En la toxicologa gentica se acepta que una sola prueba no puede detectar con exactitud o

predecir confiablemente los efectos genotxicos de una sustancia en el ser humano; por esto es
importante
tener
alternativas
para
evaluar
genotxicos.
La correlacin entre mutagenicidad y carcinogenicidad es cada da ms aceptada. Se ha
demostrado que 157 de los 175 carcingenos conocidos tambin son mutgenos, de ah la
conveniencia de saber con precisin el posible dao que un compuesto puede tener sobre nuestro
organismo
o
sobre
otros
seres
vivos.
El monitoreo de los contaminantes por anlisis directo requiere conocer el agente qumico a
verificar; adems, su evaluacin est limitada por la sensibilidad y especificidad del mtodo
utilizado. Ante esto, los bioensayos ofrecen considerables ventajas, ya que un organismo puede
metabolizar un compuesto cualquiera en otros que pueden ser an ms txicos que el original.
Diversos qumicos medioambientales e industriales provocan daos en animales que se emplean
en la experimentacin, y es obvio ese potencial para causar efectos similares en el hombre. Las
pruebas para la deteccin de mutgenos, por lo tanto, son importantes en cuanto que estos
compuestos tienen la capacidad de alterar el material gentico en los organismos; adems, pueden
tener efectos teratognicos, causar mutaciones en las clulas germinales y en las clulas
somticas, inducir enfermedades cardacas, influir en los procesos de envejecimiento y provocar
mutaciones que pueden generar cncer.
Se dispone actualmente de pruebas con las que se puede determinar un dao gentico o detectar
compuestos genotxicos. Estas pruebas pueden ser bioqumicas, in vivo o in vitro, con micro o
macroorganismos; pueden asimismo determinar daos microscpicos o moleculares como
cuando se estudian algunos polimorfismos gnicos (que, segn se sabe, se asocian con el
desarrollo de algunos tipos de cncer), o bien la formacin de aductos, es decir, complejos que se
forman cuando un compuesto qumico se une a una molcula biolgica, como el ADN o ciertas
protenas.
Conocer estas alternativas es importante, pues cientos de compuestos qumicos que no estn
suficientemente estudiados aparecen en el mercado cada semana, sobre todo en lo que respecta
al dao que pueden producir en el material gentico de los seres vivos.
En este trabajo abordamos slo una de estas pruebas: la prueba de microncleos.
En qu consiste dicha prueba? La prueba de microncleos fue desarrollada por W. Schmid en
1975, quien originalmente la propuso para practicarse en la medula sea del ratn; posteriormente,
la tcnica se ha instrumentado en una gran variedad de tejidos y especies, y en la actualidad se le
utiliza
ampliamente.
Los microncleos son fragmentos de cromosomas o cromosomas completos que
espontneamente o por causa de agentes que rompen cromosomas, como las radiaciones
(agentes que se denominan clastgenos) o que daan el huso mittico, como la vincristina
(aneuploidgenos), quedan fuera del ncleo durante la mitosis. Los microncleos son conocidos en
el campo de la hematologa como cuerpos de Howell-Jolly y su forma es generalmente redonda o
almendrada, con un dimetro que vara desde 0.4 a 1.6 micras. Su formacin se basa en que en la
anafase cualquier fragmento cromosmico que no posea centrmero no podr integrarse a un
ncleo por carecer del elemento indispensable para orientarse en el huso acromtico. Despus de
la telofase, los cromosomas normales, as como los fragmentos que posean centrmeros, dan
origen a los ncleos de las clulas hijas; sin embargo, los elementos rezagados que pueden ser
fragmentos o cromosomas completos quedan incluidos en el citoplasma de las clulas hijas, y una
proporcin de ellos se transforma en uno o varios ncleos secundarios. Tales ncleos son mucho
ms pequeos que el ncleo principal, y de ah su nombre de microncleos. Entonces, si el
compuesto estudiado es un clastgeno, se formarn microncleos pequeos, pero si es un
aneuploidgeno, lo que observaremos ser la formacin de microncleos grandes.
Para la realizacin de esta prueba es indispensable utilizar un tejido en constante divisin, pero
debe considerarse que en las clulas con poco citoplasma los microncleos no son fcilmente

distinguibles
de
los
lbulos
o
proyecciones
del
ncleo
normal.
La prueba se realiza en diferentes tipos celulares: eritrocitos policromticos de la mdula sea,
cultivos de linfocitos de sangre perifrica, eritrocitos jvenes y maduros de la sangre perifrica,
queratinocitos, clulas de la mucosa bucal, hepatocitos de rata, clulas germinales y clulas de
descamacin
de
la
vagina
de
la
rata,
entre
otros.
Dentro de las ventajas de la tcnica de microncleos se incluyen la facilidad y rapidez, la
posibilidad de probar un slo qumico sin otros compuestos, la abundancia de clulas analizables
en diferentes periodos del ciclo celular y el que los microncleos formados durante la divisin
celular persisten al menos durante la siguiente interfase; adems, la prueba no deja lugar a dudas
sobre el dao producido, pues lo que se observa como microncleos es claramente una prdida de
ADN. Por otro lado, la prueba no detecta agentes que no producen prdidas de material gentico o
rezagos anafsicos, y tampoco es til en poblaciones celulares que no se dividen.
El procedimiento para estudiar los microncleos en la mdula sea puede realizarse en todos los
vertebrados; no obstante, suele ser demasiado traumtica, e incluso requiere en ocasiones el
sacrificio del organismo bajo estudio ya que es necesario pasar suero fetal o soluciones salinas por
los huesos largos obtenidos de rata, ratn, pollo o la especie elegida para tener el material con el
que
se
realizarn
los
frotis.
Otra manera es emplear cultivos celulares, como es el caso de los linfocitos, para lo que se
requiere trabajar en condiciones estriles y, por lo mismo, es necesario contar con ms equipos y
reactivos. Una manera sencilla para realizar la tcnica es mediante el estudio de microncleos en
eritrocitos de sangre perifrica, pues una sola gota de sangre es suficiente para realizar los frotis;
de esta manera, se pueden contar los microncleos hallados en los eritrocitos jvenes, en los
reticulocitos (para el caso de pruebas de 24 a 48 horas) y en normocromticos en periodos de
mayor tiempo o cuando la especie estudiada no muestra eritrocitos policromticos de manera
normal.
Los animales en general exhiben una gran variacin en las frecuencias de microncleos
espontneos en la sangre perifrica, que van de sumamente bajas (cercanas a cero) a un buen
nmero; eso depende de la capacidad del sistema reticuloendotelial, principalmente el bazo, que
es el encargado de retirar a los microncleos de la circulacin; por tanto, de la eficiencia de este
rgano depende la cantidad de microncleos que se puedan observar en la circulacin.
De gran importancia se vuelve entonces reconocer especies que presenten microncleos
espontneamente, ya que, tal como se mencion antes, en esas especies el control que ejerce el
bazo es menor, y, por consiguiente, cuando estos organismos son expuestos a genotxicos
micronucleognicos, los microncleos se incrementan de manera significativa en sus eritrocitos; es
por ello que los organismos con tales caractersticas pueden ser bioindicadores naturales.
Por otro lado, en el ser humano el nmero de microncleos espontneos en los eritrocitos de la
sangre perifrica es cercano a cero en condiciones normales; sin embargo, cuando por alguna
indicacin del hematlogo a un individuo se le extirpa quirrgicamente el bazo (esplenectoma), el
nmero de esas estructuras aumenta significativamente (pues el control en nosotros lo ejerce casi
totalmente el citado rgano), y el aumento se hace an mayor si se expone a genotxicos como las
drogas anticancerosas. Por tanto, la esplenectoma puede ser utilizada como una herramienta en
especies en las que el bazo es el responsable de eliminar a los microncleos de la circulacin y se
pretende
probar
genotxicos
con
ellos.
El estudio de los microncleos de la mucosa bucal tambin es relativamente simple; tiene la
ventaja de que se realiza directamente sin la elaboracin de cultivos, y estas clulas reflejan el
efecto genotxico ocurrido en la capa basal en las ltimas tres semanas. Para realizarla, se
requiere solamente que la persona se enjuague con agua la cavidad bucal; luego, se realiza un
raspado de la parte interna de las mejillas y el material es esparcido sobre un portaobjetos limpio,
donde se deja secar para despus fijarlo y teirlo. Las observaciones se hacen en un microscopio
con
objetivo
de
inmersin.
Debido a la ventaja que tiene el emplear bioensayos para detectar genotxicos, diversos grupos de
investigadores se han dado a la tarea de buscar organismos que puedan ser utilizados como

indicadores de dao en el ADN. Para el caso particular de los microncleos, esos organismos
debern responder formando microncleos en nmero suficiente como para que, al exponerlos al
probable agente genotxico, se observe un aumento significativo. Ello permite detectar genotxicos
micronucleognicos mediante el estudio comparativo de los eritrocitos micronucleados de la sangre
perifrica
de
dichas
especies.
De esta manera, adems de las especies de laboratorio rata, ratn, hmster y algunos primates,
se han propuesto otros vertebrados no mamferos, como ciertos anfibios, aves y peces, e incluso
plantas en tejidos como las clulas formadoras del polen y los meristemos apicales de la raz o el
tallo.
Con el afn de hacer ms sensible la prueba de microncelos, algunos investigadores han utilizado
sustancias mitognicas como la eritropoyetina, que es un factor de crecimiento, multiplicacin y
diferenciacin de los eritroblastos, la cual se utiliza para inducir eritropoyesis, o tambin, en forma
similar, el dicloruro de cobalto, que se usa para inducir a la eritropoyetina.
Finalmente, con esta prueba, descrita originalmente para determinar el dao, nos encontramos
actualmente realizando estudios en los que pretendemos demostrar la utilidad de tal herramienta
en la taxonoma, con base en que el valor espontneo de los eritrocitos micronucleados es
caracterstico de cada especie.

http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S1025028X2011000100005&script=sci_arttext
articulo microncleos