INTRODUCCION

La gluclisis es el proceso por el cual la glucosa se degrada a Etanol y CO2, y/ a cido

lctico dependiendo del organismo que lo efecte, como siendo en el primer caso las
levaduras las responsables.
Ambas rutas de fermentacin son similares hasta la formacin de piruvato, manteniendo
idnticas las etapas de conservacin de energa que conducen a la formacin de ATP.
La gluclisis no solo es la ruta principal para el metabolismo de la glucosa que conduce
a la produccin de Acetil-Co-A y a su oxidacin en el ciclo del cido ctrico, sino que
tambin proporciona una va importante para metabolizar fructosa y galactosa derivada
de los alimentos. La caracterstica de la gluclisis de proporcionar ATP en ausencia de
oxgeno es de significado crtico biomdico, porque permite al msculo esqueltico
hacer un trabajo sumamente eficiente an cuando la oxidacin aerbica se vuelva
insuficiente, a la vez que los tejidos con capacidad glucoltica pueden sobrevivir a
episodios de anoxia. Inversamente el msculo cardaco, que est adaptado al trabajo
aerbico, tiene una capacidad glucoltica relativamente deficiente y supervivencia
escasa bajo condiciones de isquemia. Hay un nmero pequeo de enfermedades en las
que las enzimas del sistema glucoltico como por ejemplo la piruvatocinasa muestran
actividad deficiente; estas anomalas se manifiestan principalmente como anemias
hemolticas. En las clulas cancerosas que proliferan con rapidez, la gluclisis procede a
una velocidad mucho mayor que la requerida por el ciclo del cido ctrico, por tanto, se
produce ms piruvato que el puede ser metabolizado. El resultado es una produccin
excesiva del lactato, que favorece un entorno local relativamente cido en el tumor,
situacin que puede tener implicaciones con ciertos tipos de teraputica contra el cncer.
Tambin se produce acidosis lctica por deficiencia de piruvato deshidrogenasa.

OBJETIVOS

Determinar la presencia de piruvato mediante la fermentacin de levadura

Observar la fermentacin de piruvato, mediante cambios de color

MATERIALES

4 tubos de ensayo
2 tubos de centrifuga
Beaker de 400 ml
Pipetas de 5 ml
Balanza
Calentador
Pinzas para tubo de ensayo
Termmetro
Esptula
Solucin de glucosa
Levadura
Fosfato de sodio dibsico 0,5 M
Fosfato de potasio monobsico 0,5 M
Acido tricloroacetico 10%
2,4 dinitrofenilhidracina saturado en HCL 2M
NAOH 10%

TEORIA RELACIONADA

Fermentacin.
Es la extraccin de energa del piruvato en ausencia de oxgeno. Hay dos tipos de
fermentacin: la fermentacin alcohlica y la fermentacin lctica o cida. En ambos
casos la fermentacin produce dos molculas de ATP por cada molcula de glucosa que
se rompe.
Las levaduras son hongos unicelulares que en presencia de oxgeno tienen respiracin
aerbica pero en ausencia de ese gas, cambian a respiracin anaerbica. Las levaduras
llevan a cabo la fermentacin alcohlica, que es aquella que con vierte el piruvato en
dixido de carbono y etanol (alcohol), por eso se ha dado el nombre de fermentacin
alcohlica.
La fermentacin alcohlica es un importante recurso econmico. Los panaderos usan la
fermentacin alcohlica de la levadura para producir pan. Cuando la levadura rompe los
carbohidratos de la pasta de harina, libera CO 2 y este forma burbujas en la pasta y esta
crece (esas burbujas son los espacios llenos de aire en la masa del pan). Cuando se
hornea el pan la levadura muere y el alcohol se evapora.
La fermentacin alcohlica se utiliza en la produccin de vinos, cervezas, ron y otras
bebidas alcohlicas, y en la produccin de etanol que se usa para producir la mezcla de
gasohol o gasolina-alcohol, usada como combustible de motor en algunos pases.
Las clulas animales no desarrollan la fermentacin alcohlica, aunque algunas como
las clulas musculares, pueden convertir al piruvato en cido lctico. La respiracin
anaerbica que produce esta sustancia se denomina fermentacin lctica (porque
produce cido lctico).
Durante un ejercicio violento, puede suceder que la respiracin no provea suficiente
oxgeno para suplir las necesidades de las clulas, y entonces las clulas musculares
continan trabajando y cambian a respiracin anaerbica, produciendo cido lctico.
Luego de un ejercicio fuerte sobreviene la fatiga muscular y sentimos dolor, ese dolor se
debe a la produccin de cido lctico y su acumulacin en los msculos. La mayora de
ese cido se moviliza a la sangre y en el hgado se convierte otra vez en piruvato.
Cuando tenemos un calambre, el cual produce un dolor tras una contraccin fuerte de un
msculo, esta se debe a una acumulacin de cido lctico producida por la contraccin
que ocurri a expensas de respiracin anaerbica por las clulas del msculo.

Anlisis y resultados

Al crear la solucin de glucosa y levadura en el tubo A y B Respectivamente, y al

incubarlos durante una hora a 37C se observo que las soluciones seguan siendo
transparentes sin ningn otro cambio.
Posteriormente se agitaron las sustancias contenidas en los tubos. El proceso que se
lleva a cabo en esta prctica se llama fermentacin. Este se efecta partiendo de la
glucolisis que consiste en una serie de reacciones en la que se involucran varios
intermediarios.
La reaccin completa de una molcula de glucosa produce dos molculas de piruvato,
dos molculas de ATP y dos molculas de NADH. Este ltimo es un cofactor que se
encuentra en cantidades catalticas (es necesario reoxidarlo para que no se suspenda el
proceso), y es utilizado por la cadena respiratoria para la obtencin del ATP
produciendo de esta forma NAD+.
La glucolisis proporciona una cantidad de piruvato que puede tomar dos
rutasmetabolicas anaerobias, eso depende del tipo de clulas que intervengan. Para este
caso de la prctica de laboratorio, se utilizaron soluciones de levadura respectivamente
las cuales a causa de su pH determinaron la cantidad de productos que se obtuvieron. En
este caso se presenta un proceso de fermentacin el cual se caracteriza por ser una
reaccin de obtencin de energa en ausencia de oxgeno en el que el reactivo inicial es
la glucosa y se obtienen como productos una cantidad de piruvato y otra cantidad de
etanol que se deriva de la reaccion del cido pirvico reducido a acetaldehdo y que
finalmente produce este alcohol.
Se utilizaron los tubos de ensayo A y B con las respectivas sustancias que se trabajaron
en la primera fase. Seguidamente se adiciono 1ml de 2,4-dinitrofenilhidrazina
mezclndose fuertemente. Posteriormente se aadi a cada tubo un 1ml de NaOH y se
observ una coloracin roja en cada tubo seguida de turbidez y una precipitacin que se
dio minutos ms tarde cuando esto se encontraba en reposo. En el tubo A que contena
la levadura en condiciones acidas se precipito el piruvato que posea un color naranja
oscuro quedando el etanol en gran proporcin con un color rojo muy tenue. En el tubo B
que contena la levadura en condicin bsica o alcalina el piruvato se precipito en
mayor cantidad, presentado un color rojo oscuro. En este proceso es claro que la
identificacin de la acumulacin de piruvato se hace por medio de una prueba
cualitativa de color. Las observaciones anteriores se deben a que los intermediarios
metablicos como el piruvato se encuentra presentes en bajas concentraciones, por lo
tanto para demostrar su existencia como intermediarios en el proceso metablico es
necesario que se impida que sean transformados en otros compuestos.
Este procedimiento se realiza por medio del bloqueo de la enzima que cataliza la
conversin del compuesto por medio de inhibidores como el pH. Tambin se pueden
cambiar las condiciones fisiolgicas para que la enzima funcione a baja velocidad con
referencia a su actividad mxima usando un agente que atrape el intermediario y que
forme un compuesto que no pueda metabolizarse.

La enzima piruvato descarboxilasa no es activa en soluciones ligeramente alcalinas

como la de la levadura que se agreg en el tubo A de esta manera el piruvato se acumula
y su presencia se demuestra por la reaccion de la 2,4 dinitrofenilhidrazina.
CUESTIONARIO

1. Cul es la funcin del acido tricloroacetico?

cido tricloroactico (tambin conocido como cido tricloroetanico) es un anlogo
del cido actico en el cual los tres tomos de hidrogeno del grupo metilo fueron
substituidos por tomos de cloro. Tiene frmula qumica CCl3COOH.
ES preparado por la reaccin del cloro con al cido actico en la presencia de un
catalizador adecuado.
CH3COOH + 3 Cl2 CCl3COOH + 3 HCl
ES anchamente usado en bioqumica para la precipitacin de macromolculas tal como
protenas, ADN y RNA. Su sal de sdio es usado como un herbicida. Soluciones
conteniendo cido tricloroactico como ingrediente son usadas para el tratamiento de
verrugas, incluyendo verrugas genitales. ES considerado seguro para el uso con este
propsito durante gestao.[1]
Sales de cido tricloroactico son llamados tricloroacetatos. Reduccin de cido
tricloroactico resulta en cido dicloroactico, un compuesto farmacolgicamente activo
que se muestra promisor en el tratamiento de cncer.
2. Cul es la reaccin de la 2,4 dinitrofenilhidrazina con el piruvato?
Los metabolitos de piruvato y acetaldehdo se encuentran presentes normalmente en
muy bajas concentraciones, por tanto para demostrar su existencia como intermediario
en el camino metablico, es necesario impedir que sean transformados en otros
compuestos. Este proceso se usa mucho cuando se investigan caminos metablicos y se
hace bloqueando la enzima que catalizas la conversin del compuesto, que se est
investigando mediante inhibidores.
La pirvico-descarboxilasa no es activa en soluciones ligeramente alcalinas, de manera
que el piruvato se acumula y su presencia puede demostrarse por la reaccin con
nitroprusiato de sodio o 2,4 dinitrofenilhidrocina.

Oxidacin aerbica y anaerbica de glucosa en la levadura

Los cristales de las distintas hidrazonas tienen puntos de fusin y ebullicin
caractersticos. Gracias a ello la 2,3-DNFH puede usarse para distinguir entre diversos
compuestos con grupos carbonilos. Este mtodo es particularmente importante porque
las determinaciones de punto de fusin requieren tan slo instrumental de bajo costo.
Esta aplicacin en qumica analtica fue desarrollada por Brady y Elsmie.[3]
Adems, no reacciona con otros grupos funcionales que contengan carbonilos, como los
cidos carboxlicos, amidas y steres.
3. Que funcin cumple el NAD+ en la produccin de piruvato?
La enzima Glicerol-3-fosfato deshidrogenasa (NAD+) EC 1.1.1.8 cataliza la reaccin
de oxidacin del glicerol-3-fosfato a dihidroxiacetona fosfato utilizando NAD+ como
aceptor de electrones.
Glicerol-3-fosfato + NAD+

dihidroxiacetona fosfato + NADH

Esta enzima tambin cataliza las reacciones de oxidacin y reduccin del propano-1,2diol y del sulfato de glicerona respectivamente, pero con mucha menos afinidad.
Durante la gliclisis se genera NADH en el citosol en la oxidacin del gliceraldehdo-3fosfato y se debe regenerar ms NAD + para que la gliclisis contine. El NADH no
puede pasar a la mitocondria para ser oxidado por la cadena respiratoria ya que la
membrana interior mitocondrial es impermeable al NADH y NAD +. La solucin es que
los electrones del NADH, en vez del propio NADH, sean transportados a travs de esta
membrana.
Una de las maneras de introducir electrones del NADH en la cadena respiratoria es la
lanzadera del glicerol-3-fosfato. El primer paso es transferir un par de electrones desde
el NADH a la dihidroxiacetona fosfato, un intermedio glicoltico, para formar glicerol3-fosfato. Esta reaccin es catalizada por la glicerol-3-fosfato deshidrogenasa en el
citosol. El glicerol-3-fosfato es reoxidizado a dihidroxiacetona fosfato en la superficie
exterior de la membrana interior mitocondrial por una isozima de la glicerol-3-fosfato

dehidrogenasa unida a la membrana. Un par de electrones se transfiere desde el glicerol3-fosfato al grupo prosttico FAD de la enzima para producir FADH 2. Esta reaccin
regenera la dihidroxiacetona fosfato.
Por ltimo, la flavina reducida transfiere sus electrones a al transportador de electrones
Q que entra en la cadena respiratoria como QH2.
La lanzadera del glicerol-3-fosfato se utiliza mucho en los msculos ya que permite
mantener una alta velocidad de fosforilacin oxidativa. En cambio, en el corazn y en el
hgado, los electrones del NADH citoslico son transportados a la mitocondria por la
lanzadera del malato-aspartato que est formada por 2 transportadores y 4 enzimas (2
unidades de la malato deshidrogenasa y 2 unidades de la aspartato transaminasa).
El ciclo de Krebs tiene lugar en las mitocondrias de las plantas y animales, mientras que
en los procariotas ese ciclo ocurre en el citosol; se hace, pues en todos los organismos
aerobios. El punto de entrada de todos los combustibles al ciclo de Krebs a travs del
intermediario metablico acetil CoA; ste se condensa con una molcula de oxalacetato,
para dar citrato, de all el nombre de ciclo del cido ctrico, y como da origen a otros
cidos tricarboxlicos, tambin se llama ciclo de los cidos tricarboxlicos. El
oxalacetato que se desprende en forma de CO2 corresponde al oxalacetato y no al ltimo
acetilo incorporado.
En consecuencia, el oxalacetato que se regenera al final del ciclo no contiene los
mismos tomos de carbn que el oxalacetato original. En cada vuelta del ciclo se oxida
un residuo acetil CoA a dos molculas de CO 2; simultneamente se reducen 4
coenzimas 3 NAD+ a 3 NADH y 1 FAD a 1 FADH 2. Adems se genera un GTP a partir
de GDP + fosfato inorgnico que dar posteriormente un ATP3.
La velocidad de las enzimas para regular el ciclo depende bsicamente de la cantidad de
ATP; si hay demasiado, la velocidad de ciclo disminuye y, si por el contrario hay exceso
de ADP la velocidad del ciclo aumenta4. El ciclo de Krebs representa la va final comn
de la oxidacin aerbica de todos los sustratos de la dieta (protenas, lpidos y
carbohidratos) con produccin de CO2 como desecho, reduccin de coenzimas que van
a transportar tomos de hidrgeno y electrones que se utilizarn en la cadena
respiratoria para la formacin de ATP y de una molcula de GTP que reaccionar con el
ADP y formar ATP. As se resume la utilidad y la productividad del ciclo.
Cada molcula de NAD+ acepta 2 electrones y 1 protn. El protn y uno de los
electrones se une a un tomo de carbono de la molcula de NAD+; el otro electrn
neutraliza la carga positiva. Esta forma reducida de NAD+ se denomina NADH. El
NADH es el principal intermediario entre el ciclo de Krebs y la cadena respiratoria.
Algunos insectos no tienen L-lactato deshidrogenasa y son completamente dependientes
de la lanzadera del glicerol-3-fosfato para regeneral el NAD+ citoslico.

4. Consulte la va de la glicolisis y determine los pasos irreversibles de esta

va?
La gluclisis o gliclisis, es la va metablica encargada de oxidar la glucosa con la
finalidad de obtener energa para la clula. Consiste en 10 reacciones enzimticas
consecutivas que convierten a la glucosa en dos molculas de piruvato, el cual es capaz
de seguir otras vas metablicas y as continuar entregando energa al organismo.
Durante la gluclisis se obtiene un rendimiento neto de dos molculas de ATP y dos
molculas de NADH; el ATP puede ser usado como fuente de energa para realizar
trabajo metablico, mientras que el NADH puede tener diferentes destinos. Puede
usarse como fuente de poder reductor en reacciones anablicas; si hay oxgeno, puede
oxidarse en la cadena respiratoria, obtenindose 5 ATP (2.5 por cada NADH); si no hay
oxgeno, se usa para reducir el piruvato a lactato (fermentacin lctica), o a CO2 y
etanol (fermentacin alcohlica), sin obtencin adicional de energa.
Las reacciones irreversibles de la glucolisis son. Glucosa ---> Glucosa 6 fosfato (1
reaccin IRREVERSIBLE), este paso consta de la fosforilacin de la glucosa en el
carbono 6 usando un ATP como donar de un grupo fosfato y la glucosa es el aceptor.

Fructosa 6 fosfato---> fructosa1, 6 bifosfato (reaccin IRREVERSIBLE), se fosforila la

molcula de fructosa utilizando como donar una molcula de ATP

Despus de una serie de pasos llegas a obtener 1,3 bifosfoglicerato, el cual participa
tambin de una reaccin irreversible, en este paso se obtiene una molcula de ATP 1,3
biofosfoglicerato ----> 3 fosfoglicerato
Finalmente el paso ltimo de la glucolisis y tambin irreversible fosfoenolpiruvato ---->
piruvato.

BIBLIOGRAFIA

http://colombiamedica.univalle.edu.co/Vol25No2/celulas.html

http://www.xuletas.es/ficha/protocolo-10/

http://eurlex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?
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http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratorio/Plummer/Chp10a.pdf

http://es.wikilingue.com/pt/%C3%81cido_tricloroac%C3%A9tico