Prctica de laboratorio No. 4: Uso y manejo del microscopio.

RESUMEN
El microscopio es una herramienta de gran importancia para la observacin e
identificacin de los microorganismos. Debemos distinguir entre las tcnicas para
observacin de microorganismos vivos y las preparaciones para tincin. Las
tinciones ofrecen una informacin adicional a la simple observacin de la
morfologa, ya que ponen de manifiesto caractersticas de la pared celular o la
existencia de estructuras especiales, como las esporas bacterianas.
Palabras

clave:

Microscopio,

Crecimiento

bacteriano,

Tincin,

Frotis,

Microorganismos.
I.

INTRODUCCIN
El microscopio es un instrumento ptico que amplifica la imagen de un objeto
pequeo, siendo el instrumento ms utilizado en los laboratorios donde se
estudian microorganismos. Si bien las lentes de aumento han sido conocidas
desde muy temprano en la historia, slo se le utiliz en biologa con el
advenimiento del microscopio de luz moderno. Desde su invencin, el microscopio
ha sido una herramienta valiosa en el desarrollo de la teora cientfica.

II.

OBJETIVOS
Aprender a usar y manejar adecuadamente el microscopio, aplicndolo en las
diferentes reas del laboratorio teniendo como finalidad el enfoque de los
diferentes objetos que se le indiquen.

III.

MATERIALES Y MTODOS
1. Materiales y reactivos
Cuando nos encontrbamos en el laboratorio se nos presentaron los materiales
que usaramos para la prctica, de los cuales eran: Asa de platino, Caja Petri,

Mechero de Bunsen, Pinzas, Gotero con azul de metileno, Portaobjetos, Pizeta

con agua destilada, Tubos de ensayo, Gradillas y Microscopios.
2. Procedimiento experimental
1. Procedimiento del frotis.
A. Se deba lavar perfectamente los portaobjetos, secarlos con papel y
etiquetarlos.
B. Despus encender el mechero que se nos dio y esterilizar el asa al
rojo.
C. Dejar enfriar el asa para despus tomar la muestra del cultivo en el
que estaban los microorganismos. Acercar la muestra al mechero con
las pinzas y con cuidado.
D. Si el cultivo es lquido se coloca la muestra en el centro del
portaobjetos y se extiende suavemente en un rea circular de 2 cm
de dimetro aproximadamente con el asa. Dejar secar el frotis al aire
y repetir los procedimientos por 2-3 veces ms.
E. Si el cultivo es de medio slido, previamente se colocar en el centro
del portaobjetos una gota de agua destilada en la que se mezcla una
pequea muestra del cultivo que se toma siguiendo las indicaciones
del paso C. Extenderla suavemente y dejar secar.
2. Fijacin del frotis.
A. Fijar los frotis de cultivos lquidos con dos gotas de metanol o etanol
absoluto y dejar secar al aire.
B. En cultivos slidos, completamente secos se fijaran con calor. Mechero
(2-3 veces).
C. Enfriar el portaobjetos.
3. Tincin simple.
A. Cubrir el frotis con 2 gotas de azul de metileno durante 30 segundos a 1
minuto.
B. Eliminar el exceso de colorante con lavado suave al agua corriente o
con ayuda de la pizeta.
C. Dejar secar al aire.
4. Observacin al microscopio.

IV.

RESULTADOS Y DISCUSIN

Lo que buscamos conocer con esta prctica es el uso y manejo del microscopio,
para ello fue necesario preparar algunos medios de cultivo que nos servira para
observar los microorganismos.
Para prepararse los medios de cultivo se esterilizaron los materiales.
Cuando vimos a travs del microscopio, al principio no se poda ver la muestra
hasta que lo ajustamos, se vean podan ver unas machas de acuerdo a la
muestra que fuese.
Al finalizar la prctica obtuvimos unos resultados y estos estn representados en
la siguiente tabla.
MUESTRA

FORMA

AGRUPACION DE

TAMAO

Agua de bao

Cocos

CELUALAS
Solos

10x

Agua de

Cocos, espirales

Solos

10x

trapeador
Agua de garrafn

Cocos

Solos y en cadena

45x

Tos

Vibrios

Solos

10x

V.

CONCLUSIONES

VI.

CUESTIONARIO
1. Cules son las principales precauciones de manejo del microscopio?
1) Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en
posicin de observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la platina
no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.
2) Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas
muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica.
3) No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el
microscopio.
4) No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico,
micromtrico, platina, revlver y condensador).

5) El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la

mirada a la preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra. No
cambiar nunca de objetivo agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo
mientras se est observando a travs del ocular.
6) Mantener seca y limpia la platina del microscopio.
7) Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la
sesin prctica.
2. Cul fue el aporte de Lazzaro Spallanzani y Ferdinand Cohn al estudio
de la Microbiologa?
Ferdinand

Cohn:

Descubri

la

existencia

de

endosporas

bacterianas

termorresistentes.
Lazzaro Spallanzani: Mejor el diseo experimental de Needham cerrando primero
hermticamente los matraces de vidrio que contenan agua y semillas. Si estos
matraces se introducen en agua hirviendo durante de hora, no se produca
crecimiento microbiano, mientras estuviesen cerrados hermticamente. Propuso
que el aire transportaba grmenes al medio de cultivo.

3. Menciona

las

caractersticas

principales

del

microscopio

ptico,

microscopio de fluorescencia y el electrnico de transmisin.

Microscopio ptico:
Basado en lentes pticos. Tambin se le conoce como microscopio de luz, (que
utiliza luz o "fotones") o microscopio de campo claro. El desarrollo de este aparato
suele asociarse con los trabajos de Anton van Leeuwenhoek. Los microscopios de
Leeuwenhoek constaban de una nica lente pequea y convexa, montada sobre
una plancha, con un mecanismo para sujetar el material que se iba a examinar (la
muestra o espcimen). Este uso de una nica lente convexa se conoce como
microscopio simple, en el que se incluye la lupa, entre otros aparatos pticos.

Microscopio de fluorescencia:

Es una variacin del microscopio de luz ultravioleta en el que los objetos son
iluminados por rayos de una determinada longitud de onda. La imagen observada
es el resultado de la radiacin electromagntica emitida por las molculas que han
absorbido la excitacin primaria y reemitido una luz con mayor longitud de onda.
Para dejar pasar slo la emisin secundaria deseada, se deben colocar filtros
apropiados debajo del condensador y encima del objetivo. Se usa para detectar
sustancias con autofluorescencia (vitamina A) o sustancias marcadas con
fluorocromos.
El fenmeno de la fluorescencia se produce cuando un electrn de un tomo
absorbe toda la energa de una determinada longitud de onda de la luz, saltando a
otros orbitales. Es una situacin inestable durante la cual se emite la mayor parte
de la energa que se ha absorbido (con mayor longitud de onda) y vuelve a
desplazarse a su orbital.
Aprovechando este fenmeno, se han creado los fluorocromos (tambin conocido
como fluoroforos). Para utilizarlos necesitamos una bombilla que emita luz
ultravioleta y luz visible. Para excitar el fluorocromo necesitamos un filtro. de
excitacin que seleccione la longitud de onda que excita nuestro flurocromo. Los
ms comunes son el DAPI que tie el ncleo de las clulas y el GFP.

Microscopio electrnico de transmisin:

Es un microscopio que utiliza un haz de electrones para visualizar un objeto,

debido a que la potencia amplificadora de un microscopio ptico est limitada por
la longitud de onda de la luz visible. Lo caracterstico de este microscopio es el
uso de una muestra ultrafina y que la imagen se obtenga de los electrones que
atraviesan la muestra.
Los microscopios electrnicos de transmisin pueden aumentar un objeto hasta un
milln de veces.

4. Cul es la finalidad de realizar una tincin al realizar el estudio

microscpico de bacterias?
Su finalidad es mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio. Los
colorantes y tinturas son sustancias que usualmente se utilizan en biologa y
medicina para resaltar estructuras en tejidos biolgicos que van a ser observados
con la ayuda de diferentes tipos de microscopios. Los diferentes colorantes
pueden ser utilizados para aumentar la definicin y examinar grandes cortes de
tejido (resaltando por ejemplo fibras musculares o tejido conectivo), poblaciones
celulares (por ejemplo clasificando diferentes clulas sanguneas) o incluso para
resaltar organelas dentro de clulas individuales.

5. Porque se recomienda fijar los frotis de cultivos lquidos con alcohol y

no con calor?
Para evitar residuos del medio, que al quemarse darn interferencias en las
observaciones.

VII.

BIBLIOGRAFA
Microscopio. Recuperado de http://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio
Uso del microscopio de luz. Recuperado de
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Uso_
del_microscopio_de_luz.pdf
Manual de microscopio. Recuperado de:
http://canal.unad.edu.co/laboratorio/index/main.html