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UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS

FACULTAD DE INGENIERA Y ARQUITECTURA


ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE
INGENIERA AMBIENTAL
PERFIL DE PROYECTO DE INVESTIGACIN
AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS A PARTIR DE LIXIVIADOS DEL
BOTADERO MUNICIPAL PARA LA FORMACION DE LODOS ACTIVOS CON
FINES DE MITIGACION AMBIENTAL TARAPOTO 2014

ALUMNOS:
lvarez Rengifo Mark Eduardo, Caparachn Murrieta
Carol Yohana, Del Aguila Paredes Eduardo, Flores Lozano Ethel,
Flores Ramirez Jesica Mishel, Huamn Linarez Baressa, Medina
Linares Bryan, Robalino Garcia Ledinn, Sanchez Lazo Sandra
Veronica,
CURSO:
BIOTECNOLOGIA AMBIENTAL
CICLO:
VIII
PROFESOR:

Blgo. Mblgo. Henry Giovani Jave Concepcin

TARAPOTO PER
2014

NDICE
CAPITULO I: PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA...................................................4
1.1.

Descripcin de la realidad problemtica................................................4

1.2.

Delimitacin de la investigacin..............................................................4

1.3.

1.4.

1.2.1.

Social..............................................................................................................4

1.2.2.

Espacial..........................................................................................................5

1.2.3.

Temporal........................................................................................................7

Formulacin del problema de investigacin.........................................7


1.3.1.

Problema general........................................................................................7

1.3.2.

Problemas especficos..............................................................................7

Objetivos.....................................................................................................7
1.4.1.

Objetivo general..........................................................................................7

1.4.2.

Objetivo especifico.....................................................................................7

1.5.

Justificacin de la investigacin.............................................................8

1.6.

Limitaciones de la investigacin.............................................................8

CAPITULO II: MARCO TERICO...................................................................................9


2.1.

Antecedentes del estudio de investigacin............................................9

2.2.

Bases tericas..........................................................................................11

2.3.

Bases legales...........................................................................................15

2.4.

Definicin de trminos bsicos.............................................................15

CAPITULO III: HIPTESIS Y VARIABLES..................................................................18


3.1.

Hiptesis general.....................................................................................18

3.2.

Hiptesis especficas..............................................................................18

3.3.

Variables...................................................................................................18
3.3.1.

Operacionalizacin de las variables....................................................19

CAPITULO IV: METODOLOGA DE LA INVESTIGACIN.......................................20


4.1.

Diseo de investigacin.........................................................................20

4.2.

Tipo y Nivel de investigacion.................................................................20

4.3.

Enfoque de la investigacin...................................................................20

4.4.

Mtodo de la investigacin.....................................................................21

4.5.

Poblacin y muestra................................................................................22

4.6.

Tcnicas e instrumentos de recoleccin de datos..............................22


4.6.1.

Tcnicas.......................................................................................................22

4.6.2.

Instrumentos..............................................................................................22

4.6.3.

Criterios de validez y confiabilidad de los instrumentos...............22

CAPITULO V:ANALISIS E INTERPRETACION DE RESULTADOS.......................23


5.1.

Anlisis de datos.....................................................................................23

5.2.

Prueba de la hiptesis.............................................................................23

5.3.

Discusin de resultados.........................................................................25

CAPITULO VI: CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES..


5.4. Conclusiones..
5.5. Recomendaciones.
FUENTES DE INFORMACIN.......................................................................................26
ANEXOS.............................................................................................................................27

CAPITULO I: PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA


1.1.

Descripcin de la realidad problemtica


El aumento de la poblacin trae consigo ciertos problemas ambientales
como la inadecuada disposicin de las aguas residuales, stas son vertidas
en los ros sin previo tratamiento, y representa un grave problema existente
en los pases en vas de desarrollo; generando la contaminacin directa de
nuestros ros. Las aguas residuales cada ao se encuentran en aumento
producto de este problema, y la incorrecta gestin de nuestras autoridades
para la disposicin final de estas implica un alto ndice de problemas
ambientales, puesto que son vertidos directamente y de manera irracional
hacia nuestros principales ecosistemas.
A nivel mundial existen muchos tratamientos para las aguas
residuales, en especial los de uso comn son los tratamiento qumicos,
pero trae consigo muchos inconvenientes debido

a las propiedades

agresivas de los productos qumicos que son utilizados, donde

los

procedimientos de seguridad son ms estrictos para su aplicacin, sumado


a esto est la generacin de efluentes contaminantes.
Nuestra ciudad no es ajena a este problema, siendo una ciudad que
se encuentra en vas de desarrollo por lo cual existe el deterioro de los
ecosistemas, debido a que las aguas residuales son vertidas en conjunto
con las aguas residuales urbanas, quienes poseen altas concentraciones
de protenas, lpidos, carbohidratos y metales pesados, y que al pretender
ser tratados de manera conjunta presentan una mayor dificultad;
generando un mayor impacto ambiental negativo en el rea de influencia
directa e indirecta.

1.2.

Delimitacin de la investigacin
1.2.1. Social
El presente proyecto de investigacin involucra a toda la poblacin
con acceso al servicio bsico de desage adems de la poblacin
4

asentada en las riveras, al sector agrcola e industrial quienes


reutilizarn estas aguas mediante el abastecimiento de sistemas de
captacin, siendo los principales beneficiados tras la aplicacin del
tratamiento de las aguas residuales mediante la accin de los lodos
activos.
1.2.2. Espacial
Para el presente proyecto de investigacin se pretende extraer la
muestra

del

botadero

Municipal

Yacucatina

cuya

ubicacin

geogrfica correspondiente es UTM 355542 mE; 9264179 mN; a


una altitud de 326 m.s.n.m. sector Yacucatina.

MAPA 01. Ubicacin geogrfica del laboratorio del ICT

FUENTE: Elaboracin propia 2014


7

1.2.3. Temporal
El presente proyecto se desarrollar en un periodo estimado de dos
(02) meses. Que comprenden Noviembre a Diciembre del 2014, de
los cuales en el primer mes se desarrollar la etapa de laboratorio y
el mes siguiente la etapa de gabinete hasta la presentacin del
informe final.
1.3.

Formulacin del problema de investigacin


1.3.1. Problema general
Sera factible aislar microorganismos a partir del lixiviado del
botadero municipal para la formacin de lodos activos con fines
de mitigacin ambiental?
1.3.2. Problemas especficos
Facilitarn los inductores el aislamiento de microorganismos a

partir del lixiviado del botadero municipal?


Cmo probar el funcionamiento del lodo activo conformado por
microorganismos a partir del lixiviado del botadero municipal?

1.4.

Objetivos
1.4.1. Objetivo general
Aislar microorganismos a partir del lixiviado del botadero
municipal para la formacin de lodos activos.
1.4.2. Objetivo especifico

Evaluar los inductores para el aislamiento de microorganismos a

partir del lixiviado del botadero municipal.


Probar el funcionamiento del lodo activo en la mitigacin
ambiental.

1.5.

Justificacin de la investigacin
Motivado por la vocacin profesional y de servicio, siendo consciente
de la importancia del desarrollo del proyecto de investigacin
formacin de lodos activos en condiciones de laboratorio para

tratamiento de aguas residuales industriales con fines de mitigacin


ambiental como parte de la solucin a un problema ambiental que

aqueja a nuestra ciudad.


Los aportes de este proyecto de investigacin es para mejorar la
eficacia en la degradacin y transformacin de ciertos contaminantes
presentes en las aguas residuales generados por la poblacin con el fin
de reducir su impacto hacia el medio ambiente.

1.6.

Limitaciones de la investigacin
Entre las limitaciones de la investigacin podemos encontrar a las
siguientes:
Falta de laboratorio implementados con equipos apropiados.
Costo elevado del proyecto.
Escases de materiales a utilizar.
Espacio de los laboratorios.
Tiempo de ejecucin.

CAPITULO II: MARCO TERICO


2.1.

Antecedentes del estudio de investigacin


Segn la investigacin realizado por ALCARAZ JUAREZ A.

(2008).

Aislamiento

Lodos

Identificacin

De

Microorganismos

En

Activados.
Que tuvo como objetivo general aislar e identificar bacterias con capacidad
de degradacin de derivados del petrleo.
Y dicha investigacin concluyo con: se pudo asilar bacterias
(Microbacterium) y hongos capaces de degradar el petrleo.

Segn la investigacin realizada por

LOAIZA NAVIA J. (2010).

Modelacin el proceso de lodos activados en la Planta de tratamiento


de Aguas Residuales Noreste, Apodaca, N.L.
El objetivo principal fue modelar el proceso de lodos activos de la planta
Noreste con el ASM 1, para reproducir su comportamiento en cuanto a
remocin de materia orgnica, nitrgeno y produccin de lodo, con el fin de
que el modelo sirva como herramienta de toma de decisiones.
Al finalizar su investigacin concluyo que el modelo calibrado fue
capaz de describir de forma adecuada la calidad del efluente (carbono y
nitrgeno) y la produccin del lodo, en especial en estado estacionario.
Porque que considero exitosa la secuencia de calibracin desarrollada y
puesta en prctica.
Segn la publicacin realizada por LPEZ TORRES M., VELIZ E.,
FERNNDEZ GARCA LA et al. Tratamiento de lodos. Una etapa
necesaria dentro del proceso tecnolgico. Revista CENIC. 2010; vol.
41: pp. 1-6.
El objetivo general fue la caracterizacin de la digestin anaerbia puede
ser una opcin atractiva, como una va de evacuacin y como fuente de
energa alternativa.
Al trmino de su poblacin concluy, que los resultados demuestran
que la digestin anaerobia de los lodos es una opcin tecnolgica
adecuada y ms an para cerrar el ciclo del proceso de tratamiento para el
reuso de las aguas residuales municipales, con la potencialidad de la
obtencin de biogs y la posible valorizacin del lodo para reus en la
agricultura.
Segn la investigacin realizada por SALAZAR L., CRESPI M.,
SALAZAR R. (2009) Tratamiento de aguas residuales textiles
mediante un biorreactor de membrana.
El objetivo de la investigacin fue obtener mejores rendimientos de
depuracin, reduccin de costos de operacin y mantenimiento en la
generacin de procesos que posean una elevada flexibilidad para soportar
10

las variaciones en el afluente, que generen una mnima produccin de


lodos y que sean diseados en condiciones mnimas de rea.
Llegaron a la conclusin de que el tratamiento de aguas residuales
textiles mediante un BRM resulta atractivo, ya que durante el desarrollo de
la parte experimental presenta una mayor estabilidad del proceso, una
remocin de la materia orgnica promedio de 89%, de slidos suspendidos
totales de 95% y de color del 69%.
Segn la investigacin realizada por PABN S.; SUREZ J. Arranque y
operacin a escala real de un sistema de tratamiento de lodos activos
para aguas residuales de matadero revista ingeniera e investigacin
vol. 29 no. 2, agosto de 2009; pg. (53-58)
El estudio tuvo como objetivo realizar el seguimiento al arranque y
operacin

de un sistema de tratamiento de lodos activos, mediante la

aplicacin de una tcnica de arranque utilizando contenido rumial y el


monitoreo peridico de parmetros fsicos qumicos y microbiolgicos a las
variedades corrientes del proceso y anlisis de los parmetros de control
de lodo reactivo.
El resultado fue que es viable utilizar como inoculo contenido
ruminal, adaptndolo con variaciones de carga con variadas proporciones
de sustrato (agua ruminaza- aguasangre).
2.2.

Bases tericas
AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
El aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales de realiza, en la
mayora de los casos, mediante la produccin de colonias aisladas en
cultivos slido. El crecimiento explosivo de las bacterias permite producir
un gran nmero de ellas a partir de una nica clula inicial de forma, tras
un periodo de incubacin en las condiciones ambientales adecuadas, se
produce una colonia observable a simple vista y formada por individuas
iguales.
Sin embargo, no todos los microorganismos presentes en las
muestras ambientales so cultivables. Esta es debido a dificultades
11

intrnsecas en el cultivo, al desconocimiento de los requerimientos


especficos de cultivo, y a laa existencia de grupos de microorganismos
que deben mantenerse en equilibrio para poder sobrevivir. BIBLIOGRAFIA
RECOMENDADA: Cap. 1 de la octava edicin de Brock: Biologia de los
microorganismos.
Existen procedimientos de enriquecimientos del nmero de bacterias
de ambientes naturales para facilitar su aislamiento. Uno de ellas es la
columna de Winogradski que crea un microcosmos para enriquecer el
nmero de ciertos tipos de microorganismos presentes en ambientes
naturales con objeto de facilitar su aislamiento.
CARACTERSTICAS FSICAS, QUMICAS y BIOLGICAS DEL AGUA
RESIDUAL.
A continuacin se describen brevemente los constituyentes fsicos y
qumicos de las aguas residuales, los contaminantes importantes de cara al
tratamiento de las aguas, los mtodos de anlisis, y las unidades que se
emplean para caracterizar la presencia de cada uno de los contaminantes
en el agua residual.
Las aguas residuales se caracterizan por su composicin fsica y
qumica. Las principales propiedades fsicas de agua residual as como
sus principales constituyentes qumicos.
Es conveniente observar que muchos de los parmetros que
aparecen en la tabla estn relacionados entre ellos. Por ejemplo, una
propiedad fsica como la temperatura afecta tanto a la actividad biolgica
como a la cantidad de gases disueltos en el agua residual.
Propiedades fsicas:
Color Aguas residuales domsticas e industriales.
Olor Agua residual en descomposicin, residuos industriales
Constituyentes qumicos:
Orgnicos carbohidratos Aguas residuales domsticas, industriales y

comerciales.
Grasas animales, aceites Aguas residuales domsticas, industriales y

comerciales y grasa.
Pesticidas Residuos agrcolas.
Fenoles Vertidos industriales.

12

Protenas Aguas residuales domsticas, industriales y comerciales.


Contaminantes prioritarios Aguas residuales domsticas,
Industriales y comerciales.
Agentes tenso activos Aguas residuales domsticas, industriales y

comerciales.
Compuestos orgnicos voltiles Aguas residuales domsticas,
industriales y comerciales.

Otros Degradacin natural de materia orgnica


Inorgnicos:

Alcalinidad Aguas residuales domsticas, agua de suministro, infiltracin

de agua subterrnea.
Cloruros Aguas residuales domsticas, agua de suministro, infiltracin

de agua subterrnea.
Metales pesados Vertidos industriales.
Nitrgeno Residuos agrcolas y aguas residuales domsticas.
PH Aguas residuales domsticas, industriales y comerciales.
Fsforo Aguas residuales domsticas, industriales y comerciales; aguas

de Escorrenta.
Contaminantes prioritarios Aguas residuales domsticas, industriales y

comerciales.
Azufre Agua de suministro; aguas residuales domsticas, comerciales e
industriales.

Gases:

Sulfuro de hidrgeno Descomposicin de residuos domsticos.


Metano Descomposicin de residuos domsticos.
Oxgeno Agua de suministro; infiltracin de agua superficial. Disponible
en: http://cidta.usal.es/cursos/ETAP/modulos/libros/Caracteristicas.PDF

Funcionamiento de los lodos activos.


El tratamiento de las aguas residuales implica una serie de procesos y
operaciones unitarias, comunes en la Ingeniera Qumica, y que son
empleadas frecuentemente en el tratamiento y acondicionamiento de

13

aguas naturales. Estas operaciones unitarias son la sedimentacin,


filtracin, cribado, etc. Adicionalmente a estos procesos es necesario un
tratamiento biolgico, a travs del cual el material orgnico.
Presente en el agua residual es convertido parcialmente a material
celular o biomasa, y el resto se oxida a metano y productos inorgnicos
como: agua, carbonatos, bixido de carbono, amoniaco, nitratos, etc.
Quienes llevan a cabo este proceso, son una gran masa de
microorganismos de especies muy variadas, y que cumplen funciones
especficas en el proceso de depuracin de material orgnico en las aguas
residuales. Estos microorganismos pueden ser: aerobios, anaerobios o
facultativos.
En presencia de oxgeno, los aerobios y facultativos son los que
crecen y se desarrollan, mientras que en ausencia de oxgeno los
anaerobios y facultativos predominan. Los procesos aerobios son los ms
convenientes para la conversin del material orgnico en las aguas
residuales, y el proceso anaerobio es el ms adecuado para la conversin
del material orgnico que se tiene en los lodos biolgicos producidos en el
proceso de tratamiento de las aguas residuales.
Durante el proceso de digestin del material orgnico por procesos
aerobios, se forman productos intermedios que no son de carcter
agresivo o repulsivo, lo cual si ocurre en un proceso anaerobio, por lo tanto
la digestin aerobia se lleva a efecto en espacios abiertos, con grandes
suministros de oxgeno y buena ventilacin. Por el contrario, la digestin
anaerobia se realiza en un recipiente cerrado, y solo es abierto una vez
que el material orgnico se ha convertido a productos terminales, que ya
no son objetables y pueden manejarse los residuos adecuadamente.
Por estas razones, los procesos de tratamiento de aguas residuales
en digestores o reactores biolgicos aireados (reactor aerobio), son los
ms convenientes y los ms frecuentemente empleados. Uno de los
procesos aerobios ms empleados es el proceso de lodos activados.

14

No hay un solo proceso de lodos activados, y existen muchas


variaciones de dicho proceso para darle tratamiento a diferentes tipos y
calidades de agua, o para obtener un agua tratada con ciertos parmetros
de calidad. Disponible en:
http://filtrosyequipos.com/GUEST/residuales/lodosactivados5.pdf

CARACTERSTICAS

DE

LOS

LIXIVIADOS

QUE

AFECTAN

SU

TRATAMIENTO
Existen numerosas caracterizaciones de los lixiviados en donde se hace
nfasis en su alto poder contaminante. Se dice que los lixiviados
usualmente tienen un alto contenido de nitrgeno y fosforo, presencia
abundante de patgenos e igualmente de sustancias toxicas como metales
pesados y constituyentes orgnicos. (GIRALDO E. 2010).
2.3.

Bases legales

Segn la ley de recursos hdricos, Ley N 29338; en el artculo 79.Vertimiento de agua residual: hace mencin que la autoridad nacional
del Agua autoriza el vertimiento del agua residual tratada a un cuerpo
natural.

Segn la ley de recursos hdricos, Ley N 29338;

Artculo 82.-

Reutilizacin de agua residual: menciona que la Autoridad Nacional, a


travs del Consejo de Cuenca, autoriza el reso del agua residual
tratada, segn el fin para el que se destine la misma.

D.S. N 003-2010-MINAM (Aprueba Lmites Mximos Permisibles para


los efluentes de Plantas de Tratamiento de Aguas Residuales
Domsticas o Municipales): establece los Lmites mximos permisibles
en plantas de tratamiento de las aguas residuales.

Segn la Ley General Del Ambiente - Ley N 28611, Artculo 121.- Del
vertimiento de aguas residuales: El Estado emite en base a la

15

capacidad de carga de los cuerpos receptores, una autorizacin previa


para el vertimiento de aguas residuales domsticas, industriales.
2.4.

Definicin de trminos bsicos


Lodos activos: Residuo semislido que contiene microorganismos
y sus productos, de cualquier sistema de tratamiento de aguas, Un
proceso de lodos activados, no es otra cosa que un tratamiento
biolgico. (GONZALES CRUZ, M 2010).

Aerobio: proceso que ocurre en presencia de oxigeno molecular.


(GONZALES CRUZ, M 2010).

Aguas residuales: agua deseca por una casa, una comunidad, una
granja o una industria que contiene materia orgnica disuelta o
suspendida. . (GONZALES CRUZ, M 2010).

Agua residual domestica: agua proveniente de los desechos de


una comunidad. . (GONZALES CRUZ, M 2010).

Agua residual industrial: agua descargada resultante de un


proceso industrial y que no tiene ningn valor para est.
(GONZALES CRUZ, M 2010).

Digestion anaerobica: la digestion anaerobia es una de los


procesos mas antiguos empleados en la estabilizacion de lodos.
Este proceso se propicia de la degradacion de la materia organica
contenida en el en ausencia de oxigeno molecular. (GONZALES
CRUZ, M. 2010).

Digestion aerobia: la digestion aerobia se emplea generalmente en


plantas de tratamiento con capacidad minima sin embargo en
algunas ocasiones se ah empleado en plantas con mayor capacidad.
(GONZALES CRUZ, M. 2010).

Consorcios: Un Consorcio Microbiano es una asociacin natural de


dos o ms poblaciones microbianas, de diferentes especies, que
actan conjuntamente como una comunidad en un sistema
complejo, donde todos se benefician de las actividades de los
dems. (LPEZ, DOMNGUEZ & GARCA, 2007).

16

Inductores: sustancia, normalmente un sustrato molecular de una


enzima especfica, que se combina con el represor activo producido
por el gen regulador y lo desactiva.

Muestra: La muestra es un subconjunto de la Poblacin Blanco de


la Inferencia. Los objetivos de la extraccin de una muestra de la
poblacin. (Cristina Ludewig).

Muestreo por atributos: En

los sistemas de muestreo para

aceptacin se emplean mucho los trminos defectivo y defecto.


Una unidad defectuosa es la que no cumple con las especificaciones
en algn aspecto, o sea tiene uno o ms defectos

17

CAPITULO III: HIPTESIS Y VARIABLES


3.1.

Hiptesis general
Mediante la utilizacin de inductores en medios especficos se aislarn e
identificarn

microorganismos

degradadores

transformadores

de

compuestos contaminantes.
3.2.

Hiptesis especficas
En medios bsicos con la adicin de compuestos lipdicos (lecitina),
proteicos (lactosa), carbohidratos (Almidn) y metales pesados (cloruro
de mercurio o hidrocarburo) como inductores se ensayar el aislamiento

de microorganismos con caractersticas de inters.


Mediante el principio de la prueba del granulo anaerbicos ser factible
evaluar y probar la funcionalidad del lodo activo conformado.

3.3.

Variables
Variables independientes
Inductores (Lecitina, almidn, casena y cloruro de mercurio e
hidrocarburo).
Variable dependiente
Aislamiento de organismos degradadores y transformadores de lpidos,
carbohidratos, protenas y metales pesados.

18

3.3.1. Operacionalizacin de las variables


Cuadro 01: Operacionalizacin de las variables
VARIABLE

DEFINICION
CONCEPTUAL

INDEPENDIENTE:
Inductores
(Lecitina,
almidn, casena y
fluor).

- El inductor suele ser


el sustrato de una ruta
catablica, o una
molcula muy
semejante al sustrato
natural.

DEPENDIENTE:
Aislamiento de
organismos
degradadores y
transformadores de
lpidos, carbohidratos,
protenas y metales
pesados.

-Son colonias
bacterianas
pertenecientes a una
misma especie, con
capacidad
degradadora y
especficas.

DIFINICION
OPERACIONAL
Produccin
enzimas.

de

DIMENSIONES
Capacidad para
estimular la produccin
de enzimas
especficas.

Presencia de colonias. - Crecimiento en medios


especficos.
Formacin de halos.
- Tolerancia a
compuestos
Degradacin
y
especficos.
transformacin
de
inductores.

Fuente: Elaboracin propia 2014

19

INDICADORES
Endo-enzimas.

ESCALA DE
MEDICION
Ordinal/Nominal:
Abundante o mnimo

Exo-enzimas.

-Dimetro del halo


-Reduccin del
sustrato.
-Formacin mltiple de
colonias.

Nominal: Grande,
mediano y pequeo.

CAPITULO IV: METODOLOGA DE LA INVESTIGACIN


4.1.

Diseo de investigacin
Segn el propsito del estudio y la naturaleza de la investigacin,
corresponde a un diseo de tipo Investigacin de laboratorio o
experimental.
Segn ESS FERRER.(2010).Operacionalizacin de variables,
hace mencin que sta investigacin se presenta mediante la manipulacin
de

una

variable

no

comprobada,

en

condiciones

rigurosamente

controladas, con el fin de escribir de qu modo y por qu causa se produce


una
4.2.

situacin

acontecimiento

particular.

Tipo y nivel de la investigacin


La presente investigacin es de tipo correlacional, porque persigue medir
el grado de relacin existente entre variables
Segn ESS FERRER. (2010).Operacionalizacin de variables,
menciona que dicho nivel de investigacin Estudia las relaciones entre
variables dependientes e independientes, es decir, la correlacin entre dos
variables.
Nivel de investigacin:
Segn lo establecido por SNCHEZ CARLESSI H. y REYES MEZA C.
(2006), nuestro nivel de investigacin cientfica es del tipo explicativa o de
comprobacin de hiptesis causales, porque busca explicar fenmenos y el
estudiar sus relaciones para conocer su estructura y los aspectos que
intervienen en la dinmica de aqullos. Hay predominio de explicacin,
descripcin y correlacin. Es aquella que tiene relacin causal, no solo
persigue describir o acercarse a un problema, sino que intenta encontrar las
causas del mismo.

4.3.

Enfoque de la investigacin
Segn el enfoque de investigacin es cuantitativo;

HERNNDEZ

SAMPIERI R. (2010). Metodologa de la investigacin. Lo define como


una investigacin que utiliza diseos para analizar la certeza de las
hiptesis formuladas en un contexto en particular o para aportar evidencia
respecto de los lineamientos de la investigacin, se encuentra relacionada

20

con el grado en que apliquemos el diseo tal como fue preconcebido


(particularmente en el caso de los experimentos).

4.4.

Mtodo de la investigacin
Para el trabajo de investigacin se desarrollara 11 etapas:
ETAPA 01: COORDINACION CON LOS LABORATORIOS
Se coordin con los laboratorios para la esterilizacin de los materiales e
insumos, mediante documentacin.
ETAPA 02: ADQUISICION DE INSUMOS E INSTRUMENTOS DE
LABORATORIO
Se compr todos los instrumentos e insumos que se necesit para el
desarrollo del presente proyecto de investigacin.
ETAPA 03: FORRADO DE LOS MATERIALES PARA LA
ESTIRILIZACION
El forrado se realiz con el papel kraft, la forma de forrado vari de

acuerdo a la forma de los materiales.


En el caso del almidn se necesit pesar 1.56 gr y fue forrado con papel

aluminio para su posterior esterilizacin en el horno.


En el caso de los matraces, primero se prepar el agar nutritivo para

hidratar a una concentracin de 1.84 de agar / 80ml de agua destilada.


En este proceso con el papel kraft se cubri los materiales de vidrio
como los Matraces, vasos de precipitacin, pipetas, varillas de agitacin,
probetas y cajas Petri. Los tubos de ensayos fueron llenados con 18.8 ml
de solucin salina y luego se procedi a la esterilizacin.
ETAPA 04: ESTERILIZACIO DE LOS MATERIALES

Las placas Petri y el almidn fueron esterilizados en horno a 160 C por

2 horas.
Los dems insumos e instrumentos fueron esterilizado en autoclave a
121 C por 20 minutos.

ETAPA 05: OBTENCION DE LA MUESTRA DE LIXIVIADO

Para poder obtener la muestra se construy un muestreador artesanal,


mediante el uso de un cucharon de aluminio, un listn de madera, jebes
de llanta, lata y alambre.

21

La tcnica de muestreo seleccionado fue al azar y por atributo, debido a

la ubicacin geogrfica y a la inaccesibilidad del lixiviado.


Se ubic los puntos de muestreo.
Luego con el muestreador artesanal, se procedi a sacar las muestra de
la parte superficial, media y baja de cada punto de muestreo del
lixiviado, el cual cada extraccin de muestras fueron colocadas en un
recipiente y mezcladas, para ir obteniendo una mezcla homognea de

las muestras.
Una vez obtenida la muestra se procedi a colocarlo en una bolsa ziploc
y se transport para su refrigeracin.

ETAPA 06: PRACTICA EN LABORATORIO


Preparacin del alcohol yodado
Se prepar 240 ml de alcohol yodado, con proporcin de 3 a 1 (alcohol y
agua destilada), y se desinfecto la mesa.

Licuacin del agar nutritivo para hidratar


Se calent al agar hasta su punto de ebullicin, evitando su
solidificacin.

Incorporacin de los inductores a los medios de cultivo.


Inductor lecitina
Se desinfect el huevo con alcohol yodado y se rompi una pequea
capa del huevo dejando libre la membrana que cubre la clula. Luego
con el asa bacteriolgica se perfor la membrana y se vaco la clara en
un vaso de precipitacin, luego se procedi a vaciar la yema en un vaso
de precipitacin esterilizado. Y se agreg 1 ml de solucin salina, para
su extraccin.
Se extrajo 2.1 ml de yema para incorporarlo en el matraz con el
agar que debe encontrarse aproximadamente a 37C.
Inductor almidn
En ste proceso se extrajo 0.96 gr de almidn esterilizado y se agreg al
medio de cultivo el cual luego fue agitado para la homogenizacin.
Inductor casena

22

Se esteriliz el tarro de leche con alcohol yodado, luego con un cuchillo


tambin esterilizado se procedi a perforar el tarro de leche.
Se vaci la leche en un vaso de precipitacin esterilizado y con una
pipeta se procedi a extraer 1.8 ml de leche, el cual fue agregado al
matraz con el medio de cultivo.
Inductor cloruro de mercurio
Se pes 1.76 gr de cloruro de mercurio (Hg Cl2) y se procedi a
colocarlo en un papel aluminio el cual posteriormente se agreg al agar,
con el uso de EPP.
Los medios de cultivos fueron agitados hasta su hominizacin.

Incorporacin de las muestras con el mtodo de MacFarland.


Se agreg 2 ml de lixiviado en un tubo de ensayo con solucin salina de
18,8 ml esterilizado obteniendo como muestra 10 -1.
Luego para realizar la muestra 10 -2 se extrajo 2ml de la muestra 10 1

y se agreg al siguiente tubo de ensayo, y as sucesivamente hasta

obtener las muestras de 10-3, 10-4, 10-5, 10-6.

Sembrado de la muestra en el medio de cultivo.


Para este proceso se realiz primero la separacin de las pipetas por
nmero de muestra, en este caso tomamos las muestras 10-3, 10-4, 10-5,
10-6.
El siguiente procedimiento se agreg el agar con inductor en las
cajas petri observando que se cubra toda la superficie de sta, logrando
una concentracin aproximadamente de 12.5 a 13.5 ml, luego se deja que
este se solidifique. Con el agar sobrante se coloc en tubos de ensayo
inclinados a 45. El siguiente procedimiento fue realizar el sembrado de
cada una de las muestra, siendo duplicados las muestras 10 -4, 10-5.
El sembrado const del uso del asa de drigalski esterilizado, con la
pipeta se extrajo 0.5 ml de muestra de cada uno de los tubos de ensayos
y se coloc en las cajas petri con los inductores, y se procedi al
extendido con el asa de drigalski.
23

Incubacin de los medios de cultivo a temperatura ambiente.


Se incubo las cajas Petri a temperatura ambiente, por 5 das.
ETAPA 07: EJECUCION DEL PROYECTO
En la ejecucin del presente proyecto de investigacin, se sigui los
mismos pasos descritos en la ETAPA 06, con la variacin en las
disoluciones, la variacin del inductor de metal pesado y no se aisl del
inductor de carbohidratos.
1. Se prepar el alcohol yodado.
2. Se licu el agar nutritivo para hidratar (156 ml), para los 3 inductores
que se realiz.
3. Se extrajo los inductores:
4. Para cada inductor se agreg las siguientes concentraciones:
Leche: 1.8 ml en 52 ml de agar.
Huevo: 2.1 ml en 52 ml de agar.
Hidrocarburo: 0.52 ml en 52 ml de agar.
5. Se vaci los inductores con el agar en cuatro (04) placas Petri para
cada inductor (a excepcin del hidrocarburo).
6. Se realiz el mtodo de MacFarland, y se sembr con las disoluciones
de 10-5 y 10-6, cada una con su duplicado y todo por superficie.
7. Para la mezcla del inductor de hidrocarburo, las placas Petri tenan que
estar heladas; se calent el agar con el inductor del hidrocarburo y
rpidamente se lo vaci sobre la placa helada; y se sembr en
superficie con la disolucin de 10-6 (para una sola placa).
8. Todas las placas sembradas fueron envueltas con su papel kraft estril
e incubados a temperatura ambiente por 5 das, los monitoreos se
realizaron cada 24 horas.
ETAPA 08: MEDICION DE LOS HALOS
Para la medicin de los halos de degradacin se us de un escalmetro se
aplic la siguiente formula:

HN = HT - HC
Dnde:
HN: Halo neto
HT: Halo total
HC: Halo de colonia

Para la medicin de los halos de compuestos


carbohidratados, se agreg una gota de solucin
de yodo para poder diferenciar el halo formado.

24

ETAPA 09: AISLAMIENTO DE LOS ORGANISMOS


Se determin mediante la observacin las colonias con mayor dimetro de
halo neto, luego se esteriliz al asa bacteriolgica con el mechero,
posteriormente con el asa en punta se procedi a extraer una pequea
cantidad de la colonia de inters para luego ser aislado en los tubos de
ensayo con el agar sin inductor, todo este proceso se realiz con el debido
cuidado.

ETAPA 10:

POSIBLE

IDENTIFICACION

DE

LOS

ORGANISMOS

MEDIANTE TINCION GRAM


Para la identificacin, se extrajo con el asa bacteriolgica una pequea
muestra de las colonias presentes en los tubos y se los extendi en
presencia de mechero, posterior a eso se procedi a la tincin:
1. Se agreg cristal violeta sobre la muestra, por un periodo de 1 minuto y
30 segundos. Y luego se lav.
2. Seguido, se agreg lugol por un periodo de 30 segundos; y luego se
lav.
3. Posteriormente se agreg alcohol (96) por un periodo de 1 minuto y 30
segundos, y se lo lav.
4. Luego se agreg safranina por un periodo de 4 minutos, luego se lav y
se lo seco al mechero.
Para su posible identificacin se observ en el microscopio a 100x,
mediante la aplicacin del aceite de inmersin.
ETAPA 11: SISTEMATIZACIN DE LOS RESULTADOS EN EL INFORME
FINAL
Despus de concluir con el proyecto de investigacin, se procedi con la
sistematizacin de los datos en el informe final que ser expuesto y
presentado al docente del curso.
4.5.

Poblacin y muestra
Poblacin
Todos los microorganismos presentes en los lixiviados.

Muestra
Todos los microorganismos factibles hacer aislados.

25

4.6.

Tcnicas e instrumentos de recoleccin de datos


4.6.1. Tcnicas
Anlisis cualitativo de los lixiviados.
Anlisis de libros virtuales referente al tema de investigacin
Observacin directa de la zona de estudio.
Uso de los software ArcGIS y Google Earth
Uso del internet como herramienta para bsqueda de
informacin referente al tema de investigacin.
4.6.2. Instrumentos
Se utilizaran los siguientes instrumentos para la obtencin de los
datos:

Balanza analtica
Libreta de campo
Cmara fotogrfica
Microscopio
Escalmetro

4.6.3. Criterios de validez y confiabilidad de los instrumentos


Validez de los Instrumentos: sern evaluados mediante la
revisin de sus mrgenes de error (ajuste tcnico y
calibracin), tambin se har una observacin minuciosa de

la parte externa e interna de los instrumentos.


Confiabilidad de los instrumentos: en caso de los
instrumentos de laboratorio que sern usados, se solicitar el
certificado de verificacin para la obtencin de datos
confiables y seguros.

26

CAPITULO V: ANALISIS E INTERPRETACION DE RESULTADOS


5.1.

Anlisis de datos
PARA LA PRACTICA EN LABORATORIO

COMPUESTOS LIPDICOS
Tabla 01: Medicin de los halos de la placa con disolucin 10 -3
PLACA CON DISOLUCIN 10-3
N de
Halo total
Colonias
(cm)
01
1,9
02
1,9
03
1,9
04
1,9
05
2,9
06
0,8
07
0,5
08
0,7
09
0,7
10
1,1
11
1,1
12
0,7
-4
disolucin 10

Halo de
colonia (cm)
1,2
0,3
0,2
0,9
2,7
0,4
0,3
0,4
0,3
0,2
0,8
0,3

Halo neto
(cm)
0.7
1.6
1.7
1
0.2
0.4
0.2
0.3
0.4
0.9
0.3
0.4

Fuente:

elaboracin

Propia 2014
Tabla 02: Medicin de
los halos de la placa con

PLACA DE DISOLUCION 10 -4
N de
Colonia
s
00
01
02
03
3.1
04
05
06
07
08
09
10

Halo total
(cm)
0.6
2.8
Fue
absorbido
2.9
3.2
0.83
2.4
0.8

Halo de
colonia
(cm)
0.2
0.93
0.2
0.83

Halo neto
(cm)

0.35
2.16
Moho
0.35
Moho
Moho
1.73
0.3

2.55
1.04
0.48
0.67
0.5

0.4
1.87
0.2
0.83

27

Fuente: Elaboracin Propia 2014


Tabla 03: Medicin de los halos de la placa con
Disolucin 10-4 duplicado
PLACA DE DISOLUCION 10 -4 DUPLICADO
N de
Halo total
Halo de
Halo
Colonia
(cm)
colonia
neto
s
(cm)
(cm)
01
0.32
0.32
02
0.4
0.4
03
0.4
0.4
04
1.2
0.05
1.15
05
3.1
2.1
1
06
1.6
1.03
0.57
Fuente: Elaboracin Propia 2014
Tabla 04: Medicin de los halos de la placa de disolucin 10

-5

PLACA DE DISOLUCION 10-5


N de
Halo total
Halo de
Halo neto
Colonia
(cm)
colonia
(cm)
s
(cm)
01
2.3
0.7
1.6
02
1.3
0.9
0.4
03
2.6
2.3
0.3
04
1.4
1.3
0.1
05
2.6
1.6
1
Fuente: elaboracin propia 2014
Tabla 05: Medicin de los halos de la placa de
Disolucin 10-5 duplicado
PLACA DE DISOLUCION 10-5 DUPLICADO
N de
Halo total
Halo de
Halo neto
Colonia
(cm)
colonia
(cm)
s
(cm)
01
0.6
0.4
0.2
02
0.8
0.1
0.7
03
2.8
1.6
1.2
Fuente: elaboracin propia 2014

28

Tabla 06: Medicin de los halos de la placa de disolucin 10 -6


PLACA DE DISOLUCION 10-6
N de
Colonias

Halo total
(cm)

01
02
03

0.5
1.2

Halo de
colonia
(cm)
0.3
0.9
0.2

Halo neto
(cm)
0.2
0.9
1

Fuente: elaboracin propia 2014

COMPUESTO CARBOHIDRATADOS
PLACA DE DISOLUCION 10-3
Halo total
Halo de
Halo neto
-3
(cm)
colonia
(cm)
(cm)
PLACA CON
DISOLUCIN
10

N de
Colonia
s
01N de
Colonias
02
0301
02
03

Halo
12 total
(cm)
14
10 1
0.9
0.5

6 Halo de
colonia
(cm)
11
5 0.62
0.68
0.34

Halo
neto (cm)
6
3
0.38
5
0.22
0.16

Tabla 07:
Medicin de
los halos de
la placa con
disolucin
10-3

Fuente: elaboracin propia 2014


Tabla 08: Medicin de los halos de la placa de disolucin
10 -3 duplicado

Fuente: elaboracin propia 2014

29

COMPUESTOS PROTEICOS
Tabla 09: Medicin de los halos de la placa con disolucin 10

-4

PLACA DE DISOLUCION 10 -4
N de
Halo total
Colonia
(cm)
s
00
0.7
01
0.65
02
1.5
elaboracin propia 2014

Halo de
colonia (cm)

Halo neto (cm)

0.3
0.44
1.36

0.4
0.21
0.14

Tabla 10: Medicin de los halos de la placa con disolucin 10

Fuente:

-4

PLACA DE DISOLUCION 10 -4 DUPLICADO


N de
Halo de
Halo total
Colonia
colonia
Halo neto (cm)
(cm)
s
(cm)
01
1
0.64
0.36
02
1.4
1.22
0.18
03
1.35
1.2
0.15
Fuente: elaboracin propia 2014
Tabla 11: Medicin de los halos de la placa con disolucin 10

N de
Colonia
s
01
02
03

-5

PLACA DE DISOLUCION 10-5


Halo
Halo de
total
colonia
Halo neto (cm)
(cm)
(cm)
2.29
1.3
0.99
0.93
0.7
0.23
1.7
1.5
0.20

Fuente: elaboracin propia 2014


Tabla 12: Medicin de los halos de la placa con disolucin 10

-5

PLACA DE DISOLUCION 10-5 DUPLICADO

30

N de
Colonia
s
01

Halo total
(cm)
1.9

Halo de
colonia
(cm)
1.5

Halo neto (cm)


0.4

Fuente: elaboracin propia 2014


Tabla 13: Medicin de los halos de la placa con disolucin 10

-6

PLACA DE DISOLUCION 10-6


N de
Colonias

Halo total
(cm)

01
02
03

2.62
1.8

Halo de
colonia
(cm)
1.8
1.69

Halo neto (cm)


0.82
0.11
0.26

Fuente: elaboracin propia 2014

METAL PESADO
No se form ninguna colonia en los das de monitoreo.

PARA LA EJECUCION DEL PROYECTO

PARA COMPUESTOS LIPDICOS


Tabla 14: Medicin de los halos de la placa con disolucin 10

N de
Colonia
s
01
02

-5

PLACA DE DISOLUCION 10-5


Halo
Halo
de
total
Halo neto (cm)
colonia
(cm)
(cm)
1.83
1.16
0.67
0.6
0.273
0.327

Fuente: elaboracin propia 2014

Tabla 15: Medicin de los halos de la placa con disolucin 10


N de
Colonia
s
01
02
03

-6

PLACA DE DISOLUCION 10-6


Halo total
Halo de
Halo neto (cm)
(cm)
colonia
(cm)
1.156
0.34
0.816
1.24
0.3
0.94
1.2
0.47
0.73
31

Fuente: elaboracin propia 2014

PARA COMPUESTOS PROTEICOS


Tabla 16: Medicin de los halos de la placa con disolucin 10
N de
Colonia
s
01

-5

PLACA DE DISOLUCION 10-5


Halo de
Halo total
colonia
Halo neto (cm)
(cm)
(cm)
8
1
7

Fuente: elaboracin propia 2014


Tabla 17: Medicin de los halos de la placa con disolucin 10
PLACA DE DISOLUCION 10-6
N de
Halo
Halo
Colonias
total
de
(cm)
coloni
a (cm)
01
Moho
Moho

-6

Halo
neto
(cm)
Moho

Fuente: elaboracin propia 2014

PARA METALES PESADOS

Medicin
halos de
con
10 -6

-6

N de
Colonia
s
01
02

PLACA DE DISOLUCION 10
Halo de
Halo total
colonia
Halo neto (cm)
(cm)
(cm)
0.4
0.2
0.2
0.5
0.2
0.3

Tabla 18:
de los
la placa
disolucin

Fuente: elaboracin propia 2014

INDUCTOR
Huevo (lpido)
Leche (protena)
Almidn (carbohidrato)
Hidrocarburo (Metal pesado)

COLONIAS

HALOS

POSIBLE

FORMADAS
Abundante
Mnima
Mnima
Mnima

FORMADOS
Grande
Mediano
Mediano
Mediano

ORGANISMO
Pseudomona
Bacillus
Bacillus
Pseudomona

Cuadro 02: Cuadro resumen


Fuente: elaboracin propia 2014

32

5.2.

Prueba de la hiptesis
5.2.1. Hiptesis general
Mediante la utilizacion de inductores en medios especificos se logro
aislar e indentificar microorganismos capaces de degradar y
transformar compuestos contaminantes.
5.2.2. Hiptesis especifica

En medios bsicos con la adicin de compuestos lipdicos (lecitina),


proteicos (casena), carbohidratos (Almidn) y metales pesados (cloruro
de mercurio o hidrocarburo) como inductores se logr ensayar el

aislamiento de microorganismos con caractersticas de inters.


Por factores de tiempo y falta de equipos de laboratorio no se logr
evaluar y probar la funcionalidad del lodo activo conformado.

5.3.

Discusin de resultados
Para compuestos lipdicos
Para la identificacin de los organismos presentes en el huevo, se encontr
una cierta dificultad, pero segn los descrito por VANDEVENNE C y
ESCOLA M, menciona que el Bacillus cereus produce lecitinasa, de
manera que degrada lecitina de la yema de huevo formando un halo de
precipitado alrededor de sus colonias, siendo los microorganismo mas
comunes en la degradacin de compuestos lopidicos y el manitol como
medio nos permite la diferenciacin de bacillus cereus, que es un
microorganismo manitol negativo, frente a la flora acompaante manitol
positiva, que hace que el rojo fenol del medio vire de rojo a amarillo.
Asimismo, el crecimiento de la flora acompaante se ve inhibido por la
polimixina, que no afecta al crecimiento bacillus cereus.

Para compuestos carbohidratos


Para la medicin de los halos formados por la degradacin de compuestos
carbohidratos se aplic el revelador lugol, se observ los diferentes tonos
de colores; FLORES CH; hace mencin que el almidn en contacto con el

33

reactivo de Lugol (disolucin de yodo y yoduro potsico) toma un color


azul-violeta caracterstico. Esa coloracin producida por el Lugol se debe a
que el yodo se introduce entre las espiras de la molcula de almidn. Por lo
tanto, no es una verdadera reaccin qumica, sino que se forma un
compuesto de inclusin que modifica las propiedades fsicas de esta
molcula, apareciendo la coloracin azul violeta.
BOLAOS N tambin hace mencin que ste proceso es usado
para determinar la presencia o alteracin de almidn u otros polisacridos.
La amilosa, el componente del almidn de cadena lineal, forma hlices
donde se juntan las molculas de yodo, formando un color azul oscuro a
negro. La amilopectina, el componente del almidn de cadena ramificada,
forma hlices mucho ms cortas, y las molculas de yodo son incapaces
de juntarse, obtenindose un color entre naranja y amarillo.

Para compuestos proteicos


Durante el primer da de monitoreo, en la placa que contena inductor de
leche

(10-6)

se

encontr

una

colonia

de

microorganismos,

que

problablemente sea un moho, segn la investigacin realizada en la


Universidad Nacional Abierta y a Distancia, cuyo tema fue acerca de los
mohos y levaduras, hace mencin que los mohos realmente no se
presentan en la leche cruda y en algunos productos lcteos solo atacan la
parte superficial que est en contacto con el aire. Siendo esto una de las
principales causas de la existencia de dicho microorganismos en la placa.

Para metales pesados


Despus de los cuatro das de muestreo, no se observ la formacin de
ningn halo, imposibilitando su medicin,
mencin

en

su

trabajo

de

Snchez L, Senz E, hace

investigacin

titulado

Antispticos

Desinfectantes, al cloruro de mercurio, era usado como desinfectante


potente, siendo muy txico, y no se puede usar en reas extensas de la
piel, debido a su accin esencialmente bacteriosttica y fungisttica.
Mediante el uso del hidrocarburo como inductor, se logr la
formacin de colonias de microrganismo capaces de transformar metales
pesados, segn la investigacin realizada por la Universidad de
Antofagasta. 2005. Contaminacin por hidrocarburo en la zona costera de
la ciudad de Antofagasta, hace mencin que los productos derivados del

34

Petrleo, en general son mezclas complejas de hidrocarburos (HBC) tipo


n-alcanos, alcanos ramificados, ciclo alcanos e hidrocarburos aromticos
(mono y polibencnicos), y pueden contener metales pesados como Pb, V,
Ni, Co, Fe.

CAPITULO VI: CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES


5.4. Conclusiones
Se concluye que si fue factible aislar microorganismos a aprtir del lixiviado
del botadero, capaces de degradar los diferentes compuestos de interes
como lipidos, proteinas, carbhidratos y metales pesados, obteniendo
35

como

posibles

identificaciones

de

microorganismos

mediante

la

coloracion gram los siguientes:


- Para lipidos: Pseudomona
- Para proteinas: Bacillus
- Para metal pesado: Pseudomona
- Carbohidrato: Bacillus
Repecto a los inductores estos fueron muy efectivos permitiendonos
obtener buenos resultados de acuerdo a la formacion de colonias y la
capacidad degradadora de estas, siendo el hidrocarburo un buen inductor
para el aislamiento de microorganismos capaces de transformar metales
pesados.
Ya una vez lograda el aislamiento, no se pudo probar la accion de los
microorganismos, ya que nos falto el tiempo y la accesibilidad de ciertos
insumos y materiales, no cumpliendo asi con uno de los objetivos
especificos.
5.5. Recomendaciones
-

Se recomienda la utilizacin de hidrocarburo como inductor de metales

pesados y no el cloruro de mercurio.


Para la mejor obtencin de resultados se implementara equipos modernos

e insumos presentes en el laboratorio.


Para el aislamiento de microorganismos se debe trabajar con materiales
esterilizados, evitando as el desarrollo de microrganismos ajenos a los de

inters.
Para la identificacin de microorganismos se debera usar un microscan.

36

FUENTES DE INFORMACIN
LOAIZA NAVIA J. (2010). Modelacin el proceso de lodos activados en la Planta
de tratamiento de Aguas Residuales Noreste, Apodaca, N.L.
LPEZ TORRES M, VELIZ E, FERNNDEZ GARCA LA et al. Tratamiento de
lodos. Una etapa necesaria dentro del proceso tecnolgico. Revista CENIC.
2010; vol. 41: pp. 1-6.
SALAZAR L., CRESPI M.,
SALAZAR R. (2009) Tratamiento de aguas
residuales textiles mediante un biorreactor de membrana.
PABN S.; SUREZ J. Arranque y operacin a escala real de un sistema de
tratamiento de lodos activos para aguas residuales de matadero revista
ingeniera e investigacin vol. 29 no. 2, agosto de 2009; pg. (53-58).
GONZALES CRUZ, M 2010. Definicin de trminos bsicos.

Ley de recursos hidricos, Ley N 29338.


D.S. N 003-2010-MINAM
Ley General Del Ambiente - Ley N 28611, Artculo 121.- Del vertimiento de
aguas residuales.
BARAY A.(2006). Introduccin a la metodologa de la investigacin. Edicin
electrnica.
VAN DALEN DB y MEYER WJ. (1944). Manual de tcnica de investigacin.
SNCHEZ CARLESSI H. y REYES MEZA C. (2006)
ALCARAZ JUAREZ A. (2008). Aislamiento E Identificacin De Microorganismos
En Lodos Activados.
BROCK. (2010). Biologa de los microorganismos.

37

ANEXOS
Anexo 01: Matriz de Consistencia.
TITULO

AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS A PARTIR DE LIXIVIADOS DEL BOTADERO MUNICIPAL PARA LA FORMACION DE LODOS ACTIVOS CON FINES DE MITIGACION AMBIENTAL TARAPOTO 2014
GENERAL

Sera factible aislar microorganismos a partir del lixiviado del botadero municipal para la formacin de lodos activos con fines de mitigacin ambiental?
Facilitarn los inductores el aislamiento de microorganismos a partir del lixiviado del botadero municipal?

PROBLEMA
ESPECFICOS

Cmo probar el funcionamiento del lodo activo conformado por microorganismos a partir del lixiviado del botadero municipal?
GENERAL

Mediante la utilizacin de inductores en medios especficos se aislaran e identificara microorganismos degradadores y transformadores de compuestos contaminantes.
Evaluar los inductores para el aislamiento de microorganismos a partir del lixiviado del botadero municipal.

OBJETIVOS
ESPECFICOS

Probar el funcionamiento del lodo activo en la mitigacin ambiental.

H. GENERAL:

-Mediante la utilizacin de inductores en medios especficos se aislaran e identificara microorganismos degradadores y transformadores de compuestos contaminantes.
HIPTESIS

H. ESPECFICA:
-En medios bsicos con la adicin de compuestos lipdicos (lecitina), proteicos (lactosa), carbohidratos (Almidn) y metales pesados (flor) como inductores se ensayara el aislamiento de microorganismos con caractersticas de inters.

-Mediante el principio de la prueba del granulo anaerbicos ser factible evaluar y probar la funcionalidad del lodo activo conformado

INDEPENDIENTE

VARIABLES
DEPENDIENTE

METODOLOGA

Inductores (Lecitina,
almidn, lactosa y cloruro
de mercurio e
hidrocarburo).
Aislamiento de organismos
degradadores
y
transformadores de lpidos,
carbohidratos, protenas y
metales pesados.

DE

El inductor suele ser el sustrato de una

Capacidad para estimular la produccin de

FIN

ruta catablica, o una molcula muy

enzimas especficas.

ICI

semejante al sustrato natural.

EP
TU

Exo-enzimas.
DIME

CO
NC

Endo-enzimas.

Son colonias

bacterianas perteneciente

a una misma especie, con capacidad


degradadora y especficas.

NSIO

INDIC

Crecimiento en medios especficos.

NES

ADO
RES

Tolerancia a compuestos especficos.

AL

Etapa 01: coordinacin con los laboratorios


Etapa 02: adquisicin de insumos e instrumentos de laboratorio
Etapa 03: forrado de los materiales para la esterilizacin
Etapa 04: esterilizacin de los materiales
Etapa 05: obtencin de la muestra de lixiviado
Etapa 06: practica en laboratorio
Etapa 07: ejecucin del proyecto
Etapa 08: medicin de los halos
Etapa 09: aislamiento de los organismos
Etapa 10: posible identificacin de los organismos mediante tincin Gram
Etapa 11: sistematizacin de los resultados en el informe final

Fuente: Elaboracin propia 2014.

38

-Dimetro del halo


-Reduccin del sustrato.
-Formacin mltiple de colonias.

Anexo 02: Adquisicin de materiales de laboratorio

Materiales comprados por el grupo para la


realizacin del presente proyecto de investigacin.

Anexo 03: Monitoreo del halo formado

Colonias formadas en el agar con inductor de huevo


(lesitina)

39

Anexo 04: Microorganismos gram aislados

Microorganismos encontrados en el inductor de


huevo.

Microorganismos encontrados en el inductor de leche

Microorganismo rugoso encontrado en el inductor de


metal pesado (Hidrocarburo)

Microorganismo liso encontrado en el inductor de


metal pesado (Hidrocarburo)

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