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ALUMNOS:
lvarez Rengifo Mark Eduardo, Caparachn Murrieta
Carol Yohana, Del Aguila Paredes Eduardo, Flores Lozano Ethel,
Flores Ramirez Jesica Mishel, Huamn Linarez Baressa, Medina
Linares Bryan, Robalino Garcia Ledinn, Sanchez Lazo Sandra
Veronica,
CURSO:
BIOTECNOLOGIA AMBIENTAL
CICLO:
VIII
PROFESOR:
TARAPOTO PER
2014
NDICE
CAPITULO I: PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA...................................................4
1.1.
1.2.
Delimitacin de la investigacin..............................................................4
1.3.
1.4.
1.2.1.
Social..............................................................................................................4
1.2.2.
Espacial..........................................................................................................5
1.2.3.
Temporal........................................................................................................7
Problema general........................................................................................7
1.3.2.
Problemas especficos..............................................................................7
Objetivos.....................................................................................................7
1.4.1.
Objetivo general..........................................................................................7
1.4.2.
Objetivo especifico.....................................................................................7
1.5.
Justificacin de la investigacin.............................................................8
1.6.
Limitaciones de la investigacin.............................................................8
2.2.
Bases tericas..........................................................................................11
2.3.
Bases legales...........................................................................................15
2.4.
Hiptesis general.....................................................................................18
3.2.
Hiptesis especficas..............................................................................18
3.3.
Variables...................................................................................................18
3.3.1.
Diseo de investigacin.........................................................................20
4.2.
4.3.
Enfoque de la investigacin...................................................................20
4.4.
Mtodo de la investigacin.....................................................................21
4.5.
Poblacin y muestra................................................................................22
4.6.
Tcnicas.......................................................................................................22
4.6.2.
Instrumentos..............................................................................................22
4.6.3.
Anlisis de datos.....................................................................................23
5.2.
Prueba de la hiptesis.............................................................................23
5.3.
Discusin de resultados.........................................................................25
a las propiedades
los
1.2.
Delimitacin de la investigacin
1.2.1. Social
El presente proyecto de investigacin involucra a toda la poblacin
con acceso al servicio bsico de desage adems de la poblacin
4
del
botadero
Municipal
Yacucatina
cuya
ubicacin
1.2.3. Temporal
El presente proyecto se desarrollar en un periodo estimado de dos
(02) meses. Que comprenden Noviembre a Diciembre del 2014, de
los cuales en el primer mes se desarrollar la etapa de laboratorio y
el mes siguiente la etapa de gabinete hasta la presentacin del
informe final.
1.3.
1.4.
Objetivos
1.4.1. Objetivo general
Aislar microorganismos a partir del lixiviado del botadero
municipal para la formacin de lodos activos.
1.4.2. Objetivo especifico
1.5.
Justificacin de la investigacin
Motivado por la vocacin profesional y de servicio, siendo consciente
de la importancia del desarrollo del proyecto de investigacin
formacin de lodos activos en condiciones de laboratorio para
1.6.
Limitaciones de la investigacin
Entre las limitaciones de la investigacin podemos encontrar a las
siguientes:
Falta de laboratorio implementados con equipos apropiados.
Costo elevado del proyecto.
Escases de materiales a utilizar.
Espacio de los laboratorios.
Tiempo de ejecucin.
(2008).
Aislamiento
Lodos
Identificacin
De
Microorganismos
En
Activados.
Que tuvo como objetivo general aislar e identificar bacterias con capacidad
de degradacin de derivados del petrleo.
Y dicha investigacin concluyo con: se pudo asilar bacterias
(Microbacterium) y hongos capaces de degradar el petrleo.
Bases tericas
AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
El aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales de realiza, en la
mayora de los casos, mediante la produccin de colonias aisladas en
cultivos slido. El crecimiento explosivo de las bacterias permite producir
un gran nmero de ellas a partir de una nica clula inicial de forma, tras
un periodo de incubacin en las condiciones ambientales adecuadas, se
produce una colonia observable a simple vista y formada por individuas
iguales.
Sin embargo, no todos los microorganismos presentes en las
muestras ambientales so cultivables. Esta es debido a dificultades
11
comerciales.
Grasas animales, aceites Aguas residuales domsticas, industriales y
comerciales y grasa.
Pesticidas Residuos agrcolas.
Fenoles Vertidos industriales.
12
comerciales.
Compuestos orgnicos voltiles Aguas residuales domsticas,
industriales y comerciales.
de agua subterrnea.
Cloruros Aguas residuales domsticas, agua de suministro, infiltracin
de agua subterrnea.
Metales pesados Vertidos industriales.
Nitrgeno Residuos agrcolas y aguas residuales domsticas.
PH Aguas residuales domsticas, industriales y comerciales.
Fsforo Aguas residuales domsticas, industriales y comerciales; aguas
de Escorrenta.
Contaminantes prioritarios Aguas residuales domsticas, industriales y
comerciales.
Azufre Agua de suministro; aguas residuales domsticas, comerciales e
industriales.
Gases:
13
14
CARACTERSTICAS
DE
LOS
LIXIVIADOS
QUE
AFECTAN
SU
TRATAMIENTO
Existen numerosas caracterizaciones de los lixiviados en donde se hace
nfasis en su alto poder contaminante. Se dice que los lixiviados
usualmente tienen un alto contenido de nitrgeno y fosforo, presencia
abundante de patgenos e igualmente de sustancias toxicas como metales
pesados y constituyentes orgnicos. (GIRALDO E. 2010).
2.3.
Bases legales
Segn la ley de recursos hdricos, Ley N 29338; en el artculo 79.Vertimiento de agua residual: hace mencin que la autoridad nacional
del Agua autoriza el vertimiento del agua residual tratada a un cuerpo
natural.
Artculo 82.-
Segn la Ley General Del Ambiente - Ley N 28611, Artculo 121.- Del
vertimiento de aguas residuales: El Estado emite en base a la
15
Aguas residuales: agua deseca por una casa, una comunidad, una
granja o una industria que contiene materia orgnica disuelta o
suspendida. . (GONZALES CRUZ, M 2010).
16
17
Hiptesis general
Mediante la utilizacin de inductores en medios especficos se aislarn e
identificarn
microorganismos
degradadores
transformadores
de
compuestos contaminantes.
3.2.
Hiptesis especficas
En medios bsicos con la adicin de compuestos lipdicos (lecitina),
proteicos (lactosa), carbohidratos (Almidn) y metales pesados (cloruro
de mercurio o hidrocarburo) como inductores se ensayar el aislamiento
3.3.
Variables
Variables independientes
Inductores (Lecitina, almidn, casena y cloruro de mercurio e
hidrocarburo).
Variable dependiente
Aislamiento de organismos degradadores y transformadores de lpidos,
carbohidratos, protenas y metales pesados.
18
DEFINICION
CONCEPTUAL
INDEPENDIENTE:
Inductores
(Lecitina,
almidn, casena y
fluor).
DEPENDIENTE:
Aislamiento de
organismos
degradadores y
transformadores de
lpidos, carbohidratos,
protenas y metales
pesados.
-Son colonias
bacterianas
pertenecientes a una
misma especie, con
capacidad
degradadora y
especficas.
DIFINICION
OPERACIONAL
Produccin
enzimas.
de
DIMENSIONES
Capacidad para
estimular la produccin
de enzimas
especficas.
19
INDICADORES
Endo-enzimas.
ESCALA DE
MEDICION
Ordinal/Nominal:
Abundante o mnimo
Exo-enzimas.
Nominal: Grande,
mediano y pequeo.
Diseo de investigacin
Segn el propsito del estudio y la naturaleza de la investigacin,
corresponde a un diseo de tipo Investigacin de laboratorio o
experimental.
Segn ESS FERRER.(2010).Operacionalizacin de variables,
hace mencin que sta investigacin se presenta mediante la manipulacin
de
una
variable
no
comprobada,
en
condiciones
rigurosamente
situacin
acontecimiento
particular.
4.3.
Enfoque de la investigacin
Segn el enfoque de investigacin es cuantitativo;
HERNNDEZ
20
4.4.
Mtodo de la investigacin
Para el trabajo de investigacin se desarrollara 11 etapas:
ETAPA 01: COORDINACION CON LOS LABORATORIOS
Se coordin con los laboratorios para la esterilizacin de los materiales e
insumos, mediante documentacin.
ETAPA 02: ADQUISICION DE INSUMOS E INSTRUMENTOS DE
LABORATORIO
Se compr todos los instrumentos e insumos que se necesit para el
desarrollo del presente proyecto de investigacin.
ETAPA 03: FORRADO DE LOS MATERIALES PARA LA
ESTIRILIZACION
El forrado se realiz con el papel kraft, la forma de forrado vari de
2 horas.
Los dems insumos e instrumentos fueron esterilizado en autoclave a
121 C por 20 minutos.
21
las muestras.
Una vez obtenida la muestra se procedi a colocarlo en una bolsa ziploc
y se transport para su refrigeracin.
22
HN = HT - HC
Dnde:
HN: Halo neto
HT: Halo total
HC: Halo de colonia
24
ETAPA 10:
POSIBLE
IDENTIFICACION
DE
LOS
ORGANISMOS
Poblacin y muestra
Poblacin
Todos los microorganismos presentes en los lixiviados.
Muestra
Todos los microorganismos factibles hacer aislados.
25
4.6.
Balanza analtica
Libreta de campo
Cmara fotogrfica
Microscopio
Escalmetro
26
Anlisis de datos
PARA LA PRACTICA EN LABORATORIO
COMPUESTOS LIPDICOS
Tabla 01: Medicin de los halos de la placa con disolucin 10 -3
PLACA CON DISOLUCIN 10-3
N de
Halo total
Colonias
(cm)
01
1,9
02
1,9
03
1,9
04
1,9
05
2,9
06
0,8
07
0,5
08
0,7
09
0,7
10
1,1
11
1,1
12
0,7
-4
disolucin 10
Halo de
colonia (cm)
1,2
0,3
0,2
0,9
2,7
0,4
0,3
0,4
0,3
0,2
0,8
0,3
Halo neto
(cm)
0.7
1.6
1.7
1
0.2
0.4
0.2
0.3
0.4
0.9
0.3
0.4
Fuente:
elaboracin
Propia 2014
Tabla 02: Medicin de
los halos de la placa con
PLACA DE DISOLUCION 10 -4
N de
Colonia
s
00
01
02
03
3.1
04
05
06
07
08
09
10
Halo total
(cm)
0.6
2.8
Fue
absorbido
2.9
3.2
0.83
2.4
0.8
Halo de
colonia
(cm)
0.2
0.93
0.2
0.83
Halo neto
(cm)
0.35
2.16
Moho
0.35
Moho
Moho
1.73
0.3
2.55
1.04
0.48
0.67
0.5
0.4
1.87
0.2
0.83
27
-5
28
Halo total
(cm)
01
02
03
0.5
1.2
Halo de
colonia
(cm)
0.3
0.9
0.2
Halo neto
(cm)
0.2
0.9
1
COMPUESTO CARBOHIDRATADOS
PLACA DE DISOLUCION 10-3
Halo total
Halo de
Halo neto
-3
(cm)
colonia
(cm)
(cm)
PLACA CON
DISOLUCIN
10
N de
Colonia
s
01N de
Colonias
02
0301
02
03
Halo
12 total
(cm)
14
10 1
0.9
0.5
6 Halo de
colonia
(cm)
11
5 0.62
0.68
0.34
Halo
neto (cm)
6
3
0.38
5
0.22
0.16
Tabla 07:
Medicin de
los halos de
la placa con
disolucin
10-3
29
COMPUESTOS PROTEICOS
Tabla 09: Medicin de los halos de la placa con disolucin 10
-4
PLACA DE DISOLUCION 10 -4
N de
Halo total
Colonia
(cm)
s
00
0.7
01
0.65
02
1.5
elaboracin propia 2014
Halo de
colonia (cm)
0.3
0.44
1.36
0.4
0.21
0.14
Fuente:
-4
N de
Colonia
s
01
02
03
-5
-5
30
N de
Colonia
s
01
Halo total
(cm)
1.9
Halo de
colonia
(cm)
1.5
-6
Halo total
(cm)
01
02
03
2.62
1.8
Halo de
colonia
(cm)
1.8
1.69
METAL PESADO
No se form ninguna colonia en los das de monitoreo.
N de
Colonia
s
01
02
-5
-6
-5
-6
Halo
neto
(cm)
Moho
Medicin
halos de
con
10 -6
-6
N de
Colonia
s
01
02
PLACA DE DISOLUCION 10
Halo de
Halo total
colonia
Halo neto (cm)
(cm)
(cm)
0.4
0.2
0.2
0.5
0.2
0.3
Tabla 18:
de los
la placa
disolucin
INDUCTOR
Huevo (lpido)
Leche (protena)
Almidn (carbohidrato)
Hidrocarburo (Metal pesado)
COLONIAS
HALOS
POSIBLE
FORMADAS
Abundante
Mnima
Mnima
Mnima
FORMADOS
Grande
Mediano
Mediano
Mediano
ORGANISMO
Pseudomona
Bacillus
Bacillus
Pseudomona
32
5.2.
Prueba de la hiptesis
5.2.1. Hiptesis general
Mediante la utilizacion de inductores en medios especificos se logro
aislar e indentificar microorganismos capaces de degradar y
transformar compuestos contaminantes.
5.2.2. Hiptesis especifica
5.3.
Discusin de resultados
Para compuestos lipdicos
Para la identificacin de los organismos presentes en el huevo, se encontr
una cierta dificultad, pero segn los descrito por VANDEVENNE C y
ESCOLA M, menciona que el Bacillus cereus produce lecitinasa, de
manera que degrada lecitina de la yema de huevo formando un halo de
precipitado alrededor de sus colonias, siendo los microorganismo mas
comunes en la degradacin de compuestos lopidicos y el manitol como
medio nos permite la diferenciacin de bacillus cereus, que es un
microorganismo manitol negativo, frente a la flora acompaante manitol
positiva, que hace que el rojo fenol del medio vire de rojo a amarillo.
Asimismo, el crecimiento de la flora acompaante se ve inhibido por la
polimixina, que no afecta al crecimiento bacillus cereus.
33
(10-6)
se
encontr
una
colonia
de
microorganismos,
que
en
su
trabajo
de
investigacin
titulado
Antispticos
34
como
posibles
identificaciones
de
microorganismos
mediante
la
inters.
Para la identificacin de microorganismos se debera usar un microscan.
36
FUENTES DE INFORMACIN
LOAIZA NAVIA J. (2010). Modelacin el proceso de lodos activados en la Planta
de tratamiento de Aguas Residuales Noreste, Apodaca, N.L.
LPEZ TORRES M, VELIZ E, FERNNDEZ GARCA LA et al. Tratamiento de
lodos. Una etapa necesaria dentro del proceso tecnolgico. Revista CENIC.
2010; vol. 41: pp. 1-6.
SALAZAR L., CRESPI M.,
SALAZAR R. (2009) Tratamiento de aguas
residuales textiles mediante un biorreactor de membrana.
PABN S.; SUREZ J. Arranque y operacin a escala real de un sistema de
tratamiento de lodos activos para aguas residuales de matadero revista
ingeniera e investigacin vol. 29 no. 2, agosto de 2009; pg. (53-58).
GONZALES CRUZ, M 2010. Definicin de trminos bsicos.
37
ANEXOS
Anexo 01: Matriz de Consistencia.
TITULO
AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS A PARTIR DE LIXIVIADOS DEL BOTADERO MUNICIPAL PARA LA FORMACION DE LODOS ACTIVOS CON FINES DE MITIGACION AMBIENTAL TARAPOTO 2014
GENERAL
Sera factible aislar microorganismos a partir del lixiviado del botadero municipal para la formacin de lodos activos con fines de mitigacin ambiental?
Facilitarn los inductores el aislamiento de microorganismos a partir del lixiviado del botadero municipal?
PROBLEMA
ESPECFICOS
Cmo probar el funcionamiento del lodo activo conformado por microorganismos a partir del lixiviado del botadero municipal?
GENERAL
Mediante la utilizacin de inductores en medios especficos se aislaran e identificara microorganismos degradadores y transformadores de compuestos contaminantes.
Evaluar los inductores para el aislamiento de microorganismos a partir del lixiviado del botadero municipal.
OBJETIVOS
ESPECFICOS
H. GENERAL:
-Mediante la utilizacin de inductores en medios especficos se aislaran e identificara microorganismos degradadores y transformadores de compuestos contaminantes.
HIPTESIS
H. ESPECFICA:
-En medios bsicos con la adicin de compuestos lipdicos (lecitina), proteicos (lactosa), carbohidratos (Almidn) y metales pesados (flor) como inductores se ensayara el aislamiento de microorganismos con caractersticas de inters.
-Mediante el principio de la prueba del granulo anaerbicos ser factible evaluar y probar la funcionalidad del lodo activo conformado
INDEPENDIENTE
VARIABLES
DEPENDIENTE
METODOLOGA
Inductores (Lecitina,
almidn, lactosa y cloruro
de mercurio e
hidrocarburo).
Aislamiento de organismos
degradadores
y
transformadores de lpidos,
carbohidratos, protenas y
metales pesados.
DE
FIN
enzimas especficas.
ICI
EP
TU
Exo-enzimas.
DIME
CO
NC
Endo-enzimas.
Son colonias
bacterianas perteneciente
NSIO
INDIC
NES
ADO
RES
AL
38
39
40
41