PRCTICA No. 1: Bioseguridad y esterilizacin en el laboratorio de microbiologa.

Autores y cdigos: Nicole Uribe Trivio 413541 - Francisco Jos Prez 413530 Dailer Montoya Daz 413525
Fecha: 18 de febrero de 2015. En la siguiente Tabla encontrar una lista de materiales e insumos de laboratorio;
Usted debe escribir al frente de cada uno de ellos: La forma de preparacin para la esterilizacin y el mtodo

Materiales e
insumos

Forma de preparacin del material para esterilizacin

Mtodo apropiado de
esterilizacin

Cajas Petri.

Las cajas de Petri despus de ser lavadas con detergente y agua destilada preferiblemente y secadas se
envuelven en papel de estraza, para ser colocadas en el horno a 150 C durante 2 horas aprox.
Posteriormente se sacan y se dejan enfriar para su utilizacin en reas nicamente aspticas.

Calor Seco (Accin directa

Pipetas Pasteur
plsticas.

Se pone un tapn de algodn con gaza en la parte superior de la pipeta y teniendo en cuenta que el uso
de autoclave se recomienda para materiales plsticos y disponen las pipetas en el autoclave. Tambin se
puede esterilizar con xido de etileno dependiendo del tipo de plstico o por radiacin ionizante.

Calor Hmedo

Pipetas de
vidrio.

Se introduce un pedacito de algodn en el cuello de las pipetas, se envuelven en papel de estraza

marcando el cuello de la pipeta. Por lo general los materiales de vidrio como las pipetas se llevan a un
horno a 150C por 2 Horas. Posteriormente se sacan y se dejan enfriar para su utilizacin en reas
nicamente aspticas.

Calor Seco (Accin directa

Erlenmeyer y/
Beaker.

Los Beakers y los Elenmeyer se colocan dentro del autoclave boca abajo u Horizontales para que permitir
el paso constante del aire y contacto con el vapor a una temperatura de 134C durante 3 minutos aprox.
Tambin se pueden introducir al horno a 170C por 2 horas aprox.

Calor Hmedo

Hisopos de
algodn.

Los hisopos se pueden introducir dentro de un tuvo sellados con una tapa de algodn para evitar que se
contaminen. Se introducen en un horno Pasteur a 180C por 2 horas aprox.

por generadores de calor)

(Autoclave)

por generadores de calor)

(Autoclave)

Calor seco (Accin directa

por generadores de calor)

Radiacin
(Ultravioleta)

Agua destilada.

Solucin de
antibiticos.

La sustancia a esterilizar pasa por un filtro a presin y por tamao de partculas aquellas de tamao
inferior al filtro pasan al medio estril y los microrganismos son contenidos por el filtro. Teniendo en cuenta
trabajar en un medio asptico (mechero).

Filtracin
(filtros)

Carbohidratos.

Una vez montado el equipo de filtracin, las soluciones de carbohidratos se hacen pasar por unos filtros a
presin, en el cual aquellas partculas de tamao inferior al filtro pasan al medio estril quedando los
microrganismos contenidos en el filtro y la solucin en el medio esterilizado. Teniendo el medio de trabajo
asptico (mechero).

Filtracin
(Filtros)

Bajalenguas o
depresor lingual.
Probeta vidrio.
Asa
bacteriolgica.
Asa Digralsky.
Pinzas
metlicas.
Tubos de
ensayo.

Papel filtro.

Los bajalenguas a ser elementos muy delicados no se esterilizan por vapor ya que pueden sufrir daos
durante el proceso, por lo general son desechables y vienen esterilizados por el fabricante.

Calor Seco (Accin directa

Se lavan con detergente y agua destilada, se tapan con algodn y gaza para evitar que se contaminen
envuelven en papel de estraza y se colocar en un horno a 150C por 2 horas aprox.

Calor Seco (Accin directa

Se esteriliza colocando las Asas directamente a la llama. Para obtener una adecuada esterilizacin se
debe asegurar un flujo de llama contante hasta que el instrumento quede al rojo vivo.

Se envuelve el material en papel de estraza y se lleva al horno a 150C por dos horas aprox, tambin se
puede flamear unas cuantas veces dependiendo de la calidad del vidrio.

Se esteriliza colocando las pinzas directamente a la llama. Para obtener una adecuada esterilizacin se
debe asegurar un flujo de llama contante hasta que el instrumento quede al rojo vivo.

Los tubos de ensayo se colocan dentro del autoclave boca abajo u Horizontales para que permitir un
rpido paso del aire y contacto con el vapor a una temperatura de 134C durante 3 minutos aprox.

Se dispone en el horno procurando que la temperatura no exceda los 160C por un tiempo aproximado de
5 horas.

Suelo.

por generadores de calor)

por generadores de calor)

Calor Seco
(Accin directa de la llama)

Calor Seco (Accin directa

por generadores de calor)

Calor Seco
(Accin directa de la llama)

Calor Hmedo
(Autoclave)
Calor Seco
(Accin directa por
generadores de calor)

Radiacin
(Ionizantes)

apropiado de esterilizacin.
Alberto Rojas-Trivio

DISCUSIN
Los mtodos de esterilizacin a los equipos a utilizar en un laboratorio para realizar una prctica experimental, una investigacin
acadmica u otros trabajos cientficos o mdicos, son de tal importancia que permiten alargar la vida til de estos instrumentos y
perdurar su funcionalidad para el desarrollo de tales procesos, su eficacia y calidad. Conocer estas herramientas contribuye a
mejorar los resultados de un proceso ya que estos no se vern afectados por la presencia o entrada de agentes o factores ajenos
al ambiente controlado que se tiene tras el uso de instrumentos o equipos necesarios. De igual manera corroboran en la
eliminacin de agentes no deseados para el estudio y la investigacin, en las muestras ambientales que se obtienen en campo
abierto de alguna bacteria, hongo o alga en especfico.

CONSULTA
1. Liste al menos tres microorganismos representativos para cada uno de los cuatro niveles de contingencia en los laboratorios
de microbiologa, mencionando la importancia que representa para su rea de formacin.
R//
2. Qu medidas podra tomar usted para verificar la efectividad de la esterilizacin en autoclave?
R// Se podran emplear las siguientes medidas para poder determinar la efectividad o veracidad de la esterilizacin en autoclave.
a. Prueba de Bowie & Dick.
El ensayo de Bowie y Dick est diseado para evaluar el funcionamiento de autoclaves de alto vaco. Consiste en
introducir una hoja impresa con tinta reactiva sensible al tiempo, a la temperatura y a la presencia de vapor. Cuando el
desalojo de aire y la penetracin de vapor son adecuadas, la tinta vira correctamente; en caso contrario la tinta muestra
una falla en el cambio de color. Como alternativa al ensayo clsico, se disearon los paquetes descartables de Bowie
Dick, en donde la hoja reactiva est empaquetada dentro de una barrera de papel inerte. (QUMICA DEL SANTO S.A.,
s.f., s.d.).
b. Uso de un Indicador Biolgico.
Para la esterilizacin en autoclave, se utilizan esporas de la bacteria Bacillus stearothermophilus, este indicador debe
colocarse en la situacin ms problemtica de la esterilizacin, para los esterilizadores de vapor esta suele ser el punto
ms bajo de la cmara cerca del desagote. El indicador se recupera despus de la esterilizacin y las esporas de control
se cultivan para evaluar los resultados.
Durante el cultivo, las esporas bacterianas pueden crecer en un medio de cultivo estril incubado al menos durante 24
horas. Si se observa crecimiento bacteriano en el cultivo de control, el proceso de esterilizacin fue ineficaz. Si no se
desarrollan bacterias, se supone que se logr la esterilidad de todos los artculos dentro de la carga. (Kotcher F. et al,
2008, p.:146).
c. Uso de un Indicador Qumico
Los indicadores qumicos para procesos de esterilizacin se usan desde hace aproximadamente 30 aos. Son
sustancias tales como tintas, ceras y soluciones qumicas que mediante una reaccin qumica cambian su aspecto
cuando se exponen al proceso de esterilizacin.
Los indicadores qumicos son especficos para cada proceso de esterilizacin; esto quiere decir que si un indicador
qumico est diseado para el control del calor seco, xido de etileno, vapor a baja temperatura y formaldehdo o ningn
otro sistema de esterilizacin diferente al vapor.
Las ventaja fundamental de usar un indicador qumico es que dan una lectura inmediata. (Martnez Abril C., 2003,
p.:108).
3. Defina liofilizacin?
R// Es la remocin de agua de las clulas congelndolas (slidas) a presin reducida (sublimacin). Para llevar a cabo este
procedimiento, se toma una muestra del cultivo por conservar y se suspende en algn medio con crio protectores. Como leche,
Suero o glutamato de sodio. Se transfieren unas gotas de la muestra a una ampolla, se congela y se somete a alto vaco hasta
que el agua celular se sublima (pasa del estado slido al gaseoso). Una vez liofilizada la cepa, la ampolla que la contiene se sella
para impedir que el microorganismo se altere por el contacto con el medio ambiente. Es un mtodo bastante efectivo de
conservacin, pues lo microorganismos pueden mantener su viabilidad por veinte aos o ms. (Hernndez Pearanda A., 2003,
p.: 21).
4. Defina sonicacin?

R// Es la aplicacin de ultrasonidos a una suspensin celular. La intensa agitacin producida destruye las membranas celulares.
Dependiendo de la frecuencia, intensidad y energa aplicada su pueden destruir as mismo las estructuras subcelulares e incluso
solubilizar complejos proteicos. Se suele aplicar en frio para evitar el sobrecalentamiento de las muestras que podra provocar la
desnaturalizacin de las protenas. Se transmite una corriente elctrica a un sistema mecnico que la convertir en vibraciones
de alta intensidad, generndose ondas de ultrasonido que generan millones de burbujas microscpicas, las cuales se expanden y
colapsan contra las clulas causando la ruptura de su membrana. (UNIVERSIDAD JAVERIANA, s.d.)
Su utilidad se debe a que es un mtodo de fragmentacin celular que tiene como objeto obtener fracciones puras de un
determinado componente celular (organela, fraccin de una membrana, complejos proteicos, etc.).
5. Defina tindalizacin?
R// Consiste en calentar los productos de 90 a 100C durante media a una hora, en tres das consecutivos. Entre casa etapa de
calentamiento se incuba a 37C. En las etapas de calentamiento se destruyen los microorganismos, pero permanecen las
esporas, las cuales germinan en las etapas de incubacin, para que nuevamente se destruyan los microorganismos germinados
en la segunda o tercera etapa de calentamiento. Este procedimiento se utiliza poco en la prctica diaria. (Caballero R., 2007, p.:
36).
6. Qu metodologa de esterilizacin es la adecuada para cada una de las siguientes muestras ambientales? (i) Medios de
cultivo slidos contaminados con Salmonella sp., (ii) muestras de agua residual domstica, (iii) hisopos utilizados en
muestreo de manipuladores de alimentos, (iv) tejidos de procedencia animal y origen desconocido, (v) suelo, (vi) suelo
inoculado con patgenos de plantas y (vii) antibiticos?
R//

BIBLIOGRAFA

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