Cromatografa de Gases

En la cromatografa de gases un soluto gaseoso (o el vapor de un lquido voltil)

es transportado por una fase mvil gaseosa. L a fase estacionaria puede ser un lquido
no voltil (GL C) o un soporte slido de grano fino (GSC) adsorbente. El esquema de un
cromatgrafo de gases se muestra en la figura 1 0 .

Figura 1 0 . Esquema de un cromatgrafo de gases.

En el cromatgrafo de gases una muestra de lquido voltil se inyecta a travs de

un septum de goma a un horno de inyeccin caliente, donde la muestra se vaporiza. El

volumen tpico de muestra es de 0 .1 -1 0 L . Si la muestra es gaseosa, 0 .5 a 1 0 ml de

gas son suficientes.

L a muestra es arrastrada hacia la columna por un gas portador inerte (He, N 2, H2)
que acta como fase mvil.

Despus de elur por la columna que contiene la fase

estacionaria, los solutos separados pasan por un detector, cuya respuesta se visualiza en
un graficador o en una computadora.
No es necesario que la temperatura de la columna sea mayor que el punto de
ebullicin de todos los solutos, pero debe ser lo suficientemente alta para garantizar una
presin vapor suficiente para evitar que la elucin tome demasiado tiempo.

continuacin explicaremos brevemente las caractersticas de cada una de las partes que
componen al cromatgrafo de gases.

L a columna

Es la parte del cromatgrafo donde se realiza la separacin de los componentes

de la mezcla.

Normalmente se encuentran dentro de un horno termostatizado a

temperatura constante, y tienen forma de espiral para aprovechar al mximo el espacio.

Se dividen en dos tipos: columnas empacadas y columnas tubulares abiertas.

Columnas empacadas Son de acero inoxidable o vidrio, su dimetro es de 3 -6 mm

y miden de 1 a 5 m de largo.

Se empacan con un soporte slido de grano fino

recubierto con un solvente no voltil como fase estacionaria (GL C) o bien el slido
mismo es la fase estacionaria (GSC).

Entre sus ventajas est el poder manejar

cantidades relativamente grandes de muestra y el ser baratas. Sin embargo, la cada

de presin a travs de ellas es grande, ya que el gas tiene que pasar a travs de las
partculas empacadas del slido. Debido a su longitud, el poder de separacin es
menor que en otro tipo de columnas.

Columnas tubulares abiertas Tambin conocidas como columnas capilares, son

ms estrechas y largas (1 0 -1 0 0 m es una longitud tpica) que las columnas
empacadas. Se fabrican generalmente de slice fundida. Tienen mayor resolucin y
menor tiempo de anlisis que las empacadas, pero son ms caras y tienen menor

capacidad de muestra. L a cada de presin tambin es menor.

L as columnas

capilares pueden ser de tres tipos: de pared recubierta, de soporte recubierto y de

capa porosa (para GSC), tal como se muestra en la figura 1 1 .

Figura 1 1 . Tipos de columnas empleadas en cromatografa de gases.

El soporte slido

Debe ser un material relativamente inerte, con partculas pequeas de forma

constante y gran rea superficial.

Se emplean mucho las tierras diatomceas

(diatomita), slice, almina y polmeros como el tefln.

L a fase estacionaria

Es el lquido no voltil que recubre al soporte slido.

Existen muchos tipos

disponibles en el comercio (hidrocarburos, siliconas, alcoholes de cadena larga, etc.) y

deben escogerse adecuadamente dependiendo del tipo de muestra que se desea
separar. Se sugiere consultar la bibliografa especializada.

El detector

El detector indica la presencia de cada constituyente de la muestra y mide en qu

cantidad est presente. L os tres tipos de detectores ms comunes en cromatografa de

gases son: el detector de conductividad trmica, el detector de ionizacin de flama y el

detector de captura de electrones.

El detector de conductividad trmica ( T CD) mide la diferencia que existe entre

la conductividad trmica del gas que entra a la columna (eluyente) y la de la mezcla
gaseosa que sale (eluato). L a diferencia de conductividades trmicas hace que la
resistencia de un alambre de platino cambie, y esta seal se mide y se grafica. Este
detector es til para compuestos orgnicos e inorgnicos, pero es sensible a cambios
de temperatura y flujo del gas.

El detector de ionizacin de flama ( FID) funciona de un modo distinto. El eluato

de la columna se mezcla con hidrgeno y aire, y despus se quema en una flama
dentro del detector. L os componentes orgnicos producen iones CHO + al quemarse:

CH + O CHO+ + e L os iones son recogidos por un electrodo de platino, y

esto origina una corriente elctrica. Este detector es til para compuestos orgnicos
(menos sensible si contienen grupos carbonilo) y no es sensible a gases como CO 2,
O2, NH3 y agua. Es ms sensible y ms estable que el detector de conductividad
trmica, pero es destructivo con la muestra.

INV ESTIGAR
Detector de captura de electrones, detector fotomtrico de flama, detector de lcalis de
flama.

Cromatografa de Lquidos
En la cromatografa de lquidos, los componentes de una mezcla se separan
debido a que existen equilibrios lquido-lquido (equilibrios de reparto) para cada soluto.
L a fase mvil es un lquido, mientras que la fase estacionaria es un lquido fijado sobre
un soporte slido. Se acostumbra distinguir dos tipos de cromatografa lquido-lquido:

Cromatografa de fase normal Fase mvil orgnica (no polar), fase estacionaria
acuosa (polar)

Cromatografa de fase inversa

Fase mvil acuosa (polar), fase estacionaria

orgnica. Es la ms empleada.

Cromatografa de lquidos clsica

En esta tcnica el analito y el eluyente se alimentan a la parte superior de una

columna que funciona por gravedad. L a columna es simplemente un tubo de vidrio de 1
0 -3 0 cm de longitud y 1 cm o ms de dimetro, empacado con la fase estacionaria. Un
tapn de lana de vidrio evita que el empaque caiga, mientras que una llave regula el
flujo de eluyente. Generalmente los solutos se recogen en forma manual al salir de la
columna, o por medio de un colector automtico de fracciones. L a cantidad de soluto
en cada fraccin se determina por titulacin, espectrofotometra o algn mtodo de
anlisis. L a tcnica es apropiada para separar grandes cantidades de muestra (mg o g)
y es muy importante porque permite separar compuestos que no son voltiles (no podra
usarse GC) o que se destruyen fcilmente con el calor.

Cromatografa de lquidos de alta resolucin ( HPL C)

Es la tcnica cromatografa ms empleada actualmente en la que la fase mvil es

un lquido. L as siglas en ingls provienen de high performance liquid chromatography.
En HPL C, el eluyente se hace pasar a gran velocidad a travs de una columna
empacada utilizando una bomba. L a figura 1 2 es un diagrama esquemtico de las
partes que componen a un cromatgrafo de lquidos de alta resolucin.

Fig ura 1 2 . Esquema de un aparato de HPL C.

La bomba

L a calidad de las bombas empleadas en HPL C es muy importante para

garantizar la estabilidad en el flujo de eluyente. Generalmente se utilizan bombas de
pistn, que producen un flujo constante y presiones muy elevadas, de hasta 4 0 0 atm.
Es comn trabajar con dos bombas reciprocantes, lo que mejora la estabilidad del flujo.

El inyector

L a muestra debe inyectarse con una jeringa dentro de una vlvula que resista las
altas presiones sin derramar lquido. Antes de entrar a la columna, la muestra pasa por
un filtro muy fino para remover el polvo y las partculas que podran contaminar a la
columna o daar la bomba.
L as vlvulas de inyeccin generalmente se disean de modo que entreguen un
volumen constante de muestra (2 0 -5 0 L ) independientemente de la cantidad
inyectada. L a vlvula tiene un bucle o lazo de volumen conocido, que al llenarse de
muestra proporciona la cantidad deseada al cromatgrafo.

L a columna

Debe estar construida en acero inoxidable para resistir la presin. L a columna es

un tubo de acero de 1 0 a 3 0 cm de largo y 2 a 5 mm de dimetro interior, empacada
con la fase estacionaria. Algunos cromatgrafos tienen la columna en posicin vertical,
otros horizontal, y generalmente se encuentra en el exterior del aparato, a temperatura
ambiente.

L a fase estacionaria y el soporte slido

En la cromatografa lquido-lquido, la fase estacionaria es un lquido que se

encuentra inmovilizado sobre un soporte slido. Un soporte muy utilizado es la slice en

forma de partculas microporosas irregulares o esfricas. L as partculas deben ser muy

finas (5 -1 0 m de dametro) ya que la resolucin del equipo mejora al disminuir el
tamao de partcula. Tambin pueden usarse partculas de un material inerte (vidrio o
plstico) recubiertas con material adsorbente.

Estas ltimas son llamadas partculas

peliculares, ver figura 1 3 .

Figura 1 3 . Tipos de partculas empleadas en HPL C como soporte slido.

Existen muchas combinaciones posibles entre la fase mvil y la fase estacionaria.

Para ayudarnos a elegir qu tipo de lquidos debemos utilizar, se sugiere consultar la
bibliografa especializada.

El detector

L os detectores para HPL C normalmente se basan en alguna de las propiedades

fsicas del lquido eluyente (densidad, ndice de refraccin, etc.) o en alguna de las
propiedades del analito (absorcin de luz UV , detector electroqumico, etc.).
El detector ms comnmente empleado es el detector de UV . L a solucin que
sale de la columna pasa por una celda en forma de Z, donde un rayo de luz ultravioleta
atraviesa 1 cm de solucin (figura 1 4 ).

Muchos compuestos orgnicos y algunos

inorgnicos, as como todos los aromticos, absorben la radiacin UV . L a absorbancia

del soluto se convierte en una seal elctrica que despus se grafica.
detector es muy sensible.

Este tipo de

Fig ura 1 4 . Un detector UV tpico para HPL C.

Otros tipos de detectores empleados en cromatografa lquido-lquido son:

Detector de ndice de refraccin:

poco sensible, pero puede emplearse para

compuestos que no absorben luz UV .

Detector electroqumico: muy sensible, solo puede emplearse para solutos que se
pueden oxidar o reducir, por lo que es muy selectivo. El solvente debe ser polar y
contener electrolitos disueltos.