Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
MEMOIRE
Prsent par
Soutenu le : 15-12-2009
Mr. SLIMANI M.
Prsident
Rapporteur
Mr. KIHEL M.
Examinateur
Mr. GUESSAS B.
Examinateur
Mr. HEDADJI M.
Examinateur
Table des
Matires
.................................................................................................................... xi
Liste des tableaux .................................................................................................................... xii
Liste des figures ..................................................................................................................... xiii
Liste des abrviations ............................................................................................................... xv
Glossaire ................................................................................................................................ xvi
Introduction........................................................................................................................... 2
Premire Partie : Synthse Bibliographique
Chapitre I : Le palmier dattier ............................................................................................... 6
1/ Distribution systmatique.................................................................................................. ....6
2/ Description morphologique ................................................................................................... 7
3/ Cycle vgtatif ou cycle de dveloppement ....................................................................... 12
4/ Ecologie du palmier dattier ................................................................................................. 13
5/ Multiplication du palmier dattier ........................................................................................ 14
6/ Rpartition gographique du palmier dattier ........................................................................ 15
7/ Importance conomique du palmier dattier ......................................................................... 15
Chapitre II : Lagent pathogne ........................................................................................... 18
1/ Historique de la taxonomie ................................................................................................ 18
1.1/ Le genre Fusarium ............................................................................................... 18
1.2/ Lespce oxysporum ............................................................................................. 18
1.3/ La forme spciale albedinis .................................................................................. 19
2/ Position systmatique .......................................................................................................... 19
3/ Lagent pathogne : Fusarium oxysporum f.sp. albedinis ................................................ 20
4/ Description morphologique .................................................................................................. 20
4.1/ Caractres macroscopiques .................................................................................. 20
4.2/ Caractres microscopiques ................................................................................... 22
ii
iii
iv
vi
Remerciements
En mon nom personnel,
Mes premiers remerciements iront Dieu le tout puissant pour mavoir aid
suivre mes tudes universitaires et les corroborer par le prsent mmoire.
Mes vifs remerciements sadressent mes trs chers parents qui ont t
toujours prsents quand il le faut.
Que Mr. HENNI J.E., Professeur la Facult des Sciences, Dpartement
de Biologie lUniversit dOran, veuille bien accepter mes remerciements les plus
sincres pour laccueil quil ma rserv durant la ralisation de ma thse au sein de
son Laboratoire de Phytopathologie, lUniversit dOran au Dpartement de
Biologie, et la mise ma disposition des moyens ncessaires pour le droulement
correct de mon travail.
Je remercie Mr. KARKACHI N., Matre assistant lUniversit dOran,
pour son suivi efficace et rigoureux. Je le remercie chaleureusement pour son aide,
sa disponibilit quil a constamment montre mon gard, son guide prcieux et
ses conseils judicieux. Quil trouve ici lexpression de ma gratitude et de mon
profond respect.
Je tiens remercier vivement Mme GHARBI KARKACHI S., Matre
assistante lUniversit Mohamed Boudiaf dOran (U.S.T.O.), pour son aide
prcieuse, sa rigueur scientifique, ses conseils aviss et ses encouragements
permanents. Quelle me soit permise de lui prouver ma profonde reconnaissance.
Je suis trs sensible lhonneur que me fait Mr. SLIMANI M., Professeur
lUniversit dOran, qui a bien voulu accepter de prsider ce Jury. Quil veuille
bien accepter lexpression de mes sincres remerciements.
Je remercie Mr. KIHEL M., Professeur lUniversit dOran et Mr.
HADADJI M., Matre de Confrences lUniversit dOran, qui ont accept
dexaminer ce travail. Quils trouvent ici le tmoignage de mon profond respect.
Je tiens remercier tout particulirement Mr. GUESSAS B., Matre de
Confrences lUniversit dOran, qui accepte de juger ce travail. Quil trouve ici
lexpression de ma respectueuse gratitude et de mon profond respect.
Mes remerciements sadressent galement toute lquipe du Laboratoire de
Phytopathologie et tous mes encouragements ma promotion de Magister.
Je suis particulirement reconnaissante mes collgues Mohamed D. Amina
A., Malika G., et Zakia H., pour leur disponibilit exceptionnelle, leur aide
physique, leurs encouragements et surtout leurs soutien moral.
Je remercie enfin, tout ce qui ont contribu de prs ou de loin et qui ont pris
une part active la ralisation de ce travail, ainsi que tous ceux qui jaurais pu
oublier et qui se reconnaitront dans la collaboration apporte la ralisation de ce
travail.
Rsum
ix
Abstract
Bayoud is one specific vascular fusariose of the date palm (Phnix dactylifera L.), due
to a telluric fungi, the Fusarium oxysporum f.sp. albedinis. Generally the orientations of fight
are identical to those adopted against all vascular fusarioses.
Our work to be concerned the isolation of 20 strains of fungi belonging to the genre
Fusarium and to identify 06 stumps of them of Fusarium oxysporum f.sp. albedinis. The
virulence of these stumps is confirmed by the test of pathogenicity.
After the isolation and the purification, the morphological characterization indicates the
existence of three different typical morphotypes typical lifeless, downy and typical short
mucous. Besides, the microscopic observations show the presence of three characteristic spores
of Fusarium.
The physiological study of the fungi strains reveals a better growth on the PDA medium
with pH 5, with an optimal temperature of 28 C under a photoperiod of 12 hours. The source
of carbon favorable to the growth is represented by monosaccharides and the source of nitrogen
by nitrates of potassium and sodium.
The study of the isoenzymatique polymorphism, by the revelation of three systems
namely: esterase, acid phosphatases and peroxydases, shows a similarity of the electrophoretic
profils for strains of Fusarium oxysporum f.sp. albedinis.
The essays of a chemical fight, on one hand, against Fusarium oxysporum f.sp.
albedinis, by the in vitro use of 20 fungicidal substances incorporated in the middle solid PDA
with various concentrations (50-100-200 and 400 ppm), reveals the presence of an inhibition
activity of some substances on the growth of the colony of the fungi.
On the other hand, an in vitro biological fight with Trichoderma harzianum, as
opposing agent, whether it is in a direct way on middle of culture or by activity of the filtrats of
culture, show an inhibition of the growth mycelien of pathogenic tested.
Keywords :
Date palm, Fusarium oxysporum f.sp. albedinis, pathogenic power, identification,
electrophoretic profils, chemical fight, biological fight, Trichoderma harzianum.
( (Phoenix dactylifera L.
28 C 12 .
.
:
Fusarium oxysporum f.sp. albedinis
. Trichoderma harzianum
xi
xii
xiii
xiv
%
C
l
m
CLA
Cm
CMI50
D.O.
Est
F.o.a.
f.sp.
g/L
M
mA
mg
ml
mm
nm
PAC
PAGE
PDA
pH
Pox
ppm
q.s.p.
SDS
Glu
Mal
Amid
Tm
Asn
Ec. con
Ob. con
Photo. 12h
: pourcent
: Degr Celsius
: microlitre
: micromtre
: Carnation Leaf Agar
: centimtre
: Concentration Minimale Inhibitrice
: Densit Optique
: Estrase
: Fusarium oxysporum f.sp. albedinis
: forme spciale
: grammes / Litre
: Molaire
: milliampre
: milligramme
: millilitre
: millimtre
: nanomtre
: Phosphatase Acide
: Poly Acrylamide Gel Electrophoresis
: Potato Dextrose Agar
: potentiel d'Hydrogne
: Peroxydase
: partie par million
: quantit suffisante pour
: Sodium Dodcyl Sulfate
: Glucose
: Maltose
: Amidon
: Tmoin
: Asparagine
: Eclairage continu
: Obscurit continue
: Photopriode de 12 heures
xv
Glossaire
Aisselle :
Axillaire :
Bracte :
Carpelle :
Chacune des pices florales dont lensemble soud forme le pistil des
fleurs.
Corn :
Fascicule :
Inflorescence :
Lancole :
Pne :
xvi
Introduction
Introduction
Le palmier dattier Phnix dactylifera L. est un arbre cultiv principalement dans les zones
arides ou dsertiques de lAfrique du Nord et du Moyen Orient.
En Algrie, prcisment au Sahara, le palmier dattier reprsente larbre fruitier par
excellence, puisquil a constitu et constitue toujours la base alimentaire des populations de
cette rgion.
Il assure la production de dattes -fruit au contenu sucr important- et donc il est une source
de revenus (trocs, changes commerciaux, exportation).
Du point de vue cologique, le palmier dattier permet de :
crer, surtout, sous son couvert, un microclimat favorable la culture de certains arbres
fruitiers et aussi toutes autres cultures cralires, fourragres ou marachres.
De plus, toutes les parties du palmier dattier (tronc, palmes, noyau du fruit,...) peuvent tre
utilises pour diffrents buts et dans diffrents domaines : industriel, agricole, levage,
construction, fabrication de meubles, de cordes et de matriel demballage
(Hodel
et Johnson, 2007).
Si pendant trs longtemps le palmier dattier a constitu le pilier sur lequel a repos tout
lcosystme oasien, cet arbre symbole se trouve menac depuis lapparition dune fusariose
vasculaire mortelle. Il sagit dune maladie cryptogamique, la plus grave et la plus dvastatrice,
appele localement Bayoud . Cette trachomycose est cause par un champignon du sol : le
Fusarium oxysporum f.sp. albedinis (Djerbi, 1991).
Depuis lapparition de cette maladie (1898) dans les palmeraies de Figuig au Maroc et Bni
Ouenif (Bchar) en Algrie, plus de 12 Millions de palmiers dattiers ont t dtruits dans ces 02
pays (Ouinten, 1996). Cest un vritable flau des zones phnicicoles de lAfrique du Nord et
une menace qui pse sur cette richesse naturelle et notamment la varit Deglet Nour trs
prise dans les pays Europens.
La stratgie de lutte contre
-2-
Introduction
maladie.
La seconde partie repose sur un travail pratique men au laboratoire et qui sintgre
dans le cadre des tudes consacres lagent pathogne Fusarium oxysporum f.sp.
albedinis, en vue dvaluer un essai de moyens de lutte in vitro contre ce champignon
par quelques substances fongicides pour la lutte chimique et par lagent antagoniste
(Trichoderma harzianum), pour la lutte biologique.
Dans la troisime partie, nous nous efforcerons de prsenter les observations et les
conclusions obtenues au laboratoire.
-3-
Premire Partie :
Synthse Bibliographique
Chapitre I :
Le palmier dattier
Synthse Bibliographique
Le palmier dattier porte le nom latin Phnix dactylifera est aussi date palm en anglais et
nakhil
en arabe. Cette appellation botanique donne par Linn depuis 1734, est
arbre quils considraient comme larbre des phniciens, ou phoinikes en grec. Quant
dactylifera , cet adjectif drive de daktylus , qui signifie un doigt et illustre la forme du fruit
1/ Distribution systmatique :
Le palmier dattier comme son nom lindique, appartient lune des plus grandes familles
dangiospermes monocotyldones, celle des Palmaceae ou Arecaceae, reprsente par 200
genres et 2700 espces, rpartie en six sous-familles. La sous-famille des Coryphodeae est elle
mme subdivise en trois tribus. Le palmier dattier fait partie de la tribu des Phniceae qui ne
comporte quun seul genre : Phnix (Bounaga, 1991). Douze espces appartiennent ce
genre, mais cinq seulement dentre elles, en dehors du palmier dattier, sont fruits
consommables : P. atlantica, P. reclinata, P. farinifera, P. humilis et P. acoulis (Munier,
1973).
La classification du palmier dattier donne par Djerbi (1994), est la suivante :
Groupe :
Spadiciflora
Embranchement :
Angiospermes
Classe :
Monocotyledones
Ordre :
Palmales
Famille :
Palmaceae
Tribu :
Phniceae
Genre :
Phnix
Espce :
Phnix dactylifera L.
-6-
Synthse Bibliographique
2/ Description morphologique :
Lallure la plus commune et la plus connue du palmier dattier est arborescente
monocotyldone, avec un tronc ou stipe monopodique (non ramifi et unique), trs lanc,
vertical et cylindrique de couleur brune, pouvant atteindre 30 40 mtre de haut et portant au
sommet une couronne de feuilles ou palmes, pennes de 4 7 mtres de longueur
(Figure
n 01). Lespce est dioque et porte des inflorescences mles et femelles. Une seule fleur est
fconde, se dveloppe et forme le fruit : la datte (Hadjari et Kadi Hanifi, 2005).
-7-
Synthse Bibliographique
Figure n 02 : Les quatre types de racines dun palmier dattier (Peyron, 2000).
-8-
Synthse Bibliographique
Synthse Bibliographique
-10-
Synthse Bibliographique
Hampe ou spadice
-11-
Synthse Bibliographique
- Stade I : La graine
Elle possde un albumen (endosperme) dur et corn, dont lembryon est toujours trs petit par
rapport lalbumen (2 3 mm).
-12-
Synthse Bibliographique
-13-
Synthse Bibliographique
-14-
Synthse Bibliographique
6.2/ En Algrie :
Quant la rpartition en Algrie, la culture du palmier dattier occupe toutes les rgions
situes sous lAtlas saharien, soit 6000 ha depuis la frontire Marocaine lOuest, jusqu la
frontire Tuniso-libyenne lEst.
Du nord au sud du pays, la culture du palmier dattier, stend depuis la limite sud de lAtlas
saharien jusqu Regghane lOuest, Tamanrasset au centre et Djanet lEst (Matallah, 2003).
La production mondiale des dattes est estime 5.087.000 tonnes pour lanne 2005, dont
41 % soit 2.074.000 tonnes, proviennent du bassin mditerranen dont : LEgypte, 1er pays
producteur avec 23% et lAlgrie classe au 4me rang mondial avec 10 %.
-15-
Synthse Bibliographique
Le tableau n 01 nous renseigne sur le dtail de cette production mondiale, selon les
statistiques de la F.A.O. publis en 2007.
Tableau n 01 : Production mondiale des dattes (statistiques de la F.A.O., 2007).
Pays
Monde
Mditerrane
Egypte
Iran
Arabie Saoudite
Algrie
Pakistan
Soudan
Libye
Chine
Tunisie
Maroc
Quantit de production
(1000 tonnes)
5 087
2 075
1 170
997
970
516
497
328
181
130
125
48
(%)
100%
41%
23%
20%
19%
10%
10%
6%
4%
3%
2%
1%
-16-
Chapitre II :
Lagent pathogne
Synthse Bibliographique
1/ Historique de la taxonomie :
1.1/ Le genre Fusarium :
Le genre Fusarium a t dcrit pour la premire fois par Link en 1809 (in Booth, 1985). La
dtermination des Fusarium, comme celle des autres champignons imparfaits t base
essentiellement, et jusqu ce jour, sur les critres morphologiques (pigmentation, aspect du
myclium, prsence ou absence des spores, taille, forme, nombre de cloisons, ...).
La diversit et lextrme variabilit de ces caractres au cours des repiquages successifs et
en fonction des conditions de culture des champignons appartenant ce genre, expliquent les
difficults rencontres pour la classification, do les nombreux systmes taxonomiques et les
controverses proposs. Les travaux de Wollenweber et Rincking (1935), qui ont servi de
rfrences, ont pu dcrire 65 espces, 55 varits et 22 formes, rassembles en 16 sections et 06
sous-sections (Synder et Hansen, 1940).
Le genre Fusarium a t profondment revu par Synder et Hansen (1940, 1941, 1945),
Tousson et Nelson (1968, 1975) et Messiaen et Cassini (1968, 1981).
Ils ont simplifi la classification pour ne retenir que 09 espces, dans le but de permettre une
dtermination rapide des parasites rencontrs (Bounaga, 1991).
Dautres systmes taxonomiques proposs, sappuyant sur les travaux de Wollenweber, ont
t suggrs, notamment par Raillo (1935), Bilai (1955, 1970), Gordon (1952, 1960, 1965),
Booth (1971, 1975, 1981), Joffe (1974) et Gerlach (1970, 1977, 1981), et ils ont conserv un
certain nombre de section et despces avec quelques modifications (Bounaga, 1991).
1.2/ Lespce oxysporum :
Wollenweber et Rincking (1935) ont plac lespce oxysporum dans la section Elegans ,
quils ont subdivis en 03 sous-sections, en se basant sur la forme et la taille des spores et sur
les caractres culturaux.
Ds 1940, toutes les espces de la section
espce Fusarium oxysporum, par Synder et Hansen, laquelle, Synder et al., adjoignent le
cultivar Redolens en 1957.
-18-
Synthse Bibliographique
Dans le genre Fusarium, lespce oxysporum, constitue 50% 70% des populations
fusariennes des sols (Guillemat et Montegut, 1958; Gorden1965 ; M.C. Mullen et Stack,
1983). Elle est considre comme colonisatrice primaire du rhizoplan et du cortex racinaire.
Elle reprsente plus de 50 % des isolats de Fusarium partir des racines de plantes diverses
(Bruel, 1976 ; MC Mullen et Stack, 1983 ; in Bounaga, 1991).
Lespce oxysporum, peut vivre en saprophyte ou en parasites de vertbrs ou de plantes
(Nelson et al., 1981 ; Rebell, 1981, in Bounaga, 1991). Sa forme parfaite nest pas encore
connue.
1.3/ La forme spciale albedinis :
Lespce est actuellement subdivise en plus de 80 formes spciales (Armestrong G. et
Armestrong J., 1981), suivant la plante hte laquelle elle sattaque et dont elle est isole.
La
reconnaissance de ces formes spciales, ne fait appel aucun critre morphologique mais
seulement la pathognicit du champignon, dont la dtermination doit se faire par la
rinoculation du pathogne dans la plante hte (Bounaga, 1991).
Ces formes spciales peuvent tre subdivises en races, bases sur la pathognicit
diffrentielle des isolats sur des varits distinctes. Mais par contre, certaines formes spciales
ont t rassembles, car elles taient susceptibles de provoquer la mme maladie dans plusieurs
htes (Armestrong G. et Armestrong J., 1981). Le Fusarium oxysporum f. sp. albedinis est la
forme spciale du palmier dattier (Bounaga, 1991).
2/ Position systmatique :
Le systme Saccardo de la classification des champignons imparfaits
Fungi imperfecti
-19-
Synthse Bibliographique
4/ Description morphologique :
4.1/ Caractres macroscopiques :
Laspect
myclien fin fris, de couleur rose saumon la lumire et blanc ou violet lobscurit, au sein
du quel se forme de petites sporodochies (Figure n 08).
Laspect ou la forme sauvage du Fusarium oxysporum f.sp. albedinis permet didentifier
lagent causal du Bayoud sans recours aux tests de virulence (Djerbi et al., 1984 ; Sedra et
Djerbi, 1984). Des sclrotes de couleur bleue noire naissent parfois groupes et mesurent de 1
3 mm de diamtre (Djerbi, 1988).
-20-
-21-
Synthse Bibliographique
4.2/ Caractres microscopiques :
Le Fusarium oxysporum f.sp. albedinis possde un myclium hyalin cloisonn, il est fin et
rgulier en culture jeune. Ce myclium prsente des cellules hypertrophies en chaine, daspect
globuleux en cultures ges ayant une grande ressemblance avec les chlamydospores, mais sans
paississement de la paroi.
La multiplication asexue se ralise par des microphialides et des marophialides qui
produisent respectivement des microconidies et des macroconidies.
- Les microconidies : sont trs nombreuses, hyalines de forme et de dimension variables dans
une mme culture (3-15 x 3-5 m). En culture jeune elles sont globuleuses, par contre en
culture ges, elles sont plus allonges. Les microconidies sont souvent unicellulaires, parfois
bicellulaires et possdent deux cloisons.
- Les macroconidies : sont peu nombreuses, base pdiforme, et une extrmit pointue et
courte. Elles possdent trois cloisons, rarement 4 ou 5 et mesurent (20-35 x 3-5 m).
- Les chlamydospores : dans les cultures ges ou dans le sol, le Fusarium oxysporum f.sp.
albedinis forme des chlamydospores, rgulires, soit globuleuses, paroi lisse et paisse, et
leur taille varie de 6 20 m. Elles sont intercalaires ou terminales et sont isoles ou groupes
par 2. Elles se forment soit sur le myclium, soit partir des macroconidies (Bulletin OEPP/
EPPO, 2003).
chelle = 50 m
-22-
Chapitre III :
La maladie du Bayoud
Synthse Bibliographique
Le palmier dattier, comme toute autre espce vgtale, se trouve sous la menace de diverses
pathologies dues des ravageurs (insectes ou acariens) ou des parasites (champignons,
bactries, ou mycoplasmes). A titre dexemple, on peut citer :
cur qui
penche , ..., sont causes par dautres espces de champignons (Bounaga et Djerbi,
1990).
Si certaines de ces maladies, peuvent se manifester pour une priode ou une saison donne
et, par la suite, constituer linfection dont les dgts sont rversibles, en revanche, et
malheureusement, la fusariose vasculaire appele Bayoud reprsente la maladie la plus grave
et la plus dvastatrice qui provoque un dprissement irrversible du palmier dattier et, par
consquent, des dgts considrables et dfinitifs (Ouinten, 1996). Ainsi le patrimoine du
palmier dattier des rgions phnicicoles de lAfrique du Nord, est attaqu depuis plusieurs
dcennies, et continue ltre toujours, particulirement au Maroc et en Algrie (El Hadrami et
al., 2005).
-24-
Synthse Bibliographique
Bchar en 1940, par la localisation de quelques foyers. Les palmeraies proches de ces
centres sont atteintes leur tour tel que Bni Abbs en 1908 et Taghit en 1923 (Figure n 10).
Entre 1940 et 1950, deux contaminations sont particulirement importantes, la rgion dIn
Salah et celle dAdrar, respectivement vers 1943 et 1950 (Brac De La Perriere et Benkhalifa,
1991).
Bien que le Bayoud a enregistr une progression de proche en proche vers lOuest, de la
Valle du Dra au Maroc jusqu Bni Ouenif en Algrie ; il effectue au Sahara central de
lAlgrie, des bonds dsordonns, de rgions en rgions, malgr quelles soient trs loignes
gographiquement savoir :
-
Enfin, et plus rcemment, les palmeraies de Ghardaa et dEl Gola, sont contamines leur
tour en 1965 et 1978 (Djerbi, 1982 ; Brac De La Perriere et Benkhalifa, 1991). Paralllement,
certaines palmeraies algriennes sont indemnes, notamment les palmeraies de Kerzaz, de
Timimoun et de la Station de Recherche de lI.N.R.A. dAdrar (Brac De La Perriere et
Benkhalifa, 1991).
Synthse Bibliographique
2/ Symptmes de la maladie :
2.1/ Symptmes externes :
En gnral, les premiers signes de la maladie se manifestent par un dprissement
progressif, de la base vers lextrmit, dune ou de plusieurs palmes au niveau de la couronne
moyenne. Les folioles ou les pines situs sur le mme ct de la palme se desschent et se
replient contre la nervure principale (rachis), cest lattaque hmiplgique typique de la
fusariose. Lorsque tout ce ct est atteint, le dprissement commence sur lautre ct, de
lextrmit jusqu la base (Bulletin OEPP/ EPPO, 2003).
En se desschant, la palme fini par mourir et prend laspect dune plume mouille
(Figure
n 11), avec une couleur blanchtre, do le nom du Bayoud, qui drive du mot arabe
abyed et qui veut dire blanc (Djerbi, 1990 ; Ouinten, 1996).
Lvolution du desschement sur les folioles saccompagne par lapparition dune rayure
brune longitudinale sur le rachis. Depuis, lattaque se gnralise sur la totalit des palmes du
bourgeon terminal, entranant ainsi la mort de larbre.
Le palmier dattier atteint, meurt 06 mois 12 ans, aprs lattaque par le Fusarium
oxysporum f.sp. albedinis et lapparition des premiers symptmes de la maladie (Bulletin
OEPP/ EPPO, 2003).
-26-
Synthse Bibliographique
(OEPP, 1994).
4/ Epidmiologie :
Le champignon est distribu ingalement dans le sol, prsent entre 0 et 30 cm parfois
jusqu plus de 1m de profondeur (Tantaoui, 1989). Il peut tre alternativement saprophyte ou
parasite (Bounaga, 1985). Il peut aussi se conserver pendant plusieurs annes sous forme de
chlamydospores, dans le sol, en absence de la plante hte ou dans les tissus dun palmier dattier
infect (Louvet, 1977).
La contamination seffectue dune manire rgulire par le contact entre les racines malades
et les racines saines entre les palmiers dattiers, ainsi, lirrigation importante favorise
lexpansion de la maladie.
-27-
Synthse Bibliographique
Les plantes des autres cultures, associes la phoeniciculture, dont on a dj parl, et qui
sont des porteurs sains , peuvent contribuer au maintien du Fusarium oxysporum f.sp.
albedinis dans le sol.
La propagation de la maladie du Bayoud entre les palmeraies contamines et celles
indemnes, peut tre assure par la dispersion des conidies (Laville, 1973), principalement par
lchange du matriel vgtal (rejets), du sol, doutils ou de machines agricoles, ..., etc
(Bulletin OEPP/ EPPO, 2003). Ltendue de cette dispersion dpend aussi des pratiques
culturales (fertilisation, irrigation,...) et des conditions climatiques (temprature, vent,...)
(OEPP, 1994).
Synthse Bibliographique
La chloropicrine, qui est une substance chimique hautement volatile avec une activit
antifongique trs leve, mais qui prsente linconvnient de ne pntrer que faiblement
dans les dbris vgtaux. Contrairement au bromure de mthyle, qui prsente une
grande capacit de pntrer dans le sol grce sa tension de vapeur leve, mais avec
une fongitoxicit relativement moins leve (Cheikh-Assa, 1990 ; Vanachter, 1991).
-29-
Synthse Bibliographique
Plusieurs chercheurs se sont intresss aux micro-organismes antagonistes tels que les
bactries, les champignons et les actinomyctes, dans lespoir de mettre au point un procd de
lutte efficace capable de limiter la gravit des fusarioses (Alabouvette et al., 1986).
Parmi les bactries utilises en lutte biologique, on peut citer les Pseudomonas fluorescens
et Serratia marcescens, et parmi mes champignons, il existe les Fusarium non pathognes et le
Trichoderma harzianum.
Amir (1991 a) et Amir et Mahdi (1993), ont slectionn des souches de Fusarium solani et
Fusarium oxysporum non pathogne, pour leur pouvoir comptitif lev et inhibiteur de deux
formes spciales : Fusarium oxysporum f.sp. lini et Fusarium oxysporum f.sp. albedinis.
Hibar et ses collaborateurs (2005), ont montr quil est dintrt primordial dutiliser le
Trichoderma harzianum en tant quagent de lutte biologique contre la fusariose vasculaire.
5.5/ La lutte gntique :
Le palmier dattier a lavantage de prsenter une grande diversit gntique de rsistance au
Bayoud (Bounaga et al., 1992).
Cette diversit gntique de chaque palmeraie qui est le fruit de slections autonomes et
dchanges entre les agriculteurs, a servi dans la plupart des cas luter directement contre la
fusariose par la multiplication empirique des clones les plus tolrants (Brac de la Perriere et
Bounaga, 1990). Ceci est mis en vidence, pendant 25 ans, aprs les essais de comparaison de
rsistance de 32 varits au Bayoud, dans les palmeraies infestes naturellement au Maroc.
Selon Saadi (1992), ces cultivars rsistants sont devenus susceptibles aprs 15 ans.
Lexpression de ce type de rsistance est influence par les conditions de dveloppement des
arbres et probablement par labondance et lactivit de linoculum de Fusarium pathogne dans
le sol (Louvet, 1991).
5.6/ La lutte intgre :
Amir (1991 b), propose galement une lutte intgre contre Fusarium oxysporum f.sp.
albedinis comprenant lradication par fumigation et inoculation avec des antagonistes des
foyers primaires dangereux, cration de varits rsistantes nouvelles par croisement, recherche
de mutants rsistants partir des cultures in vitro, cration des ppinires et repeuplement des
palmeraies dvastes grce la multiplication in vitro de plants
-30-
Synthse Bibliographique
-31-
Deuxime Partie :
Matriels et Mthodes
Chapitre I :
Etude du parasite et de la
plante hte
Matriels et Mthodes
I/ Le parasite et sa culture :
1.1/ Espce tudie :
Notre tude est base essentiellement sur le champignon phytopathogne Fusarium
oxysporum f.sp. albedinis (F.o.a), lagent causal de la fusariose vasculaire. Cette maladie
connue sous le nom du Bayoud , chez le palmier dattier, menace la majorit des palmeraies
algriennes.
Bayoud
(Figure n 12), est dbarrass des tissus externes, coup dune faon transversale puis dcoup
en petits fragments. Ces derniers sont tromps dans une solution dHypochlorite de Sodium
dilue 2% pendant 03 minutes, pour une dsinfection superficielle ensuite rincs avec trois
bains successifs deau distille strile.
Les petits fragments sont dposs (la face sectionne), dans des boites de Ptri
(Figure n 13) contenant le milieu PDA (Annexe n 01). Les boites sont mises incuber dans
une chambre de culture, une temprature de 22 C, sous une photopriode de 12 heures.
-34-
Matriels et Mthodes
Date
dchantillonnage
Rfrence
de la souche
Partie
disolement
Site de prlvement
Wilaya
F1
F 1
El Mahdia
Adrar
18-03-2008
F 2
Aoughrout (Timimoun)
Adrar
Rhizosphre
02-04-2008
F 3
Laksour (Timimoun)
Adrar
Rhizosphre
11-03-2008
Rachis
Rhizosphre
Rachis
F4
F 4
Igli A2
F 5
Igli A3
Bchar
Rhizosphre
F6
Igli A4
Bchar
Rachis
F7
Igli A5
Bchar
Rachis
F8
F 8
F 8
Igli B
Bchar
F 9
Bchar
Rhizosphre
F 10
Bchar
Rhizosphre
F 11
Bchar
Rhizosphre
Taghit
Bchar
Rhizosphre
Bchar
Rhizosphre
26, 27 -03-2008
Rachis
Rhizosphre
F 12
10-04-2008
F 12
21-05-2008
F 13
Adrar
Rachis
03-07-2008
F 14
Mat (Taghit)
Bchar
Rhizosphre
03-06-2008
F 15
Ghardaa
Rachis
-35-
Matriels et Mthodes
-36-
Matriels et Mthodes
-37-
Matriels et Mthodes
-38-
Matriels et Mthodes
Les petits morceaux de feuilles dillet sont prpars partir dune collecte de cette plante
dillet frache non traite par des fongicides dinsecticides. Les feuilles collectes sont
dcoupes en petits morceaux de 5-8 mm2 (ils se rtrcissent aprs schage), puis schs dans
un four (~70 C) pendant 3 4 heures, ils peuvent tre schs aussi dans une micro-onde. Le
stockage de ces petits morceaux se fait dans un endroit sec de temprature ambiante jusqu 12
mois avant usage (Leslie et Summerell, 2006).
Une bouture myclienne est place ct de cette feuille dillet strile, le tout, dans une
boite de Ptri contenant le milieu Glose 2%. La boite est mise incuber dans la chambre de
culture 22 C, sous une photopriode de 12 heures.
-39-
Matriels et Mthodes
-40-
Matriels et Mthodes
41,0
9,0
14,8
35,2
39,0
61,0
94,7
5,3
Solutions
Eau distille
100 %
0,8 g Na Cl
95 %
10 g Na Cl
80 %
30 g Na Cl
74 %
32 g Na Cl
50 %
50 g Na Cl
14 %
-41-
Matriels et Mthodes
-42-
Matriels et Mthodes
-43-
Matriels et Mthodes
Nitrate de Calcium
(CaNO3)
Nitrate de Potassium
(KNO3)
0,25 g
Sulfate de Magnsium
(MgSO4)
0,25 g
Phosphate monopotassique
(KH2PO4)
0,25 g
Sulfate ferreux
(FeSO4)
0,001 g
-44-
Matriels et Mthodes
-45-
Chapitre II :
Etude du polymorphisme
isoenzymatique
Matriels et Mthodes
-47-
Matriels et Mthodes
Bleu de Coomassie
10 mg
Acide Orthophosphorique 85 %
10 ml
Ethanol 95 %
5 ml
100 ml
1/2
1/3
1/4
1/5
1/6
1/7
1/8
1/9
1/10
blanc
SBA (l)
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
200
300
400
500
600
700
800
900
200
Bradford (ml)
II/ lectrophorse :
2.1/ Prparation des gels pour le systme PAGE :
Llectrophorse se fait sur gel de polyacrylamide. Les deux gels (de sparation 10% et
de concentration 5%) sont prpars selon la mthode de Laenlmli (1970), modifie de la
manire suivante (Tableau n 04 ci-contre) :
-48-
Matriels et Mthodes
Gel de
sparation 10%
Gel de
concentration 5%
5 ml
2,5 ml
Solution de bis-acrylamide 1%
5 ml
3,9 ml
1,95 ml
3,75 ml
0,15 ml
0,15 ml
Eau distille
4,1 ml
4,65 ml
Temed
50 l
50 l
100 l
100 l
Solutions
La composition des tampons utiliss pour la prparation des gels et pour la migration est
donne en Annexe n 02.
Le gel se prsente sous forme de matriel glifi, form par la polymrisation dun
mlange dacrylamide et de bis-acrylamide. Le gel de concentration est coul en haut du gel de
sparation, pour permettre une entre homogne de lchantillon dans le gel de sparation. Des
pistes individuelles (puits) sont ralises laide dun peigne, qui spare le gel de concentration
en portions gales, destines la migration de chaque chantillon.
-49-
Matriels et Mthodes
Enzyme
Mlange ractionnel
Fast Blue RR
40 mg
50 ml
un alcool + un anion
acide carboxylique
50 mg
50 mg
50 ml
-Naphtyl Phosphate
-Naphtol Actate
PAC
Peroxydase
Shaw et Prasad
Pox
2 H2O2
2 H2O2 + O2
40 mg
5 ml
92,5 ml
2 ml
30 l
NB : Les chiffres crits en gras entre parenthses (1 3) renvoient la liste des solutions de
rvlation en Annexe n 02.
-50-
Matriels et Mthodes
-51-
Matriels et Mthodes
-52-
Chapitre III :
Essais in vitro de recherches
de moyens de lutte
Matriels et Mthodes
Substance
Substance
Laboratoire
Solubilit
O1
Laboratoire
Actone
Am6
Hydrosoluble
P2
de Chimie
Actone
Am7
Hydrosoluble
P3
Universit
Actone
ZS 49
Actone
M4
ES-Snia
Actone
ZS 50
Actone
M5
Oran
Actone
ZS 54
Hydrosoluble
ZS 55
Fongicide
Am1
Fongicide
Am2
Laboratoire
Hydrosoluble
ZS 60
Am3
de Chimie
Hydrosoluble
ZS 61
Am4
Universit de
Hydrosoluble
ZS 65
Am5
Sada
Hydrosoluble
ZS 66
Laboratoire
Laboratoire
de Chimie
Universit
ES-Snia
Oran
Solubilit
Actone
Actone
Actone
Actone
Actone
Actone
-54-
Matriels et Mthodes
Dans un premier temps, une solution mre de chaque produit est prpare une
concentration de 105 ppm (partie par million), puis des dilutions seront effectues avec un
milieu liquide base de pomme de terre, pour arriver chaque fois la concentration voulue
(50, 100, 200 et 400 ppm). Le 0 ppm comme tant le tmoin, ne contient que le solvant
incorpor dans le milieu PDA.
Les diffrentes dilutions sont obtenues en respectant la loi suivante :
C1 V1 = C2 V2
C2 : Concentration prparer
D : Diamtre
-55-
Matriels et Mthodes
Boite de Ptri
contenant le
milieu de culture
Implants du
myclium
-56-
Matriels et Mthodes
Code de la
dchantillonnage
souche
03.07.2008
T1
03.07.2008
T2
Site de
Partie
prlvement
disolement
Bchar
Haya
Sol
Bchar
Mat
Sol
Wilaya
Aprs lisolement des souches de Trichoderma (T1 et T2) partir du sol par la technique des
dilutions (similaire celle cite pour lisolement de F.o.a.), les caractres macroscopiques et
microscopiques sont tudis par la culture de cet agent antagoniste sur le milieu Davet (Annexe
01).
2.2/ Test de lactivit antagoniste in vitro :
Lactivit antagoniste in vitro de Trichoderma harzianum contre les isolats de F.o.a., a t
tudie selon deux mthodes :
-57-
Matriels et Mthodes
(Figure n 17).
Le tmoin est constitu par un filtrat de culture de lagent antagoniste dnatur au bainmarie pendant 5 minutes.
Ainsi,
Matriels et Mthodes
F.o.a.
T. harzianum
3 cm
Milieu PDA
Figure n 16 : Confrontation de F.o.a. avec T. harzianum par contact direct sur milieu de
culture.
Implant de F.o.a.
Figure n 17 : Confrontation de F.o.a. avec T. harzianum par lactivit des filtrats de culture.
-59-
Troisime Partie :
Rsultats et Discussions
Rsultats
Rsultats
I/ Isolement du champignon :
Les isolements partir des rachis dun palmier infect ou de la rhizosphre, rvlent un
dveloppement des souches fongiques qui prsentent des colonies duveteuses cotonneuses ou
ras muqueuses, de couleur
microscopique de tous les isolats, rvle la prsence de trois types de spores (microconidies,
macroconidies et chlamydospores), ce qui confirme que les isolats appartiennent au genre
Fusarium.
Le morphotype cotonneux, prsente un myclium arien trs abondant, pais et dense avec
une couleur blanche ros. Dans ce type, les microconidies sont produites tardivement
(Figure n 18 -a-).
Le morphotype duveteux, prsente un myclium arien assez court mais dense, portant de
nombreuses microconidies. Les macroconidies et les chlamydospores sont formes tardivement
(Figure n 18 -b-).
Le morphotype ras et muqueux, est caractris par labsence du myclium arien, ce qui
donne la culture un aspect muqueux comme si elle tait envahie par des bactries. Les
microconidies sont trs abondantes, les macroconidies sont rares et les chlamydospores sont
tardives mais abondantes (Figure n 18 -c-).
-62-
Rsultats
Tableau n 08 : Diffrents morphotypes rencontrs chez F.o.a. et Fusarium de la
rhizosphre du palmier dattier.
Souches
isoles
Partie
disolement
Site de
prlvement
Morphotype
F1
Rachis
Adrar
ras muqueux
(type sauvage)
Rose violet
F.o.a.
F 1
Rhizosphre
Adrar
cotonneux
Blanc ros
Fusarium sp.
F 2
Rhizosphre
Adrar
duveteux
Rose ple
Fusarium sp.
F 3
Rhizosphre
Adrar
cotonneux
Blanc ros
Fusarium sp.
F4
Rachis
Bchar
ras muqueux
Rose orang
F.o.a.
F 4
Rhizosphre
Adrar
cotonneux
Blanc
Fusarium sp.
F 5
Rhizosphre
Bchar
duveteux
Blanc ros
Fusarium sp.
F6
Rachis
Bchar
duveteux
Rouge carmin
Fusarium sp.
F7
Rachis
Bchar
Rose orang
F.o.a.
F8
Rachis
Bchar
ras muqueux
(type sauvage)
ras muqueux
(type sauvage)
Rose orang
F.o.a.
Rouge carmin
Fusarium sp.
Rouge carmin
Fusarium sp.
Rose clair
Fusarium sp.
Bchar
Pigmentation Identification
F 8
Rhizosphre
F 8
Rhizosphre
F 9
Rhizosphre
Bchar
ras
F 10
Rhizosphre
Bchar
cotonneux
Blanc
Fusarium sp.
F 11
Rhizosphre
Bchar
ras
Orange
Fusarium sp.
F 12
Rhizosphre
Bchar
ras muqueux
(type sauvage)
Violet ple
F 12
Rhizosphre
Bchar
ras
Orange
F.o.a.
(saprophyte)
Fusarium sp.
F 13
Rachis
Adrar
ras muqueux
(type sauvage)
Rose orang
F.o.a.
F 14
Rhizosphre
Bchar
ras muqueux
Blanc
Fusarium sp.
F 15
Rachis
Ghardaa
ras
blanc
Fusarium sp.
duveteux
Bchar
duveteux
-63-
Rsultats
Figure n 18 -a- :
Morphotype cotonneux
Figure n 18 -b- :
Morphotype duveteux
Figure n 18 -c- :
Morphotype ras muqueux
-64-
Rsultats
Lisolat F1
Lisolat F4
Lisolat F7
Lisolat F8
Lisolat F12
Lisolat F13
-65-
Rsultats
sont
lisses
et
produites
en
grande
quantit
dans
les
cultures
ges
(Figure n 20 -c-).
Suivant ces caractristiques, seules les souches sauvages isoles du rachis (F1-F4-F7-F8F13) et une souche saprophyte du sol (F12) sont des Fusarium oxysporum (Figure n 19), les
autres isolats appartenaient dautres espces du genre Fusarium.
2.3/ Effet des diffrents milieux de culture :
Sous les conditions de culture utilises, trois critres morphologiques sont pris en
considration (laspect du myclium, sa pigmentation et la vitesse de croissance de la colonie).
Le myclium de tous les isolats (F1-F4-F7-F8 et F13), sest trs bien dvelopp sur le
milieu PDA, avec un aspect ras muqueux et une pigmentation naturelle (Figure n 21),
contrairement aux deux autres milieux (Czapeck et Mathur), qui permettent une bonne
croissance mais la colonie a une faible pigmentation : blanchtre sur le milieu Czapeck (Figure
n 22) et presque transparente sur le milieu Mathur (Figure n 23).
La vitesse de croissance de tous les isolats est presque similaire sur les trois milieux de
culture. Le Tableau n 10 et la Figure n 24, illustrent les rsultats du diamtre moyen, calcul
aprs 10 jours dincubation et dune manire quotidienne, selon la mthode des deux sens
perpendiculaires.
-66-
Rsultats
-a1
2
5 m
-b-
6,8 m
-c-
6,8 m
-67-
Rsultats
F1
F4
F13
F7
F8
F8
F7
F4
F1
F13
F7
F8
F7
F1
F4
F13
F8
F7
Rsultats
Tableau n 10 : Diamtre moyen (cm) des cinq isolas sur les trois milieux de culture.
Milieux
PDA
Czapeck
Mathur
F1
4,995
3,958
4,79
F4
4,878
5,063
4,882
F7
4,998
4,699
4,965
F8
4,877
4,783
5,015
F 13
5,413
5,211
4,911
Souches
6
5
4
F1
F4
F7
F8
F 13
0
PDA
Czapeck
Mathur
Milieux de culture
-69-
Rsultats
-70-
Rsultats
Diamtre (cm)
6
Diamtre (cm)
4.7
5
4.6
4.5
3
2
4.4
4.3
4.2
15 C
22 C
28 C
35 C
Glucose
Maltose
Amidon
Diamtre (cm)
Diamtre (cm)
0
Asparagine NH4SO4
KNO3
Ec. Con.
Ob. Con.
Photo. 12H
lisolat F13.
-71-
Rsultats
Diamtre (cm)
4.5
4
3.5
3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
pH = 4
pH = 5
pH = 7
pH = 8
Diamtre (cm)
-72-
Rsultats
Souches de F.o.a.
Nombre de
plantules atteintes
Pourcentage de
mortalit (%)
F1
80%
F4
40%
F7
40%
F8
80%
F12
20%
F13
60%
-73-
Rsultats
A
C
E
F
D
-74-
Rsultats
VI/ lectrophorse :
Le gel de polyacrylamide a servi pour ltude isozymique des isolats de F.o.a. (F1-F4-F7F8-F12 et F13), rcolts des diffrentes rgions du Sahara Algrien. Trois systmes
enzymatiques ont t tudis.
6.1/ Estrases :
Ce systme rvle un profil lectrophortique de 04 bandes chez tous les isolats de F.o.a.
Les bandes sont parfaitement visibles, dune intensit variable et, dune couleur rouge brique
ou marron (Figure n 33).
6.2/ Phosphatases :
Le profil lectrophortique des phosphatases des isolats de F.o.a. rvle la prsence dune
seule bande lisible et visible dune intensit variable et dune couleur marron (Figure n 34).
6.3/ Peroxydases :
La rvlation de ce systme est ngative. Le profil lectrophortique na prsent aucune
bande visible pour les isolats de F.o.a. (Figure n 35).
6.4/ Protines totales :
La rvlation des bandes protiques sur le gel de polyacrylamide en prsence du SDS,
montre la prsence de plusieurs bandes sur un profil lectrophortique presque similaires pour
tous les isolats de F.o.a. (Figure n 36).
-75-
Rsultats
Tableau n 12 : Densit optique (D.O.) de chaque dilution.
1/2
1/3
1/4
1/5
1/6
1/7
1/8
1/9
1/10
D.O.
0,869
0,840
0,824
0,782
0,776
0,734
0,719
0,701
0,689
Dilutions
1/11
1/12
1/13
1/14
1/15
1/16
1/17
1/18
1/19
D.O.
0,666
0,660
0,631
0,578
0,573
0,560
0,552
0,532
0519
D.O.
Dilutions
Souches
F1
F4
F7
F8
F12
F13
D.O.
0,312
0,277
0,332
0,204
0,351
0,281
Concentration en
protines (g/ml)
14,65
12,93
15,63
9,35
16,56
13,13
-76-
Rsultats
F13
F12
F8
F7
F4
F13
F1
F12 F8
F7
F4
F1
(-)
(+)
F1
F4
F7
F8
F12
F1
F13
F4
F7
F8
F12 F13
(-)
(+)
-77-
Rsultats
F1
F4
F7
F8 F12 F13
F1
F4
F7
F8
F12 F13
F1
F4
F7
F8
F12
F13
(-)
(+)
Figure n 36 : Profil lectrophortique des protines totales chez les isolats de F.o.a.
-78-
Rsultats
0 ppm
50 ppm
200 ppm
100 ppm
400 ppm
Rsultats
Tableau n 14 : Diamtre moyen (cm) de lisolat F13 confront avec la premire srie des
substances fongicides.
O1
P2
P3
M4
M5
0 ppm
3,95
4,65
5,91
4,35
3,51
50 ppm
3,96
4,63
5,43
3,26
3,38
100 ppm
4,48
3,66
4,65
5,51
3,6
200 ppm
3,43
2,68
4,01
5,31
3,28
400 ppm
3,48
2,53
3,81
4,7
2,75
Tableau n 15 : Taux dinhibition (%) de la premire srie des substances fongicides contre
lisolat F13.
P2
P3
M4
M5
50 ppm
0,43
8,12
25,1
3,7
100 ppm
21,29
21,3
200 ppm
13,16
42,36
32,1
6,55
400 ppm
11,89
45,59
35,5
21,7
O1
6
5
0 ppm
50 ppm
3
100 ppm
200 ppm
400 ppm
0
O1
P2
P3
M4
M5
-80-
Rsultats
Tableau n 16 : Diamtre moyen (cm) de lisolat F13 confront avec la deuxime srie des
substances fongicides.
Am1
Am2
Am3
Am4
Am5
Am6
Am7
0 ppm
4,93
4,28
2,11
4,08
3,13
3,43
3,26
50 ppm
4,38
3,61
2,3
6,03
2,08
1,23
3,18
100 ppm
4,83
2,33
2,3
5,11
2,16
1,01
3,36
200 ppm
4,88
2,63
2,26
5,81
2,3
0,76
3,41
400 ppm
4,86
2,28
2,26
4,01
2,78
1,48
4,36
Tableau n 17 : Taux dinhibition (%) de la deuxime srie des substances fongicides contre
lisolat F13.
Am2
Am3
Am4
Am5
Am6
Am7
50 ppm
11,15
15,65
33,5
64,13
3,04
100 ppm
2,02
45,65
31
70,55
200 ppm
1,01
38,55
26,5
77,84
400 ppm
1,41
46,72
1,71
11,2
56,84
Am1
7
6
5
0 ppm
4
50 ppm
100 ppm
200 ppm
400 ppm
1
0
Am1
Am2
Am3
Am4
Am5
Am6
Am7
-81-
Rsultats
Tableau n 18 : Diamtre moyen (cm) de lisolat F13 confront avec la troisime srie des
substances fongicides.
ZS49
ZS50
ZS54
ZS55
ZS 60
ZS 61
ZS65
ZS 66
0 ppm
3,46
3,8
3,5
2,98
4,16
4,18
3,9
4,13
50 ppm
2,81
3,03
2,95
3,68
3,05
2,8
2,78
3,25
100 ppm
2,73
2,56
2,3
2,7
2,88
2,65
2,61
3,38
20 ppm
2,95
2,46
1,55
3,11
2,48
2,48
1,9
3,68
400 ppm
2,8
2,7
1,11
4,06
2,16
3,15
1,95
4,46
Tableau n 19 : Taux dinhibition (%) de la troisime srie des substances fongicides contre
lisolat F13.
ZS 50
ZS 54
ZS 55
ZS 60
ZS 61
ZS 65
ZS 66
50 ppm
18,78
20,26
15,7
27
31,87
28,71
21,3
100 ppm
21,09
32,63
34,3
9,39
31,1
35,52
33,07
18,15
200 ppm
14,73
35,26
55,7
40,7
39,65
51,28
10,89
400 ppm
19,07
28,94
68,3
48,3
23,35
50
ZS 49
4.5
4
3.5
0 ppm
50 ppm
2.5
100 ppm
2
1.5
20 ppm
400 ppm
0.5
0
ZS49 ZS50 ZS54 ZS55 ZS 60 ZS 61 ZS65 ZS 66
-82-
Rsultats
4 m
1
2
1 : spore
2 : phialide
3 : conidiophore
3
Rsultats
T.H.%
F4
T.H.%
F7
T.H.%
F8
T.H.%
F13
T.H.%
T1
2,7
22,8
1,26
54,2
2,6
16,6
2,38
28,3
2,8
30,9
T2
2,7
22,8
1,52
47,1
2,44
21,8
1,96
40,9
2,62
36,0
Tm
2,62
25,1
2,2
22,5
2,16
30,7
2,4
27,7
2,82
31,2
Tmoin
3,5
2,84
3,12
3,32
4,12
Diamtre moyen de la
colonie (cm)
4.5
4
3.5
3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
T1
T2
Tm
Tmoin
F1
F4
F7
F8
F13
Figure n 43 : Diamtre moyen (cm) des isolats de F.o.a. en contact direct avec les
diffrentes souches de Trichoderma pendant 4 jours dincubation.
-84-
Rsultats
Tableau n 21 : Diamtre moyen (cm) des isolats de F.o.a. et le taux dinhibition (%) des
diffrentes souches de Trichoderma par action des filtrats de culture.
F1
T.H.%
F4
T.H.%
F7
T.H.%
F8
T.H.%
F13
T.H.%
T1
2,43
42,9
2,98
40,0
2,65
45,3
2,66
32,1
2,92
39,9
T2
2,43
42,9
2,31
53,4
2,15
35,6
2,08
47,0
2,45
49,6
Tm
1,26
70,2
1,63
67,1
1,5
55,0
1,4
64,3
1,8
63,0
Tmoin
4,26
4,97
3,33
Diamtre moyen de la
colonie (cm)
5
4.5
4
3.5
3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
F1
F4
3,93
4,86
T1
T2
Tm
Tmoin
F7
F8
F13
Figure n 44 : Diamtre moyen (cm) des isolats de F.o.a. sous laction des filtrats de
culture des diffrentes souches de Trichoderma pendant 4 jours dincubation.
T1
T.H. (%)
T2
Tm
60
80
T.H. (%)
70
50
60
40
50
30
40
30
20
20
10
10
0
F1
F4
F7
Contact Direct
F8
F13
F1
F4
F7
F8
F13
Rsultats
Le test de lactivit antagoniste de Trichoderma harzianum contre les isolats de F.o.a., que
se soit par contact direct sur milieu de culture ou par laction des filtrats de culture, rvle un
recouvrement des isolats de F.o.a. par le myclium de lagent antagoniste sur toute la surface
de la boite de Ptri, avec lexistence de fructification de ce dernier sur les isolats de F.o.a. et la
scrtion de substance jaune dans la zone de contact (Figure n 46 et 47).
1 Jour dincubation
4 Jour dincubation
Tmoin
antagoniste.
Figure n 46 : Contact direct sur milieu de culture entre Trichoderma harzianum et F.o.a.
-86-
Rsultats
1 Jour dincubation
4 Jour dincubation
Tmoin
antagoniste et production de
(pastille du centre).
-87-
Discussions
Discussions
-89-
Discussions
Par ailleurs, Une croissance inhibe de notre souche a t remarque sur le milieu
contenant le sulfate dammonium comme seule source azote. Les mmes constatations ont t
faites par (Guessas, 1993 ; Ameziane, 1997).
4/ Ltude du pouvoir pathogne, nous a permis de constater que tous les isolats du Fusarium
oxysporum f.sp. albedinis, issus du rachis, taient pathognes (aprs une priode de 3 mois et
plus ou moins quelques semaines), sur les plantules du palmier dattier obtenues aprs la
germination des noyaux de dattes, avec un degr de pathognicit variable. Nos observations
concordent avec celles obtenues par (Ouinten, 1996).
Parmi les 05 plantules inocules, nous avons enregistr 04 plantules dtruites pour chacun des
isolats F1 et F8, avec un pourcentage de mortalit de 80 % et 03 plantules pour lisolat F13 o
le taux de mortalit a atteint 60 %.
Chez les isolats F4 et F7, le taux de mortalit enregistr a atteint 40 %, soit 02 plantules sur la
totalit.
Par ailleurs, nous avons constat que, seul lisolat F12, issu de la rhizosphre dgage le
nombre le plus faible des plantules atteintes (01 seule), soit un taux de mortalit de 20 %.
5/ Ltude du polymorphisme isoenzymatique, par la rvlation des estrases et des
phosphatases acides, ainsi que les protines totales de nos isolats du Fusarium oxysporum f.sp.
albedinis, nous a montr une similarit des profils lectrophortiques entre les isolats pour
chaque systme rvl. Le mme constat a t fait par (Bounaga, 1985).
Nous avons, en ce qui nous concerne enregistr une absence totale de bandes pour la rvlation
des peroxydases, chez tous les isolats de F.o.a., peut tre que le ractif de rvlation tait
prim.
-90-
Discussions
Dans la premire srie des substances fongicides, nous navons pas pu calculer le taux
dinhibition pour le produit O1 ( 50 et 100 ppm), le produit M4 ( 100, 200 et 400 ppm) et le
produit M5 ( 100 ppm) ; puisque le diamtre de lisolat F13 dans ces concentrations (le test),
dpasse celui du tmoin (0 ppm).
Le taux dinhibition de la croissance myclienne de lisolat F13, calcul pour cette srie de
substances fongicides, varie considrablement de 0,43% (le taux le plus faible) 45,59 % (le
taux le plus lev).
Les meilleurs pourcentages dinhibition sont obtenus avec le produit P2 (42,36 % 200 ppm et
45,59 % 400 ppm) et le produit P3 (32,1 % 200 ppm et 35,5 % 400 ppm). Cela implique
que la CMI50 de ces deux produits (P2 et P3), dpasse la concentration 400 ppm.
Dans la deuxime srie des substances fongicides, nous avons constat quil existe une
diffrence dans lefficacit entre chaque produit test.
En premier lieu,
les produits Am3 - Am4 et Am7, ne montrent aucune inhibition de lisolat F13 ;
autrement dit, ces 03 produits nont aucun effet sur la croissance myclienne du champignon.
Le produit Am1, quant lui, prsente un taux trs faible de 11,15 % ( 50 ppm), qui
devient ngligeable dans les concentrations qui suivent (2,02 % 100 ppm, 1,01 200 ppm et
1,41 400 ppm).
En second lieu, le produit Am5 prsente une dgradation du pourcentage dinhibition, o
lefficacit commence avec un pourcentage de 33,5 % 50 ppm, puis dcroit 31% 100 ppm
et chute enfin 11,2 % 400 ppm.
En dernier lieu, et concernant les 02 produits restants (Am2 et Am6), nous avons pu enregistrer
pour le premier, un taux dinhibition relativement lev 46,72 % 400 ppm par contre, le
second a dgag le taux le plus lev soit 77,84 % 200 ppm. Dans ce cas, nous pouvons
estimer la CMI50 suprieure 400 ppm, pour le produit Am2 et infrieure 400 ppm pour le
produit Am6.
-91-
Discussions
Dans la troisime srie des substances fongicides, les molcules de triazoles ZS54,
ZS60 et ZS6 testes sur la souche fongique F.o.a. F13, ont exerc un effet inhibiteur sur sa
croissance myclienne une concentration de 400 ppm avec un taux de 68.3 %, 48.3 % et 50 %
respectivement.
Avec les autres substances testes on remarque une inhibition au niveau des
concentrations 50 ppm, 100 ppm et 200 ppm; mais avec la concentration de 400 ppm on note
un rehaussement de la croissance de la souche F13 qui fait penser lhypothse de rsistance
ou de mutation.
Parmi ces substances on citera la ZS50 et ZS61 o la croissance 400 ppm est plus
importante que celle note avec les concentrations 50 ppm et 100 ppm. Elles enregistrent un
taux dinhibition maximal avec les concentrations 100 et 200 ppm, soit 35 % 200 ppm et 39,
6 % 200 ppm respectivement.
Les substances ZS55 et ZS66 nont aucune activit inhibitrice envers la croissance
myclienne de la souche F13 du Fusarium oxysporum f.sp. albedinis.
Les rsultats obtenus dans la lutte biologique contre le Fusarium oxysporum f.sp.
albedinis par lagent antagoniste Trichoderma harzianum, nous a montr une nette rduction du
diamtre moyen de la croissance myclienne, une zone dinhibition ds le 1er jour et un
envahissement total de la boite de Ptri par lagent antagoniste au bout de 4 jours dincubation.
-92-
Discussions
une confrontation directe sur milieu de culture entre cet antagoniste et un autre champignon
tellurique, le Pythium ultimum et ce au bout de quatre cinq jour aprs linoculation. DaamiRemadi et El Mahjoub (2001), ont signal, en testant lactivit antagoniste de Trichoderma
harzianum, vis--vis de deux espces de Pythium, que pendant les trois premiers jours, la boite
de Ptri est totalement envahie par Pythium spp. et que Trichoderma harzianum ne commence
exercer son activit antagoniste qu partir du quatrime jour dincubation. Quant Hibar et
al., 2005, qui ont travaill sur le Trichoderma harzianum contre le Fusarium oxysporum f.sp.
radicis-lycopersici, ont trouv que les isolats de lagent pathogne noccupent quune surface
de 20 mm de diamtre, ce qui correspond une inhibition de 65 %. Le tmoin cultiv seul
occupe une surface denviron 50 mm de diamtre.
-93-
Conclusion
Conclusion
Notre travail au Laboratoire de Phytopathologie, Dpartement de Biologie, lUniversit
dOran Es-Snia, a port principalement sur trois axes de recherche :
1- Lidentification et la caractrisation des isolats de Fusarium oxysporum f.sp. albedinis
par une tude morphologique des caractres macroscopiques et microscopiques ainsi
que linfluence de quelques facteurs physico-chimiques sur la croissance myclienne.
2- Ltude du polymorphisme isoenzymatique des isolats de Fusarium oxysporum f.sp.
albedinis par la rvlation des protines totales et de trois systmes enzymatiques
savoir : les estrases, les phosphatases acides et les peroxydases.
3- Les effets ou rsultats de la lutte contre Fusarium oxysporum f.sp. albedinis, que ce soit
une lutte chimique par des substances fongicides ou une lutte biologique par lagent
antagoniste Trichoderma harzianum.
Lexprience mene au Laboratoire, pendant plusieurs mois, sous lil vigilant de notre
encadreur, qui fut aussi riche en vnements et leons que frustrante (notamment lanalyse
lectrophortique), nest pas sans insuffler une certaine fiert, dans la mesure o, elle nous
a permis de constater de visu, essentiellement, les oprations suivantes :
douloureuses ont t menes, avec un dvouement constant, en vue de parvenir aux rsultats
souhaits et prsenter un travail qui puisse tre utile aux lecteurs dune manire gnrale et aux
professionnels dune manire particulire.
Les rsultats auraient t meilleurs, neussent t :
-
Lexigut du Laboratoire,
Rfrences
Bibliographiques
Rfrences Bibliographiques
1.
Albouvette, C., Couteaudier, Y., et Louvet, J., 1986. Recherches sur la rsistance des
sols aux maladies. X-comparaison de la mycoflore colonisant les racines de melons
cultivs dans un sol rsistant ou dans un sol sensible aux fusarioses vasculaires. 4, 735740.
2.
3.
Amir, H., 1991b. Interactions entre les populations du genre Fusarium dans les sols
sahariens : dterminisme de laptitude des souches non pathognes limiter lexpression
de la fusariose vasculaire. Thse doct, USTH. Alger. 92-94.
4.
Amir, H., et Mahdi, N., 1993. Liaisons entre les aptitudes cologiques de diffrentes
souches de Fusarium et leur efficacit dans la protection de plantes de lin contre la
fusariose vasculaire. Can. J. Microbiol. 39 : 234- 244.
5.
6.
Armestrong, G., et Armestrong, J.K., 1981. Formae speciales and races of Fusarium
oxysporum causing wilt disease. Pages 391-399: In Fusarium, diseases, biology, and
taxonomy. P.E. Nelson, Tousson, T.A., et Cook, R.J. Eds. The Pennsylvania State
University Press. University Parck and London.
7.
8.
BAAZIZ, M., 2000. Date palm culture in the Maghreb countries. Constraints and
scientific researches. Date palm International Symposium. Windhoek, Namibia, 22-25.
9.
-97-
Rfrences Bibliographiques
10.
11.
Bilai, V.I., 1955. The Fusaria Biology and Systematics. Kiev. Akad. Nauk. Ukr.
12.
Bilai, V.I., 1977. Experimental morphogenesis in the fungi of the genus Fusarium and
their Taxonomy. Ann. Acad. Sci. Fenn. A. IV Biologica, 168, 7-18.
13.
Blaise, K., Couture, L., Dostaler, D., et Berner, L., 2001. Variabilit phntique du
Colletotrichum graminicola du sorgho. Can.J.Plant Pathol. 23.
14.
Booth, C. 1975. The present status of Fusarium taxonomy. Ann. Rev. Phytopat. 13.
83-84.
15.
Booth, C., 1971. The genus Fusarium. Kew-England: Commonwealth Mycol. Inst.
237
p.
16.
Booth, C., 1981. Perfect States (Telomorphs) of Fusarium species. In: Fusarium:
Diseases, Biology and Taxonomy. Edit by Nelson P.E., Tousson T.A. and Cook R.J. The
Penn. State Univ. Press. Univ. Parck and London.
17.
Booth, C., 1985. The genus Fusarium. Commonwealth Mycological Institute, Kew, 3me
Edition.
18.
19.
Bounaga, N., 1985. Contribution ltude de Fusarium oxysporum f.sp. albedinis, agent
de la fusariose du palmier dattier. Thse de doctorat dtat. Universit des Sciences et de
Technologie Houari Boumdine, Alger. 195 p.
-98-
Rfrences Bibliographiques
20.
21.
Bounaga, N., Benkhalifa, A., et Brac de la Perrire, R.A., 1992. Lutte contre la
fusariose du dattier par lutilisation dune diversit gntique entretenue. In : Complexes
dEspces, Flux.
22.
23.
24.
Brac de la Perrire, R.A., et Bounaga, N., 1990. Etude du verger phoenicicole dune
palmeraie (Bni-Abbes, sudouest Algrien). I. inventaire exhaustif et composition
varitale. Rev. Rs. Amlior. Pro. Agr. Milieu Aride.2 : 9-18.
25.
26.
Bulit, J., Louvet, J., Bouhot, D., et Toutain, G., 1967. Travaux sur les Fusarioses. I :
Travaux sur le Bayoud, Fusariose Vasculaire du Palmier Dattier en Afrique du Nord.
Ann. Epiphytes. 18 : 213-239.
27.
Bulletin OEPP/ EPPO, 2003. Protocoles de diagnostic pour les organismes rglements.
Fusarium oxysporum f.sp. albedinis. Bulletin n 33, 265-269. PM 7/16. 75016. Paris.
France.
28.
Catani, S.C., and Peterson, J.L., 1966. Antagonistic relationships between Verticillum
dahliae and fungi isolated from the rhisosphere of acer platanoides. Phytopathology, 57,
363-366.
-99-
Rfrences Bibliographiques
29.
Cheikh-Aissia, A., 1990. Les possibilits de dsinfection dun foyer primaire de Bayoud
du palmier dattier laide du bromure de mthyle. INPV, Ghardaa, 9 p.
30.
CIRAD et GRET, 2002. Mmento de lagronome. Edit. Quae, 2002. ISBN 2876145227.
1691 p. CIRAD/ Centre de coopration International en Recherche Agronomique pour le
Dveloppement France, GRET/ Groupe de Recherche dEchanges Technologiques.
31.
32.
Daikh, H., et Demarly, Y., 1987. Rsultats prliminaires sur lobtention dembryons
somatiques et la ralisation de semences artificielles de palmier dattier (Phoenix
dactylifera L.). Fruits, 42 (10), 593-596.
33.
Diallo, B., et Diouf, A., 2000. Etude de lactivit analgsique du Pilostigma reticulatum
(Nguiguis). Odontostomatologie tropicale 92.
34.
Djerbi, M., 1982. Bayoud disease in North Africa: history, distribution, diagnosis and
control. Date palm Journal I. (2): 153-198.
35.
Djerbi, M., 1988. Les maladies du palmier dattier. Edit. El Watan Printing Press Co.
Beyrouth. 125 p.
36.
Djerbi, M., 1990. Mthodes de diagnostic du Bayoud. In : Compte rendu de latelier sur
le diagnostic et lradication du Bayoud. Ghardaa 3-7 Juin 1989. Algrie (sous la
presse).
37.
Djerbi, M., 1991. Biotechnologie du palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) : Voies de
propagation des clones rsistants au bayoud et de haute qualit dattire. Options
Mditerranennes, Sries Sminaires n 14 : 31-38.
-100-
Rfrences Bibliographiques
38.
39.
Djerbi, M., El Ghorfi, A., et El Idrissi, M.A., 1985. Etude du comportement du henn
(Lawsonia isnermis L.) et la luzerne (Medicago sativa L.) et de quelques espces de
palmaces lgard du Fusarium oxysporum f.sp. albedinis, agent causal du bayoud.
Ann. Inst. Rech. Agr. Tunisie, 58:1-11.
40.
41.
42.
El Hadrami, A., El Idrissi-Tourane, A., El Hassni, M., Daayf, F., et El Hadrami, I.,
2005. Toxin-based in-vitro selection and its potential application to date palm for
resistance to the bayoud Fusarium wilt. Plant Biology and Pathology, C. R. Biologies,
328. 732744.
43.
Elad, Y., Chet, I. et Henis, Y., 1982. Degradation of plant pathogenic fungi by
Trichoderma harzianum. Can. J. Microbiol. 28, p. 719-725.
44.
Fernandez, D., Lourd, M., Ouinten, M., Tantaoui, A., et Geiger, J.P., 1995. Le
Bayoud du palmier dattier. Une maladie qui menace la phoeniciculture. Phytoma. La
dfense des vgtaux. n 469.
45.
46.
-101-
Rfrences Bibliographiques
albedinis (Bayoud) dans le sol. Table ronde sur le Bayoud (19-20 Septembre 19888),
Alger, p 27-35.
47.
Frederixs, M.J.J., et Den Brader, K., 1989. Rsultats des essais de dsinfection des sols
contenant des chantillons de Fusarium oxysporum f.sp. albedinis FAO/ PNUD/ RAB/
88/ 024. Ghardaa, Alger.
48.
49.
Gerlach, W., 1977. Fusarium species inciting plant diseases in the tropics. In: The
diseases pests and weeds in tropical crops. Edit. by Kranz J., Schumutterer H., et Koch
W. Verlag. Paul Parey. Berlin.
50.
Gerlach, W., 1981. The present concept of Fusarium classification. In: Fusarium:
Diseases Biology and Taxonomy. Edit. by Nelson P.E., Tousson T.A., and Cook R.J. The
Penn. State Univ. Press. Univ. Parck and London.
51.
Gordon, W.L., 1952. The occurrence of Fusarium species in Canada. Prevalence and
Taxonomy of Fusarium species in cereal seed. Can. J. Bot., 30, 209-251.
52.
Gordon, W.L., 1960. The taxonomy and habitats of Fusarium species from tropical and
temperate regions. Can. J. Bot. 38, 643-658.
53.
Gordon, W.L., 1965. Pathogenic strains of Fusarium oxysporum. Can. J. Bot., 43:13091318.
54.
55.
-102-
Rfrences Bibliographiques
56.
Hadjari, M., Kadi Hanifi, M., 2005. La mise en uvre de la fermentation de jus de datte
tude cintique et biochimique, mmoire d'ingniorat en sciences alimentaire, Mascara,
21-22-23 p.
57.
58.
Henni, J.E., 1987. Evaluation de lefficacit de certains champignons antagonistes vis-vis de Verticillium dahliae. Crypt. Mycol. P: 8, 203-207.
59.
Henni, J.E., 1998. Morphologie, pouvoir pathogne et diversit gntique chez Fusarium
oxysporum f.sp.lycopersici. Thse de Doctorat dtat. Universit dOran.
60.
171 p.
Hibar, K., Daam-Remadi, M., Khiareddine, H., et El-Mahjoub, M., 2005. Effet
inhibiteur in vitro du Trichoderma harzianum sur Fusarium oxysporum f.sp. radicislycopersici. Biotechnol. agron. Soc. Environ. 9 (3), 163-171.
61.
Hodel, D.R., Johnson, D.V., 2007. Imported and Americain Varieties of Dates in the
United States. University of California, Agriculture and Natural Ressources, 112 p.
62.
Joffe, A.Z., 1974. A modern system of Fusarium taxonomy. Mycopathol. Mycol. Appl.,
53, 201-228.
63.
Lafont, R., 2005. Biologie et Multimdia - Universit Pierre et Marie Curie - UFR de
Biologie.
64.
Laville, E., 1973. Les maladies du dattier. Pages 95-108. In Le palmier dattier. P.
Munier. Edit. Maisonneuve et Larose, Paris, 221 p.
65.
Leslie, J.F., Summerell, B.A., 2006. The Fusarium Laboratory Manuel. Edit. Blackwell
Publishing Professional. ISBN-13: 978-0-8138-1919-8. 2121 State Avenue. Ames, Iowa
50014, USA 388 p.
-103-
Rfrences Bibliographiques
66.
Letouze, R., et Daguin, F., 1989. Lembryognse somatique ; des possibilits nouvelles
pour la micropropagation du palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) C.R.
Deuxime Sminaire Maghrbien sur la culture in vitro du palmier dattier contre le
bayoud FAO/PNUD/RAB/88/024, Marrakech, Maroc, 9-12 Octobre 1989, (sous presse).
67.
Lopez, M.E., et Fergus, L., 1965. The carbon and nitrogen nutrition of Fusarium
roseum. Mycologia 57, 897-903.
68.
69.
Louvet, J., 1991. Que devons-nous faire pour lutter contre le Bayoud. In : Physiologie
des Arbres et Arbustes en zones arides et semiarides (Ed. by A. Riedaker, E. Dreyer, C.
Pafadnam, H. Joly and G. Bory) pp 337-346. Groupe dtude de larbre, Jhon Libbey
Eurotext, Paris, France.
70.
Louvet,J., Toutain, G., 1973. Recherches sur les Fusarioses. VIII Nouvelles
Observations sur la Fusariose du Palmier Dattier et Prcisions Concernant la Lutte. Ann.
Phytopath. 5 :35-52.
71.
72.
73.
MARKERT, C.L., MOLLER, F., 1959. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 45:753-63.
74.
Spcialit
Technologie
Alimentaire
lI.N.A.
(Institut
National
-104-
Rfrences Bibliographiques
75.
MC Mullen, M.P., et Stack, R.W., 1983. Effect of isolation techniques and media on the
differential isolation of Fusarium species. Phytopatology, 73. 458-462.
76.
Messiaen, C.M., et Cassini, R., 1968. Recherches sur les Fusarioses. IV. La
systmatique des Fusarium. Ann. Epiphyt. 19. 387-454.
77.
Messiaen, C.M., et Cassini, R., 1981. Taxonomy of Fusarium. In: Fusarium: Diseases,
Biology and Taxonomy. Edit. by Nelson P.E., Tousson T.A., and Cook R.J. The Penn.
State Univ. Press. Univ. Parck and London.
78.
Messiaen, C.M., et Lafon, R., 1970. Les maladies des plantes marachres. Edit. INRA.
Paris. 431 p.
79.
MOSS, D.W., 1984. Acid phosphatases. In Methods of enzymatic analysis. Volume IV.
Enzymes 2: esterases, glycosidases, lyases, ligase (Bergmeyer J ed) Verlag Chemie,
Weinheim, 92-106.
80.
Munier, P., 1973. Le palmier dattier. Edit. Maison neuve et Larose, Paris. ISBN
2706805633. 221 p.
81.
Nelson, P.E., Tousson, T.A., et Cook, R.J., 1981. Fusarium: Diseases, Biology and
Taxonomy. The Pennsylvana state University Press. University Parck and London.
82.
OEPP, 1994. Fiche informative sur les organismes de quarantaine. Fusarium oxysporum
f.sp. albedinis. n 70 II/ A1. Organisation Europenne et Mditerranenne pour la
protection des plantes. 1-6 p.
83.
84.
-105-
Rfrences Bibliographiques
palmier dattier. Thse de Doctorat. Sciences et Technique du Languedoc. Universit de
Montpelier II.
85.
Ozbay, N. et Newman, S.E., 2004. Fusarium crown and root rot of tomato andcontrol
methods. Plant. Pathol. J. 3, p. 9-18.
86.
Pereau Leroy, P., 1958. Le palmier dattier au Maroc. Min. Agric. Maroc, Ser. Rech.
Agron. Et Inst. Franais Rech. Fruit Outre Mer, Rabat, 142 p.
87.
Peyron, G., 2000. Cultiver le palmier. Edit. CIRAD. N ISBN 2876143992. 110 p.
88.
Poulin, C., Rhiss, A., et Beauchesne, G., 1979. Multiplication vgtative en culture
in vitro du palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) C.R. Acad.Agr.Paris. 11 :1151-1154.
89.
90.
Raillo, A., 1935. Diagnostic estimation of morphological and cultural character in the
genus Fusarium. Bull. Plant. Prot. II. Leningrad. (Phytopathol).
91.
Rebell, G., 1981. Fusarium infections in human and veterinary medicine. In: Fusarium:
Diseases, Biology and Taxonomy. Edit. by Nelson P.E., Tousson T.A., and Cook R.J.
The Penn. State Univ. Press. Univ. Parck and London.
92.
Riedacker, A., 1990. Physiologie des arbres et arbustes en zones arides et semi-arides,
John Libbey, Eurotext. ISBN 2742000194. 489 p.
93.
Roger, C., 1990. Principe de phytopathologie et de lute contre les maladies des plantes.
Edit. Presses Polytechniques et Universitaires Romandes. 285 p.
94.
Rfrences Bibliographiques
95.
96.
Saaidi, M., et Rodet J., 1974. Lutte contre le Bayoud : II. Efficacit de deux fongicides
sur Fusarium oxysporum f.sp. albedinis agent du Bayoud in vitro.
97.
Sedra, M.H., et Djerbi, M., 1984. Mise au point dune mthode rapide et prcise
didentification du Fusarium oxysporum f.sp. albedinis agent causal du bayoud. Ann.
Insti. Nat. Rech. Agr. Tunisie 58 (1985), 2 : 1-12.
98.
Snyder, W. C., and H. N. Hansen. 1947. Advantages of natural media and environments
in the culture of fungi. Phytopathology 37: 420-421. (2, 4).
99.
Snyder, W. C., et Hansen, H.N. 1940. The species concept in Fusarium. Amer. J. Bot.,
27: 64-67.
100. Snyder, W. C., et Hansen, H.N. 1941. The species concept in Fusarium with reference
to section Martiella. Amer. J. Bot., 28: 738-42.
101. Snyder, W. C., et Hansen, H.N. 1945. The species concept in Fusarium with reference
to section Discolor and other sections. Amer. J. Bot., 32: 657-666.
102. Synder, W.C., Hansen, H.N., et Oswald, J.W., 1957. Cultivars of the fungus Fusarium.
J. Madras Univ., 27. 187-192.
103. Tantaoui, A., 1989. Contribution ltude de lcologie du Fusarium in Fusarium wilt
reference to section Martilla. American Jornal of Botany 28 (9) : 738-742.
104. Toshiaki, O., et Takashi, T., 2004. FoSSTUA, Encoding a Basid Helix-Loop-Helix
Protei, Differentally Regulates Development of Three Kinds of Asexual Spores,
Macroconidia, Microconidia and Chlamydospores, in the Fungal Plant Pathogen
Fusarium oxysporum. University, Chikusa. Japan.
-107-
Rfrences Bibliographiques
105. Tousson, A., et Nelson, P.E., 1968. A pectorial guide to the identification of
Fusarium species. The pennsylvana state University Parck and London. 51 p.
106. Tousson, A., et Nelson, P.E., 1975. A pectorial guide to the identification of
Fusarium species according to the taxonomic system of Synder and Hansen. Second
edition. Pennsylvana state Univ. Press., University Parck and London, 44 p.
107. Toutain, G. 1965. Note sur lpidmiologie du bayoud en Afrique du Nord. AL
Awamia, 15 :37-45.
108. Vanachter, A., 1991. Dsinfection des sols laide des fumigants : cas du Bayoud.
Bulletin du Rseau Maghrbin de Recherche, 1 : 14-20.
109. Waltz, S.S., et Johnes, J.P., 1981. Nutritionale quirements of Fusarium oxysporum:
Basis for a disease conrol system. In Nelson. R.J. et al., 340-349.
110. Wilson, K.S., and Poeter, CL., 1957. The pathogenicity of Verticillium albo-atrom as
affected by muck soil antagonists. Appl. Microb. 6, 155-159.
111. Wolf, F., 1966. Nutrition and metabolism of tobacco wilt Fusarium Bull. Torr. Bot. Cl,
82 (5), 313-351.
112. Wollenweber, H.W., et Reinking, O.A., 1935. Die Fusarien, ihre Beschreibung.
Schadwirkung and Bekampfung. Berlin. Paul Parey. 355 p.
113. Zad, A., 2002. Date Palm Cultivation. FAO Plant Production and Protection Paper.
156 Rev.1. ISSN 0259-2517, ISBN 92-5-104863-0.
-108-
Annexes
Annexes
..
..
..
..
200 g
20 g
20 g
1000 ml
- La pomme de terre est pluche, coupe en petits ds puis cuite dans un litre deau distille.
Aprs cuisson, le filtrat est rcupr, ajust 1000 ml puis ajuster le pH 5,5.
..
..
..
..
..
..
..
..
30 g
1 g
0,5 g
2 g
0,5 g
0,1 g
20 g
1000 ml
..
..
..
..
..
..
..
0,5 g
2,72 g
1,5 g
1,23 g
2,8 g
20
g
1000
ml
-110-
Annexes
* Glose 2 % :
Agar agar
Eau Distille q.s.p.
..
..
20 g
1000 ml
..
..
..
..
..
..
..
..
1
1
0,5
0,5
0,2
0,2
20
1000
g
g
g
g
g
g
g
ml
- Placer une deux pices de papier filtre strile par autoclavage (1 cm2), sur la surface du
milieu aprs quil soit glifi (pour la sporulation et comme autre source de carbone).
..
..
..
..
..
..
..
..
..
1
1
250
250
125
2
50
25
1000
g
g
mg
mg
mg
g
mg
g
ml
-111-
Annexes
Glycrol
Bleu de bromophnol 1%
Eau Distille q.s.p.
..
..
..
5 ml
1 ml
10 ml
Le tampon est rparti raison de 0,5 ml par tube hmolyse avant dtre conserv au
conglateur jusquau moment de lemploi.
* Tampon de charge (SDS-PAGE) :
(Tris-HCl: 0,125 M; SDS: 4%; Glycrol: 20%; 2- Mercaptoethanol 0,04 %; pH= 6 ,8)
Tris-HCl (0,5 M)
SDS 10 %
Glycrol
2- Mercaptoethanol
Bleu de Bromophnol 1 %
Eau Distille q.s.p.
..
..
..
..
..
..
1,25
2
5
0,5
1
10
ml
ml
ml
ml
ml
ml
Le tampon est rparti raison de 0,5 ml par tube hmolyse avant dtre conserv au
conglateur jusquau moment de lemploi.
* Tampon de migration :
..
..
..
..
3,03
14,4
1
1000
g
g
g
ml
-112-
Annexes
Tris
Eau Distille q.s.p.
..
..
36,3 g
100 ml
Le pH est ajust avec environ 24 ml dHCl 1N, puis complt 200 ml avec de leau
distille. Aprs filtration la solution est conserve 4C.
* Tampon de concentration (Tris-HCl : 0,5 M ; pH = 6,8) :
Tris
Eau Distille q.s.p.
..
..
3 g
20 ml
Le pH est ajust avec environ 24 ml dHCl 1N, puis complt 200 ml avec de leau
distille. Aprs filtration la solution est conserve 4C.
* Tampon Na-phosphate 0,1 M pH = 7,1 (1) :
..
..
3,4 g
475
ml
..
..
1,1 g
100
ml
-113-
Annexes
Acide actique
Eau Distille q.s.p.
..
..
200 ml
1000 ml
* Solution de coloration :
..
..
..
..
1,5
250
40
1000
..
..
..
250 ml
20 ml
1000 ml
..
..
70 ml
1000 ml
g
ml
ml
ml
* Solution de dcoloration :
Ethanol
Acide actique
Eau Distille q.s.p.
* Solution de conservation :
Acide actique
Eau Distille q.s.p.
-114-