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MEDICINA VETERINRIA
CAMPO MOURO
2014
MEDICINA VETERINRIA
TRABALHO INTEGRADOR
CAMPO MOURO
2014
SUMRIO
3.1.2
Diagnstico.................................................................................6
3.1.3
Danos causados.........................................................................7
Infeco......................................................................................7
3.2.2
Microbiologia da piometra..........................................................7
3.2.2.1
Escherichia coli..........................................................................8
3.2.2.2
Streptococcus spp.....................................................................8
3.2.2.3
Staphylococcus spp...................................................................9
3.2.2.4
Corinebacterium spp...............................................................10
3.2.2.5
Clostridium spp........................................................................11
gar Mc Conkey.......................................................................12
3.3.2
gar sangue.............................................................................12
3.3.3
3.5.2
Controle e preveno...............................................................16
4.0 CONCLUSO..............................................................................................................19
REFERNCIAS..................................................................................................................20
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Cadela com corrimento vulvar sanguinolento..........................................................6
Figura 2- Ultrassom anecico caracterstico de piometra em cadela......................................6
Figura 3- Estrutura E. coli........................................................................................................8
Figura 4- E. coli corada no teste de gram................................................................................8
Figura 5- Streptococcus spp corados no procedimento de gram............................................9
Figura 6- Staphylococcus spp corados no procedimento de gram........................................10
Figura 7- Corinebacterium spp, bastonetes em raquete........................................................10
Figura 8- Clostridium spp, esporos e clulas vegetativas......................................................11
Figura 9- Classificao da hemlise em gar sangue...........................................................12
Figura 10- tero da cadela poodle durante a OSH...............................................................17
Figura 11- Tcnica de semeadura por esgotamento.............................................................18
Figura 12- 2 Formao de alos pelos antibiticos................................................................22
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 Tabela de fundamentos das provas do Bactray para amostras I-II.......................20
Tabela 2- : Tabela de fundamentos das provas do Bactray para amostras III.......................21
Tabela 3- : Tabela com os resultados do antibiograma.........................................................21
1.0
RESUMO
O complexo de alteraes que induzem ao quadro conhecido por piometra em cadelas inclui
diversos fatores, ganhando destaque as alteraes hormonais e a infeco oportunista. O
quadro clnico pode evoluir para leso tecidual por toxicemia, pois as bactrias produzem
toxinas que podem inclusive chegar a circulao. Os sinais inespecficos incluem a letargia,
depresso, inapetncia, anorexia, poliria, polidipsia, diarreia e vmito. Alm destes h o
corrimento vulvar em piometra aberta e o inchao do tero em caos de piometra confinada.
Como formas de diagnstico pode-se optar pelo ultrassom e raio-x, que iro evidenciar o
aumento do volume uterino assim como alteraes na imagem decorrentes do acmulo de
lquido. Caso o quadro no seja tratado pode-se evidenciar: hipotermia ou hipertermia,
taquicardia, bradipinia leucopenia ou leucocitose, e em caso mais extremos de infeco e
imunossupresso a leso pulmonar aguda, distrbio dos fatores de coagulao,
trombocitopenia, alterao do estado mental e falncia cardaca/ heptica/ renal. Os agentes
causadores so em principal Escherichia coli, sendo isolada em 59% a 96% dos casos. No
ambiente aerbio podem ser isoladas tambm colnias de Streptococcus spp e
Staphylococcus spp, e no cultivo anaerbio ganham destaque Corinebacterium spp e
Clostridium spp. Para os processos laboratoriais so usados diferentes meios de cultura que
se baseiam em fornecer ambiente timo de proliferao e em alguns seletividade quanto ao
tipo de populao microbitica. Testes utilizando-se a cominao de meios de cultura e
administrao de antibiticos so bons exemplos da interao entre farmacologia e
microbiologia veterinria. O caso em questo engloba o estudo da piometra em cadela
poodle, e devido a problemas durante os procedimentos de cultivo mostrou como resistncia
bacteriana um problema que precisa ser solucionado.
Palavras-chave: Microbiologia; Piometra; Bactrias.
2.0
INTRODUO
3.0
REVISO. BIBLIOGRFICA
3.1
PIOMETRA EM CADELAS
Sendo uma enfermidade relacionada a fmeas, o ponto bsico para a instalao do
3.1.2 Diagnstico
A partir do momento em que instaurada a suspeita de piometra, parte-se para o
segundo patamar, o diagnstico.
De acordo com Evangelista (2009), o hemograma uma das principais ferramentas,
onde em animais com piometra observa-se: anemia de grau leve ou moderado, causada
pelo efeito supressor das toxinas bacterianas sobre a medula ssea, e tambm a grande
migrao de hemcias para a regio da infeco; volume dos glbulos pode estar
aumentado, devido a desidratao; leucograma alterado levemente em casos de piometra
aberta e severamente em caso de piometra fechada, apresentando leucocitose acentuada
caracterizada por neutrofilia com desvio esquerda, somada a
possvel monocitose
3.2.1 Infeco
O complexo que culmina com a piometra tem incio com as alteraes hormonais
decorrentes do perodo do diestro. O principal hormnio envolvido inicialmente o
estrgeno, que estimula a proliferao das clulas endometriais e formao de criptas com
receptores para a progesterona. Uma ao da progesterona a inibio do tnus da cervix,
que ao se relaxar permite a infeco pela flora bacteriana da vagina e oriunda do nus, que
invadem por via ascendente (LIMA, 2009).
Os principais grupos presentes na infeco piometrosa esto comumente dispersos
no ambiente e quando existe a oportunidade migram para o tero, onde tem a combinao
de ambiente adequado e pouco incomodo por parte do sistema imune, que se encontra
suprimido por ao da progesterona. Podem se listar outros fatores que levariam a infeco
uterina, mas de forma pratica a ao hormonal a principal e mais comum porta de entrada
(COGGAN, 2014).
3.2.2 Microbiologia da piometra
Segundo Oliveira (et al., 2014), a Escherichia coli a principal bactria associada a
piometra, sendo isolada em 59% a 96% dos casos. No ambiente aerbio podem ser
isoladas tambm colnias de Streptococcus spp e Staphylococcus spp, e no cultivo
anaerbio ganham destaque Corinebacterium spp e Clostridium spp.
10
Estas bactrias no esto no grupo dos bacilos lcool cido resistentes, so catalase
positivos e so anaerbios-facultativos. So imveis e exigentes nos meios de cultura, se
proliferando melhor em meio sangue. Tem o formato de clava (Figura 7), e no formam
esporos (TRABULSI, 2005).
11
3.3
variedade de bactrias que esto presentes em diversas infeces. Sendo assim, para suas
12
proliferao
de
microorganismo
gram-positivos
(Especialmente
enterococos
13
3.3.3
3.4
sistmicos
de
amplo
espectro
devem
ser
administrados
14
RESISTNCIA BACTERIANA
A resistncia microbiana refere-se a cepas de microrganismos que
so capazes de multiplicar-se em presena de concentraes de
antimicrobianos mais altas do que as que provm de doses
teraputicas dadas. O desenvolvimento de resistncia fenmeno
biolgico natural que se seguiu introduo de agentes
antimicrobianos na prtica clnica. O uso desmedido e irracional
desses agentes tem contribudo para o aumento daquele problema.
As taxas de resistncia variam localmente na dependncia do
consumo local de antimicrobianos (WANNMACHER, 2004).
Os primeiros casos de resistncia aos antimicrobianos ocorreram entre os anos
15
bacteriana
desenvolve-se
partir
de
mutaes
16
17
4.0
MATERIAL E MTODOS
O material foi coletado de uma cadela da raa poodle, com nove anos, pesando 6.1
Kg. O animal apresentava estado de nutrio regular, desidratao de 6%, sua temperatura
retal era de 39,9C, frequncia respiratria de 40 respiraes por minuto e frequncia
cardaca de 140 batimentos por minuto. Apresentava um comportamento aptico, pele e
anexos com perda de elasticidade cutnea (des. 6%), mucosas levemente hipercoradas e
linfonodos no reativos. Sistema digestivo foi observado dor a palpao abdominal, tempo
de perfuso capilar era de 2 e o sistema gnito-urinrio apresentava secreo vaginal
purulenta ftida e esbranquiada, o proprietrio no soube informar a data do ltimo cio. Em
seguida, foram colhidas amostras de sangue para realizao de hemograma completo e
avaliao de bioqumica srica da funo renal.
A cadela apresentou hematcrito de 39.3%. A srie branca revelou severa
leucocitose (40.2x10/uL). Na bioqumica srica observou-se 1.2 mg/dL de creatinina (0,5 a
1,6mg/dL). O laudo ultrassonogrfico revelou a presena de uma dilatao em um dos
cornos uterinos, paredes espessadas e com contedo lquido de grande celularidade. Aps
a
confirmao
do
diagnstico,
optou-se
pelo
tratamento
cirrgico
Aps a retirada do tero foi armazenado e refrigerado, depois retirado para ser feito a
coleta por meio de swabs estreis, foi aberto o tero e retirado direto da secreo interna,
18
A semeadura foi realizada nas placas de cultura: gar Sangue e gar MacConkey.
Duas placas foram para aerobiose e duas para anaerobiose, por 48 horas. Posterior a isso
as placas foram retiradas da estufa e deixadas na geladeira para conservao. Passados
dois dias as placas foram re-semeadas para obter um melhor isolamentos das colnias,
onde metade das placas foram para anaerobiose e a outra para aerobiose.
No dia posterior obteve-se o crescimento bacteriano, e as amostras foram utilizadas
para ser feito o fixamento das bactrias nas lminas e serem coradas. O processo de
colorao inicia adicionando o cristal violeta e escorrendo-o aps um minuto, em seguida foi
19
adicionado o lugol (fixador) e desprezado aps um minuto, para a descolorao foi usado o
lcool absoluto e em seguida lavado com gua corrente. Por ltimo adicionou-se a fucsina,
deixando-a por dez segundos e lavando com gua. Aps secas, as lminas foram
visualizadas no microscpio ptico, contatando-se bacilos gram-positivos.
A bactria que desejava ser isolada (E. colli) gram-negativa, sendo assim foram
descartadas as culturas utilizadas para o processo de gram (gar Sangue). A cultura de
meio gar MacConkey foi utilizada para recolher uma amostra da mesma e refazer a
semeadura de colnias semelhantes para se obter o resultado esperado, sendo deixado
novamente em BHI caldo.
Na aula prtica foram realizados trs procedimentos, o primeiro a fita de oxidase
que determina se a bactria contm essa enzima ou no, se o resultado for positivo a fita
ficar roxa. O segundo procedimento feito foi a catalase, onde retirou-se com a pipeta uma
quantidade da amostra de caldo BHI e colocou-se na lmina, em seguida adicionou-se uma
gota de perxido de hidrognio que nesse caso iria formar bolhas se fossem gramnegativas. O ltimo procedimento feito foi o Bactray, que dividido em I-II e III.
Iniciou-se o processo adicionando 1,0 ml da amostra bacteriana no Bactray de forma
homognea, inclinou-se para trs o conjunto, num ngulo de aproximadamente 45 para a
esquerda e em seguida para a direita, por fim apoiou-se o tray na mesa e inclinou-se para
frente para obter uma perfeita distribuio do inculo em todos os substratos. O
procedimento foi realizado em quatro tray, sendo encaminhados dois para anaerobiose e
dois para aerobiose.
O procedimento de antibiograma se iniciou com a coleta de amostra do contedo
bacteriolgico, que foi adicionado a soluo salina estril (NaCl 0,85%) at se obter turvao
compatvel com a suspeno desejada. Como meio de cultura foi utilizado Agar Mueller
Hinton, mtodo no seletivo que compatvel e indicado para o processo. Utilizando-se o
bico de Bunsen para se formar um ambiente estril ao redor da chama foram coletados 100
l da suspeno de bactrias utilizando-se o micropipetador, e adicionado ao meio de
cultura. Com o auxlio de um swab estril procedeu-se a homogeneizao da amostra pela
placa, e em disposio de estrela foram colocados os discos embebidos em antibiticos
utilizando pina para sua devida fixao. Os antibiticos testados foram: Amoxacilina +
clavunalato; Cefalexina; Sulfametoxazol + Trimetoprim; Ciprofloxacina; Enrofloxacin.
A placa permaneceu em incubao na estufa a 36 C, por 24 horas para que se
pudesse evidenciar a formao de alos ao redor dos monodiscos, base da avaliao do
antibiograma.
20
21
Aps os clculos finais, a bactria esperada (E. colli) no foi a isolada, o resultado
que procedeu-se foi o da Acinetobacter baumannii.
Como via didtica escolheu-se o antibiograma com amostra de Escherichia coli, e os
resultado so demonstrados na tabela 3 e figura 12.
Antibitico
Classificao
Amoxicilina +
clavulanato
Sensvel
Cefalexina
Sensvel
Sulfametoxazol
+ Trimetoprim
Sensvel
Ciprofloxacina
Sensvel
Enrofloxacin
Sensvel
22
possvel concordar com Hirsh (2003) quanto ao fato de que a utilizao de meios
de cultura seletivos e multiplicadores so o melhor caminho pra se conseguir identificar uma
infeco bacteriana atravs de amostra, e por meio dos sinais de proliferao restringir o
nmero de possveis agentes etiolgicos.
Os sinais clnicos foram compatveis com as afirmaes de Evangelista (2009), Lima
(2009) e Chen (2014), e isso se deve ao comportamento previsvel das infeces
bacterianas no trato reprodutivo de cadelas. Os resultados de exames clnicos tambm se
mostraram bem prximos dos exemplos destes autores.
As etapas de isolamento da bactria causadora tiveram resultados pouco esperados,
mas segundo Trabulsi (2005) podem ocorrer casos de infeco de culturas por
Acinetobacter baumannii, pois isso pode ocorrer em ambientes hospitalares, como o local de
coleta do material, ou por acidentes durante as etapas de processamento das culturas.
Tambm pode se relacionar aos materiais deste autor a informao de que a bactria mais
comum em infeces do trato reprodutivo de cadelas ser Escherichia coli.
Os frmacos antibiticos citados por Lima (2009) disponveis para a prtica se
mostraram efetivos no controle da bactria, formando alos descritos pelo autor.
Confirmando os estudos de Wannmacher (2014), pode-se dizer que o isolamento de
Acinetobacter baumannii exemplifica bem a utilidade de se combater o uso de antibiticos
de forma descuidada, pois foi esta prtica que criou a resistncia destas bactrias. No
momento no so relatados casos de infeces por ete agente em casos de piometra, mas
o uso indiscriminado de frmacos deve ser abolido para evitar transtornos futuros, como dito
por Spinosa, Gorniak e Bernardi (2011).
23
6.0
CONCLUSO
24
REFERNCIAS
em:
http://www.anvisa.gov.br/servicosaude/microbiologia/mod_4_2004.pdf
BACTRAY.
Tcnica
para
utilizao
do
bactray
II.
Disponvel
em:
CHEN, R. F.; ADDEO, P. M. D.; SASAKI, A. Y.; Piometra aberta em uma cadela de 10
meses.
Disponvel
em:
ttp://www2.pucpr.br/reol/index.php/ACADEMICA
GOMES,
M.J.;
Gnero
Clostriduim
spp.
Disponvel
em:
GOMES,
M.J.;
Gnero
Corynebacterium
spp.
Disponvel
em:
http://www.ufrgs.br/labacvet/files/Gnero%20Coryne-Rhodo-Trueperella%204-2013-1.pdf
Acesso em: 01 ag. 2014.
GOMES,
M.J.;
Gnero
Staphylococcus
spp.
Disponvel
em:
http://www.ufrgs.br/labacvet/files/Gnero%20Staphylococcus%20spp%204-2013-1.pdf
Acesso em: 01 ag. 2014.
HIRSH, D. C.; ZEE, Y. C. Microbiologia Veterinria. Rio de Janeiro: Guanabara, 2003. 446
p.
25
em:
http://www.ebah.com.br/content/ABAAABNZMAF/relatorio-aula-pratica-
KALENSKI, T.A. et al. Identificao das bactrias envolvidas na sepse grave de fmeas
caninas com piometra submetidas a ovrio-histerectomia teraputica. Disponvel em:
http://www.revistas.usp.br/bjvras/article/download/40269/43159 Acesso em: 01 ag. 2014.