PRUEBA COOMBS

La prueba de Coombs (tambin conocida como prueba de antiglobulina) es

un examen de sangre que se usa en inmunologa y hematologa. Este anlisis puede
detectar la presencia de anticuerpos en suero que reaccionan con antgenos en la
superficie de los glbulos rojos. Hay dos tipos distintos de la prueba de Coombs: el
directo y el indirecto.

Prueba de Coombs, prueba de antiglobulina directa o prueba de antiglobulina

indirecta es un anlisis de sangre que busca anticuerpos que puedan fijarse a los
glbulos rojos y causar su destruccin prematura (hemlisis).
PRINCIPIO
La reaccin de Antiglobulina, fue descrita por Moreshi. En 1908, y fue aplicado por
Coombs y sus colaboradores en 1945 en la serologa de grupos sanguneos. Cuando se
utiliza el suero de animales inmunizados con protena humana en la deteccin de los
llamados anticuerpos incompletos, la capacidad del suero antiglobulina para reaccionar
con componentes del complemento humana unidos a los glbulos rojos fue reportado en
1957 por Dacie y sus colaboradores.
La prueba de antiglobulina Coombs es un procedimiento importante para la deteccin
de inmunoglobulina y/o complemento unido a los glbulos rojos. La prueba de
antiglobulina directa se utiliza para demostrar los anticuerpos y/o complemento unido a
los glbulos rojos in vivo, y la prueba de antiglobulina indirecta despus de la
incubacin del suero y los glbulos rojos, demuestran los anticuerpos y/o complemento
unido in vitro.

Cuando los anticuerpos incompletos (usualmente IgG) entran en contacto con los
glbulos rojos que poseen los antgenos apropiados, stos se unirn a la superficie de las
clulas y permanecern unidos durante la serie de lavados con solucin salina
fisiolgica 0.9% para eliminar la protena humana unida. Se puede detectar entonces la
presencia de la protena resultante a travs de una prueba de lavado de clulas con un
reactivo hecho de suero de conejo inmunizado con la protena humana adecuada, o de
anticuerpos monoclonales secretados por hibridomas derivadas de ratn inmunizado y
de un cultivo medio fluido.

La aglutinacin de glbulos rojos por Anti-IgG en la prueba de antiglobulina directa e

indirecta, indica que las clulas estn cubiertas con anticuerpos.
Algunos reportes sugieren que el IgG puede fallar ocasionalmente en la deteccin de
anticuerpos que se demuestren por el uso de un reactivo de antiglobulina humana poli
especfica y los anticuerpos no detectados por Anti-IgG pueden ser clnicamente
significativos en algunos casos. El usuario debe ser consiente que la informacin
cientfica actual no es completamente un soporte para el uso excesivo de Anti-IgG para
pruebas de rastreo de anticuerpos y para pruebas de compatibilidad.
Un paso crucial en el procedimiento de la prueba de antiglobulina son los lavados de
clulas antes de aadir la antiglobulina humana. Los lavados eliminan la protena
humana unida, que de otra manera pudieran neutralizarla.
DESCRIPCIN DEL REACTIVO
Anti-globulina humana, Anti-IgG, Gamma Clone (verde o incoloro) contiene un
anticuerpo murino monoclonal IgM secretado por hibridomas de la lnea celular 16H8
cultivada en un medio fluido, este anticuerpo est destinado para reaccionar con un
eptope en el dominio CH3 de la regin Fc de IgG humano.

RAZONES POR LAS QUE SE REALIZA LA PRUEBA DE COOMBS

La prueba de Coombs directa se se realiza a pacientes en los primeros momentos de
una reaccin hemoltica y utiliza para detectar anticuerpos que ya se han fijado a la
superficie de los glbulos rojos y al diagnstico de anemias hemolticas auto inmunes,
hemlisis inducidas por drogas, y enfermedad hemoltica del recin nacido.
Muchas enfermedades y frmacos (quinidina, metildopa y procainamida) pueden llevar
a la produccin de estos anticuerpos. Estos anticuerpos algunas veces destruyen los
glbulos rojos y causan anemia.
La prueba de Coombs indirecta busca anticuerpos circulantes libres contra una serie
de glbulos rojos estandarizados. Esta prueba se usa con ms frecuencia para determinar
si una persona podra tener o no una reaccin a una transfusin de sangre. Rara vez para
diagnosticar una afeccin mdica.
El Coombs cruzado es una variante del Coombs indirecto y se realiza a pacientes
politransfundidos, pacientes con antecedentes de reaccin post transfusional hemoltica
y a multparas para escoger sangre compatible.

LOS VALORES NORMALES DE LA PRUEBA DE COOMBS

La falta de agrupacin de clulas (aglutinacin), indicando que no hay anticuerpos para
los glbulos rojos, es lo normal.
Los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre diferentes
laboratorios. Hable con el mdico acerca del significado de los resultados especficos de
su examen.

SIGNIFICADO DE LOS VALORES ANORMALES DE LA PRUEBA DE COOMBS

Una prueba de Coombs directa anormal (positiva) significa que usted tiene
anticuerpos que actan contra sus glbulos rojos, lo cual puede deberse a:

Anemia hemoltica autoinmunitaria sin otra causa

Leucemia linfoctica crnica (LLC)u otro trastorno linfoproliferativo
Anemia hemoltica inducida por frmacos (muchos frmacos han sido asociados
con esta complicacin)
Eritroblastosis fetal (enfermedad hemoltica del recin nacido)
Mononucleosis infecciosa
Infeccin por micoplasma
Sfilis
Lupus eritematoso sistmico u otra afeccin reumatolgica
Reaccin a transfusin como la ocasionada por unidades de sangre cotejadas de
manera impropia

Esta prueba tambin es anormal en algunas personas sin una causa clara, especialmente
entre los ancianos. Hasta el 3% de las personas que estn hospitalizadas sin un trastorno
sanguneo conocido tendrn un resultado anormal en la prueba de Coombs directa.
Una prueba de Coombs indirecta anormal (positiva) significa que usted tiene
anticuerpos que actuarn contra los glbulos rojos que el cuerpo asume como extraos.
Esto puede sugerir la presencia de:

Anemia hemoltica autoinmunitaria o inducida por frmacos

Eritroblastosis fetal (enfermedad hemoltica)
Incompatibilidad sangunea (cuando se utiliza en bancos de sangre)

FORMA EN QUE SE REALIZA LA PRUEBA DE COOMBS

La sangre se extrae tpicamente de una vena, por lo general de la parte interior del codo
o del dorso de la mano. El sitio se limpia con un desinfectante (antisptico). El mdico
envuelve una banda elstica alrededor de la parte superior del brazo con el fin de aplicar
presin en el rea y hacer que la vena se llene de sangre.
Luego, el mdico introduce suavemente una aguja en la vena y recoge la sangre en un
frasco hermtico o en un tubo pegado a la aguja. La banda elstica se retira del brazo.
Una vez que se ha recogido la muestra de sangre, se retira la aguja y se cubre el sitio de
puncin para detener cualquier sangrado.
En bebs o en nios pequeos, se puede utilizar un instrumento puntiagudo llamado
lanceta para punzar la piel y hacerla sangrar. La sangre se recoge en un tubo pequeo de
vidrio llamado pipeta, en un portaobjetos o en una tira reactiva. Finalmente, se puede
colocar un vendaje sobre el rea si hay algn sangrado.

FIGURA 8. SUERO DE COOMBS MONOCLONAL-POLIESPECFICO (ANTIIgG,-C3D)

El sobrenadante del cultivo del tejido que contiene el anticuerpo monoclonal se diluye
en una solucin amortiguadora apropiada para facilitar la resuspensin del botn de
clulas despus de la centrifugacin.
El producto final se ajusta a un pH 7.0 + 0.1 y contiene azida de sodio a una
concentracin final de 0.1% como conservador. Advertencia: La azida de sodio puede
reaccionar con las tuberas de plomo y cobre formando azidas metlicas explosivas.
Enjuague con un gran volumen de agua para prevenir la formacin de azidas explosivas.
El Gamma-Clone Anti-IgG Verde contiene una mezcla de Acid Blue #1 y Acid Yellow
#23. Estos reactivos de diagnstico estn destinados para utilizarse como se indica en
cualquiera de los mtodos descritos en este instructivo. No se diluye. No se use despus
de la fecha de caducidad. Mantngase de 1C a 8C cuando no se use. No se congele.
Tenga cuidado de mantener la esterilidad. No se use si est turbio. Precaucin: No
pipetee este producto con la boca.
8.3 RECOLECCIN DE LA MUESTRA
PREPARACIN DEL PACIENTE
No se requiere una preparacin previa del paciente para obtener la muestra. La sangre
debe obtenerse por medio de una tcnica asptica, y preferentemente debe probarse
mientras est fresca. Si ocurre un retraso en la prueba, la muestra debe conservarse de
1C a 8C.
Para la prueba de antiglobulina directa se debe extraer la sangre con o sin anticoagulante
cuando se va a realizar la prueba con Anti-IgG.
TIPO DE MUESTRA
Suero, eritrocitos
TABLA 13. TIPO Y VOLUMEN VOLUMEN
REQUERIDO
TIPO
DE
MUESTRA
ptimo
Mnimo
Suero
4.0 mL
2.0 mL

https://www.clinicadam.com/salud/5/003344.html

Equipamiento, locales, materiales y reactivos

Centrfuga para tubos de mesa
Neveras de conservacin de sangre 4-6C

 Aglutinoscopio.
Tubos de ensayo de13x100
Gradillas para tubos de ensayo
Jeringuillas de 10 o 20 mL
Agujas 20 o 21
Torundas
Ligaduras
Aplicadores de madera.
Anticoagulante EDTA o heparina
Alcohol al 70% o hibitane alcohlico
Suero de Coombs poliespecfico
Suero de Coombs monoespecfico anti IgG y anti C3d.
Solucin salina
Operaciones preliminares
Prepare el rea de trabajo con el material y reactivos que van a ser utilizados.
Tome muestra de sangre del paciente compuesta de un tubo anticoagulado (con EDTA
o heparina) y un tubo seco debidamente identificado y que no exceda las 72 horas de
extrada.
Procedimiento
Coombs directo
Lave tres veces los hemates del paciente con solucin salina fisiolgica.
Haga una suspensin de hemates lavados al 2-5 %.
Aada en un tubo debidamente rotulado dos gotas de la suspensin.
Aada dos gotas de Suero de Coombs poliespecfico.
Centrifugue un minuto a 1000 rpm.
Manual de Prcticas Mdicas - Hospital Hermanos Ameijeiras
3
Lea desprendiendo suavemente el botn sobre la lmpara
aglutinoscopio.
Coombs indirecto y cruzado
Centrifugue la muestra de sangre 10 min a 3 000 rpm para obtener el suero y
decntelo en un tubo debidamente identificado.
Prepare una suspensin al 2-5 % con la mezcla de hemates O y en el caso del
Coombs cruzado utilice una muestra de la sangre a transfundir para preparar la
suspensin.
En un tubo debidamente rotulado aada dos gotas del suero y dos gotas de la
suspensin y mezcle bien.
Prepare un tubo control rotulado C+ (control positivo) y aada en l dos gotas de la
suspensin de hemates O y dos de suero hemoclasificador anti-D y mezcle bien
Incube ambos tubos en un Bao de Mara a 37C por 30 minutos
Lave tres veces con solucin salina escurriendo totalmente el sobrenadante del ltimo
lavado.
Aada dos gotas de suero de Coombs poliespecfico a cada tubo.
Centrifugue 1minuto a 1000 rpm.

 Lea desprendiendo suavemente el botn en la lmpara aglutinoscopio.

Interpretacin de los resultados
Si en la prueba de Coombs directo observa aglutinacin esto indica presencia de
anticuerpos y /o complemento unidos a los hemates in vivo, repita nuevamente el
procedimiento pero utilizando los reactivos monoespecficos anti-IgG y anti-C3d.
Patrones de reaccin
Reactivos monoespecficos 1 2 3 4
_____________________________________________________
anti Ig G + + - anti C3 - + + ______________________________________________
Manual de Prcticas Mdicas - Hospital Hermanos Ameijeiras
4
Si en la prueba de Coombs indirecto se observa aglutinacin significa que
estamos en presencia de anticuerpos irregulares en el suero del receptor
por lo que debe proceder al estudio e identificacin de l o los anticuerpos
adquiridos.
Si en la prueba de Coombs cruzado se observa aglutinacin indica que
estamos en presencia de anticuerpos irregulares en el suero del receptor
por lo que las unidades de sangre estudiadas que presenten este resultado
no deben ser transfundidas al paciente en estudio.
Controles
El jefe tcnico controlar que en todos los casos se trabaje con muestra
extrada con no ms de 72 horas para lo que mantendr la nevera donde
se almacenan las mismas libre de muestras vencidas.
El jefe tcnico controlar que no ocurra en ningn caso omisin alguna de
los pasos descritos anteriormente.
El tcnico que realiza el proceder debe verificar que el tubo control que se
monta en paralelo muestre aglutinacin lo cual garantiza que el reactivo de
Coombs empleado mantiene su actividad biolgica.
ndice
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1 Mecanismo

2 Prueba de Coombs directa

o

2.1 Trastornos asociados con un resultado positivo

3 Prueba de Coombs indirecta

4 Historia

5 Referencias
Mecanismo[editar]
Ambas pruebas de Coombs emplean un antisuero llamado reactivo de Coombs, que
contiene anticuerpos de animales inmunizados dirigidos contra IgG, IgM,
y/o complemento humano.1 Estos anticuerpos se unen a los antgenos que estn en la
superficie de los glbulos rojos, causando aglutinacin de las clulas. 2 Esta aglutinacin
observada corresponde a un resultado positivo, y la ausencia de aglutinacin es un
resultado negativo.
Prueba de Coombs directa[editar]
Esta prueba se usa para determinar si hay complemento o anticuerpos ya fijados a
eritrocitos tomados directamente del paciente. Estas clulas, alcanzadas
unavenopuncin, se lavan y se agrega el reactivo de Coombs. Los anticuerpos
reactivo se unen a IgG, IgM, o complemento que est unido a la superficie de
glbulos rojos. Estos se aglutinan, produciendo grupos de clulas que indican
resultado positivo.

los
de
del
los
un

Trastornos asociados con un resultado positivo

Anemias hemolticas inducidas por frmacos

Anemias hemolticas inmunitarias

Reacciones a transfusin

Enfermedad hemoltica del recin nacido

Trastornos linfoproliferativos, como leucemia linfoctica crnica

Mononucleosis infecciosa

Algunas enfermedades pueden causar hemlisis no inmunitaria, como la esferocitosis

hereditaria y la talasemia.3 Estos trastornos no son asociados con un resultado positivo
en la prueba de Coombs porque no son causados por anticuerpos hemolticos.
Prueba de Coombs indirecta
Se detectan anticuerpos especficos de ciertos antgenos que no necesariamente estn
presentados en los glbulos rojos del paciente, pero puede estar en glbulos rojos de
otras personas. Si se mezcla suero tomado de un paciente que contiene estos anticuerpos
con glbulos rojos que s muestran estos antgenos especficos, los glbulos rojos se van

a cubrir con anticuerpo. Una vez cubiertas, las clulas se van a aglutinar despus de una
exposicin al reactivo de Coombs. Por ejemplo, en el diagnstico de eritroblastosis
fetal, el suero tomado de la madre Rh- no reacciona con su propia sangre, sino con la de
su feto Rh+. El suero de la madre, que contiene anticuerpos especficos del factor Rh, se
mezcla con glbulos rojos Rh+. Los anticuerpos del suero se unen a las clulas. Luego,
se agregan anticuerpos antihumanos para aglutinar los glbulos rojos. Se puede diluir el
suero y hacer la prueba repetidas veces, para cuantificar los anticuerpos en el suero.5