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UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD

Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y del Medio Ambiente- ECAPMA


Programa:
PREINFORME: Bioqumica Metablica -LBM
Nombre y Apellido: Johanna Jerez Gutirrez. Cdigo: 23973887 Fecha: 29 de Abril del 2015

TTULO DE LA PRCTICA: ACTIVIDAD UREASICA EN


MUESTRAS DE ORIGEN METABOLICO
Introduccin
La bioqumica metablica es el estudio a nivel bioqumico de
las caractersticas y los procesos metablicos de las clulas
de los seres vivos. De una forma ms especfica, se estudian
los principios por los que se producen las reacciones
bioqumicas.
La ureasa es una enzima que cataliza la hidrolisis de urea a
dixido de carbono y amoniaco dependiendo de las
reacciones bioqumicas enzimticas (RBE) en dichas
reacciones las enzimas actan sobre las molculas
denominadas sustratos las cuales se convierten en
molculas deferentes llamados productos.LA ureasa se
encuentra en varios tejidos vegetales lo cual puede ser
usada en el anlisis de alimentos y forrajes.

1.3.2 En Laboratorio
1. pesamos 2,0g de muestra(suelo, forraje)
2. En un Beaker adicionamos la muestra previa y agregamos 20m
NaCl al 1%.
3. Agitar por 2 min (varilla de vidrio).}
4. Llevamos a Shaker a 150rpm por 5 min.
5. Dejamos reposar 3min.
6. Se filtr y se midi el volumen filtrado.
7. Se coloc el volumen filtrado en un tubo de centrifuga.
8. Se llev a la centrifuga a 3500rpm por 5 min.
9. Se rotulo la muestra y se llev a refrigerar.
1.3.3. Diagrama de Flujo

Pesaje de
la
muestra.
(Wm)

Diagrama conceptual

Extraccion
.
Mezcla de
reactivos

Color azulverdoso.
Muestra +.
(AU)

2.

1. Materiales y mtodos
1.1. Materiales y equipos requeridos
Material / Equipo
Tubos de ensayo con
gradilla.
Erlenmeyer
Pipetas.
Bao de termostato
Pinzas para bureta
Beaker
Bureta
Erlenmeyer
soporte universal

Caractersticas
Medianos y 15ml.
125ml
5 y 10 ml
Control de temperatura
Mango de pasta
400ml
25ml
100ml

registrar
datos.
ml
gastados
de HCl

Color rosado
violeta
palido.

Titulacin.
Adicionamos
HCl (gotas).

Repetir
proceso

Para todos
las
muestras.
(standar,
M1 y M2)

Finalizar
Calcular
datos.

Tabla de datos
Muestras.
Wm (g)

Vf (mL)

Suelo
Forraje
Estndar.
Blanco

3. Resultados esperados:
En la extraccin de la muestra se espera que se torne una
tonalidad verdosa lo que nos indica que es una muestra
positiva para la actividad eursica, en caso que no sea as,
se debe realizar nuevamente el procedimiento.
En el proceso de titulacin al ir adicionando lentamente el

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HCL, aparece un color violeta plido, lo cual indica que los


equivalentes-gramo del hidrxido de amonio fueron
neutralizados por lo equivalentes-gramo del acido
clorhdrico.
Determinaremos en cul de las muestras existentes se
presenta la mayor actividad eursica (suelo-forraje).

Glosario:
1.2 Reactivos a utilizar
Reactivo

Ureasa
Urea
Cloruro de
mercurio
cido Clorhdrico.
Indicador de
Tashiro.

Frmula

Concentraci
n

En Buffer
CH4N2O
HgCL2

1%
0,25M
1%

HCL

0,1N

C15H14N3O2Na+
C16H18N3SCL3H2O+C2H6O

1.3 Procedimiento
1.3.1. En campo:
Muestra de forraje fresco: 250 gr troceado a un tamao de
0,5cm y empacado en bolsa de papel peridico, rotulado y
sellado con la descripcin y ubicacin geogrfica del lugar de
recoleccin.
Muestra de Suelo: 250gr tomado a una profundidad de
20cm, secado al aire, sobre papel peridico y empacado en
bolsa plstica negra, sellado y rotulado.

Capacidad amortiguadora: Potencial qumico que tiene los


sistemas edficos para regular y controlar su PH, Cuando son
sometidos a procesos de acidificacin o alcalinizacin; dicha
regulacin se da por la presencia de sistemas amortiguadores
biolgicos, existentes en la materia orgnica e inorgnica del suelo

La catalasa: como biocatalizador de origen proteico, es una


enzima oxido-reductasa que participa en la degradacin del
perxido de hidrogeno (H2O2), hasta oxigeno molecular (O2 ) y agua
(H2O).

Solucin Buffer: Es la mezcla en concentraciones relativamente


elevadas de un cido dbil y su base conjugada, es decir, sales
hidroliticamente activas. Tiene la propiedad de mantener estable el
PH de una disolucin frente a la adiccin de cantidades
relativamente pequeas de cidos o bases fuertes.
Bibliografa (Normas APA)

http://datateca.unad.edu.co.
http://www.gaqsa.com/Muestro%20Forrajes.htm.

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Ttulo de la prctica:
PRACTICA N2 CARBONO ORGANICO, MATERIA ORGANICA Y
CAPACIDAD AMORTIGUADORA DE SUELOS.
Introduccin

1.3.2 En Laboratorio
Medida y rotulacin de las muestras, titulacin
volumtrica con NaOH 0.1 N, tcnica potencio -mtrica,
registro de mL gastado; tabla de datos.

El suelo es un mezcla heterognea constituida por


componentes orgnicos e inorgnicos, presentes en fases
lquida, slida y gaseosa; dichos componentes estn en 1.3.3. Diagrama de Flujo
permanente bio-actividad para generarle caractersticas
Agitar y
Adicionar 100ml
de agua destilad
Pesar las muestras
Colocarlas en el erlenmeyer
5g
fisicoqumicas y bioqumicas especficas, lo cual determina su
utilizacin en el sector agrcola y pecuario.
Capacidad amortiguadora y potencial amortiguador, nos ayuda a
evaluar si el Ph se mantiene constante en las reacciones enzimticas,
las cuales pueden ser con sustancias acidas o bases, con las cuales
debemos tener mucho cuidado ya que las especies vegetales y
animales deben tener un pH adecuado de tal manera que se podr
obtener un ptimo rendimiento y desarrollo de los organismos, en el
caso de las plantas si el cultivo establecido no cuenta con un pH
optimo ser muy difcil lograr que las plantas asimilen los nutrientes,
causando que las reacciones catalizadas por enzimas no tengan una
velocidad constante y se dificulte el proceso de sobrevivencia en la
planta.
Diagrama conceptual

Agitar por 1 min


Agregar 5 ml de HCL Medir
Medir PH y tomar datos
PH
y

4.

Tabla de datos
Mtodo espectrofotomtrico.

Muestras
M1 (suelo)
Blanco

Peso(Wm)
19,9965gr

VFeSO4(mL)
10ml
4.2ml

Datos potenciomtricos para capacidad


amortiguadora de suelos.
Muestras
Peso(Wm)
pH1
Suelo 1
19,9965gr
5,71
Agua
6,39
destilada
Solucin
7,20
buffer

Absorbancia
0,044

pH2
6,38
10,80
9,71

3. Resultado:

Al realizar el procedimiento de la capacida


amortiguadora por el mtodo de titulacin y con la ayuda
del potencimetro llegar a siguientes concluir:
Si los procesos biolgicos son dependientes del pH; Si un
pequeo cambio en el pH lleva a un gran cambio en la
velocidad de un proceso.
Glosario:

La ecuacin de Henderson-Hasselbalch es una frmul


qumica que se utiliza para calcular el pH, de una solucin
buffer, o tampn, a partir
del pKa (la constante d
disociacin del cido) y de las concentraciones d
equilibrio del cido o base, del cido o la base conjugada

3.

Materiales y mtodos

El espectrofotmetro es un instrumento que permit


comparar la radiacin absorbida o transmitida por una
solucin que contiene una cantidad desconocida de
soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la
misma sustancia.

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3.1. Materiales y equipos requeridos


Material / Equipo
Beaker.

Bibliografia (Normas APA)

Caractersticas
250ml.

Mdulo de bioqumica metablica, AUTOR: JAIRO


ENRIQUE GRANADOS MORENO., MSc. DOCENTE
ECAPMA.

Potencimetro.
Erlenmeyer
Pipeta graduada

125ml
10ml

Esptula

Metlica

Agitador.

Vidrio

Bureta graduada

25ml

Soporte universal.

Metlico, con pinza para bureta.

www.ehu.es/biomoleculas/1b/pdf/5_buffers.pdf

Equipo de titulacin.

1.2 Reactivos a utilizar


Reactivo
Acido clorhdrico.
Fenolftaleina

Buffer fosfato
pH=6,8-7,0
Hidrxido de sodio.

Frmula
HCL

Concentracin
0,1N

C20H14O4
HPO4/H3PO4
NaOH
0,1N

Agua destilada.
Sulfato de hierro.

FeSO4

cido fosfrico

H3PO4

1.3 Procedimiento
1.3.1. En campo:
Variable(indicador)
evaluada(o)

Tcnica analtica utilizada

pH

Mtodo potencio -mtrico

Capacidad Amortiguadora

Mtodo titulacin
volumtrica

1N

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PRACTICA N3: DETERMINACION DE CARBOHIDRATOS


NO ESTRUCTURALES (CNE), EN FORRAJES, POR EL
MTODO DE FENOL-ACIDO SULFURICO.

1.3.3. Diagrama de Flujo

Introduccin
Es un mtodo que determina la cantidad de carbohidratos
totales, no estructurales, basndose en el contenido de
almidones hidrolizables y azcares solubles.
METODO FENOLACIDO
SULFURICO.
Determina la
cantidad
De carbohidratos no
estructurales

Basndose en el
contenido de

6. Tabla de datos
DATOS PARA LA CUANTIFICACION DE CNE
Azucares
solubles.

Almidones
hidrolizables

Indicadores
Wm
Vf
Ast

5. Materiales y mtodos
5.1. Materiales y equipos requeridos
Material / Equipo

Am

Caractersticas

Pipetas.

5 y 10ml

Tubos de ensayo.

13ml

Valor.
2,0415gr
33.3ml
0,070
0,786.

3. Resultados esperados:

Gradillas.
Pinzas para bureta.
Buretas

25ml.

Erlenmeyer

125ml.

Matraz aforado

100ml

Beaker.
Soporte universal.

400ml.

1.2 Reactivos a utilizar


Reactivo
Cloruro de
mercurio.

Descripcin.
Peso de la
muestra
Volumen
filtrado.
Absorbancia
del estndar.
Absorbancia
del tubo que
contenia el
FFCNE

Frmula

HgC12

Determinar
estructurales

La muestra FNCE tendr una cantidad apreciable d


carbohidratos que podrn ser determinados con e
espectrofotmetro.
Determinar el grado de transmitancia y absorbencia en las
muestras.
Glosario:

Concentraci
n
1%

los

carbohidratos

no

Mtodo de fenol-sulfrico: Este mtodo propuest


por Dubois en 1956 se fundamenta en que lo
carbohidratos son particularmente sensible a cido
fuertes y altas temperaturas. Bajo estas condiciones una

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Acido clorhdrico.
Hidroxido de Sodio
fenol

HCL
NaOH
C6H6O

0,1N
0,1N
5%

1.3 Procedimiento
1.3.1. En campo:
Toma de muestra de +/- 2gr de muestra de suelo tamizado.
1.3.2 En Laboratorio

serie de reacciones complejas toman lugar empezando


con una deshidratacin simple, si se contina e
calentamiento y la catlisis cida se producen vario
derivados del furano que condensan consigo mismos
con otros subproductos para producir compuesto
coloridos producto de la condensacin de compuesto
fenlicos y con heterociclos con el nitrgeno como
heterotomo.

Pesar +/- 2gr de muestra en la balanza analitica y


registrar como:(Wm),depositarla luego en un vaso de
precipitado y agregar 50ml de slucin de HCL al 0,6%.
Agitar constantemente con la varilla de vidrio durante
5min.

Termostato: Es el componente de un sistema de contro


simple que abre o cierra un circuito elctrico en funcin d
la temperatura. Su versin ms simple consiste en
una lmina bimetlica como la que utilizan los equipo
de aire
acondicionado para
apagar
o
encende
el compresor.

Llevar ael beaker con la solucin el bao termostatado y


calnetar a 90C, durante 20min.

cido
sulfrico:
Es
un compuesto
qumic
extremadamente corrosivo cuya frmula es H2SO4. E
el compuesto qumico que ms se produce en el mundo
por eso se utiliza como uno de los tantos medidores de la
capacidad industrial de los pases.

Bibliografa
dejar enfriar por 5min,y filtar obre papel filtro.Medir el
volumen filtrado(Vf) y pasar 5ml a un tubo de
ensayo,adicionar a este 5ml de NaOH 0,6%,agitar por 15
segundos,tapar y rotular asi:FFCNE: filtardo de forraje para
carbohidratos no estructurales.

Mdulo de bioqumica metablica, AUTOR: JAIRO


ENRIQUE GRANADOS MORENO., MSc. DOCENTE
ECAPMA.

Granados, J.,(2010),Protocolo prcticas de laboratorio


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Ttulo de la prctica:

ACTIVIDAD CATALTICA DE LA CATALASA (ACAT).

1.3.2 En Laboratorio
1. Pesar ms o menos 2g de muestra

Introduccin

La catalasa como biocatalizador de origen proteco, es


una enzima xido-reductasa que participa en la
degradacin del perxido de hidrgeno (H2O2), hasta
Oxgeno molecular (O2) y agua (H2O).

2.

Diagrama conceptual

3.
4.

La catalasa
como
biocatalizador
de origen
proteico.

Es una
Enzima xidoreductasa

Que participa en
la
Degradacin del
peroxido de
hidrogeno.
Hasta
Oxigeno
molecular.

5.

picada pulverizada, registrar el valor


como: Wm y colocarla en un tubo de
centrifuga.
Luego adicionar 10mL de solucin fra
de buffer fosfato 0,05M, pH=6,8-7,0,
agitar, con agitador de vidrio (3min) y
centrifugar a 2500rpm durante 5min.
Sacar el sobrenadante, filtrar y medir
su volumen.
registrarlo como: Vf y tomar 5 mL de
ste para depositarlo en un tubo de
ensayo, taparlo, rotularlo como:
EVCAT(extracto de verdura para
catalasa ) EFCAT(extracto de fruta
para catalasa), ECCAT (extracto de
concentrado para catalasa), ESCAT.
Colocarlos inmediatamente en bao de
hielo.

1.3.3. Diagrama de Flujo

protegiendolas de
la toxicidad de los
radicales
libres peroxido,
inpidiendo su
acumulacion
y beneficiando
el metabolismo
celular.

Esta presente
en
peroxisomas y
mitocondrias
de celulas
animales y
vegetales.

7. Materiales y mtodos
7.1. Materiales y equipos requeridos
Material / Equipo

Caractersticas

Soporte universal.
Bureta.
Pinzas.

Muestreo

Mezclar
reactivos

Titular

Medir
columen
de
muestra

Rotular

Viraje de
color?

Agregar
bufer
fosfato

Agitar

Resultados
Finalizar.

y agua.

8.

Tabla de datos

Erlenmeyer
Pipeta graduada.
Beaker
Tubos de ensayo

400ml.

Muestras /Tubos
Suelo.
Forraje.
Blanco

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Gradilla.

1.2 Reactivos a utilizar


Reactivo
Perxido de
Hidrogeno

Frmula

Concentracin
0.05 M

3. Resultados esperados:
Determinar la actividad de la catalasa por mtod
permanganomtrico (Ulrich.,1980)
Glosario:

cido sulfrico

2N

Buffer Fosfato

0,05 M

Permanganato de
potasio

0.01 M

Muestras(suelo,
forraje)
1.3 Procedimiento
1.3.1. En campo:
Muestra de forraje: aproximadamente 250g, troceado o picado a un
tamao de 0,5cm y empacado en una bolsa de papel peridico,
sellada y rotulada.
Muestra de Suelo: Aproximadamente 250g, tomado a 20cm de
profundidad, secado al aire, sobre papel peridico y empacado en
bolsa de plstico negra, sellada y rotulada.

CATALASA: Es una enzima que se encuentra en organismos vivos


cataliza la descomposicin del perxido de hidrgeno (H 202) e
oxgeno y agua.

CATALISIS: La catlisis es el proceso por el cual se aumenta l


velocidad de una reaccin qumica, debido a la participacin de un
sustancia llamada catalizador y las que desactivan la catlisis so
denominados inhibidores. Un concepto importante es que e
catalizador no se modifica durante la reaccin qumica, lo que l
diferencia de un reactivo.

PEROXISOMAS: Son orgnulos citoplasmticos muy comunes e


forma de vesculas que contienen oxidasas y catalasas. Estas enzima
cumplen funciones de detoxificacin celular.

Bibliografa

Granados, J.,(2010),Mdulo Bioqumica Metablica, ECAPMA; UNAD


Granados, J.,(2014),Protocolo prcticas de laboratorio, ECAPMA;
UNAD.

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Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y del Medio Ambiente- ECAPMA
Programa:
PREINFORME: Bioqumica Metablica -LBM
Nombre y Apellido: Johanna Jerez Gutirrez. Cdigo: 23973887 Fecha: 29 de Abril del 2015

1.3.3. Diagrama de Flujo


TTULO DE LA PRCTICA: CUANTIFICACIN DE NITRGENO NO
PROTEICO (NNP) (Fraccin A de Van Soest )

Introduccin

El nitrgeno no proteico Corresponde a los compuestos que poseen


nitrgeno en su molcula en formas diferentes a la que es propia de
las protenas (cadenas peptdicas). (Aminocidos libres, Purinas,
Amidas, Alcaloides, Sales de amonio, Compuestos ntricos y Urea). Su
utilizacin queda limitada a nivel del ciego y colon principalmente. La
urea en el intestino delgado es absorbida como tal y solamente es
desdoblada en los sacos fermentadores.
Mentefacto

10. Tabla de datos


9. Materiales y mtodos
9.1. Materiales y equipos requeridos
Material / Equipo

Caractersticas

Tubos de ensayo
Gradilla.
Pinzas para bureta.
Erlenmeyer

Indicado
Wm(g)

125ml.

Pipetas

5 y 10ml

Matraz aforado.

100ml

Bao termostatado
Beaker
Bureta
Soporte universal.

1.2 Reactivos a utilizar


Reactivo

Muestras /Tubos
Suelo.
Forraje.
Estndar.
Blanco

400ml
25ml

Frmula

Concentracin

3. Resultados esperados:

Cuantificar el nitrgeno no proteco


(NNP) ,tambin denominado fraccin A
de Van Soest , mediante el reactivo
especfico : cido Tricloroactico (ATA).
Aplicar tcnicas instrumentales
analticas de Kjeldhal y
espectrofotomtricas para determinar

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Nombre y Apellido: Johanna Jerez Gutirrez. Cdigo: 23973887 Fecha: 29 de Abril del 2015

cido
Tricloroactico
(ATA)

CI3- CCOOH)

10 %.

Agua destilada

H2O

20 mL

el contenido de NNP y Protena


verdadera (PV) en forrajes y
concentrados.
Glosario:

1.3 Procedimiento

Pesar +/- 2,0 g de muestra (Suelo, forraje) (picada


pulverizada) , en balanza analtica y registrar
como ( y colocar en vaso de precipitado
Adicionar 20 mL de agua destilada fra, agitar por
1min
Dejar reposar la mezcla por 15 min.
Adicionar 30 mL de solucin de ATA, agitar por
1min.
Reposar a Temperatura ambiente por 20 min
Filtrar sobre papel filtro en probeta
Medir el volumen del filtrado(Vf)
Recolectar 5 mL del filtrado, colocarlos en un tubo
de ensayo y rotularlo: FFNNP: filtrado de forraje
para nitrgeno no proteco FSNNP (Filtrado de
suelo para nitrgeno no proteco
Tapar los tubos y guardar en nevera a
refrigeracin, hasta ser utilizados en la mezcla
reactiva.
En Laboratorio:

Cuantificar el Nitrgeno en el filtrado, por mtodo


espectrofotomtrico de BiuretLowry a)
Mezcla de reactivos Alistar 4 tubos de ensayo,
rotularlos as: B:blanco; st :estndar; m-1 y m2 Adicionar los siguientes reactivos en el orden
dado, segn el cuadro:

Nitrgeno no proteico: Se denomina Nitrgeno n


proteico a los compuestos de nitrgeno que pueden se
convertidos en protenas por algunos organismos vivos
Muchos organismos superiores no pueden obtene
aminocidos de otras formas, ms que absorbindolos de
la dieta. Los cuales pueden ser convertir alguno
aminocidos en otros diferentes. Los compuestos que
forman
el
NNP
son
los
qu
contienen amonaco, nitritos y nitratos y
otros
com
la urea, el biuret o el cido rico. Los organismos qu
puede
utilizar
el
NNP
son
los hongos
las plantas y algas, bacterias y organismos que viven e
simbiosis con ellos.

Espectrofotomtricas:
Un espectrofotmetro es
u
instrumento usado en el anlisis qumico que sirve par
medir, en funcin de la longitud de onda, la relacin entr
valores de una misma magnitud fotomtrica relativos a
dos haces de radiaciones y la concentracin o reaccione
qumicas que se miden en una muestra. Tambin e
utilizado en los laboratorios de qumica para
la cuantificacin de sustancias y microorganismos.

Anlisis Kjeldahl: Las determinaciones de nitrgeno de


Kjeldahl se realizan sobre una variedad de sustancias

Bibliografa

Mdulo de bioqumica metablica, AUTOR: JAIRO


ENRIQUE GRANADOS MORENO., MSc. DOCENTE
ECAPMA.

Granados, J.,(2010),Protocolo prcticas de laboratorio


ECAPMA; UNAD.

Agitar vigorosamente por 30 segundos y dejar reposar


de 5 a 10 min, a temperatura ambiente.

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