Introduccin

Dentro del campo de la clnica veterinaria, es frecuente analizar la concentracin

espermtica, importante al momento de realizar fecundaciones. Para calcular esta
concentracin a nivel microscpico, se utilizan diferentes tcnicas, entre las que podemos
mencionar, Cmara de Neubauer y la Turbidimetra.
Lo primero que se lleva cabo es la evaluacin en forma macroscpica de la muestra de
semen. En esta etapa se observa su volumen, color, densidad, pH, olor, presencia de
cuerpos extraos y temperatura. Luego, a travs de las tcnicas mencionadas
previamente, se obtiene el porcentaje de espermatozoides vivos, su concentracin,
movilidad, morfologa e integridad y funcionalidad de su membrana celular.
Para evaluar la fertilidad de la muestra, no se puede tomar los resultados de ninguna de
las pruebas por separado, sino, que son necesarios los datos aportados por todas ellas.
Sin embargo, la concentracin de espermatozoides es la que indicar cuantas dosis de
inseminacin artificial puedo obtener, ya que a una mayor concentracin, mayor ser la
cantidad de dosis.
Como mencionamos antes, lo mtodos ms utilizados para medir la concentracin
espermtica son la Cmara de Neubauer y la Turbidimetra. La primera consiste en un
recipiente al cual le cargaremos un volumen predeterminado de lquido, el mismo se
encuentra subdividido por lneas horizontales y verticales, quedando marcados varios
campos. As, al observar estos campos con un microscopio, es sencillo realizar el
recuento celular. La ventaja de este dispositivo, es que estandariza el volumen utilizado,
siendo siempre el mismo. Por lgica, la cantidad de espermatozoides que se cuenten, se
encontrarn en este volumen ya conocido y se podr extrapolar el resultado obtenido al
volumen de la muestra real. Se conocen como datos, el largo del lado del campo que se
utilizar para contar los espermatozoides, como tambin se conoce la altura de la cmara,
los mismos son aportados por el fabricante de la cmara.
Al realizar esta prueba, para el semen de los porcinos, se utilizan solo 5 campos de los
que se mencionaron previamente, por lo que se debe calcular el volumen de lquido
contenido por estos 5 campos, aplicando la frmula:
LxLxH
Siendo L, el largo del lado del campo y H la altura del mismo.
El valor obtenido corresponder al volumen de uno de los campos, este resultado debe
ser multiplicado por 5 y as se obtiene el volumen total sobre el que se contaron los
espermatozoides.

La cantidad de cuadrados que se cuentan depende de la especie, por ejemplo, en el caso

de los camlidos, es muy difcil homogeneizar la suspensin, por lo que se cuentan todos
los cuadrados de la cmara.
No debemos dejar de mencionar que los 5 campos que se seleccionen para realizar la
lectura no deben compartir ninguno de sus lados, as se evita el riesgo de contar dos
veces el mismo espermatozoide. Tambin se debe aclarar, que no se cuenta todo el
espermatozoide, sino slo sus cabezas. Para realizar el conteo solo se consideran 2 de
los cuatro lados del cuadrado, los espermatozoides que caigan sobre los dos lmites no
seleccionados, no debern ser contados. A su vez, los bordes estn delimitados por tres
lneas, solo se contarn los espermatozoides que caigan sobre la lnea interna, en los
bordes seleccionados.
Es importante aclarar que las muestras utilizadas, siempre son diluidas previamente. Por
lo tanto se debe relacionar el valor encontrado con el factor de dilucin empleado, siendo
un dato conocido por el operador, ya que es l quien realiza la dilucin.
En cuanto a la segunda tcnica, la Turbidimetria, se utilizar un Fotocolormetro o un
Espectofotmetro. Se toman muestras de concentracin conocida y se mide su absorcin
para realizar la curva de calibracin (en un grfico concentracin versus absorcin), se
mide la absorcin de la sustancia incgnita y se obtiene su concentracin mediante el
grafico.
La diferencia radica en el comportamiento de los espermatozoides al ser colocados en el
diluyente, como son partculas de gran tamao no se encuentran disueltos, sino
suspendidos, formando una suspensin coloidal.
El haz que emite el equipo es dispersado, al refractarse y reflejarse la luz contra la
superficie de los espermatozoides, como consecuencia, la intensidad que emerge decrece
al pasar por la suspensin. El equipo transmite la informacin de rayo insidente como
absorbancia, y as se puede calcular la concentracin de la solucin incgnita.
El blanco utilizado en este caso es una solucin salina formolada. Se utiliza la solucin
salina (0,9 %) para que sea isotnica con los espermatozoides y no produzca ningn tipo
de cambio en la estructura de los mismos (no se deshidraten o hinchen hasta romper su
membrana) y el formol para que los espermatozoides mueran, no se muevan, pero
mantengan su forma y se fijen las protenas de la membrana.
Otro mtodo de medicin es la Nefelometria, mediante el cual el aparato mide la luz
dispersada.
En todos estos mtodos es importante la homogenizacin de la muestra antes de la
medicin, para conseguir que los espermatozoides se resuspendan y evitar una lectura
errnea de la absorbancia.

Objetivo
En este trabajo prctico se determinar la concentracin de una muestra de semen
porcino mediante la Cmara de Neubauer y Turbidimetria, utilizando un Fotocolorimetro.

Materiales
Los materiales utilizados fueron, un Fotocolormetro, 2 cubetas, una cmara de Neubauer,
4 diluciones de semen de cerdo (una con concentracin desconocida), solucin salina
formolada, 2 pipetas, microscopio y guantes.

Mtodo
Para comenzar, se realiza la disolucin de la muestra. Se liberal la misma por capilaridad
sobre la placa de la cmara de Neubauer.
Se seleccionan los 5 cuadrados y los bordes que consideramos (en este caso, superior y
lateral izquierdo)y, utilizando un microscopio se procede a contabilizar los
espermatozoides.
Se suma la cantidad de espermatozoides contados en cada cuadrado y se calcula el
volumen total de todos los cuadrados. El volumen en cada uno se obtiene mediante la
frmula L x L x H y luego se multiplica por cinco, que es la cantidad de cuadrados
considerados.
La cantidad de espermatozoides total en el volumen considerado se extrapola a la
concentracin real de la muestra, utilizando la regla de tres simple.
Al medir la concentracin por turbidimetria, en este caso se utilizar un fotocolormetro.
Se toma el blanco (solucin salina formolada) y se calibra el aparato a cero. Luego, se
toma una muestra de concentracin conocida, se homogeniza por inversin, y se coloca
dentro del fotocolormetro, el mismo mide su absorbancia.
Se vuelve a calibrar el aparato a cero, utilizando el mismo blanco y se repite el
procedimiento con las otras dos muestras de concentracin conocida.
Una vez obtenidas las tres absorbancias se realiza la curva de calibracin. Cabe destacar
que la misma es especie especfica, esto quiere decir, que solo servir para el semen
de chancho, si se quiere utilizar para otra especie, el dato ser errneo, ya que no todas
tienen la misma cantidad de espermatozoides ,por lo que la dilucin se debe adecuar a
cada especie, as como el blanco utilizado.

Una vez hecha la curva, se toma la absorbancia de la solucin incgnita, siguiendo el

mismo procedimiento que se ha llevado a cabo con las de solucin conocida .Con el dato
de la absorbancia, se ingresa al cuadro y se observa la concentracin correspondiente.

Resultados
A partir de la curva de calibracin, podemos ver que el resultado obtenido es: 24.000.000
espermatozoides por mililitro.
La misma se realiz con los datos obtenidos a travs del Fotocolormetro.

Cmara de Neubauer

Cuadrado 1: 8 espermatozoides.
Cuadrado 2: 8 espermatozoides.
Cuadrado 3: 11 espermatozoides.
Cuadrado 4: 12 espermatozoides.
Cuadrado 5: 14 espermatozoides.

Cantidad de espermatozoides total: 53.

Volumen en un cuadrado:
L x L x H: 0,02 cm x 0,02 cm x 0,01 cm = 0,000004 centmetro cbicos.
Volumen en 5 cuadrados:
0,000004 x 5 = 0,00002 centmetros cbicos.
La dilucin de rutina es 1/200, en consecuencia, el volumen total medido se divide por
doscientos para encontrar el volumen real de semen analizado
0,00002 cm cbicos = 0,0000001 centmetros cbicos.
200
0,0000001 centmetros cbicos

53 Espermatozoides

1 centmetro cbico

530.000.000 Espermatozoides.

Concentracin espermtica de la muestra: 530.000.000 Espermatozoides por centmetro

cbico.

Discusin
A lo largo del trabajo prctico se estim la concentracin de espermatozoides.
En cuanto a la utilizacin de la Cmara de Neubauer, al cual solo tuvimos acceso a travs
de imagines sacadas previamente, podemos decir que el recuento de espermatozoides de
los diversos grupos puede haber diferido, producto de los diferentes modos de
contabilizarlos, es decir algunos grupos pueden haber contado las cabezas de las clulas
que se encontraban en el margen superior y derecho, otros pueden haber tomado el
derecho y el de abajo, etc. Por esta razn es probable que los diferentes grupos hayan
alcanzado diversos resultados, no producto de un error de conteo sino de diferencia de
mtodo utilizado. Sin embargo, probablemente la cantidad de espermatozoides final es
igual o muy similar. A lo largo de la experiencia de la utilizacin de la cmara se pueden
haber cometido diversos errores, entre los que encontramos error de conteo o que al
momento de poner la muestra en la cmara no se encontraba homogeneizada
apropiadamente.
En el caso de la Turbidimetria, los errores que se pueden haber cometido son en el
momento de realizar la dilucin o a la hora de calibrar el fotocolormetro con el blanco.
Si comparamos ambos resultados, hay una gran diferencia en la concentracin de las
muestras, por lo que podemos intuir que la que tiene ms concentracin pertenece a un
animal ms joven que la que observamos un menor recuento.
Ambas muestras son aproximadas, ya que con la Cmara de Neubauer no se cuentan
todos los espermatozoides, en el caso del porcino, sino que solo contabilizamos los cinco
cuadrados seleccionados previamente y que vamos a utilizar en posibles muetras futuras.
Al medirlo con el Fotocolormetro, el error en el clculo puede estar relacionado con un
problema en la membrana del espermatozoide.

Conclusin

Durante la experiencia se pudo calcular la concentracin espermtica del semen de cerdo

a travs de la Cmara de Neubauer y Turbidimetra, en la primera se calcul un valor
aproximado de 530.000.000 Z/cm3, mientras que con el fotocolormetro, y la utilizacin del
grafico se alcanz un valor de 24000000 Z/ml.