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CONTROL DE CALIDAD

INTERNO
En el Laboratorio Clnico

DAYAN CRCAMO
JACQUELINE FERNANDES
CAMILA VARGAS
Inmunologa Clnica
Docente: Gloria Arismendi
10 / 06 / 2015

INDICE

Introduccin __________________________________________________________________________ Pgina 2


Marco Terico
Control de Calidad Interno_______________________________________________________ Pginas 36
Marco Prctico
Metodologa de Trabajo __________________________________________________________ Pgina 7
Protocolo de Trabajo _____________________________________________________________ Pgina 7-8
Determinacin de Suero control
cido rico _________________________________________________________________________ Pginas 9-11
Albumina ___________________________________________________________________________ Pginas 12-14
Colesterol __________________________________________________________________________ Pgina 15-17
Protena total ______________________________________________________________________ Pginas 18-20
Triglicridos _______________________________________________________________________ Pginas 21-23
Conclusin _____________________________________________________________________________ Pgina 24
Bibliografa ____________________________________________________________________________ Pgina 25

INTRODUCCIN

El objetivo del laboratorio clnico es proporcionar informacin til para el cribado,


diagnstico, tratamiento y seguimiento de las enfermedades. Con este objetivo en el
laboratorio se realizan una serie de mediciones, aplicando procedimientos de medida
diferentes, que mediante estrategias bien definidas, deberan permitir obtener
informacin fiable y segura.
Por lo tanto en la prctica diaria del laboratorio clnico es esencial y es prioridad
otorgar prestaciones que cumplan con los requisitos de calidad, y realizar cambios,
para establecer una mejora continua de sus procesos.
La implementacin de un sistema de gestin de calidad, es importante, porque
permite el desarrollo de estrategias que pueden conducir a, la identificacin de
problemas analticos, con lo cual pueden dirigirse esfuerzos para la resolucin,
limitacin, eliminacin, o prevencin, de errores en beneficio del laboratorio, y de la
comunidad que solicita el servicio.
Segn lo anterior los laboratorios nacionales, se han adjuntado a un sistema de
gestin de calidad, implementado por el Instituto de Salud Pblica de Chile, con la
finalidad de mejorar la calidad del servicio, otorgado por estos centros hacia a sus
usuarios, entregndoles a estos, la confianza de que los resultados entregados de sus
respectivos anlisis biolgicos, sean certeros y fidedignos.
Para ello, se han desarrollado herramientas tecnolgicas, como informticas, que
permiten, planear y controlar la calidad analtica de los exmenes, asegurando la
liberacin de resultados tiles, para el diagnstico clnico. Para cumplir tales
objetivos, se establece tanto un Control de Calidad Externo y un Control de Calidad
Interno en el laboratorio que tienen como objetivo, el seguimiento de los procesos
pre analtico, analtico, y post analticos, para el aseguramiento de la calidad del
laboratorio.
En el siguiente trabajo se abordara especficamente el control interno del laboratorio
de la seccin de bioqumica clnica, aplicado en un marco prctico, el cual se bas en el
uso de un material de control (hecho en el laboratorio) para la revisin de diferentes
analitos, utilizados en el laboratorio de docencia de la Universidad Santo Toms, y
mediante los resultados de estos controles estableces mtodos para su evaluacin.

MARCO TERICO

Control de calidad Interno


El propsito de control de calidad interno es evaluar el desempeo del sistema de
medicin para liberar los resultados de las muestras de pacientes procesadas bajo las
mimas condiciones de trabajo, permiten detectar desvos y variabilidad del sistema
analtico para tomar acciones preventivas y apoyar en la mejora del desempeo.
EL proceso ms importante que es evaluado dentro del control interno de calidad del
laboratorio es la etapa analtica y una forma de poder evaluar el desempeo analtico
de los procesos de medicin de analitos es el uso de materiales de control.
Se define como material de control como un lquido o sustancia liofilizada de origen
humano, animal o qumico que se usan para monitorear la calidad y consistencia del
proceso analtico. El profesional debe seleccionar el material de control basado en las
siguientes premisas:

Que se parezcan lo ms posible a muestras de pacientes en cuanto a su


reactividad con el sistema de medicin utilizado.

Se pueden elegir de primera opinin o de tercera opinin siendo los ltimos


ms recomendables como alternativa.

Los controles pueden ser preparados por el propio laboratorio (pool de sueros
normales), este debe realizarse con las precauciones de estabilidad y
seguridad para el personal de laboratorio.

Se debe seleccionar considerando su estabilidad disponibilidad en cantidad


para mantener un stock por al menos de 6 meses.

El nivel de concentracin del control en lo posible debe estar comprendido en


el intervalo de referencia comprendido en el intervalo de referencia biolgica
normal, bajo o sobre este.

Cuadro 1: Flujograma para el aseguramiento de la calidad analtica en el laboratorio clnico.

Para evaluar los resultados obtenidos desde los controles y analizarlos se cre un
mtodo llamado carta control de Levey Jenning.
Este es un mtodo grafico que muestra los resultados de los controles y como estos se
comportan en un periodo de tiempo determinado.
Los resultados se grafican secuencialmente en el tiempo (eje X), y el resultado de la
medicin (eje Y).
Para realizar la carta control de Levey Jennigs debemos:

Obtener con cada uno de los controles como mnimo 20 resultados en a


lo menos 20 das distintos. Si se dispone de menos tiempo se pueden
hacer dos determinaciones diarias por 10 das consecutivos y
establecer una media y desviacin standard provisoria, hasta tener un
mes de resultados.

Eliminar los valores extremos por la prueba de Dixon o Grubbs u otro


que cumpla con el mismo objetivo.

Los resultados obtenidos durante la valoracin de material control


permite calcular la media aritmtica y desviacin estndar para poder
construir la carta control.
o Media

Es la suma de los alores de todas las


observaciones dividida por el nmero de
observaciones

o Desviacin estndar

Se define como la raz cuadrada de la


varianza. Permite obtener una medida de la
variabilidad de los datos expresados en la
misma unidad de medida de la variable.

o Coeficiente de

Expresa la desviacin
porcentaje de la media.

variacin

estndar

como

Se sugiere calcular el coeficiente de variacin del mtodo al menos


mensualmente para conocer su imprecisin y posterior anlisis de su
desempeo.

En la carta control de Levey Jenning se deben aplicar las reglas de


Westgard que son una serie de pautas de control usadas en el
procedimiento de control de calidad para analizar la medicin del control
(ver cuadro 2).-

Cuadro 2: Reglas de Westgard y el tipo de error al que se asocian

MARCO PRCTICO

Se realiz en el laboratorio de docencia de la universidad Santo Tomas, el control de


calidad en bioqumica clnica a travs de material de control, con el objetivo de poder
aplicar los contenidos mencionados en este trabajo.

Metodologa de trabajo
Se realiz un control de calidad interno en una corrida analtica de varios analitos
utilizando un material de control realizado por el grupo de trabajo, se analiz los
datos obtenidos a travs de la carta de control de Levy Jenning, y esta a su vez se le
aplicaron las reglas de Westgard para poder ver el comportamiento de nuestro
control en un periodo de tiempo.

Protocolo de trabajo

1. Obtencin de 10 muestras sanguneas de pacientes


sanos y que se encontraban en ayuno completo. La
obtencin de la muestra se realiza
en tubos sin anticoagulante (tapa
roja).

2. Posteriormente se procedi a centrifugar las


muestras sanguneas con el objetivo de separar los
elementos sanguneos y as obtener suero. La
centrifugacin se realiza a 3500 rpm por 5 minutos.
3. Luego de centrifugar y obtener los sueros de cada
muestra, se procedi a extraer el suero residual para colocarlo en un tubo
khan. Los sueros ya separados se centrifugaron nuevamente para evitar
el hallazgo de trazas de sangre total.

4. Ya obtenido los sueros, en un matraz estril se procedi a


colocar todos los sueros para as lograr mezclarlos de manera
homognea. Despus se dispuso a colocar de manera
equitativo el suero en diferentes tubos, para que puedan ser
utilizados como material de control.
5. Se utiliz este material de control para los siguientes analitos: Protenas
totales, Albumina, cido rico, Colesterol y Triglicridos.
6. El anlisis bioqumico fue semi automatizado con la
medicin a travs de mtodos espectrofotomtricos.

A continuacin se presentarn los resultados de cada uno delos analitos mencionados


anteriormente, con sus respectivos factores de calibracin, absorbancia de cada
lectura y la concentracin que se obtuvo en cada una de ellas. Adems se adjunta el
Grfico de Levey Jennings para cada uno de los ndices medidos.

DETERMINACIN DE CIDO RICO PARA POOL DE SUERO CONTROL


Es el principal producto del catabolismo de las bases pricas, excretado por la orina.se
forma a partir de la xantina por accin de la xantino oxidasa se sintetiza
principalmente en el hgado y el intestino delgado. El adulto tiene un contenido de 1,2
gramos en el organismo.

Mtodo Uricasa Enzimtico

Fundamento del Mtodo:


El cido rico es oxidado por la accin de la uricasa, en alantoina y perxido de
hidrgeno. En presencia de peroxidasa (POD) la mezcla de diclorofenol sulfonato
(DCFS) y 4 aminoantipirina (4-AA) se condensan por accin del perxido de
hidrgeno, formando una quinonaimina coloreada proporcional a la concentracin de
cido rico en la muestra.

Concentracin del estndar: 8 mg/dl


Absorbancia del estndar: 0,146
Longitud de onda: 546 nm
Tipo de reaccin: Ascendente enzimtico
Tiempo de incubacin: 5 minutos a 37C
Rango de referencia: H: 3,5 7,2 mg/dl // M: 2,6 6 mg/dl

=
. =

Concentracin estandar
Absorbancia estandar

8 mg/dl
0,146

F.C = 54, 79 mg/dl

CIDO RICO

Lecturas
L1
L2
L3
L4
L5
L6
L7
L8
L9
L10
L11
L12
L13
L14
L15
L16
L17
L18
L19
L20

Absorbancia

Concentracin
(FC x Abs)

0,093
0,090
0,103
0,092
0,081
0,085
0,080
0,082
0,074
0,073
0,082
0,087
0,088
0,089
0,093
0,074
0,076
0,071
0,079
0,086

5,09 mg/dl
4,93 mg/dl
5,64 mg/dl
5,04 mg/dl
4,43 mg/dl
4,65 mg/dl
4,38 mg/dl
4,49 mg/dl
4,05 mg/dl
3,99 mg/dl
4,49 mg/dl
4,76 mg/dl
4,82 mg/dl
4,89 mg/dl
5,09 mg/dl
4,05 mg/dl
4,16 mg/dl
3,89 mg/dl
4,32 mg/dl
4,71 mg/dl

Promedio

4,593
5

Desviacin estndar:

0,45252828

Coeficiente de variacin:

9,8514 %

10

CONCENTRACION g/L

Grfico de Levey Jennings

LECTURA

SIMBOLOGIA
Promedio
1era desviacin estndar
2da desviacin estndar
Concentracin del pool de muestras

11

DETERMINACIN DE ALBUMINA PARA POOL DE SUERO CONTROL


La albmina srica constituye ms de la mitad de las protenas sanguneas y en una
forma muy general representa aproximadamente el 50% de la actividad sinttica del
hgado. La albmina humana es una pequea protena relativamente simtrica y que
siendo la principal protena del plasma, es una molcula altamente soluble, que a
pesar de su elevada carga negativa puede ligarse reversiblemente tanto con cationes
como con aniones, lo que hace posible que su situacin plasmtica sea ptima para
poder transportar o inactivar una serie de sustancias como metales pesados, drogas,
tinturas, cidos grasos, hormonas y enzimas. Su principal indicacin se relaciona con
su accin onctica como un excelente expansor del volumen plasmtico. Los efectos
fisiolgicos de la propiedad de ligarse que tiene la albmina a otras sustancias, pueden
ser determinantes para la utilizacin futura de esta protena.

Mtodo Biuret Colorimtrico


Fundamento del mtodo
La albmina reacciona especficamente sin separacin previa con la forma aninica de
la 3,3',5,5'-tetrabromo cresolsulfon ftalena (BCF), en presencia de un exceso de
colorante, en medio tamponado a pH 3,8. El aumento de absorbanciaa 625 nm
respecto del Blanco de reactivo, es proporcional a la cantidad de albmina presente en
la muestra.

Concentracin del estndar: 2,7 g/dl


Absorbancia del estndar:2,57
Longitud de onda: 625 nm
Tipo de reaccin: Ascendente enzimtico
Tiempo de incubacin: 10 minutos a T ambiente
Rango de referencia: 3,5 4,8 g/dl

=
. =

Concentracin estandar
Absorbancia estandar

2,7 g/dl
2,57

F.C = 1,05 g/dl

12

Albumina
Lectura
L1
L2
L3
L4
L5
L6
L7
L8
L9
L10
L11
L12
L13
L14
L15
L16
L17
L18
L19
L20

Absorbancia (ABS)
3,31
3,35
3,32
3,30
3,33
3,41
3,44
3,39
3,36
3,43
3,38
3,85
3,44
3,37
3,42
3,43
3,36
3,45
3,50
3,52

Concentracin (FC x ABS)


3,47
3,81
3,48
3,46
3,49
3,58
3,61
3,55
3,52
3,6
3,9
3,7
4,62
3,5
3,59
3,6
3,52
3,62
3,67
3,69

Promedio

6,6145

Desviacin estndar:

0,27955745

Coeficiente de variacin:

4,2264 %

13

CONCENTRACION g/L

Grfico de Levey Jennings

LECTURA

SIMBOLOGIA
Promedio
1era desviacin estndar
2da desviacin estndar
Concentracin del pool de muestras

14

DETERMINACIN DE COLESTEROL PARA POOL DE SUERO CONTROL


El colesterol es un lpido esteroide que se encuentra en los tejidos corporales y en
plasma sanguneo. Las concentraciones ms altas de este lpido las encontramos en
cerebro, hgado, medula espinal y pncreas. Est constituido por cuatro carboxilos y
posee una cabeza polar formada por el grupo OH y una porcin apolar.
El colesterol lo obtenemos de forma exgena a travs de la dieta y de forma endgena
sintetizndose en el hgado, es precursor de hormonas y sales biliares y es uno de los
principales componentes estructurales de las membranas plasmticas de todas
nuestras clulas a las que les otorga firmeza.
La determinacin de colesterol en forma aislada en una muestra sangunea tiene
utilidad diagnostica limitada, sin embargo, su concentracin ser indicativo de
diversas condiciones clnicas y patolgicas. Se ha visto que el colesterol es uno de los
factores contribuyentes en la formacin de ateromas dado que las complicaciones
aterosclerticas prevalecen en individuos hipercolesterolemicos, lo cual es un riesgo
latente a contraer enfermedad cardiaca coronaria y como consecuente un infarto
agudo al miocardio.

Mtodo CHOD PAP colorimtrico


Fundamento:
El Colesterol es oxidado enzimticamente por la colesterol oxidasa (CHOD), previa
hidrlisis enzimtica de los steres mediante una lipasa de origen fungal. El Agua
oxigenada (H2O2) generada en la oxidacin permite la unin oxidativa del fenol con la
4-aminofenazona (4-AF) mediante una reaccin catalizada por la peroxidasa (POD). El
indicador final es la quinonimina roja.

Concentracin del estndar: 200 mg/dl


Absorbancia del estndar: 0,328
Longitud de onda: 505 nm
Tipo de reaccin: Ascendente enzimtico
Tiempo de incubacin: 5 minutos a 37C
Rango de referencia: <200 mg/dl

=
. =

Concentracin estandar
Absorbancia estandar

200 mg/dl
0,328

F.C = 610
15 mg/dl

Colesterol
Lectura

Absorbancia (ABS)

Concentracin (FC x ABS)

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20

0,276
0,272
0,335
0,273
0,257
0,249
0,287
0,231
0,252
0,329
0,254
0,237
0,251
0,241
0,247
0,254
0,277
0,281
0,287
0,266

168 mg/dl
166 mg/dl
204 mg/dl
167 mg/dl
157 mg/dl
152 mg/dl
175 mg/dl
141 mg/dl
154 mg/dl
201 mg/dl
155 mg/dl
145 mg/dl
153 mg/dl
147 mg/dl
151 mg/dl
155 mg/dl
169 mg/dl
171 mg/dl
175 mg/dl
162 mg/dl

Promedio

163,4

Desviacin estndar:

16,59

Coeficiente de variacin:

10,15 %

16

CONCENTRACION g/L

Grfica de Levey Jennings

LECTURA

SIMBOLOGIA
Promedio
1era desviacin estndar
2da desviacin estndar
Concentracin del pool de muestras

17

DETERMINACIN DE PROTENAS TOTALES PARA POOL DE SUERO CONTROL


Las protenas son compuestos orgnicos macromoleculares, ampliamente distribuidos
en el organismo y esenciales para la vida. Actan como elementos estructurales y de
transporte aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de
coagulacin, etc.

Mtodo Biuret Colorimtrico


Fundamento del Mtodo:
Los enlaces peptdicos de las protenas reacciones con el in cprico, en medio
alcalino, para dar un complejo color violeta, con mximo de absorcin a 540 nm, cuya
intensidad es proporcional a la concentracin de protenas totales en la muestra.

Concentracin del estndar: 4,7 g/dl


Absorbancia del estndar: 1,105
Longitud de onda: 540 nm
Tipo de reaccin: Ascendente enzimtico
Tiempo de incubacin: 5 minutos a 37C
Rango de referencia: 6,1 7,9 g/dl

=
. =

Concentracin estandar
Absorbancia estandar

4,7 g/dl
1,105

F.C = 4,25 g/dl

18

PROTENAS TOTALES

Lecturas

Absorbancia

Concentracin
(FC x Abs)

L1
L2
L3
L4
L5
L6
L7
L8
L9
L10
L11
L12
L13
L14
L15
L16
L17
L18
L19
L20

1,64
1,57
1,59
1,57
1,58
1,63
1,62
1,64
1,54
1,48
1,62
1,55
1,55
1,65
1,42
1,45
1,53
1,51
1,57
1,53

6,97 g/dl
6,6 g/dl
6,75 g/dl
6,7 g/dl
6,72 g/dl
6,92 g/dl
6,88 g/dl
6,97 g/dl
6,54 g/dl
6,2 g/dl
6,8 g/dl
6,5 g/dl
6,58 g/dl
7,0 g/dl
6,0 g/dl
6,16 g/dl
6,5 g/dl
6,4 g/dl
6,6 g/dl
6,5 g/dl

Promedio

6,6145

Desviacin estndar:

0,27955745

Coeficiente de variacin:

4,2264 %

19

CONCENTRACION g/L

Grfico de Levey Jennings

LECTURA

SIMBOLOGIA
Promedio
1era desviacin estndar
2da desviacin estndar
Concentracin del pool de muestras

20

DETERMINACIN DE TRIGLICERIDOS PARA POOL DE SUERO CONTROL


Los triglicridos son lpidos absorbidos en la dieta y tambin producidos en forma
endgena a partir de los carbohidratos. Su medicin es importante en el diagnstico y
manejo de las hiperlipidemias. Estas enfermedades pueden tener origen gentico o
ser secundarias a otras tales como nefrosis, diabetes mellitus y disfunciones
endcrinas. El aumento de triglicridos se ha identificado como un factor de riesgo en
enfermedades aterosclerticas.

Metodo GPO PAP Colorimtrico


Fundamento:
Los triglicridos son hidrolizados por una lipasa especfica liberando cidos grasos y
glicerol. El glicerol es fosforilado por la enzima gliceroquinasa y posteriormente, el
glicerol-1-fosfato es oxidado a dihidroxiacetona fosfato por la enzima glicerol-fosfato
oxidasa, generndose perxido de hidrgeno. Posteriormente, en una reaccin del
tipo Trinder, el perxido de hidrgeno reacciona con 4-Aminoantipirina y el cido 3,5Dicloro-2-Hidroxi-bencensulfnico para producir por medio de la enzima peroxidasa
un compuesto coloreado en cantidad proporcional a la concentracin de triglicridos
presente en la muestra.

Concentracin del estndar: 200 mg/dl


Absorbancia del estndar: 0,264
Longitud de onda: 505 nm
Tipo de reaccin: Ascendente enzimtico
Tiempo de incubacin: 5 minutos a 37C
Rango de referencia: <150 mg/dl

=
. =

Concentracin estandar
Absorbancia estandar

200 mg/dl
0,264

F.C = 757 mg/dl

21

Triglicridos
Lectura

Absorbancia (ABS)

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20

0,114
0,143
0,133
0,109
0,101
0,131
0,127
0,111
0,097
0,129
0,186
0,127
0,120
0,141
0,156
0,113
0,205
0,095
0,112
0,122

Concentracin
(FC x ABS)
86 mg/dl
108 mg/dl
100 mg/dl
83 mg/dl
76 mg/dl
99 mg/dl
96 mg/dl
84 mg/dl
73 mg/dl
98 mg/dl
140 mg/dl
96 mg/dl
91 mg/dl
107 mg/dl
118 mg/dl
86 mg/dl
155 mg/dl
72 mg/dl
85 mg/dl
92 mg/dl

Promedio

118,1

Desviacin estndar:

20,959

Coeficiente de variacin:

21,54 %
22

CONCENTRACION g/L

Grafica de Levey Jennings

LECTURA

SIMBOLOGIA
Promedio
1era desviacin estndar
2da desviacin estndar
Concentracin del pool de muestras

23

CONCLUSIN

En la actualidad en los laboratorios clnicos es indispensable contar con un sistema de


calidad que gestione todos los procesos pre analticos, analticos y post analticos de
las secciones propias de un laboratorios, con el objetivo de entregar a sus usuarios un
servicio confiable.
En base a lo anterior se establecen tanto controles internos como controles externos
siendo el primero el de mayor importancia en la prctica diaria. Y se define como
El conjunto de operaciones emprendidas por el personal de un laboratorio para la
evaluacin contina de la fiabilidad de su trabajo.
En este control interno podemos evaluar nuestros procesos analticos a travs de
materiales controles los cuales pueden ser comerciales o elaborados por el mismo
laboratorio, los cuales tienen como finalidad el verificar si los proceso realizados son
los correctos.
A travs del marco prctico se pudo comprobar la importancia de comprender cada
uno de los mtodos utilizados para evaluar el desempeo analtico de las pruebas
bioqumicas, siendo de gran ayuda en el aprendizaje continuo.

24

BIBLIOGRAFA

Educacin continuada en el laboratorio clnico/ Control de la calidad interno:


una prctica muy actual; 2011-2012 Ed Cont Lab Cln; 15: 97-111.
Documentos tcnicos para el Laboratorio clnico; Gua tcnica para control de
calidad de mediciones cuantitativas en el laboratorio clnico, / 2005.
Ricardo Guglielmone (col), Verificacin de mtodos en un laboratorio
acreditado y planificacin del control de calidad interno; Acta Bioqum Cln
Latinoam 2011; 45 (2): 335-47

25