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Para alm disso, baseando-se na margem de temperatura de crescimento e na sua temperatura tima, os
microrganismos so divididos em grupos.
2.
taxa de rendimento submxima porque o nutriente no pode ser transportado para a clula suficientemente
rpido para satisfazer as necessidades metablicas. A nveis de nutriente moderados ou altos,
Efeito no rendimento de biomassa
O Y (rendimento em biomassa em relao ao nutriente limitante (Yxs)) definido pela quantidade de
biomassa produzida (X) por quantidade de nutriente limitante consumido (S) e pode ser estimado a partir do
declive da reta, sendo o intervalo de concentraes que asseguram um valor mximo de .
= =
=
Para microrganismos aerbios facultativos, como a S. cerevisiae, o YXS em relao glucose pode variar
drasticamente com a disponibilidade em O2 (efeito de Pasteur) e com a concentrao de glucose (Efeito de
Crabtree).
Os organismos crabtree positivos, so microrganismos cujo metabolismo energtico inibido por grandes
concentraes de Carbono, tal acontece porque nessas circunstncias o metabolismo energtico vai tender a
ser fermentativo. Para se promover o metabolismo respiratrio, deve-se baixar as concentraes de carbono
e aumentar a aerao, aumentando a disponibilidade de oxignio.
O YXS em culturas com concentraes limitantes de glucose, em condies em que as clulas
essencialmente respirem, pode ser to elevado como 0,5 gbiomassa/gglucose. Na presena de concentraes
elevadas de glucose, em que as clulas essencialmente fermentam, o rendimento em biomassa menor,
aproximadamente 0,1-0,2 gbiomassa/gglucose.
Equao de Monod
=
max[]
+
+[]
max[S]
max
1
[]
1
max
Crescimento diuxico
Uma das consequncias da represso catablica que esta pode levar a duas fases de crescimento
exponencial, uma situao chamada de crescimento diuxico.
Se estiverem presentes no meio duas fontes teis de energia, as clulas crescem utilizando primeiro a
melhor fonte de energia. O crescimento pra quando esta fonte esgotada, seguindo-se um perodo de
latncia, e o crescimento retoma com a outra fonte de energia.
O que acontece na fase de latncia uma adaptao
das clulas para conseguirem utilizar o segundo
acar, que no foi consumido antes porque era
necessria a produo de enzimas para o seu
metabolismo.
Nem sempre necessrio uma cultura com duas fontes
de energia para observar este tipo de crescimento. Ao
metabolizar o substrato dado, por exemplo a glucose,
os microrganismos originam produtos desse
metabolismo, como o etanol, que podem ser usados
como fonte de carbono e energia quando o primeiro
nutriente esgota.
No caso da E. coli, quando se encontra numa
cultura mista de glucose e lactose, cresce mais
rapidamente em glucose do que lactose. Embora os
dois acares sejam excelentes fontes de energia, a
glucose superior e o crescimento mais rpido. Neste caso, inicialmente h represso da expresso do
opero da lactose e este s expresso quando necessrio.
No caso de S. cerevisiae, mesmo na presena de oxignio, e com concentraes no muito baixas de glucose,
tem preferncia pela fermentao, produzindo etanol. O etanol posteriormente respirado, aps uma fase
estacionria, em que as enzimas respiratrias so sintetizadas. Este efeito chamado de Crabtree e
explicado pelo efeito de represso da sntese das enzimas do metabolismo respiratrio por concentraes
mais elevadas do acar. Por outro lado, o coeficiente de rendimento de biomassa, Y, superior cerca de trs
vezes quando o metabolismo respiratrio.
max
( + ) (1 +
A partir de determinadas concentraes, podem at haver nutrientes que no so txicos, e que introduzem
toxicidade no metabolismo microbiano. Da haver, a diminuio na taxa especfica de crescimento.
Os efeitos negativos da concentrao elevada de nutriente limitante dependem da sua
natureza qumica (aucares, solventes).
produo de biomassa(
de nutriente limitante
Dividindo ambos os membros pela biomassa num dado instante (X), obtm-se a seguinte equao:
1
1
Que pode ser escrita sob a forma de: =Yq
Em que q a taxa especfica de transferncia de nutriente limitante (quantidade de nutriente transferido
para dentro da clula num dado momento), expressa em massa de glucose transferida por unidade de
biomassa por unidade de tempo.
Respirao: como a respirao apresenta uma maior eficincia energtica (menor quantidade de
nutriente para produzir igual biomassa), ter um menor q.
Quando o nutriente limitante utilizado como nica fonte de energia, para concentraes
suficientemente baixas no se observa um aumento proporcional na quantidade de biomassa
produzida com o aumento na quantidade de nutriente limitante consumido. Isto porque, as clulas precisam
primeiramente da energia para a manuteno bioqumica
do organismo, pelo que quando
o nutriente a nica fonte de alimentao
(e escassa), a nossa taxa especfica de crescimento no
vai traduzir um aumento de biomassa devido ao facto
desse nutriente no estar a ser utilizado para aumentar o
nmero de organismos, mas sim para processos de
manuteno celular.
Por outro lado, tambm pode acontecer que, aumentando
ainda mais a concentrao do nutriente, no ocorrer
aumento nem da taxa especifica de crescimento (Kc) nem
o numero de clulas na fase estacionria, isto porque a dada altura, um segundo nutriente passou a ser
limitante que no aquele que era o nosso.
Para distinguir a energia utilizada no crescimento da que utilizada na manuteno celular, considera-se que
q a soma de duas parcelas: da taxa especfica de transferncia de nutriente limitante para o crescimento
(qc) (nutriente utilizado para crescimento) e da taxa especfica de transferncia de nutrient
uteno (qm) (nutriente utilizado para manuteno).
= ( + ) =
+
Para concentraes do nutriente limitante elevadas, a taxa do nutriente transferida para processos de
manuteno torna-se insignificante. Como tal, podemos considerar que
todo o nutriente est a ser utilizado
para produzir biomassa. Deste modo, quando qm muito baixo, vamos obter um Ymx, porque todo o
nutriente est a ser utilizado para o crescimento. Assim, a partir desta equao possvel definir o conceito
de coeficiente de rendimento mximo (Ymx) como o limite de Y quando qm tende para zero:
=
+
+
= lim =
0
que descreve a dependncia de Y em funo de ,em que a designada por taxa especifica de manuteno,
com as mesmas unidades de , ou seja, o inverso do tempo (h-1).
Se no existisse uma taxa especfica de manuteno, o microrganismo no ia crescer a
uma taxa especfica de crescimento , mas sim a uma taxa de crescimento + , isto porque
no haveria nutriente a ser gasto para a manuteno, era tudo para crescimento
1
1
1
1
1
1
=
+
= +
Os parmetros Ymx, a e qm, designados por parmetros cinticos energticos do crescimento, so
caractersticos de um dado microrganismo em condies definidas de crescimento. Para a determinao
destes parmetros recorre-se ao ajuste de dados experimentais de Y em funo de , de acordo com a
Equao de Pirt.
=
O tempo necessrio para alimentar a cultura de modo a substituir todo o volume do
vaso (tempo de residncia) dado por:
=
Quando so utilizadas taxas de diluio muito altas, tem-se valores altos de S, o que ir permitir ter taxas de
crescimento altas. Se se quiser mais biomassa para uma mesma taxa de diluio, aumenta-se a concentrao
de nutriente limitante na alimentao.
Balano de massas para o nutriente limitante
Influxo = Efluxo + Acumulao Formao
Como em estado estacionrio a acumulao nula, temos:
FSr=FS - rsV
onde FS a concentrao de nutriente sada, rS a taxa volumtrica de consumo de
nutriente limitante por unidade de volume por unidade de tempo (g.l-1.h-1) e V o volume do vaso
(constante).
rS pode ser descrito por:
Esta equao mostra a dependncia da concentrao de clulas no estado estacionrio, em
relao taxa de diluio e concentrao de nutriente limitante. Uma concentrao elevada de nutriente
limitante na alimentao corresponde a uma quantidade elevada de biomassa no estado estacionrio,
enquanto uma taxa de diluio elevada corresponde a uma biomassa baixa.
=
=
+
2.2303
onde EA a energia de ativao da reao, R
corresponde constante dos gases perfeitos e
T a temperatura absoluta expressa em graus
kelvin (K).
A morte celular microbiana d-se pela
exposio de uma cultura microbiana a um
agente letal como o calor. Radiao UV,
compostos txicos, entre outros, e corresponde
ao decrscimo da densidade populacional avaliada pelo nmero de clulas viveis:
= =
ou Kd (taxa especfica de morte) uma constante para um dado microrganismo e para condies
definidas e induo de morte (h-1)
Integrando a equao e considerando constante:
= 0 (0 )
que corresponde cintica de morte exponencial e nos permite saber o nmero de clulas
viveis ao fim de um intervalo de tempo.
0
0
Curvas de sobrevivncia
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Perfil trmico
O Perfil trmico a designao atribuda representao conjunta do grfico de Arrhenius das taxas
especficas de crescimento e do grfico de Arrhenius das taxas especficas de morte de uma dada
populao microbiana em condies experimentais definidas.
Permite fazer uma previso da dependncia do crescimento e da morte em sistemas de interesse industrial
ou ecolgico, para alm de uma avaliao da relao temperatura/efeito de drogas/conservantes em
microrganismos patognicos ou de deteriorao de alimentos devido alterao profunda do perfil de
temperatura pela presena de metabolitos extracelulares.
Existem dois perfis, o perfil de temperatura do tipo associativo (leveduras mesfilas
10-45C) e o perfil de temperatura do tipo dissociativo (leveduras psicrfilas 0-15C).
Perfil trmico do tipo associativo
No perfil do tipo associativo, tal como o nome indica, existe uma associao do processo de crescimento e
do processo de morte. Este tipo de perfil pode ser visvel, por exemplo, em S. cerevisiae.
Neste perfil observa-se cinco temperaturas cardiais:
1. Temperatura mnima de crescimento (Tmin)
2. Temperatura tima (Top)
3. Temperatura mnima de morte (Tdmin )
4. Temperatura mxima final (Tmx f)
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Analisando o grfico, v-se que existem 4 intervalos de temperaturas supra-timas e pode-se obter as seguintes
afirmaes:
Entre a Tmin e a Top (zona 1), um aumento na temperatura traduz-se num aumento da taxa especfica de crescimento;
Entre Top e a Tdmin (zona 2), h uma temperatura tima para o organismo e, por isso, uma taxa de crescimento
mxima.
Seguidamente, a reta de taxa de morte
interseta a curva da taxa de crescimento
em Tdmin. Isto significa, portanto, que Tdmin corresponde temperatura mnima qual se inicia a morte do organismo.
Assim, entre Tdmin e Tmx f (zona 3), temos dois perodos de crescimento. No 1 perodo, a populao cresce como
anteriormente. No 2 perodo, parte da populao continua a crescer e a outra parte comea a morrer e, por essa razo,
observa-se uma taxa de crescimento mais baixa. No entanto, a taxa de crescimento superior taxa de morte e,
consequentemente o nmero de clulas continua a aumentar. Pode-se concluir que a Tmx f corresponde temperatura
mxima na qual comea-se a ter morte no perodo final.
Posteriormente, entre Tmx f e a Tmx i (zona 4), temos tambm dois perodos de crescimento microbiano, o 1
com a taxa de crescimento prximo de zero e no 2 perodo pode-se ver que com o aumento da temperatura, a taxa de
morte mais elevada que a taxa de crescimento e, como tal, a populao vai apresentar um crescimento negativo. A
Tmx i corresponde temperatura mxima na qual comeamos a ter morte no perodo inicial.
Com um aumento drstico da temperatura, a partir da Tmx i (zona 5), no 1 perodo deixamos de observar um
crescimento e atinge-se logo o perodo de morte trmica.
Entre Tmin e Top existe um aumento da taxa de crescimento com o aumento da temperatura. Aps atingir o Top, com o
aumento da temperatura, existe diminuio do crescimento.
A temperaturas mais elevadas, o crescimento negativo, uma vez que a taxa de crescimento nula e apenas existe
um aumento da taxa de morte.
Quando o Arrhenius de morte interseta o eixo XX d inicio morte da cultura (temperatura mnima de morte).
Existem alguns compostos qumicos/medicamentos, que podem ou no alterar o perfil trmico dos microrganismos de
modo a combate-los, por exemplo, no caso das infees.
No caso do miconazole, o perfil de candida mantem-se associativo e as temperaturas
cordiais no so, significativamente aleradas. No entanto existe uma reduo do Kc.
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