INTRODUCCIN

Este trabajo tiene como marco terico, el desarrollo de las Reacciones del
cido Tricarboxilico o llamado tambin Ciclo de Krebs, y las Reacciones
Anapleroticas, adems de su Regulacin de Ciclo,

se llama de Krebs, en

honor de su descubridor Hans Krebs, fue la consecuencia de propuestas,

experimentos y deducciones brillantes que han marcado un hito en la
historia y el desarrollo de la Bioqumica. Krebs bas sus estudios en los
realizados previamente por Thumberg, Szent Gyorgyi, Martius, Knoop y
Ochoa y sus primeros resultados los public en 1937 en las revistas
Enzymologia y Lanzet.
En cada vuelta del ciclo de Krebs una molcula de acetilo (del acetil-CoA) de
dos tomos de carbono se condensa con una molcula de cido oxalactico
de cuatro tomos de carbono para formar cido ctrico, un compuesto de
seis tomos de carbono. Este ltimo se oxida mediante una secuencia de
reacciones, de tal modo que se liberan dos molculas de CO2 y se genera
una molcula de cido oxalacetato. Este compuesto puede combinarse con
otra molcula de acetilo, iniciando el ciclo de forma cclico.
La regulacin del ciclo hace posible la produccin de molculas de acuerdo
a las necesidades celulares, y asegura que no ocurra sobre o sub produccin
en un momento dado. La regulacin del ciclo se da en diferentes puntos,
porque puede alimentarse o ser abastecido a travs de cualquiera de sus
intermediarios. La regulacin es compleja en comparacin con la de vas
catablicas como la gluclisis, y se considerarn situaciones de regulacin
relacionadas al estado energtico celular.

EL CICLO DE LOS CIDOS TRICARBOXLICOS

Este ciclo, conocido tambin como de los cidos tricarboxlicos o ciclo de
Krebs, es la va de oxidacin de la mayor parte de carbohidratos, cidos
grasos y aminocidos y genera numerosos metabolitos intermediarios de
otras rutas metablicas. Es, por lo tanto, un ciclo anfiblico, es decir, opera
catablica y anablicamente.
Una visin general del ciclo del cido ctrico nos muestra una secuencia de
reacciones que, en la mitocondria, oxidan el grupo acetilo del acetil-CoA a
dos molculas de dixido de carbono, de forma que se conserva la energa
libre producida, utilizndola en la sntesis de ATP. El ciclo fue propuesto por
Hans Krebs en 1937.
En condiciones aerbicas, el acetil-CoA que se encuentra en la mitocondria
es oxidado completamente hasta CO2 mediante una ruta conocida como el
ciclo de los cidos tricarboxlicos (TCA), o ciclo de Krebs.
Esta ruta es la parte final de la degradacin de todas las molculas que
funcionan como combustible: los aminocidos, los cidos grasos y los
carbohidratos.
Generalmente, las entradas al ciclo inician con acetil-CoA, aunque otros
intermediarios pueden continuar con el proceso.
El ciclo de Krebs ocupa un lugar central en el metabolismo celular, por lo
que es regulado por otras rutas y recibe entrada de sustratos de varias
rutas.
Los pasos que lo integran incluyen reacciones degradativas y anablicas,
por ello que site en esa posicin central. Se dice, por lo tanto, que el ciclo
de Krebs es una ruta anfiblica finamente regulada por otras rutas.
Protenas, triglicridos y polisacridos pueden proveer de acetil-CoA a la
ruta.

El ciclo del cido ctrico se complementa con la cadena respiratoria de

transporte de electrones, de modo que los productos de NADH y FADH 2 que
produce el ciclo pueden volverse a oxidar en dicha cadena.

El ciclo de Krebs est regulado por la piruvato deshidrogenasa, ya que la

conversin de piruvato a acetil-CoA es el paso previo para la ruta.

FUNCIONES DEL CICLO DE KREBS

Produce la mayor parte del dixido de carbono en los tejidos animales.
Es la mayor fuente de coenzimas que impulsan la produccin de ATP en la
cadena respiratoria.
Dirige el exceso de energa hacia la biosntesis de cidos grasos, por lo cual
permite el almacenamiento energtico.
Proporciona precursores para la biosntesis de protenas y cidos nucleicos.
Sus
componentes
regulan
directamente
(producto-precursor)
indirectamente (alostricamente) otras rutas metablicas.

En el ciclo de los cidos tricarboxlicos intervienen ocho enzimas que se

encuentran en la matriz mitocondrial.
De estas ocho enzimas, cuatro son oxidorreductasas que son coenzimas que
captan equivalentes reductores (hidruro o hidrgeno).
Provee intermediarios que son sustratos para otras rutas anablicas.

ESTEQUIOMETRA
En dos pasos oxidativos, entre citrato y succinil-CoA, se pierden dos
carbonos en forma de CO2, de modo que estequiomtricamente se ha
oxidado completamente el acetil-CoA.
El balance general del ciclo indica que el acetilo activo se oxida por
completo a 2 CO2 y que se producen cuatro pares equivalentes reductores,
tres como NADH + H+ y uno como FADH2, los cuales se utilizan despus para
generar energa.
Adems, el acoplamiento con la cadena respiratoria genera la mayor
produccin de ATP en el organismo, y la ms importante.
La regulacin del ciclo de Krebs en las clulas animales ocurre
fundamentalmente en dos sitios: primero a nivel de la piruvato
deshidrogenasa y luego a nivel de la isocitrato deshidrogenasa, dentro del
ciclo.

De modo general, las sintasas son enzimas que catalizan la condensacin

sin consumir ningn nuclesido trifosfato (ATP, GTP, etc.) como fuente de
energa.
Las sintetasas catalizan condensaciones que s utilizan ATP u otro nuclesido
trifosfato como fuente de energa.

REACCIONES DEL CICLO DE KREBS:

REACCIN : FORMACIN DE CITRATO
Es una reaccin de condensacin catalizada por la enzima citrato sintasa. El
uso de agua es lo que libera la reaccin del uso de energa. El grupo metlico
del acetilo reacciona con el carbonilo del oxalacetato.
La condensacin es del tipo aldlica y es seguida de una hidrlisis.
En el sitio activo de la citrato cinasa se forma un intermediario: el citril-CoA.

REACCIN : FORMACIN DEL ISOCITRATO

En la enzima aconitasa (o aconitasa hidratasa) se cataliza una reaccin de
isomerizacin va la sntesis de un intermediario, el cis-aconitato, que nunca
abandona el sitio activo de la enzima.
Esta transformacin es reversible, y consiste en una hidratacin y
deshidratacin sucesivas. Esto genera el intercambio de un H con el OH.
La isomerizacin del citrato en isocitrato es indispensable para permitir las
reacciones de oxidacin sucesivas.
La aconitasa contiene tomos de Fe no unidos a un grupo hemo. Estos
cuatro tomos se asocian a grupos sulfuro formando complejos 4Fe-4S. Tres
grupos sulfuro son de origen inorgnico, mientras que el cuarto proviene de
un Cys.
El doble enlace del cis-aconitato permite la adicin de H 2O en cualquier
carbono. La reaccin enzimtica puede por ello producir tanto citrato como
isocitrato.
La reaccin, sin embargo, tiende a la generacin de citrato antes que a la
formacin de isocitrato (en una mezcla a pH 7.4 y 25C solamente el 10%
contiene isocitrato) cmo se avanza, entonces, en el ciclo?
REACCIN : OXIDACIN Y DESCARBOXILACIN DEL ISOCITRATO
El isocitrato reacciona inmediatamente con la isocitrato deshidrogenasa.
Esta es la primera de las cuatro reacciones de oxidacin. Para esta reaccin
es necesaria la presencia de NAD + como cofactor.
El intermediario de esta reaccin es el oxalsuccinato, que en el sitio activo
pierde rpidamente un CO2. Esto genera inmediatamente -cetoglutarato.
En el sitio activo de la enzima se encuentra un tomo de Mn +2 que dirige la
descarboxilacin y estabiliza al enol formado.
La reaccin del oxalsuccinato es bsicamente una resonancia magntica.
REACCIN : DESCARBOXILACIN DEL -CETOGLUTARATO
El isocitrato reacciona inmediatamente con la isocitrato deshidrogenasa.
Esta es la primera de las cuatro reacciones de oxidacin. Para esta reaccin
es necesaria la presencia de NAD + como transportador de electrones y el
CoA-SH como transportador del succinilo.
El -cetoglutarato reacciona con una -cetoglutarato deshidrogenasa, que
escinde el segundo CO2. Aqu termina la oxidacin del piruvato.
La energa de oxidacin se conserva gracias, nuevamente, al enlace tiester
del succinil-CoA. Esta reaccin es idntica a la descarboxilacin del piruvato
que ocurre en la membrana mitocondrial, tanto en estructura como en
funcin.

Por ello se tienen homlogos E1, E2 y E3, y los mismos cofactores (TPP,
lipoato, NAD, FAD y CoA).
Son complejos homlogos mas no por ello idnticos (a excepcin de E3 y
E3):
1. La secuencia de aminocidos de E1 genera afinidad por cetoglutarato (-cetoglutarato deshidrogenasa). La secuencia de E1
genera la afinidad al piruvato.
2. El lipoil de E2 debe jalar un grupo succinil, y no uno acetil como en
E2.
REACCIN : GENERACIN DE UN ENLACE DE ALTA ENERGA EN EL
SUCCINIL-COA
El succinil-CoA tiene un enlace de alta energa libre de hidrlisis estndar
negativa. Esta reaccin utiliza este enlace de alta energa para promover la
formacin de un enlace fosfoanhdrido de GTP o ATP con una G0=
-2.9kJ/mol.
El proceso final es la liberacin de succinato. La reaccin la cataliza una
succinil-CoA sintetasa o succnico tioquinasa.
Las clulas animales tienen dos isozimas de la succinil-CoA sintetasa. Una
especfica para ADP que produce ATP y otra especfica para GDP y produce
GTP.
La formacin de ATP (o GTP) a expensas de la energa liberada por el cetoglutarato es una fosforilacin a nivel sustrato, idntica a las reacciones
que sintetizan ATP que se encuentran en reacciones glucolticas catalizadas
por la gliceraldehdo-3-fosfato deshidrogenasa y la piruvato quinasa.
El GTP puede donar un grupo fosfato al ADP y formar ATP. Ambos son
equivalentes, y no es requerida energa adicional.
GTP + ADP

GDP + ATP

G0= 0 kJ/mol

La reaccin es catalizada por una nuclesido difosfato quinasa.

REACCIN : OXIDACIN DEL SUCCINATO A FUMARATO
Las siguientes reacciones transforman el succinato para regenerar el
oxalacetato. La primera de estas reacciones corre a cargo de una oxidacin
catalizada por la succinato deshidrogenasa.
El aceptor de hidrgeno es el FAD, ya que el cambio de energa libre es
insuficiente para permitir que el NAD interacte. El producto final es
fumarato.
En eucariontes, la succinato deshidrogenasa est fuertemente a la
membrana mitocondrial. En procariontes, a la membrana plasmtica.

Esta enzima est intrnsecamente relacionada con la cadena electrnica. Por

esta enzima es que el ciclo de Krebs no se desarrolla exclusivamente en el
citosol.
La succinato deshidrogenasa es, al igual que la aconitasa, una protena
ferrosulfurada.
El FAD est covalentemente unido a ese complejo ferrosulfurado. El acarreo
de electrones est, por lo tanto, dirigido inmediatamente a la cadena
transportadora de electrones en la membrana mitocondrial.
El malonato es un inhibidor competitivo de la succinato deshidrogenasa, al
que es anlogo. La adicin de este compuesto a la mitocondria genera una
detencin tanto del ciclo de Krebs como de la cadena respiratoria (ya que el
complejo II de dicha cadena es precisamente una succinato
deshidrogenasa).
Esta sal puede estar presente en el cuerpo si se consumen ciertas races
(como las de la remolacha) y un derivado, el malonil-CoA, es importante en
el anabolismo de lpidos.
REACCIN : HIDRATACIN DEL FUMARATO
La conversin de fumarato a L-malato esta catalizada por la fumarato
hidratasa (o fumarasa), y es una hidratacin reversible.
La principal caracterstica de esta enzima es su alta estereoespecificidad.
Cataliza la hidratacin del doble enlace en trans del fumarato, pero no en
cis del maleato. En direccin inversa, la fumarasa no puede utilizar Dmalato.

REACCIN : OXIDACIN DEL L-MALATO A OXALACETATO

En la ltima reaccin del ciclo una L-malato deshidrogenasa cataliza una
oxidacin del L-malato a oxalacetato.
El equilibrio de esta reaccin est altamente desplazado hacia la izquierda
en condiciones termodinmicas estables; en clulas intactas, el oxalacetato
es rpidamente desechado por la citrato sintasa (reaccin altamente
exergnica)
Esto mantiene la concentracin de oxalacetato muy baja en la clula,
favoreciendo la produccin de este compuesto.

REACCIONES ANAPLEROTICAS:
Aunque el ciclo de Krebs es la va degradativa mas importante para generar
ATP, el ciclo es esencial para la biosntesis de compuestos celulares. As,
muchos aminocidos derivan del -cetoglutarato y del oxalacetato, y la
mayora de los tomos de carbono de las porfirinas proceden del succinilCoA. Cuando esos metabolitos son extrados del ciclo de Krebs, este deja de
funcionar, puesto que se interrumpe la formacin de oxalacetato.
Para que el ciclo siga actuando a un ritmo normal, existen reacciones
denominadas anaplerticas (de relleno) que restablecen los niveles de los
intermediarios del ciclo.
Reaccin
anaplertica
Piruvato a
OAA

Lugar
donde se
lleva a
cabo
Mitocondri
as

Enzima
Piruvato
carboxilasa

Reversibl
eo
irreversib
le
Irreversibl
e

Descripcin
La
piruvato
carboxilasa, que se
encuentra en el
hgado y en el
rin,
es
una
enzima
alostrica
de peso molecular
elevado.
Su
modulador positivo,
es el acetil-CoA.
Cuando
esta
sustancia
alcanza
un nivel por encima
de lo normal, activa
la
reaccin
favoreciendo
la

formacin
de
oxalacetato, el cual
se condensa con la
acetil-CoA
acumulado
para
formar citrato y de
esta forma permitir
que el ciclo siga
funcionando.
En
plantas
y
bacterias,
el
oxalacetato
es
introducido al ciclo
PEP
Fosfoenolpiruv
mediante
la
Citosol
carboxiquin Reversible
ato a OAA
carboxilacin
del
asa
fosfoenolpiruvato
catalizada por la
fosfoenolpiruvato
carboxilasa.
En esta reaccin se
oxida NADPH + H+
a NADP+. En el
corazn y en el
tejido
muscular
acta
Piruvato a
Citosol
Mlica
Reversible principalmente
la
Malato
enzima
mlica
(malato
deshidrogenasa)
dependiente de la
concentracin
de
NADP+.
Estas reacciones que regeneran intermediarios del ciclo de Krebs cuando
stos han sido utilizados en reacciones biosintticas, situacin en la cual no
hay disponible oxalacetato (sustrato regenerador) indispensable para el
inicio del ciclo.
1. PIRUVATO CARBOXILASA.
Enzima mitocondrial presente en animales.

CH3-CO-COO- + MgATP 2- + HCO3- -O2C-CH2-CO-COO- + MgADP 1- + Pi

2- + H+
Go = - 0,5 Kcal mol-1
Esta enzima es activada por acetil-CoA. La disminucin de la velocidad del
ciclo por insuficiente oxalacetato o de otro intermediario del ciclo resulta en
un aumento de acetil-CoA. Ello activa a la piruvato carboxilasa , que
regenera oxalacetato, con lo que la velocidad del ciclo aumenta.
2. PEP CARBOXILASA.
Enzima citoplasmtica presente en vegetales.

El mitocondria vegetal, a diferencia del animal, transporta oxalacetato a

travs de la membrana interna mediante una protena transportadora
especfica.
REGULACION DEL CICLO DE LOS CIDOS TRICARBOXLICOS.
La velocidad del ciclo de Krebs viene continuamente modulada para cumplir
con las necesidades energticas exactas de la clula. Los sitios primarios de

control son las enzimas alostricas: la isocitrato deshidrogenasa y la cetoglutarato deshidrogenasa. La isocitrato deshidrogenasa es estimulada
alostricamente por la presencia de ADP, que aumenta la afinidad de la
enzima por el sustrato. Las uniones de isocitrato, de NAD+, de Mg2+, y de
ADP, a la enzima son mutuamente cooperativas en sentido activador. Por
contra, el NADH inhibe la enzima por el desplazamiento directo de NAD+. El
mismo ATP tiene efecto inhibitorio.
El segundo sitio del control del ciclo de Krebs est cerca de la cetoglutarato deshidrogenasa. Algunos aspectos del control de esta enzima
son parecidos a los del complejo enzimtico de la piruvato deshidrogenasa,
como puede esperarse dada la extrema homologa entre las dos enzimas.
La -cetoglutarato deshidrogenasa es inhibida por el succinil-CoA y el NADH,
es decir, los productos de la reaccin que cataliza. La -cetoglutarato
deshidrogenasa puede ser tambin inhibida genricamente por un alto nivel
energtico presente en la clula. Esto significa que, en presencia de altos
niveles de ATP, la clula es capaz de reducir la eficiencia del proceso de
produccin de energa.
En muchas bacterias, tambin se controla la entrada en el ciclo de las
molculas con dos tomos de carbono. En ellos, la sntesis de citrato,
oxalacetato y acetil-CoA es la sede de una importante regulacin. EL ATP, en
efecto, es un inhibidor alostrico de la citrato sintasa. El efecto concreto del
ATP es aumentar la KM de la enzima por el acetil CoA. De este modo, cuanto
ms ATP est presente en la clula menos Acetil-CoA se introduce en el
ciclo.
Tres factores son los que regulan el flujo de metabolitos en el ciclo
de Krebs:

La disponibilidad de sustratos.

La inhibicin por los productos acumulados.

La regulacin alostrica de los tres puntos control (exergnicos) del

ciclo.

Cada reaccin exergnica puede, en un momento dado, ser la limitante en

la velocidad de la reaccin.
La disponibilidad de los sustratos para la citrato sintasa vara con el estado
metablico de la clula. Y, tanto la isocitrato deshidrogenasa como la cetoglutarato deshidrogenasa, se ven reguladas por el coeficiente de
[NADH]/[NAD+]
En el msculo de vertebrados, el Ca +2, la seal para la contraccin y para un
aumento concomitante en la demanda de ATP, activa tanto la isocitrato
deshidrogenasa como la a-cetoglutarato deshidrogenasa, as como el
complejo de la piruvato deshidrogenasa.

En resumen, las [sustrato e intermediarios] del ciclo del cido ctrico hacen
que el flujo a travs de esta va se mantenga a una velocidad que permite
mantener concentraciones ptimas de ATP y NADH.
En condiciones normales, la velocidad de la gluclisis y del ciclo del cido
ctrico estn integradas de manera que slo se metaboliza a piruvato la
glucosa necesaria para suministrar al ciclo del cido ctrico su combustible,
los grupos acetilo del acetil-CoA.
Piruvato, lactato y acetil-CoA se mantienen normalmente a concentraciones
de estado estacionario.
El citrato es un inhibidor alostrico importante de la fosfofructoquinasa-1 en
la va glucoltica.

CONCLUSIONES

En la condensacin de una unidad de acetilo (del acetil-CoA) con

oxalacetato entran en el ciclo dos tomos de carbono. Por las
descarboxilaciones
sucesivas
catalizadas
por
la
isocitrato
deshidrogenasa y la -cetoglutarato deshidrogenasa salen del ciclo
otros dos carbonos en forma de CO 2. Los dos tomos de carbono que
salen del ciclo son diferentes de los que han entrado en la misma
vuelta.

En las cuatro reacciones de oxidacin salen del ciclo cuatro pares de

tomos de hidrgeno. En las descarboxilaciones oxidativas del
isocitrato y del a-cetoglutarato se reducen dos molculas de NAD+,
en la oxidacin del succinato se reduce una molcula de FAD y en la
oxidacin del malato se reduce otra de NAD+.

A partir del enlace tioster altamente energtico del succinil-CoA se

genera un enlace fosfato de alta energa (en forma de GTP).

Se consumen dos molculas de agua: una en la sntesis del citrato,

por la hidrlisis del citril-CoA, y la otra en la hidratacin del fumarato.

El FADH2 y el NADH+H+ producidos son rpidamente aprovechados

como cofactores en la cadena transportadora de electrones.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICAJOSE MARIA TEIJON

RIVERA, AMANDO GARRIDO PERTIERRA, DOLORES BLANCO GAITAN.
http://es.slideshare.net/Regaladiux/ciclo-de-krebs-10063165
http://www.fagro.edu.uy/~bioquimica/docencia/material
%20nivelacion/CICLO%20DE%20KREBS.pdf
https://sites.google.com/site/bq2014iruizcruzmariaconcepcion/viacido-citrico/6-1-ciclo-del-acido-citrico/6-1-2-reacciones-del-ciclo-delacido-citrico/6-1-2-5-reacciones-anapleroticas