Cromatografa de gases

Principios de la tcnica
En cromatografa de gases la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna
cromatogrfica. La elucin se produce por el flujo de una fase mvil que es un gas inerte, y
a diferencia de la mayora de los tipos de cromatografa, la fase mvil no interacciona con
las molculas del analito; su nica funcin es la de transportar el analito a travs de la
columna.
Respecto a la cromatografa lquida, la cromatografa de gases tiene la ventaja de disponer
de detectores mucho ms universales (por ejemplo, el de ionizacin de llama). Adems,
para numerosas aplicaciones, los mtodos son ms simples, ms rpidos y ms sensibles que
los correspondientes a la cromatografa lquida de alta resolucin. La instrumentacin
requerida para cromatografa de gases tambin es mucho ms sencilla y econmica que la
empleada en HPLC. Sin embargo, en cromatografa de gases, la influencia de la
temperatura sobre la distribucin del equilibrio es considerable, a diferencia de la
cromatografa lquida. Por ello, la cromatografa de gases presenta limitaciones en tres
casos:

compuestos poco voltiles, generalmente los de peso molecular superior a 300 u.m.a.
compuestos sensibles a una elevacin de la temperatura incluso moderada
(determinados compuestos de inters biolgico)
compuestos que se encuentran en forma inica (puesto que son e n general poco
voltiles)
Por esta razn, la cromatografa de gases se emplea cuando los componentes de la mezcla
problema son voltiles o semivoltiles y trmicamente estables a temperaturas de hasta
350-400C. En cambio, cuando los compuestos a analizar son poco voltiles y/o
termolbiles, la tcnica separativa adecuada suele ser la cromatografa lquida de alta
resolucin (HPLC).
A menudo la cromatografa de gases se emplea para confirmar de la presencia o ausencia de
un compuesto en una muestra determinada.

Aplicaciones
Medioambientales: Anlisis de pesticidas y herbicidas, anlisis de hidrocarburos,
semivoltiles y voltiles, anlisis del aire...
Alimentos y aromas: fragancias y aromas, aceites, bebidas, cidos orgnicos, azcares,
FAMES, steres metlicos, triglicridos, alcoholes...
Qumica Industrial: alcoholes, cidos orgnicos, aminas,aldehdos y cetonas, steres y
glicoles, hidrocarburos, disolventes, anilinas, gases inorgnicos...
Biociencia: drogas, frmacos, alcoholes y contaminantes en sangre, disolventes
residuales...
Derivadas del petrleo: gas natural, gases permanentes, gas derefinera, gasolinas,
gasleos, parafinas...

Funcionamiento del servicio

Las muestras deben ir acompaadas de la hoja de solicitud de servicios generada en esta
pgina web una vez realizado el registro en la misma. El ususario debe rellenar todos los
campos de la solicitud de servicios que conozca, con el fin de obtener el mejor resultado
posible.

Equipos

Cromatgrafos de gases Agilent Technologies 7890A

Detector de captura electrnica (ECD)
Detector de ionizacin de llama (FID)

Cromatografa
Keulemans ha definido la cromatografa como un mtodo fsico de separacin en el cual los
componentes a separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales constituye la fase
estacionaria, de gran rea superficial, y la otra es un fluido (fase mvil) que pasa a travs o
a lo largo de la fase estacionaria.
La fase estacionaria puede ser un slido o un lquido dispuesto sobre un slido que acta
como soporte, de gran rea superficial. La fase mvil es un fluido (puede ser gas, lquido o
fluido supercrtico) que se usa como portador de la mezcla.
En la cromatografa ocurren dos fenmenos muy importantes y que son prcticamente los
rectores del proceso de separacin: la adsorcin y la absorcin.
La adsorcin es la retencin de una especie qumica en los sitios activos de la superficie de
un slido, quedando delimitado el fenmeno a la superficie que separa las fases o superficie
interfacial.
Esta retencin superficial puede ser fsica o qumica. La adsorcin depende de la naturaleza
de la substancia adsorbida, de la temperatura, de la naturaleza y estado de subdivisin del
adsorbente, y de la concentracin.
La absorcin es la retencin de una especie qumica por parte de una masa y depende de la
tendencia que tiene sta a formar mezcla o reaccionar qumicamente con la misma.
Existen muchas maneras de clasificar los mtodos cromatogrficos.
Segn, Giddings, se puede clasificar la Cromatografa por sus variantes:
Fase Mvil (puede ser gaseosa, lquida fluido supercrtico)
Fase Estacionaria
Mecanismo de Retencin (tipos de equilibrios implicados en la transferencia de los solutos
entre las fases).
Forma de Contacto entre las fases (columna superficie plana)
Dimensionalidad
Escala Fsica
Gradientes

Teoras del proceso Cromatogrfico

El proceso cromatogrfico, aparentemente simple en prctica, es en realidad

una compleja unin de fenmenos tales como hidrodinmica, cintica,
termodinmica, qumica de superficie y difusin.

Hasta la fecha se han propuesto muchas teoras, que incluyen complejos

modelos matemticos para poder explicar el comportamiento de los solutos en
las columnas cromatogrficas. Las ms estudiadas son: La Teora de los Platos
Tericos (Martin y Synge), la Teora Cintica (Van Deemter, Zuiderweg,
Klinkenberg y Sjenitzer) y la Teora Desarrollada (Golay) para Columnas
Capilares.

Segn la Teora de los Platos, una columna cromatogrfica est constituda por
una serie de platos que contiene una fase estacionaria. Supone que el volmen
de fase estacionaria en cada plato es constante; que el volmen de fase mvil
es constante de plato a plato; que en cada plato las dos fases estn en
equilibrio, y que el valor del Coeficiente de Distribucin es constante e
independiente de la concentracin del soluto.

La principal desventaja de la Teora de los Platos Tericos es la falta de

conexin entre la eficiencia de la columna cromatogrfica, el tamao de la
partcula, la difusin, la velocidad de flujo y la temperatura. La otra desventaja
es que utiliza un modelo basado en muchas suposiciones.

La Ecuacin que rige esta teora es:

N = 16(tr/w)2

La Teora Cintica considera el proceso cromatogrfico en funcin de los

factores cinticos que intevienen en l.
Siendo estos factores:

Las mltiples trayectorias (diferentes rutas) que toma un soluto durante su

movimiento (migracin) a travs del empaque de la columna, provocando
variaciones en la velocidad del flujo.
La Difusin Axial o Longitudinal del soluto en la fase mvil.
La cintica de la resistencia a la transferencia de masa entre las fases mvil y
estacionaria.
La Ecuacin de Van Deemter,

HETP H = A + B/u + Cu

donde u= L(cm)/ traire(seg)

Columna
Es el lugar donde ocurre la separacin. Se dice que es el corazn de un
cromatgrafo.
Los materiales con los cuales generalmente se pueden elaborar las columnas
son: cobre, aluminio, acero inoxidable, vidrio tefln.
El relleno puede ser un slido, un lquido recubriendo un slido.
Podemos clasificar las columnas segn el propsito del proceso cromtografico:

Empacadas
Analtica
Preparativas
Capilares
W.C.O.T. (Wall Coated Open Tubular)
S.C.O.T. (Support Coated Open Tubular)
Factores que Afectan la Eficiencia de una Columna

Longitud de la Columna
Dimetro de la Columna (1/4", 1/8", 1/16" de dimetro externo)
Tamao de las partculas del relleno
Naturaleza de las fases
Cantidad de fase estacionaria
Temperatura de la columna
Velocidad del gas portador
Cantidad de muestra inyectada
Material del cual est elaborada la columna

Enrollado de la columna

Soporte
La funcin bsica del soporte es la de "mantener" (sostener, retener) la fase
estacionaria. Idealmente debera ser un material inerte que "mantiene" la fase
estacionaria sobre su superficie como una pelcula delgada.
La mayora de los soportes cromatogrficos est hecha de diatomita.
Qumicamente es casi todo slice, con algunas impurezas. Tambin se conoce
como Tierras Diatomceas Kiselguhr (palabra alemana). Domina el campo de
los soportes debido a su estructura, superficie y disponibilidad.

Hay que tener en cuenta dos cosas a la hora de escoger un soporte:

La Estructura, Caractersticas Fsicas (contribuye a la eficiencia de la columna

cromatogrfica):
Tamao de partcula
Dimetro del poro
Densidad
rea Superficial
y

la Qumica de Superficie Caractersticas Superficiales (gobierna la

participacin del soporte en los resultados de la separacin).
Grupos silanoles activos
Iones metlicos
Adems de las caractersticas anteriores, la seleccin del soporte va a
depender tambin de:

la naturaleza de la muestra
la naturaleza de la Fase Lquida
el uso que se le va a dar a la columna:

General
Especfico
Precio
Podemos resumir que un buen soporte debe reunir las siguientes
caractersticas:

Elevada Superficie por unidad de volmen

Estabilidad Trmica
Dureza mecnica suficiente para que pueda resistir los procedimientos de
revestimientos y relleno
Inactividad qumica o de adsorcin
Baja resistencia al paso de la fase mvil
La eliminacin reduccin de los sitios activos de adsorcin (tambin conocido
como Desactivacin de la Supeficie) de un soporte cromatogrfico puede
efectuarse de varias maneras:

Remocin por lavado con cido (NAW AW)

Eliminacin Remocin por reaccin del Grupo Silanol
Saturacin de la superficie con una fase lquida
Impregnando recubriendo con material slido inerte

Fase Estacionaria Lquida

Al hablar de fase estacionaria lquida entramos en contacto con dos palabras
trminos: Polaridad y Selectividad.

Las fases lquidas podemos clasificarlas segn sus polaridades

cromatogrficas, nos valemos de unas constantes que determinan dicha
polaridad. Existen dos sistemas:

Constante de Rohrchneider
Constante de McReynolds

Existen muchas discusiones sobre este tema para poder definir y describir el
parmetro polaridad en cromatografa, podemos decir que la polaridad de una
fase estacionaria lquida se refiere a las interacciones intermoleculares que
involucra dipolos permanentes.
Selectividad es definida como las diferentes atracciones intermoleculares
Varias cualidades ha de reunir un lquido para servir como fase estacionaria:

Viscosidad
Tensin Superficial
Tensin de Vapor
Selectividad respecto a los componentes de la fase mvil
Reversibilidad del Reparto
Estabilidad Trmica

Gas Portador
El gas portador cumple bsicamente dos propsitos: Transportar los
componentes de la muestra, y crear una matriz adecuada para el detector.

Un gas portador debe reunir ciertas condiciones:

Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la muestra como con la
fase estacionaria)
Debe ser capaz de minimizar la difusin gaseosa
Fcilmente disponible y puro
Econmico
Adecuado al detector a utilizar

Detectores
Un detector es un dispositivo para revelar la presencia de las sustancias
eludas a la salida de la columna cromatogrfica. Podemos expresar que el
detector son los "ojos" de un cromatgrafo.
El Detector es un dispositivo capaz de convertir una propiedad fsica, no
medible directamente, en una seal elaborable y ofrecernos informacin sobre
la naturaleza y magnitud de la propiedad fsica.
En cromatografa un detector funciona comparando una propiedad fsica entre
el gas portador puro y el mismo gas portador llevando cada uno de los
componentes que previamente se han separado en la columna, esta accin se
traduce en una seal tipo elctrica, que posteriormente se amplificar
mediante un registrador grfico integrador permitiendo indicar el momento
que salen de la columna los componentes.
Clasificacin de los detectores

Estos pueden ser clasificados:

Detectores segn su Grado de Selectividad :

Universales. Responde a la mayora de los solutos que pasan por l.
Especficos Selectivos. Exhibe una gran respuesta a un grupo particular de
substancias con un mnimo de respuesta a otras.
Detectores Destructivos y No destructivos. Esta clasificacin, obviamente, es
en referencia a si la muestra es destruda o no.
Detectores segn su Modo de Respuesta:
Dependientes del Flujo Msico. Producen una seal que es proporcional a la
cantidad de soluto que pasa a travs de l en la unidad de tiempo pero es
independiente del volmen de gas portador requerido para la elucin.
Dependiente de la Concentracin. Dan una seal proporcional a la cantidad de
soluto por unidad de volmen de gas portador que pasa a travs de l.
Detectores segn el proceso de deteccin Ionizacin, ptico-espectroscpico,
Electroqumico, etc.

Caractersticas de los Detectores

Sensibilidad. Medida de la efectividad de un detector para convertir la muestra

en una seal elctrica medible.
Linealidad. Rango de masa concentracin de muestra sobre el cual el
detector mantiene una sensibilidad constante sin una desviacin arbitraria. El
significado prctico de la linealidad del detector es el que le indica al analista la
concentracin para la cual el detector es confiable. Hay dos lmites en la curva
de linealidad:
El lmite de concentracin inferior, que es dado por el lmite de deteccin y,
El lmite Superior, definido por un porcentaje de desviacin arbitrario de la
curva de linealidad, normalmente se toma un 5% de desviscin.
Rango Dinmico Lineal.Rango sobre el cual la sensibilidad del detector es
constante.
Ruido. Es cuantificado por el promedio de la amplitud pico-pico de la seal. El
significado de conocer el nivel de ruido de un detector es un factor
determinante en la determinacin de la cantidad mnima detectable y el lmite
inferior del rango lineal.
Lmite de Deteccin. Est definido como la mnima cantidad de substancia que
puede producir una seal que sea el doble del nivel de ruido.
Corriente de Fondo. Seal constante de salida generada por el proceso en el
que un detector est operativo sin que alguna substancia pasa a travs de l.
Esta seal es muy importante, ya que permite diagnosticar el buen o mal
funcionamiento del detector.
Detectores ms usados en Cromatografa de Gases

Detector de Conductividad Trmica. Mide la conductividad trmica del gas

portador, ocasionada por la presencia de substancias eludas.
Detector de Ionizacin a la Llama. Basado en la medida de las variaciones de la
corriente de ionizacin en una llama oxgeno-hidrgeno debido a la presencia
de substancias eludas.
Detector de Captura Electrnica. Basado en la electronegatividad de las
substancias eludas, y su habilidad para formar iones negativos por captura de
electrones.
Detector de Fotometra a la Llama. Basada en la medida de la intensidad de la
emisin molecular de la fluorescencia de heterotomos en las molculas
orgnicas.
Detector de Ionizacin de Llama Alcalina

Detector de Espectrometra de Masas

Cromatograma y su Interpretacin
Los siguientes trminos son los utilizados en un cromatograma tpico y
recomendados por la IUPAC:

Line Base
Pico Cromatogrfico
Base del Pico
rea del Pico
Altura del Pico
Ancho del Pico
Ancho del Pico a la mitad de la Altura

Medida de la Altura rea de Pico

Altura del Pico: Medida que se efectua, para cada pico de inters, desde la
lnea base hasta el mximo del pico.
Los errores de malas mediciones se pueden atribuir a:

Insuficiente Resolucin
Variaciones en la lnea base
Picos extremadamente pequeos
Las desviaciones en la lnea base se pueden compensar por interpolacin de
sta entre el prinpio y el final del pico.

rea del Pico.

Existen varias tcnicas para la determinacin del rea de un Pico
Cromatogrfico:
Integracin Manual
Mtodos Geomtricos
Triangulacin: En esta tcnica se trazan lneas tangentes a cada lado del pico.
La altura se mide desde la lnea base hasta la interseccin de las dos
tangentes. El ancho se mide tomando la interseccin de las dos lneas
tangentes con la lnea base. Luego se utiliza la frmula A=1/2*Altura del Pico*
Base del Pico. Las limitaciones de esta tcnica estan en el trazado de las lneas
tangentes, un pequeo error al trazar las tangentes puede afectar la medida de
la altura.
Altura por ancho a la mitad de la Altura:
Mtodos Mecnicos
Planimtricos
Corte y Pesada: Esta tcnica requiere recortar el pico del cromatograma, luego
pesarlo en una balanza analtica. El recorte y pesada depende mucho de la
habilidad del operdor. Pueden introducirse errores por cambios en la humedad
del papel, la grasa de las manos del operador, homogeneidad del papel.
Generalmente se recomienda utilizar una fotocopia del cromatograma para no
destruir el original.

Integracin Automtica
Electromecnica
Electrnica

Anlisis Cualitativo
Los procedimientos para identificacin de los picos cromatogrficos podemos
dividirlos en dos categoras:

Identificacin Cromatogrfica
Por Datos de Retencin
Por Serie Homlogas (Indices de Retencin de Kovacs)
Identificacin No Cromatogrfica
Anlisis Clsicos
Identificacin por:
Adicin de Estndar
Formacin de Derivados
Sustraccin de un Componente
Identificacin con Tcnicas Auxiliares: UV, IR, MS, RMN

Anlisis Cuantitativo
Existen varios mtodos para cuantificar un pico cromatogrfico:

Normalizacin de rea
Normalizacin de rea con Factores de Respuesta
Estandarizacin Externa
Estandarizacin Interna

Los pasos del mtodo cientfico

El mtodo cientfico est compuesto de varios pasos que deben seguirse en un orden y
completa rigurosidad. Estos son:

Observacin: investigacin o recoleccin previa de datos relacionados al tema a

investigar, los cuales se analizan y organizan, de forma de ofrecer informacin confiable
que lleve al siguiente paso

Proposicin: establecer la duda que se quiere resolver o aquello que se desea

estudiar

Hiptesis: la posible solucin o respuesta que queremos comprobar y que basa en

una suposicin en base a investigacin. Puede ser o no verdadera y, mediante los
siguiente pasos, se trata de demostrar su posible validez.

Verificacin y experimentacin: se trata de probar o desechar la hiptesis mediante

la experimentacin o aplicacin de investigaciones vlidas y objetivas.

Demostracin o refutacin de la hiptesis: se analiza si sta es correcta o

incorrecta, basndose en los datos obtenidos durante la verificacin.

Conclusiones: se indican el porqu de los resultados, enunciando las teoras que

pueden surgir de ellos y el conocimiento cientfico que se genero mediante la aplicacin
correcta del mtodo.

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El mtodo cientfico se utiliza en casi cualquier rea, desde la fsica a la qumica y biologa,
pasando por las matemticas, filosofa, antropologa y sociologa, entre otras ms.
Gracias al mtodo cientfico y su rigurosidad, los resultados de estudios ganan credibilidad,
construyendo conocimiento y haciendo posible nuevos descubrimientos cientficos para el
beneficio de toda la humanidad.