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La microbiologa es la ciencia que estudia a los seres vivos que no se pueden ver a simple
vista, a los que denominamos microorganismos (tamao menor a 0,1 mm que es el poder de
resolucin del ojo humano). Estos microorganismos son en general unicelulares (estn
compuestos por una nica clula) pero pueden ser multicelulares sin diferenciacin entre
clulas. Para darnos una idea comparativa de los tamaos de diferentes, tenemos el
siguiente grafico donde podemos ver los tamaos relativos de diferentes clulas y los
elementos necesarios para poder verlas.
Para poder ver los seres vivos que estudia la microbiologa fue necesario esperar hasta que
se inventara algn instrumento con el cual pudiramos ver a estos seres tan pequeos. No
fue hasta el siglo S XVI donde se inventaron los primeros instrumentos capaces de ver
estos seres vivos: el microscopio, aunque en principio se los utilizo para hacer otro tipo de
investigaciones (se visualizaron las clulas animal y vegetal, se aplic en medicina) pero no
fue hasta el siglo XVII donde un holands autodidacta y aficionado llamado Anthony van
Leeuwenhoek que construa sus propios microscopios descubri la presencia de seres
diminutos a los que llamo animaculos y con esta primera observacin naci la
microbiologa.
Dentro de esta clasificacin, todos los organismos procariotas son clulas que no tienen un
ncleo definido y su material gentico se encuentra en una nica molcula y tienen una
pared celular que da soporte y proteccin a la clula a este dominio pertenecen las
bacterias. Los organismos Eucariotas en cambio son ms complejos, tienen su material
gentico organizado en cromosomas y contenido en una membrana nuclear a la vez que
muchas partes de la clula cumplen funciones especficas (se las denomina organelos). A
este dominio pertenecen las plantas, los animales, los protozoos, los hongos y tambin las
levaduras.
El sistema de nomenclatura de los organismos utilizado en la actualidad fue establecido en
1735 por CarolusLinnaeus. Los nombres cientficos son latinizados porque el latn era el
idioma tradicionalmente usado por los estudiosos. La nomenclatura cientfica asigna dos
nombres a cada organismo: el del gnero es el primer nombre y siempre se escribe con
mayscula, a continuacin va el epteto especfico (nombre de la especie) que se escribe
con minscula. Para referirse al organismo se usan ambos nombres, el del gnero y el de la
especie. Por costumbre, despus de haber mencionado un nombre cientfico por primera
vez , se lo puede abreviar con la inicial del genero seguida por el epteto especifico.
Los microorganismos estn presentes en todas partes de la tierra en las aguas, los suelos, el
aire, los animales, las plantas y todos los objetos que nos rodean. Hay microorganismos que
sobreviven a temperaturas mucho ms bajas que el punto de congelacin del agua y otros
que sobreviven a la temperatura de ebullicin del agua.nos encontramos absolutamente
rodeados de los ms variados microorganismos.
Existe una tendencia a asociar microorganismos con enfermedades, infecciones o
inconvenientes, sin embargo la mayora de los mismos hacen contribuciones importantes al
equilibrio del mundo: los microorganismos marinos y de agua dulce constituyen la base de
la cadena alimentaria, los microbios del suelo contribuyen a la degradacin de materiales y
a la incorporacin de nitrgeno al suelo, reciclado de desechos, etc. Tampoco podemos
descartar las aplicaciones comerciales de los mismos: desde los utilizados para producir
alimentos (como es el caso de la cerveza, vinos, lcteos, vinagre, lcteos, etc.), aplicaciones
de reciclado de efluentes (Plantas de tratamiento biolgicas) a aplicaciones en
medicamentos (como sntesis de insulina, antibiticos, etc.).
Los tipos de microorganismos existentes son:
Archae: Los miembros del archae tambin son procariotas, pero sus paredes
celulares carecen de pptido glucanos. Estos microorganismos en general se
encuentran en ambientes extremos (ambientes muy salinos, aguas clidas y
sulfurosas). No causan enfermedades conocidas.
Hongos: Los hongos son eucariotas, es decir poseen en ncleo diferenciado que
contiene el material gentico de la clula rodeado por una membrana nuclear y
tienen organellos (partes de la clula con funciones claramente diferenciadas y
especializadas). Pueden ser unicelulares (levaduras) o multicelulares.
Crecimiento celular
El crecimiento de los microorganismos es una parte integral de casi todos los procesos de
fermentacin. Ya hemos visto que las bacterias se reproducen por fisin binaria
produciendo dos clulas hijas iguales, mientras que la duplicacin de muchas levaduras se
produce normalmente por mecanismos de gemacin; los hongos crecen por extensin de las
hifas y la morfologa de su micelio puede variar en funcin del medio ambiente.
Condiciones que influyen en el crecimiento microbiano
Es necesario conocer los factores que influyen en el crecimiento microbiano, ya que se
necesitan condiciones apropiadas para las fermentaciones o la produccin de protena o
masa celular, sin embargo en el caso de preservacin de alimentos estas condiciones deben
evitarse. Los microambientes cambian constantemente en los productos alimenticios o en
determinado sustrato. Las reacciones catalizadas pos sistemas de enzimas inherentes a
algunos alimentos producen calor, consumen oxgeno atmosfrico y liberan CO2y otros
gases. Estos cambios en los alimentos, o en el medio de cultivo, afectan a los procesos
microbianos. En un ambiente alimentario dado por ejemplo, algunas especies microbianas
sobreviven y se vuelven dominantes, y los microorganismos incapaces de resistir el
ambiente desfavorable, sucumben.
Visin global del crecimiento de clulas
La clula bacteriana es una maquinaria de sntesis capaz de duplicarse a s misma. Los
procesos para el desarrollo de una nueva clula incluyen unas 2000 reacciones bioqumicas
de una amplia variedad de tipos. Algunas de estas reacciones implican transformaciones de
energa; otras implican biosntesis de molculas pequeas, o de las enzimas necesarias para
las reacciones metablicas. Sin embargo, las reacciones principales de la sntesis celular
son reacciones de polimerizacin, por las cuales se producen los polmeros
(macromolculas) a partir de monmeros, siendo las ms importantes la sntesis de DNA,
de RNA y de protenas. Una vez sintetizados los polmeros, el crecimiento contina con el
ensamblaje y formacin de nuevas estructuras celulares tales como la pared celular,
membrana citoplasmtica, flagelos, ribosomas, complejos enzimticos, etc., y finalizan con
la divisin en dos clulas hijas. Esto es posible en un medio apropiado fsica y
nutricionalmente, en el cual el cultivo de clulas se reproduce continuamente, absorbiendo
y metabolizando nutrientes.
Crecimiento de poblaciones
Debido al pequeo tamao de las clulas microbianas, el estudio del crecimiento celular se
realiza sobre poblaciones de clulas. El crecimiento poblacional se define como el
aumento en el nmero de clulas microbianas en una poblacin, o el aumento de la masa
microbiana. La tasa de crecimiento es el cambio en el nmero de clulas o masa celular por
unidad de tiempo. El tiempo requerido para que se duplique el nmero de clulas es
llamado tiempo de generacin o tiempo de duplicacin. Este tiempo vara ampliamente
entre los microorganismos y depende de factores tanto de nutricin como genticos.
Muchas bacterias tienen tiempo de generacin de 1 3 horas; las conocidas como de
crecimiento muy rpido pueden hacerlo en tan solo 10 minutos, mientras otras pueden
tardar incluso das. Bajo las mejores condiciones de cultivo, una bacteria como E. coli
puede completar su ciclo en 20 minutos.
Este modelo de aumento de la poblacin, donde la cantidad de clulas se duplica durante
cada cierto perodo de tiempo se conoce como crecimiento exponencial y es caracterstico
de los organismos unicelulares. Deduciendo la expresin matemtica en funcin al
incremento del nmero de individuos, y suponiendo que se parte de una clula, tras una
divisin (generacin celular Figura 7.11), se tendrn 2 clulas, tras dos divisiones se
tendrn 4, luego 8, etc., lo que representa una serie geomtrica: 1, 2, 22, 23, 24,... 2n (donde n
es el nmero de generaciones transcurridas). Si en lugar de partir de una clula partimos de
un determinado nmero inicial de clulas N0 tenemos:
1. La fase de latencia, (fase lag): cuando las clulas se transfieren de un medio a otro,
su crecimiento no se inicia inmediatamente (no existe aumento en el nmero de
clulas), ya que los microorganismos deben adaptarse a las nuevas condiciones
ambientales, Su duracin es variable, dependiendo de diversas circunstancias, como
la cantidad o condicin fisiolgica del inculo (edad de las clulas, daos, etc.).
2. La fase logartmica (o exponencial), como se seal, es consecuencia de la
duplicacin celular. El crecimiento de la masa celular puede describirse ahora
cuantitativamente en funcin de la duplicacin del nmero de clulas por unidad de
tiempo (levaduras y bacterias) o por la duplicacin de la biomasa por unidad de
tiempo (organismos filamentosos como estreptomicetos y hongos).
3. La fase estacionaria, en la que no hay aumento neto de microorganismos. Tan
pronto como el sustrato es metabolizado o se han formado sustancias txicas, el
crecimiento desciende o se detiene completamente. Los distintos metabolitos
formados en la fase estacionaria -metabolitos secundarios, son frecuentemente
de gran inters, siendo ejemplo de ellos la produccin de antibiticos (penicilina,
estreptomicina) y la produccin de micotoxinas.
4. La fase de muerte, en la que el nmero de microorganismos vivos disminuye de
forma exponencial. En esta fase las reservas de energa de las clulas se agotan y la
viabilidad disminuye lentamente, llegando a la muerte de los microorganismos.
Medicin del Crecimiento Microbiano
Para seguir el curso del crecimiento de una poblacin microbiana es necesario efectuar
mediciones cuantitativas, siguiendo los cambios en el nmero de clulas o el peso de la
biomasa celular. Existen diversos mtodos para contar el nmero de clulas o para estimar
la masa celular, dependiendo del microorganismo de que se trate.
Observacin microscpica: se
cuentan todas las clulas.
Figura 7.14. Mtodos para realizar recuento en placa. En cualquier caso la muestra debe
ser previamente diluida.
El recuento viable se realiza en ambos casos contando las colonias que desarrollan despus
de la incubacin de las placas y multiplicando por la dilucin efectuada.
Bacterias
Las bacterias son la forma de vida ms antigua ya que poblaron la Tierra mucho antes de
que ningn otro grupo de seres vivos la habitaran. Esas primeras bacterias habitaron un
mundo inhspito: carente de oxgeno, con temperaturas extremadamente elevadas y niveles
altos de radiacin ultravioleta procedente del Sol.Las descendientes de esas bacterias
primigenias pueblan hoy un gran nmero de ambientes. La mayora ha experimentado
cambios y hoy no seran capaces de sobrevivir en las duras condiciones que caracterizaban
la Tierra primitiva. Sin embargo algunas no han variado mucho, ya que en la actualidad son
capaces de crecer a temperaturas superiores al punto de ebullicin del agua; otras viven en
fuentes termales; incluso pueden vivir bacterias que metabolizan el azufre en las grietas
Clasificacin
En el actual sistema de clasificacin en cinco reinos, las bacterias pertenecen al reino
Moneras, cuyos miembros son organismos procariotas, de los que se conocen unas 1.600
especies. Hay muchas formas para agrupar bacterias. En la taxonoma bacteriana
convencional se consideran una variedad de caractersticas de diferentes razas o especies y
estos rasgos se utilizan para agrupar los organismos.Las bacterias se suelen clasificar
siguiendo varios criterios:
por su forma:en cocos (esfricas), bacilos (forma de bastn), espiroquetas y espirilos (con
forma espiral);
segn la estructura de la pared celular; por el comportamiento frente a la tincin de
Gram;
en funcin de que necesiten oxgeno para vivir o no (aerobias o anaerobias,
respectivamente);
segn sus capacidades metablicas o fermentadoras;
por su posibilidad de formar esporas resistentes cuando las condiciones son adversas;
vibrios: forma de coma (espacialmente forma espiral con menos de una vuelta de hlice).
Otros tipos de formas: * filamentos (ramificados o no), * anillos casi cerrados
* con prolongaciones (con prostecas).
Estos distintos tipos de morfologas celulares deben de haberse originado por mecanismos
evolutivos, a saber, por seleccin y estabilizacin adaptativa frente a las distintas presiones
ambientales presentes en diferentes nichos ecolgicos.
Agrupaciones bacterianas
Las bacterias normalmente se multiplican por fisin transversal simple. En muchas
especies, las clulas hijas resultantes se dispersan separadas por la accin de fuerzas fsicas
(movimiento browniano, cizallamiento, corrientes de conveccin, etc.). En otras, las clulas
hijas permanecen unidas entre s,sea porque el tabique queda incompleto o por la existencia
de capas mucosas que las mantienen juntas. Si la tendencia a permanecer unidas es baja,
tendremos agrupaciones de dos clulas, que dependiendo que sean de morfologa esfrica o
alargada, se denominan:
diplococos
diplobacilos
Si la tendencia a permanecer unidas es mayor (por ms tiempo), nos encontramos con
varias posibilidades, dependiendo del nmero de planos de divisin y de la relacin entre
ellos:
estreptococos:los tabiques son paralelos entre s (existe un solo plano de divisin)
formando cadenetas arrosariadas de cocos y estreptobacilos (cadenetas de bacilos).
Si existe ms de un plano de divisin, en el caso de cocos podemos encontrar tres
posibilidades:
tetradas: dos planos perpendiculares: (4 clulas en un plano) o mltiplos;
sarcinas: tres planos ortogonales: (paquetes cbicos);
estafilococos: muchos planos de divisin: (racimos irregulares).
En el caso de bacilos, se pueden dar variantes adicionales, debido a la posibilidad de que se
produzcan movimientos post-fisionales (en algunos casos con desgarro):
bacilos en empalizadao en paquetes de cigarrillos (debido a giros de 180o)
dos bacilos en ngulo (en forma de letra V o L)
varios bacilos formando letras chinas.
Tamaoy consecuencias del pequeo tamao de las bacterias:
Las bacterias son muy pequeas, desde 0,4 a ms de 1m de dimetro y desde 0,5 hasta 10
m de largo y muy variables en cuanto al modo de obtenerenerga yalimento.
Consecuencias metodolgicas:
Se necesita recurrir a microscopios para su visualizacin, y emplear tcnicas especiales
adecuadas al pequeo tamao.
Para sacar conclusiones sobre caractersticas de las bacterias se deben hacer estudios
promediados, es decir, obtenidos a partir de una gran poblacin de clulas, y no sobre un
solo individuo (el estudio de clulas bacterianas aisladas es posible, pero complicado).
En la pared celular de las bacterias existe una capa rgida, que es la principal responsable de
la resistencia de la pared. Esta capa rgida es muy similar en su composicin qumica tanto
en Gram positivas como en Gram negativas.
Se denomina peptidoglucano (o murena) y est formada por dos derivados de azcares:Nacetilglucosaminay N-acetilmurmico, conectados siempre a travs de enlaces (1,4),
adems de un grupo de aminocidos que incluyen L-alanina, D-alanina, D-glutmico y
lisina o en otros casos cido diaminopimlico (DAP). Estos componentes se unen entre s
para formar una estructura que se repite a lo largo de la pared y que se denomina
tetrapptidoglucano.
En Gram (+) el peptidoglucano representa hasta el 90% de la pared, pudiendo tener varias
capas (hasta 25 en algunos casos), ms pequeas cantidades de cidos teicoicos. En Gram
negativas el peptidoglucano constituye slo un 10% de la pared, siendo el resto una capa
compleja.
Murena
Gram
(peptidoglucano)
cidos
teicoicos
Polisacridos
Protenas
+++
Gram (+)
Lpidos
(90% de la pared)
(Alcanzan un 1%)
Gram (-)
(5 a 20% de la pared)
Capa rgida
+
(Alcanzan un 20%)
Una propiedad biolgica importante de esta membrana es que resulta habitualmente txica
para el hombre y los animales. Algunos ejemplos incluyen miembros de los gneros
Salmonella, Shigella y Escherichia, entre otros. Esta toxicidad se asocia a una parte de la
capa de lipopolisacrido.
A diferencia de la membrana citoplasmtica, la membrana externa de las Gram negativas es
relativamente permeable a pequeas molculas a pesar de su estructura bsica de bicapa
lipdica. Esto es posible porque disponen de unas protenas transmembranales llamadas
porinas que actan como canales de entrada y salida de sustancias hidroflicas de bajo peso
molecular.
Tincin de Gram
Es la ms importante entre las tinciones llamadas diferenciales (aquellas que no tien de la
misma manera a todos los tipos de bacterias). Es un procedimiento universalmente utilizado
de identificacin de bacterias, mediante una tincin especfica, que fue desarrollado por el
mdico dans Hans Christian Gram. Resumiendo, esta tincin consta de varios pasos:
1. Se realiza un frotis en
portaobjetos de vidrio
con una muestra de
varios tipos de
bacterias, fijadas por
calor. En la primera
fase, esta preparacin
se trata con un primer
colorante llamado
violeta cristal o violeta
de genciana.
2. Se aade una solucin
de lugol (yodo-ioduro),
que acta como
mordiente, formando
una laca relativamente
resistente con el violeta.
En este momento todas
las bacterias estn
teidas de color violeta.
3. Se realiza una
decoloracin diferencial
con
Su disposicin vara segn las bacterias (Figura 3.13). Pueden localizarse a lo largo de toda
la superficie celular o en uno o ambos extremos, y pueden aparecer aislados o en grupo. En
la distribucin polar, los flagelos se localizan en uno o ambos extremos de la clula. En
ocasiones, de un extremo de la clula puede surgir un penacho de flagelos, disposicin que
se conoce como lofotrica (lofo: "penacho"; tricos: "pelo"). En la distribucin peritrica,
los flagelos se insertan en varios lugares alrededor de la superficie celular (peri:
"alrededor"). El tipo de disposicin flagelar, polar o peritrica, se utiliza a menudo como un
La mayor parte de las bacterias se desarrollan en estos medios cuando se satisfacen las
exigencias de cada especie en lo relativo a calidad y cantidad de las sustancias nutritivas,
pH, temperatura, tensin de O2, etc.
Cuando una clula o un grupo de clulas bacterianas se siembran en la superficie de estos
medios, se inicia su desarrollo formando en 2 o 3 das millones de clulas hijas, reunidas en
una masa llamada colonia. El tamao y la estructura de las colonias son caractersticas para
la identificacin y diferenciacin. Algunas especies producen colonias muy pequeas, casi
invisibles a simple vista y otras se extienden rpidamente ocupando todo el espacio
disponible (por ej. una caja de Petri). Se debe destacar que el tamao de una colonia no
depende slo de la especie, sino tambin de la composicin del medio y de las condiciones
fsicas ambientales; por ello al describir una colonia de cierta especie bacteriana deben
especificarse las condiciones de cultivo.
Los caracteres que pueden observarse a simple vista o con ayuda de una lupa son (Figura
3.15):
Forma: puntiforme, circular, irregular, filamentosa, fusiforme, rizoide, etc.
Color: por los pigmentos endo y exocelulares que pueden tener las bacterias: blanco, gris,
verde, rojo, anaranjado, etc.
Tamao: variable es las distintas especies. Al hablar de tamao de una colonia se entiende
que la misma proviene de una sola clula, o de muy pocas sembradas en un solo punto.
Aspecto ptico: opaco, traslcido, opalescente, iridiscente, aterciopelado, etc.
Elevacin: colonias chatas, poco convexas, convexas papilares, convexas rugosas,
elevadas, cncavas, mamelonadas, etc.
Borde: enteros, filamentosos, erosionados, ondulados, lobulados, enrollados, ramosos,
dentados, etc.
Estructura interna: uniforme, finamente granular, granulosa, filamentosa, entrelazada,
filamentosa arborescente
1) Estrangulamiento: es el proceso por el cual una clula se divide en 2 clulas hijas, las
que pueden separarse o mantenerse unidas formando cadenas. En este caso no se distingue
la clula madre de la hija; el citoplasma y material nuclear se reparten igualmente entre las
dos y la constitucin gentica de ambas es la misma. Las fases son:
a) la clula incrementa su tamao;
b) la membrana y pared celular comienzan a cerrarse hacia adentro hasta que se unen;
c) al mismo tiempo el material gentico y citoplasmtico se alarga hacindose cncavo en
el lugar de la futura pared. En ese momento se hace visible el ADN circular;
d) el adn circular se divide formando dos cadenasiguales, las que se separan para ser
incorporadas a las clulas hijas.
Como en el caso anterior, las clulas pueden no separarse quedando unidas 2, 3 y hasta 4 de
ellas y, puesto que en general el tabique no separa completamente una clula de otra sino
que quedan poros a travs de los cuales pasan cordones protoplasmticos que establecen
una comunicacin entre clula y clula, se tiene un primer organismo pluricelular
constituido por unas pocas clulas.
Contaminantes de cerveza
Al referirnos a una contaminacin microbiolgica de la cerveza no nos estamos refiriendo a
ningn tipo de envenenamiento o intoxicacin debido a la cerveza. Nos referimos
exclusivamente a cualquier cambio que resulte en un sabor / aroma (acidez, diacetilo, DMS,
fenlicos, sper atenuacin, etc.) o apariencia (depsitos, turbidez) no caracterstico de
nuestra cerveza.
Los dos tipos de contaminaciones ms frecuentes en la cerveza son las causadas por
bacterias o por otras levaduras, incluso levaduras cerveceras (recordemos: cualquier otro
organismo distinto a nuestra cepa de levadura se trata de un contaminante). Por supuesto,
no todos los contaminantes producen un efecto observable en la cerveza, algunos de ellos
solo sern detectados por anlisis microbiolgicos, pero algunos microorganismos si
podrn producir un efecto apreciable en la cerveza: son los microorganismos que
denominamos deteriorantes.
Levaduras salvajes
Denominamos levaduras salvajes a las levaduras que no provienen de nuestra propia cepa
de levadura. Estas pueden ser levaduras salvajes del genero Saccharomyces o levaduras
salvajes de otros gneros distintos al Saccharomyces. En general, estas son:
Aerbicas
Anaerbicos facultativos
Pueden asimilar nutrientes que nuestra levadura no (estas son las ms peligrosas)
Las levaduras salvajes del genero Saccharomyces pueden estar relacionadas muy
estrechamente con nuestra propia cepa de levadura, lo que las hace difciles de detectar
(microscpicamente o en medios de cultivo de laboratorio (se confunden muy fcilmente).
Las levaduras salvajes de un gnero distinto pueden ser detectadas de varias formas:
apariencia microscpica, morfologa de las colonias, crecimiento en medios selectivos,
formacin de esporas. Cualquier levadura presente en cantidad suficiente es virtualmente
cierto que producir sabores extraos ya que producir sus propios metabolitos secundarios
de la fermentacin.
Los mtodos para detectar levaduras salvajes son:
1. Observacin microscpica: morfologa celular, diferencias significativas con la cepa
propia de levadura)
2. Esporulacin: Las cepas Lager de levaduras cerveceras raramente esporulan, por lo
tanto la presencia de esporas en clulas de levadura es una indicacin de que se trata
de levadura salvaje
3. Tratamientos trmicos: La levadura Lager es sensible al calor. Incubarla a 37C
inhibe el crecimiento de las mismas mientras permite el de levaduras Ale y muchas
otras variedades de levadura salvaje
4. Acido tartrico: Las levaduras lager no crecen con una adicin de 1,5% de cido
tartrico
5. Morfologa de colonia: Observacin de la morfologa de la colonia crecida en un
medio de cultivo de laboratorio
6. Medios de crecimiento / diferenciacin: Muchos tipos distintos de medios de
cultivo.
7. Inmunofluorescencia
Candida Intermedia
Debaromyces
Schizosaccharomyces
Un buen link para conocer la cantidad de levaduras existentes
eshttp://www.ncyc.co.uk/search-all.html
Algunos de los tipos de medio de cultivo utilizados para la deteccin de levaduras salvajes
son:
1. Medios no selectivos
1.1. Agar extracto de malta
1.2. Agar de extracto de levadura-peptona-dextrosa (YPD)
1.3. Wallerstein Laboratory Nutrient agar (WLN)
1.4. Agar mosto
1.5. Agar morfologia levadura (YM)
1. Medios inhibidores
2.1. Actidiona (cicloheximida 3 a 10 ppm)
2.2. Agar cristal violeta 18 ppm (no crecen levaduras cerveceras)
2.3. Sulfato de cobre (algunas levaduras lager no son muy sensitivas al sulfato de cobre)
2.4. Lins cristal violeta y fucsina
1. Medios selectivos
3.1. Agar lisina (nico amino acido presente, las levaduras cerveceras no crecen)
3.2. Agar dextrina (nico carbohidrato presente, levaduras cerveceras no crecen en el)
3.3. Fuentes multiples de carbono xilitol, manitol, adonitol, citrato y sorbitol (XMACS)
Algunas levaduras salvajes y sus caractersticas son:
Saccharomyces Diastaticus: contaminante en fermentacin, post fermentacin y cerveza
sin pasteurizar. Es capaz de utilizar dextrinas (azucares no fermentables) como fuentes de
carbono. Solamente miembros de este gnero pueden utilizar almidn y por lo tanto son
capaces de producir sper atenuacin. Tpicamente producen fenoles (sabor) y por la sper
atenuacin si fermentan en un envase cerrado pueden producir sper carbonatacin (riesgo
de Gushing o explosin por exceso de presin).
Saccharomyces cerevisiae var. Ellipsoideus: Gustos fenlicos
Dekkera y/o Brettanomyces: Deteriorante de cerveza envasada o sin pasteurizar, produce
fuertes gustos a cido actico y acetato de etilo cuando crece aerbicamente. Es de lento
crecimiento anaerbico.
Candida: Crece rpidamente en presencia de aire, causando turbidez y sedimentos, es uno
de los contaminantes ms comunes cuando se expone la cerveza al aire (atencin con los
barriles que son expuestos al aire!). Algunas especies pueden reducir el pH de la cerveza de
4,15 a 3,05!
Pichia: Crece rpidamente en presencia de aire formando turbidez y sedimentos. Algunas
especies son buenas fermentadoras. Dan un gusto a acetona y acetato de etilo.
Generalidades
Esta aceptado que cervezas normales, adecuadamente envasadas no soportaran el
crecimiento de patgenos humanos. El consumo de cerveza contaminada no es placentero
pero no es generalmente peligroso. Incluso algunos consumidores prefieren algn
crecimiento de microorganismos contaminantes! A pesar de esto, algunos contaminantes de
cerveza producen metabolitos que hacen a la cerveza intomable (organolpticamente
hablando), por ejemplo Pectinatus (huevo podrido y olor a cidos orgnicos) o
Megasphaera (olor a vmito, cidos orgnicos).
A pesar de que actualmente no hay patgenos conocidos que sobrevivan en cerveza, por la
calidad y estabilidad de sabor microbiolgica, debemos tomar todas las precauciones
necesarias para mantener la higiene y limpieza de nuestra planta / producto.
La catalasa es una enzima usualmente producida por los microorganismos aerobios que
descompone el agua oxigenada en agua y oxgeno. Los contaminantes ms habituales de
cerveza son catalasa negativos. El test puede realizarse agregando a una muestra de la
colonia bacteriana cultivada unas gotas de agua oxigenada y ver si esta se desprende de
inmediato (catalasa positivos) o si queda tal cual (catalasa negativos). Las bacterias
anaerobias son probables contaminantes de cerveza mientras que aquellas que son
estrictamente aerobios no pueden ser contaminantes de cerveza (que es un ambiente
estrictamente anaerobio) aunque si pueden ser contaminantes del mosto.
Los ambientes de mosto y cerveza son muy diferentes entre s, por lo que admiten
diferentes contaminaciones. Las diferencias entre ambos medios son:
Mosto
Cerveza
pH ms alto (5.2)
pH ms bajo (4.2)
Rico en nitrgeno
Presencia de oxigeno
Anaerbico
Sin CO2
CO2 presente
Presencia de levadura
Sin levadura
Sin alcohol
Presencia de alcohol
Bacilos largos
Catalasa negativos
Gram positivos
No esporulan
No tienen movilidad
Forman ttradas
Catalasa negativo
Gram positivos
No tienen movilidad
No esporulan
Cadenas cortas
Catalasa negativos
Gram positivos
Bacillus: Estas bacterias forman esporas, son resistentes al calor y pueden afectar al mosto
durante la maceracin causando una maceracin acida. Sus esporas pueden sobrevivir un
corto periodo de tiempo en cerveza (y su pasteurizacin) pero no pueden desarrollarse y
sobrevivir en el pH de la cerveza. Para identificarlos, sus principales caractersticas son:
Bacilos largos
Catalasa positivos
Gram positivos
Forman esporas
Frecuentemente mviles
CO2: Muchas bacterias son inhibidas por la atmosfera de dixido de carbono. Una
cerveza envasada normalmente tiene una atmosfera de casi el 100% de CO2 y est a
alta presin (2 a 3 atmosferas). Esta alta presin de CO2 inhibe a muchas bacterias
Gram negativas (como Pseudomonas) y algunas Gram positivas (como Bacillus y
Staphilococos).
Alcohol: Las cervezas normales y las Light tienen una concentracin de alcohol
suficiente para inhibir la mayora de las bacterias patgenas. Las cervezas sin
alcohol no tienen esta proteccin, por lo que si otros factores son comprometidos
(pH, aire) pueden dar el potencial para soportar el crecimiento de patgenos (por
eso deben pasteurizarse mucho ms intensamente que las cervezas regulares).
Ambiente anaerbico: La levadura saca todo el oxgeno del mosto en unas pocas
horas, produciendo un medio anaerbico desde una etapa muy temprana en la
Lpulo: La presencia de los cidos del lpulo (alfa y beta cidos) tiene efectos anti
bacteriales. Los test de laboratorio muestran que los cidos del lpulo inhiben
selectivamente el crecimiento de bacterias Gram positivas (no afecta a las Gram
negativas ni a la levadura). La presencia de 10 a 20 ppm inhibe el crecimiento de
contaminantes Gram positivos (tambin inhibe a sus esporas, aunque no sean
contaminantes). Por lo tanto disminuir el contenido de amargor e incrementar el pH
podra incrementar el riesgo de crecimiento de patgenos
Alta presin osmtica: Los mostos concentrados, de alta gravedad tienen una
concentracin de azucares que incrementa la presin osmtica, lo que tiende a
inhibir una cantidad de bacterias mientras que las levaduras son mas tolerantes.
Limpieza y desinfeccin
En una cervecera, hay varios motivos para realizar la limpieza de la misma:
Eficiencia de Planta: Una planta limpia donde todas las cosas funcionan
adecuadamente es una planta ms eficiente en tiempos, rendimientos y calidad.
Vamos ahora a clarificar 3 conceptos bsicos, que estn relacionados, pero no son lo
mismo.
Limpieza: Se trata de remover la suciedad, resultando en una superficie limpia, sin mugre
ni grasitud, aunque si puede tener presencia de microorganismos. Se utilizan detergentes.
Sanitizacin: Se trata de procedimientos para hacer decrecer el nmero de
microorganismos a niveles aceptables. Se utilizan sanitizantes.
Esterilizacin: Se trata de la eliminacin total de contaminantes. Se utilizan esterilizantes.
La suciedad es todo material o materia indeseado que este en la superficie de un objeto que
deseamos que est limpio. La suciedad puede ser visible o invisible y la podemos clasificar
de acuerdo a su solubilidad en solubles en agua, solubles en un lcali y solubles en acido.
Suciedad
Soluble en:
Azcar, sal
Agua
lcali
Acido
Emulsifican: Es decir, tienen una parte polar y otra no polar, lo que ayuda a que
puedan emulsificar en agua a las sustancias no polares (el agua disolvera a las
sustancias polares).
Dispersa la suciedad
Peptiza protenas
Se enjuaga fcilmente
Se disuelve en agua
No es corrosivo
Ajusta el pH
Gluconatos: para controlar la dureza del agua y solubilizar los depsitos minerales
No corrosivo
Fcil de aplicar
iv) Estable
v) Malo para la espuma de cerveza y puede afectar los tratamientos microbiolgicos de los
efluentes
b) Compuestos cido anionicos
i) Actividad muy rpida contra la mayora de los microorganismos
ii) No es afectado por la dureza del agua
iii) Su actividad decrece con el aumento del pH
c) Sales de biguanidinas y clorhexidina
i) Amplio espectro de actividad contra bacterias (Gram + y Gram -)
ii) Poca actividad contra esporas de hongos
iii) Su actividad se reduce en presencia de sustancias jabonosas
d) Anfteros
i) No dependen del pH
ii) Usualmente se combinan con amonios cuaternarios o anionicos para aumentar su
eficacia, especialmente ante variaciones de pH
En tanque fermentadores cerrados (o en cualquier tanque cerrado con presencia de CO2) no
se puede introducir una solucin caustica por el riesgo de que la misma reacciones con el
CO2, produciendo un vaco en el tanque y el rechupe o implosin del mismo. Algunas
grandes cerveceras utilizan sistemas CIP (Cleaning In Place) con programas de disparos
de soda para remover la suciedad gruesa de las paredes de los fermentadores en atmosfera
de CO2, donde por la baja cantidad no llegan a generar estos inconvenientes, pero se deben
realizar las pruebas para determinar su seguridad con las instalaciones disponibles.
Para realizar la sanitizacin, la superficie a sanitizar debe estar previamente limpia o
limpiarse durante el proceso, ya que de no hacerse as, se disminuye el efecto de la accin
sanitizante.
Caso A: Buen procedimiento de limpieza + desinfeccion