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Les systmes endocannabinode

et endovanillode
Ces systmes sont constitus par des messagers lipidiques drivs de lacide arachidonique librs par
lactivation neuronale et des rcepteurs de ces messagers: les rcepteurs cannabinodes CB1 et CB2 et les
rcepteurs-canaux TRPV1.
Ils rgulent la transmission synaptique glutamatergique et GABAergique.
Utilisation de ces systmes dans un but thrapeutique ?

Historique de la dcouverte des endocannabinodes

Le 9THC (Cannabis Sativa) est utilis depuis longtemps pour ses effets
anxiolytiques, hypnotiques, analgsiques, euphorisants et orexignes. Il peut induire
lhypothermie, lhypolocomotion, lamnsie, la catalepsie.
Identification du 9THC comme l lment psychoactif de Cannabis Sativa (phytoCB)
en 1964-synthse de cannabinomimtiques.
Clonage du rcepteur CB1 et identification du 9THC comme ligand en 1990.
Clonage du rcepteur CB2 en 1993.
Dcouverte dun ligand endogne des CB1 le N-arachidonyethanolamide
anandamide (de ananda, bonheur suprme en sanskrit) en 1992.
Dcouverte du 2-acyl-glycrol (2-AG) en 1995.
Mise en vidence du rle prsynaptique inhibiteur des rcepteurs CB1 en 1996.
Clonage des rcepteurs TRPV1 en 1997.
Obtention danimaux transgniques dficients en CB1 en 1999.
Dcouverte de lactivation physiologique des CB1 en 2001: phnomnes de DSE et
DSI.
Dveloppement dagents thrapeutiques interagissant avec le systme
endocannabinode.

Le 9 THC et cannabinomimtiques : on notera le caractre trs lipophiles de


ces molcules.

Il sest coul un temps relativement long entre lidentification du THC comme compos psychotrope et la
caractrisation de ses rcepteurs. Ceci tient la nature trs lipophile de cette molcule. On pensait que
contrairement aux agents morphiniques, le THC exerait ses effets par une action uniquement
membranaire.

Le rcepteur CB1 est un RCPG essentiellement coupl Gi et localis au niveau prsynaptique Possibilit
dhtrodimrisation (avec D2).
Toxine pertussique (PTX)

Gi

Inhibition de ladnylate cyclase


Inhibition de canaux calciques
dpendants du voltage
Activation de canaux potassiques
dpendants du voltage

Gq

Activation de PLC : IP3 / Ca2+

Activation de la voie des


MAPkinases (G ?)

Le rcepteur CB2 est coupl aux mmes voies de transduction surtout exprim par les cellules
immunitaires en priphrie (effet anti-inflammatoire, antispasmodique). Il prsente 44% dhomologie avec
CB1

Les rcepteurs CB1 sont exprims


partout dans le SNC mais surtout
dans lhippocampe le striatum et le
cervelet. Ce sont les RCPG les plus
exprims dans le SNC.
Il y a une forte corrlation entre la
distribution des rcepteurs CB1 et
les effets psychotropes des
cannabinodes (ex: effet amnsiant
expression hippocampique).
Les rcepteurs CB1 sont aussi
prsents sur les organes
priphriques (CB1
priphriques), mme si
beaucoup moins concentrs que
les CB1 centraux.

A la recherche de ligands endognes pour les rcepteurs CB1, les


endocannabonodes (eCB)

Plusieurs travaux avaient montr que laugmentation de Ca2+ dans les neurones par le
ionophore calcique ou suite une dpolarisation pouvait librer un messager capable
de dplacer la liaison du CP-55940.

Par la suite, lanandamide fut isol aprs solubilisation de membranes neuronales et


chromatographie en supposant que comme le ligand de CB1 (THC) est
particulirement hydrophobe, son ligand endogne de ce rcepteur devait avoir une
proprit similaire. Lanadamide (AEA) est un driv de lacide arachidonique qui se
fixe sur les rcepteurs CB1.

Le 2-arachidonoyl-glycrol (2-AG) fut ensuite dcouvert: cest aussi un driv de


lacide arachidonique. Il est en gnral plus concentr que lAEA.

Le 2-AG et lAEA ont des proprits pharmacologiques spcifiques: le 2-AG est un


agoniste CB1 (agoniste total) et CB2, alors que lAEA est un agoniste partiel CB1 et
agoniste TRPV1.

Dautres drivs de lacide arachidonique ont un effet endocannabinode.

Biosynthse des endocannabinodes


Les eCB sont le rsultat dune biosynthse non oxydative, spcifique chacun deux et qui met en jeu plusieurs enzymes. Les substrats
de ces biosynthses sont des phopholipides membranaires.
1-La biosynthse du 2-AG dbute partir du PIP2 par laction de la PLC qui produit du diacyl-glycrol (DAG). Le DAG est ensuite
transform en 2-AG par action de la diglycrol-lipase a (DGLa). Le 2-AG est ensuite dgrad par la mono-acyl glycrol lipase (MGL). Il
peut, comme lacide arachidonique, subir un mtabolisme oxydatif (cyclooxygnase 2 (COX-2), lipooxygnase (LOX)) pour donner des
prostaglandines. Certaines prostaglandines (PG) ont une action sur les rcepteurs CB1.

ABDH6 = / hydrolase domain containing protein 6

2-La biosynthse de lAEA peut se faire par plusieurs voies. Elle dbute partir du N-arachidonoyl-phosphatidyl-thanolamine (NAPE). Le
NAPE peut tre hydrolys par laction de la phospholipase D pour donner lanandamide (AEA). Dautres voies faisant intervenir une
hydrolase (ABHD-4) et une PLC peuvent aussi conduire la production danandamide. Lanandamide est ensuite hydrolys par la FAAH
(Fatty Acid Amide Hydrolase)

Spcificits de la dgradation des eCB


Chaque eCB possde son propre systme de dgradation avec une localisation spcifique:
-la FAAH pour lanandamide au niveau postsynaptique;
-la MAGL (ou MGL) pour le 2-AG au niveau prsynaptique.

Les eCB sont synthtiss au niveau postsynaptique et sortent du


neurone de manire passive. Ils agissent au niveau des rcepteurs CB1
prsynaptiques. Ils sont ensuite recapturs dans les neurones par des
transporteurs avant dtre dgrads (voir diapo suivante).
La biosynthse dun eCB peut inhiber la biosynthse de lautre.
Les eCB ne sont pas tous impliqus de la manire dans les
phnomnes physiologiques.

Neurone
prsynaptique

Neurone
postsynaptique

Lanandamide (et le 2-AG) est transport dans le neurone avant sa dgradation par la FAAH. Des bloqueurs slectifs du transporteur
(AM404) et de la FAAH (URB597) ont pu tre synthtiss. Ces molcules vont permettre daugmenter la demi-vie des eCB et donc leur
action synaptique.

Inhibiteur de transport danandamide

Inhibiteur de la FAAH

Les molcules WIN55212-2 et AM251 sont utilises pour la recherche sur lactivit des rcepteurs CB1, ainsi que
le CP55940 (agoniste).

Mise en vidence du rle modulateur de la transmission synaptique par des rcepteurs CB1 prsynaptiques
(1996):

Cultures de neurones exposes un milieu sans magnsium externe et mesure de calcium intracellulaire: hyperactivation des rcepteurs NMDA et augmentation de la libration de glutamate. Il apparat des signaux calciques
dus lactivation des rcepteurs AMPA et NMDA par le glutamate libr synaptiquement. Le WIN55212-2 bloque
compltement cette activit de manire dpendante de la PTX.

Les effets du WIN55212-2 sont mims par lanandamide et dautres cannabinomimtiques. Le WIN55212-3 est un
nantiomre inactif du WIN55212-2.

GLU

KA

CB1
GLU

Effet sur la transmission synaptique voque: effet prsynaptique des rcepteurs CB1.

Les rcepteurs CB1 dsensibilisent trs vite: ici une application de 24h dun agoniste total bloque les effets de cet
agoniste. Les CB1 peuvent induire des phnomnes de dsensibilisation croise avec dautres rcepteurs
prsynaptiques (A1 de ladnosine).

La dsensibilisation met en jeu la protine GRK2 et larrestine

GLU

GLU

Injection de GRK2 mute


Linjection de GRK2 mute empche la dsensibilisation des rcepteurs CB1

Le THC exerce des effets agonistes partiels sur les rcepteurs CB1 par rapport au WIN55212-2 : effet
antagoniste du THC.

Leffet inhibiteur des agonistes CB1 est aussi dtectable sur la


transmission synaptique spontane: ici laction du 2-AG et son blocage
par le AM251.

GLU

Lactivation des rcepteurs CB1 inhibe la transmission synaptique GABAergique (SR pour SR141716, le
Rimonabant).

Chez les souris CB1-/- leffet du WIN55212-2 persiste sur la transmission synaptique excitatrice. Prsence dun
rcepteur CB3 ?

Mcanisme daction physiologique des endocannabinodes: phnomnes de suppression de


transmission-excitatrice ou inhibitrice-par dpolarisation (DSE, DSI).

GLU

GLU

La DSE (ou DSI) un phnomne de dpression synaptique transitoire obtenu aprs dpolarisation du neurone postsynaptique.
On lobserve au niveau des synapses excitatrices (DSE) et inhibitrices (DSI). Ce phnomne met en jeu une libration
dendocannabinodes (voir diapo suivante).

Phnomne de suppression de linhibition (ou de lexcitation) par dpolarisation (DSI ou DSE) : ce phnomne met en jeu
la synthse dendocannabinodes et leur action sur les rcepteurs CB1. Il sobserve au niveau des synapses excitatrices
(DSE) et inhibitrices (DSI). Pour le mettre en vidence il suffit de dpolariser un neurone postsynaptique : cela conduit
une inhibition transitoire de la transmission synaptique.

La DSI et DSE s observent aussi sur lactivit spontane aprs dpolarisation post-synaptique.

Glutamate
GABA

eCB

Glutamate

eCB

mGlu1/5
eCB

eCB

+
Ca2+

+
Ca2+

Dpolarisation

Dpolarisation

En absence des rcepteurs cannabinodes, la plasticit synaptique est augmente apprentissages


restent en mmoire plus longtemps (discrimination visuelle).

CB1 et anxit
Bras ouverts

Bras ferms

Anxit augmente chez les souris CB1-/- (test elevated


plus maze)

Anxit diminue chez les souris FAAH-/- (test elevated


plus maze)

Anxit diminue par blocage de la FAAH par le URB597


(test elevated plus maze) .

Effet anti-dpresseur du AM404 et URB597 (test de nage force).

Mesure de leffet anti dpresseur du URB597. Le modle


utilis est celui dun stress chronique lger (Chronic Mild
Stress) sur plusieurs semaines (5). On mesure le poids
corporel (Body Weight) et la consommation de sucrose
(Absolute Sucrose Intake & Relative Sucrose Intake) [test
danhdonie].

La consommation de sucrose (ASI) est mesure aprs


2 semaines (graphe de gauche) et de 3 semaines de
CMS (graphe de droite) en prsence de doses
croissantes de URB597 (mg.kg-1) ou dimipramine
(20mg.kg-1) un anti-dpresseur de rfrence. On
observe une reprise de la consommation de sucrose
dpendante de la dose de URB 597 injecte.

Test de la plaque chaude

Activit locomotrice

Auto-administration de Morphine

Utilisation de la souris CB1-/- (1999)


pour tester les rponses au THC et les
interactions entre rcepteurs CB1 et
morphiniques.

Glu-CB1-/- et GABA-CB1-/-

Temprature corporelle

Auto-administration de WIN55212-2

Diminution de lhyper-locomotion induite par le MDMA chez les CB1-/-

Diminution de lanxit induite par le MDMA chez les CB1-/-

Pas de modification de la stimulation de la libration de


dopamine par le MDMA

Diminution de lauto-administration de MDMA chez les CB1-/-

Modulation des rponses associes la prise aigu ou


chronique decstasy (MDMA) par les CB1

Effet anorexigne du Rimonabant

La stimulation des CB1 avec le WIN55212-2 (R+) protge des dgts induits par lischmie in vivo et in
vitro. [(S-) : nantiomre inactif du WIN55212-2; SR: Rimonabant]
Effets controverss !

Effet neuroprotecteur des agonistes CB1: implication des rcepteurs CB1 et/ou de leur pouvoir antioxydant ?
Exemple sur un modle de la maladie de Parkinson (6-OH-Dopamine)

Une modulation du systme endocannabinode pourrait tre intressante dun


point de vue thrapeutique par stimulation des rcepteurs CB1 ou par
renforcement des eCB (AM404, URB597) pour les effets suivants :
-Effet analgsique (divers modles dont les douleurs neuropathiques);
-Effet anxiolytique;
-Effet anti-dpresseur;
-Effet orexigne;
-Effet neuroprotecteur.
Toutefois, une activation du systme endocannabinode peut tre associe
plusieurs effets secondaires (systme cardio-vasculaire, effet psychotrope).