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1 EPIDEMIOLOG
EPIDEMIOLOGA
REA
MDULO 1.1
UNIDAD
Vigilancia Epidemiol
Epidemiolgica
Gu
Gua para la Toma,
1.1.9
Conservaci
Conservacin y
Envi
Envi de Muestras
Cl
Clnicas
Epidemiologa
Programas
De Salud
3
Salud
Ambiental
CONTENIDO
INTRODUCCIN
GUIA PARA LA TOMA, CONSERVACION Y ENVIO DE MUESTRAS CLINCAS
INSTRUCCIONES PARA LA TOMA Y TRANSPORTE DE MUESTRAS
TOMA DE MUESTRA
MATERIALES PARA TOMA DE MUESTRAS
TUBOS AL VACO PARA TOMA DE MUESTRA DE SANGRE CON ANTICOAGULANTE
TUBOS AL VACO PARA TOMA DE MUESTRAS DE SANGRE SIN ANTICOAGULANTE
ESCOBILLONES O HISOPOS ESTRILES
ESCOBILLONES O HISOPOS ESTRILES
MEDIOS DE TRANSPORTE PARA ESTUDIOS VIRALES
MEDIOS DE TRANSPORTE PARA MUESTRAS BACTERIOLOGICAS
TRANSPORTE DE MUESTRAS
TRANSPORTE DE MUESTRAS REFRIGERADAS
TRANSPORTE DE MUESTRAS NO REFRIGERADAS
INSTRUCCIONES PARA LA TOMA Y TRANSPORTE DE MUESTRAS ESPECFICAS
HISOPADO FARINGEO
DIAGNSTICO DE TOSFERINA
ESPUTO
COPROCULTIVO
FAVOR TENER EN CUENTA LAS SIGUIENTES PRECAUCIONES
LQUIDO CEFALORRAQUDEO
TOMA
DE
MUESTRAS
DE
TEJIDO
PARA
ESTUDIO
HISTOLGICO
E
INMUNOHISTOQUMICO. INSTITUTO DE ANATOMA PATOLGICA JOS ANTONIO
O'DALY
CONSIDERACIONES GENERALES SOBRE LA TOMA, CONSERVACIN Y ENVIO DE LAS
MUESTRAS PARA VIROLOGA
ASPIRADO NASOFARNGEO
HISOPADO NASAL O FARNGEO
HISOPADO OCULAR
HECES
HISOPADO RECTAL
LIQUIDO DE VESCULAS, MATERIAL DE PSTULAS, COSTRAS
LIQUIDO CEFALORRAQUDEO
SANGRE PERIFRICA
ORINA
SUERO
MATERIAL DE AUTOPSIA
MUESTRAS PARA EL DIAGNSTICO DE RABIA
CEREBRO
MUESTRAS PARA EL DIAGNSTICO DE FIEBRE HEMORRGICA VENEZOLANA
INTRODUCCIN
Los laboratorios constituyen un medio ambiente de trabajo especial, que pueden presentar
riesgos qumicos, fsicos o biolgicos. Uno de los aspectos que debe considerarse en el trabajo de
los laboratorios es el cumplimiento de los requisitos de calidad relacionados con la bioseguridad.
Para el cumplimiento de ello es necesario establecer e implementar procedimientos estndares
generales y particulares para cada laboratorio, disponer de equipos de bioseguridad, y establecer
el diseo e instalaciones del laboratorio que den suficientes garantas para ejecutar un trabajo
seguro y con la calidad requerida.
La bioseguridad requiere un conjunto de medidas mnimas a ser adoptadas con el fin de reducir o
eliminar los riesgos para el personal, la comunidad y el medio ambiente, que pueden ser
producidos por agentes infecciosos, fsicos, qumicos y mecnicos. Se desarrolla en conjunto con
el personal que debe cumplir las normas, las autoridades que deben hacerlas cumplir y la
direccin del laboratorio que debe instrumentar los medios para que se cumplan.
Este documento lejos de ser un tratado, quiere ser un punto de apoyo para los laboratorios y sus
equipos de trabajo inmersos en nuestro sistema nacional de salud, para brindar as un mejor
ambiente de trabajo y a su vez mayor satisfaccin a los pacientes que acuden diariamente a estos
servicios.
TODA MUESTRA DEBE VENIR ACOMPAADA DE UNA FICHA DEL PACIENTE CON LOS
DATOS CLNICOS Y EPIDEMIOLGICOS. (La informacin provista en esta ficha es muy
valiosa, fecha de toma de muestra, fecha de inicio de sntomas, sntomas y que estos coincidan
con los exmenes solicitados.)
La ficha debe ser llenada con la mayor informacin posible.
TOMA DE MUESTRA
Las muestras clnicas pueden ser utilizadas para el diagnstico clnico, identificacin y/0
preservacin de cepas virales, bacterianas, micolgicas y parasitolgicas. En todos los casos,
independientemente de que algunos tipos de muestras requieran metodologas de coleccin
especiales, la toma de las muestras deber cumplir con ciertas normas bsicas tales como:
1. La muestra debe ser representativa del proceso infeccioso.
2. Obtener el volumen apropiado de la muestra.
3. Las muestras clnicas deben ser tomadas lo ms precoz posible y antes de la administracin
de terapias antimicrobianas.
4. La toma se debe realizar en condiciones de asepsia evitando la contaminacin con agentes
exgenos. Esto es particularmente importante en pacientes hospitalizados y en muestras de
campo.
5. Cada tipo de
incluso para su
transporte.
6. Toda muestra debe ir acompaada de una solicitud de investigacin donde se indique
claramente:
1) Nombre completo,
2) N de Cdula de Identidad
3) Edad/Sexo
4) Direccin/telfono
5) Medico e institucin que refiere.
6) Fecha de inicio de los sntomas
7) Diagnostico presuntivo
8) Datos Epidemiolgicos
9) Examen solicitado (serologa, cultivo, aislamiento, PCR, identificacin)
10) Tipo de muestra.
11) Signos y sntomas
12) Datos de laboratorio
13) Indicar tratamiento si/no (cual, que dosis y por cuanto tiempo)
De manera tal que la muestra sea procesada convenientemente y se puedan interpretar los
resultados de forma confiable.
Todas las situaciones no previstas en este manual deben ser consultadas con los especialistas
antes de tomar las muestras.
En caso de no disponer de alguno de los sistemas de transporte recomendados consultar con la
Unidad de Atencin al Paciente que ser la que deber instrumentar las soluciones alternativas.
Los colores de los tapones son de convencin internacional que aplica en todas las marcas
(ver Foto 1.).
Tubos con EDTA, tapn lila, de capacidad de 5.0 ml. Es el anticoagulante que mejor
conserva las clulas y de mayor uso en todos los casos que se requieren exmenes de
cuadro hemtico y hemoparsitos.
Tubos con Citrato de Sodio, tapn azul claro, de capacidades de 2.5 ml. Se usan cuando
se requieren pruebas de coagulacin y no se recomienda para cuadro hemtico y
hemoparsitos por la baja capacidad que tienen de conservar la morfologa celular.
Tubos con heparina, tapn verde. Se usan para realizar algunas pruebas inmunolgicas
que detectan antgenos. No se recomiendan para cuadro hemtico por la baja capacidad
conservadora.
Alternativa: Cuando no se dispone del tubo nuevo al vaco adecuado, se puede recurrir a
preparar tubos con EDTA, Se puede usar con dos gotas de EDTA al 10 % para 5 ml de
sangre.
FOTO 1. TUBOS AL VACO PARA TOMA DE MUESTRA DE SANGRE
TUBOS AL VACO
ANTICOAGULANTE
PARA
TOMA
DE
MUESTRAS
DE
SANGRE
SIN
Por convencin tienen tapn rojo, y vienen en capacidades de 3.0, 5.0, 7.0 y 10.0 ml Estos
tubos son de vidrio o plstico neutros protegido con silicona para evitar la hemlisis y facilitar
la retraccin del cogulo. Adicionalmente se pueden utilizar como recipiente estril para
muestras de bacteriologa.
Tubos de estas mismas caractersticas pueden venir adicionados de un gel activador de
coagulacin o gel para separar el cogulo del suero sin necesidad de usar otro tubo.
Alternativa: Cuando no se dispone de tubos al vaco nuevos, se puede usar tubos de
laboratorio tratados (lavados con detergente neutro, enjuagados con agua destilada y secos al
calor) No se debe usar esta alternativa cuando se requiere anlisis de minerales.
Por seguridad se prefieren los de material plstico a los de vidrio. Son tiles para la toma y
manejo de muestras de materia fecal, orina, esputos e histopatologa. Algunas marcas ofrecen
material estril que los hace tiles para estudios bacteriolgicos. Frascos de capacidad de 30 a
100 ml son suficientes para manejar cualquier muestra.
o nylon
Necropsias)
(Hisopados nasales y
TRANSPORTE DE MUESTRAS
Por norma general lo ideal es que las muestras lleguen al laboratorio lo antes posible ya que
hay diferencias para cada tipo de muestra y anlisis solicitado lo cual es explicado ms
adelante.
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Al empacar muestras que deben ser enviadas refrigeradas entre un sitio y otro dentro del pas
por va area o terrestre, se debe cumplir con las siguientes condiciones:
Verificar que las muestras estn correctamente identificadas.Siempre utilice un marcador
resistente al agua o en su defecto un lpiz de cera para identificar las muestras. Cuando se
humedecen las muestras y se ha usado un marcador soluble en agua se pierde la
identificacin y con ello el trabajo de haber tomado varias muestras. Cuando se usan los
recipientes adecuados estos tienen espacios para identificar la muestra, normalmente muy
bien adheridos. Cuando tenga necesidad de usar cinta o esparadrapo asegrese que este
rodee completamente el tubo o frasco.
Los frascos, viales, tubos, medios de transporte,
Laboratorio del Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel (INH RR), Ciudad Universitaria
detrs del Hospital Clnico Universitario (UCV-Caracas). Telfonos: (0212) 693.45.51 (Gerencia
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de Diagnstico y Epidemiologa), 662.47.97 (Presidencia), 662.95.61 (Central) y 693.45.51664.47.97 (Fax).Horario de atencin: Lunes a Viernes de 7 a.m. a 4 p.m.
Identifique la caja con la palabra RIESGO BIOLOGICO e informe al laboratorio la empresa
transportadora y nmero de gua para estar pendiente de su recepcin.
RIESGO BIOLOGICO
TRANSPORTA MUESTRAS CLINICAS
NO TOCAR
SOLO PERSONALAUTORIZADO
1. Obtenga la muestra antes de iniciar el tratamiento con antibiticos. En caso de que esto no
sea posible, informe al laboratorio sobre el tratamiento que est recibiendo, la dosis y el
tiempo.
2. El exudado es generalmente ms abundante por la maana, de manera que es conveniente
recoger la muestra luego de levantarse.
3. El paciente debe venir al laboratorio sin realizar grgaras con ningn tipo de enjuague bucal.
4. El material necesario para la toma de muestras consiste en un paquete con hisopos
buferados estriles y un tubo con el medio de transporte (Amies con carbn). Guarde este
material en la nevera hasta su uso (nunca en el congelador).
5. Para tomar la muestra coloque al paciente en la posicin ms cmoda y con la mejor
iluminacin.
6. Hacer pronunciar la Letra A, y bajar la lengua suavemente con un baja lengua estril.
7. Frotar el algodn del hisopo con firmeza, pero con suavidad por ambas caras de las
amgdalas y luego por la pared posterior de la faringe, de manera que todo el algodn quede
empapado con exudado faringeo.
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laboratorio.
11.
Coloque la muestra en una bolsa plstica tipo Clip y la historia del paciente en otra
bolsa plstica.
DIAGNSTICO DE TOSFERINA
1. La muestra se debe tomar nicamente a nios que presentan un cuadro clnico compatible:
Fiebre
Tos paroxstica o emetizante
Menos de 7 das de haber iniciado los sntomas
2. No se recomienda la toma de muestra en pacientes que han recibido tratamiento
antimicrobiano previo, ya que es poco probable aislar el agente causal bajo estas condiciones.
3. La muestra indicada es el Hisopado Nasofaringeo con hisopo de alginato de calcio o dacrn.
4. Tomar el hisopo de barra flexible e introducirlo en la fosa nasal lentamente, hasta llegar a la
zona nasofaringea, realizar movimientos de rotacin, para producir tos.
5. Sacar el hisopo y colocarlo en el medio de transporte para Bordetella pertussis (**), cortar el
resto de barra y tapar el medio.
6. Coloque la muestra en una bolsa plstica tipo Clip y la historia del paciente en otra bolsa
plstica.
7. GUARDAR Y/O TRANSPORTAR EN NEVERA (4C), HASTA SU SIEMBRA.
(**) Nota: El medio de transporte es cefalexina 4g/ml. Debe ser mantenido en nevera.
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ESPUTO
1. Obtenga la muestra antes de iniciar el tratamiento con antibiticos. En caso de que esto no
sea posible, informe al laboratorio el tratamiento que est recibiendo, la dosis y el tiempo.
2. La secrecin es generalmente ms abundante por la maana, de manera que es conveniente
recoger la muestra luego de levantarse.
3. La muestra debe recogerse en un recipiente estril, como los utilizados para la recoleccin
de orina (Urolab).
4. Destapar el recipiente nicamente en el momento de recoger la muestra. Colocar la tapa en
un lugar limpio y NO TOCAR CON LOS DEDOS EL INTERIOR DE LA TAPA O DEL
RECIPIENTE.
5. Hacer varias inspiraciones profundas para favorecer la tos y luego toser fuertemente para
expulsar la secrecin bronquial.
6. NO RECOGER NI SALIVA NI SECRECIN NASAL.
7. Tape muy bien el frasco e identifquelo con una etiqueta legible con la siguiente informacin:
nombre del paciente, tipo de muestra, fecha y hora de la toma de la muestra.
8. Coloque la muestra en una bolsa plstica tipo Clip y la historia del paciente en otra bolsa
plstica.
9. Mantenga la muestra a TEMPERATURA AMBIENTE y trigalo al laboratorio lo ms pronto
posible.
COPROCULTIVO
1. Obtenga la muestra antes de iniciar el tratamiento con antibiticos. En caso de que esto no
sea posible, informe al laboratorio el tratamiento que est recibiendo, la dosis y el tiempo.
2. La muestra puede ser recogida en su casa, en este caso debe pedir previamente al
laboratorio el material necesario, el cual consiste en un paquete con hisopos buferados
estriles y un tubo con el medio de transporte (Cary & Blair). Guarde este material en la nevera
hasta su uso (nunca en el congelador), fuera del alcance de los nios.
3. Debe recoger las heces en la forma ms estril posible, puede ser en un plato, un vaso de
cama o un recipiente cualquiera. Lo ms importante es que hayan sido lavados previamente
con agua y jabn, y luego enjuagados con abundante agua hervida.
4. En caso necesario se puede recoger la muestra mediante un hisopado rectal, que debe ser
obtenido por personal entrenado, en nios es usual y preferible.
5. Una vez recogidas las heces, impregne con las mismas los hisopos suministrados,
prefiriendo las partes que contengan moco y sangre.
6. Introduzca el hisopo en el medio de transporte hasta el fondo del tubo, parta la porcin de
madera del hisopo que queda por fuera y deje el resto en el tubo. Tpelo inmediatamente,
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identifquelo con el nombre del paciente y mantngalo en ambiente fresco (nunca en nevera).
Llvelo lo antes posible al laboratorio.
Identifique el tubo con una etiqueta legible con la siguiente informacin: nombre del
paciente, tipo de muestra, nombre del mdico, fecha y hora de la toma de la muestra. Se
recomienda utilizar un pedazo de tirro y escribir con lpiz de grafito, no usar bolgrafo pues
se puede borrar.
No llene el tubo con heces, es suficiente con la cantidad que queda adherida al algodn
del hisopo.
Las personas que sufren de estreimiento o en contactos, pueden utilizar un laxante salino
(sal de fruta) y recoger para el examen en la tercera evacuacin. En nios se pueden
utilizar supositorios de glicerina peditricos.
En lactantes, se puede recoger las muestras directamente del paal, pero asegurndose
que las heces sean recin emitidas y que no hayan sido adsorbidas por el paal. Se
recomienda colocar el paal al revs, con el plstico hacia adentro para as poder obtener
la muestra.
Coloque la muestra en una bolsa plstica tipo Clip y la historia del paciente en otra bolsa
plstica.
LQUIDO CEFALORRAQUDEO
1. Obtenga la muestra antes de iniciar el tratamiento con antibiticos. En caso de que esto no
sea posible, informe al laboratorio el tratamiento que est recibiendo, la dosis y el tiempo.
2. El lquido cefalorraqudeo se obtiene mediante una puncin lumbar, la cual debe realizarse
bajo condiciones de estricta asepsia, para evitar contaminacin de la muestra.
3. Lave completamente sus manos son solucin jabonosa yodada, squelas con toallas de
papel desechable y use guantes estriles.
4. Use tapa boca.
5. Limpie el sitio de puncin por dos veces con gasa estril impregnada en solucin de
alcohol-yodado. Es importante aplicar la solucin en forma concntrica (de dentro hacia
fuera), friccionando lo suficiente como para efectuar tambin limpieza mecnica.
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6. Limpie una vez ms con gasa estril impregnada con alcohol etlico de 70% para eliminar
el Yodo.
7. Deje secar el desinfectante por 1 minuto
8. No toque de nuevo el sitio de la puncin.
9. Efecte la puncin utilizando equipo desechable destinado para este fin. Trasvase el
lquido a un tubo estril con tapa de goma o rosca, NUNCA UTILIZAR TUBOS CON TAPA
DE ALGODN O GASA. Si obtiene suficiente cantidad de lquido enve el ltimo tubo para
el cultivo bacteriolgico.
10. Identifique el tubo con una etiqueta legible con la siguiente informacin: nombre del
paciente, tipo de muestra, fecha y hora de la toma de la muestra.
11. La muestra debe ser almacenada y transportada a TEMPERATURA AMBIENTE y llegar al
laboratorio antes de las dos horas siguientes.
12. Coloque la muestra en una bolsa plstica tipo Clip y la historia del paciente en otra bolsa
plstica.
13. Enve adjunto la historia con los datos del paciente e indique el tipo de anlisis requerido.
1. El espesor de la muestra de tejido no debe ser mayor de 5 mm de espesor (la longitud del
mismo puede variar).
2. La muestra de tejido, una vez separada del cuerpo humano o animal, debe ser colocada
inmediatamente en un envase que contenga formol, con una relacin de volumen
tejido/formol no menor de 1:10 (por cada volumen de tejido usar 9 volmenes de formol).
3. Para el estudio inmunohistoqumico resulta imprescindible que se utilice el formol tamponado
al 10%, el cual debe ser preparado de la siguiente manera:
Formol puro
...........100 cc.
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1. La probabilidad para aislar virus depende en gran medida de que el tipo de material sea el
ms adecuado, en relacin a la distribucin del agente etiolgico dentro del organismo
infectado. Ver gua para estudio virolgico (Anexo N 1 y 4).
2. Una vez iniciado el proceso de infeccin viral, entran en juego los mecanismos de defensa
inmunes no especficos y especficos para eliminar el agente infeccioso, por lo que es de
gran importancia tomar las muestras para aislamiento viral durante la fase aguda de la
enfermedad, antes de las 72 horas de inicio de los sntomas. (Ver Anexo N 2)
3. El estudio serolgico requiere de la demostracin de la elevacin de 4 veces en el ttulo de
anticuerpos especficos
primero de los cuales debe ser un suero agudo, tomado tan pronto como sea posible
despus del inicio de los sntomas, y otro colectado en la fase convaleciente (2-3 semanas
despus del primero). (Ver Anexo N 2). En algunos casos el serodiagnstico puede ser
realizado mediante la demostracin de anticuerpos clase IgM en un suero tomado a partir de
los 7-10 das del inicio de los sntomas, siendo detectable hasta por un perodo de 3 meses.
Esto ofrece la posibilidad de hacer un diagnstico rpido basado en la evaluacin de un (1)
suero nico tomado preferiblemente en fase temprana de la enfermedad (4to. da de inicio de
los sntomas).
4. Las posibilidades de aislamiento viral estn influenciadas por el tiempo entre la toma de la
muestra y la inoculacin en los sistemas susceptibles, por tanto una vez tomada la muestra
colquela en nevera a 4 C o en bao de hielo y envela en refrigeracin a la mayor
brevedad al Departamento de Virologa del Instituto Nacional de Higiene. Si no se garantiza
el envo inmediato, las muestras deben congelarse a -70 C y transportarse en hielo seco.
Es oportuno sealar que se pueden congelar muestras de suero. EVITE LA CONGELACIN
DE SANGRE COMPLETA.
5. Las muestras para diagnstico viral rpido, deben enviarse inmediatamente al Laboratorio,
en refrigeracin. No congelar. Ver agentes virales que actualmente se pueden detectar por
diagnstico rpido (Anexo N 4).
6. Las muestras hisopado rectal y/o hisopado farngeo, para aislamiento de Enterovirus,
Adenovirus y Reovirus, deben tomarse dentro de los 10 das del comienzo de la enfermedad.
Aunque estos agentes algunas veces son excretados por perodos hasta de cuatro (4)
semanas en las heces, las posibilidades de aislamiento son limitadas.
7. Sndromes enceflicos asociados con virus Herpes,
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9. Para el estudio de otros agentes virales a los sealados en el anexo No. 1 y pruebas
especiales como PCR para la deteccin de material gentico viral, sugerimos establecer
contacto con el Departamento de Virologa, Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel.
ASPIRADO NASOFARNGEO
Con un hisopo estril frotar las fosas nasales y con otra frotar el paladar hasta que el paciente
sienta nusea. Colocar el hisopo en un tubo estril conteniendo 2 ml de medio de transporte
Hanks. Quiebre el hisopo y tape el tubo.
HISOPADO OCULAR
El hisopo se coloca
Esta muestra, si se logra obtener, es preferible que el hisopado rectal, ya que suministra una
cantidad mayor de material y aumenta notablemente la posibilidad de aislar virus. Se tomarn
unos 5 gramos de material fecal y se colocarn en un frasco o tubo de boca ancha estriles.
Las muestras de heces para el intento de aislamiento deben ser colectadas tan pronto como
sea posible y durante los primeros 7-10 das despus del inicio de los sntomas. La muestra
debe ser transportada en hielo hmedo o con paquetes refrigerantes; si la muestra no se puede
enviar al laboratorio dentro de las 48 horas despus de la coleccin debe ser congelada a
20C .
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HISOPADO RECTAL
Esta muestra debe utilizarse slo en el caso de que no sea posible tomar una muestra de
heces Se toma la muestra con un hisopo previamente humedecido en medio de transporte libre
de suero, insertndolo 4-6 cm. dentro del recto tratando de obtener la mayor cantidad posible
de material fecal. La muestra debe ser tomada durante los primeros 7-10 das despus del
inicio de los sntomas El hisopo se coloca luego en un tubo, de la misma manera que se hizo
con el hisopo farngeo. Transportar al laboratorio en hielo hmedo o con paquetes
refrigerantes, si la muestra no puede ser enviada dentro de las 48 horas despus de tomada
debe ser congelada a 20C o a 70C y transportada en hielo seco.
La muestra debe ser tomada durante los primeros 3 das de iniciada la erupcin. Despus de
haber limpiado las lesiones con solucin salina fisiolgica estril, se destapan las lesiones con
un bistur de punta fina o con una aguja hipodrmica; el material epidrmico desprendido se
coloca en un tubo esterilizado. El fluido vesicular o pustuloso se toma con un tubo capilar o se
aspira con una inyectadora pequea dentro de una aguja hipodrmica, vaciando el contenido
en un tubo esterilizado que contenga 2-3 ml de medio de transporte. Las muestras deben ser
transportadas al laboratorio en hielo hmedo o paquetes refrigerantes o congeladas a 70C en
el caso de que no puedan ser procesadas en las siguientes 48 horas.
Si se desea diagnstico rpido haga raspado de la base de la lesin coloque el material en tres
reas definidas de una lmina portaobjeto, djela secar
y envela inmediatamente al
LIQUIDO CEFALORRAQUDEO
Para el aislamiento de virus colectar 3-5 ml de Lquido Cefalorraqudeo (LCR), durante los 710 das despus del inicio de la enfermedad colocar en un tubo estril de vidrio, con tapa de
rosca y sin medio de transporte y enviar al laboratorio en hielo hmedo o con paquetes
refrigerantes; si la muestra no va a ser enviada de inmediato deber ser congelada a 70C y
eventualmente transportada en hielo seco ya que los virus son muy lbiles en este medio. En
ocasiones, es til examinar la presencia de anticuerpos clase IgM e IgG en el LCR para el
diagnstico de ciertas infecciones virales que comprometen el Sistema Nervioso Central,
colectando al mismo tiempo una muestra de sangre para comparar los ttulos obtenidos en el
LCR y en el suero, para los ensayos serolgicos no se requiere refrigerar la muestra.
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SANGRE PERIFRICA
Es til para
ORINA
Generalmente esta muestra se usa para el aislamiento de citomegalovirus, aunque virus como
rubola y
urinario con solucin salina fisiolgica estril, tomar en un frasco esterilizado unos 30 ml de
orina, recogindola en la mitad de la miccin. En nios pequeos habra que recurrir a
cateterismo, o tratar la muestra por medio de bolsas plsticas especialmente diseadas. Enviar
en refrigeracin inmediatamente al Instituto Nacional de Higiene.
centrifugar fra el mismo da que se tom la muestra a 1500 RPM por 5 minutos, el sedimento
debe resuspenderse en 0,5-2 ml de medio de transporte viral, este medio que puede ser PBS o
solucin de Hanks debe ser proporcionado por el Laboratorio. La muestra debe ser enviada al
Laboratorio a la mayor brevedad posible, con refrigerantes o si han sido congeladas a -70 o
40C, deben ser transportadas en hielo seco; en el caso de que la centrifugacin no sea posible
debe ser enviada de inmediato al laboratorio con refrigerantes.
SUERO
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MATERIAL DE AUTOPSIA
Las muestras (encfalo, bulbo espinal, mdula espinal, hgado, pulmn, etc.) dependern de la
enfermedad que se sospeche. El material debe tomarse lo ms pronto posible, despus de la
muerte, con las mximas precauciones de asepsia, cambiando de instrumentos para cada
rgano, y colocando un fragmento de cada uno en envase distinto, con solucin salina estril,
sin usar ningn tipo de preservativo. El material as conseguido se enva inmediatamente al
laboratorio, o se mantienen refrigeradas hasta su envi.
CEREBRO
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viales para temperatura ultra baja, deben ser congelados a 70C o en su defecto enviarlas con
refrigerantes al servicio de epidemiologa local, o al Instituto Nacional de Higiene
Para los estudios serolgicos extraer 10cc de sangre y obtener igualmente el suero,
conservarlo en congelacin a 20C o refrigerado hasta su envo al laboratorio.
ANEXO N 1
Gua para Estudio Virolgico
Tipo de Muestra(s)
ENFERMEDADES DEL TRACTO RESPIRATORIO
Tracto Respiratorio
Aspirado
Rinovirus
Nasofaringeo o
Respiratorio Sincicial
Hisopado
Parainfluenza
Farngeo
Influenza
Suero Agudo y
Epstein Barr
Suero Convaleciente
Adenovirus
Heces o
Secreciones
Enterovirus
Hisopado
Traqueales
Rectal
Bronqueales
Pulmn
Muestra Post-Morten
HEPATITIS VIRAL
Hepatitis A
Hepatitis B
Hepatitis C
Hepatitis Delta
Citomegalovirus
Epstein Barr
MONONUCLEOSIS
Epstein Barr
Citomegalovirus
FIEBRES HEMORRAGICAS
Alfavirus
Flavivirus
Suero
Arenavirus
Lavado garganta
Bunyavirus
S1-S2
Filovirus
Muestra Post-Mortem
Hsopado Farngeo
Suero Agudo (5 das)
Hisopado conjuntival
ENFERMEDADES PERINATALES
Congnita
Rubola
Hisopado Farngeo, Lquido CefalorraCitomegalovirus
qudeo. Suero del nio y de la madre
Suero(s)
Neonatales
Herpes Simples
Citomegalovirus
Hepatitits Viral
HIV
Hisopado de Lesin
Orina
Suero(S)
Recomendaciones generales
1.
Las muestras para aislamiento viral deben tomarse dentro de las 72 horas del comienzo de los sntomas.
2.
El diagnstico serolgico se basa en la medida de la respuesta inmune mediada por anticuerpos (IgG e IgM) Para la
determinacin de IgG se requiere de un suero tomado en la fase aguda (primeros 5 das) del comienzo de los sntomas y
otro en la fase convaleciente (2-3 semanas despus del primero) y para la determinacin de IgM se requiere de un nico
suero que debe ser tomado a partir de los 7-10 das del inicio de los sntomas y hasta un lapso no mayor de 3 meses.
3.
La muestra debe ser identificada con Nombre del paciente, tipo de muestra y fecha de toma.
4.
Debe acompaarse de los datos clnicos que se indican en el Anexo 3.
5.
Cada recipiente (tubo, frasco o envase) que contenga la muestra debe ser hermticamente cerrado con tapa de rosca o
tapn de goma asegurado con adhesivo.
6.
La muestra debe enviarse inmediatamente al laboratorio en bao de hielo, en caso contrario consrvela y envela en hielo
seco.
7.
Slo se realizar diagnstico viral rpido a muestras de aspirado nasofarngeo, raspado de lesin o tejido cerebral
enviado inmediatamente al laboratorio en refrigeracin (bao de hielo)
8.
Las muestras de suero deben enviarse inmediatamente.
A N E X O N 2
T
T
U
L
O
S
D
E
Recolectar Suero de
la fase Aguda
Recolectar Suero de
fase convaleciente
Recolectar muestra
para aislamiento de
virus
VIREMIA
A
N
T
I
C
U
E
R
P
O
S
Enf.
Clnica
11
13
15
17
28
30
22
ANEXO N 3
FICHA DE INVESTIGACIN EPIDEMIOLGICA DE ENFERMEDAD RESPIRATORIA
AGUDA
Cdigo N INH-RR:
Ficha Estado N:
FECHA:
SEM. EPIDEMIOLGICA:
ESTABLECIMIENTO:
ESTADO:
MUNICIPIO:
PARROQUIA:
SEXO:
INVESTIG
DE BROTE
SITIO
DE TRABAJO:
SITIO DE TRABAJO:
EDAD:
CONSULTANTE
CONTACTO
TELEF:
ESTADO:
PARROQUIA:
II.DATOS EPIDEMIOLGICOS:
LUGAR PROBABLE DE EXPOSICIN:
ESTADO:
MUNICIPIO:
PARROQUIA:
FECHA PROBABLE DE EXPOSICIN:
TIEMPO DE EXPOSICIN:
FECHA DE INICIO DE SINTOMAS:
FECHA DE ATENCIN MDICA:
FECHA DE NOTIFICACIN:
FECHA DE INVESTIGACIN:
EN CASO DE VIAJE POR VIA AREA: PROCEDENCIA: ________________________________________________________
FECHA DE ARRIVO:__________________LUGAR(AEROPUERTO):_______________________________________________
SI NO
FECHA
GARGANTA: ARDOR
GARCANTA: DOLOR
ODINOFAGIA
ESTRIDOR
DISFONA
TOS PERRUNA
TOS SECA
TOS PRODUCTIVA
DOLOR TORAXICO
SIGNOS Y SNTOMAS
TAQUIPNEA
DISNEA/TIRAJE
CIANOSIS
AUSCULTACION:
RONCUS
SIBILANTES
CREPITANTES
MALESTAR GENERAL
FATIGA
ASTENIA
POSTRACIN
CONJUNTIVITIS
NAUSEAS O VOMITOS
DIARREA
ERITEMA
OTROS:
SI NO
FECHAS
HB
HTO
CTA. BLANCA
SEGMENTADOS
LINFOCITOS
EOSINOFILOS
MONOCITOS
GLICEMIA
UREA
CREATININA
VALORES
TIPO DE EXAMEN
FECHAS
TGO
TGP
PROTEINA C REACTIVA
Antiestreptolisinas
Puncin Torxica
RX TRAX: FECHA
VALORES
FECHA
23
V. ANTECEDENTES EPIDEMIOLOGICOS:
FACTORES DE RIESGO
SI NO
DONDE:
HA ESTADO EN CONTACTO CON GALLINEROS, COCHINERAS, HARAS
FACTORES DE RIESGO
HABITO TABQUICO
ANTECEDENTES DE ASMA
ANTECEDENTES DE EBPOC
ANTECEDENTES DE CARDIOPATAS/HTA
ANTECEDENTES DE DIABETES
ANTECEDENTES NEFROPATA
INFECCIN VIH/SIDA
INDUSTRIAS: TIPO:
Cuntos?
N DE PERSONAS DEL GRUPO FAMILIAR
N DE HABITACIONES PARA DORMIR
POBLACION CAUTIVA
DONDE:
TRABAJADOR DEL AREA DE SALUD
NOMBRES Y APELLIDOS (*)
1
2
3
4
5
6
SI NO
FECHA
ANTI INFLUENZA
ANTI SARAMPION
TRIVALENTE VIRAL
DPT
ANTIHAEMOPHILUS TIPO B:
PENTAVALENTE
EDAD SNTOMAS PRINCIPALES (ESPECIFIQUE)
INFLUENZA
FARINGITIS AGUDA
AMIGDALITIS AGUDA
RINOFARINGITIS AGUDA
NEUMONA
BRONQUIOLITIS AGUDA < 2 A
BRONQUITIS AGUDA
OBSERVACIONES:
IFI
CULTIVO/AISLAMIENTO VIRAL*
TIPIFICACIN (HI)*
CULTIVO BACTERIOLGICO
CEPILLADO BRONQUIAL
TEJIDOS POR BIOP/AUTOP
ANTIBIOGRAMA
PCR (TOSFERINA)
ORGANOS (PULMN)
SANGRE
ORINA
FECHA
ELISA
ASPIR. TRAQUEAL/RONQUIAL
HISTOPLAMINA (P.CUTNEA)
PRUEBAS TOXICOLGICAS
Dx. DEFINITIVO:
IX. RESPONSABLE DE LA NOTIFICACIN.
NOMBRE Y APELLIDO:
FUNCIN:
TELEFAX:
FECHA
MEJORA
TRASLADO
MUERTE
CONTRA OPININ
SINDROME COQUELUCHOIDE/TOSFERINA
SINDROME VIRAL
MALARIA
HISTOPLASMOSIS
NEUMONITIS QUIMICA
OTROS:
VIII. EXAMEN SOLICITADO:
TIPO DE EXMEN:
FECHA TOMA
TIPO DE MUESTRA
HISOPADO NASAL
HISOPADO FARNGEO
HISOPADO NASOFARNGEO
ESPUTO
N DAS
HOSPITALIZACIN
AMBULATORIO
BUSQUEDA ACTIVA
FIRMA:
E-MAIL:
RESULTADO
24
Virus
Muestra
Disponible a
Influenza A B
ANF b, pulmn
Parainfluenza 1 4
y3
Si
Respiratorio sincicial
Si
Adenovirus
Si
Sarampin
Si
Herpes simplex
Raspado de vescula
Cerebro
Si
Parainfluenza 1
Varicela zoster
Raspado de vescula
No
Rabia
Cerebro, Crnea
Si d
ANEXO N 5
GUIA PARA LA TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS PARA ESTUDIO
VIROLGICO DE DENGUE
Tipo de muestra
Suero
Suero
Muestras de
rganos
Puncin Intra
cardiaca
Intervalo desde el
comienzo de sntomas
Hasta 3 das
> 5 das
Estudio de Laboratorio
Aislamiento viral ,
PCR
Viral,
PCR,
Volumen.
2 cc. (ml) de suero o plasma centrifugado
Almacenamiento y envo.
Las muestras de suero debe enviarse inmediatamente (no mas de 48
horas) al laboratorio, en hielo hmedo o panelas refrigerantes; en caso
contrario consrvela 70C, y envela en hielo seco.
Las muestras de rganos se deben conservar en solucin fisiolgica (no
agregar formol) y enviarse al Laboratorio de Virologa inmediatamente
congeladas en hielo seco.
25
ANEXO N 6
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS SEROLOGICOS
TABLA 1.
IgM POSITIVA
IgM NEGATIVA
IgG POSITIVA
IgG NEGATIVA
INTERPRETACION
Evidencia de infeccin reciente
No hay evidencia de infeccin reciente
Evidencia de inmunidad o de infeccin
anterior pasada.
Susceptibilidad.
No hay evidencia de infeccin.
P O S IT IV O (E j.: T tu lo > 8 )
P O S IT IV O (E j.: T tu lo ? 1 2 80 )
TABLA 2.2
IN T E R P R E T A C IO N
N o h a y e vid e nc ia d e
inm u nid a d o in fe cc i n .
S u s ce p tib ilida d
E v id e n c ia d e inm un id a d o
infe c c i n a nte rior p a s a da .
E v id e n c ia d e in fec c i n
re c ie nte
RESULTADO
S1 Y S2 ambos
NEGATIVOS
(Ej: Ttulo < 8)
S1 y S2 ambos
POSITIVOS.
Sin diferencia en el
ttulo entre ambos
sueros
(Ej: Ttulo 8 16
32 64, etc)
S1 < S2: Aumento
significativo del ttulo
del S2 con respecto
al S1.
S1 y S2 ambos
1280
SU = Suero nico
S1 = Suero agudo
S2 = Suero convaleciente.
INTERPRETACION
No hay evidencia de
inmunidad o infeccin.
Susceptibilidad
Evidencia
de
inmunidad
o
infeccin
anterior
pasada
Evidencia de infeccin
reciente
Evidencia de infeccin
reciente
26
GENERO
VIRUS
Togaviridae
Alfavirus
Chinkungunya
Sindbis
Flaviviridae
Flavivirus
Fiebre amarilla
Dengue 1-4
Fiebre del Oeste del Nilo
Fiebre de Selva Kyasanur
Fiebre Hemorrgica de Omsk
Bunyaviridae
Nairovirus
GENERO
VIRUS
Bunyaviridae
Hantavirus
Arenaviridae
Arenavirus
Junin
Machupo
Fiebre de Lassa
Guanarito
Desconocido
FAMILIA
GENERO
VIRUS
Filoviridae
Filovirus
Ebola
Marburg
ANEXO N 8
DIAGNSTICO DE LABORATORIO DE DENGUE
PROCESAMIENTO DE MUESTRAS DE CASOS
PROBABLES DE DENGUE Y VIGILANCIA
EPIDEMIOLGICA DE DENGUE
FLUJOGRAMA
Presentacin Clnica
Vigilancia Epidemiolgica
Muerte
DC - DH
Muestra de autopsia
(Hgado, Bazo,
Ganglios)
Muestra de
Suero
RT-PCR
>5d
Aislamiento Viral
C6-36 - Vero
Hasta 3 das
(< 72 horas)
IFI Policlonal
ELISA-IgM
PP
P
Reporte
definitivo
Segunda muestra
de suero
IFI Monoclonal
D1, D2, D3, D4
PCR - RT
IgM y/o HI
Reporte
definitivo
Reporte
definitivo
Reporte
definitivo
Reporte
definitivo
Diagnstico diferencial
DC = Dengue Clsico
DH = Dengue Hemorrgico
HI = Inhibicin de la hemaglutinacin
IFI = Inmunofluorescencia Indirecta
* = Slo en casos que amerite el estudio Ejemplo: Fallecidos.
27
ANEXO N 9
TOMA Y PREPARACIN DE MUESTRAS PARA DIAGNSTICO ANATOMO-PATOLGICO,
EN EL INHRR
1. De cualquier rgano humano, animal o alimento crnico seccione una pieza del tamao de
un borrador de lpiz (1cm x 1cm x 1cm), que comprenda la lesin macroscpica y los
alrededores de tejido normal.
2. Use un frasco boca ancha con tapa roscada para colocar la muestra o pieza separada.
Ejemplo: frasco de compota, frasco de mermelada o frasco urotainer.
Para remitir la muestra: Identifique el frasco con el nombre del paciente, especie animal,
fecha de fijacin, nombre del remitente e institucin o consultorio privado, enve anexo la
historia clnica del paciente.
3. Fijador universal formol 10%; pH 7. Cantidad: 20 veces el volumen de la pieza que va a
fijar. Preparacin del fijador: Para preparar 1 litro de fijador, mida 100ml de formaldehdo al
36,5% y disulvalo en 900ml de agua destilada, para neutralizar a pH 7, agregue a la solucin
anterior 4g de fosfato de sodio monobsico mas 6,5g de fosfato de sodio (dibsico) anhidro.
4. Una vez que la muestra est en el fijador no es necesario enfriar o congelar la muestra, se
puede mantener a temperatura ambiente por varios das.
ANEXO N 10
MUESTRAS REQUERIDAS PARA EL AISLAMIENTO VIRAL EN CULTIVO CELULAR
1. ADENOVIRUS: Aspirado nasofarngeo, Hisopado farngeo, Heces, Hisopado nasal,
Lavado bronquial, Hisopado ocular, Aspirado bronquial, Aspirado traqueal, Aspirado pulmonar,
Tejido bronquial, Biopsia.
2. ARENAVIRUS: Suero agudo, Sangre completa, Vsceras.
3. CITOMEGALOVIRUS (CMV): Orina, Sangre perifrica, Hisopado farngeo, Lquido
amnitico, Lquido pleural.
4. DENGUE: Suero agudo.
5. ENTEROVIRUS-NO POLIO: Heces, Hisopado rectal, Lquido cefalorraqudeo (LCR),
Hisopado farngeo.
6. ENCEFALITIS EQUINA VENEZOLANA (EEV): Suero agudo, LCR, Vsceras, Mosquitos.
7. FIEBRE AMARILLA: Suero agudo, Vsceras de humanos Monos (hgado), Mosquitos.
8. VIRUS HERPES SIMPLEX: Raspado y Lquido de vescula, LCR.
9. HERPES VARICELA ZOSTER: Raspado y Lquido de vescula, LCR.
10. HANTAVIRUS: Suero agudo.
11. PAROTIDITIS: Hisopado farngeo.
12. POLIO: Heces, Hisopado rectal, Hisopado farngeo.
13. OTROS ARBOVIRUS: Suero agudo, Vsceras, Mosquitos.
14. RUBOLA: Hisopado farngeo, Orina.
15. RABIA: Tejido cerebral.
16. VIRUS RESPIRATORIOS: Influenza A y B Parainfluenza 1, 2, 3 Virus Respiratorio
Sincicial: Aspirado nasofarngeo, Hisopado farngeo, Hisopado nasal, Lavado bronquial,
Aspirado bronquial, Aspirado traqueal, Aspirado pulmonar, Tejido bronquial, Biopsia.
17. SARAMPIN: Orina.
ANEXO N 11
DIAGNSTICO VIRAL RPIDO DETECCIN DIRECTA
28
ANEXO N 12
VIRUS DETECTADOS POR LA TCNICA DE REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERA
(PCR)
ANEXO N 13
TRANSPORTE SEGURO DE SUSTANCIAS INFECCIOSAS
Embalaje, Etiquetado y Documentacin para el Transporte de Muestras
Sistema Triple bsico para embalaje
El sistema consiste de tres recipientes:
1.
2.
3.
29
ANEXO N 14
INSTRUCTIVO PARA LA TOMA DE MUESTRA PARA DIAGNSTICO DE VIRUS
INFLUENZA Y OTROS VIRUS DEL TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
CONSIDERACIONES: Caso Probable: Todo paciente con fiebre de inicio sbito >39C y
mialgias, fatiga, postracin, sntomas del tracto respiratorio alto: tos, congestin nasal, rinorrea,
dolor de garganta, acompaada de algunos otros sntomas sistmicos como: dolor de cabeza,
malestar, escalofros; de intensidad moderada a severa.
MUESTRA: Hisopado Nasal Farngeo
CONDICIONES DE LA MUESTRA:
Debe ser tomada dentro de las primeras 72 horas del inicio de los sntomas.
No debe haber contenido hemorrgico ni secreciones purulentas.
Los hisopos de recoleccin y el medio de transporte, deben ser conservados en la nevera
hasta el momento de su utilizacin.
Una vez tomada la muestra, enviar al INHR.R dentro del lapso de las siguientes 48 horas
de la toma.
En caso de no ser enviada inmediatamente la muestra, conservar en nevera a (4C)
mientras se realice el envo.
El envo se puede realizar a travs del servicio que presta la Compaa MRW con cobro a
destino.
MTODOS DE COLECCIN DE MUESTRAS:
Hisopado Nasal: Inserte un Hisopo seco en la nariz paralelamente al paladar hasta la
altura de los cornetes nasales (3cm en el adulto y un poco menos en nios). Frote el rea y
retrelo suavemente con movimiento rotatorio. Introduzca el Hisopo dentro del recipiente que
contiene el medio de transporte viral hasta que el medio de transporte impregne el Hisopo con
la muestra.
Hisopado Farngeo: Frote vigorosamente con un Hisopo ambas amgdalas y la faringe
posterior, y procese el Hisopo como en el paso anterior.
GUA GENERAL:
Las muestras deben ser debidamente identificadas.
Almacenamiento: Guardarlas en nevera a 4C hasta el momento de su envo.
Transporte (*): En hielo hmedo dentro de cavas u otros envases.
La ficha del paciente debe contener toda la informacin.
El estudio no requiere de muestras de suero.
Otras muestras: Hisopado Conjuntival, Aspirado Nasofarngeo, Aspirado Transtraqueal,
Biopsia de Pulmn.
30
BIBLIOGRAFA CONSULTADA
Diagnstico Procedures for viral, Rickettsial and Clamydial Infections. E. Lennette and N.
Schimidt tth De. American Public Health Association.