Pruebas Bioquímicas (Microbiología de Los Alimentos)

ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DEL LITORAL
Licenciatura en Nutricin
MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS II
Laboratorio N 9
Tema:
PRUEBAS BIOQUIMICAS DE IDENTIFICACION
Autor:
ANDR ROMN
Docente:
MSc. ABEL ROSADO
INTRODUCCION
PRUEBAS API
Los sistemas miniaturizados API son mtodos rpidos que permiten la
identificacin de microorganismos a travs de la realizacin de diferentes
pruebas bioqumicas. Estos sistemas consisten en un dispositivo de plstico con
varios microtubos que contienen diferentes medios de cultivo deshidratados o
diferentes sustratos de enzimas de acuerdo al tipo de prueba que se requiere
montar. Entre algunas de las pruebas bioqumicas que pueden realizarse con
estos sistemas estn las pruebas de fermentacin de carbohidratos, la
determinacin de la produccin de H2S, la determinacin de la hidrlisis de la
gelatina, entre otras.
El ndice Analtico de Perfil (API) son un conjunto de pruebas bioqumicas que se
concentran en muy poco espacio mediante el uso de pocillos con el reactivo
correspondiente ya preparado para ser usado. Se llenan los pocillos siguiendo
las instrucciones del fabricante con la muestra problema. Se sellan los pocillos
que sean obligatorios. Se incuba la estufa a unos 37 C normalmente.
Posteriormente se comprueba los resultados pasado el tiempo indicado en la
tira. Los resultados se apuntan por cada prueba bioqumica en el casillero
correspondiente, de manera que al final dar un nmero de varias cifras. Con
este nmero se puede buscar en el libro de referencia de las tiras API, el tipo de
bacteria que se tiene en la muestra. Son muy tiles, capaces de identificar en
poco tiempo la bacteria problema (actualmente unas 600 especies).
Sistemas de identificacin multipruebas (API): La batera de pruebas API20E es
un
sistema
de
identificacin
rpida
para
bacterias
de
la
familia Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram-. Bsicamente consta de 21

tests bioqumicos estandarizados y miniaturizados, y una base de datos. Este
sistema presenta las ventajas de ser rpido, eficaz y de permitir realizar
numerosas pruebas a la vez. Cada tira de API 20E contiene 20 microtubos o
pocillos con distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una prueba
bioqumica distinta. La prueba nmero 21, la oxidasa, se hace de forma
independiente a la tira. Las pruebas de que consta la galera son las siguientes:
Batera de pruebas API: Pruebas incluidas y tablas de lectura con coloraciones

positivas y negativas
Pueba
Reaccin / Enzimas
Negativo
Positivo
ONPG
beta-galactosidasa
sin color
amarillo
ADH
arginina deshidrolasa
amarillo
rojo o naranja
LDC
lisina descarboxilasa
amarillo
rojo o naranja
ODC
ornitina descarboxilasa
amarillo
rojo o naranja
CIT
utilizacin del citrato
verde
azul oscuro o
turquesa
H2S
produccin de H2S
URE
ureasa
amarillo
rojo o naranja
TDA
triptfano desaminasa
amarillo
marrn-rojo
IND
produccin de indol
amarillo
color rosa o anillo

rosa-rojo
VP
produccin de acetona (VogesProskauer)
sin color
rosa-rojo
GEL
gelatinasa
sin difusin
difusin de
pigmento
GLU
fermentacin/oxidacin de glucosa
azul o verde
amarillo
sin precipitado
precipitado negro
negro
MAN
fermentacin/oxidacin de manitol
azul o verde
amarillo
INO
fermentacin/oxidacin de inositol
azul o verde
amarillo
SOR
fermentacin/oxidacin de sorbitol
azul o verde
amarillo
RHA
fermentacin/oxidacin de ramnosa
azul o verde
amarillo
SAC
fermentacin/oxidacin de sacarosa
azul o verde
amarillo
MEL
fermentacin/oxidacin de melobiosa
azul o verde
amarillo
AMY
fermentacin/oxidacin de amigdalina
azul o verde
amarillo
ARA
fermentacin/oxidacin de arabinosa
azul o verde
amarillo
OX
citocromo oxidasa
Pruebas API que actualmente se encuentran siendo utilizadas en la gran

mayora de laboratorios de Microbiologa son:
API 20E: Permite la identificacin de microorganismos pertenecientes al grupo
de las enterobacterias y de otros bacilos gram negativos.
API 20 NE: Permite la identificacin de bacilos gram negativos no

pertenecientes al grupo de las enterobacterias como por ejemplo Pseudomonas,
Acinetobacter, Flavobacterium, Moraxella, Vibrio, Aeromonas, entre otros.
API 20 A: Con este sistema miniaturizado se pueden montar las pruebas
bioqumicas que permiten la identificacin de bacterias anaerobias.
API STAPH: Este sistema permite la identificacin de microorganismos
pertenecientes al gnero Staphylococcus, Micrococcus y Kocuria.
API 50 CHL: Utilizado para la identificacin de Lactobacilos.
Existen otros sistemas miniaturizados API; entre ellos podemos sealar el API20
STREP, el API CAMPY, el APICORYNE, el APICANDIDA.
OBJETIVO
-
Identificar mediante pruebas bioqumicas la cepa de Salmonella spp

(Aislada del huevo, practica pasada, especialmente de la parte interna).
DESARROLLO
Pruebas Bioqumicas desarrolladas en la prctica:
-
Urea Agar.
MR-VP Medio
Agar Citrato de Simmnons
Agar Hierro Tres Azcares
Agar Levine EMB

Agar SIM mdium
Oxidasa
Catalasa
Microscopia
Urea Agar: Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la

actividad uresica. Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales
como
Proteus
spp.,
otras
enterobacterias
estafilococos.
Fundamento
En el medio de cultivo, la triptena y la glucosa, aportan los nutrientes para el
desarrollo de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance
osmtico, y el rojo de fenol es el indicador de pH. Algunas bacterias hidrolizan la
urea por medio de la enzima ureasa liberando amonaco y dixido de carbono.
Estos productos alcalinizan el medio haciendo virar el rojo de fenol del amarillo
al rojo. En este medio, la fermentacin de la glucosa activa la enzima ureasa,
acelerando la velocidad del metabolismo en aquellos organismos que hidrolizan
lentamente la urea, como especies de Enterobacter o Klebsiella.
Frmula (en gramos por litro)
Triptena
1.0
Glucosa
1.0
Cloruro de sodio
5.0
Fosfato monopotsico
2.0
Rojo de fenol
Agar
0.012
Instrucciones
Suspender 24 g de polvo en 950 ml

de agua destilada. Dejar reposar 2
minutos. Esterilizar en autoclave a
121C durante 15 minutos. Enfriar a
50C y agregar 50 ml de una
solucin de urea al 40% previamente
esterilizada por filtracin o
cloroformo. Fraccionar en tubos de
hemlisis y solidificar en pico de
flauta con fondo profundo.
15.0
pH final: 6.8 0.2
Siembra: A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, estriar la superficie del pico
de flauta. Algunos microorganismos pueden requerir mayor tiempo de
incubacin.
Se recomienda no punzar la capa profunda para controlar el color.
Incubacin: En aerobiosis, durante 24-48 horas a 35-37 C.
Resultados
Microorganismo
Actividad uresica
Color del medio
Proteus mirabilis ATCC 43071
Positiva
Rojo-Rosado
K. pneumoniae ATCC 700603
Positiva dbil
Rojo-Rosado
Escherichia coli ATCC 25922
Negativa
Amarillo
S. flexneri ATCC 12022
Negativa
Amarillo
S. typhimurium ATCC 14028
Negativa
Amarillo
MR-VP Medio: Medio utilizado para la realizacin del ensayo de Rojo de Metilo y
Voges
Proskauer.
Es
particularmente
til
para
la
clasificacin
de
enterobacterias.
Fundamento: En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes
necesarios para el desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono
fermentable.
La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a travs de
distintas vas metablicas. Segn la va utilizada, se originarn productos finales
cidos (cido lctico, cido actico, cido frmico), o productos finales neutros
(acetil metil carbinol).
Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podra ser reconocida por la

adicin de un indicador como rojo de metilo, para revelar la presencia de
productos cidos, y por la adicin de alfa naftol e hidrxido de potasio para
evidenciar
la
presencia
de
productos
finales
neutros.
Voges y Proskauer, describieron una coloracin rojiza que apareca despus de

adicionar hidrxido de potasio a los cultivos de ciertos microorganismos en
medio con glucosa. Esta coloracin se debe a la oxidacin del acetilmetil
carbinol a diacetilo el cual reacciona con la peptona del medio para dar un color
rojo.
Pluripeptona
Instrucciones
7.0
Glucosa
5.0
Fosfato dipotsico
5.0
Suspender 17 g del polvo por litro de

agua destilada. Calentar suavemente
agitando hasta disolver. Distribuir y
esterilizar en autoclave a 118-121C
durante 15 minutos.
pH final: 6.9 0.2
Siembra: Por inoculacin directa, a partir del cultivo en estudio.

Incubacin: En aerobiosis, a 35-37C por 3 das.
Revelado de pruebas bioqumicas.
a. Prueba del rojo de metilo:
Aadir unas gotas de rojo de metilo al 0.04%, observar el color del medio.
b. Prueba del Voges Proskauer:
Aadir 0,6 ml de alfa naftol al 5% en alcohol etlico absoluto y 0.2 ml de hidrxido
de potasio al 40% a 2.5 ml de cultivo. Agitar el tubo, y dejar a T ambiente
durante 10-15 mins. Observar el color de la superficie del medio.
Resultados
1.
2.
-
Prueba del rojo de metilo:

Positivo: color rojo.
Negativo: color amarillo.
Prueba de Voges Proskauer:
Positivo: desarrollo de un color rojo en pocos minutos despus de una
completa agitacin del tubo.

Negativo: ausencia de color rojo.
Microorganismo
Crecimiento
RM
VP
E. coli ATCC 25922
Bueno
K. pneumoniae ATCC
700603
Bueno
P. mirabilis ATCC 43071
Bueno
S. typhimurium ATCC
14028
Bueno
Citrobacter freundii
Bueno
Enterobacter aerogenes
Bueno
Agar Citrato de Simmnons: Medio utilizado para la diferenciacin de

enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como nica fuente de
carbono y energa.
Fundamento: En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente
de nitrgeno y el citrato de sodio es la nica fuente de carbono. Ambos
componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato
forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimtico. El cloruro de sodio
mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que
vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a
que los microorganismos capaces de utilizar citrato como nica fuente de

carbono, usan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno, con la
consiguiente produccin de alcalinidad. El metabolismo del citrato se realiza, en
aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a travs del ciclo del cido
tricarboxlico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y
piruvato. Este ltimo, en presencia de un medio alcalino, da origen a cidos
orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y
bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la
produccin de citrato permeasa.
Citrato de sodio
2.0
Cloruro de sodio
5.0
Fosfato dipotsico
1.0
Fosfato monoamnico
1.0
Sulfato de magnesio
0.2
Azul de bromotimol
0.08
Agar
15.0
Instrucciones
Suspender 24,2 g del medio deshidratado por litro

de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y
mezclar calentando a ebullicin durante 1 o 2
minutos. Distribuir en tubos y esterilizar en
autoclave a 121C durante 15 minutos. Enfriar en
posicin inclinada.
pH final: 6.9 0.2
Siembra: A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar en superficie un

inculo ligero, usando un asa sin arrastrar el agar.
Incubacin: A 35-37 C, durante 24-48 hrs, en aerobiosis. Algunos MO pueden
requerir hasta 4 das de incubacin.
Resultados
-
Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.

Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay
desarrollo bacteriano y no hay cambio de color.
Microorganismo
Citrato permeasa Color del medio
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603
Positivo
Azul
Positivo
Azul
E. coli ATCC 25922
Negativo
Verde
Negativo
Verde
Agar Hierro Tres Azcares: Medio universalmente empleado para la

diferenciacin de enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa, lactosa,
sacarosa
la
produccin
de
cido
sulfhdrico.
Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los
nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y
glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el
sustrato necesario para producir de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y
amonio, es la fuente de iones Fe 3+ , los cuales se combinan con el cido
sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el
indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.
Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio
del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio cido. El
tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con
una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.
Instrucciones
Extracto de carne
Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua

destilada. Mezclar bien y calentar con
agitacin frecuente, hervir 1 o 2 minutos
hasta disolucin total. Llenar hasta la tercera
parte de los tubos de ensayo. Esterilizar a
121C por 15 minutos. Enfriar en pico de
flauta profundo.
Pluripeptona
Cloruro de sodio
3.0
20.0
5.0
Lactosa
10.0
Sacarosa
10.0
Glucosa
1.0
Sulfato de hierro y amonio
0.2
Tiosulfato de sodio
0.2
Rojo de fenol
Agar
0.025
13.0
pH final: 7.3 0.2
Siembra
A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo sobre
la superficie del medio.
Incubacin
A 35-37C durante 24 horas, en aerobiosis.
Resultados
1. Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el MO solamente

fermenta la glucosa.
2. Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el MO fermenta
glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3. Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el MO es no
fermentador de azcares.
4. La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el MO
produce gas.
5. Ennegrecimiento del medio indica que el MO produce cido sulfhdrico.
Microorganismo
Pico/Fondo
Produce gas
Produce H2S
E. coli ATCC 25922
A/A
A/A
K/A
K/A
S. enteritidis ATCC 13076
K/A
K/A
P. aeruginosa ATCC 27853
K/K
A: cido
K: alcalino
Agar Levine EMB: Medio adecuado para la bsqueda y diferenciacin de

bacilos entricos, a partir de muestras clnicas, aguas servidas, y otros
materiales.
Fundamento
La frmula original de este medio de cultivo, fue modificada por Levine,
eliminando la sacarosa e incrementando la concentracin de lactosa, lo que

permite
una
mejor
diferenciacin
de
E.
coli.
Es un medio selectivo y diferencial, adecuado para el crecimiento de

enterobacterias. La combinacin utilizada de eosina y azul de metileno, inhibe el
desarrollo de microorganismos Gram positivos y de bacterias Gram negativas
fastidiosas, y tambin, permite diferenciar bacterias fermentadoras y no
fermentadoras de lactosa.
Los microorganismos fermentadores de lactosa, originan colonias de color
azulado-negro, con brillo metlico. Las colonias producidas por microorganismos
no
fermentadores
de
lactosa
son
incoloras.
Algunas bacterias Gram positivas (cepas de estafilococos, enterococos) y

levaduras,
pueden
crecer,
originando
colonias incoloras y puntiformes.

Este medio de cultivo,es til para la orientacin y no confirmacin de especies
bacterianas (ya que numerosas cepas de Citrobacter spp. producen colonias con
brillo metlico), por lo cual ser necesario realizar pruebas bioqumicas, para la
identificacin de gnero y especie.
Peptona
10.0
Lactosa
10.0
Fosfato dipotsico
2.0
Agar
15.0
Eosina
0.4
Azul de metileno
0.065
Instrucciones
Suspender 37,4 g de polvo por litro de

agua destilada, dejar reposar 5 minutos.
Calentar a ebullicin hasta disolucin
total. Distribuir y esterilizar 15 minutos a
121C.
pH final:7.1 0.2
Siembra: Directa, estriando la superficie.

Incubacin: De 18-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
Resultados
Microorganismos
Escherichia coli ATCC 25922
Crecimiento
Caractersticas de las colonias
Bueno a excelente
Verdosas con brillo metlico y centro negro

azulado
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Bueno a excelente
Mucosas, rosa prpura, confluentes
P. aeruginosa ATCC 27853
Bueno a excelente
Incoloras
Proteus mirabilis ATCC 43071
Bueno a excelente
Incoloras
S. aureus ATCC 25923
Pobre
Incoloras, pequeas, puntiformes
Enterococcus faecalis ATCC 29212
Pobre
Incoloras, pequeas, puntiformes
Shigella flexneri ATCC 12022
Bueno a excelente
Incoloras
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Bueno a excelente
Incoloras
Agar SIM mdium: Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad,

produccin de indol y de sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo.
Es
til
para
diferenciar
miembros
de
la
familia
Enterobacteriaceae.
Fundamento: El triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas,

y particularmente de la triptena, que puede ser oxidado por algunas bacterias
para formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas

triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Kovac
s o de Erlich, para originar un compuesto de color rojo. Las cepas mviles
pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la
puncin de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhdrico se
distinguen por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir
del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.2.
Triptena
20.0
Peptona
6.1
Sulfato de hierro y amonio
0.2
Tiosulfato de sodio
0.2
Agar
3.5
Instrucciones
Suspender 30 g del polvo por litro de

agua destilada. Mezclar hasta disolver;
calentar agitando y hervir durante un
minuto. Distribuir unos 4 ml en tubos de
hemlisis y esterilizar en autoclave a
121C durante 15 minutos. Solidificar en
posicin vertical.
pH final: 7.3 0.2
Siembra: A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio slido, sembrar por

puncin profunda con aguja de inoculacin recta (no usar ansa con anillo). Se
debe inocular el centro del tubo, y la puncin debe abarcar 2 tercios de
profundidad del medio de cultivo desde la superficie. Es importante que la
siembra se realice en lnea recta.
Incubacin:
Durante
24
horas,
35-37
C,
en
aerobiosis.
Luego de la incubacin, agregar 3-5 gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich.

Resultados
Cepas mviles: producen turbidez del medio, que se extiende mas all de
la lnea de siembra.
Cepas inmviles: el crecimiento se observa solamente en la lnea de
siembra.
Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la lnea de siembra o
en todo el medio.
Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color.
Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo
de Kovacs o de Erlich.
Cepas indol negativas: sin cambio de color.
Microorganismo
Movilidad
Indol
Produccin de cido
sulfhdrico
E. coli ATCC 25922
S. enteritidis ATCC 13076
Oxidasa: Tirillas de Oxidasa: tiras reactivas que sirven para la deteccin rpida
y sencilla del enzima citocromo-oxidasa en el diagnstico microbiolgico. A
diferencia con el ensayo tradicional de laboratorio, donde el reactivo tetrametil pfenilendiamina, posee una gran inestabilidad, en las tiras de la oxidasa Panreac,
gracias a que el reactivo se encuentra fijado en la almohadilla, su estabilidad es
muy superior.
Principales ventajas:
Estabilidad Superior, el reactivo se encuentra fijado en la almohadilla.

Rapidez y comodidad, no son necesarios ni calibraciones,
ni
preparaciones ni largos tiempos de espera.

Catalasa: Se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que se
encuentra en la mayora de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que
contienen citocromo. La principal excepcin es Streptococcus. Originariamente,
esta prueba era utilizada para diferenciar entre los siguientes gneros:
Streptococcus (-) de Micrococcus (+) y/o Staphylococcus (+).
Bacillus (+) de Clostridium (-).
Lysteria monocytogenes (+) y/o Corynebacterium (+, con las excepciones

de C. pyogenes y C. haemolyticum, ambos - ) de Erysipelothrix (-)
Una prueba de rutina de la catalasa a temperatura ambiente puede hacerse

siguiendo dos tcnicas:
1. Mtodo del portaobjetos (recomendado):
Con el asa de siembra recoger el centro de una colonia pura de 18-24

horas y colocar sobre un portaobjetos limpio de vidrio.
Agregar con gotero o pipeta Pasteur una gota de H 2O2 al 30% sobre el
microorganismo sin mezclarlo con el cultivo.
Observar la formacin inmediata de burbujas (resultado positivo).
Desechar el portaobjetos en un recipiente con desinfectante.
Si se invierte el orden del mtodo (extender la colonia sobre el agua

oxigenada) pueden producirse falsos positivos.
1 Mtodo del tubo de ensayo:
Agregar 1ml de H2O2 al 3% directamente a un cultivo puro de agar en

slant densamente inoculado.
Observar la formacin inmediata de burbujas (resultado positivo).
Precauciones: Si se utilizan para esta prueba cultivos procedentes de agar

sangre, se debe tener la precaucin de no retirar algo de agar con el asa al
retirar la colonia ya que los eritrocitos del medio contienen catalasa y su
presencia dar un falso resultado positivo.
TECNICA SIEMBRA POR ESTRIAS SUPERFICIE
El mtodo de siembra por estra en placa Es el mtodo ms fcil y el ms usado para
obtener cultivos axnicos. Para ello, con un asa de siembra se toma una muestra de la
poblacin mixta y a continuacin se hacen estras sobre la superficie de un medio slido
preparado en una placa Petr. Conforme se van haciendo estras en zigzag con el asa,
cada vez se van depositando en la superficie del medio menos microorganismos. A
continuacin, se flamea el asa, se toca en la regin donde se han realizado las ltimas
estras y se contina la siembra con la misma tcnica, en la superficie de medio sin
sembrar an. Repitiendo este proceso varias veces se logra separar clulas
individuales.
A continuacin, las placas se incuban en un lugar adecuado, permitiendo que las

clulas aisladas experimenten un nmero suficiente de divisiones para formar
colonias visibles. Aunque cada colonia posiblemente representa un clon derivado
de una sola clula, no podemos asegurarlo. Quizs, dos clulas quedaron
depositadas tan juntas que han originado una nica colonia mixta. Por tanto,
para asegurarnos de que hemos obtenido un cultivo axnico, conviene repetir el
procedimiento a partir de una colonia bien aislada en la primera placa. Las
colonias que se desarrollen la segunda vez, sern, casi con toda seguridad,
cultivos axenicos.
Siembra por picadura: El inoculo es introducido con el asa recta o pipeta
pasteur hasta el fondo del medio con un solo movimiento y teniendo cuidado en
hacer el mismo trayecto de entrada que de salida. Debe flamearse la boca del
tubo antes y despus de la siembra. Antes de introducir el tubo a la estufa de
cultivo debe soltarse el tapn de goma para evitar que los gases expulsen el
tapn.
Siembra en superficie y picadura: El inoculo es introducido con el asa recta o
pipeta Pasteur hasta el fondo del medio con un solo movimiento y teniendo
cuidado en hacer el mismo trayecto de entrada que de salida, se retira hacia la
superficie inclinada del agar haciendo suavemente una estra ondulada. Debe
flamearse la boca del tubo antes y despus de la siembra. Antes de introducir el
tubo a la estufa de cultivo debe soltarse el tapn de goma para evitar que los
gases expulsen el tapn.
Tincin de GRAM
La tincin
de
Gram
es
un
tipo
de tincin
diferencial empleado
en microbiologa para la visualizacin de bacterias. Debe su nombre al

bacterilogo dans Christian Gram, que desarroll la tcnica en 1884. Se utiliza
tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana como para poder
realizar
una
primera
aproximacin
la
diferenciacin
bacteriana,
considerndose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color

moradas y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo.
Metodologa.
Recoger muestras.
Hacer el extendido en espiral.
Dejar secar a temperatura ambiente.
Fijar la muestra con calor (flameado 3 veces aprox.)
Agregar azul violeta (cristal violeta) y esperar 1 min. Todas las clulas
gram positivas y gram negativas se tien de color azul-purpura.
Enjuagar con agua.
Agregar lugol y esperar entre 1 minuto.
Enjuagar con agua.
Agregar acetona y/o alcohol y esperar 4 segundos (parte critica de la

coloracin)
Enjuagar con agua.
Tincin de contraste agregando safranina o fucsina bsica y esperar 1-2

min Este tinte dejar de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.
Enjuagar con agua.
Observar al microscopio a 100x con aceite de inmersin.
Bacterias resistentes a la Tincin de Gram

Las siguientes bacterias de naturaleza grampositiva, tien como gramnegativas:
Mycobacterias (estn encapsuladas).
Mycoplasmas (no tienen pared).
Formas L (prdida ocasional de la pared).
Protoplastos y esferoplastos (eliminacin total y parcial de la pared,

respectivamente).
Diagrama del proceso de la Tincin de Gram
MICROSCOPIA
Conjunto de tcnicas y mtodos destinados a hacer visible los objetos de
estudio que por su pequeez estn fuera del rango de resolucin del ojo
normal.
Si bien el microscopio es el elemento central de la microscopa, el uso del
mismo requiere para producir las imgenes adecuadas, de todo un conjunto
de mtodos y tcnicas afines pero extrnsecas al aparato. Algunas de ellas
son, tcnicas de preparacin y manejo de los objetos de estudio, tcnicas de
salida, procesamiento, interpretacin y registro de imgenes, etc.
PREPARACIONES MICROSCOPICAS.
Para realizar
observaciones de los
microorganismos
presentes
en
una
muestra es necesario manipular previamente dicha muestra.

Esta manipulacin permite obtener una preparacin microscpica, que es el
material que finalmente se colocar en la pletina del microscopio.
Esta preparacin constar obligatoriamente de un portaobjetos (ya sea
convencional o de uso especfico), una porcin de la muestra (que en muchos
casos habr sido modificada) y podr o no incluir un cubreobjetos y otros
materiales. Las preparaciones microscpicas se obtienen de modos diversos
que dependen de la
queremos observar.
naturaleza de la
muestra
y de los
parmetros
que
Hay distintos criterios que pueden utilizarse para clasificar las diferentes
preparaciones microscpicas existentes. El criterio que vamos a seguir aqu
consiste en establecer tres grupos:
-
Preparaciones para examen en fresco sin modificar.

Preparaciones para examen en fresco ligeramente modifica das.
Preparaciones fijadas y teidas. La muestra a partir de la cual se
obtiene debe ser una muestra directa fresca o un cultivo reciente, pues
la utilizacin de muestras y cultivos envejecidos y no conservados
adecuadamente puede hacer que las caractersticas observadas no
correspondan a la realidad.
LIMITACIONES DEL MICROSCOPIO PTICO.

Por qu se trabaja a un mximo de 1.000 aumentos en los microscopios
pticos?
La
limitacin
bsica
no
es
una
cuestin de aumentos,
sino de poder de resolucin, que es la capacidad de distincin entre dos puntos

adyacentes como distintos y separados.
Por cuestiones relacionadas con la longitud de onda de la luz visible en las que
no vamos a entrar, la luz visible no permite distinguir ntidamente objetos
menores de 0'2
m de dimetro.
Con
algunas
modificaciones
pueden
construirse microscopios pticos de 2.000 o 3.000 aumentos. Sin embargo, los

microscopios pticos de ms de 2.000 o 3.000 aumentos proporcionarn
imgenes ms grandes pero ms borrosas y esto no tiene ninguna utilidad.
Desarrollo de la prctica
Materiales.
-
Algodn
Mechero
Lpiz graso
Asa de platino en forma de asa
Asa de platino en forma de punta
Caja Petri (con muestra)
Tirillas de Oxidas
Incubadora (1)
Encendedor
Papel Aluminio
Cinta Masking tape
Guante de seguridad
Gradilla
Porta objetos (3)
Sustancias.
-
Agua Destilada Estril

Medio de cultivo con muestra
(Salmonella)
Alcohol Antisptico
Cristal Violeta
Lugol
Alcohol
Safranina
Aceite de Inmersin
Perxido de Hidrgeno (agua
Cubre Objetos
Microscopio ptico
Pipeta volumtrica
Vaso de precipitacin
Tubo de ensayo con tapa (6)
Cmara de flujo laminar
oxigenada)
Rojo de Metilo
Urea Agar.
MR-VP Medio
Agar Citrato de Simmnons
Agar Levine EMB
Agar SIM mdium
Siembras por Estra de Superficie (S.E.S.), resuspensin (R) y picadura (P).

En
diferentes
agares
para
desarrollo
de
pruebas
bioqumica
determinacin del tipo de MO especfico.

1. Ingresamos al laboratorio de microbiologa manteniendo las normas de
bioseguridad.
2. Escuchamos una breve introduccin de lo que ser la prctica a realizar
(pruebas bioqumicas de identificacin).
3. Escuchar con atencin las pautas, recomendaciones y normas para
realizar la prctica (indicaciones) por parte del profesor y ayudante.
4. Observar con detenimiento y anotar todos los pasos realizados por el
docente al realizar una demostracin rpida de lo que ser la prctica a
realizar (pruebas bioqumicas de identificacin y desarrollar los mtodos
S.E.S., P, R).
5. Preparar el rtulo respectivo para tubo asignado (6 tubos por subgrupo)
(Fecha, agar, tcnica, muestra, T, nombre, grupo, subgrupo, etc)
6. Plaqueamos los tubos asiganados, ya con los medios (agares) dentro de
ellos, para realizar la siempra.
7. Ubicarse (Cabina de flujo laminar) y preparar (cono de seguridad) todo en
el lugar de trabajo asignado, tomando en cuenta las indicaciones y
recomendaciones del profesor.
8. Siembra en Urea Agar (P).
8.1. Tomamos de la placa con el medio de cultivo de muestra con el
8.2.
asa de platino en forma de punta, previamente flameada.

Tomamos el tubo de ensayo con tapa previamente rotulado en
8.3.
donde se encuentra el urea agar.

Luego flameamos el tubo al abrir y sembramos con el asa
utilizando el metodo de siembra por picadura.

8.4. Cerrar despus de sembrar y colocar en la gradilla.
9. Siembra en MR-VP Medio (R).
asa de platino en forma de asa, previamente flameada.
9.2.
Tomamos el tubo de ensayo con tapa previamente rotulado en
9.3.
donde se encuentra el MR-VP medio.

Luego flameamos el tubo al abrir y sembramos con el asa
utilizando el metodo de siembra por resuspensin.

10. Siembra en Agar Citrato de Simmons (P/S.E.S.).
10.2. Tomamos el tubo de ensayo con tapa previamente rotulado en
donde se encuentra el Agar Citrato de Simmons.
10.3. Luego flameamos el tubo al abrir y sembramos con el asa
10.4. Una vez realizada la siembra por picadura, antes de sacar el asa,
de manera inmediata, con mucho cuidado realizar la siembra por
estria de superfie, guardando mucho cuidado para no romper el
agar.
11. Siembra en Agar Hierro Tres Azucares (T.S.I.) (P/S.E.S.).
donde se encuentra el Agar Hierro Tres Azucares.
11.4. Una vez realizada la siembra por picadura, antes de sacar el asa,
de manera inmediata, con mucho cuidado realizar la siembra por
estria de superfie, guardando mucho cuidado para no romper el
agar.
12. Siembra en Agar Levine - EMB (S.E.S.).
donde se encuentra el Agar Levine - EMB.
12.3. Luego flameamos el tubo al abrir y sembramos con el asa en forma
de asa y realizar la siembra por estria de superfie, guardando
mucho cuidado para no romper el agar.
13. Siembra en Agar SIM mdium (P).

donde se encuentra el agar SIM.
14. Luego de sembrar, llevamos la gradilla a la incubadora 1 y dejamos a una
T= 37C por 24 hrs.
15. Tincin de GRAM y microscopia
15.1. Colocamos una gota de agua destilada utilizando el gotero sobre el
portaobjetos.
15.2. Encender el mechero, esterilizamos el asa de platino en forma de
asa.
15.3. Luego, tomar la placa (caja petri), abrirla y enfriar el asa en la parte
superior de esta.
15.4. Luego, tomamos con el asa de platino una muestra muy muy
pequea (un ligero roce sobre la muestra).
15.5. Tomamos el portaobjetos (con la gota de agua destilada) y
realizamos el frotis sobre este (sobre la gota) esparcimos solo en la
zona a trabajar, expandir bien.
15.6. Luego tomamos el portaobjeto con las pinzas para hacer la fijacin
(flameo) sobre la llama (de adentro hacia afuera).
15.7. Luego de la fijacin, dejamos enfriar un poco, y con el lpiz graso
delimitamos la muestra con dos lneas dibujadas que la dividan
desde el centro formando una cuadrado.
15.8. Llevamos el portaobjetos al lavabo, lo colocamos sobre el soporte
del lavabo, para realizar la tincin.
15.9. Procedemos a colocar el violeta cristal sobre el portaobjetos (en la
zona delimitada por el lpiz graso) y dejamos reposar 1min.
15.10. Luego, verter el liquido en la rejilla del lavabo y enjuagamos a
chorro ligero, dejando caer el agua sobre nuestro dedo ndice y con
este hacerla llegar al portaobjetos para dejarla parcialmente limpia.
15.11. Luego, procedemos a colocar el lugol sobre el portaobjetos (en la
15.13. Despus verter alcohol sobre el portaobjetos, as mismo como en
el violeta cristal y lugol, por la zona delimitada, por 20seg.
15.14. Luego, enjuagamos a chorro ligero, dejando caer el agua sobre

nuestro dedo ndice y con este hacerla llegar al portaobjetos para
dejarla parcialmente limpia.
15.15. Finalmente colocamos la safranina sobre el portaobjetos (en la
15.17. Secamos la parte inferior del portaobjetos con una toalla, y luego
dejamos reposar hasta que se seque.
15.18. Una vez seco nuestro portaobjetos, colocamos unas gotas de
aceite de inmersin en el rea delimitada por el lpiz graso.
15.19. Colocamos encima del acite de inmersin de nuestro porta
objetos, el cubre objetos.
15.20. Luego, llevamos al microscopio ptico (a una visualizacin de
100X) para realizar las observaciones respectivas y distinguir,
Gram- (Salmonellas)
15.21. Anotar y dibujar los resultados de esta observacin. (Resultados)
16. Finalmente lavamos todo lo utilizado.
17. Observar despus de las 24hrs y anotar resultados.
RESULTADOS
Segn lo realizado en esta prctica, de la muestra que tomamos (placa petri con
Medio de Cultivo de muestra - Salmonellas) fue adquirida de los cultivos
obtenidos del huevo que muestreamos la semana pasada, La muestra
presentaba las siguientes caractersticas:
-
Agar (SS) Color: Verde.

Colonias de color: Rosa, grises, incoloras.
Colonias con caracteristicas cremosas (ciertas), con centros de color gris
o negro.
En las pruebas realizadas en el laboratorio se obtuvo los siguientes resultados

(mismo da de la prctica):
Oxidasa: Tirillas de oxidasa al reaccionar con la muestra: Tono azul
Positivo
Catalasa: Perxido de Hidrgeno al reaccionar con la muestra: Produce
efervescencia (burbujas liberacin de O2 + H2O) Positivo.
Tincin de Gram: Resultado favorable: Coloracin de gram (lo que

buscbamos) logrando ver en la microscopia Salmonellas
Despus de 24hrs los tubos en la incubadora 1 se obtuvieron los siguientes

resultados:
Urea Agar: Coloracin sin cambio alguno (Amarillo) Negativo

MR-VP Medio: Al agregar las gotas de rojo de metilo (MR) coloracin roja
(parte media-superior) Positivo

Agar Citrato de Simmnons: Coloracin azul (medio del tubo) Positivo
Agar Hierro Tres Azcares: Coloracin del agar no presenta cambio
alguno (Rojo) Negativo

Agar Levine EMB: Coloracin del agar no presenta cambio alguno
Negativo.
Agar SIM mdium: El medio presenta turbidez que se extiende ms all
de la lnea de siembra La cepa presenta movilidad (Muy mvil, ya que
extenda por todo el agar en el tubo).
En la microscopia pudimos observar los MO gram negativas Salmonellas
DISCUSIN
Se obtuvo de la muestra (del huevo; tomada la prctica anterior/ Interno y
externo, Pero especficamente de la muestra externa).
Como se infectan los huevos:

Varias cepas de Salmonella habitan el intestino de animales y aves y son
transmitidas a los humanos por alimentos de origen animal. La
contaminacin del huevo con deposiciones de la gallina y/o la rotura
facilita la infeccin. Este mecanismo en otros pases se ha controlado casi
totalmente por medio de la inspeccin cuidadosa de los huevos y tcnicas
de aseo.
Sin embargo pese al consumo exclusivo de huevos con cscara intacta y
desinfectados el problema persiste ya que la Salmonella enteritidis infecta
silenciosamente los ovarios de gallinas aparentemente sanas y contamina
los huevos antes de la formacin de la cscara. En ciertas zonas de EU
se estima que 1 de cada 10.000 huevos puede estar contaminado
internamente. Slo un pequeo nmero de gallinas estn infectadas en
un momento preciso e incluso una gallina infectada puede poner muchos
huevos sanos y slo ocasionalmente algunos infectados.

Quienes pueden enfermar: Los ancianos, nios pequeos y personas
con deficiencia de la inmunidad estn en mayor riesgo de enfermedad
grave. En ellos una pequea cantidad de salmonellas puede producir la
enfermedad. La mayora de los casos fatales por esta infeccin se
producen en ancianos internados en asilos.
Los adultos sanos y nios tambin pueden sufrir la infeccin pero
habitualmente en forma ms benigna.
Al observar (todos los tubos) pudimos observar los diversos resultados y colores
de colonias (cultivos obtenidos) y reacciones de los MO que all haban, de lo
que pude observar he elaborado una tabla de resultados, tomando como
referencia al tipo de prueba bioqumica (agar o medio, reaccin) y el resultado
observado, en dependencia de si es positivo o negativo, coloracin de MO en
tincin de gram, microscopia.
PRUEBA BIOQUIMICA
Urea Agar.
RESULTADO
Negativo
MR-VP Medio
Agar Citrato de Simmons
Agar Levine EMB
Agar SIM mdium
Oxidasa
Catalasa
Tincin de Gram
Microscopia
Positivo
Positivo
Negativo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Gram Negativas
Bacilos flagelados gran negativos
S. marcescens: Vistas en 3D a una

visualizacin de 80x (Gram negativas)
S. marcescens: Vista
macroscpicamente (colonias-color rojo)
S. marcescens: Vista microscpicamente:

Microscopio ptico
(bacilo con flagelo)
S.
marcescens:
Observacin
microscopio electrnico (ptico) (bacilos

con flagelos)
Tomando en cuenta estos resultados y guindonos en las tablas para determinar

el tipo de MO especifico (sealando y descartando posibles MO que cumplen
estas caractersticas en cuanto a los resultados) que se ha obtenido es Serratia
marcescens.
Serratia marcescens Reino: Bacteria; Filo: Proteobacteria; Clase: Gamma
Proteobacteria;
Orden:
Enterobacteriales;
Familia:
Enterobacteriaceae;
Genero: Serratia; Especie: S. marcescens.

Serratia marcescens es motil, en forma de bacilo, Gram-negativos, anaerobios
facultativos bacteria, clasificado como un patgeno oportunista.
De manera ptima, Serratia marcescens crece a 37 C, pero puede crecer a
temperaturas que van desde 5-40 C. Crecen en los niveles de pH que van
desde 5 hasta 9. Serratia marcescens es bien conocido por la pigmentacin roja
que produce llamada prodigiosina. La Prodigiosina se compone de tres anillos
de pirrol y no se produce a 37 C, pero si a temperaturas inferiores a 30C. La
produccin de pigmentos de color rojo no est presente en todas las cepas, pero
en los que est presente, se asemejan a la sangre. Esto y el hecho de
que Serratia marcescens normalmente crece en el pan y hostias almacenados
en lugares hmedos, se ha llevado a los cientficos a sugerir la contaminacin
Serratia como una posible explicacin para los milagros transubstanciacin (la
conversin del pan en el Cuerpo y la Sangre de Cristo). Por ejemplo, la historia
del Milagro de Bolsena de los estados que, en 1263, un sacerdote con dudas de
la presencia de Cristo en la hostia consagrada presidi una misa en la baslica
de Bolsena. Despus de hablar las palabras de la consagracin, la sangre
empez a gotear de la hostia consagrada en sus manos y el altar. Este evento
fue representado por Rafael en las paredes del Vaticano
El genoma de la cepa Serratia marcescens DB11 se secuenci por el Instituto
Sanger de la colaboracin del Dr.Jonathan Ewbank del Centre d'Immunologie de
Marsella Luminy. El genoma completo se compone de un nico cromosoma

circular de 5,113,802 pares de bases que contienen un contenido de G + C, de
59,51%.
Estructura de la clula y Metabolismo
Serratia marcescens es un bacilo motil. Es un anaerobio facultativo, lo que
significa que puede crecer en ya sea la presencia de oxgeno (aerbico) o en
ausencia de oxgeno (anaerobio).Principalmente se utiliza la fermentacin como
el medio de reunir la energa y tiene enzimas (superxido dismutasa, catalasa o
perxidos) que lo protegen de especies reactivas del oxgeno, lo que le permite
vivir en ambientes oxigenados. Serratia marcescens es una bacteria gram
negativa. Las bacterias gram negativas tienen una pared celular delgada hecha
de una sola capa de peptidoglicano que est encerrado por una membrana
externa. La membrana externa tiene lipopolisacridos (LPS), que son una clase
especial de fosfolpido compuesto de cidos grasos que estn conectados a un
dmero fosfato glucosamina. Una glucosamina se fija entonces a un polisacrido
bsico que se extiende a los polisacridos O. La membrana externa tambin
sirve como un medio para regular la absorcin de nutrientes y la exclusin de las
toxinas. Los poros de protenas y transportadores que se encuentran en las
capas envolventes variar en selectividad.
Serratia marcescens es mvil y se desplaza por diferentes medios. Una sola
bacteria Serratia marcescens puede nadar con la utilizacin de su flagelo. Como
grupo, pueden estar como un enjambre juntos en agar de concentraciones ms
bajas (0 .5 a 0.8%) Las clulas de este Enjambre pueden variar en longitud de
5-30 micras y son muy flageladas y no septadas Serratia marcescens tiene
alrededor
de
100
1.000
flagelos
por
clula
nadadora
Serratia
marcescens tambin pueden formar un biofilm (estructura compleja formada por

secretada mucilaginosa matrixto. formar una capa protectora en la que estn
encerrados).
La hidrlisis de la casena no es un rasgo comn y es por lo tanto tiles en la
diferenciacin de Serratia marcescens de las 438 cepas de las familias
Enterobacteriaceae
Pseudomonadaceae.
Serratia
marcescens tiene
la
capacidad de reproducirse a romper la casena produce un intercambio de

informacin sobre placas de agar de leche. La casena es la protena de la leche
precipitada que forma la base de queso y algunos tipos de plstico. Serratia
marcescens utiliza enzimas llamadas proteasas extracelulares para romper los
enlaces peptdicos (CO-NH) en la casena. De manera similar, una enzima
extracelular llamado rompe gelatinasa abajo gelatina, una protena incompleta
que carece de triptfano. Hidrlisis gelatina transforma la protena a los
aminocidos individuales y provoca que se licuan en condiciones fras (menos
de 25 C) cuando lo que debera ser slido.
Hay otras pruebas bioqumicas que ayudan a identificar Serratia marcescens en
el laboratorio. Es negativo para la prueba de rojo de metilo debido a su
produccin de 2, 3 - butanodiol y etanol, pero positivo para la prueba de VogesProskauer, que muestra capacidad de un organismo para convertir el piruvato a
acetona Serratia marcescens es negativo para el cido. Produccin (positivo) de
lactosa, glucosa y sacarosa fermentacin. Las pruebas de nitratos son positivas
desde que el nitrato se utiliza generalmente como el aceptor final de electrones
en lugar de oxgeno. Citrato (prueba positiva) es utilizado por Serratia
marcescens para producir cido pirvico. Es positivo para la descarboxilasa, que
es la eliminacin de un grupo carboxilo de un aminocido, produciendo una
amina y dixido de carbono. La pigmentacin de color rojo (prodigiosina)
que Serratia marcescens es conocido por puede ser un factor de diferenciacin
pero slo est presente en algunas cepas. No se conoce exactamente por qu
es, pero hay la hiptesis de que es un producto del gen estrechamente
regulado. La Prodigiosina puede activar el sistema inmunolgico del cuerpo
(anticuerpos y clulas T), por lo que es posible que las Serratia marcescens que
viven en un cuerpo humano limiten su sntesis de prodigiosina y, por tanto
escapar a la deteccin por el sistema inmune del husped. Muchas cepas
parecen haber perdido la capacidad para producirla en absoluto.
Ecologa: Serratia marcescens: Se encuentra comnmente en el suelo, agua,

plantas y animales. Es ampliamente presentes en el agua no potable en los
pases subdesarrollados debido a la cloracin pobres. Este microorganismo es
un agente comn responsable de la contaminacin de las placas de Petri en el
laboratorio,
tambin
se
encuentra
creciendo
en
el
pan. Aunque S. marcescens es un microorganismo patgeno, slo es as con los

individuos inmunocomprometidos, tales como los encontrados en los hospitales
donde muchas de las infecciones documentadas tienen lugar. El modo de
transmisin de este microorganismo es por contacto directo, o por catteres,
gotas, soluciones salinas de riego, y otras soluciones que se cree que son
estriles.
Patologa: Serratia marcescens es un patgeno oportunista que causa
infecciones nosocomiales. Es resistente a muchos antibiticos utilizados
tradicionalmente para tratar infecciones bacterianas, como la penicilina y la
ampicilina. Esto es debido a todas las caractersticas Serratia marcescens;
membrana nica (LPS) como una bacteria Gram-negativas, la capacidad de
sobrevivir en condiciones aerobias y anaerobias, y su motilidad. La mayora de
las cepas son resistentes a varios antibiticos debido a la presencia de factores
R (genes que codifican para resistencia a los antibiticos) en plsmidos. Hay
muchas enfermedades que se asocian con Serratia marcescens: sepsis,
abscesos bacteriemia, meningitis y cerebrales, infecciones del tracto urinario,
osteomielitis, infecciones oculares, y endocarditis. Debido a la amplia gama de
enfermedades Serratia marcescens causas, no es un sntoma o la determinacin
de
fuente
de
origen. Las
biopelculas
son
generalmente
producidas
patgenamente en el cuerpo.
Tambin, como se menciona en la estructura celular, la capa de LPS est unida
a la membrana externa de la bateria Gram negativas. El LPS acta como una
endotoxina (un componente de la clula que es inofensivo, siempre y cuando el
patgeno se mantiene intacto). La liberacin de LPS se sobre-estimular las
defensas del husped y hacer que someterse a shock endotxico letal. La
presencia de LPS por lo tanto hace que sea difcil de matar Serratia
marcescens, sin causar la muerte de las clulas del husped.
Algunos de los antibiticos han demostrado ser eficaces contra Serratia

marcescens son los antipseudomonal antibiticos beta-lactmicos, que matan
las bacterias inhibiendo la sntesis de la pared celular. A pesar de que se han
desarrollado y se utiliza para matar las pseudomonas, que tambin han
demostrado su eficacia contra la Serratia marcescens y otras estrechamente
relacionadas con las bacterias Gram negativas. Parte de la naturaleza
problemtica de este organismo es su capacidad de colonizar cualquier
superficie. Por ejemplo, Serratia marcescens ha sido identificado como el
organismo ms comn que se encuentra en ambos de los sitios corneales y
lentes de contacto. Se ha encontrado, sin embargo, que policuaternio-1 (un
biocida utilizado comercialmente en una solucin desinfectante de lentes de
contacto) es activo frente a la membrana citoplasmtica de Serratia marcescens
Un estudio reciente sugiere que la Serratia marcescens ost3 produce una
pelcula de prodigiosina llamada MAMPDM ((2,2'- [3-metoxi-1amyl-5-metil-4-(1pirrilo) dipyrrylmethene)) que puede tener un impacto importante en el
tratamiento del cncer. Este pigmento rojo ha demostrado una actividad
citotxica selectiva en lneas celulares de cncer, pero en el contraste se revel
una toxicidad reducida para las clulas no malignas. Llegaron a la conclusin de
que la Serratia marcescens ost3 puede en un tiempo ser utilizada como un
fuente de desarrollo de un compuesto contra el cncer.
Otro estudio sugiere que la Serratia marcescens cepa NCTC 10211 puede servir
como un probitico en la inhibicin del crecimiento de H. pylori, el agente
causante de las lceras de estmago. Al examinar diferentes especies y cepas
de bacterias, Serratia marcescens cepa NCTC 10211 revel sorprendentes
zonas de inhibicin cuando se inocularon con diferentes componentes de HP
strains. El mecanismo implicado en la inhibicin de la proliferacin de HP todava
no se comprende bien. Se necesita investigacin adicional para aislar y
caracterizar las sustancias inhibidoras de modo que puedan ser utilizados para
la terapia de Hp. Es en gran parte no est claro si Serratia marcescens tiene
actividad bactericidial o si promueve cambios en la fisiologa y morfologa de Hp.
Serratia marcescens tiene una capacidad nica para producir enzimas
extracelulares. Varias de tales enzimas han demostrado tener la capacidad de
degradar quitina, una sustancia que comprende principalmente las paredes

celulares de los hongos. Estas enzimas quitinolticas podran tener posibles usos
industriales y agrcolas, tales como la introduccin de estos genes para enzimas
que degradan la quitina en los cultivos, as como las bacterias fermentativas. La
investigacin adicional en la modificacin de protenas de secuencias de
nucletidos que permiten la expresin mejorada de quitina genes que producen,
proporcionando as un mecanismo de proteccin de plantas sensibles y
bacterias fermentadoras contra infecciones fngicas
Se sabe que causa varias infecciones nosocomiales, sobre todo, inducido por el
catter bacteriemia, infeccin del tracto urinario, e infecciones de la herida.
Dada su omnipresencia en el medio ambiente, y su parcialidad hacia las
condiciones de humedad, S. marcescens prolifera en los baos, donde se
observa como una coloracin rosada y pelcula aceitosa sobre la proliferacin de
los residuos de jabn y champ y materiales que contengan fsforo. Una vez
que las bacterias se han establecido, la aniquilacin total es bastante
complicada, pero se puede hacer mediante la aplicacin de un desinfectante
basado en cloro. El microbio se encuentra tambin en la sub-gingival biopelcula
de los dientes. Estos microbios tambin sintetizar un pigmento de color rojizoanaranjado llamado prodigiosina que podra resultar en la tincin extrnseca de
los dientes. Tambin tiene una aficin por el crecimiento en los alimentos con
almidn, donde las colonias pigmentadas se confunden con las gotas de
sangre.
Serratia marcescens puede provocar conjuntivitis, queratitis e infecciones en
heridas, riones y vas
urinarias,
as
como infecciones
respiratorias,
meningitis y endocarditis. Esta bacteria afecta especialmente a pacientes

hospitalizados y a pacientes que tienen la inmunidad disminuida por
enfermedades sistmicas o tratamientos mdicos inmunosupresores.
Serratia marcescens, sntomas
La sepsis o bacteriemia es el sntoma ms comn de presentacin de S.

marcescens, y es visto como la fiebre con escalofros.
La
infeccin
urinaria es
una
manifestacin
ms
comn. Las
caractersticas clnicas son: necesidad frecuente de orinar, ardor al orinar,
sangre y sangre en la orina y fiebre.

La infeccin del tracto respiratorio se demuestra como fiebre, tos con
expectoracin, sibilancias y jadeo y dolor en el pecho.

La meningitis o abscesos cerebrales, debido a los microbios se
desarrollan en los nios, y se manifiesta como: fiebre, vmitos,
convulsiones y coma.
Las infecciones intra-abdominales causar dao al hgado, la vescula biliar
y los abscesos pancreticos y exudado peritoneal.

La osteomielitis y la artritis tambin son relativamente comunes, y son
vistos como inflamacin en las articulaciones, enrojecimiento y dolor en
las articulaciones afectadas, la rigidez y dificultad de movimiento.

La endocarditis puede ponerse de manifiesto como con fiebre, petequias
y, en ocasiones, complicaciones tromboemblicas.
Serratia marcescens causa

El factor de riesgo principal para la infeccin por S. marcescens es largo
interminable hospitalizacin. Los que tienen un mecanismo inmunolgico dbil
son
ms
propensos
nosocomiales. Importantes
al
factores
desarrollo
de
desencadenantes
estas
son:
infecciones
intra
venosa
peritoneal, intra o catteres urinarios, la instrumentacin de las vas

respiratorias, como la broncoscopa y los ventiladores, las inyecciones intraarticulares, trauma en el crneo, la ciruga neuro-, la inyeccin epidural o una
puncin lumbar.
Tratamientos para infecciones o complicaciones causadas por Serratia
marcescens
Todas las bacterias del gnero Serratia presentan resistencia a muchos
antibiticos a causa de la presencia de factores R, los cuales son una tipo
de plsmido que codifica enzimas de resistencia a antibiticos. El ms
importante de estos es el SmaI. Por ello, esta bacteria presenta una resistencia
primaria a todas las penicilinas, a las cefalosporinas y a la polimixina.
El
tratamiento
para
infecciones
leves
puede
realizarse
con trimetoprim, sulfamidas o fluoroquinolona. Para infecciones ms graves, se

utilizan fluoroquilonas (ciprofloxacino, levofloxacino), carbapenemes (ertapenem,
imipenem, meropenem), o ms frecuente cefalosporinas de tercera generacin,
generalmente asociado a un aminoglucsido (gentamicina).
Serratia marcescens tratamiento
El plan de tratamiento principal es la administracin de antibiticos.

Los abscesos y exudados requieren incisin y drenaje.
S. marcescens es resistente a la ampicilina, macrlidos y cefalosporinas
de 1 generacin. En consecuencia, la mayora de los mdicos se
encargan el caso de los aminoglucsidos, junto con antipseudomonas
beta-lactmicos. Adems, las quinolonas son decididamente activa contra
la mayora de las cepas de Serratia.

La terapia definitiva para el caso depende de los resultados de las
pruebas de vulnerabilidad, teniendo en cuenta que, de varias cepas
resistentes son bastante comunes.

Inicio terapia es una alternativa para aquellos pacientes que estn
clnicamente estables, mientras que otros tienen que ser hospitalizadas.

El pronstico para las infecciones por S. marcescens es moderadamente
- los pobres. Ciertas infecciones, como infecciones urinarias, abscesos
abdominales y la artritis muestran resultados bastante buenos, mientras
que la meningitis, abscesos cerebrales, sepsis y endocarditis muestran
pronstico moderado.
CONCLUSIONES
Al final de la prctica he concluido que ha sido muy importante para el
descubrimiento de agentes microbianos como las Salmonellas y sus diferentes
tipos que se hallan en huevos, son los que nosotros y nuestros hijos ingerimos,
por ser al alcance de todo bolsillo y por haber un amplio recetario para preparar
alimentos y tenerlos como acompaante o formando parte de otros.
Considero que las pruebas bioqumicas efectuadas (en el caso de mi subgrupo)
fueron plenamente exitosas, ya que se obtuvo resultados precisos que
coincidieron con un solo tipo de MO en este caso los resultados indicaron que el
MO detectado es Serratia marcescens.
En cuanto a este MO es un bacilo motil y flagelado, causante de daos en el
organismo
humano
tales
como:
heridas, riones, vas
Conjuntivitis, queratitis,
urinarias,
infecciones
infecciones
en
respiratorias,
meningitis y endocarditis.
El tratamiento contra este MO es arduo ya que presenta algunas resistencias a
antibiticos (como se indica en la zona de tratamiento en la parte superior donde
se hace referencia a la vida y caractersticas de la Serratia marcescens).
Leyendo los estudios realizados a este MO he concluido que es la causante
principal y/o la explicacin cientfica para eventos sobrenaturales- o
Milagrosos que hacen referencia al llanto de esculturas o retratos de conocidas
figuras religiosas, inclusive en ostias, hasta en pan, ya que produce y secreta un
pigmento llamado Prodigiosina que curiosamente es muy similar a la sangre
(fcil de confundirla con esta).
Se ha determinado exitosamente con la ayuda de las tablas el tipo de MO
presente en la muestra segn los resultados obtenidos.
RECOMENDACIONES
Se recomienda (preferible) NO consumir huevos adquiridos o comprados al
granel, sin registro sanitario (no exentos de salmonellas, pero si ms confiables)
por las causas ya antes expuestas.
Tener mucho cuidado al manipular los tubos con los agares al momento de la
siembra e inoculacin. Practicar mucho y siempre segn los resultados guiarse
en las tablas de resultados de pruebas bioqumicas para tener una precisin al

momento de determinar los o el tipo de MO que resulta..
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=1&action=none&url=
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MCDLab (en lnea) Mxico: empresa mexicana dedicada a la fabricacin y
desarrollo de Medios de Cultivo para microbiologa y biologa molecular; 2012
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URL disponible en:

Pruebas Bioquímicas (Microbiología de Los Alimentos)

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ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DEL LITORAL

familia Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram-. Bsicamente consta de 21

Batera de pruebas API: Pruebas incluidas y tablas de lectura con coloraciones

utilizacin del citrato

color rosa o anillo

produccin de acetona (VogesProskauer)

Pruebas API que actualmente se encuentran siendo utilizadas en la gran

API 20 NE: Permite la identificacin de bacilos gram negativos no

Identificar mediante pruebas bioqumicas la cepa de Salmonella spp

Agar Levine EMB

Urea Agar: Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la

Frmula (en gramos por litro)

Suspender 24 g de polvo en 950 ml

pH final: 6.8 0.2

Color del medio

Proteus mirabilis ATCC 43071

K. pneumoniae ATCC 700603

Escherichia coli ATCC 25922

S. flexneri ATCC 12022

S. typhimurium ATCC 14028

Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podra ser reconocida por la

Voges y Proskauer, describieron una coloracin rojiza que apareca despus de

Frmula (en gramos por litro)

Suspender 17 g del polvo por litro de

pH final: 6.9 0.2

Siembra: Por inoculacin directa, a partir del cultivo en estudio.

Prueba del rojo de metilo:

completa agitacin del tubo.

E. coli ATCC 25922

P. mirabilis ATCC 43071

Agar Citrato de Simmnons: Medio utilizado para la diferenciacin de

que los microorganismos capaces de utilizar citrato como nica fuente de

Frmula (en gramos por litro)

Suspender 24,2 g del medio deshidratado por litro

pH final: 6.9 0.2

Siembra: A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar en superficie un

Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.

Citrato permeasa Color del medio

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603

S. typhimurium ATCC 14028

E. coli ATCC 25922

S. flexneri ATCC 12022

Agar Hierro Tres Azcares: Medio universalmente empleado para la

Frmula (en gramos por litro)

Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua

Sulfato de hierro y amonio

pH final: 7.3 0.2

1. Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el MO solamente

E. coli ATCC 25922

K. pneumoniae ATCC 700603

P. mirabilis ATCC 43071

S. typhimurium ATCC 14028

S. enteritidis ATCC 13076

S. flexneri ATCC 12022

P. aeruginosa ATCC 27853

Agar Levine EMB: Medio adecuado para la bsqueda y diferenciacin de

eliminando la sacarosa e incrementando la concentracin de lactosa, lo que

Es un medio selectivo y diferencial, adecuado para el crecimiento de

Algunas bacterias Gram positivas (cepas de estafilococos, enterococos) y

colonias incoloras y puntiformes.

Frmula (en gramos por litro)

Suspender 37,4 g de polvo por litro de

Siembra: Directa, estriando la superficie.