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FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial
Para optar al ttulo de
MICROBILOGA INDUSTRIAL
Bogot D.C.
21 de Julio de 2008
NOTA DE ADVERTENCIA
APROBADO
_____________________
Gretty Paola Tarazona
Bacteriloga
Directora
____________________
Janeth Arias Palcios
Bacteriloga M.C
Codirectora
__________________
Zulma Valbuena
Bacteriloga
Jurado
____________________
Miguel Pinzon Bello
Asesor Estadstico
__________________
Cindy Fernndez
Microbiologa Industrial
Jurado
APROBADO
_________________________
Dra. INGRID SCHULER P.h D.
Decana Acadmica
____________________________
JANETH ARIAS PALACIOS MSc.
Directora de Carrera
AGRADECIMIENTOS
incondicional,
por su
TABLA DE CONTENIDO
Paginas
1. INTRODUCCIN
2. MARCO TERORICO
11
2.1. DESINFECCIN
11
2.2. DEFINICIONES
13
2.3. DESINFECTANTES
15
2.3.1.Generalidades
15
16
16
18
21
23
23
23
23
24
25
25
27
27
2.3.9.1.1. Formaldehdo
27
2.3.9.1.2. Glutaraldehido
28
29
29
2.3.9.2.2. Ozono
30
30
31
33
2.3.9.2.3.3. Aplicaciones
33
34
2.3.9.4. Alcoholes
35
2.3.9.5. Halgenos
36
36
37
2.3.9.8. Biguanidas
39
39
40
40
41
41
42
3. TIPOS DE MICROORGANISMOS
43
45
46
46
46
47
47
48
48
49
49
49
50
51
51
52
53
7. OBJETIVOS
54
7.1 General
54
7.2. Especficos
54
8. HIPOTESIS DE ESTUDIO
55
9. MATERIALES Y METODOS
56
9.1. Materiales
56
58
58
59
60
60
61
61
9.4.1.
62
Lectura e interpretacin
10.
Resultados
63
71
72
73
13. Conclusiones
79
14. Recomendaciones
80
81
16. Presupuesto
81
17. Bibliografa
82
18. ANEXOS
INDICE DE TABLAS
Paginas
Tabla N 1. Definicin de trminos
12
15
19
42
50
56
56
57
60
61
63
65
66
67
68
68
69
69
INDICE DE FIGURAS
Figura 1. Comportamiento del desinfectante ante Staphylococcus aureus
64
65
66
67
RESUMEN
experimental,
promedio fue del 100% para las concentraciones de 0.08%, 1% y 2%. De acuerdo a los
resultados obtenidos en este estudio se demostr que el desinfectante de alto nivel de STERIS
a base de perxido de hidrogeno es efectivo en un 100% cuando se emplea la concentracin
recomendada por la casa comercial (2%) en el menor tiempo de exposicin al desinfectante.
La
10
1. INTRODUCIN
La limpieza y desinfeccin son las herramientas para controlar los factores relacionados con el
medio ambiente hospitalario.
utilizados para el cuidado del paciente pueden comportarse como vehculos de transmisin de
agentes infecciosos a huspedes susceptibles. Estos objetos primero deben limpiarse
cuidadosamente y posteriormente desinfectarse o esterilizarse para prevenir la contaminacin
cruzada y una posible transmisin de microorganismos. Una adecuada poltica de desinfeccin
y esterilizacin, junto con el lavado de manos y las precauciones de barrera, son las medidas
ms eficaces para prevenir la infeccin hospitalaria.
Un aspecto importante del control de las infecciones son los principios que rigen la limpieza,
desinfeccin y esterilizacin. Evitar la transmisin de microorganismos potencialmente
patgenos, ya sea entre enfermos, del personal sanitario a aqullos o a la inversa, debe
considerarse como una prioridad en todos los centros sanitarios. Es necesario diferenciar
claramente, segn el uso a que est destinado el mismo, el material que necesita una
esterilizacin del que necesita una desinfeccin o simplemente una limpieza adecuada. La
limpieza es obligada en cualquier caso, pudiendo despus optar por una esterilizacin o por
una desinfeccin de mayor o menor nivel.
Es cierto que en el hospital la creacin de fuentes nuevas de infeccin es permanente y que la
propagacin de la contaminacin es igualmente continua, en consecuencia, la aplicacin de las
medidas higinicas debe ser tambin metdica, programada y continua (diaria); por tal motivo
la limpieza y la desinfeccin, constituyen, junto con la esterilizacin, los elementos primarios y
ms eficaces para romper la cadena epidemiolgica de la infeccin. Teniendo en cuenta que
La infeccin hospitalaria constituye un tema de extraordinaria actualidad por su frecuencia,
gravedad y repercusin econmica.
El objetivo de este estudio es evaluar la eficacia del desinfectante de alto nivel de STERIS a
base de perxido de hidrogeno. El cual es empleado en la desinfeccin de equipos,
dispositivos e instrumentos crticos y semicrticos hospitalarios, teniendo como referencia 6
microorganismos contaminantes.
En el presente trabajo se evalu el desinfectante de alto nivel de STERIS a base de perxido
de hidrogeno, empleado en la desinfeccin de equipos e instrumentos hospitalarios.
El mtodo de evolucin de la eficacia del desinfectante fue la tcnica de placa en agar
mediante la siembra en estra, en el cual se logr, el porcentaje de inhibicin del desinfectante
de alto nivel de STERIS a base de perxido de hidrogeno, frente 4 microorganismos con
propiedades
caractersticas
diferentes:
Pseudomonas
aeruginosa
(ATCC
9027),
11
CMDM
074) y
el desinfectante, es
12
2. MARCO TEORICO
2.1. DESINFECCION
La desinfeccin se puede definir como el acto de eliminar todos los microorganismos sobre
objetos inanimados, pero no necesariamente toda forma de vida microbiana, por ejemplo, las
esporas bacterianas y los hongos. La desinfeccin no tiene el margen de seguridad que
proporciona la esterilizacin, adems de que la desinfeccin es afectada por muchos factores,
cada uno de los cuales tiene un efecto importante en el resultado final. (Navarrete et al, 1998).
La razn principal
13
2.2. DEFINICIONES
TERMINO
DEFINICION
Antibitico
Bactericida
Bacteriosttico
Biocida
14
Desinfeccin
Desinfectante
que
destruye
los
microorganismos
causantes
de
Detergentes
Fungicida
15
Inactivacin
Limpieza
Sanitizacion
principio
activo
Virucida
16
2.3. DESINFECTANTES
2.3.1.
Generalidades
Los desinfectantes y antispticos son sustancias qumicas que matan o inhiben el crecimiento
microbiano. Entre los desinfectantes esta el cloro, hipoclorito, clormidas, fenol, agentes
alquilantes, detergentes, etc.
mientras que los antispticos como el alcohol yodado, methiolate se emplean sobre tejidos
vivos. (Escobar, 2002). El objetivo de los agentes es disminuir el nmero de microorganismos,
de forma que los que sobrevivan (algunas esporas y posiblemente unas pocas formas
vegetativas muy resistentes) no influyan en la calidad microbiolgica de las muestras y
productos que contactan con las superficies desinfectantes (Arias, 2006).
Pueden utilizarse como desinfectantes o antispticos muchos tipos de sustancias qumicas.
Dado que el nmero y la variedad de productos comerciales es cada vez mayor, deben elegirse
cuidadosamente las formulaciones que sean ms indicadas para las necesidades concretas. La
actividad germicida de muchas sustancias qumicas es ms rpida y eficaz a temperaturas ms
altas, pero las temperaturas elevadas tambin pueden acelerar su evaporacin y degradarlas.
Es preciso tener particular cuidado en el uso y el almacenamiento de esas sustancias en las
regiones tropicales, donde su tiempo de conservacin puede verse reducido a causa de las
altas temperaturas del ambiente. Muchos germicidas pueden ser perjudiciales para el ser
humano o el medio ambiente. Se deben seleccionar, almacenar, manipular, utilizar y eliminar
con precaucin, siguiendo las instrucciones del fabricante. En relacin con la seguridad
personal, se recomienda utilizar guantes, delantales y proteccin ocular cuando se preparen
diluciones de germicidas qumicos. (OMS, 2005).
En la tabla N2. Se observan la clasificacin de lo diferentes agentes esterilizantes, segn al
grupo al que pertenecen, desinfectantes y antispticos:
Tabla N 2. Agentes qumicos desinfectantes y Antispticos
Antispticos
Alcoholes
Iodo
Agentes catinicos, aninicos y anfteros
Colorantes
Fuente: (http://www.microbiologia.com.ar).
17
2.3.2.
Los desinfectantes que se deben utilizar en las superficies, deben cumplir, en condiciones
ideales lo siguiente:
Su eficacia: destruir rpidamente los microorganismos, siendo igual de eficaces con las
bacterias Gram positivas que con las Gram negativas; deben destruir la mayora de las
esporas fngicas, siendo tambin conveniente la destruccin de las esporas bacterianas.
Estables durante mucho tiempo en forma concentrada y durante u tiempo mas breve en
forma diluida. (Quiles y Hevia, 2007); (Marriot, 2003).
pH: Todos los desinfectantes se ven afectados por el pH de las soluciones de uso.
(GTC 85, 2003). El pH afecta tanto a los microorganismos como a los agentes
qumicos. El aumento de pH por encima de 7 incrementa la carga negativa de los
microorganismos afectando la concentracin del agente sobre la clula. El pH
determina el grado de disociacin y la efectividad del agente qumico, pues a menor
18
disociacin
mayor
permeabilidad
mayor
efectividad.
(http://www.microbiologia.com.ar/).
Algunos
Dureza del Agua: La mayora de los desinfectantes son eficaces en una amplia gama
de la dureza del agua. (GTC 85, 2003). Las aguas duras (Calcio y magnesio), afectan
negativamente al desinfectante. (Arias, 2006).
19
Adems, de una forma no reactiva, la metera orgnica e inorgnica forma una barrera
protectora, de tal manera, que los microorganismos son protegidos de sus efectos. (Galn,
2003).
La accin oxidante del cloro al combinarse con el agua, se lleva a cabo directamente sobre el
protoplasma de la bacteria, causando desintegracin de su estructura.
As mismo, se conoce que la mayora de desinfectantes qumicos coagulan las protenas, como
otro mecanismo de accin en la destruccin de las bacterias. El rompimiento de la pared
celular se explica por el descenso de la tensin superficial causando en algunos casos que la
bacteria se disuelva. (Soto, 1995). En la Tabla N 3, se resumen los mecanismos de accin y
los blancos de los principales agentes qumicos utilizados en desinfeccin.
20
Tabla N3
Comunes.
Sitio Blanco
Envoltura
Antisptico o Desinfectante
Mecanismo de Accin
Glutaraldehdo
celular
(pared
celular,
membrana
externa)
liberacin
de
algunos
lipopolisacaridos
cuaternario)
Clorhexidina
Membrana interna
Diaminas
citoplasmtica
bioguanidas
polihexametileno), alexidina.
de
Fase de separacin y formacin de
dominios de lpidos de membrana.
Fenoles
Prdida, desacople.
Desnaturalizacin
de
protenas
por
coagulacin
Unin cruzada a
Formaldehdo
Glutaraldehdo
ADN.
macromolculas
Intercalacin
de
una
molcula
21
de
Intercalacin con el
ADN
bases en el ADN.
Interaccin
con
grupos tiol
Efectos en el ADN
Halgenos
de plata
Halgenos
Oxidacin
de
los
grupos
tioles
Peroxgenos
Membrana
Alcoholes
citoplasmtica
Desagregacin
de
la
membrana
de
enzimas
citoplasmtica.
Desnaturalizacin
en
y
las
Cloro y derivados
acidos
nucleicos
Inhibe
las
reacciones
enzimticas,
22
Las bacterias Gram negativas por lo general son ms resistentes a los antispticos y
desinfectantes que las Gram positivas. La membrana externa de las bacterias Gram negativas
acta como una barrera que limita la entrada de varios tipos de agentes antibacterianos sin
relacin qumica. Las molculas hidroflicas de bajo peso molecular pasan fcilmente a travs
de las porinas, en cambio las molculas hidrofbicas se difunden a travs de la bicapa de la
membrana. Adems de las vas antes descritas se ha propuesto una tercera va para agentes
catinicos como los Compuestos de amonio cuaternario, biguanidas y diamidinas, los cuales
daan la membrana y facilitan su autocaptacin. Un ejemplo claro de resistencia mediada por
la membrana externa es el de P. aeruginosa que presenta diferencias en la composicin del
lipopolisacrido (LPS) y el contenido de cationes como el magnesio, que produce enlaces
estables entre molculas de LPS y como complemento a este mecanismo, esta bacteria
presenta porinas pequeas que impiden el paso por difusin de ciertas sustancias. Algunas
cepas que son muy resistentes a clorhexidina, CAC, EDTA y diamidinas se han aislado de
23
muestras clnicas. La presencia de un LPS menos cido en la membrana externa puede ser un
factor que contribuye a la resistencia intrnseca. (Cabrera et,al, 2007).
La presencia de lpidos en la membrana externa de los bacilos Gram negativos se relaciona
con el hecho de que estas bacterias son mucho ms resistentes que los Gram positivos a los
agentes antibacterianos, incluyendo los desinfectantes. En los estafilococos, por ejemplo, los
lpidos estn presentes en pequeas cantidades; si se incrementa (por ejemplo hacindoles
crecer en presencia de glicerol), los microorganismos se vuelven ms resistentes a ciertos
fenoles y penicilinas. En las micobacterias, el contenido en lpidos se asocia con su gran
resistencia a los desinfectantes. Se han
defectivos en la regin interna del ncleo, que resulta sensibles a una amplia variedad de
desinfectantes y detergentes, relacionndose lo uno con lo otro. Se ha visto tambin, que la
reorganizacin de los fosfolpidos de la membrana externa puede permitir la penetracin de
molculas hidrofbicas por disolucin y difusin en los lpidos. (Camargo, Torres, 2003).
La superficie de los Gram negativos lisos es hidroflica; en el caso de los mutantes rugosos, sin
embargo, tienden a ser mucho ms hidrofbica En las cepas salvajes, las molculas del LPS
intactos se oponen al acceso rpido de los biocidas hidrofbicos o de los antibiticos, al interior
de la clula probablemente mediante un sistema de blindaje protector conferido por los
fosfolpidos, mucho de los cuales no estn presentes en la estructura de la membrana clsica.
En el caso de los bactericidas cationicos,
24
2.3.6.3. Agentes que modifican los grupos funcionales cidos Nucleicos y Protenas
Se caracterizan por los siguientes efectos:
Alteran grupos funcionales que forman parte de los centros activos de enzimas y otras
protenas.
Al modificarse los grupos funcionales, ya sea por cambio en estado de oxidacin (agentes
oxidantes), por bloqueo (metales pesados) o por incorporacin de pequeos restos carbonados
(agentes alquilantes) se afecta:
25
26
2.3.8.
CLASIFICACIN
DE
LOS
DESINFECTANTES
SEGN
EL
METODO
DE
DESINFECCION
El Calor
La eficacia de los procesos de desinfeccin por calor depende de la temperatura alcanzada, del
tiempo y de la humedad. El grado de destruccin microbiana requerido se alcanza siempre y
cuando el mtodo de aplicacin y el diseo del equipo permitan la penetracin adecuada de
calor en todas partes del equipo. (GTC 85, 2003).
Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la accin del calor. El calor
provoca desnaturalizacin de protenas, fusin y desorganizacin de las membranas y/o
procesos oxidativas irreversibles en los microorganismos. La efectividad del calor como mtodo
de
esterilizacin
depende
de:
Temperatura
Tiempo
de
exposicin.
(http://www.microbiologia.com.ar/).
El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Estos efectos se deben
principalmente a dos razones:
El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas (DNA,
RNA, protenas, etc) son producidas por reacciones que eliminan agua. Por lo tanto,
reacciones inversas podran daar a la clula a causa de la produccin de productos
txicos. Adems, las estructuras secundarias y terciarias de las protenas se estabilizan
27
Calor seco
El calor seco produce desecacin de la clula, efectos txicos por niveles elevados de
electrolitos, procesos oxidativos y fusin de membranas. Estos efectos se deben a la
transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que estn en contacto con
stos. El aire es mal conductor del calor, y el aire caliente penetra ms lentamente que el vapor
de agua en materiales porosos. La accin destructiva del calor sobre protenas y lpidos
requiere mayor temperatura cuando el material est seco o la actividad de agua del medio es
baja. Esto se debe a que las protenas se estabilizan mediante uniones puente de hidrgeno
intramoleculares
que
son
ms
difciles
de
romper
por
el
calor
seco.
(http://www.microbiologia.com.ar/).
Para este tipo de tratamientos se emplean hornos que alcancen temperaturas mayores de
150C. Estos tratamientos pueden ser esterilizantes. Las condiciones de esterilizacin de
material con baja carga puede ser: a) 180C una hora b) 160c durante dos horas . Si se
empleara calor seco al 121C se debera realizar un tratamiento de 16 horas. (Jimnez,
2000). Este tipo de tratamientos se usa para esterilizar material de vidrio, instrumentos de
metal o aceites y polvos que soporten esas altas temperaturas
Otros Agentes Fsicos desinfectantes
y la dosis. Ionizantes:
Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos nuclecos, estructuras
proteicas y lipdicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos.
28
superficies. (http://www.microbiologia.com.ar/).
Filtracin
Los filtros retienen los microorganismos impidiendo el pasaje a travs de los mismos. Los filtros
de membrana retiene a los microorganismos en la superficie por poseer poros de tamao
pequeo (0.2 micras) a travs de los cuales los microorganismos no pueden pasar. Los filtros
de profundidad retienen a los microorganismos atrapndolos en su matriz. Un ejemplo de
filtracin de profundidad es el tapn de algodn que se utiliza para tapar los tubos de medio de
cultivo. (Jimnez, 2000).
29
El formaldehdo reacciona con las protenas y los cidos nucleicos dando lugar a una
desnaturalizacin irreversible debido a la formacin de puentes intra e intermoleculares. El
formaldehdo es muy utilizado para la desinfeccin de superficies, de equipos y de los circuitos
de tuberas, en asociacin con otros aldehdos amonios cuaternarios. El uso principal es la
desinfeccin por va area. (Leveau y Bouix, 2002)
Ventajas
Bactericida-fungicida
No corrosivo
Buena enjuagabilidad
Bajo costo.
Desventajas:
Olor desagradable
lacrimgeno
2.3.9.1.2. Glutaraldehido
Conocido comnmente como aldehdo glutrico. La estabilidad del glutaraldehido depende del
pH y la temperatura. La prdida de actividad se acelera a partir de pH 8,8 y una temperatura
superior a 50C. La zona de pH compatible con una estabilidad satisfactoria va de pH 3,5 a 6,5.
El gluataraldehido no es un agente qumico agresivo frente a los materiales utilizados (acero
inoxidable, aluminio, materias plsticas, caucho). (Leveau y Bouix, 2002)
El glutaraldehido es el agente antimicrobino mas utilizado en el sector hospitalario para la
desinfeccin del materila de endoscopia. (Leveau y Bouix, 2002)
Su actividad biocida se debe a la desnaturalizacin de las protenas y aniquilacin de los
cidos nucleicos (RNA y DNA). El glutaraldehido posee un espectro muy amplio que abarca
las bacterias, levaduras, mohos, y formas esporuladas. Se distingue sobre todo por su
actividad virucda frente a los virus encapsulados y virus desnudos. Esta propiedad es
aprovechada en el sector hospitalario (activiadad anti-hepatitis B) o agroalimentario (actividad
antifungico). (Leveau y Bouix, 2002)
Ventajas
30
Bactericida-fungicida-virucida-esporicda
Accin rpida
No corrosivo
Costo moderado
Desventaja:
Olor caracterstico
Bactericida-fungicida-virucida-esporicida
Accin rpida
Buena enjuagabilidad
Poco costoso.
Desventajas
Riesgos de corrosin
Vapores irritantes.
31
2.3.9.2.2. Ozono
El
ozono es una molcula compuesta por tres tomos de oxigeno que se presenta
naturalmente en la parte superior de la atmosfera que envuelve la tierra. Acta como oxidante y
desinfectante y puede utilizarse como medio de control de amenazas qumicas y microbianas.
El ozono esta siendo considerado como sustituto del cloro. Como el dixido de cloro, el ozono
es inestable, debiendo generase a medida que se va consumiendo en el punto de aplicacin.
Como oxida rpidamente, ejerce menos impacto ambiental. (Marriot, 2003)
Estos
radicales libres son txicos para los componentes celulares, de tal suerte que los
microorganismos que crecen en presencia de oxigeno, como aceptor final de electrones, deben
sintetizar un enzima la superxido dimutasa, para neutralizarlos. Gracias a esta enzima, los
radicales superxido se transforman en oxigeno molecular (O-2) y perxido de hidrogeno
(H2O2). (Cuesta y Castillo, 2004).
El perxido de hidrogeno es tambin toxico, pero se convierte inmediatamente en oxigeno
molecular y aguas mediante la enzimas catalasa. Tambin la peroxidasa destruye el peroxido
de hidrogeno. El in perxido (O-2) es otra forma txica del oxigeno, que se genera en
pequeas cantidades en la respiracin normal. El ultimo producto de la respiracin normal es
32
el radical hidroxilo libre (OH-) es muy reactivo. Se produce principalmente por las radiaciones
ionizantes, tambin en la
Castillo, 2004).
Mecanismos de accin
El mecanismo de accin del perxido de hidrogeno todava no est definitivamente establecido.
Se han presentado no obstante varias hiptesis.
Una primera hiptesis, la formacin del hipoclorito
enzima mieloperoxidasa, el cloruro contenido en las bacterias puede ser oxidado por el
perxido de hidrogeno en hipoclorito:
O2 + e- O2 - ion speroxido
O2 + H2O2 OH- + O2 + OH radical hidroxilo
Este radical puede atacar a los lpidos de las membranas, al ADN, protenas, y otros
compuestos vitales de la clula. (Leveau y Bouix, 2002).
Se considera que la inhibicin de crecimiento microbiano por el perxido de hidrogeno no es
resultado directo
microorganismo. Aunque el mecanismo exacto por el cual el H2O2 produce productos letales
para muchos microorganismos no ha sido
debido a su capacidad
33
Descomposicin por una reaccin de dismutacin con un mximo ritmo de pH. (Labas
et al, 2007).
Los radicales hidroxilos constituyen una de las especies qumicas con el mayor potencial para
producir dao celular. El perxido de hidrgeno no es una molcula grande y es capaz de
difundir a travs de la membrana celular y, una vez dentro, para producir los radicales hidroxilo
(OH ) por medio de algunos de los mecanismos mencionados anteriormente. Los radicales
hidroxilos pueden repercutir en los diferentes componentes de la
cistena dando
Tambin pueden actuar sobre los lpidos para producir una reaccin de peroxidacin
que afecta gravemente a la integridad de la membrana celular. Una de las
consecuencias de esta reaccin es el aumento de la rigidez de la membrana celular,
se produce la prdida de su permeabilidad y
Acta sobre la clula, el DNA, especficamente el (OH), puede producir una ruptura en
la cadena o modificaciones qumicas en las bases nitrogenadas.
34
Espectro de actividad
El efecto bactericida del perxido de hidrogeno en los sistema biolgico ha sido reportado y
muestra una inhibicin del crecimiento e inactivacin de los microorganismos patgenos;
bacterias, hongos, virus, micobacterias y esporas bacterianas, cuando se utiliza el
desinfectante a la concentracin y bajo condiciones adecuadas. (Labas et al, 2007).
El perxido de hidrogeno tiene actividad, particularmente frene a las esporas, fuertemente
aumentada por una elevacin de la temperatura. Al pasar de 20 a 45 C, por 10 al menos el
tiempo necesario para matar las esporas. (Leveau y Bouix, 2002).
El perxido de hidrogeno es ms activo sobre la bacterias Gram negativas que sobre las Gram
positivas, lo que es normal, sobre las bacterias anaerobias, que estn provistas de catalasa,
que sobre las bacterias aerobias. Algunos mohos, como por ejemplo los Trichophyton, pobres
en catalasa, son ms sensibles. Otros como Candida albicans, que posee una actividad
catalasa ms elevada, son ms resistentes. pH optimo: ligeramente acido; incompatibilidades:
alcalinos, metales, catalasa. (Leveau y Bouix, 2002).
Cuando se utiliza el perxido de hidrogeno en medio alcalino libera de una forma violenta todo
su oxigeno. Por el contrario en medio cido, las soluciones de perxido de hidrogeno son ms
estables cuanto ms bajo es el pH. Esta molcula es utilizada a veces en los detergentesdesinfectantes para la industria Lctea o fabricas de queso, en presencia a de cido fosfrico.
(Leveau y Bouix, 2002).
Aplicaciones como antisptico
Antisptico en el lavado de lceras y heridas: ayuda a la eliminacin de detritus titulares en
regiones inaccesibles. Se utiliza H2O2 de 10 volmenes (3%) y cremas del 1%-1.5%.
Enjuagues bucales en amigdalitis, estomatitis aguda, halitosis, extracciones dentales e
infecciones de la boca. Diluir 1 parte del perxido de hidrogeno comercial de 10 V con una
parte
de
agua
para
obtener
una
concentracin
del
1.5%.(www.scielo.cl/pdf/infotec/v18n2/art10.pdf).
35
Pero no se utiliza porque su poder oxidante podra daar los aparatos (deteriora gomas
y plsticos de tubos de insercin). A concentraciones del 3% es eficaz frente a quistes.
(www.scielo.cl/pdf/infotec/v18n2/art10.pdf).
El H2O2 ha sido utilizado como agente antimicrobiano desde principio del ao 1800 y
es bien conocido por su uso en aplicacin tpica de la piel en concentraciones del
3%.(Labas et al, 2007).
36
2.3.9.4. Alcoholes
Dos alcoholes se utilizan principalmente: el etanol y el isopropanol. Estos dos compuestos son
elegidos por su poder disolvente y carcter voltil ms que por actividad antimicrobiana. Los
alcoholes poseen una rpida accin bactericida, actuando sobre bacterias Gram negativas y
Gram positivas, y virus con envuelta, siendo por tanto considerados como desinfectantes de
bajo nivel. La concentracin bactericida ptima se sita en el 70%. Ello se debe a que estos
compuestos acuosos penetran mejor en las clulas y bacterias, permitiendo as la
desnaturalizacin de las protenas. (Leveau y Bouix, 2002).
Los alcoholes se inactivan en presencia de materia orgnica. Se utilizan muy frecuentemente
para la desinfeccin de la piel, y resultan muy eficaces para este fin cuando a continuacin se
aplica un yodforo. Su aplicacin est tambin indicada en la desinfeccin de material no
crtico como termmetros y fonendoscopios. La toxicidad del alcohol isoproplico es dos veces
37
Poco toxico
Accin rpida
Secado rpido
No corrosivo.
Desventajas
2.3.9.5. Halgenos
Todos los halgenos (F, Cl, I, y Br) son desinfectantes: sus propiedades germicidas y de
penetracin en general aumentan con su peso molecular. El yodo es el halgeno de mayor
peso atmico y que por su bajo poder de oxidacin resulta ms estable.
Los productos oxidantes halogenados, bien sean el cloro y derivados, o el yodo y derivados
(yodoformos), son uno de los grupos de desinfectantes ms utilizados en la actualidad,
generalmente como desinfectantes de superficies los primeros y como antispticos de piel y
mucosas los segundos, aunque tanto unos como los otros pueden tener efectos txicos.
(Galn, 2003).
Por su capacidad como fuertes oxidantes, todos los halgenos tienen accin desinfectante,
aunque en su forma elemental solo tiene importancia el cloro y el yodo. (Galn, 2003).
38
levaduras son bastantes sensibles a los derivados yodados. La actividad esporicda solo se
obtiene con concentraciones muy elevadas. (Leveau y Bouix, 2002).
Ventajas
Bactericida-fungicida-virucida
Desventajas
riesgo de corrosin
corrosivo de metales.
en
forma
lquida
(hipoclorito
sdico)
slida
(hipoclorito
clcico,
dicloroisocianurato sdico).
El hipoclorito de sodio es relativamente inestable a la temperatura y a luz. Los derivados
clorados, en forma de polvo, son ms estables pero sensibles a la humedad. El cloro gaseoso,
39
el hipoclorito de sodio y los derivados clorados dan cido hipocloroso (HCLO) en presencia de
agua. (Leveau y Bouix, 2002).
El mecanismo de accin sobre los microorganismos, se basa en el poder oxidante del cido
hipocloroso (forma Activa) que entraa una destruccin de las protenas estructurales y un
bloqueo de la actividad enzimtico.
Los generadores de cido hipocloroso son muy buenos bactericidas y virucidas. La actividad
fungicida es poco marcada. El potencial de actividad es muy dependiente de la proporcin de
materia orgnica. Los derivados clorados son principalmente utilizados en tratamiento de
superficies y circuitos de tuberas, despus de la limpieza. (Leveau y Bouix, 2002).
Ventajas
Poco costoso
Buena enjuagabilidad.
Poco corrosivo
No son afectados por las sales de las guas duras (salvo si se registran ligeras
variaciones debidas al pH)
Acta rpidamente
Desventajas
Riesgos de corrosin
Se volatiliza rpidamente
2.3.9.8. Biguanidas
Son derivados de la guanidina, una sustancia que se encuentra en forma natural en vegetales y
cereales. El grupo incluye un pequeo nmero de materiales que han sido identificados como
poseedores de propiedades bactericidas. Estos son bis-biguanidas o biguanidas polimricas.
40
Bactericida
poco txicos
no espumantes
no corrosivos
Desventajas:
no virucda
41
Bactericida-fungicida
Poco toxico
Estables (pH-temperatura)
No corrosivo
Costo moderado
42
Desventajas
Espumante
No virucidas
2.3.9.13. Detergentes-Desinfectantes
Los detergentes-desinfectantes, conocidos popularmente como detergentes antimicrobianos
son esencialmente combinaciones de ingredientes compatibles y complementarios; contiene
adems de un detergente, un desinfectantes de forma que la limpieza y desinfeccin se lleva a
cabo en una sola operacin. En la prctica, las formulaciones de detergentes/desinfectantes
suelen contener otros componentes, como agentes secuestrantes y tampones, siendo
frecuentes el incluir dos surfactantes en una sola formulacin, siempre que sean compatibles.
Cualquiera que sea su frmula, idealmente un buen detergente-desinfectante debe ser eficaz
frente a una gran variedad de suciedades y amplio espectro de microorganismos. (Forsythe y
Hayes, 2002).
4 - Excelente
3 Alta
43
2 Media
1 Baja
0 Ninguna
Bacteria
Hongos
Desinfectantes
Gram (+)
Gram (-)
Levadura
Moho
Cloro Liquido
Hipoclorito Orgnico
Yodforos
Amonio Cuaternario
Desinfectantes cidos
cido Percetico
Biguanidas
acelerado (AHP, Accelerated Hydrogen Peroxide), una frmula patentada, que combina una
baja concentracin de perxido de hidrgeno y otros ingredientes inertes, lo que acelera su
eficacia; est diseado para la desinfeccin de alto nivel de dispositivos mdicos de riesgo
medio sensibles al calor, incluido el procedimiento manual o automtico de los endoscopios
flexibles. (www.steris.com)
Caractersticas del desinfectante
Cinco minutos de tiempo de contacto a 20C (68F) para alto nivel de desinfeccin
No requiere activacin
44
Es inodoro
No es costoso
Beneficios
3. TIPOS DE MICROORGANISMOS
Los microorganismos son la forma de vida ms difundida en la naturaleza. Su presencia tiene
efectos positivos y negativos para la vida del hombre, consecuentemente su control es
fundamental para evitar que estos efectos produzcan consecuencias indeseables, para la
salud, el medio ambiente y los bienes que hacen a la calidad de vida del ser humano. El
mencionado control se puede realizar por medios fsicos o qumicos, los cuales deben ser
especficos para la accin deseada y no deben producir efectos colaterales indeseados.
Los microorganismos se clasifican en: bacterias, mohos (hongos), levaduras, parsitos y virus.
Bacterias
Las
bacterias
son
microorganismos
unicelulares
(clulas
procariticas)
que
tienen
45
de ribosomas y el material gentico est libre sin membrana nuclear. Algunas son mviles por
poseer flagelos. (Marriot, 2003)
Mohos
Los mohos son microorganismos pluricelulares (clulas eucariotas) con morfologa de micelio
filamentosa. Consisten en una serie de clulas tubulares que oscilan entre 30 a 100 micras de
dimetro, llamadas hifas, que forman una masa microscpica llamada micelio. Los mohos se
caracterizan por la variedad de colores en que se manifiestan y son generalmente reconocidos
por su apariencia suave o rizada, como algodn. Pueden desarrollarse numerosas y diminutas
esporas que se encuentran el aire y que pueden esparcirse con las corrientes de aire. Las
esporas producen el crecimiento de un nuevo hongo si son trasladadas a un lugar que reuna
las condiciones adecuadas para su germinacin. Los mohos generalmente resisten mayores
variaciones en el pH que las bacterias y las levaduras y pueden tolerar con frecuencia mayores
variaciones de temperatura. (Marriot, 2003).
Los mohos se reproducen sexual y asexualmente (esporas), la cual determina sus variadas
especies, obtienen su alimento de materia orgnica que proviene, en su gran mayora de los
alimentos. (GTC 85, 2003).
Virus
Los virus son microorganismos infecciosos con dimensiones que oscilan de 20 300 nm, o sea
que son alrededor de 1/100 a 1/10 menores que una bacteria. La mayora de los virus pueden
verse solo a travs del microscopio electrnico. Una partcula de virus consiste en una
molcula simple de DNA o RNA, rodeada por una capa de protena. Los virus nos se pueden
reproducir fuera de otro organismo y son parsitos obligados de todos los organismos vivos,
como bacterias, hongos, algas, protozoos, plantas superiores y animales vertebrados e
invertebrados. (Marriot, 2003).
Levaduras
Las levaduras son generalmente unicelulares. Difieren de las bacterias por el gran tamao de
sus clulas y su morfologa, y porque producen brotes durante el proceso de reproduccin por
gemacin. Las levaduras pueden diseminarse a travs del aire u otros medios y pueden
ponerse en las superficies de los alimentos. Las colonias de levaduras son generalmente de
apariencia hmeda o viscosa y de una blancura cremosa. Estos microorganismos se
desarrollan mejor en una zona de acidez media, con un pH entre 4.0 y 4.5. (Marriot, 2003).
46
a la ultima clases
47
se puede encuentran
animales. En el hombre son oportunistas. Los alimentos implicados: vegetales crudos, agua,
leche no pasteurizada. Estos microorganismos no realizan fermentaciones y obtiene su energa
de la fermentacin de azucares; aun as muchas cepas pueden crecer en forma anaerbica
utilizando nitrato como aceptor terminal de electrones. (Cuesta y Castillo 2004).
48
serotipos descritos las cuales poseen antgenos somticos (O, que son lipolisacridos, y
flagelares (H) que son protenas. Desde el punto de vista bioqumico, en general son lactosa y
sacarosa negativas. Samonella choleraesuis se caracteriza por presentar el siguiente cuadro
clnico de infeccin: bacteremia y septicemia sin sntomas gastrointestinales siendo
particularmente invasiva caracterizada por picos de fiebre alta y cultivos de sangre positivos.
(Koneman, 1992)
blanco,
49
Limpiar el material con detergente tan pronto se haya utilizado para evitar que los
restos de materia orgnica se sequen y adhieran al instrumental. Es preferible emplear
agua caliente. Utilizar detergente enzimtico en los materiales difciles de acceder para
su limpieza.
Una vez lavado, sumergir el material en la solucin desinfectante, procurando que sta
llegue a todas las superficies, tanto internas como externas.
Es preciso que los recipientes estn limpios para evitar que la solucin se contamine.
50
estriles
son los
endoscopios
51
Tipo
Instrumentos o equipos
Procedimiento
Desinfectantes
- Catteres endovenosos y
- Algunos de estos
cardacos
objetos se adquieren
- Instrumental quirrgico y
estriles y son de un
dental
- Implantes
posible
- Sondas urinarias
esterilizar
Material Critico
(Sistema
entran en tejidos
xido de etileno.
vascular
estriles
tejidos
estriles)
(artroscopio,
se
por
deben
calor
Esterilizacin
laparoscopios)
-
Accesorios
de
endoscopios rgidos y de
fibra
(pinzas de biopsia, cepillos,
cnulas)
- Agujas
- Endoscopios rgidos que
penetran en
0,2%
cido
Material
cavidades
semicrtico
(broncoscopios,
(Toca
laringoscopios)
Desinfeccin de
fenolato 1:8
membranas
- Endoscopios flexibles de
alto nivel
mucosas)
fibra ptica
no
estriles
peractico
- Glutaraldehdo al 2%
-
Glutaraldehdo
Perxido
de
hidrgeno al 6%
52
Mquinas
de
dilisis
(circuito interno)
- Otoscopios, sinuscopios,
tonmetros,
espculos
vaginales,
termmetros rectales
-
Equipos
de
terapia
respiratoria
- Termmetros
- Alcohol de 70%
Material
- Orinales
Desinfeccin de
no crtico
- Fonendoscopios
nivel intermedio o
aldehdos al 1%
- Desfibriladores
de bajo nivel
- Hipoclorito sdico al
Toca
intacta)
la
piel
Asociacin
- Esfigmomanmetros
0,1%
- Superficies
de
Amonios
cuaternarios
- Iodforos
Fuente: (www. Academia.cat/societats/formcl/libre/hygiene/3pdf.
53
54
6. JUSTIFICACION
En todos los campos de la investigacin, en los que ha de trabajarse con productos qumicos,
se necesitan un desinfectante que impida de forma fiable la contaminacin microbiana y
mantenga limpias al mismo tiempo las superficies y los equipos de trabajo.
La limpieza y la desinfeccin, constituyen, junto con la esterilizacin, los elementos primarios y
ms eficaces para romper la cadena epidemiolgica de la infeccin. La infeccin hospitalaria
constituye un tema de extraordinaria actualidad por su frecuencia, gravedad y repercusin
econmica.
La desinfeccin de instrumentos y superficies de los puestos de trabajo, bsicamente en el
laboratorio donde se manipulan muestras biolgicas, constituye la forma ms adecuada de
evitar el posible contagio. Esto se consigue con una correcta utilizacin de desinfectantes.
La atencin hospitalaria plantea las mximas exigencias de higiene ya que los dispositivos
mdicos e instrumentos de ciruga como es el caso de los implantes, tienen contacto directos
con fluidos corporales. La mala higiene de estos instrumentos pueden ocasionar infecciones
irreversibles en pacientes inmunosuprimidos o en el peor de los casos la muerte; Justamente
por tal motivo se necesita utilizar un desinfectante que tenga una eficacia no solo eliminando de
forma rpida y fiable los microorganismos, evitando de tal forma el deterioro de la salud de los
pacientes sino eliminando tambin los olores desagradables. Permitiendo de esta manera
que no se generen enfermedades.
Para el desarrollo de esta investigacin se empleara el desinfectante de alto nivel de STERIS,
a base de perxido de hidrogeno, mediante ensayos in Vitro que garanticen su utilizacin en
instrumentos y dispositivos mdicos en el sector hospitalario.
55
7. OBJETIVOS
Evaluar la eficacia del desinfectante de alto nivel de STERIS a base de perxido de hidrogeno
frente a los microorganismos descritos en la ficha tcnica con la finalidad
de verificar su
7.1.
Objetivos Especficos
mdicos.
56
8.
Ho: 75%
57
9.
9.1.
MATERIALES Y METODOS
MATERIALES
Para la realizacin de este estudio se empleo el siguiente material, los cuales fueron
proporcionados por la Pontificia Universidad Javeriana.
MATERIALES
TOTAL
126
46
PIPETAS 2ml
36
FIOLA DE 1000 ml
EQUIPOS
CANTIDAD
Incubadora 25C+/-2C
Incubadora 35C+/- 2C
Autoclave
Balanza
Mechero
Microscopio
58
CANTIDAD
Agar BHI
500 g
Caldo BHI
500 g
Yoduro de potasio
1 unidad
Cristales de fenol
1 unidad
Alcohol acetona
1 unidad
Fucsina
1 unidad
Cloruro de bario
1 ml
Acido sulfrico
10 ml
59
Poblacin
del
desinfectante frente a las diferentes cepas microbianas. Se realizaran dos repeticiones para
cada microorganismo con las tres concentraciones del desinfectante. Las muestras se
analizaron en los laboratorios de la Pontificia universidad Javeriana. El tiempo de contacto del
desinfectante vs microorganismo, fue de 5, 10 y 15 minutos, para bacterias vegetativas y un
tiempo de 3,6 y 9 horas para la cepa esporulada, todo esto con el fin de
determinar si el
Variables dependientes
Porcentaje de inhibicin microbiana de cada concentracin del desinfectante evaluada,
se calcular mediante el promedio de inhibicin de las replicas de cada
microorganismo evaluado.
Variables independientes
Las diferentes concentraciones a las cual se evaluara el agente desinfectante
(Concentracin recomendada, ala mitad y al doble).
Los diferentes tiempos de exposicin para las 3 cepas bacterianas 5,10 y 15; 3,6 y 9
horas para la cepa esporulada.
60
frente a los
61
Microorganismos: los microorganismos que se utilizaron fueron Bacillus subtilis ATCC 6633,
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Staphylococcus aureus beta-hemolitico CMDM 227 y
Salmonella choleraesuis- Kuznedorf CMDM 074, los cuales se preservaron en cajas petri a 5C
y les realizo una identificacin microscpica por medio de la coloracin de Gram.
Desinfectante: Fue suministrado por la casa comercial STERIS y preparado de acuerdo a las
recomendaciones de la misma.
Medios de cultivo. Caldo BHI para inocular los microorganismo y reproducirlo; agar agar BHI
utilizado como medio de cultivo para siembra y recuperacin de Salmonella choleraesuis,
Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa.
BaCl2 1%
H2SO4 1%
Concentracin
ml x 108
0.2
9.8
62
CONCENTRACIONES DEL
DESINFECTANTE
0.02%
0.04%
0.08%
1%
2%
FACTOR DE DILUCIN
1/100: Se prepara 1 ml de la solucin desinfectante en 100 ml
de agua.
2/100: Se prepara 2 ml de la solucin desinfectante en 100 ml
de agua
4/100: Se prepara 4 ml de la solucin desinfectante en 100 ml
de agua
50/100: Se prepara 50 ml de la solucin desinfectante en 100
ml de agua
Se debe usar el desinfectante puro.
A BASE DE
PEROXIDO DE HIDROGENO.
63
concentraciones del
desinfectante.
Las cajas fueron divididas en cuatro segmentos, donde por medio de estras se sembr
cada una de las concentraciones del desinfectante con el microorganismo. Se repiti el
mismo procedimiento con cada cepa.
Se incubaron a 35C las cajas de agar BHI por 48 horas. (Carrascal et al, 2003),
(Morales, 2007).
observando el
nmero de estras que presentaron crecimiento del microorganismo, se tuvieron en cuenta los
siguientes criterios:
lee por
inhibicin del crecimiento del microorganismo, para considerar valida una estra esta
debe tener mas de 50% de su longitud.
Control: todas las estras deben mostrar crecimiento (si este control no presenta
crecimiento en todas las estras se debe repetir todo el procedimiento). (Carrascal et al,
2003)
64
10.
RESULTADOS
Sthaphylococcus aureus
Sthaphylococcus aureus
IN VITRO
CONCENTRACION DEL
DESINFECTANTE
% INHIBICION
TIEMPO DE CONTACTO EN MINUTOS
5 MINUTOS
10 MINUTOS
15 MINUTOS
0.02%
25
0.04%
43.75
100
0.08%
100
100
100
1%
100
100
100
2%
100
100
100
65
100%
90%
80%
%DEINHIBICION
70%
0.02%
60%
0.04%
50%
0.08%
40%
1%
30%
2%
20%
10%
0%
5min
10min
15min
TIEMPOENMINUTOS
66
Pseudomonas aeruginosa
IN VITRO
CONCENTRACION DEL
DESINFECTANTE
Pseudomonasa aeruginosa
% INHIBICION
TIEMPO DE CONTACTO EN MINUTOS
5 MINUTOS
10 MINUTOS
15 MINUTOS
0.02%
28.12
0.04%
87.5
100
100
0.08%
100
100
100
1%
100
100
100
2%
100
100
100
NOTA: Los resultados corresponden al promedio de las replicas y estn expresados en
porcentaje.
%DEINHIBICION
100%
80%
0.02%
60%
0.04%
40%
0.08%
20%
1%
0%
2%
5min
10min
15min
TIEMPOENMINUTOS
67
Salmonella choleraesuis
Tabla N13. Porcentaje de inhibicin de
Salmonella choleraesuis
IN VITRO
CONCENTRACION DEL
DESINFECTANTE
% INHIBICION
TIEMPO DE CONTACTO EN MINUTOS
5 MINUTOS
10 MINUTOS
15 MINUTOS
0.02%
42.15
0.04%
62.5
100
0.08%
100
100
100
1%
100
100
100
2%
100
100
100
NOTA: Los resultados corresponden al promedio de las replicas y estn expresados en
porcentaje.
%
%INHIBICION
100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
0.02%
0.04%
0.08%
1%
5min
10min
15min
2%
TIEMPOMINUTOS
68
Bacillus subtilis
tiempo de contacto.
Bacillus subtilis
IN VITRO
CONCENTRACION DEL
DESINFECTANTE
% INHIBICION
TIEMPO DE CONTACTO EN MINUTOS
3 HORAS
6 HORAS
9 HORAS
0.02%
50
50
87.25
0.04%
68.75
96
100
0.08%
100
100
100
1%
100
100
100
2%
100
100
100
NOTA: Los resultados corresponden al promedio de las replicas y estn expresados en
porcentaje.
%DEINHIBICION
100,%
90,%
80,%
70,%
60,%
50,%
40,%
30,%
20,%
10,%
0,%
0.02%
0.04%
0.08%
1%
2%
3hr
6hr
9hr
TIEMPOENHORAS
69
En la Tabla N 15, se puede observar la comparacin entre los resultados del porcentaje de
inhibicin del enfrentamiento de las cepas microbianas ante la concentracin de 0.02% del
desinfectante de alto nivel de STERIS, a base de perxido de hidrogeno.
MICROORGANISMOS
PORCENTAJE DE
INHIBICION
TIEMPO DE EXPOSICIN
5 min
10 min
15 min
Staphylococcus aureus
0%
0%
25%
Pseudomonas aeruginosa
0%
0%
28%
Salmonella choleraesuis
0%
0%
42%
TIEMPO DE EXPOSICIN
3 hr
6 hr
9 hr
Bacillus subtilis
50%
50%
100%
En la Tabla N 16, se puede observar la comparacin entre los resultados del porcentaje de
inhibicin del enfrentamiento de las cepas microbianas ante la concentracin del 0.04% del
desinfectante de alto nivel de STERIS, a base de perxido de hidrogeno.
MICROORGANISMOS
PORCENTAJE DE
INHIBICION
TIEMPO DE EXPOSICIN
5 min
10 min
15 min
Staphylococcus aureus
0%
44%
100%
Pseudomonas aeruginosa
88%
100%
100%
Salmonella choleraesuis
0%
63%
100%
TIEMPO DE EXPOSICIN
3 hr
6 hr
9 hr
Bacillus subtillis
69%
96%
100%
70
En la Tabla N 17, se puede observar la comparacin entre los resultados del porcentaje de
inhibicin del enfrentamiento de las cepas microbianas ante la concentracin del 0.08% del
desinfectante de alto nivel de STERIS, a base de perxido de hidrogeno.
MICROORGANISMOS
PORCENTAJE DE
INHIBICION
TIEMPO DE EXPOSICIN
5 min
10 min
15 min
Staphylococcus aureus
100%
100%
100%
Pseudomonas aeruginosa
100%
100%
100%
Salmonella choleraesuis
100%
100%
100%
TIEMPO DE EXPOSICIN
3 hr
6 hr
9 hr
Bacillus subtillis
100%
100%
100%
En la Tabla N18, se puede observar la comparacin entre los resultados del porcentaje de
inhibicin
MICROORGANISMOS
PORCENTAJE DE
INHIBICION
TIEMPO DE EXPOSICIN
5 min
10 min
15 min
Staphylococcus aureus
100%
100%
100%
Pseudomonas aeruginosa
100%
100%
100%
Salmonella choleraesuis
100%
100%
100%
TIEMPO DE EXPOSICIN
3 hr
6 hr
9 hr
Bacillus subtillis
100%
100%
100%
71
En la Tabla N 19, se puede observar la comparacin entre los resultados del porcentaje de
inhibicin
MICROORGANISMOS
PORCENTAJE DE
INHIBICION
TIEMPO DE EXPOSICIN
5 min
10 min
15 min
Staphylococcus aureus
100%
100%
100%
Pseudomonas aeruginosa
100%
100%
100%
Salmonella choleraesuis
100%
100%
100%
TIEMPO DE EXPOSICIN
3 hr
6 hr
9 hr
Bacillus subtillis
100%
100%
100%
72
Los resultados obtenidos a travs de este ensayo experimental se examinaron por medio de un
anlisis descriptivo a travs de tablas y graficas, donde se observa el comportamiento de cada
microorganismo despus de ser expuesto a cada una de las concentraciones y tiempo
evaluado del desinfectante, de esta forma se estableci la mejor concentracin de
desinfectante que actu frente a cada microorganismo. Para este fin se emplearon las
siguientes hiptesis:
Hiptesis nula (Ho): El porcentaje de inhibicin de las concentraciones evaluadas (0.02%,
0.04%, 0.08%, 1% Y 2%) del desinfectante es mayor o igual al 75%.
Hiptesis alterna (Hi): El porcentaje de inhibicin de las concentraciones evaluadas (0.02%,
0.04%, 0.08%, 1% y 2%) del desinfectante es menor al 75%.
Decisin: Para todo valor de probabilidad igual o menor a 0.05, se acepta la hiptesis
alterna y por ende se rechaza la hiptesis nula, es decir que el porcentaje de inhibicin
no es igual en las tres concentraciones evaluadas del desinfectante, por lo menos una
es diferente.
73
Para el anlisis de resultados fue necesario comprender la naturaleza de los datos que forman
la base de los procedimientos de prueba, para ello se utilizo el programa estadstico
postprogram, ya que este ayuda a determinar la prueba particular que se ha de utilizar.
Los datos obtenidos durante la investigacin, se analizaron estadsticamente mediante la
prueba de MANN-WHITNEY para comparar dos tratamientos y
la prueba de KRUSKAL-
74
Mediante esta investigacin se evalu la eficacia del desinfectante de alto nivel de STERIS a
base de perxido de hidrogeno frente a diferentes cepas de microorganismos; con el objetivo
de verificar su actividad en el sector hospitalario, para esto se prepararon una serie de 5
concentraciones del desinfectante en estudio de la siguiente manera: concentracin de 0.02%,
0.04%, 0.08%, 1% y 2%; los tiempos de contacto probados fueron 5, 10 y 15 minutos.
Staphylococcus aureus
Los ensayos realizados para determinar la eficacia del desinfectante de alto nivel de STERIS a
base de perxido de hidrogeno ante Staphylococcus aureus se muestran en la tabla N 11 en
los cuales se demostr que el desinfectante con un tiempo de contacto de 5, 10 y 15 minutos a
una concentracin del 0.02%, no tiene accin bactericida por encima del criterio mnimo de
aceptacin establecido 75%, para este microorganismo.
Al analizar los datos empleando la concentracin de 0.04%, se observo un aumento en el
porcentaje de inhibicin, el cual tampoco cumple con el criterio mnimo de aceptacin 75% en
un tiempo de exposicin de 5 minutos. Sin embargo, al probar la concentracin de 0.08%, se
alcanzo un porcentaje de inhibicin del 100% para los tres tiempos establecidos.
A los 10 minutos de exposicin con la concentracin del 0.02%, Staphylococcus aureus no
presento un aumento en el porcentaje de inhibicin, mientras que al probar la concentracin de
0.04% se obtuvo un porcentaje de inhibicin del 43.75% y con una concentracin de 0.08%,
se evidencio una inhibicin total del crecimiento. Mientras que a los 15 minutos de contacto
con el desinfectante se observo un aumento del 100% en el porcentaje de inhibicin con la
concentracin de 0.04%, de igual forma con una concentracin del 0.08%.
Como se muestra en la figura 1, la poblacin bacteriana se reduce en su totalidad, alcanzando
un porcentaje de inhibicin del 100%, despus de 5 minutos de tratamiento con el
desinfectante del alto nivel de STERIS a base de perxido de hidrogeno, cuando se emplearon
la mitad de la concentracin 1% y la concentracin recomendada por la casa comercial (2%).
Estos datos nos comprueban que la destruccin parcial o total de Staphylococcus aureus al
ponerlo en contacto con el desinfectante en estudio, esta determinado por la concentracin del
desinfectante y por el tiempo de exposicin.
75
Pseudomonas aeruginosa
concentraciones al 0.08%,
76
Salmonella choleraesuis
Los resultados del porcentaje de inhibicin del desinfectante de alto nivel de STERIS frente a
Salmonella choleraesuis se pueden observar en la tabla N 13 y en la figura 3, en donde se
observa que a una concentracin de 0.02%, en un tiempo de contacto entre 5 y 10 minutos, el
desinfectante no tiene ningn efecto inhibitorio frente a este microorganismo. Aunque una
concentracin del 0.04% presenta un incremento en el porcentaje de inhibicin, esta no cumple
con el criterio mnimo de aceptacin del 75% para un tiempo establecido entre los 5 y 10
minutos, puesto que se obtuvo un porcentaje de inhibicin de 0 y 63% respectivamente. Sin
embargo, se registro una reduccin total, es decir del 100% cuando se emplearon
concentraciones de 0.08 %, 1% y 2%.
A los 15 minutos de contacto del microorganismo con el desinfectante, se observo un aumento
en el porcentaje de inhibicin del 42.15% con la concentracin de 0.02%, ver figura 3. Al
emplear la concentracin 0.04% y la concentracin de 0.08%, se obtiene un porcentaje de
inhibicin del 100%.
La figura 3. muestra los valores promedios de la inhibicin del desinfectante ante Salmonella
choleraesuis, expresados en porcentaje, en los cuales se observa que la poblacin bacteriana
se reduce en su totalidad alcanzando un promedio de inhibicin del 100% cuando se emplea
77
mediante los cuales pueden eludir la accin de los agentes antimicrobianos como por ejemplo;
pueden modificar la membrana celular, hacindola menos permeable a los antimicrobianos,
presentan enzimas especificas que modifican o inactivan los antimicrobianos; adems, la
resistencia puede deberse a la accin de una bomba de flujo o modificaciones de la pared
celular. (Martnez, 2007)
Bacillus subtilis
Tal como se puede visualizar en la tabla N 11 y en la figura 4, con estos resultados podemos
decir que cuando se emplea
una
concentracin
microorganismos Bacillus subtilis, se alcanza una reduccin en al poblacin del 50% para un
tiempo de contacto entre 3 y 6 horas y una reduccin del 87% para las 9 horas.
Al analizar los datos empleando una concentracin de 0.04%, se consigui un aumento en el
porcentaje de inhibicin del 68% a las 3 horas, 96 % a las 6 horas y 100% para 9 horas. El
desinfectante es eficaz en un 100% cuando se emplea una concentracin de 0.08%, para los
tres tiempos establecidos en la prueba.
Del anlisis de los resultados obtenidos (ver figura 4) con la mitad de la concentracin 1% y la
concentracin recomendada 2%, podemos decir que el desinfectante de alto nivel de STERIS a
base de perxido de hidrogeno, posee un alto poder esporicida a las 3 horas de exposicin,
puesto que logro una disminucin absoluta de poblacin bacteriana para este microorganismo.
Para este microorganismo en particular se establecieron diferentes tiempos de contacto con el
desinfectante, en este caso fueron 3, 6 y 9 horas, ya que esta especie tiene la capacidad de
formar esporas como estructuras de resistencia y al aumentar el tiempo de exposicin frente a
las diferentes concentraciones, el desinfectante puede ejercer su accin contra las esporas
impidiendo la formacin del cortex entre la membrana interna y la externa antes de la
maduracin de la espora. (Morales, 2007).
La resistencia de Bacillus subtilis, a los desinfectantes se atribuye a que los microorganismos
esporuldos forman una barrera a la entrada de los agentes antimicrobianos, ya que las
membranas que rodean el ncleo de la endospora acta como factor adicional al limitar la
penetracin del agente qumico. (Henao, 2008).
78
Los resultados obtenidos en este estudio, para cada microorganismos demuestran que el
efecto inhibitorio del desinfectante esta influenciado directamente por en tiempo de exposicin,
para este caso se recomienda usar el desinfectante de alto nivel de STERIS a base de
perxido de hidrogeno una
producto al 2%.
Cuando se establece una comparacin entra las bacterias vegetativas (Pseudomonas
aeruginosa, Salmonella choleraesuis y Staphylococcus aureus), ver tabla 15 a 19. La mayor
reduccin del crecimiento microbiano se presento en la cepa de P. aeruginosa, la cual alcanzo
un porcentaje de inhibicin del 87.5% cuando se someti a una concentracin del desinfectante
de 0.04% con un tiempo de exposicin de 5 minutos. En tanto que la menor reduccin se
observo con la cepa de S. aureus, en la cual a los 10 minutos de exposicin la poblacin
disminuye has el 43.75%. Por otro lado, la cepa esporulada B. subtilis presento una
disminucin del crecimiento de 68.7% para las primeras tres horas de exposicin al
desinfectante, a una concentracin de 0.04%.
La reduccin de la poblacin en promedio fue del 100% para las concentraciones de 0.08%,
1% y 2%. Tomando como base lo anterior, podemos decir que el desinfectante de alto nivel de
STERIS a base de perxido de hidrogeno es efectivo en un 100% cuando se emplea la
concentracin recomendada por la casa comercial (2%) en el menor tiempo de exposicin; de
igual manera podemos establecer que la Concentracin mnima Inhibitoria, es decir la menor
79
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027; Mehmi (2006), utilizo Bacillus subtilis ATCC
6633, las mismas cepas utilizadas para este estudio. Quienes reportan resultados 100%
satisfactorios para cada microorganismos cuando usaron productos con una concentracin de
perxido de hidrogeno mayor al 3%.
80
13. CONCLUSIONES
Segn los datos obtenidos se puede determinar que la mejor concentracin para el
empleo del desinfectante e alto nivel de STERIS a base de perxido de hidrogeno es la
del 2%.
Segn los resultados obtenidos en este estudio, podemos decir que la mnima
concentracin de efectividad del desinfectante ensayado es de 0.08% y que empleada
concentraciones menores no se garantiza la destruccin total de los microorganismos.
81
14. RECOMENDACIONES
Se recomienda realizar un numero mayor de replicas para cada estudio con el fin de
pode realizar anlisis estadsticos mas profundos.
Se recomienda evaluar distintos lotes del desinfectante de alto nivel de STERIS, con el
fin de verificar que todos cumplan con las mismas caractersticas y criterios de
evaluacin.
82
Actividad a Desarrollar
Enero
Febrero
Marzo
Abrir
Mayo
Junio
Pruebas Microbiolgicas
Entrega de Trabajo Final
Julio
Sustentacin de Tesis
16. PRESUPUESTO
El material de vidrio necesario para llevar a cabo esta investigacin, fue proporcionado por la
Pontificia Universidad Javeriana y los medios de cultivos empleados para la misma, fueron
suministrados por la doctora Gretty Tarazona directora del proyecto y representante en
Colombia de la Casa Comercial STERIS.
83
La resistencia de bacterias a
Bogota D.C. 78 p.
84
GUIA TECNICA COLOMBIANA GTC 85. 2003. Gua de Limpieza y Desinfeccin para
Plantas de Alimentos. Instituto Colombiano de Normas Tcnicas (ICONTEC). 38 p.
Ho-Hyuk Jang, H. Ann, S. Kim, M. y Kim, CH. 2007. Use of hydrogen peroxide as an
effective disinfectant to Actinobacillus ureae. Process Biochemistry.
MIGNARD, P.J. 2006. Desenfectin des endoscopes. Annales d urologie 40: 591-593.
85
RODRGUEZ, R.
CASTELLANOS, V.
Rev
QUIEROZ, G. A.
contaminated surface materials with a sodium hypochlorite and a hydrogen peroxidebased sanitizer. Journal of Applied Microbiology
QUIEROZ, G. A.
86
VIROX TECHNOLOGIES INC. 2007 Accelerated Stability Study (40C) Report Modified
AHLD5 Formula. Bristol Circle Unit 4. 3p.
Recursos Electrnicos
Investigacion
original.
gtip.uab.es/Apuntsmicro/Limpieza_desinfeccion_y_esterilizacio.
10
Dic.
2007].
Limpieza
desinfeccin
del
material
hospitalario.
www.
87
88