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1 Radioinmunoensayos
o
2 Unin no especfica
3 Referencias
Radioinmunoensayos[editar]
RIA Directo[editar]
El RIA se basa en la competencia existente entre el antgeno no marcado y una
cantidad conocida del antgeno marcado para formar los complejos AgAc o Ag*Ac.
Con estos tres componentes (Ag, Ag* y Ac) puede realizarse el ensayo en el que
manteniendo constante la cantidad de Ag* y Ac se observar que a mayor cantidad
de Ag menos Ag* queda unido a la cantidad fija de Ac (y por tanto
menos radiactividad), lo que permitir relacionar la radiactividad con la
concentracin de Ag.
1. Se obtienen anticuerpos especficos, para ello se inyectan en un animal
pequeas cantidades en varias dosis del antgeno muy purificado.
El animal generar anticuerpos que podrn ser recogidos del plasma
sanguneo.
Ag*
Ag
Suero normal
Tubo 1
1mL
1mL
0mL
1mL
Tubo 2
1mL
1mL
0,1mL
0,9mL
Tubo 3
1mL
1mL
0,2mL
0,8mL
Tubo 4
1mL
1mL
0,3mL
0,7mL
Tubo 5
1mL
1mL
0,4mL
0,6mL
Tubo 6
1mL
1mL
0,5mL
0,5mL
Para la realizacin del calibrado se dispone de varios tubos en los que se aaden
una cantidad fija de Ac y de Ag* y una cantidad variable de Ag a la que se aade
suero normal para enrasar al mismo volumen. As obtendramos una tabla como la
adjunta.
En el tubo 1 Ac no se une a Ag. En el tubo 2 la mayora se une a Ag*, la
competencia se va desplazando poco a poco a Ag por lo que la radiactividad de la
muestra va disminuyendo (disminuyen los complejos Ac-Ag*). Se crea una recta R
vs. [Ag].
RIA de Inhibicin[editar]
Usado cuando no se puede marcar el antgeno.
Unin no especfica[editar]
Normalmente se suelen obtener valores de radiactividad por encima del 0 cuando
[Ag]=0, esto se debe a la unin no especfica (NSB). Se suelen usar algunos
pocillos para calcular el NSB que existe (haciendo un blanco de calibrado). Para ello
se aade a un pocillo 1mL de suero+1mL de Ag*+XmL de Ag+(1-X)mL de suero y
al no aadir Ac se realiza el mismo proceso y al lavar se mide la unin no
especfica.