinario) y el rea que lo rodea con un
movimiento de adelante hacia atrs. Este procedimiento debe repetirse con una
segunda gasa.(figura 9)
Figura 9. Limpieza del meato urinario.

4.-Manteniendo los labios del rea genital separados se debe iniciar la miccin.
Se inicia la miccin sin recolectar la primera fraccin, la cual se desecha en el
excusado.
5- En el recipiente que se le proporciono en el laboratorio, recolecte la
fraccin del chorro medio.
19
Figura 10. Recoleccin de la muestra.

6- Retire el vaso recolector del chorro y termine de orinar desechando la fraccin
final en el excusado.
Reporte
Una parte importante del urocultivo es la interpretacin de los resultados. El
criterio de 100,000 o ms grmenes por mL de orina para el diagnstico de la
bacteriuria significativa es primariamente de ndole operacional, cuando se
emplea el mtodo del vaciado asptico para recoger las muestras. Actualmente
se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria verdadera.
La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden
sobradamente el 1, 000,000 de colonias por mL; menos de 10,000 UFC/ mL se
considera negativo. Sin embargo es muy importante el criterio del mdico de
acuerdo al estado clnico de su paciente.
La forma del reporte es de la siguiente forma:
Nombre del Paciente, edad fecha

Nombre del mdico
Tipo de Estudio: Por ejemplo, se aisl E. coli 650, 000 UFC/mL. Negativo a las 48
hrs. de incubacin.
Firma del Responsable.
20
2.5 CUESTIONARIO
1.- Explique la importancia clnica del aislamiento e identificacin de este grupo
de bacilos Gram-negativos no fermentadores (Pseudonomas) en un laboratorio
de bacteriologa clnica.
2.- Por qu es comn encontrarla en un urocultivo Escherichia coli?
3.- Qu microorganismos son los ms frecuentes de aislar en un urocultivo?
4.- Qu es una bacteriuria y qu la causa?
5.- Cmo se debe recolectar una muestra de orina en nios menores de 5 aos,
para la realizacin de un urocultivo?
Figura 11. Diagrama ecolgico: Aislamiento e identificacin de bacterias.

el retrete.
para su reuso.
21

2.7 EVALUACIN
2.8 BIBLIOGRAFA
2.- Nom. 087. Norma oficial Mexicana para el manejo de RPBI.
3.- Prescott LM, Harley JP, Klein DA (2004). Microbiologa. 5ta. Edicin. Ed. Mc
Graw-Hill Interamericana. Madrid Espaa.
22
SUBCOMPETENCIA 1
PRCTICA 3. EXUDADO FARNGEO Y NASOFARNGEO
3.1 GENERALIDADES
El estudio del exudado farngeo y nasofarngeo es importante para el diagnstico
de ciertas infecciones consideradas dentro de las principales causas de
morbilidad y mortalidad en todo el mundo. Dentro de las principales bacterias
patgenas causantes de infeccin estn los estreptococos, adems de otras
enfermedades no bacterianas como la difteria, la tosferina y la candidiasis. Es
muy importante conocer la flora normal en las vas respiratorias altas y bajas para
un buen reporte, ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a
los patgenos de los comensales con ayuda del cultivo.
El exudado farngeo y nasofarngeo son las muestras clnicas ms empleadas para
el estudio bacteriolgico de una infeccin de vas respiratorias superiores y es
requisito importante que sean tomadas en forma adecuada para garantizar
resultados confiables y correctos.
3.2 OBJETIVO
Realizar los exudados farngeo y nasofarngeo correctamente para que ste sirva
como apoyo al diagnstico clnico en caso de enfermedades de vas respiratorias.

Placas
de
Petri
con
Agar:
Tubos de 13 x 100 con caldo Soya

23
Sangre de camero al 5%, Sal y
Tripticasa ,pruebas bioqumicas. TSI,
Manitol, MacConkey, Thayer-
LIA, MIO, CS y Urea
Martin,
Hemina
bacitracina
Tubos de Caldo soya tripticasa con
extracto de levadura(GHBL).
medio de Biggy
Matraz con 15 mi de agar de
Soya tripticasa
6.5 % NaCl
Sensidiscos de Optoquina
Hisopos estriles
Sensidiscos de Novobiocina
Abatelenguas estriles
Colorantes de Gram.
Frasco con cloro
Sensidiscos de Bacitracina de 0.04 U
3.4 PROCEDIMIENTO
Toma y transporte de la muestra:
Exudado farngeo:
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro clnico antes de
empezar cualquier tratamiento.
1. Indicar al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal.
2. No haber ingerido ningn tipo de alimento.
3. No haber ingerido ningn antimicrobiano.
4.- Inclinar la cabeza del paciente hacia atrs y se revisa con una lmpara la zona
afectada
5. Empujar la lenguas hacia abajo con un abatelenguas estril que permita mejor
visin.
6. Introducir un hisopo hacia las amgdalas, sin tocar la lengua para nada; frotar
suavemente la zona afectada.
7. Evitar tocar la lengua, los dientes o la mucosa.
24
Exudado nasofarngeo:
1. Utilizar un hisopo que sea de algodn tratado, de alginato de calcio o en su
defecto de dacrn que su mango sea flexible que no lastime al paciente.
2. Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando
de tocar solo el extremo posterior del mango y evitar tocar solo los cornetes.
3. Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con
movimiento rpido.
Transporte de la muestra:
1. En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deber depositar
en medio de transporte.
2. El mdico debe indicar en base al cuadro clnico, el germen que sospecha, para
aplicar los requerimientos de cada una de las bacterias en la siembra y
procesamiento de las muestras inmediatamente.
Seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta prctica. Aunque el uso de
gelosa sangre de camero es obligado para la bsqueda de Streptococcus beta
hemoltico.
1. Se toma la muestra como ya se indico anteriormente se siembra en los
medios como son: Gelosa sangre de carnero, Thayer Martin, Sal y Manitol etc.
2. Se incuban 24 h a 37C
3. Hacer frotes y teir por tcnica de Gram., Ziehl Neelsen, Giemsa para
investigar asociacin con fusoespirilar.
4. S en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir
un diagrama de trabajo especfico para su identificacin as como el aviso
inmediato a las autoridades de la S.S.A.
5. Se debe leer todas las placas y se identifica
a los microorganismos
patgenos.
6. Es importante en nios menores de cinco dos aos 1 investigacin de
Haemophilus influenzae.
25
7. Es de gran trascendencia epidemiolgica determinar la presencia de

portadores de Neisseria meningitidis.
8. Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante
sembrar las muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama
especfico para su identificacin as como el aviso de los casos a la S.S.A.
Reporte:
El reporte al mdico es de acuerdo a nuestros resultados, es importante tomar en
cuenta la edad y sexo del paciente.
1. Se aisl Flora Normal
2. Se identific el siguiente microorganismo, se pone gnero y especie
3. Es posible encontrar ms de un microorganismo patgeno en un cultivo
4. De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene ms de una
bacteria patgena a cada una se les realiza su antibiograma
3.5 CUESTIONARIO
1.- Explique la importancia clnica del aislamiento e identificacin de este grupo
de microorganismos causantes de enfermedades de vas respiratorias, en un
laboratorio de bacteriologa clnica.
2.- Por qu es necesario realizar un antibiograma?
3.- Qu microorganismos son los ms frecuentes de aislar en un exudado
nasofarngeo?
4.- Qu otras enfermedades son causadas por microorganismos en vas
respiratorias, tanto altas como bajas?
26
Figura 12. Diagrama ecolgico: Aislamiento e identificacin de bacterias.

el retrete.
para su reuso.
3.7 EVALUACIN
27
3.8 BIBLIOGRAFA
28
SUBCOMPETENCIA 2
PRCTICA 4. SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS
(ANTIBIOGRAMA)
4.1 GENERALIDADES
Plantear la necesidad de saber cul es el antimicrobiano que se debe utilizar para
eliminar el microorganismo que est provocando la infeccin, es de suma
importancia en pacientes cuyas terapias antimicrobianas han tenido poco xito.
Principalmente en pacientes hospitalizados. Para esto es necesario conocer:
1. La susceptibilidad del microorganismo "in vitro"
2. La relacin de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la
misma especie.
3. Las propiedades farmacolgicas de los antimicrobianos, incluyendo su
toxicidad, distribucin, absorcin y excrecin.
4. Experiencia clnica en el tratamiento
5. Historia natural del proceso patolgico.
6. El estado inmune del husped
Al determinar la susceptibilidad a los microorganismos "in vitro", el laboratorio
dar una pauta a seguir sobre el tratamiento, sin dejar de considerar las
diferencias en su actividad in vitro.
Para este tipo de estudios existen varios mtodos como son:
1. Dilucin seriada en tubo; 2. Dilucin seriada en placa; 3. Difusin en discos de
papel filtro; 4. Sistemas automatizados.
La seleccin del mtodo depender de:
1. Nmero de pruebas que se procesen diariamente.
2. Tipo de microorganismo que se trata, del sitio que se aisle, tipo de
patogenicidad etc.
3. Equipo automatizado que se cuente.
29
4.2 OBJETIVO
Adquirir la destreza para la realizacin de antibiogramas, as como una buena
lectura del antibiograma, para apoyar en el diagnstico clnico.

Placas con medio de Mueller-
Placas con medio de Mueller-Hinton
Hinton de 15 cm de dimetro
Tubos con 4 mL de caldo
Mueller Hinton
Pinzas
con sangre de camero

Hisopos estriles
Solucin salina isotnica estril
Sensidiscos para grampositivos y
Tubo del Nefelmetro de Mac

Farland al 0.5%
Cepas control
gramnegativos
Regla transparente
4.4 PROCEDIMIENTO
1. Tocar con un asa en punta 4 5 colonias morfolgicamente iguales e inocular
en un tubo con caldo Mueller-Hinton
2. Incubar a 35C que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)
3. Ajustar la turbiedad tomando como referencia el tubo 0.5 del Nefelmetro.
4. Introducir el hisopo en el caldo con la suspensin bacteriana, quitar el exceso
de caldo en las paredes del tubo.
5. Sembrar uniformemente el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en
tres direcciones y al final pasar el hisopo en el borde de la placa.
6. Distribuidos los sensidiscos uniformemente o en su defecto usar un
dispensador automtico.
7. Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35C.
30
8.- Medir los halos de inhibicin con la regla.

9. Interpretar los dimetros de las zonas de inhibicin de las cepas con base a las
tablas del fabricante.
Reporte
Informar la actividad de los antibiticos contra los microorganismos empleados
Revisar los resultados de las cepas control.
Probar el comportamiento hacia otros antibiticos si la cepa es de
microorganismos resistentes a la penicilina
Usar eritromicina y tetraciclinas como alternativa s el paciente es sensible a la
penicilina.
Reportar gnero y especie de la bacteria y los resultados del antibiograma.
4.5 CUESTIONARIO
1.- Explique la importancia clnica de realizar un antibiograma.
2.- Qu es un antibitico?
3.- Cules son los mtodos de cuantificacin de microorganismos de acuerdo a
la sensibilidad o resistencia los antimicrobianos?
4.6 TRATAMIENTO Y DISPOSICIN DE RESIDUOS
Figura 13. Diagrama ecolgico : Aislamiento e identificacin de bacterias

31

D2. Esterilizar en autoclave 121C, 15 min y deschar como residuo orgnico el
medio de cultivo. Lavar y secar los tubos para su reuso.
4.7 EVALUACIN
4.8 BIBLIOGRAFA
2.- Holt, J., Krieg. N. et al.(1994). Manual Determinativo de bacteriologa de
Bergey. 10 Edicin. Editorial Lippincott Williams an Wilkins. Philadelphia USA.
3.- Mandigan MT, Martinko JM, Parker J (1999).Brock. Biologa de los
Microorganismos. Ed. Prentice Hall. 8va Edicin. Madrid.
32
SUBCOMPETENCIA 2
PRCTICA 5. INFECCIONES DE VAS RESPIRATORIAS
BAJAS (CULTIVO DE ESPUTO)
5.1 GENERALIDADES
Las infecciones de las vas respiratorias inferiores son causa importante de
enfermedad y muerte a nivel nacional. Siendo la tuberculosis en sus diferentes
cuadros agudos, una de las ms frecuentes.
De los principales agentes bacterianos asociados a neumonas sobre salen en
primer
trmino
Streptococcus
pneumoniae.
Klebsiella
pneumoniae,
Haemophilus influenzae: bacterias del tipo anaerobio tienen un papel

importante en algunas muestras, por lo que se recomienda la bsqueda de
Chlamvdia pneumoniae Mvcoplasma pneumoniae que se asocia con neumonas

atpicas, Francisella tularensis, Escherichia coli,
Pseudomonas aeruginosa,
levaduras del tipo de Candida albicans.

En este tipo de estudios el reporte preliminar de las tinciones para el inicio del
manejo antimicrobiano es de suma importancia.
El esputo puede no ser el espcimen de eleccin para determinar el agente
etiolgico en una neumona, sangre, lavado o aspirado transtraqueal pueden ser
ms adecuados. Secreciones del tracto respiratorio bajo de pacientes con datos
de infeccin, deben presentar alta cantidad de leucocitos y ausencia de clulas
epiteliales. La presencia de estas indica contaminacin de secrecin de
orofaringe.
33
5.2 OBJETIVO
Realizar de manera correcta un esputo, estudio que sirva para cultivar e
identificar las bacterias que se encuentran en las vas bajas respiratorias,
para contribuir al diagnstico clnico.

Placas
de
camero,
Agar
Mac
Sangre
Conkey,
de
Placas de gelosa sangre en base
agar
Columbia con cido nalidxico y
cetrimida, agar de Sal y Manitol,

agar
Thayer
Martn,
agar
colisima.
Levinthal, medio de Lowensten
Pipetas Pasteur estriles
Jensen.
Centrifuga
Tubos con medio de Biggy y

tubos de 13 x 100 mm con
Juego de colorantes de.Gram, ZiehINeelsen.
pruebas bioqumicas: TSI, UREA,
. Aceite de inmersin
CS, LIA yMIO
Taxos de optoquina y bacitracina de
Tubos
estriles
de
plstico
desechable
0.04 U y 10 U
Microscopio
5.4 PROCEDIMIENTO
Toma de muestra y transporte
Esputo.- Tomar las muestras al inicio del cuadro clnico sin que se haya
administrado algn antimicrobiano.
1. La muestra debe ser la primera de la maana (al despertase el paciente en
caso que el paciente no espectore se le puede ayudar con nebulizaciones).
2. La muestra se recoge en un frasco estril de boca ancha biodegradable con
capacidad de 30-50 ml. de material transparente y de tapa de rosca.
34
3. La muestra no debe contener saliva, seleccionar aquel producto que

microscpicamente en el examen en
fresco resulte representativa por su
elevado nmero de leucocitos y bajo nmero de clulas epiteliales.

4. Procesarse lo antes posible la muestra al llegar al laboratorio.
Lavado o cepillado bronquial
Este tipo de muestras solo son tomadas por un mdico en condiciones aspticas,
evitando la contaminacin con la flora de la cavidad oral.
Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA, Cncer o enfermedad
obstructiva crnica (EPOC).
La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio con las
medidas de seguridad pertinentes: Uso de campana de seguridad, guantes
desechables, cubrebocas y lentes protectores, o en su defecto mascarillas.
Seleccin de la muestra
1. Examinar la muestra microscpicamente para identificar la presencia de sangre
y material purulento as como el color de la misma.
2. Tomar de la porcin ms purulenta o con restos de sangre y a partir de esta
porcin hacer una tincin de ZiehI-Neelsen, tincin de Gram y el examen en
fresco el cual una vez puesto el cubre-objetos se presiona de tal forma que la
muestra se distribuya.
3. Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucin de las clulas
tipo.
4. Examinar por la ptica de Normarsky. Hay que seleccionar 10 campos
representativos y en ellos se cuentan el nmero y proporcin de leucocitos, de
clulas epiteliales de descamacin. Segn los resultados se clasifican de
acuerdo a Welch y Kelly.
5. Cultivar las muestras que sean de clase III. Rechazar las muestras que sean de
clase I y II, no se deben cultivar.
35
Nota. Indicar el motivo del rechazo de la muestra al mdico y solicitar una nueva
muestra; anexarla leyenda: "La muestra no fue aceptada para el cultivo debido a
la presencia de ms de 25 clulas epiteliales por campo microscpico (lOOx).
6. Inocular la porcin sobrante del material purulento en los medios de cultivo
adecuados por estra cruzada, no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa
sangre de camero para certificar la hemolisis.
7. Incubar las placas con sangre a 35-37 C en atmsfera parcial de C02 .
8. Se identifican las bacterias de acuerdo a su gnero y especie.
9. Inocular con pipeta estril el medio de Lowenstein-Jensen
Reporte
1. Proporcionar un informe preliminar despus de la observacin de los cultivos.
2. La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada.
3. Si no se observan microorganismos al trmino de la incubacin y la
identificacin de los microorganismos patgenos que ya se realiz .se debe
enviar el informe final con fecha y firma del responsable. Se debe informar el
cultivo p/e Negativo a bsqueda de S. pvogenes.
4. Si no hay crecimiento despus de dos das el informe final es el siguiente: No
hubo crecimiento bacteriano a las 48 hrs. de incubacin.
5.5 CUESTIONARIO
1.- Por qu es importante realizar un esputo?
2.- Qu otras muestras pueden servir para el diagnstico de alguna enfermedad
de vas respiratorias bajas?
3.- Qu errores se pueden cometer a la hora de realizar el reporte?
4.- Por qu se debe tener cuidado al trabajar con esputos?
36
Figura 14.Diagrama ecolgico: Aislamiento e identificacin de bacterias

el retrete.
para su reuso.
5.7 EVALUACIN
37
5.8 BIBLIOGRAFA
2.- Mac Faddin JF, (2003). Pruebas Bioqumicas para la Identificacin de bacterias
de importancia clnica. 3 Edicin. ED. Mdica Panamericana.

38
SUBCOMPETENCIA 2
PRCTICA
6.
BSQUEDA E
Mycobacterium tuberculosis
IDENTIFICACIN
DE
6.1 GENERALIDADES
La tuberculosis en nuestro pas, es actualmente uno de los problemas ms
importantes de salud en los ltimos 5 aos y su resurgimiento se da a partir
de la epidemia de VIH que ataca a todo el mundo.
El diagnstico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos
biolgicos como son: esputo, orina, lavado gstrico, raspado larngeo, lavado
o cepillado bronquial, materia fecal, sangre menstrual, heridas.
6.2 OBJETIVO
Realizar correctamente la bsqueda e identificacin de Mycobacterium
tuberculosis en diferentes productos biolgicos para un acertado diagnstico

clnico.

Tubos estriles de tapn de
rosca
de
plstico
biodegradable de 40 mL
Cubrebocas o en su defecto mascarilla

Tubos
con
medio de
Lowestein-
Jensen
Frascos estriles
Agitador vortex
Equipo de ZiehI-Neelsen
Equipo de Auramina Rodamina
NaOH al 4%
Pipetas Pasteur estriles

39
Frasco con fenol al 10%
Pinzas
Guantes desechables
Microscopio
Aceite de inmersin
Porta-objetos.
6.4 PROCEDIMIENTO
Requisitos indispensables a cubrir en la toma de muestra.-: 1. Calidad de la
muestra; 2. Cantidad; 3. Envase estril y desechable.
Esputo.- Usar frasco estril biodegradable de boca ancha.
Usar de preferencia la primera de la maana; enviarlas al laboratorio; agregar
carbonato de sodio con la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora
asociada, y disminuir el mal olor.
Usar hisopo larngeo o nasofarngeo en caso de nios.
Orina.- Usar frasco estril de boca ancha y lavado estricto de genitales.
Usar orina de 24hrs o la primera de la maana.
Lavado gstrico.- El muestreo solo lo efecta el mdico utilizando una sonda
gstrica estril y desechable.
Poner el contenido del lavado gstrico en un frasco estril
Procesar las muestras el mismo da que se toman; se trabaja el sedimento.
Lavado cepillado bronquial y pleural.- El mdico deber realizar el muestreo en
frasco estril en sala de operaciones bajo condiciones de asepsia.
Procesar el mismo da que se reciben; trabajar con el sedimento de la misma.
Heces fecales.- La muestra se colecta en frasco estril desechable.
Preparar una suspensin gruesa de materia fecal y solucin salina.
40
Agregar un volumen igual de ter.

Agitar y centrifugar a 3000 rpm durante 5 min. y eliminar el sobrenadante.
Utilizar la capa gelatinosa.
Realizar la tincin de BAAR.
Aadir al resto de las heces NaOH al 4% y seguir los pasos igual que el esputo.
Lquido cefalorraqudeo.- La muestra es obtenida por el mdico en forma
asptica en tubos estriles.
Centrifugar la muestra
Realizar las tinciones y siembra del sedimento se
Teir y sembrar las muestra el mismo da que se recibe.
Tejidos.- Colectar en frasco estril de boca ancha.
Tomar fragmentos de tejidos y triturar en un mortero estril.
Hacer frotis delgados.
Sembrar la muestra en forma directa.
Baciloscopa directa del esputo
1. Hacer un frotis de la porcin purulenta, usando un aplicador de madera.
2. Extender en forma uniforme.
3. Desechar el aplicador dentro del frasco de la muestra.
4. Dejar secar el frote al aire.
5. Fijar al calor.
6. Teir por la tcnica que se tenga para la bsqueda de BAAR.
Esquema de lectura dl portaobjetos teido:
Informe de la baciloscopia en la bsqueda de BAAR para diagnstico de
tuberculosis:
Ausencia de BAAR: NSEABAAR (No se observaron BAAR en todo el frote)
41
BAAR -. Se anota la cifra exacta en 100 campos de inmersin

BAAR+ en 100 campos de inmersin
Tomado de Intemational and Unin Againts Tuberculosis 1977

Concentracin y cultivo del esputo
Dado las caractersticas de las muestras es importante las indicaciones para
prepararlas y poder sembrar en el medio selectivo.
Mtodo de Petroff modificado.
1. Transferir 2 mL del esputo a un tubo de tapn de rosca de plstico desechable
y mezclar con un volumen igual de NaOH al 4% o con rojo de fenol.
2. Agitar el tubo en vortex durante 20 seg. .Incubar a 37 C por 15 min.
3. Centrifugar a 3,000 r.p.m. durante 15 min. (Por ningn motivo se debe abrir la
centrifuga si no se ha detenido completamente).
4. Decantar cuidadosamente el sobrenadante.
5. Neutralizar cuidadosamente el sedimento con HCl 1N o con H2S04 al 8%.
Hasta que el pH final no sea inferior a 6.5, ni superior a 7.2.
6. Sembrar de 7 a 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur estril en dos tubos
con medio de Lowenstein-Jensen .
7. Hacer dos frotis con el sedimento y teir con Ziehl-Neelsen para la bsqueda
de BAAR (puede ser tambin con auramina rodamina).
8. Incubar los tubos a 37C en posicin horizontal con la tapa floja durante 24 a
48 hasta que se evapore el inculo. Posteriormente apretar la tapa para evitar
que la muestra se evapore, incubar durante 60 das.
9. Revisar cada semana hasta la semana ocho, s no hay desarrollo informar como
presuntiva negativa. Reportar como negativo despus de 60 das de
incubacin.
10. Si hay crecimiento, identificar a M. tuberculosis; las caractersticas del
crecimiento son masas pequeas, de superficie mate y consistencia crea.
11. Informar gnero y especie del m.o wncontrado.
42
Tratamiento de la orina
1. Recibir la muestra de preferencia la primera orina de la maana en un frasco
estril de boca ancha.
2. Centrifugar a 3000 r.p.m. por 30 min.
3. Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original, cuidar de limpiar
la boca del tubo con fenol al 10%. Hacer el frotis con el sedimento.
4. Tratar el resto del sedimento con NaOH al 4%, Agregando un volumen 1 a 1 al
volumen del sedimento.
5. Dejar reposar 15min a 37C
6. Seguir los mismos pasos que para la tcnica del esputo para sembrar el
sedimento con pipeta Pasteur estril.
7. Realizar la baciloscopia del sedimento.
Reporte
En caso de tener BAAR positivo reportar previa correlacionarlo con el cultivo.
6.5 CUESTIONARIO
1.- A qu se debe que la tuberculosis sea considerada actualmente como una
enfermedad emergente?
2.- Qu otras muestras pueden servir para el diagnstico?
4.- Por qu se debe tener cuidado al manejar pacientes tuberculosos?
43
6.6 TRATAMIENTO Y DISPOSICIN DE RESIDUOS
Figura 15. Diagrama ecolgico. Aislamiento e identificacin de bacterias

el retrete.
para su reuso.
lavar y secar los tubos para su reuso..
6.7 EVALUACIN
6.8 BIBLIOGRAFA

44

Bergey. 10a. Edicin. Editorial Lippincott Williams an Wilkins. Philadelphia USA.
45
SUBCOMPETENCIA 2
PRCTICA 7. DIAGNSTICO DE ENFERMEDADES MENNGEAS
(CULTIVO DE LCR)
7.1 GENERALIDADES
En la historia se daba por hecho que la funcin primordial del LCR era la de
proteccin del SNC y la regulacin de su volumen, en 1926 Cushing propuso la
idea de que el LCR representaba la "Tercera Circulacin".
Recientemente se sabe que el LCR contribuye en el transporte de molculas
como hormonas y aminas de accin neutral activas a travs del encfalo.
La meningitis es la patologa que ms comnmente se presenta a este nivel,
debido a que los microorganismos responsables de esta forma clnica pueden
alcanzar el SNC a travs de la va hematgena (bacteriemia o septicemia) o
invadir directamente el cerebro (otitis, fracturas de crneo etc.)
El diagnstico de las enfermedades del SNC se apoya en el examen integral del
LCR en esta tarea, tanto el mdico como el qumico son responsables de la
utilidad del examen. El mdico desde la toma de la muestra, la medicin de la
presin intracerebral etc. y el qumico como realizador directo de los anlisis
citoqumicos y microbiolgicos del LCR.
7.2 OBJETIVO
Realizar en forma correcta el cultivo de lquido cefalorraqudeo para el
diagnstico de enfermedades menngeas.
46

Placas con agar sangre de
Tubos con medio de Lowensten-
carnero, Mac Conkey, Sal y
Jensen, con caldo tioglicolato, con
Manitol,
Pruebas bioqumicas: TSI, LIA. MIO
Medio
de
Thayer-
Martin (sin inhibidor), gelosa

de Levinthal.
CS. Urea
Tubos de 13x 100 mm con base CTA
conteniendo:
Equipo de Coaglutinacin
maltosa, fructuosa al 1%.
glucosa,
sacarosa,
Centrfuga.
Reactivo de Kovacs
. Pipetas Pasteur estril
Aceite de Inmersin.
Tinta china (Marca Pelikan)
Equipo de tincin de Gram
Equipo de tincin Auramina
Taxos de bacitracina y optoquina.
rodamina.
7.4 PROCEDIMIENTO
Toma y transporte de la muestra
1. El LCR es obtenido por un Mdico a travs de puncin lumbar, buscando un
volumen aproximado de 5 a 10 mL de LCR.
2. Distribuir la muestra de LCR en 3 tubos estriles, uno de los cuales ser usado
para el estudio citoqumico mientras que el otro se utilizar para el estudio
microbiolgico y el tercero para el diagnstico rpido.
3. Es muy importante que las muestras sean acompaadas de un resumen clnico
que incluye antecedentes de importancia epidemiolgica.
4. El examen citoqumico y bacteriolgico del LCR es el requisito indispensable
para identificar al microorganismos causal de las meningitis de cualquier
etiologa en particular de las bacterianas.
Tcnica:
1.
Manejar el LCR en condiciones de esterilidad,

47
2.
Reportar en forma inmediata el resultado de las tinciones y la prueba de
coaglutinacin para el inmediato manejo del paciente.

3.
Reportar las caractersticas principales del LCR como son: color aspecto,
presencia de sangre, de cogulos o pelculas.

4.
Si a primera vista la muestra es purulenta puede examinarse
inmediatamente en forma directa, de lo contrario es de suma importancia

centrifugar el LCR a 3000 r.p.m. por 5 a 10 min.
5.
Separar el sobrenadante y usar el sedimento para el cultivo y las
diferentes tinciones.
6.
Observar las tinciones primeramente con el objetivo de 40x y
posteriormente con el objetivo 100x. Reportar en forma inmediata.

7.
Incubar las placas de gelosa sangre Levinthal y Thayer-Martn a 37C en
atmsfera parcial de C02 por tres das con una revisin diaria.
8.
En caso de sospechar de meningitis por Micobacterias, se siembra el
sedimento en el medio de Lowenstein-Jensen con pipeta Pasteur esta se debe

incubar por 6 semanas con revisin diaria del mismo.
9.
Realizar con el sobrenadante la prueba de coaglutinacin.
10. Reportar el resultado de esta prueba junto con las tinciones.

Reporte:
1. Reportar cualquier presencia de microorganismo se el LCR.
2. Reportar resultados de cada tincin y el estudio de coaglutinacin.
3. Reportar los resultados del estudio citoqumico junto con el bacteriolgico.
4. Reportar la bacteria encontrado as como su antibiograma.
5. Reportar cultivos sin crecimiento como Negativos a los tres das de incubacin.
Resultados ideales e interpretacin:
Consultar en internet los resultados normales y compararlos con la
interpretacin de cada prueba.
48
7.5 CUESTIONARIO
1.- Por qu es importante realizar el estudio de LCR?
2.- Qu enfermedades menngeas existen, solo los nombres?
4.- Por qu se debe tener cuidado al trabajar con LCR?
Figura 16. Diagrama ecolgico.Aislamiento e identificacin de bacterias

el retrete.
para su reuso.
49

7.7 EVALUACIN
7.8 BIBLIOGRAFA

Bergey. 10a. Edicin. Editorial Lippincott Williams an Wilkins. Philadelphia USA.

.
50
SUBCOMPETENCIA 2
PRCTICA 8. HEMOCULTIVO Y CULTIVO DE MDULA SEA
8.1 GENERALIDADES
El cultivo de sangre apoya el diagnstico de las infecciones sistmicas que
presentan en su evolucin una etapa de bacteriemia septicemia.
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccin activa y
diseminada en los tejidos; esta situacin puede originarse por:
BACTERIEMIA: Puede ser transitorio como resultado de un fenmeno comn
como el cepillarse los dientes.
La bacteriemia persistente o recurrente implica la evolucin de algunas
enfermedades como infeccin de vas urinarias, en infeccin de heridas.
SEPTICEMIA: Presencia de bacterias en sangre y tejidos, acompaado por ataque
al estado general, las bacterias se multiplican en forma activa liberando toxinas,
originando manifestaciones clnicas de magnitud diversa (local y sistmica).
PIEMIA: Formacin de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
en pacientes comprometidos como son recin nacidos, personas de la tercera
edad, as como inmunosuprimidos se pueden presentar focos spticos, y poner
en peligro su vida.
8.2 OBJETIVO
Realizar correctamente un hemocultivo y cultivo de mdula sea, a travs de las
tcnicas especializadas, para la contribucin de un diagnstico adecuado.
51

Placas
de
Agar
camero, Mac
Manitol,
sangre
de
Conkey, Sal
Levnthal,
Thayer-
Martn y Placas de agar Brucella

Frasco con tintura de Iodo
Medio
difsico
de
Pruebas bioqumicas: TSI, MIO, LIA,

CS y Urea
Microscopio
Torniquete y torundas con alcohol
Agujas estriles calibre 21
Ruiz
Jeringas estriles y desechables de
Castaeda.
5 o 10 MI
Sensidiscos de Bacitracina y
Equipo de tincin de Gram
Optoquina.Taxos de oxidasa
8.4 PROCEDIMIENTO
Toma de muestra y transporte:
Este tipo de muestra est indicado en casos de fiebre, hipotermia, sensacin de
enfriamiento,
calosfros,
postracin,
hipotensin,
fiebre
prolongada
intermitente con soplo cardiaco perceptible.

1.
Tomar la muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del periodo
febril, antes de llegar al pico.

2.
El nmero e intervalos de los cultivos depende del cuadro clnico del
paciente as como de su gravedad.

3.
Es importante saber el tipo de botella de Hemocultivo que se puede
actualmente usar ya que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la

accin de los antimicrobianos as como el complemento y la fagocitosis.
4.
Puede usarse mdula sea lo que aumentara las posibilidades de obtener
un buen diagnstico.
52
5.
Seleccionar el sitio de toma de muestra, evitar tomar muestras de catter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda

obtenerse por venopuntura.
6.
Limpiar el sitio de venopuntura vigorosamente con torundas impregnadas
de etanol al 70% o con tintura de yodo en alcohol.

7.
Esperar que seque sin soplar.
8.
Por ningn motivo se debe tocar el sitio despus de que me desinfectado.
9.
Limpiar el tapn de las botellas o tubos de cultivo con alcohol-Iodo.
10.
Extraer la sangre, en volumen acorde a la edad del paciente y marca de la
botella usada. El volumen recomendado es: niosos de 1 a 3 mL, adultos de 5 mL

en adelante.
11.
Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva.
Mezclar bien en forma homognea para evitar que se coagule.

12.
Mantener la botella inoculada horizontalmente con la parte slida hacia
abajo durante 20 minutos.

13.
Incubar la botella a 37C durante 6 semanas en forma vertical,
Hemocultvo Lquido
1. Tomar la muestra cmo se indic anteriormente.
2. Incubar a 37C en aerobiosis; inspeccionar las botellas al menos una vez al da
durante 3 das y luego 2 a 3 veces por semana hasta completar 21 das.
Botella de Cultivo Bifsico
1. Emplear botellas de Ruz Castaeda modificada o medios bifsicos
comerciales.
2. Tomar la muestra de sangre como se ndic anteriormente.
3. Inocular la sangre en la botella e incubar a 37C durante 7 das o dejar hasta 45
das en caso que se sospeche de Brucella.
4. Incubar en atmsfera de C02 al 5-10%.
53
5. Inspeccionar los frascos a diario buscando colonias en la superficie del medio

como seal de un cultivo positivo.
6. Realizar tincin de Gram en cultivos positivos.
7. Realizar resiembras en los medios indicados.
En ausencia de crecimiento visible se efectan resiembras a las 48 h, y luego
cada semana hasta completar los 21 das, aunque puede continuar por 45 das, y
solo despus de este tiempo se puede descartar y considerar negativo.
Mtodo de Lisis
1. Tomar los tubos que contienen sustancias hemolizantes.
2. Concentrar los m.o. por centrifugacin a 3000 rpm durante 30 min.
3. Inocular el sedimento en las diferentes placas de cultivo.
Mtodo de Fluorescencia
1. Inocular la muestra en las botellas de acuerdo al tipo de paciente, este tipo de
botellas tiene medios de cultivo para bacterias aerobias, anaerobias y hongos.
2. Incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37C y
rotando suavemente.
3. En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de
fluorescencia la que se va aumentando por el incremento de C0 2 implcito por el
propio metabolismo bacteriano esto lo realiza cada 10 min. La alarma avisa al
qumico la posicin de la botella con crecimiento.
4. Realizar las resiembras en los medios ya descritos.
Reporte:
Es poco frecuente encontrarse dos o ms especies bacterianas diferentes en un
cultivo de sangre, en la mayora de los casos se trata de alguna contaminacin y
esto sucede principalmente por una mala toma de muestra.
S no hay crecimiento a los 45 das hay que dar como negativo el cultivo y se
desecha la botella.
54
En el caso de haber crecimiento se identifica a el agente etiolgico con las

pruebas requeridas por el mismo.
Es importante mantener informado al mdico como va el hemocultvo de sus
pacientes principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva.
8.5 CUESTIONARIO
1.- Qu es un hemocultivo?
2.- Qu microorganismos pueden aislarse de un hemocultivo?
3.- Qu errores se pueden cometer a la hora de realizar los anlisis?
4.- Por qu se debe tener cuidado al trabajar con sangre?
Figura 17. Diagrama ecolgico.Aislamiento e identificacin de bacterias
55

el retrete.
para su reuso.
8.7 EVALUACIN
8.8 BIBLIOGRAFA

56
SUBCOMPETENCIA 2
PRCTICA 9. INFECCIONES DEL APARATO GENITAL: EXUDADO
CERVICO VAGINAL Y EXUDADO URETRAL
9.1 GENERALIDADES
Los principales agentes asociados a las enfermedades de transmisin sexual ETS
incluyen virus, bacterias, hongos, protozoarios y ectoparsitos los cuales estn
involucrados en varios sndromes, por lo que la participacin del laboratorio en el
diagnstico es relevante.
En general la identificacin de las bacterias productoras de ETS no siempre es a
travs de cultivos, en algunos casos se requiere de tcnicas inmunolgicas.
Como el caso de Treponema pallidum ya que no existe ningn medio sinttico
para su aislamiento Chlamvdia trachomatis que por ser una bacteria intracelular
obligada requiere de clulas vivas para su multiplicacin, de tinciones especiales
o bien de tcnicas de hibridacin para su identificacin. Las infecciones agudas
pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar secuelas
graves en tanto que la infeccin puede tener caractersticas metastsicas y
transmitirse por va sangunea a otros rganos y tejidos.
9.2 OBJETIVO
Realizar en forma correcta exudados cervico vaginal y uretral para el diagnstico
de infecciones del aparato genital.
57

Espejos
vaginales
estriles
desechables.
Hisopos especiales de alginato

de calcio o de dacron.
Tubos con solucin salina estril
Porta y cubre objetos nuevos
Placas de gelosa sangre de camero
Placas de agar sangre humano en
Equipo para detectar Clamidia
Sal
Manitol,
Mac
Conkey, Dnasa con indicador
Papel pH
Tubos de Biggy, Tubos en base de
conteniendo:
agar Columbia, Thayer-
Martin,
(Mtodo de Elisa)
CTA
base
GIucosa,
Maltosa Fructuosa, Sacarosa y

Raffinosa.
Tubos de 13 x 100 mm de
bioqumicas con: TSI, LIA, MIO, CS
y Urea
Cubrebocas
Guantes desechables estril
Lentes protectores
Sabanas desechables
Taxos de oxidasa y de optoquina
Tubos con caldo soya triplicas con
Frasco con solucin de KOH al
NaCl al 6%
Tubos con 0.5 mL de solucin
acuosa al 1% de hipurato de
sodio.
Juegos de colorantes de Gram
10%.
Solucin de ninhidrina al 3.5%
en acetona butanol 1:1 v/v
Tincin de Giemsa y Tincin de
Papanicolau.
9.4 PROCEDIMIENTO
Toma y transporte de la muestra:
1. Tomar la muestra cuando la sintomatologa existe y obligatoriamente en los
contactos de la pareja sexual.
2. El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano.
3. Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de
algnato de calcio, de dacrn o tratados con solucione Buffer.
58
4. Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y

en forma inmediata.
Muestras de canal anal
1. Colocar al paciente en posicin boca abajo
2. Insertar un hisopo aproximadamente 3 cm dentro del canal anal.
3. Rotar con cuidado el hisopo sobre las criptas del anillo anal y se espera unos
30 segundos para que se absorba la muestra.
Muestras de faringe
1. Tomar con un hisopo de algodn de la parte posterior de la faringe.
Muestras de lesiones
1. Obtener las muestras directamente de las lesiones (chancro).
2. Limpiar la superficie de la lesin suavemente con gasa humedecida en
solucin salina estril.
3. Presionar el chancro con el pulgar y el ndice para producir la salida del
lquido.
4. Tocar suavemente el lquido de la lesin con un cubreobjetos limpio.
5. Colocar sobre una gota de solucin salina previamente colocada sobre un
portaobjeto.
6. Observar en el microscopio de campo obscuro.
7. Sembrar la muestra tomada directamente de la lesin si es necesario.
Tcnica:
Medicin del pH:
Es importante la medicin del pH vaginal directamente de endocervix al igual
que el de uretra.
59
Prueba de KOH
1. Realizar esta prueba con la secrecin que queda en el espejo, agregar unas
gotas de KOH al 10%, reportar positivas si desprende un olor caracterstico a
"pescado" el cual se debe a aminas voltiles.
Observacin en fresco
Son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe secrecin vaginal
y en el caso de tricomoniasis, vaginosis bacteriana y candidiasis, as como en la
trichomomasis en pacientes masculinos.
1. Colocar las muestras recolectadas en un tubo con solucin salina isotnica.
2. Tomar una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubrir.
3. Observar al microscopio en objetivo de 40 x y con poca iluminacin.
4. Reportar si se observan Trichomonas vaginalis, levaduras, clulas clave,
leucocitos, bacilos de Dderlein
Observacin de tinciones
1. Realizar un extendido de la muestra tomada directamente a lo largo del
portaobjetos de tal manera que si hay leucocitos y clulas e extiendan
adecuadamente y conserven as su integridad.
2. Realizar la tincin de Gram y reportar la flora bacteriana existente, si hay
levaduras, si hay clulas clave, la cantidad de bacilos de Dderlein, si hay
leucocitos y eritrocitos.
3. Reportar los diplococos Gram negativos intracelulares presuntivos de N.
gonorrhoeae en el caso de muestras obtenidas de uretra.
4. Fijar y proceder de acuerdo a la tcnica los frotis que a usarse para pruebas de
inmunofluorescencia directa o indirecta.
5. Observar en campo obscuro.
60
Aislamiento
1. Sembrar las muestras directamente en el medio de cultivo en forma adecuada.
En el caso de Thayer-Martn se debe sembrar en forma de Z con el hisopo y
posteriormente estrar con el asa.
2. Incubar en atmsfera parcial de C02 a 37 C las placas de Gelosa sangre, de
Thayer Martn, de gelosa chocolate y del medio de Casman.
3. Revisar las placas despus de la incubacin y realizar la tincin de Gram.
Exudado uretral
1. Es un examen de laboratorio que se lleva a cabo en los hombres adultos y
jvenes para identificar organismos en la uretra y en el aparato genital que
causan infeccin.
2. Este examen se realiza cuando se presenta uretritis la cual es una infeccin
caracterizado por la aparicin de exudado uretral.
3. Las uretritis pueden no ser infecciosas, sin embargo la mayora estn
producidas por infecciones de transmisin sexual.
4. Toma de muestra:
5. Se recomienda al paciente no orinar por lo menos una hora antes de tomar la
muestra.
6. En casos de gonorrea, cuando se produce un exudado abundante, presionar
ligeramente la uretra con el fin de expulsarlo, recoger con un hisopo de
alginato estril y depositar en el medio de transporte de Stuart.
7. Al sospechar de infeccin por clamidia, emplear hisopo de alginato de calcio
adecuado para toma de muestras en varones, introducir de 2 a 4 cm en la
uretra y frotar las paredes haciendo girar el hisopo durante 5 a 10 segundos;
con esta muestra se deben hacer de inmediato frotes en portaobjetos limpios
que se fijan con acetona.
8. Enviar el tubo y las preparaciones lo antes posible de modo que no lleguen al
laboratorio despus de 24 horas.
61
Reporte para el exudado vaginal

En este tipo de reporte es importante informarle a l mdico lo siguiente:
1. Edad del paciente.
2. Sexo del mismo.
3. Tipo de muestra.
4. Ao en el que se realiz
5. Que se observo en la toma de muestra p/e Como se encuentra el
endocervix. Si hay lceras, cantidad de flujo, olor, etc.
6. pH Vaginal
7. Tincin de Gram directa.
8. Examen en fresco
9. Resultado del cultivo
10. Antibiograma
11 .Bsqueda de Chiamydia trachomatis.
12. Bsqueda de Treponema pallidum.
13. Firma del responsable
Reporte para el exudado uretral
La presencia de ms de 4 PMN/c y diplococcos Gram negativos intracelulares,
indicara uretritis por Neisseria gonorrhoeae.
Si alguna de las tcnicas especiales es positiva se informar: para Chlamydia
trachomatis (ELISA positiva, PCR positiva).

Con estos informes se valorar clnicamente al paciente.
62
Figura 18.Diagrama de flujo del exudado uretral
9.5 CUESTIONARIO
1.- Qu importancia tiene el Haemophilus ducreyi (bacilo de Ducrey) en un
exudado vaginal o uretral?
2.- Cules pueden ser infecciones causadas por Clamydia trachomatis?
4.- Por qu se debe tener cuidado al trabajar con exudados?
63
Figura 19. Diagrama ecolgico: del aislamiento e identificacin de bacterias

el retrete.
para su reuso.
9.7 EVALUACIN
64
9.8 BIBLIOGRAFA
65
SUBCOMPETENCIA 2
PRCTICA 10. CULTIVO DE EXUDADO OCULAR, INFECCIONES
OCULARES
10.1 GENERALIDADES
Las infecciones oculares se manifiestan comnmente por el constante lagrimeo.
Los microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del
paciente y su localidad.
Considerndose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recin nacidos por
las posibles secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Una de las principales molestias que presentan los pacientes sobre problemas
oculares es la conjuntivitis, muy extendida entre la poblacin de ambos sexos y
de todas las edades.
Cualquier infeccin en la conjuntiva del recin nacido se denomina oftalma del
recin nacido. Los ojos del beb se contaminan, por lo general, con el agente
infeccioso durante el paso a travs del conducto del parto
Las causas de oftalma del recin nacido son: Neisseria gonorrhoeae, Bacterias
oportunistas como estafilococos, Streptococcus pneumoniae, estreptococo A y B
y algunos gramnegativos como Pseudomonas aeruginosa, Neisseria meningitidis.,
Chlamydia trachomatis y Herpesvirus humano tipo 2 (herpes genital).
10.2 OBJETIVO
Realizar correctamente el exudado ocular para contribuir a un diagnstico clnico
acertado de infecciones oculares.
66

Hisopos estriles de alginato de
calcio o de dacrn.
Placas de Gelosa sangre de
camero.
Tubos de 13 x 100 con medio
Bggy, bioqumicas : TSI,LIA, MIO,
CS y Urea
Guantes estriles y desechables

Taxos de optoquina y bacitracna
Placas de Agar; Sal y manitol, Mac
Conkey, Thayer Martn, Levinthal,
Dnasa
Equipo
para
bsqueda
de
Chlamydia
Reactivo de oxidasa.
10.4 PROCEDIMIENTO
Toma de muestra:
1. Indicar al paciente que se debe abstener de aplicar soluciones antispticas o
en su defecto antimicrobiano. En ambos ojos.
2. No debe ir con pintura.
3. No llevar puestos lentes de contactos si usa.
4. Realizar con un hisopo delgado de algnato de calcio o de dacrn la toma de
muestra.
5. Tomar en la porcin anterior del saco conjuntival inferior y superior de ambos
ojos.
6. Realizar un ligero raspado.
7. Identificar el ojo de donde procede la muestra; rotular como ojo derecho o
izquierdo.
En caso de que el paciente tenga lesiones ulcerosas en cornea solo deber
tomarlas un mdico Oftalmlogo.
67
Tcnica:
1. La muestra se toma del sito de dao y se siembra en los medios de cultivo
indicados.
2. Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran.
3. Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincin de Gram.
4. Se identifica el crecimiento segn el diagrama.
5. Para bsqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto
por mtodos de inmunofluorescencia.
Reporte:
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada
para su tratamiento inmediato.
Reportar el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la
identificacin.
Reportar el antibiograma en este tipo de muestra.
10.5 CUESTIONARIO
1.- Qu es la Blefaritis ulcerosa o estafiloccica?
2.- Dependiendo del tipo de glndulas afectadas hay dos tipos de orzuelo,
cules son?
68
Figura 20. Diagrama ecolgico: del aislamiento e identificacin de bacterias

el retrete.
para su reuso.
10.7 EVALUACIN
69
10.8 BIBLIOGRAFA

70
SUBCOMPETENCIA 2
PRCTICA 11. EXUDADO TICO (ODO MEDIO) INFECCIONES
TICAS
11.1 GENERALIDADES
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones ms frecuentes
estn la de los odos ya sean por su forma crnica o aguda. El cuadro inicial puede
asociarse a infecciones respiratorias mal cuidadas, en nios por la introduccin
de objetos extraos p/e botones, frijoles etc.
Las infecciones de odo son frecuentemente asociados a
S. pneumoniae, H.
influenzae y Branhamella catharralis, con menos frecuencia Staphylococcus

aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae.
11.2 OBJETIVO
Realizar correctamente el exudado tico (odo medio) para contribuir a un
diagnstico clnico acertado de infecciones ticas.

Guantes estriles desechables.
Reactivo para catalasa
Gasas estriles.
Hisopos delgados de alginato de

calcio o de dacron.
Placas de agar: Sangre de camero.,
Colorantes de Gram
Sal
Tubos
Levinthal, Dnasa
Tubos de 13 x 100 con medio
Manitol,
Mac
Conjkey,
Taxos de optoquina
71
Biggy
pruebas
bioqumicas:
TSI, LIA, MIO CS y Urea.
Reactivo para oxidasa

Tubos con 0/F con glucosa al 1%
Taxos con bacitracina.
11.4 PROCEDIMIENTO
Toma de muestra:
1. Indicar al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos.
2. Introducir el hisopo teniendo cuidado de no lastimar, indicando el paciente
hasta donde soporta el hisopo.
3. Diferenciar los tubos del odo derecho e izquierdo.
4. Limpiar el odo con solucin de cloruro de benzalconio 1:1000 para eliminar la
flora contaminante en las infecciones crnicas.
Cuando se trata de perforaciones del tmpano la muestra debe ser tomada por el
otorrinolaringlogo
Tcnica:
Sembrar la en forma inmediata despus de la toma de muestra en los medios de
cultivos indicados.
Efectuar tincin de Gram a Cualquier crecimiento y realizar la identificacin.
Reporte:
En el reporte al mdico se debe indicar:
1. El resultado por separado de cada odo
2. Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra.
3. Si se encontr algn objeto extrao.
4. Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre
positivo.
72
5. S no se asla ningn microorganismo se reporta como negativo a las 72 horas

de incubacin.
11.5 CUESTIONARIO
1.- Qu es la mastoiditis?
2.- Qu es la otitis media aguda?
Figura 21 . Diagrama ecolgico: del aislamiento e identificacin de bacterias

el retrete.
73
para su reuso.
11.7 EVALUACIN
11.8 BIBLIOGRAFA
74
SUBCOMPETENCIA 2
PRCTICA 12. CULTIVO DE HERIDAS
12.1 GENERALIDADES
Las infecciones de las cuales se obtienen muestras de heridas y abscesos pueden
ser exgenos o endgenas.
Las infecciones exgenos incluyen las asociadas con heridas traumticas, heridas
o lceras por decbito, mordeduras de animales o humanos, quemaduras o
cuerpos extraos en la piel o mucosa.
Estas lesiones con frecuencia son colonizadas por bacterias ambientales y los
hisopados a menudo no reflejan la verdadera causa del proceso infeccioso.
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados, quemados u
operados que se encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que
pueden adquirir en esos nosocomios.
El principal problema de stas es la resistencia que presentan a los diferentes
antibiticos. Tambin existen infecciones de heridas por falta de limpieza de
pacientes ambulatorios.
12.2 OBJETIVO
Realizar correctamente el cultivo de heridas para facilitar el diagnstico clnico.

Hisopos estriles de algnato de
calcio o de dacron.
Guantes estriles
Colorantes de Gram, ZiehI-Neelsen
75
Gasas estriles
Solucin
de
Solucin de cloruro de benzalconio

lodo-Ioduro
de
Solucin salina isotnica estril
potasio al 3%
. Tubos de 13 x 100 con: Bigg y
pruebas
Jeringas estriles y desechables.

Placas de agar: Sangre de camero,
bioqumicas
Mac Conkey, Sal y manitol, agar
conteniendo: TSI, LIA, MIO CS y
chocolate, agar cetrimida, DNASA
Urea, con 0/F con glucosa al 1%,
Reactivo de catalasa
Caldo tioglicolato, con caldo
Portaobjetos
soya tripticasa con NaCl al 6%
Prueba de oxidasa
12.4 PROCEDIMIENTO
Toma de muestra y transporte:
Emplear en esta prctica material purulento o seroso de diversas infecciones, se
debern tomar sus debidas precauciones
Heridas cerradas:
1. Toman las muestras de la porcin profunda con una jeringa estril;
desinfectar previamente la piel con solucin de lodo-Ioduro de potasio al 3%.
2. Sembrar de inmediato y procesar para bacterias Anaerobias.
3. Realizar la tincin de Gram de la muestra.
Herida abierta y quemaduras:
1. Se deben limpiar con algodn y solucin salina estril. Evitando tomar las
muestras de las porciones superficiales. Tomando del centro y de la parte
profunda de la infeccin.
2. Se utilizan 3 hisopos estriles.
3. Se debe realizar la tincin de Gram de la muestra directa.
4. Se debe trabajar la muestra para Anaerobios.
76
Tcnica:
Utilizar hisopos estriles para la toma de muestra del material purulento.
1. Realizar las tinciones de Gram y Ziehl-Neelsen.
2. Sembrar los diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3. Eliminar el oxgeno del medio de tioglicolato, hirvindolo durante 10 min.
4. Incubar todo el material a 37C durante 24 a 48 h.
5. Revisar las placas y realizar del crecimiento la tincin de Grama eidentificar de
acuerdo al gnero y especie
6. Realizar antibiogramas.
Reporte:
Reportar la tincin de Gram directa lo ms pronto posible para iniciar
tratamiento.
Reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento.
Reportar como negativo cuando no existe crecimiento.
12.5 CUESTIONARIO
1.- Cules son los principales microorganismos que se pueden aislar de las
heridas?
2.- Por qu es importante la forma de tomar la muestra?
4.- Por qu se debe tener cuidado al trabajar con stos exudados?
77
Figura 22. Diagrama ecolgico. Aislamiento e identificacin de bacterias

el retrete.
para su reuso.
12.7 EVALUACIN
78
12.8 BIBLIOGRAFA

79
BIBLIOGRAFA GENERAL

Bergey. 10a. Edicin. Editorial Lippincott Williams and Wilkins. Philadelphia USA.

80
ANEXOS
81
ANEXO I. INSTRUMENTOS DE EVALUACIN

ESCALA ESTIMATIVA PARA EVALUAR EL DESEMPEO EN EL LABORATORIO
(INDIVIDUAL).
Fuente: Martha Rosales Raya / Adecuado por comit de academia.
ESCALA ESTIMATIVA PARA EVALUAR LA BITCORA DE LABORATORIO
Fuente: M.E.S. Luis Bolaos Celis / Adecuado por comit de academia.
ESCALA ESTIMATIVA PARA EVALUAR EL REPORTE DE LABORATORIO
Fuente: M en C. Rafael Manuel de Jess Mex lvarez/ Adecuado por comit de
academia.
82
ESCALA ESTIMATIVA PARA EVALUAR EL DESEMPEO EN EL LABORATORIO (INDIVIDUAL)

ALUMNO:
Puntos:
Aspectos a evaluar
Acondiciona y prepara su
rea de trabajo
Prepara en forma
adecuada equipos y
materiales
Forma de trabajo del
alumno
Grado/grupo:
Matricula:
2
Escala
A veces
Con regularidad
Siempre
A veces
Con regularidad
Siempre
Individual
Con su equipo
Colaborativamente
Escasamente
Medianamente
Totalmente
Inadecuada
Medianamente
adecuada
Adecuadamente
Insuficiente
Suficiente
Excelente
Poco cuidadoso
Cuidadoso
Muy cuidadoso y
meticuloso
Poco cuidadoso
Cuidadoso
Muy cuidadoso y
meticuloso
Inadecuadamente
Medianamente
adecuada
Adecuadamente
Slo con compaeros
Con compaeros e
instructor
Con compaeros,
instructor y
sujeto/objeto de
estudio
En el equipo realiza de
adecuada las tareas que se
le encomiendan
Escasamente
Medianamente
Totalmente
En el desarrollo de la
prctica emplea el tiempo
eficientemente
Escasamente
Por intervalos breves
En todo el desarrollo de
la prctica
Al concluir la prctica
colabora con el equipo con
la limpieza y entrega de
materiales
Escasamente
Medianamente
Totalmente
Es organizado en su forma
de trabajo
Toma notas elaboradas y

aporta de su experiencia
Demuestra conocimiento
al realizar las actividades
de la prctica
Emplea de forma adecuada

equipo(s), reactivos y
materiales
Realiza los experimentos

atendiendo a las medidas
de seguridad
Atiende a las indicaciones

de trabajo del docente y/o
instructores
Su actitud de trabajo es
respetuoso con
compaeros, instructor y
sujeto/objeto de estudio
Ponderacin
Observaciones y
sugerencias
Total de puntos
Fuente: Martha Rosales Raya / Adecuado por comit de academia.
83
ESCALA ESTIMATIVA PARA EVALUAR LA BITCORA DE LABORATORIO
Forma 20%
EQUIPO No.
Puntos
4 3 2
Puntos
Ponderados
Criterio
Indicadores
Presentacin
Es una libreta costurada, enumerada, en

buen estado, aspecto presentable
x 0.2=
Usa ttulos y subttulos para organizar y

guardar un orden en el registro de las
actividades realizadas en el laboratorio.
x 0.2=
Se indica quienes participaron en el

experimento mediante un listado con
firmas.
x 0.2=
Describe en forma breve, clara y precisa el

experimento(s) a realizar
X 0.8=
Explica en forma breve y clara lo que se

pretende probar experimentalmente
X 0.8=
Describe el procedimiento del

experimento(s) con enunciados claros y
completos.
X 0.8=
Presenta una secuencia correcta de los

pasos y estn enumerados
X 0.8=
Se registra los acontecimientos y sucesos

que ocurren como resultado del
experimento(s), mediante datos,
esquemas, dibujos, tablas, fotos o videos
segn se requiera para cada caso.
X 0.8=
Se registran las observaciones en

secuencia correcta de acuerdo al orden de
los eventos.
X 0.8=
Se registr los eventos o sucesos

significativos del experimento(s)
observado.
X 0.8=
Emplea un lenguaje tcnico y propio de la

disciplina para expresar principios, hechos
o ideas registradas.
X 0.8=
Organizacin
Introduccin
Contenido 80%
Procedimiento*
Registro de
observaciones*
Conceptos
cientficos
*Estos aspectos son crticos no pueden faltar en la bitcora
Total de
puntos
Fuente: M.E.S. Luis Bolaos Celis / Adecuado por comit de academia.
84
ESCALA ESTIMATIVA PARA EVALUAR EL REPORTE DE LABORATORIO
Forma 20%
EQUIPO No.
Puntos
Ponderados
Indicadores
Presentacin
Es un texto en un folder de aspecto presentable,

elaborado a computadora, hojas blancas tamao
carta, con una portada de datos generales.
X 0.2=
Fecha de
entrega
Entrega el informe de laboratorio completo en la

fecha establecida
X 0.2=
Organizacin
Usa ndice, ttulos y subttulos para organizar el

informe de laboratorio que presenta.
X 0.2=
Ortografa
Presenta un mximo de dos errores ortogrficos o

de puntuacin
X 0.2=
Referencias
bibliogrficas
El documento contiene la bibliografa citada en el

informe para sustentar el trabajo.
X 0.2=
Describe en forma breve, clara y precisa el

experimento(s) a realizar
X 0.8=
Redacta en forma breve y clara el objetivo de lo que

pretende lograr experimentalmente.
X 0.8=
Se formula hiptesis el experimento en forma clara

basada en el razonamiento del fundamento terico.
X 0.8=
Describe el procedimiento del experimento(s) con

enunciados claros y completos.
X 0.8=
Presenta una secuencia correcta de los pasos y estn

enumerados
X 0.8=
Se reporta en orden y en forma correcta los datos de

los acontecimientos y sucesos que ocurrieron como
resultado del experimento(s),
X 0.8=
Se construye de manera correcta: esquemas, dibujos,

tablas y grficos que muestran de manera objetiva
los resultados obtenidos
X 0.8=
Se reporta los eventos o sucesos significativos del

experimento(s) observado.
X 0.8=
Se discuten los resultados (datos experimentales

obtenidos) con citas bibliogrficas que lo soporten.
X 0.8=
Se concluye contrastando objetivo(s) con resultados

y referencias bibliogrficas.
X 0.8=
Se justifica la aceptacin o rechazo de la hiptesis,

contrastando los datos experimentales obtenidos
con las referencias bibliogrficas (en caso de
manejar hiptesis).
X 0.8=
Emplea un lenguaje tcnico y propio de la disciplina

para expresar principios, hechos o ideas registradas.
X 0.8=
Introduccin
Hiptesis
(En caso de
requerirse)
Procedimiento*
Contenido 80%
Puntos
4
3
Criterio
Registro de
observaciones*
Discusin y
Conclusin*
Conceptos
cientficos
*Estos aspectos son crticos no pueden faltar en el reporte
Total de puntos
Fuente: Rafael Manuel de Jess Mex lvarez / Adecuado por comit de academia.
85
ANEXO II. LINEAMIENTOS GENERALES EN MATERIA DE SEGURIDAD E HIGIENE A

SEGUIR EN LOS LABORATORIOS
Las actividades de carcter docente e investigador que se llevan a cabo en las
prcticas de
laboratorios del Programa Educativo de Qumico Farmacutico
Bilogo de la Facultad de Ciencias Qumico Biolgicas (FCQB) de la Universidad

Autnoma de Campeche (UAC) conllevan, en determinados casos, un riesgo
dependiendo del tipo de trabajo que se desarrolle.
Este documento recoge los lineamientos necesarios para llevar a cabo un trabajo
seguro y eficiente atendiendo a las indicaciones del Reglamento Federal de
Seguridad e Higiene y Medio ambiente de Trabajo, publicado en el Diario Oficial
de la Federacin, el 21 de enero de 1997, Normatividad en materia de Seguridad
e Higiene de la Secretaria del Trabajo y Previsin Social, Sistema de Gestin
Ambiental Yum Kaax ISO 14001:2004 de la Universidad Autnoma de Campeche
y Reglamento Interno de los Laboratorios en los que se realizan prcticas de
docencia de la FCQB de la UAC.
Solo se permitir trabajar a los alumnos bajo la responsabilidad de un profesor o
de la persona asignada de manera previa por el Coordinador del Programa
Educativo o de Posgrado e Investigacin.
Realizar nicamente tareas enmarcadas en el mbito de trabajo del laboratorio
para las que ha sido autorizado.
Se deber llevar siempre la bata de manga larga y los equipos de proteccin
individual exigidos segn el tipo de trabajo que se realice (goggles, mascarilla
protectora, guantes de latex, calzado cerrado que cubra el empeine, de tacn
ancho o corrido con altura mxima de 4 cm, de piel, que no sea de tela ni de
material plstico, incluida la suela) segn lo solicite el profesor.
No se permite ingresar con bermudas o short y, en el caso de las mujeres, el largo
de la falda debe ser debajo de la rodilla.
Hombres y mujeres con cabello largo debern portar el pelo recogido hacia atrs.
86
No llevar pulseras, colgantes, mangas anchas ni prendas sueltas que puedan

trabarse en montajes, equipos o mquinas.
No fumar, comer ni beber.
No realizar reuniones o celebraciones.
No guardar alimentos ni bebidas en los frigorficos del laboratorio.
Mantener el orden en las sesiones de laboratorio y tratar con respeto al
laboratorista, compaeros y profesores.
Verificar que el material y los equipos de laboratorio a emplear se encuentren en
ptimas condiciones de funcionamiento.
Antes de hacer uso de cualquier material y/o equipo consulte su operatividad con
el laboratorista.
Mantener las mesas de trabajo limpias y sin objetos personales en las superficies
(libros, cajas o accesorios innecesarios) para el trabajo que se est realizando.
Tener la autorizacin para el uso de un producto, equipo o instalacin concreta.
Lavar y enjuagar todo el material de vidrio con agua destilada y secarlo.
Leer la etiqueta o consultar las fichas de seguridad de productos qumicos antes
de utilizarlos por primera vez.
Para efectuar pipeteos utilice siempre propipeta o perilla
No tocar ni probar, sin el uso de guantes a los productos qumicos.
Calentar tubos de ensayo de lado y utilizando pinzas.
Por su seguridad utilizar gradillas y soportes.
Comprobar la temperatura de los materiales antes de sujetarlos directamente
con las manos.
En caso de ser necesario utilizar las campanas de extraccin.
Etiquetar adecuadamente los frascos y recipientes a los que se haya transvasado
algn producto o donde se hayan preparado mezclas, identificando su contenido,
a quin pertenece y la informacin sobre su peligrosidad (reproducir el
etiquetado original).
87
Reportar cualquier accidente o anomala ocurrida durante la prctica, de manera

inmediata al laboratorista.
Salvaguardar todos los implementos y dispositivos de seguridad e higiene
(extintor, sealamientos, regadera y lavaojos de emergencia, etc.) habilitados en
el interior del laboratorio.
Revisar la Normativa correspondiente de acuerdo a la NOM-062-ZOO-1999,
Cuidado y uso de animales de laboratorios y la NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002,
Proteccin
ambiental-Salud
ambiental-Residuos
peligrosos
biolgico-
infecciosos-Clasificacin y especificaciones de manejo para el caso de emplear

animales de laboratorio y muestras biolgico-infecciosas respectivamente.
El material y equipo que se rompa o sufra desperfectos en el transcurso de la
prctica, se deber reportar al laboratorista de inmediato.
Asegurar la desconexin de equipos, agua y gas al terminar el trabajo.
Recoger materiales, reactivos, equipos, y depositar los residuos en los
contenedores correspondientes.
Lavarse las manos antes de dejar el laboratorio.
MARCO JURDICO
Reglamento Federal de Seguridad e Higiene y Medio ambiente de Trabajo.

Publicado en el Diario Oficial de la Federacin (D.O.F.), el 21 de enero de 1997.
NOM-002-STPS-2010, Condiciones de seguridad - Prevencin y proteccin contra
incendios en los centros de trabajo. D.O.F. 9-XII-2010.
NOM-005-STPS-1998, Relativa a las condiciones de seguridad e higiene en los
centros de trabajo para el manejo, transporte y almacenamiento de sustancias
qumicas peligrosas. D.O.F. 2-II-1999
NOM-010-STPS-1999, Condiciones de seguridad e higiene en los centros de
trabajo donde se manejen, transporten, procesen o almacenen sustancias
88
qumicas capaces de generar contaminacin en el medio ambiente laboral. D.O.F.

13-III-2000.
NOM-017-STPS-2008, Equipo de proteccin personal - Seleccin, uso y manejo
en los centros de trabajo. D.O.F. 9-XII-2008.
NOM-018-STPS-2000, Sistema para la identificacin y comunicacin de peligros y
riesgos por sustancias qumicas peligrosas en los centros de trabajo. D.O.F. 27-X2000.
NOM-026-STPS-2008, Colores y seales de seguridad e higiene, e identificacin
de riesgos por fluidos conducidos en tuberas. D.O.F. 25-XI-2008.
NOM-028-STPS-2004, Organizacin del Trabajo-Seguridad en los Procesos de
sustancias qumicas. D.O.F. 14-I-2005.
NOM-062-ZOO-1999. Cuidado y uso de animales de laboratorio. D.O.F. 18-VI2001.
NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002,
Proteccin
ambiental-Salud
ambiental-
Residuos peligrosos biolgico-infecciosos-Clasificacin y especificaciones de

manejo. D.O.F. 17-II-2003.
NOM-052-SEMARNAT-2005, que establece las caractersticas, el procedimiento
de identificacin, clasificacin y los listados de los residuos peligrosos. D.O.F. 23VI-2006.
Sistema de Gestin Ambiental Yum Kaax de la Universidad Autnoma de
Campeche. Octubre 2010.
Reglamento Interno de los Laboratorios en los que se realizan prcticas de
docencia de la Facultad de Ciencias Qumico Biolgicas de la Universidad
Autnoma de Campeche. Agosto de 2012.
89

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CONTENIDO

faecalis, diversas especies de Staphylococcus, Mvcobacterium y especies

1.3 MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

13x100 con medio de: TSI LIA,

MIO, urea de Christensen, Citrato

Placas de Petri con Agar: Mac

Colorante de Azul de Metileno

Conkey, S.S, XLD, Sulfito de

Antisueros para la Serotipificacin

de Salmonella, E. coli y Shigella

Bismuto, Entrico de Hektoen,

Solucin salina isotnica en tubos

Pruebas bioqumicas en tubos de

Caldo selenito o tetrationato

en tubos de 13x100 con 2 mL.

Frasco con Benzal

Juego de colorantes de Gram

alcalina (APA) a pH 9.0

4. Sembrar de inmediato, si la muestra se toma en el mismo laboratorio

enterocolitica, adems de Vibrio y Campylobacter.)

por la tcnica de estra cruzada esterilizando el asa en cada seccin de la

Figura 1. Identificacin de bacterias patgenas gastrointestinales.

Figura 2. Identificacin de Salmonella, Shigella y E. coli.

bacteriana con un antisuero polivalente contra los tipos A, B o C de E. coli (cepas

Figura 3. Aislamiento de Vibrio cholerae

Reporte del coprocultivo

Figura 4. Procedimiento para Amiba en fresco y frotis de moco fecal.

Shigella en los diferentes medios de cultivo que les diferencia de la mayora de

1.6 TRATAMIENTO Y DISPOSICION DE RESIDUOS

Figura 5. Diagrama ecolgico: aislamiento e identificacin de bacterias.

D1. Inactivar con Hipoclorito de sodio al 5% durante 10-15 min y desechar en

E. coli, Staphylococcus, Proteus, Enterococcus faecalis, Salmonella, Pseudomonas,

2.3 MATERIALES, EQUIPOS, Y REACTIVO

Tubos de 13 x 100 con medio de

MacConkey, Sal y Manitol,

Gelosa sangre de carnero,

LIA, MIO, Urea y C. Simmons.

Thayer, Martn, Dnasa.

pruebas bioqumicas: TSI,

Juego de colorantes de Gram

Taxos de catalasa, oxidasa,

PN, ESD, Bacitracina 0.04 U

La muestra de orina se recoge en un frasco de boca ancha estril y desechable, en

Mtodo de dilucin con pipeta

Figura 6. Exposicin del meato urinario en

Figura 7. Limpieza del meato uretral.

4.- Se inicia la miccin sin recolectar la primera fraccin, la cual se desecha en el

Figura 8.Exposicion del meato urinario.

Figura 9. Limpieza del meato urinario.

Figura 10. Recoleccin de la muestra.

Nombre del Paciente, edad fecha

2.6 TRATAMIENTO Y DISPOSICION DE RESIDUOS

Figura 11. Diagrama ecolgico: Aislamiento e identificacin de bacterias.

D1. Inactivar con Hipoclorito de sodio al 5% durante 10-15 min y desechar en

D4. Colectar los residuos en recipientes, etiquetar y confinar en almacen

3.3 MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

Tubos de 13 x 100 con caldo Soya

Sangre de camero al 5%, Sal y

Tripticasa ,pruebas bioqumicas. TSI,

Manitol, MacConkey, Thayer-

LIA, MIO, CS y Urea

Tubos de Caldo soya tripticasa con

Frasco con cloro

Sensidiscos de Bacitracina de 0.04 U