UNIVERSIDAD VERACRUZANA

MATERIA: Lab. De Anlisis Instrumental

NOMBRE DE LA MAESTRA: Guadalupe Prez
Magaa
ALUMNA: Alexis Yathzil Guerra Hernndez

Nm. Practica: 3

NOMBRE: Obtencin del espectro de absorcin

de un colorante en la regin visible y
elaboracin de la curva de calibracin.

FECHA: 06-04-2015

OBJETIVO

Seleccionar la MAX a partir del espectro de absorcin y que utilizara para

elaborar la curva estndar.

Elaborar la curva estndar y determinar la concentracin de una muestra.

FUNDAMENTO Y GENERALIDADES
El fundamento de la espectroscopa se debe a la capacidad de las molculas para
absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UV-VIS. Las
longitudes de onda de las radiaciones que una molcula puede absorber y la
eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura atmica y de las
condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza inica, constante dielctrica), por
lo que dicha tcnica constituye un valioso instrumento para la determinacin y
caracterizacin de biomolculas.
Los compuestos con dobles enlaces aislados, triples enlaces, enlaces peptdicos,
sistemas aromticos, grupos carbonilos y otros heterotomos tienen su mxima
absorbancia en la regin UV, por lo que sta es muy importante para la
determinacin cualitativa y cuantitativa de compuestos orgnicos. Sin embargo, en
la regin visible apreciamos el color visible de una solucin y que corresponde a
las longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe. El color que absorbe
es el complementario del color que transmite.
Muchas molculas absorben luz visible o ultravioleta y se lleva a cabo

longitudes de onda diferentes. Un espectro de absorcin mostrar un nmero de

bandas de absorcin correspondientes a grupos estructurales que estn dentro de
la molcula. No obstante, hay una gran cantidad de factores que originan
variaciones en los valores de max y M, entre los que se incluye el pH, la polaridad
del solvente o molculas vecinas y la orientacin de los cromforos vecinos; y
cada uno afecta de forma particular.
Por ejemplo, variaciones originadas por cambios de pH son debidas al efecto de
ste sobre la ionizacin del compuesto. A continuacin se muestran como ejemplo

los espectros de absorcin de HNTS (un reactivo empleado para la determinacin

de especies oxidantes) y comprobndose que por espectrotometra se puede
seguir el efecto que ejercen el pH y los oxidantes.

DIAGRAMA DE TRABAJO
Preparar una sol.
madre de 100 ppm
en 100 mL del
colorante rojo #40.

10
ppm
A partir de la
sol madre
preparar:

8 ppm
6 ppm
4 ppm
2 ppm

Leer la sol madre

en un rango de
(380- 740 nm)

Determinar su
max.

Antes hacer
los clculos
pertinentes.

Posteriormente leer
los espectros de
absorcin con la max
que arrojo la sol
madre.

Leer la
disolucin
problema.

Construir la curva y
determinar la conc.
De la sol problema
con la ec. De la
recta y
directamente en la
curva.

CALCULOS
Se elabora la solucin madre con el colorante rojo #40 de 100 ppm en 100 mL.
Datos
Formula
Mg= ?
mg
ppm=
V= 100 ml
L
Ppm= 100
*En la bscula con cuatro cifras despus del punto de pesa as: 0.0100

Sustitucin
mg=(100 ppm)( 0.1 L)
Mg= 10 en 100 mL

Se prepararan las diluciones correspondientes de 10, 8, 6, 4 y 2 ppm.

Datos
C1= 100 ppm
V1= ?
C2= 10 ppm
V2= 100 mL

Formula
C1 V 1=C 2 V 2

Datos
C1= 100 ppm
V1= ?
C2= 8 ppm
V2= 100 mL

Formula
C1 V 1=C 2 V 2

Datos
C1= 100 ppm
V1= ?
C2= 6 ppm
V2= 100 mL

Formula
C1 V 1=C 2 V 2

Datos
C1= 100 ppm
V1= ?
C2= 4 ppm

Formula
C1 V 1=C 2 V 2

Sustitucin
(10)(100 ml)
V 1=
100
V1= 10 mL de la sol
madre en 100 mL de
agua destilada.

Sustitucin
(8)(100 ml)
V 1=
100
V1= 8 mL de la sol madre
en 100 mL de agua
destilada.

Sustitucin
(6)(100 ml)
V 1=
100
V1= 6 mL de la sol madre
en 100 mL de agua
destilada.

Sustitucin
(4)(100 ml)
V 1=
100

V2= 100 mL

V1= 4 mL de la sol madre

en 100 mL de agua
destilada.

Datos
C1= 100 ppm
V1= ?
C2= 2 ppm
V2= 100 mL

Formula
C1 V 1=C 2 V 2

Sustitucin
(2)(100 ml)
V 1=
100
V1= 2 mL de la sol madre
en 100 mL de agua
destilada.

RESULTADO
Espectro de absorcin del colorante
rojo #40, su MAX= 512 nm con una
absorbancia de 0.24033.

0.35
f(x) = 0.03x + 0.01
R = 1

0.3
0.25
0.2
absorbancia

0.15
0.1
0.05
0
1

concentracin

DISCUSION DE RESULTADOS

10

Esta prctica fue modificada porque no se utiliz la primera solucin de 1000 ppm
del colorante rojo #40 ya que sala muy concentrada y esto no es bueno para
leerse ya que dara un pico muy disparado es por eso que se tom la solucin de
100 ppm y tambin por su baja estabilidad de este colorante.
Se ley en la regin Visible ya que como se mencion en el fundamento y
generalidades los compuestos que tengan color ser preferente leerlos en la
regin visible y los que tengan la estructura qumica con dobles enlaces, ciclos,
etc. en UV, esto se comprob al realizar esta prctica y tambin se vio que se
poda utilizar una celda de vidrio que es til para la regin visible y tambin se
comprob que las diluciones son buenas utilizarlas siempre y cuando se est
consciente de las proporciones que se utilizan al leer en el espectrofotmetro.
Al hacer la dilucin no quiere decir que la MAX cambie solo que se logra apreciar
mejor el pico y as calcular bien la absorbancia para despus correr la curva de las
posteriores diluciones.
CONCLUSION
Sigue siendo un reto hacer bien los clculos y preparar las soluciones con un
correcto mtodo para poder analizar el cromforo, pero cada vez se tienen menos
errores como equipo y esta vez se utiliz solo la regin visible, no nos dieron
muestra problema, tambin aprend que el colorante rojo 40 es malo para el
consumo humano y sin embargo es uno de los ms comunes en nuestra
alimentacin diaria.
BIBLIOGRAFIA

http://vivirsalud.imujer.com/5068/los-peligros-de-consumir-alimentos-con-

colorantes-artificiales
http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-

mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETR%C3%8DA.pdf
Manual de Anlisis Instrumental.