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Tesis de Doctorado
Facultad:
Director:
1993
Hace constar:
El Director
El Doctorando
-----
CULTIVO,
ADAPTACION
MORFOLOGICA
PREFACIO
Esta tesis compila los resultados de los artculos que se citan a continuacin as
como otros resultados no publicados:
I.
II.
III.
IV.
Garca Reina G, Gmez Pinchetti JL, Robledo DR, Sosa P (1991) Actual,
potential and speculative applications of seaweed cellular
biotechnology:
221: 181-194.
V.
Este trabajo ha sido llevado a cabo por Daniel Robledo Ramrez en el Instituto de
Algologa Aplicada del Departamento de Biologa de la Universidad de Las Palmas
de Gran Canaria.
AGRADECIMIENTOS
i
ndice General.
I. Introduccin....................................................................................................... 1
1.- Introduccin a los sistemas intensivos................................................... 3
1.1.- Cultivo por aspersin................................................................ 5
1.2.- Acumulacin de metales........................................................... 9
1.3.- Cultivo en tanque .................................................................... 14
2.- Fisio-patologa en cultivo de macroalgas. ............................................ 16
2.1.- Epifitos...................................................................................... 17
2.1.1.- Mtodos biolgicos de control. ............................... 18
2.1.2.- Mtodos qumicos de control.................................. 20
2.2.- Virus. ........................................................................................ 21
3.- Objetivos.................................................................................................. 22
ii
iii
ndice General.
V. Conclusiones................................................................................................. 105
I. INTRODUCCIN.
I. Introduccin.
Introduccin.
Las macroalgas han sido utilizadas durante cientos de aos como alimento
humano y en remedios populares, para consumo animal y como fertilizante agrcola
(Chapman y Chapman 1980). La utilizacin de los polisacridos matriciales de algas
rojas (agar y carragenatos) y pardas (alginatos), son bsicos en la industria
alimenticia, qumica y farmacutica (McHugh 1987).
La mayora de las especies de macroalgas de inters industrial se obtienen
por explotacin de poblaciones naturales. Sin embargo, la creciente demanda de
materia prima por parte de la industria, aunado a la sobreexplotacin y destruccin
de praderas naturales, ha potenciado el desarrollo de mtodos de cultivo como
alternativa al suministro de biomasa.
Las prcticas de cultivo de macroalgas tienen varios siglos de antigedad en
las culturas orientales (Tseng y Fei 1987), pero ha sido slo en los ltimos 50 aos
cuando se han establecido las bases cientficas para su desarrollo, tanto en Oriente
como en otros lugares del mundo (Santelices 1989).
El cultivo tradicional en ambientes marinos o hbitats costeros precisa el fijar
las plantas a sustratos naturales y/o artificiales, implicando en la mayora de los
casos el control y cultivo del ciclo completo del alga. Esta forma de cultivo ha sido
ampliamente desarrollada en pases asiticos, con tradicin en el consumo directo de
estos vegetales y donde la demanda para su uso alimenticio es amplia. En estos
pases, las condiciones ambientales, costeras y sociales permiten el desarrollo de
estos sistemas, comunmente llamados "mano de obra intensivos" (Doty 1979), que
muchas veces no satisfacen los costes energticos y/o econmicos. Sin embargo, en
este tipo de cultivos la manipulacin de factores como corrientes marinas,
temperatura, luz, composicin del medio (en particular nutrientes) y efectos
I. Introduccin.
I. Introduccin.
Tabla 1.1.- Condiciones de cultivo, tasa de crecimiento y produccin de algas pertenecientes a la divisin Clorofita y Feofita. Condiciones de cultivo: Luz
(N=Iluminacin ambiental, L=Iluminacin artificial); Flujo del riego (l^m-2^min-1); Adicin de nutrientes para sistema abierto (FS=mtodo fertilizacin foliar,
DW=agua de profundidad rica en nutrientes, SW=aguas superficiales, PF=fertilizacin por pulsos) y para sistemas cerrados (ASW=agua de mar artificial, B=adicin
directa al medio); Rgimen de riego (S=irrigacin continua, S/D=irrigacin intermitente con periodos de desecacin menores de una hora, 12:12=ciclos
irrigacin/desecacin en horas del da); Tasa de crecimiento expresada en incremento porcentual de biomasa por da.
Especies
estudiadas
Densidad
(g^m2)
#Niveles
Luz
Flujo
CLOROFITAS
Ulva lactuca
100-450
14-17
4200
4200
4200
3000
3000
3000
1700
1700
1700
3000
200
100-450
200
3000
200
3000
100-450
200
3000
3000
II
IV
III
III
III
III
II
II
II
I
I
I
I
I
I
I
I
I
I
I
N
N
N
N
N
N
N
N
N
N
L
N
L
N
L
N
N
L
N
N
FEOFITAS
Ascophyllum
nodosum
Fucus serratus
Fucus vesiculosus
Laminaria
saccharina
Halydris siliquosa
(*)
2.6
2.6
2.6
0.5-3.5 PF
0.5-3.5 PF
0.5-3.5 PF
15.0
15.0
15.0
2.0
1.6
14-17
1.6
2.0
1.6
2.0
14-17
1.6
2.0
2.0
Adicin
Sal.
nutrientes ()
15-20
FS
FS
FS
SW
DW
SW
DW
ASW
B
ASW
DW
ASW
DW
B
ASW
DW
DW
Temp.
(C)
10-30
-
20
20
20
22-29 11-12
32-33 8-9
22-29 11-12
33-34 7.0
33
13
15-20 10-30
33
13
33-34 7.0
33
13
33-34 7.0
7-19 10-30
33
13
33-34 7.0
33-34 7.0
Rgimen Tasa
Produccin
de riego crecimiento g^m-2^d-1
S/D
2.5
12:12
12:12
S/D
S
16:8
3:1
S
20:4
20:4
S
S
S/D
S
S
S
S
S/D
S
S
S
1.2
1.0
1.2
0.4
0.3
0.4
8.0
2.4
2.5
2.4
3.5
2.1
4.0
1.1
0.4*
1.7*
1.5
26
40-68
28
10-14
8.8-12.6
6.0-13.2
3.3
2.7
1.1-2.0
-
Referencia
= Tasa de crecimiento expresada e centimetros por da, debido a la morfologa del alga (Lignell & Pedersen 1986), o por la tcnica de medicin empleada (Indergaard et al.
1986).
Tabla 1.2.- Condiciones de cultivo, tasa de crecimiento y produccin de algas pertenecientes a la divisin Rodofita. Condiciones de cultivo: Luz (N=Iluminacin
ambiental, L=Iluminacin artificial); Flujo del riego (l^m-2^min-1); Adicin de nutrientes para sistema abierto (FS=mtodo fertilizacin foliar, DW=agua de profundidad
rica en nutrientes, SW=aguas superficiales, PF=fertilizacin por pulsos) y para sistemas cerrados (ASW=agua de mar artificial, B=adicin directa al medio); Rgimen
de riego (S=irrigacin continua, S/D=irrigacin intermitente con periodos de desecacin menores de una hora, 12:12=ciclos irrigacin/desecacin en horas del da);
Tasa de crecimiento expresada en incremento porcentual de biomasa por da.
Especies
estudiadas
RODOFITAS
Ahnfeltia plicata
Densidad
(g^m2)
#Niveles
Luz
Flujo
Adicin
nutrientes
Sal.
()
Temp.
(C)
Rgimen Tasa
Produccin
de riego crecimiento g^m-2^d-1
Referencia
1700
100-450
II
II
N
N
15.0
10-17
DW
B
32-33
15-20
8-9 S
10-30
S/D
0.2
0.5
1.2
-
Furcellaria
lumbricalis
1700
100-450
100-450
200
1000
II
II
I
I
I
N
N
N
L
N
15.0
10-14
10-14
1.6
2.0
SW
B
B
ASW
DW
22-29
15-20
7
33
33-34
9-11
10-30
10-30
13
7.0
S
S/D
S/D
S
S
0.02*
0.1
0.6
1.6
2.3
Chondrus crispus
200
1000
100-450
I
I
I
L
N
N
1.6
2.0
10-14
ASW
DW
B
33
33-34
15-20
13
7.0
10-30
S
S
S/D
0.7
1.3
0.5
Polyides rotundus
1000
2.0
DW
33-34
7.0 S
1.4
Gelidium sp
100-450
14-17
15-20
10-30
S/D
3.3
Pterocladia pinata
100-450
14-17
15-20
10-30
S/D
0.9
Gracilaria secundata
G. tikvahiae
100-450
-
I
I
N
N
14-17
50
B
PF
15-20
-
10-30
-
S/D
S
1.3
-
0-35
(*)
= Tasa de crecimiento expresada en centmetros por da, debido a la morfologa del alga (Lignell & Pedersen 1986), o por la tcnica de medicin empleada (Indergaard et al.
1986).
I. Introduccin
10
[Agua mar]
g^g-1
[Algas]
g^g-1
Referencia
Titanio
0.001
2.4-178
Cromo
5E-4
0.5-2.83
Nquel
0.007
0.23-5.64
Estroncio*
20-11,500
Cadmio
4E-4
0.3-3.30
Mercurio
3E-5
0.1-25
Plomo
3E-5
< 8-56.5
Tabla 1.4.- Clasificacin de los metales de acuerdo a su probable funcin en el metabolismo algal. 1 = Macronutrientes escenciales requeridos
por todas las algas, 2 = Micronutrientes escenciales requeridos por todas las algas (DeBoer 1981); 3 = Elementos requeridos como trazas slo
por algunas especies, 4 = Elementos no escenciales presentes en algas (Lobban 1985); 5 = Elementos no escenciales muy txicos y
relativamente accesibles en el agua de mar. Elementos ordenados de acuerdo a su aparicin en la tabla peridica.
Metal
Boro2
[Agua mar]
g^^g-1
4.39
[Algas]
g^^g-1
15-910
Funcin
Compuestos
Referencia
Posible regulacin en la
utilizacin del carbono
No se conocen
Lobban 1985
Sodio3
11,000
200-66,600
Activacin enzimtica,
balance hdrico
Nitrato
reductasa
Lobban 1985
Yamamoto et al. 1979
Magnesio1
1,290
1,900-66,000
Pigmentos fotosintticos,
activacin enzimtica,
transporte inico, estabilidad ribosomal
Clorofilas
Lobban 1985
En forma
inica Al+3
ATP, GTP, etc.,
cidos nucleicos,
fosfolpidos,
coenzimas Co-A
Fosfoenolpiruvato
Aluminio4
0.001
57-3,320
Fsforo1
0.068
300-12,000
Lobban 1985
Potasio
406
Calcio1 412
4,500-82,000
30,000-82,000
2,000-360,000
Vanadio3
0.002
0.66-10.1
Manganeso2
0.001*
4-240
Hierro2 0.003*
90-1,500
Metionina, cistina,
glutation, agar,
carragenatos, sulfolpidos, coenzima A
Predominantemente
en forma inica K+
Lobban 1985
Lobban 1985
Estructural, activacin
enzimtica y transporte
inico
Alginato clcico,
carbonato clcico
Lobban 1985
No se conoce
Forma orgnica
e inorgnica
H2VO4-
Maeda y
Sakaguchi 1990
Yamamoto et al. 1979
Ninguno descrito
Lobban 1985
Ferredoxina,
citocromos, nitrito
y nitrato reductasa, catalasa
Lobban 1985
Transporte electrnico en
el Fotosistema II, mantiene
la estructura de membrana
del cloroplasto
Grupos activos en molculas
de porfirina y enzimas
0.002*
Zinc2
0.004*
5
Arsnico
Selenio5
Molibdeno2
0.001
8E-5
0.01
0.24-2.51
0.6-80
2-680
1.4-95
0.06-1.16
Componente de la vitamina
Ciano-
Lobban 1985
B12
cobalamina
Transporte electrnico en
Plastocianina,
la fotosntesis, enzimas
amino-oxidasa
Lobban 1985
Anhidrasa carbnica
Lobban 1985
Arseno-azucares,
e inorgnica
arsenolipidos,
Enzimas, probalemente en
fosfatidil
Maeda y
areseno colina
Sakaguchi
1990
En fracciones de varios
Aminocidos, carbo-
componentes bioqumicos
hidratos solubles y
Maeda y
lpidos
Sakaguchi 1990
Reduccin de nitrato,
Nitrato
Lobban 1985
absorcin inica
reductasa
14
afectan la
tuberas localizadas en el fondo del tanque, generan una circulacin adecuada del
agua y permiten la exposicin peridica de las plantas a la luz en la superficie.
I. Introduccin.
15
16
I. Introduccin.
17
2.1.- Epifitos.
Actualmente el problema ms importante del cultivo intensivo de macroalgas
es el crecimiento de algas epifitas, tanto en cultivos en el mar (Kuschel y Buschmann
1991) como, sobre todo, en tanques (Friedlander 1992). Los epifitos ms comunes
son algas microscpicas unicelulares, principalmente diatomeas (Booth 1981),
aunque las especies ms problemticas son algas macroscpicas verdes del gnero
Ulva y Enteromorpha, las pardas filamentosas del gnero Ectocarpus y Pilayella
adems de algunas algas rojas filamentosas como Acrochaetium y Audouniella.
Entre los efectos ms importantes que causan estas pestes estn:
i) la reduccin de la produccin (p.e. en Chondrus crispus hasta un 50-60%,
Bidwell et al. 1985), ii) la competencia con las algas en cultivo por la irradiacin (al
cubrir la superficie del alga y reducir la luz incidente) y nutrientes (al ser formas
oportunistas de crecimiento ms rpido) y iii) la disminucin significativa de la
calidad de la biomasa algal (Lapointe y Ryther 1978, Morgan et al. 1980).
Aunque para evitar estos problemas se recomiendan algunos mtodos de
prevencin durante los periodos iniciales del cultivo, como inculos unialgales y
filtracin del medio, una vez que se establece alguna especie epifita es difcilmente
controlable. Existen sin embargo mtodos fsicos, como remocin manual, lavado
con agua a presin y periodos de desecacin, para controlar y/o eliminar dichas
pestes. Aunque los primeros son poco prcticos y laboriosos (Gibor 1980), los
ltimos son aplicados con xito en cultivos en el mar (p.e. Porphyra, Tseng y Fei
1987).
La mayora de los mtodos se relacionan de alguna forma con el control de
parmetros ambientales (irradiacin, temperatura, etc.) y por lo tanto son aplicables a
los sistemas de cultivo (Tabla 1.5). Aproximaciones ms prcticas en este sentido
han sido sugeridas para los sistemas de cultivo intensivo:
18
Tabla 1.5.- Mtodos de control del epifitismo empleados durante el cultivo de especies de inters comercial.
Mtodo de control
Epifitos
Especie cultivada
Referencia
Control de factores
combinados (bC, ,I,pH)
Acrochaetium
Ectocarpus, Enteromorpha
Palmaria palmata
Control densidad
y fertilizacin
Ulva, Ectocarpus
Enteromorpha
Chondrus crispus
Periodos de desecacin
en cultivo spray
Ulva, Enteromorpha
Pilayella
Ascophyllum nodosum
Lignell &
Pedersn 1986
Control de factores
combinados (bC,I,
,pH) y calidad de
luz
Ulva lactuca
Cladophora pellucida
Ectocarpus confervoides
Enteromorpha compressa
Gracilaria conferta
Friedlander 1992
Mesoherbvoros
anfpodos
Enteromorpha linza
Gracilaria asiatica
Gracilaria lemaneiformis
Mesoherbvoros
ispodos
Ectocarpus, Enteromorpha
Chondrus crispus
Shacklock 1992
Tratamiento
con cloro
Enteromorpha, Ulva
Ectocarpus
Gracilaria chilensis
Ugarte &
Santelices 1992
Tratamiento
con cobre
Enteromorpha intestinalis
Gracilaria tenuistipitata
Haglund 1992
20
I. Introduccin.
21
2.2.- Virus.
Existen evidencias de la existencia de virus en macroalgas marinas (Chorda
tomentosa, Toth y Wilce 1972; Gracilaria epihippisora, Apt y Gibor 1991;
Ectocarpus, Van Etten et al. 1991). Sin embargo, la caracterizacin de estas
partculas virales y su aislamiento slo ha sido realizado en algas del orden
Ectocarpales (Mller et al. 1990). El mecanismo de infeccin de estos virus se
realiza a travs de las zoosporas y gametos, que durante su desarrollo transmiten el
genoma viral va mitosis a cada clula del husped; sin embargo, los sntomas de la
infeccin no aparecen hasta que los filamentos adultos se tornan frtiles.
Durante la reproduccin de las plantas infectadas, el genoma viral se expresa
al formar estructuras reproductivas similares a esporangios pluri- y uni-loculares,
pero que en lugar de producir esporas producen partculas virales y cuya
deformacin estructural resulta evidente (Mller 1991).
Experimentalmente se ha comprobado su carcter infeccioso en Ectocarpus
siliculosus, Feldmannia simplex y Feldmannia irregularis (Mller & Frenzer 1993),
adems de su especificidad sobre la especie que infectan (Mller y Stache 1992).
Aunque la reduccin de tasas metablicas, includa la fotosntesis, durante
infecciones virales en plantas superiores est bien documentada (Matthews 1991) y
existen algunos reportes sobre su efecto en cianobacterias (Misra et al. 1982), los
efectos de las infecciones virales sobre el metabolismo de macroalgas no han sido
descritos, a pesar de que algunas partculas virales han sido asociadas con
desarreglos celulares (Toth y Wilce 1972) y con la formacin de tumores (Apt y
Gibor 1991).
22
24
25
Fig. 2.1.- Zonas de recoleccin. 1.- Bocabarranco, La Furnia; 2.- La Puntilla; 3.- Muelle de
Taliarte; 4.- Muelle de Arinaga; 5.- San Cristbal.
26
Pterocladia capillacea
27
28
Peso
molecular
Concentracin
M
Peso
mg/l
NO3K
101.10
824
83
NH4Cl
53.50
45
NO3NH4
80.04
32
Na2HPO4.12H2O
358.14
NaH2PO4.2H2O
156.01
13
KH2PO4
136.09
11
K2HPO4
174.18
14
82
29
29
31
33
Fig. 2.3.- Sistema de cultivo por aspersin. (a) Vista general del sistema, (b) Unidad de cultivo en
funcionamiento, mostrando detalle del sistema de riego (modificado de Haglund y Pedersn 1988).
35
(1)
36
(2)
A
en donde
Los factores de conversin de peso seco a peso fresco equivalen entre el 8090% del peso original, se utiliz un valor promedio del 0.1.
37
2.2.-Cultivo en tanque.
El cultivo se realiz en tres tanques de 300 l, rectangulares (1,170 cm x 730
cm x 490 cm) de polister estratificado con fibra de vidrio, recubiertos con una capa
de pintura epxica. La densidad de la especie Grateloupia doryphora se ajust
semanalmente a 2 g^l-1. Las algas se mantuvieron en rotacin permanente por la
inyeccin de aire a travs de una tubera situada en el fondo del tanque.
38
Cada
tanque
se
Durante
el cultivo se tomaron plantas a distintos intervalos (7, 15, 30, 45 das), en base a su
desorganizacin para su posterior inclusin y estudio histolgico. Al trmino del
cultivo (3 meses) se analizaron treinta plantas de cada tratamiento, determinando
bajo lupa el grado de desorganizacin producido por los distintos sistemas. Los
resultados se presentaron como porcentaje de pices desorganizados del total de
pices de cada planta. Tambin se determin el porcentaje de regeneracin de pices
rotos accidentalmente.
39
2.-
3.-
4.-
40
70 mg/l
Na2HPO4
12 mg/l
Solucin de micronutrientes
FeSO4^7H2O
H3BO4
MnSO4^H2O
ZnCl2
CoCl2
Na2-EDTA^2H2O
Agua destilada
50.34 mg
1.14 g
123 mg
10.5 mg
4 mg
1g
200 ml
Solucin EDTA-Fe
FeSO4^7H2O
Na2-EDTA^2H2O
245 mg
330 mg
Agua destilada
50 ml
100 mg/l
41
42
t0 = peso inicial
t7 = peso final.
(3)
43
44
45
4.4.1.- Cultivo.
Las algas se mantuvieron durante dos semanas en cultivos stock, en agua de
mar filtrada y enriquecida (ver Tabla 2.2), en una cmara de cultivo (20 bC, 100
mol m-2 s-1 y fotoperiodo 12:12).
Treinta fragmentos circulares de 1.2 cm de dimetro de U. rigida y G.
doryphora, o porciones apicales de 1 cm de largo de G. cornea y F.spiralis, se
inocularon en matraces Ehrlenmeyer con 100 ml de agua de mar filtrada
(enriquecida con 0.8 mM NaNO3 y tamponada a pH 8.2 con 50 mM Tris-HCl)
suplementada con sulfato de cobre a las siguientes concentraciones de cobre: 0, 0.5,
2.5, 5.0, 10.0 M. La tasa de crecimiento, fotosntesis y fluorescencia se determin
al cabo de una semana de cultivo bajo las mismas condiciones de los cultivos stock.
La medicin del efecto a corto plazo del tratamiento de cobre (2.5, 5.0, 10.0
M) sobre U. rigida, se efectu midiendo la fluorescencia de los fragmentos cada
hora durante las primeras seis horas tras el tratamiento.
46
(4)
(5)
47
48
(6)
(7)
49
Las
concentraciones
de
ficoeritrina
ficocianina
se
analizaron
50
51
III. RESULTADOS.
III. Resultados.
55
56
Tabla 3.1.- Crecimiento y produccin de las especies cultivadas en el sistema por
aspersin bajo condiciones ambientales en invernadero. La tasa de crecimiento para
cada nivel se expresa como incremento porcentual de biomasa por da.
I = Nivel superior, II = Nivel medio, III = Nivel inferior.
Especies
estudiadas
Tasa
crecimiento
I
II
Produccin
g^^m-2^d-1
III
Especies locales
Codium taylori
2.0(0.10)
1.7(0.81)
1.9(0.63)
2.63 ? 0.26
Grateloupia doryphora
1.6(0.12)*
1.5(0.18)*
1.1(0.17)*
3.19 ? 0.66
Grateloupia doryphora1
1.6(0.28)*
1.5(0.12)*
0.9(0.16)*
1.52 ? 1.08
Gelidium canariensis
0.7(0.04)*
0.6(0.09)*
0.4(0.02)*
2.35 ? 1.25
Gelidium arbuscula
0.3(0.02)*
0.5(0.06)*
Pterocladia capillacea
Laurencia obtusa
Solieria filiformis
0.8(0.46)
1.19 ? 0.95
0.6(0.02)*
0.4(0.09)*
1.70 ? 0.54
1.1(0.60)
0.6(0.36)
2.83 ? 1.09
---------------
0.50 ? 0.08
Hypnea musciformis
0.3(0.10)
0.4(0.16)
Gracilaria ferox
0.5(0.05)*
0.4(0.08)*
0.2(0.06)*
1.01 ? 0.39
Gracilaria ferox1
0.2(0.06)**
0.7(0.15)**
1.5(0.17)**
0.62 ? 0.18
Furcellaria lumbricalis1
0.4(0.15)*
0.2(0.04)
0.1(0.04)
0.17 ? 0.03
Gracilaria verrucosa1
0.5(0.10)**
0.4(0.01)**
1.2(0.35)**
1.00 ? 0.48
0.6(0.22)
0.5(0.07)
0.59 ? 0.07
Especies forneas
Gracilaria cornea1
III. Resultados.
57
III. Resultados.
59
Fig. 3.1.- Dendrograma UPGMA entre las concentraciones de los 26 metales analizados en
funcin de la procedencia del material.
Fig. 3.2.- Anlisis de componentes principales entre los distintos sistemas de cultivo empleados.
SC = San Cristbal, T = Cultivo en tanque, S = Cultivo por aspersin. Periodo de recoleccin y
cultivo 1 = Otoo, 2 = Invierno, 3 = Primavera.
60
% Apices
desorganizados
Nmero de
apices examinados
Estacionario
7113
90.3
5528
4.0
6305
III. Resultados.
61
Fig. 3.3.- Planta de Solieria filiformis despus de dos semanas en cultivo turbulento, la flecha
indica la desorganizacin apical en la casi totalidad de los pices.
62
III. Resultados.
63
Fig. 3.4.- Secuencia de desorganizacin apical en Solieria filiformis. (a) Desarrollo inicial de callo
al cabo de una semana (b) Corte transversal del callo (c) Masa celular desorganizada (d) Seccin
transversal del callo despus de dos semanas (e) Proliferacin de ramificaciones a partir del callo
a la tercera semana de cultivo (f) Seccin transversal de la nueva ramificacin surgida del callo.
Escala de la barra para las figuras (a), (c), (e) = 0.5mm, y para las figuras (b), (d), (f) = 8.5 m.
64
65
III. Resultados.
(19.9 y 19.2 bC
67
III. Resultados.
Agua de mar
59
38
Provasoli
15
75
III. Resultados.
69
70
III. Resultados.
71
Fig. 3.7.- Plantas de Solieria filiformis antes del tratamiento con Hyale schmidti (a1, b1), tres das
despus (a2,b2) y siete das despus (b3).
72
73
III. Resultados.
Concentracin % NaClO
seg.
0.5
1.0
3.0
15
XX
30
XX
XXX
60
XXX
XXX
X
XX
XXX
Ningn efecto
Decoloracin marginal en Ulva
Decoloracin significativa de Ulva
Decoloracin apical en Grateloupia
74
Fig. 3.8.- Fotosntesis mxima de Grateloupia doryphora una hora despus de los distintos
tratamientos con NaClO.
III. Resultados.
75
Fig. 3.9.- Efecto del CuSO4 sobre la tasa de crecimiento de Ulva rigida, Fucus spiralis, Grateloupia
doryphora y Gracilaria cornea.
76
Pm
Fv
Ulva rigida
Control
0.5
2.5
5.0
10.0
1.09(0.02)
0.95(0.02)
0.82(0.02)
0.76(0.01)
0.49(0.02)
100
87.1
75.2
69.7
44.9
0.88(0.17)
0.72(0.11)
0.30(0.02)
0.11 --0.07 ---
100
81
41
15
9
Fucus spiralis
Control
0.5
2.5
5.0
10.0
1.54(0.03)
1.69(0.1)
1.14(0.04)
1.01(0.04)
0.82(0.08)
100
109.7
74.0
65.6
53.2
0.34(0.03)
0.36(0.07)
0.30(0.06)
0.25(0.03)
0.26(0.08)
100
105
88
73
76
1.13(0.09)
0.90(0.12)
0.74(0.09)
0.52(0.06)
0.42(0.04)
100
83.3
68.5
48.1
38.9
0.54(0.03)
0.54(0.07)
0.42(0.14)
0.40(0.12)
0.36(0.12)
100
100
77
74
66
1.70(0.12)
1.01(0.1)
0.74(0.06)
0.72(0.04)
0.69(0.06)
100
59.4
43.5
42.3
40.6
1.02(0.23)
0.90(0.15)
0.88(0.11)
0.76(0.24)
0.69(0.04)
100
88
86
74
67
Grateloupia doryphora
Control
0.5
2.5
5.0
10.0
Gracilaria cornea
Control
0.5
2.5
5.0
10.0
77
III. Resultados.
Clorofila a
Clorofila b
Clorofila c
U. rigida
0
551 ? 20
387 ? 4
0.5
645 ? 14
475 ? 6
2.5
510 ? 21
424 ? 20
5.0
398 ? 19
352 ? 2
10.0
304 ? 3
304 ? 3
F. spiralis
0
440 ? 51
35 ? 8
0.5
461 ? 80
49 ? 17
2.5
229 ? 32
28 ? 7
5.0
169 ? 14
16 ? 2
10.0
138 ? 19
15 ? 2
78
Clorofila a
Ficoeritrina
Ficocianina
122 ? 3
830 ? 20
184 ? 14
0.5
98 ? 4
323 ? 8
86 ? 5
2.5
87 ? 3
305 ? 33
80 ? 19
5.0
61 ? 1
145 ? 1
33 ? 1
10.0
23 ? 1
42 ? 29
9? 2
77 ? 1
650 ? 13
141 ? 12
0.5
71 ? 3
358 ? 33
76 ? 14
2.5
61 ? 2
346 ? 13
17 ? 1
5.0
57 ? 1
140 ? 1
11 ? 1
10.0
41 ? 1
G. doryphora
G. cornea
---
11 ? 2
3.3.3.- Fluorescencia.
En la Figura 3.10 se muestran las variaciones de fluorescencia variable en los
diversos tratamientos con cobre. La relacin inversa entre Fv y concentracin de cobre
fue similar a la descrita en el apartado anterior para fotosntesis.
III. Resultados.
79
80
Fig. 3.11.- Relacin Fv / Fm para cada especie con respecto a la concentracin de cobre empleada.
81
III. Resultados.
Correlacin (r)
0.90
0.86
0.85
Significancia
P<0.05
P<0.05
P<0.05
Correlacin (r)
0.95
0.96
0.98
Significancia
P<0.001
P<0.001
P<0.001
Correlacin (r)
0.85
0.75
0.95
Significancia
P<0.05
n.s.
P<0.05
Correlacin (r)
0.93
0.96
0.89
Significancia
P<0.05
P<0.05
P<0.05
Ulva rigida
Fucus spiralis
Gracilaria cornea
Grateloupia doryphora
82
Fig. 3.12.- Efecto de la concentracin de cobre sobre la relacin Fv / Fm en Ulva rigida durante las
primeras seis horas de incubacin.
Fig. 3.13.- Fluorescencia variable en Ulva rigida tratada con distintas concentraciones de cobre
durante un periodo de seis horas.
III. Resultados.
83
Fig. 3.14.- Curvas de fotosntesis - irradiacin de los distintos clones de Feldmannia simplex.
Las plantas sanas mostraron una mayor actividad fotosinttica (P < 0.05) que
las asintomticas, y stas a su vez superiores a las plantas infectadas.
84
Pm
Rd
alfa
Ic
sana
Flex 12 n
1.09
(0.41)
-0.21
(0.06)
0.019*
(0.002)
15.6
(2.3)
asintomtica
Flex 12 n-v-n
0.83
(0.26)
-0.21
(0.05)
0.014
(0.001)
15.9
(5.3)
infectada
Flex 12 n-v
0.69
(0.31)
-0.15
(0.05)
0.013*
(0.005)
20.7
(9.3)
Feldmania simplex
Feldmannia irregularis
sana
Firr 28 n
0.69*
(0.15)
-0.13
(0.04)
0.012**
(0.001)
15.71
(4.7)
infectada
Firr 63 v
0.22*
(0.11)
-0.10
(0.04)
0.004**
(0.001)
37.25
(8.4)
III. Resultados.
85
Fig. 3.15.- Curvas de fotosntesis - irradiacin de los distintos clones de Feldmannia irregularis.
86
Clorofila a
Clorofila c
Chlc/Chla
Feldmannia simples
sana
Flex 12 n
332 ? 15
121 ? 12
0.36 ? 0.02
asintomtica
Flex 12 n-v-n
272 ? 60
99 ? 16
0.36 ? 0.02
infectada
Flex 12 n-v
193 ? 26
77 ? 16
0.39 ? 0.05
Feldmannia irregularis
sana
Firr 28 n
398 ? 21
195 ? 19
0.47 ? 0.02
infectada
Firr 63 v
303 ? 12
112 ? 10
0.37 ? 0.04
III. Resultados.
87
Fig. 3.16.- Seccin al microscpio electrnico de una zona infectada en Feldmannia irregularis
mostrando la destruccin del cloroplasto y la gran cantidad de partculas virales asociadas.
90
IV. DISCUSIN.
IV. Discusin.
91
92
IV. Discusin.
93
Ti, Cr, Cd en el cultivo por aspersin en otoo (de 1.3 a 2.5 veces superior al
valor ms alto descrito en macroalgas costeras de zonas contaminadas).
Ni, para ambos sistemas de cultivo en otoo (5 veces superior al valor ms
alto descrito en macroalgas costeras de zonas contaminadas).
Los altos niveles de Ti pueden explicarse por la difusin al medio procedente
tanto de lminas de poliestireno (que cubran la superficie del tanque para reducir la
evaporacin) como de la pintura epxica que cubra los tanques. El elevado
contenido en Cr y Ni puede ser debido a la contaminacin producida tanto por la
estructura cromada del invernadero, como por las mallas de sombreado,
parcialmente metlica.
El elevadsimo contenido en Co de poblaciones naturales (12-17 veces
superior al de plantas en cultivo) puede ser debido a un escape fortuito (en anlisis
posteriores no se volvieron a detectar) de Co procedente de un Hospital cercano,
cuyos desages estan muy prximos a la poblacin de donde se tomaron las plantas.
Las concentraciones de Pb y As de las plantas cultivadas por aspersin
indican los riesgos que conlleva este sistema para cultivar macroalgas destinadas
para consumo humano, ya que sobrepasan los valores mximos permitidos en
macroalgas alimentarias (5.0 y 3 g^g-1 respectivamente, Whyte y Englar 1983,
Mabeau 1989). No obstante, las elevadas concentraciones de Hg en poblaciones
naturales durante los periodos de muestreo, las hacen, al menos a G, doryphora, no
aptas para consumo humano.
94
IV. Discusin.
95
96
Enteromorpha intestinalis
Ulva augusta
Feofita
70.0%
29.0%
20.0%
17.0%
17.0%
10.0%
10.0%
9.2%
9.0%
7.8%
Ecklonia cava
Macrocystis pyrifera (gametofito)
Laminaria sinclairii (gametofito)
Sargassum muticum
Pelvetia fastigiata
Sargassum hystrix
Cystoseira osmundacea
Laminaria sinclairii (esporofito)
Sargassum fluitans
Macrocystis pyrifera (esporofito)
Rodofita
87.0%
84.0%
81.0%
75.0%
33.0%
18.0%
16.0%
15.0%
10.0%
7.0%
4.0%
2.0%
1.0%
0.9%
0.6%
0.5%
0.3%
Porphyra lanceolata
Porphyra perforata
Porphyra nereocystis
Smithora naiadum
Laurencia sp
Phyllophora nervosa
Furcellaria fastigiata
Gelidium vagum
Gracilaria ferox
Eucheuma alvarezii
Gracilaria verrucosa
Ceramium kondoi
Gigartina exasperata
Eucheuma uncinatum
Gelidium robustum
Gracilaria papenfusii
Gelidium versicolor
IV. Discusin.
97
98
controlar epifitas con hipoclorito sdico (Ugarte y Santelices 1992), ms que con la
falta de efectividad del mtodo, es muy probable que est relacionada con las
elevadas concentraciones y tiempos de incubacin utilizados por estos autores.
IV. Discusin.
99
100
IV. Discusin.
101
102
V. CONCLUSIONES.
V. Conclusiones.
105
1.- Conclusiones.
1.1.- Aunque la adaptacin de macroalgas al sistema de cultivo por
aspersin est condicionada tanto por la morfologa como por el hbitat
intermareal natural, slo estas caractersticas no son indicativas de su
productividad en cultivo por aspersin. La produccin de especies agarofitas
y carragenofitas de inters industrial en sistemas por aspersin son muy
bajas, por lo que no es econmicamente rentable su cultivo por este sistema.
106
1.5.- La preferencia del anfpodo Hyale schmidti sobre las especies epfitas
ms comunes de cultivos intensivos de carragenofitas permiten considerar su
cocultivo como una estrategia vlida de lucha biolgica. No obstante, esta
estrategia slo permitira un control parcial de la cantidad de biomasa epifita
ya que un determinado nivel de escasez provocara prdidas de biomasa por
fragmentacin.
BIBLIOGRAFA.
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Bibliografa.
119
ANEXO I.
Anexo I.
123
Curvas de fotosntesis para Grateloupia doryphora tratada con CuSO4 , control ( ), 0.5 ([), 2.5 (),
5.0 ( ), 10.0 (\) M Cu.
Curvas de fotosntesis para Gracilaria cornea tratada con CuSO4, control ( ), 0.5 ([), 2.5 (), 5.0
( ), 10.0 (\) M Cu.
124
Curvas de fotosntesis para Ulva rigida tratada con CuSO4, control ( ), 0.5 ([), 2.5 (), 5.0 ( ), 10.0
(\) M Cu.
Curvas de fotosntesis para Fucus spiralis tratada con CuSO4, control ( ), 0.5 ([),
2.5 (), 5.0 ( ), 10.0 (\) M Cu.