Universidad Andrs Bello

Facultad de Ciencias biolgicas

Carrera de Bioqumica
Laboratorio de Bioqumica Vegetal
BIO365

LABORATORIO N4: RESPUESTA DE LAS

PLANTAS AL ESTRS BITICO
Respuesta de Arabidopsis thaliana a la infeccin
con Pseudomona syringae.

Profesor: Gabriel Len

Instructores: Noel Lucca; Felipe Moraga; Antonia Yarur.
Autores: Claudia Iturriaga; Marcelo Lazcano; Juan Montecinos.

INTRODUCCIN
Las plantas son seres vivos ssiles. Debido a esto deben defenderse desde esa posicin
contra el ataque de varios organismos como bacterias, hongos, virus, nematodos e incluso
otras plantas.1 A pesar de no poseer un sistema inmune tan complejo como el de los
animales, durante su vida son sorprendente capaces de defenderse de sus atancantes 2. Slo
una pequea proporcin de patgenos son capaces de enfermar realmente una planta. 1 Para
que esto suceda, se deben dar 3 condiciones (FigN.1), conocidas como el tringulo de la
enfermedad: donde la planta debe estar susceptible a ser infectada, por ejemplo por un mal
estado nutricional. El patgeno debe ser capaz de sobrepasar las barreras fsicas impuestas
por la planta, por ejemplo poseer enzimas lticas que sean capaces de degradar la cutcula o
la pared celular. Y por ltimo el medio ambiente debe estar en condiciones favorables para la
entrada y el crecimiento del patgeno, por ejemplo si es un hongo, que haya un alto
porcentaje
de
humedad.3
Existen diversos estrategias para penetrar en el
organismo, ya sea mediante el uso de enzimas lticas o
la penetracin por aberturas naturales de la planta, una
vez dentro todos los patgenos siguen una de las 3
principales de estrategias de ataque para utilizar a la
planta
y
sus
recursos1.
Los necrotrficos, los cuales matan a la planta, luego
colonizan y se alimentan del tejido muerto, Ej.: Botrytis
cinerea. Los biotrficos, los cuales mantienen viva a la
planta y mantienen una suerte de armona con la
misma, Ej.: Pseudomona spp. Y los Hemibiotrficos los
cuales mantienen viva a las clulas de la planta por un
tiempo y en etapas ms tardias las matan igual, Ej.:
FigN1: Tringulo de la enfermedad.
Phytophfthora infestans.1
Con respecto a la respuesta de la planta fente a los patgenos se plantea un modelo,
denominado zig-zag (FigN.2). Donde PTI (Pattern Triggered Immunity) es la primera respuesta
defensiva de la planta gatillada por la unin de receptores denominados PRRs (PAMPs
recognition receptors) que se encuentran en la membrana de las clulas vegetales, con los
PAMPs (patrones moleculares asociados a patgenos, como flagelina o quitina). Esta
respuesta es intermedia e involucra un aumento en la expresin de hormonas asociadas a
estrs como Etileno, ABA, SA y JA, genes relacionados con patognesis, expresin de
metabolitos secundarios con actividad antimicrobiana como las fitoalexinas, produccin de
especies reactivas de oxgeno (ROS) y produccin de polisacridos para formar la callosa. 4,2,1
La ETS (Effector Triggered Supceptibility) sucede cuando el patgeno libera efectores (Avr)
que son capaces de reprimir o disminuir la PTI, la planta se vuelve susceptible y la inmunidad
se ve disminuida. La ETI (Effertor Triggered Immunity) es provocada por la unin de protenas
denominadas R que se encuentran en el citoplasma de las clulas con los efectores formando
complejos Avr-R, activando una segunda respuesta inmunolgica por parte de la planta que
busca aumentar la amplitud de la defensa y esta vez lograr eliminar al patgeno. 1,4 Los
efectos de la activacin de ste tipo de respuesta se generan para asegurar una contencin
rpida tanto espacial como temporal del patgeno. Hay un mecanismo denominado HR o
respuesta hipersensible, donde se observa necrosis del tejido infectado para evitar que el
patgeno se propague a otras partes de la planta. Existe evidencia de que no todas las
relaciones Avr-R implicana una HR, pero la mayora de las veces en que la planta es capaz de
notar al patgeno el tejido termina muriendo ya sea debido a la muerte celular programada
o por efecto de
las sustancias liberadas que resultan txicas como los ROS. 1
Existe un mecanismo denominado SAR (resistencia sistmica adquirida), que se produce
luego de la infeccin, donde el tejido infectado es capaz de avisar a los tejidos cercanos e

incluso a plantas contiguas que hay o hubo un patgeno presente y de esta forma generar
resistencia al mismo antes de que llegue a infectar a otros. Evitando una posible interaccin
compatible entre patgeno y hospedero. El mecanismo completo no est dilucidado pero al
parecer sera la hormona c. Saliclico la seal mvil que lo provocara. 1
Las interacciones incompatibles (hospedante resistente, patgeno avirulento) se definen
como aquellas que involucran sistemas de reconocimiento (PTI/ETI) que activan la expresin
de mecanismos de defensa, que pueden estar asociados a la manifestacin de HR. Por otro
lado, en las interacciones compatibles (hospedante susceptible, patgeno virulento) el
reconocimiento no ocurre, la respuesta inmunolgica no es activada y la planta se enferma. 6
En este trabajo se evaluara el posible rol del cido saliclico en el modelo Arabidopsis thaliana
frente a la infeccin por Pseudomona syringae.y el establecimiento de si la cepa inoculada es

FigN2: Modelo de zigzag que ilustra la respuesta cuantitativa del sistema inmune en plantas.

virulenta o avirulenta.

4,5

MATERIALES Y MTODOS
Materiales:
Plantas de Arabidopsis thaliana de 6 semanas.
Cepas de Pseudomona syringae (DC3000 pv. Tomato)
Medio de cultivo King B (rinfampicina 50g/mL; kanamicina 50g/mL)
MgCl2 10mM
SA 1mM
Aspersor
Jeringa de tuberculina (1mL)
Espectrofotmetro
Cubeta de plstico 1mL
Centrfuga
Tubos Falcon de 15mL
Metodologa:
La infiltracin se realiz a partir de inculos de Pseudomona syringae que fueron crecidas en
medio King B (rifampicina 50 g/mL; kanamicina 50 g/mL).
Este cultivo fue centrifugado a 3000 RPM por 5 minutos. Luego se elimin el el sobrenadante
y el pellet se resuspendi en 5 mL. de Cloruro de Magnesio 10 mM.
Se tom 1 mL de la solucin anterior y se les midi la (OD) a 600 nm. Posteriormente fueron
diluidas hasta alcanzar una OD600 de 0,02.
Se escogi una planta de cada macetero, ya que unas haban sido rociadas con SA 1mM y las
otras no, 24 horas antes del prctico. Y con la jeringa llena de la solucin anterior se procedi
a infiltrar 3 hojas por la parte abaxial de cada una preocupndose de que no fueran contiguas
y que la solucin penetrara en al menos un 50% de la hoja.
Los resultados fueron observados y fotografiados 24, 48 y 120 horas despus de la
infiltracin.

RESULTADOS
DISCUSIN
CONCLUSIONES

BIBLIOGRAFA
1.- Buchanan, Biochemistry & Molecular Biology of Plants, Captulo 21. Responses to Plant
Pathogens
2.- Taiz
L. y Zeiger E., Plant Physiology Quinta edicin, Captulo XIII. Secondary
Metabolites and Plant Defense.
3.- Leonard J. Francl. The Disease Triangle: a plant pathological paradigm revisited. The Plant
Health Instructor. DOI: 10.1094/PHI-T-2001-0517-01.
4.- Jonathan D. G. Jones & Jeffery L. Dangl. The plant immune system. Vol 444j16 November
2006jdoi:10.1038/nature05286. Nature Reviews.
5.- Katia Ojito-Ramos, Introduccin al sistema inmune en plantas. Biotecnologa Vegetal Vol.
10, No. 1: 3 - 19, enero - marzo, 2010. Resea cientfica.
6.- Kenneth Madriz Ordeana. Mecanismos de defensa en las interacciones planta-patgeno.
Manejo Integrado de Plagas (Costa Rica) No. 63 p.22 32, 2002.