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Cristina Riquelme1,
Antnio Louvado1,2
e Maria de Lurdes Enes
Dapkevicius1
mariaenes@uac.pt
1 CITA-A, Departamento de Cincias Agrrias
Universidade dos Aores
2 CESAM, Departamento de Biologia
Universidade de Aveiro
Resumo
Os metabolitos secundrios das bactrias so uma importante fonte de
produtos naturais dotados de efeitos considerveis sobre a sade, nutrio e
economia das sociedades humanas. Estes compostos abrangem produtos
com utilidade e elevado valor econmico, que desempenham papis importantes e tm actividades biolgicas de relevo para a medicina e agricultura.
Os microrganismos dos ambientes extremos so especialmente valiosos
enquanto reservatrios de novos compostos bioactivos, uma vez que nestes
locais intocados se promove a existncia dum potencial gentico modelado
pela seleco natural s condies extremas prevalecentes, desenvolvendo
capacidades metablicas nicas. As tcnicas genmicas facilitam a triagem
de metabolitos bacterianos secundrios para a pesquisa de compostos com
interesse, como novas enzimas e antibiticos. Estes compostos tm um
relevo cada vez maior com agudizar de os problemas da resistncia
bacteriana e da necessidade de reduzir o impacto ambiental sem sacrificar o
desenvolvimento tecnolgico. As indstrias agroqumicas necessitam de
novos biocatalisadores que lhes permitam reduzir a concentrao de
compostos antinutricionais e melhorar a digestibilidade nos alimentos
compostos para animais atravs da adio de enzimas (pectinases,
quitinases e amilases) que permitam a metabolizao completa dos
compostos resistentes digesto. H uma clara necessidade de coordenar
desenvolvimento tecnolgico e sustentabilidade, um termo que abrange a
necessidade de reduzir o nosso impacto ambiental e lidera os esforos de
conservao ambiental. Os microrganismos que formam tapetes em grutas
lvicas e noutros ambientes extremos tm um enorme valor, at agora praticamente inexplorado, enquanto fontes de novos compostos bioactivos para
variados fins biotecnolgicos.
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Abstract
Bacterial secondary metabolites are a rich source of natural
products with major effect on the health, nutrition and
economics of our society. Microbial secondary metabolites
include an enormous range of useful high value products
playing important roles in medically and agriculturally relevant
biological activities. Microorganisms in extreme environments
are especially valuable as reservoirs of new bioactive
compounds for different biotechnological applications since
such pristine locations promote the existence of genes shaped
by natural selection under harsh conditions, developing
metabolic capabilities found nowhere else. Genomic
techniques facilitate the screening of bacterial secondary
metabolites of interest such as novel enzymes and antibiotics.
These compounds are gaining relevance because of two
INTRODUO
A biotecnologia microbiana refere-se ao uso de microorganismos ou sistemas bioqumicos deles procedentes em
processos de produo de bens ou de prestao de servios.
Trata-se de uma rea muito extensa que encontra aplicao
numa ampla gama de segmentos industriais (Fig. 1). Os
principais produtos da biotecnologia so produtos da
indstria farmacutica (antibiticos, hormonas, vacinas,
antifngicos, antivirais, antitumorais e imuno-supressores), da
indstria de alimentos humanos e raes (aminocidos, flavorizantes, polissacardeos e gomas xantana) e da indstria
qumica (etanol, acetona, butanol, glicerol, cido lctico, cido
ctrico, polisteres, inseticidas microbianos, algicidas).
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METODOLOGIA
A metodologia a empregar encontra-se resumida na Fig. 3.
Fig. 2_ Principais intervenientes biotecnolgicos na
implementao de novos negcios.
Adaptado de Ausbiotech, 2006 (2)
Fig. 3_ Principais etapas da metodologia para a pesquisa de compostos com potenciais aplicaes industriais a partir
de ambientes extremos dos Aores.
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Caracterizao do Habitat
O nosso objetivo a obteno de amostras com alto nvel de
diversidade gentica que abranjam o maior nmero de filotipos com propriedades bioativas j descritas e txons
bacterianos promissores (pouco explorados, particularmente
prolficos como produtores de produtos naturais). Com base
nos nossos resultados anteriores sobre a diversidade microbiana em tubos de lava nas ilhas Terceira e Pico, foram
selecionados pontos de amostragem.
Nas Furnas de Enxofre, devido falta de dados taxonmicos,
o esforo de amostragem foi guiado por diversos indicadores
de condies especficas fsicas, qumicas, bem como pela
distribuio floral.
Uma vez escolhidos os pontos de amostragem, as culturas da
nossa coleo de bactrias destes ambientes, armazenadas a
- 80C, foram revificadas em meio lquido de Nitrate Broth
(NtB, Fluka Analytical, 72548, Sua) e incubadas a uma
temperatura prxima do habitat natural. Posteriormente os
isolados foram cultivados em meio slido R2A (R2A, AES
Laboratoire, AEB153482, Frana, diludo para meia concentrao) e Nutrient Agar (NA, Biokar Diagnostics, BK185HA,
Frana). O meio R2A foi utilizado por ser um meio baixo em
nutrientes, assemelhando-se desta forma ao ambiente
oligotrfico caracterstico das grutas.
Rastreio de microorganismos
com actividade antimicrobiana
contra microrganismos indicadores
relacionados com a sade humana
A pesquisa de actividade antimicrobiana em culturas bacterianas foi efetuada recorrendo a oito microrganismos indicadores, por meio de dois mtodos semi-quantitativos, o ensaio
de inoculao cruzada e o ensaio de difuso em agar. Os
microrganismos indicadores foram obtidos de coleces
ATCC (American Type Culture Collection, Rockille, MD)
fornecidos pelo Servio Desenvolvimento Agrrio da Ilha
Terceira (Salmonella typhimurium ATCC 14028, Escherichia
coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853,
Staphylococcus aureus ATCC 29523, Listeria innocua ATCC
33090 and Listeria monocytogenes ATCC 7466) e Laboratrios de Qumica (Staphylococcus aureus ATCC 9144) e
Microbiologia (Proteus sp.) da Universidade dos Aores.
Os microrganismos indicadores foram conservados em tubos
com Plate Count Agar (PCA, Biokar Diagnostics, BK144HA,
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incubadas a 37C por 16h. A actividade antimicrobiana manifestou-se atravs da presena de halos de inibio ao redor
dos orifcios inoculados.
Procedimentos de triagem
de actividades bioqumicas
dos isolados
Aps isolamento e purificao em meios de cultura, os
isolados mais promissores foram analisados para caracterizar
o seu perfil metablico, incluindo a deteco de fosfatases,
fosfo-hidrolases, glucosidases, por meio do kit API Zym
(BioMrieux,Inc. Durham, NC).
RESULTADOS
Caracterizao do Habitat
Existe uma grande diversidade de bactrias, donde um
grande potencial biotecnolgico, nos ambientes extremos dos
Aores (Fig. 4). Seis locais de amostragem foram seleccionados em seis tubos lvicos assim como no campo de
fumarolas em estudo (Fig. 5).
Rastreio de microorganismos
com atividade antimicrobiana
Diversos isolados apresentaram atividades inibitrias nos
testes de inoculao cruzada frente a um amplo espectro de
microrganismos-alvo, incluindo vrios patgenos de interesse
relacionados com a sade humana (Fig. 6).
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Na Fig. 10, apresentam-se os resultados da avaliao da sensibilidade desta frao temperatura, pH e a enzimas de
diversas naturezas. Os resultados indicam a natureza proteica
da frao ativa, que no perde as propriedades inibitrias
mesmo aps tratamento com temperaturas at 80C, nem
quando submetida a valores de pH entre 1 e 8.
Fig. 8._ Resultados da triagem de isolados quanto s suas
actividades bioqumicas.
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CONCLUSES
Os ambientes extremos terrestes dos Aores so locais de
grande diversidade bacteriana e em que se encontram grupos
taxonmicos promissores na produo de biomolculas.
Neste trabalho, foram detetadas atividades enzimticas com
potencial uso industrial e atividade antimicrobiana contra
patgenos humanos e procedeu-se purificao parcial das
fraes antimicrobianas mais relevantes.
O elevado potencial dos ambientes estudados para a
descoberta de produtos com utilidade industrial mais um
argumento para a sua conservao.
Fig. 11_ Perfil de FPLC usando como fase mvel Tris-HCl e uma
coluna Superdex 200.
DISCUSSO
Novas espcies microbianas tm sido isoladas de ambientes
extremos aorianos, nas fumarolas na Ilha de So Miguel e em
ambientes hidrotermais ocenicas e algumas atividades enzimticas foram descritas, bem como microrganismos com potencial antibitico (5 8). Os ambientes extremos dos Aores
so locais inexplorados onde habitam uma enorme quantidade de bactrias das quais podem-se obter biomolculas
com potencial aplicao em biotecnologia. Tratando-se de
ambientes ainda mal conhecido e pouco ou nada explorado,
importa aumentar o nosso conhecimento sobre esta biodiversidade, para promover a sua preservao e aproveitamento. O desenvolvimento dos trabalhos de obteno de
molculas purificadas e caracterizadas na Universidade dos
Aores, juntamente com o regime jurdico do acesso e utilizao dos recursos naturais da Regio Autnoma dos Aores,
so etapas fundamentais para produzir futuros desenvolvimentos na rea da biotecnologia com impacto na indstria
aoriana, criando as condies para atingir os objetivos de
utilizao sustentvel e a obteno de benefcios para a
prpria Regio.
Agradecimentos
Este trabalho financiado pela SRECC Secretaria Regional da
Educao, Cincia e Cultura e ao FRC Fundo Regional para
a Cincia atravs da Bolsa de ps-doutoramento
M3.1.7/F/013/2011, no mbito do Programa para a Promoo
do Emprego e Competitividade.