UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA ACADEMICA PROFESIONAL
BIOLOGA EN ACUICULTURA

PRCTICA DE LABORATORIO

CURSO

: SANIDAD ACUCOLA I.

TEMA : ANTIBIOGRAMA Y ACCIN DE LOS AGENTES QUMICOS

EN MICROORGANISMOS
DOCENTE

: ANGEL CASTRO ALVARADO.

INTEGRANTE:

VILLAVICENCIO ARELLANO, ALEX.

NUEVO CHIMBOTE, 28 DE JUNIODEL 2005

INTRODUCCIN:
El tratamiento antibitico ha jugado un papel muy importante en el manejo de las
enfermedades infecciosas en el siglo 20.
Desde el descubrimiento de la Penicilina en 1920 y su disponibilidad para el uso
clnico en la dcada del 40 muchos nuevos ANTIMICROBIANOS aparecen todos los
aos para su uso clnico.
Mientras que este gran nmero de antibiticos permiten una gran flexibilidad al
mdico en el uso de estas drogas, tambin exige un mayor conocimiento y
experiencia para su uso adecuado.
La informacin que debe manejarse incluye lo habitual para cualquier frmaco ms
conocimiento sobre el espectro de accin o actividad antibacteriana, penetracin
tisular, resistencia a mecanismos bacterianos de inactivacin antibitica.
Debemos tener presente que, a diferencia de otros frmacos, el efecto teraputico
de los antibiticos se ejerce sobre una poblacin bacteriana que produce una
infeccin en un sitio anatmico dado de un paciente y no sobre un receptor celular
de este ltimo. La localizacin de la infeccin afectar la llegada del antibitico al
foco de infeccioso.
Toda esta informacin es difcil de manejar en el momento de establecer una
indicacin frente a un paciente en particular.

En general, la aparicin de nuevos antibiticos para uso clnico, si bien suele

solucionar problemas teraputicos tambin generan nuevas dificultades como la
emergencia de "nuevos mecanismos de resistencia".
As, el uso indiscriminado de "viejos" y "nuevos" antimicrobianos lleva al desarrollo
de una presin de seleccin que resulta en la emergencia de nuevos mecanismos de
resistencia. Por ejemplo, el uso durante ms de 3 dcadas de la Ampicilina en el
tratamiento de una gran cantidad de infecciones comunes ha llevado a que
prcticamente en todo el mundo la incidencia de cepas resistentes de Escherichia
coli a este antibitico sea del 70% de los aislamientos.
Las bacterias han demostrado tener la informacin gentica necesaria para codificar
mecanismos de resistencia a los antibiticos en uso y tambin para los que no han
sido introducidos para su aplicacin clnica.
Adems, si no los poseen tienen la capacidad de adquirirlos por mutacin o a travs
de los mecanismos de transferencia de material gentico. Esta capacidad de
variacin gentica sumada a la presin de seleccin ejercida por el uso de
antimicrobianos favorece la aparicin de cepas resistentes.
Otro factor importante que favorece la diseminacin de la transmisin de estas
cepas resistentes, es la colonizacin cruzada entre los individuos durante su
hospitalizacin. El personal de salud y todos quienes tienen contacto con el paciente
son responsables de esta transmisin.

Cuando se administra un antibitico a un paciente (Ej.: Ampicilina) para el

tratamiento de una infeccin (Ej.: faringitis estreptocccica) el antibitico
acta sobre el germen responsable de esa infeccin (Ej.: Streptococcus
pyogenes) y, a la vez, sobre los grmenes de la flora normal del paciente. El
efecto sobre la flora normal se traduce en la seleccin de cepas resistentes,
por ejemplo, Escherichia coli resistente a Ampicilina de la flora fecal. Si este
paciente est hospitalizado, al realizar sobre l cualquier maniobra (Ej.:
examen fsico), nuestras manos se colonizan con su flora normal incluyendo
las cepas resistentes a la Ampicilina. Si tocamos otro paciente sin lavarnos
previamente las manos este nuevo paciente, aunque est en otra sala o
reparticin del hospital, se colonizar con la flora del primero.
Lamentablemente este segundo paciente, aunque nunca antes haya recibido
antibiticos, estar en urinaria por Escherichia coli resistente a la Ampicilina.
Un antibitico ha sido definido como una sustancia qumica producida por un
microorganismo capaz de inhibir el desarrollo de otros microorganismos. Los
antibiticos modificados por manipulaciones qumicas aun se consideran
como tales.
El trmino agente quimioterpico ha sido empleado para referirse a agentes
antimicrobianos sintticos o no y tambin se refiere a agentes que actan contra
clulas humanas como inmunomoduladores y drogas antitumorales. Los trminos
agente antiviral y agente antimictico son trminos ms especficos, incluidos dentro
de la categora ms general de agentes antimicrobianos.
Un concepto importante sobre el que es necesario insistir es que no se pueden
realizar pruebas de sensibilidad in vitro con cultivos mixtos, slo los cultivos puros
proporcionarn resultados vlidos sobre la eficacia de un antibitico.
En la prctica diaria, una buena parte de los tratamientos efectuados tanto a nivel
de laboratorio como ambulatorio, se establecen con arreglo a unos criterios
derivados del estudio in vitro del comportamiento de las distintas especies
bacterianas frente a un determinado grupo de antibiticos (tratamiento emprico).
Ello se debe a que en muchas ocasiones, no puede disponerse de la bacteria aislada

del proceso infeccioso y la eleccin teraputica, en esos casos, responde a criterios

de empirismo derivados precisamente del conocimiento del comportamiento de
distintos tipos de antibiticos frente a las bacterias presuntamente responsables de
la infeccin.
Por otra parte, cada vez se hace ms necesario contar con un diseo de un
programa de vigilancia de la resistencia a los antimicrobianos, a nivel general,
basado precisamente en el conocimiento que tanto a nivel hospitalario como
ambulatorio se tiene del comportamiento de los distintos aislamientos de bacterias
frente a los antimicrobianos para poder disear las actuaciones que tiendan a
superar la resistencia de las mismas a los antibiticos.
En lneas generales y en funcin sobre su forma de actuar
microorganismos, hablamos de dos grandes grupos de antibiticos

sobre

los

El primer objetivo del antibiograma es el de medir la sensibilidad de una cepa

bacteriana que se sospecha es la responsable de una infeccin a uno o varios
antibiticos. En efecto, la sensibilidad in Vitro es uno de los requisitos previos para la
eficacia in vivo de un tratamiento antibitico. El antibiograma sirve, en primer lugar,
para orientar las decisiones teraputicas individuales.
El segundo objetivo del antibiograma es el de seguir la evolucin de las resistencias
bacterianas. Gracias a este seguimiento epidemiolgico, a escala de un servicio, un
centro de atencin mdica, una regin o un pas, es como puede adaptarse la
antibioterapia emprica, revisarse regularmente los espectros clnicos de los
antibiticos y adoptarse ciertas decisiones sanitarias, como el establecimiento de
programas de prevencin en los hospitales.
Hay pues un doble inters: Teraputico y epidemiolgico.
Siempre que una toma bacteriolgica de finalidad diagnstica haya permitido el
aislamiento de una bacteria considerada responsable de la infeccin.
El empleo de sustancias antibacterianas constituye en la actualidad una parte
importante en el tratamiento de diversas enfermedades
que afectan al hombre,
Disco AC.
Nalidixic.de las principales propiedades
animales y vegetales. Por esta razn, el conocimiento
Disco
que poseen los
antibiticos es de fundamental importancia para los alumnos.
gentamicina

Una manera de disminuir la intensidad de los fenmenos indeseables que acarrea el

uso indiscriminado e inadecuado de los antibiticos, es su empleo correcto.
Por las razones indicadas, se ha diseado este conjunto de experiencias prcticas
destinadas a enfatizar la importancia de la actividad antibitica, conocer algunas
tcnicas de utilidad en el ensayo rutinario de estas sustancias, y por ltimo, a poner
en evidencia algunos fenmenos que se relacionan con el efecto antibitico sobre la
Disco
ecologa bacteriana.
penicilina

I.MATERIAL Y MTODOS PARA VERIFICAR HIPTESIS:

MATERIAL PROPORCIONADO POR EL LABORATORIO:


2 Placas Petri: Con Medio de cultivo Agar comn.
10 Tubos de ensayo: Con medio de cultivo caldo comn, estril.
Muestra biolgica: E. coli y Staphylococos sp.
Asa bacteriolgica.
1 Plumn indeleble delgado.
3 Tubos con dilucin con: detergente al 1%, alcohol al 70%, formol al 5% y
leja al 5%.
1 Mechero, fsforo y pinza de laboratorio.
Una gradilla y discos de papel filtro de 0.6 cm. De dimetro.
Antibiticos: Penicilina, gentamicina, tetraciclina, cido nalidxico.
PROCEDIMIENTO PARA VERIFICAR HIPTESIS:
NOTA: Realizar aspticamente.
A. PRUEBA DEL ANTIBIOGRAMA:
Para la determinacin de la sensibilidad a los antibiticos
El fundamento de esta determinacin es establecer, en forma relativamente
cualitativa, la mayor o menor actividad relativa de un conjunto de antibiticos,
ensayados individualmente, sobre las cepas bacterianas que hay en procesos
infecciosos. De esta manera, a travs del resultado de estas experiencias, un
laboratorio determinado se encuentra en condiciones de informar tanto las drogas
sin actividad como aquellas que son activas en la inhibicin o muerte de las cepas
estudiadas. Estas pruebas se conocen con el nombre de antibiograma y pueden
hacerse de diversas maneras, pero en general, existen dos mtodos que cumplen
este objetivo:
a) Sensibilidad determinada por agar.
Se tomaran las placas: y se rotular de la siguiente manera:
1 placa: Medio de cultivo Agar comn, sembrado con
Estafilococo sp

Disco
Gentamicina

Disco AC.
Nalidixic.

Disco
Tetraciclina

2 placa: Medio de cultivo Agar comn, sembrado con E. coli..

Disco
Penicilina

Disco AC.
Nalidixic.

Disco
gentamicina

Disco
tetraciclina
Disco
penicilina

El mtodo se basa en el hecho que existe una relacin entre la concentracin de

antibitico necesaria para inhibir una cepa bacteriana y el halo de inhibicin de
crecimiento en la superficie de una placa de agar con un medio de cultivo adecuado
y sembrada homogneamente con la bacteria a ensayar y sobre la cual se ha

depositado un disco de papel filtro de 6 mm de dimetro impregnado con una

cantidad conocida del mismo antibitico determinado en el rtulo. En el caso de
probar a .varios antibiticos los discos de papel filtro deben ponerse en forma
equidistante.
A continuacin se procede a su incubacin a la temperatura de 37C por 48 horas.
Realizar el proceso de acuerdo la figura 1 y 2.
Luego con una regla se mide el halo de inhibicin y se comparan los efectos de los
distintos antibiticos sobre el microorganismo estudiado.
La lectura de los resultados es bastante simple y su expresin representa en buena
forma la actividad in vitro del antibitico a emplear; segn Leclerc (1981) los
resultados se pueden interpretar cualitativamente de la siguiente manera:
Sensible : zona de inhibicin superior a 15 mm.
Lmite : zona de inhibicin inferior a 15 mm.
Resistente : zona de inhibicin inexistente.

Es necesario sealar que el tamao del halo de inhibicin es influenciado por varios
factores, entre ellos tenemos: medio de cultivo en que se realiza la prueba,
estabilidad del antibitico, capacidad de difusin del antibitico, cantidad de inculo,
rapidez de desarrollo del microorganismo, sensibilidad al antibitico, perodo de
incubacin. Cualquier variacin de estos factores puede afectar el resultado de la
prueba, sin embargo, al emplear un procedimiento estndar es posible obtener
resultados confiables.

Figura 1 y Figura 2

II. RESULTADOS:
1. PRUEBA DEL ANTIBIOGRAMA:
a) Sensibilidad determinada por agar.
1 placa: Medio de cultivo Agar comn, sembrado con Vibrio sp.
Disco
con lej

Disco con
alcohol
Disco con
formol

Disco con
detergente

2 placa: Medio de cultivo Agar comn, sembrado con Vibrio sp.

Disco
gentamicina

Disco
penicilina

Disco AC.
Nalidixic.

Disco
tetraciclina

OBS: Se ve la formacin del halo alrededor del disco; en la primera placa hay
formacin en todos los tratamientos de los cuales el disco el tratamiento de
detergente solo se vio que la formacin del halo es casi nula a diferencia de los
otros tratamientos pues son de origen aspticos. En la segunda placa esperaba que
la accin de los antibiticos producira alrededor de los discos el halo pero en le
tratamiento de penicilina y AC. Nalidixic, no hay halo y todo se hace pensar que el
antibitico paso a la caducidad por eso que no hay el halo.

III. DISCUSIN:

La seleccin de antimicrobianos en el estudio de susceptibilidad in vitro tiene como

objetivo disponer de un adecuado apoyo en la eleccin de las terapias
antimicrobianas, al igual que promover su uso racional. Los antimicrobianos son
sustancias qumicas producidas por microorganismos de diversas especies
(bacterias, hongos, actinimicetos) capaces de detener el crecimiento (efecto
bacteriosttico) o destruir (efecto bactericida) una poblacin bacteriana, estos
conceptos se encuentran el los resultados de las placas que presentan un halo
transparente alrededor del disco.
Los antibiticos se diferencian de los desinfectantes y antispticos por el hecho de
que estos en funcin de su toxicidad se usan sobre superficies inanimadas (los
desinfectantes), o sobre la piel (los antispticos). Los antibiticos, en cambio, por sus
caractersticas farmacocinticas incluyendo su baja toxicidad pueden administrarse
por va oral o por va parenteral (endovenosa o intramuscular). Para este caso que
suministramos para la realizacin de la practica se coloco en disco de papel filtro de
0.6 cm.
Los antibiticos se diferencian de otros frmacos debido a que no actan sobre el
individuo a quien le es administrado sino sobre una poblacin bacteriana que est
produciendo una infeccin. Esta poblacin bacteriana se caracteriza por tener
muchas variables que pueden afectar la accin del antibitico como ser la o las
especies bacterianas involucradas. Estas variables incluyen su estado metablico
-pueden estar en activa replicacin o con una baja actividad metablica-; el sitio de
la infeccin; parasitismo intracelular, etc.
Mecanismo de accin de la penicilina en su mecanismo de accin se caracteriza por
su capacidad de inhibir la sntesis del peptidoglicano de la pared bacteriana. Este
efecto se obtiene mediante la unin del anillo BETALACTMICO a unas enzimas
bacterianas (transpeptidasas) localizadas en la membrana celular. Estas enzimas se
denominan PBP (del ingls "penicillin binding protein) o Protenas fijadoras de
Penicilina, y son el sitio blanco de accin para las penicilinas y para todos los
antibiticos betalactmicos incluyendo las cefalosporinas. La accin de las PBP es la
transpeptidacin de los puentes peptdicos que unen las cadenas de nacetilglucosamina y Ac. Nacetil-murmico del peptidoglicano. Son antibiticos
bactericidas y su efecto final es el resultado de tres factores: la inhibicin de la
sntesis de la pared, la activacin de enzimas bacterianas autolticas capaces de
destruir la pared bacteriana ya sintetizada y la accin del medio externo a la clula
bacteriana sobre una clula con su pared bacteriana alterada por los dos
mecanismos anteriores. Tomando como ejemplo supuesto que debi de suceder en
la practica pues solo obtuvimos que no hubo presencia del halo incoloro alrededor
del disco penicilina; por lo que el docente encargado nos manifest que esto se
debi a que el antibitico utilizado ya haba caducado
El cido Nalidxico se concentra en orina hasta siete u 8 veces su concentracin
plasmtica por lo cual es un muy buen antibitico para el tratamiento de las
infecciones del tracto urinario por grmenes sensibles, su toxicidad y la baja
concentracin en otros tejidos lo hace inadecuado para otras infecciones.
Las nuevas quinolonas disponibles en nuestro medio para uso clnico son la
Pefloxacina, Ciprofloxacina, Norfloxacina. Presentan una mejor farmacocintica que
las anteriores ya que tienen menor toxicidad se pueden administrar por va
parenteral y se eliminan por va urinaria (Norfloxacina) y heptica. En cuanto a su
espectro de accin tienen una muy buena actividad sobre Gram negativos del grupo
de las enterobacterias y sobre Staphylococus sp. Sin embargo, tienen una baja
actividad sobre Streptococcus sp.

Los antibiticos son aquellas cuya sustancia que interfiere el crecimiento y la

supervivencia de los microorganismos mediante una interaccin especfica (toxicidad
selectiva) con alguno de sus componentes celulares. Debido a esta especificidad, los
antibiticos tienen un espectro de accin limitado; esto es, en general son activos
frente a ciertos microorganismos e inactivos frente a otros, lo que permite usarlos
como agentes selectivos. Se caracteriza el los resultados de la placa que se
encuentran los tratamientos con presencia del halo incoloro al rededor
Los diferentes tipos de microorganismos o de sus formas de desarrollo (esporas,
clulas vegetativas) tienen diferentes grados de sensibilidad a los tratamientos
fsicos o qumicos. Adems, el uso de antibiticos supone una presin selectiva sobre
las poblaciones bacterianas que puede llevar a la substitucin de las poblaciones del
microorganismo sensibles al antibitico por otras que han desarrollado mecanismos
de resistencia frente al mismo. Como as se desarrollo en experiencias pasadas
representantes qumicos como el detergente, alcohol, formol y la leja.
Segn su modo de accin los antibiticos pueden ser Bacteriostticos o Bactericidas.
Un antibitico bacteriosttico causa una parada del crecimiento microbiano. Los
microorganismos no crecen en presencia del antibitico; pero tampoco mueren de
forma inmediata. Si se elimina el antibitico, los microorganismos pueden
recuperarse y volver a crecer.
Los microorganismos cuyo crecimiento est detenido por accin de un antibitico
bacteriosttico van muriendo con el paso del tiempo en presencia del antibitico; sin
embargo, este proceso de muerte es lento. Un antibitico es bactericida
(tratamientos de la placa 2) cuando la presencia del antibitico produce la muerte
del microorganismo afectado rpidamente. Esta muerte puede ir acompaada de la
lisis de las clulas (y se habla entonces de antibitico bacterioltico) o no.
Se denomina concentracin mnima inhibitoria (CMI) de un antibitico sobre un
microorganismo, a la concentracin mnima de dicho antibitico que es capaz de
impedir que dicho microorganismo siga multiplicndose. Quinolonas.
IV. CONCLUSIN:
1. Inhiben el crecimiento (bacteriostticos) o matan (bactericidas).
2. Son efectivos a bajas concentraciones.
3. Poseen toxicidad selectiva: actan sobre el patgeno sin afectar al
organismo hospedador.
4. Pueden actuar frente a procariotas o eucariotas.
5. Pueden ser de accin muy especfica o de amplio espectro.
6. Es importante tener en cuenta la posibilidad de aparicin de resistencia a
determinados antibiticos en algunos microorganismos durante el
tratamiento de una infeccin.
7. Actan sobre la pared celular bacteriana inhibiendo su sntesis: penicilina.
8. Actan sobre la membrana celular alterando su permeabilidad.
9. Inhiben la sntesis proteica.
10. Inhiben la sntesis de cidos nuclicos: cido nalidxico.
V. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA:
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Londres. Se recomienda leer el captulo 8.
GARCIA LOBO, J.M., F. DE LA CRUZ (1990): Mecanismos de formacin de transposones bacterianos con
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SALYERS, A.A., B.S. SPEER, N.B. SHOEMAKER (1990): New perspectives in tetracycline resistance. Molec.
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WOMBLE, D.D., R.H. ROWND (1988): Genetic and physical map of plasmid NR1: comparison with
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