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Inm unologa e

Inm unoqum ica


Fundamentos

1. ^

Inmunologa e
Inmunoqumica
Fundamentos
Quinta edicin

ZZZPHGLOLEURVFRP
Ricardo Anbal Margni
P rofesor Em rito de la U niversidad de Buenos Aires. P rofesor H onorario de la U niversidad del Salvador. Ex-Profesor
Titular Plenario de Inm unologa e Inm unoqum ica de la F acultad de F arm acia y B ioqum ica de la U niversidad de
Buenos A ires. M iem bro de la C arrera del Investigador Cientfico (Investigador clase Superior) del C onsejo N acional
de Investigaciones C ientficas y Tecnolgicas (CO N ICET). D irector del ID EH U -Instituto de Estudios d e ia
Inm unidad H um oral (CONICET--UBA)

: !

V B

UaiCACON

ll\A '

______ e d i t o r i a l m e d ic a ----------_

C^paaamericana^
M A R C E L O T. DE ALV EAR 2145 - BUENOS A IRES
B O G O T - C A R A C A S - M A D R ID - M X IC O - S A O P A U L O

BOiS

P rim era edicin, octubre de 1972


S egunda edicin, setiem bre de 1977
T ercera edicin, enero de 1982
C uarta edicin, ju lio de 1989
Q uinta edicin, setiem bre de 1996

ISBN 950-06-1495-2
84-7903-317-7

IM PR E SO EN LA A R G EN TIN A

Q ueda hecho el depsito que dispone la ley 11.723.


Todos los derechos reservados.
E ste libro o cualquiera de sus partes
no po d ra ser reproducidos ni archivados en sistem as recuperables,
ni transm itidos en ninguna form a o por ningn m edio,
ya sean m ecnicos o electrnicos, fotocopiadoras, grabaciones
o cualquier otro, sin el perm iso previo
de Editorial M dica P anam ericana S.A.

1996 ED ITO R IA L M D ICA P A N A M E R IC A N A S.A.


M arcelo T. de A lvear 2145 - Buenos A ires, A rgentina

E sta edicin se term in de im prim ir


en'e.' .mes de setiem bre de 1996
en los talleres de Editorial M dica P anam ericana S.A.
A v. A m an d o A lcorta 1695, Buenos A ires

Colaboradores

Leopoldo F. Abdon

Leonardo Fainboim

D ocente de la C tedra de Inm unologa de la Facultad de


Farm acia y B ioqum ica de la U niversidad de B uenos A ires
M iem bro del IDEHU

Profesor Titular del D epartam ento de M icrobiologa, Parasitologa e Inm unologa, ren Inm unologa, de a Facultad
de M edicina de la U niversidad de B uenos Aires, M iem b ro
de la C arrera del Investigador C ientfico del C O N C E T

lida lvarez
Profesora A djunta de Inm unologa, Facultad de Farm acia y
B ioqum ica ce la U niversidad de B uenos Aires. M iem bro
de la C arrera de Investigador Cientfico del CO N ICET.
M iem bro del ID EH U

Angel Basualdo
Profesor Titulu- de M icrobiologa de la Facultad de M ed i
cina de la U niversidad N acional de La Plata

Guillermo Blanco
M iem bro de ia Carrera deJ Investigador Cientfico del
C O N IC E T, M iem bro del ID EH U

Marta Braun
Profesora T itular de Inm unologa de la Facultad de
V eterinaria de la U niversidad de B uenos Aires, M iem bro
de la C arrera del Investigador Cientfico del C O N IC E T

Gloria E. Cerrone
B ecaria Posdoctoral del CONICFH, Laboratorio de B io lo
ga M olecular, Hospital de C lnicas Jos de San M artn ,
Facultad de M edicina, D ocente de la Ctedra de G entica y
B iologa M olecular de la Facultad de Farm acia y B io q u
mica de la U nivei'sidad de Buenos A ires

Alberto Fossati
P rofesor A djunto de Inm unologa de la Facultad d e C ie n
cias E xactas de la U niversidad N acional de La Plata,
M iem bro de la C arrera del Investigador C ientfico del
C O N IC E T , M iem bro del IDEHU

Mirta Franco
P rofesora A djunta de M icrobiologa de la Iacultad d e F ar
m acia y B ioqum ica de la U niversidad de B uenos A ires

Mirta Giordano
Instituto de Investigaciones H em atolgicas de la A cadem ia
N acional de M edicina, M iem bro de la Carrera del In v e sti
gador Cientfico del CO N IC E T

Fernando Goldbaum
D ocente de la C tedra de Inm unologa de la F acu ltad de
F arm acia y Bioqum ica d e la U niversidad de B u en o s Aires
M iem bro del ID EH U

Stella M. Gonzlez Cappa


P rofesora Titular del D epartam ento de M icrobiologa, P a
rasitologa e Inm unologa de la Facultad de M ed ic in a de la
U niversidad de Buenos A ires, M iem bro de la C a rrera del
Investigador C ientfico del C O N IC E T

Mnica G. Charamonte
B ecaria Posdoctoral del CO N IC E T. D ocente de la
C tedra de Inm unologa de la Facultad de Farm acia y
B ioqum ica de la U niversidad de Buenos Aires.
M iem bro del ID EH U

Ramn A. de Torres
P rofesor T itular de M icrobiologa de la Facultad de F arm a
cia y B ioqum ica de la U niversidad de Buenos A ires,
M iem bro de la C arrera de! Investigador Cientfico del
CO N IC E T

Elvira L. Durante de Isola


P rofesora A djunta de) D epartam ento de M icrobiologa, Iarasitologa e inm unologa de la Facultad de M edicina de la
U niversidad de Buenos A ires

Silvia E. Hajos
P rofesora Titular de Inm unologa de la Facultad d e I:<'armacia y B ioqum ica de la U niversidad de Buenos A ires,
M iem bro de la C arrera del Investigador Cientfico del
C O N IC E T . M iem bro del IDEHU

Nora Halperin
L aboratorio de Inm unogentica. H ospital de C ln icas Jos
de S an M artn

Ileaiia Malan Borel


D ocente de la Ctedra d e Inm unologa de la F acu ltad de
F arm acia y B ioqum ica de la U niversidad de B u en o s Aires
M iem bro de la C arrera del Investigador C ientfico del
C O N IC E T . M iem bro del ID EH U

VI

Colaboradores

Emilio L. Malchiodi

Clelia M. Riera

Profesor A djunto de Inm unologa de la Facultad de Farm acia y B ioqum ica de la U niversidad de Buenos Aires.
M iem bro de la C arrera del Investigador Cientfico del
CO N IC ET. M iem bro del IDEHU

Profesora T itular de Inm unologa y Serologa de la F acu l


tad de C iencias Q um icas de la U niversidad N acional de
Crdoba, M iem bro de la C arrera del Investigador C ientfi
co del CO N IC E T

Marcela A. Manghi

Mara Rivas

Profesora A djunta de Inm unologa de la Facultad de F ar


m acia y B ioqum ica de la U niversidad de Buenos Aires.
M iem bro de la C arrera del Investigador C ientfico del
CO N IC ET. M iem bro del IDEHU

Servicio de Inm unologa del H ospital N acional de Pediatra


Dr. Juan P. G arrahan

Irina Mathov
D ocente de la C tedra de Inm unologa de la Facultad de
Farm acia y B ioqum ica de la U niversidad de Buenos A ires
M iem bro del IDEHU

Estela Roux
D epartam ento de B rom atologa y Nutricin de la Facultad
de Farm acia y Bioqum ica de la U niversidad de Buenos
Aires. M iem bro de la C arrera del Investigador C ientfico
del CO N IC E T

M. Leonardo Satz
Gerardo Mirkin
D ocente del D epartam ento de M icrobiologa, P arasitologa
e Inm unologa de la Facultad de M edicina de la U niversi
dad de Buenos Aires

Marta Minvielle
Profesora A djunta de M icrobiologa de la F acultad de
M edicina de la U niversidad N acional de L a P lata

Claudia Mongini
B ecaria Posdoctoral de C O N IC E T. D ocente de la Ctedra
de Inm unologa de la Facultad de Farm acia y Biociumica
de la U niversidad de Buenos A ires. M iem bro del ID EH U

Laura Morelli
D ocente de la Ctedra de Inm unologa de la Facultad de
Farm acia y B ioqum ica de la U niversidad de Buenos Aires
M iem bro de la C arrera del Investigador Cientfico del
CO N IC ET. M iem bro del ID EH U

Profesor A djunto del D epartam ento de M icrobiologa,


Parasitologa e Inm unologa, rea Inm unologa de la
Facultad de M edicina de la U niversidad de Buenos
Aires, M iem bro de la C arrera del Investigador C ientfico
del CO N IC E T

Norma S. de Speziale
Profesora A djunta de Q um ica B iolgica P atolgica de la
Facultad de Farm acia y B ioqum ica de la U niversidad de
Buenos A ires, M iem bro de la C arrera del Investigador
Cientfico del C O N IC E T

Liliana G. Vauthay
D ocente del D epartam ento de B iologa C elular, H istologa,
Em briologa y G entica de la Facultad de M edicina de la
U niversidad de Buenos A ires, P rofesional Investigador,
D epartam ento B ioterio y C ncer E xperim ental, Instituto de
O ncologa A ngel R offo ,

Claudia Waldner
Ricardo Negroni
C entro de M icologa de la F acultad de M edicina de la U ni
versidad de B uenos A ires

M. Rosa Padrs Vindrola


Laboratorio de Inm unogentica. C entro de Investigaciones
M dicas A lberto Einstein. Profesora de la Facultad de M e
dicina de la U niversidad del Salvador

Marco Pizzolato
Profesor A djunto del D epartam ento de A nlisis Clnicos,
O rientacin Q um ica de P rotenas de la Facultad de F ar
m acia y B ioqum ica de la U niversidad de Buenos A ires

Edgardo Poskus
Profesor T itular de Inm unologa de la F acultad de F arm a
cia y B ioqum ica de la LIniversidad de Buenos Aires,
M iem bro de la C arrera del Investigador Cientfico del
CO N IC ET. M iem bro del ID EH U

Becaria Posdoctoral del C O N IC ET, D ocente de la


C tedra de Inm unologa de la Facultad de Farm acia y
B ioqum ica de la U niversidad de Buenos A ires, M iem bro
del ID EH U

Nora Yranzo-Volont
D ocente de la C tedra de Inm unologa y Serologa de la
Facultad de Ciencias Q um icas de la U niversidad N acional
de Crdoba, M iem bro de la Carrera del Investigador C ien
tfico del C O N IC E T

Marta Zelazko
Jefe del Servicio de Inm unologa del H ospital N acional de
Pediatra Dr. Juan P. G arrahan

Norberto W. Zwirner
Becario Posdoctoral del C O N IC E T. D ocente de la C tedra
de Inm unologa de la Facultad de Ciencias Exactas de la
U niversidad N acional de La Plata, M iem bro del ID EH U

Indice

Prlogos

IX

13. El reconocimiento antignico y


activacin de los linfocitos B y T

257

R icardo A. M argni

I. A SPEC TO S BSICO S D E LA
INM UNIDAD

1. Mecanismos de defensa contra


la agresin

14. Evolucin del sistema inmune


15. Respuesta inmune humoral

R icardo A. M argni

2. La respuesta inmune

14

R icardo A. M argni

3. Bases celulares de la respuesta


inmune. rganos linfoides primarios
y secundarios

47
75

R icardo A. M argni

6. El origen de la diversidad de los


anticuerpos

131

144

M. L eonardo Satz

8. Reaccin antgeno-anticuerpo
in vitro. Interaccin primaria

154

176

201

M. L eonardo Satz.

II . Molculas de adhesin

Elida Alvarez

317

18. Regulacin de la respuesta inmune

327

M arta Braun

19. Anticuerpos no precipitantes,


anticuerpos asimtricos de las
clases IgG. Su relacin con los
precipitantes

345

20. Inmunizacin activa y pasiva

362

II. M EC A N ISM O S E F EC T O R E S
D E L A RESPU ESTA INM UNE

373

21. Mecanismos citotxicos mediados


por clulas

375

M artn Isturiz y M irta G iordano

219

M arcela A. M anghi

12. Citoquinas

S E G U N D A PA R T E

Regulacin neuroendocrina de la
inmunidad de mucosas: un sistema
interactivo-adaptativo

R icardo A. M argni

Ricardo A. M argni

10. El complejo mayor de histocom


patibilidad y su relacin con la
respuesta inmune

M ara E.nela R oux

R icardo A. M argni

Ricardo A. M argni

9. Reaccin antgeno-anticuerpo
in vitro. Interaccin secundaria

306

PR IM E R A PA R TE

M ara Estela R oux y Liliana G raciela Vauthay

M. L eonardo Satz y Ricardo /l. M argni

7. Estructura y organizacin gentica


del receptor T

16. Hipersensibilidad tarda y otras


reacciones de inmunidad mediada
por la activacin de macrfagos
296
17. El sistema inmune de mucosas

33

R icardo A. M argni

5. Anticuerpos

278

R icardo A. M argni

Marta. Braun

M arta Braun

4. Antgenos

267

Guillerm.o Blanco

22. Complemento

386

R icardo A. M argni

231

23. Inflamacin
N orm a S. de Spezicile

435

VIII

ndice

III. INMUNOPATOLOGA

473

39. Inmunoanlisis radiomtrcos

821

Edgardo Poskus

24. Inmunologa de las infecciones


microbianas

475

M irta Franco

25. Inmunologa de las micosis

496

521

V. MTODOS INMUNOQUMICOS

867

531

41. Mtodos cromatogrficos de fase


lquido-slido (LSC) aplicados a
la purificacin de protenas

869

Stelia M. G onzlez Cappa, Elvira L D urante


de J.^olay Gerardo A. M irkin

27. Inmunologa de las infecciones


virales
Ram n A. de Torre.y, Juan A n g e l Ba,gualdo
y M arta C. M invielle

28. Autoinmunidad

559

Clelia Riera, Juliana L eoni y Nora


Yranzo-Volont

29. Estructura y funcin del complejo


mayor de histocompatibilidad

593

M. Leonardo Satz y L eonarch F ainboim

30. Inmunodeficiencias

609

M arta Zelazkj) y M ara Rivas

31. Gammopatas monoclonales

627

Marco Pizzolato

32. Manifestaciones de hipersensibilidad.


Alergia
639
Ricardo A. M argni

33. Inmunologa tumoral

664

Silvia E. Hajos

34. Inmunologa de la reproduccin

852

G loria E. C errone y Laura MorelU

Ricardo N egroni

26. Inmunologa de las infecciones


parasitarias

40. Metodologas bsicas en biologa


molecular. Tcnicas de hibridizaein
y reaccin en cadena de la
polimerasa (PCR)

Juliana Leone, Irina M atov y Leopoldo


E. A bdon

42. Electroforesis en gel de


poliacrilamida; isoeleetroenfocado;
inmunotransferencia
(immunoblotting)

906

Ricardo A. M argni, Em ilio L. M alchiodi


y M nica G. C hiaram onte

43. Antgenos bacterianos

923

Ricardo A. M argni

44. Antgenos proteicos

932

Ricardo A. M argni

45. Preparacin de sueros inmunes y


purificacin de anticuerpos

937

Ricardo A. M argni

46. Fraccionamiento de
inmunoglobulinas

945

Ricardo A. M argni

681

Ricardo A. M argni e Ileana M alan B orel

VI. APNDICES
IV. M E T O D O L O G IA S
35. Mtodos utilizados para la
identificacin y cuantificacin
de antgenos y anticuerpos

695

697

729

Claudia M ongini y Claudia W akiner

37. Hibridomas y anticuerpos


monoclonales

781

Fernando A lberto G oldbaum


y Carlos A lberto Fossati

38. ELISA
N orberto W. Z w irner

953

R icardo A. M argni

II. Soluciones buffer ms comunes


usadas en inmunologa

Ricardo A. M argni

36. Metodologas para la evaluacin de


las clulas inmunocompetentes

I. Preparacin de adyuvantes

951

957

R icardo A. M argni

III. Coeficientes de extincin molar


(E^,) de sustancias de bajo pe'So
molecular usadas en inmunologa
y Coeficientes de extincin porcentual
(E|'*n,) de protenas usadas en
inmunologa
960
Ricardo A. M argni

IV. Nomenclatura de los aminocidos

962

R icardo A. M argni

798
ndice analtico

963

Prlogo de la quinta edicin

El avance acelerado de los conocim ientos


en e] cam po de la inm unologa, sustentados
en hiptesis planteadas y en el desarrollo de
una m etodologa de avanzada, ha hecho que
los textos sobre tem as relacionados con esta
ram a de las ciencias biolgicas deban ser re
novados perm anentem ente, y muy esp ecial
mente si ellos pretenden dar una visin gene
ralizada de los fen m en o s inm unolgicos.
H asta no hace m ucho tiem po, un libro con
cinco aos de antigedad, salvo raras ex cep
ciones tena plena vigencia. En la actualidad,
ese tiem po m arca la necesidad de elab o rar
una n ueva edicin con la in corporacin de
todos los conocim ientos surgidos durante ese
perodo.
se es el m otivo de la 5"' edicin de In m u
nologa e Inm unoqum ica y es nuestro deseo
que sta llegue a tener la acogida de las cua
tro ediciones anteriores. Para que ello pueda
concretarse se ha hecho una revisin p o rm e
norizada de los diferentes captulos que co m
ponen el libro, incorporando nuevos concep
tos e hiptesis as com o la m etodologa m s
adecuada para poder encarar, desde el punto
de vista experim ental, los diferentes estudios
que puedan llevar a la clarificacin de h e
chos an no dilucidados. Se ha procurado,
adems, que la m ayor cantidad posible de las
figuras sean en colores para que sus interpre
taciones se vean facilitadas.
D ada la im portancia de las m olculas de
adhesin en el desarrollo del proceso in m u
nolgico, al igual que las citoquinas en l in

volucradas, se han incorporado sendos ca p


tulos sobre estos tem as y el captulo sobre in
flam acin ha sido actualizado sobre la base
de esos conocim ientos. Del mismo m od o se
incluye" el anlisis de los eventos b io q u m i
cos que ocurren durante la tran sd u cci n de
seales que llevan a la activacin de lo s lin
focitos T y B y a la desgranulacin y lib e ra
cin de m ediadores qum icos por las clulas
b a s fila s e sp ec fic am e n te e stim u la d a s. El
avance en el conocim iento de la estructura y
funcin de los anticuerpos IgG asim tricos
nos h a llevado a la am pliacin del captu lo
correspondiente y a la incorporacin d e un
captulo sobre Inm unologa de la R eproduc
cin, proceso en el que estos anticuerpos de
sem pean un papel im portante.
D esde el punto de vista m etodolgico los
captulos correspondientes han sido a c tu a li
zados, incorporando nuevas tcnicas d e uso
corriente en el laboratorio inm unolgico co
mo son las tcnicas bsicas de biologa m o le
cular, hibridaciones, PCR, crom atografa l
quida de alta eficiencia (HPLC, FPLC), tc
nicas p ara estudios de la inm unidad celular,
etc., y todas aquellas que resultan in d isp en
sables para un buen estudio inm unolgico e
inm unoqum ieo.
L a base del desarrollo de nuestros conocim entos es el ID EH U -Instituto de E studios de
Inm unidad H um oral (C O N IC ET-U B A ) y la
c te d ra de In m u n o lo g a de la F a c u ltad de
F arm acia y Bioqum ica de la U niversidad de
Buenos Aires. Jvenes que con el co rrer del

Prlogo de la quinta edicin

tiem po se han ido incorporando a nuestro lugar de trabajo, se han transform ado hoy en
expertos en diferentes aspectos de la inm unologa. Es por este m otivo que a los inm unlogos de prestigio que colaboraron en la
edicin anterior, se sum an en esta 5"* edicin
nuevos autores, que aportan todos sus conocim ientos adquiridos en el desarrollo de sus
tem as de trabajo. Como en ediciones anterio
res, los diferentes autores han respetado los

lincam ientos generales del libro, pero han le


nido plena libertad para expresar sus conocmientos.
Finalm ente, quiero expresar mi agradecm iento a Editorial M dica Panam ericana por
todo lo hecho p ara que esta nueva edicin
del libro pudiera concretarse,

R ic a rd o

A.

M arg n i

Prlogo de la primera edicin

En la ltim a dcada se han pubhcado nu


m erosos y muy buenos textos sobre Inm uno
loga e Inm unoqum ica, escritos p rin c ip a l
m ente en ingls y fran cs, algunos d e los
cuales fueron traducidos al espaol. L am en
tablemente, dado el tiem po transcurrido entre
su escritura en el idiom a original y la apari
cin de las traducciones, y la constante evo
lucin de los diferentes aspectos de la In m u
nologa, algunos de los captulos incluidos
en aqullos han perdido actualidad.
Cuando se decidi la publicacin de este
libro, en ningn m om ento se pens en trm i
nos de com peticin. Sim plem ente, se procu
r escribir en espaol un texto que pudiera
ser til y accesible no slo a nuestros alum
nos de la carrera de B ioqum ica que deben
cursar Inm unologa e Inm unoqum ica, sino
tam bin a todos aquellos que deseen iniciar
se en estas disciplinas y no dominen lenguas
extranjeras, en especial el ingls.
El libro ha sido dividido en tres partes, y se
han incluido adem s tres apndices. En la
parte prim era se han expuesto los conceptos
tericos bsicos de la Inm unologa. A dem s
de hacerse el estudio de los antgenos, anti
cuerpos y complemento y sus mecanism os de
interaccin in vitro e in vivo, se han incluido
un captulo sobre enfermedades autoinmunes,
en especial las de tipo experimental, y otro so
bre las bases inm unolgicas de) rechazo al in
jerto homlogo por considerarlo de sum a im
portancia en el m om ento actual. Los funda
mentos tericos sobre el concepto de afinidad
de los anticuerpos y los mtodos para medir

su Ko (constante de asociacin intrnseca pro


m edio), n (valencia) y a (factor de hom oge
neidad), han sido desarrollados en detalle.
L a p a rte segunda in cluy e la d escripcin
detallada de los m todos serolgicos m s im
portantes para la identificacin y cuantifica
cin de antgenos y anticuerpos.
U na serie de tcnicas de uso frecuente en
In m u n o q u m ic a han sido a g ru p a d as en la
p a rte tercera.
M todos para la activacin de resin as de
intercam bio inico, preparacin de colum nas
para crom atografa y filtracin por g eles, dis
tintos buffer de uso en Inm unologa e Inm u
noqum ica y una hsta de los
y
de
num erosas sustancias, en especial haptenos
de com posicin qum ica definida y protenas
antignicas o con actividad anticuerpo, for
m an parte de los tres apndices.
Se ha incluido un buen nm ero de grficos
y fotografas, de modo que faciliten la inter
pretaci n de los hechos. Han sido elab o ra
dos, en su mayora, con datos experim entales
provenientes de nuestro laboratorios.
En el captulo 4, para la identificacin dei
Complemento, de los com plejos in term edio s.
resultantes y de los productos de degradacin
enzim tica de algunos de sus com ponentes,
se ha em pleado la nom enclatura antigua. Ello
ha sido realizado con el objeto de facilitar a
los que recin se inician, el acceso y com
prensin de la bibliografa no m uy reciente
sobre e) tema. N o obstante en la p a rte final
del captulo se transcribe ia nom enclatura ac
tual, recom endada por la O rganizacin iVIun-

XII

Prlogo de la primera edicin

dial de la Salud, as com o sus relaciones con


la utilizada.
Puesto que es ste un lib ro p ara p rin c i
p ian tes, la b ib lio g rafa no fo rm a p arte del
texto. Al final de cada captulo se acom paa
una Bibliografa en la que se indican los li
bros, actualizaciones y trabajos m s im por
tantes, que el lector podr consultar pira p o
der am pliar sus conocim ientos.
En los casos particu lares de d escripcin
d e m todos o tcn icas, las re fe re n cia s b i

bliogrficas estn indicadas en el pie de p


gina.
Al finalizar este breve prlogo se deja e x
presado el reconocim iento del autor a todos
aquellos que de una u otra m anera han co n
tribuido a que sus deseos de escribir un l i
bro en espaol sobre fundam entos de la In
m unologa y la Inm unoqum ica se co n creta
ran.
R ic a rd o

A.

M a rg n i

Prlogo de la segunda edicin

La circunstancia de que la prim era edicin


de Inm unologa e Inm unoqum ica se agotara
antes de lo previsto plante la necesidad in
m ediata de su segunda edicin.
Com o en los ltim os cinco aos gran parte
de los conocim ientos en los diferentes cam
pos de la Inm unologa experim entaron cam
bios de im portancia, la m ayora de los cap
tulos del libro original fueron m odificados,
reescritos ntegram ente, subdivididos y am
pliados para su adaptacin.
D e las consultas y sugerencias recib id as
surgi la necesidad de incorporar nuevos ca
ptulos, en especial sobre rganos linfoides y
clulas que intervienen en la respuesta inm u
ne; la respuesta inm une mediada por clulas;
algunos aspectos de inm unopatologa com o
las inm uno deficiencias y las enferm edades
por autoagresin desarrolladas en el hom bre;
los anticuerpos no precipitantes; problem as
particulares en el campo de la inm unoqum i
ca, y otros. Ello hizo que para el desarrollo de
algunos de esos temas, que no eran de nuestra
esp ecialid ad , so licitara la co lab o raci n de
destacados inm unlogos de nuestro m edio. A
quienes lean la segunda edicin de Inm unolo
ga e Inm unoqum ica no les quedarn dudas
de que todos lo han hecho con el m xim o de
eficacia y que la experiencia por ellos vertida
habr de resultarles muy til.
El objetivo inicial de la redaccin de este
libro fue el de presentar una obra o rig in al

m en te esc rita en espaol, con los c o n o c i


m ie n to s in m u n o l g ico s bsico s a c tu a liz a
dos, y en la que adem s fuera posible hallar
la m etodologa necesaria para poder llev ar a
cab o los ex p erim en to s q u e p u d ieran p la n
tearse aquellos que se inician en la inv esti
g a c i n in m u n o l g ica . P o r tal m o tiv o , esa
m e to d o lo g a h a sido am pliada, in clu y en d o
las tcnicas indispensables para los estudios
de in m un id ad a nivel celu lar, los m todos
in m u n o q u m ic o s m s tiles para p u rific a
cin de diferentes tipos de antgenos y anti
cuerpos y toda la m etodologa acceso ria ne
cesaria para estos fines.
Es nuestro m ayor deseo que este libro, en
el que figura una m etodologa am pliam ente
e x p erim en tad a, pueda e sta r en la m e s a de
trab ajo de aquellos que estn h a c ie n d o sus
prim eras armas en el cam po de la Inm unolo
ga y la Inm unoqum ica.
N o podra cerrar este breve prlogo sin an
tes agradecer profundam ente a todos los que
han colaborado en su redaccin, a quienes
con sus com entarios hicieron apreciar la ne
cesidad de una am pliacin en su contenido y
a E ditorial M dica Panam ericana, responsa
ble de esta segunda edicin, por to d o el em
p e o p u e sto p a ra q u e p u e d a n c u m p lirs e
nuestros deseos.

R ic a rd o

A.

M a rg n i

Prlogo de la tercera edicin

Dos aos y medio fueron suficientes para


que la segunda edicin de Inmunologa e Inm u
noqumica se agotara. Pero en este lapso tam
bin se clarificaron algunos conocimientos en
el campo de la inmunologa y surgieron hechos
y metodologas que hicieron que optramos por
elaborar una nueva edicin del libro en lugar
de su reimpresin.
Para que este manual pueda prestar utilidad
al mayor nmero de personas interesadas en la
inm unologa se incluyeron nuevos captulos,
entre ellos: Inmunogentica, Inmunidad en las
infecciones bacterianas. Inm unidad en las in
fecciones virales. Inmunidad en las infecciones
parasitarias. Inmunidad en las infecciones mi-

cticas e Inmunidad tumoral, los que han sido


escritos por especialistas en los respectivos te
mas. Los restantes captulos han sido corregi
dos y actualizados para que el libro mantenga
vigencia permanente.
A los colaboradores iniciales y a los que se
han incorporado en esta edicin, mi sincero
agradecimiento por su contribucin, la que in
dudablem ente habr de ser apreciada por los
lectores. A E ditorial M dica Panam ericana,
responsable de la edicin, mi reconocimiento
por todo lo hecho.

R ic a r d o

A.

M arg n i

Prlogo de la cuarta edicin

Los avances logrados en el cam po de la


biologa m olecular, los aportes de la ingenie
ra gentica, el uso de anticuerpos m onoclo
nales, de cepas seleccionadas de anim ales de
experim entacin y el desarrollo de sofistica
das m etodologas, entre otros, han hecho que
num erosos conocim ientos inm unolgicos h a
yan sido clarificados en lo que va de la dca
da de 1980. A ello se debe que tengam os hoy
un concepto claro sobre el origen de la di v er
sificacin de las cadenas L y H de las inm u
noglobulinas, la que en gran parte es conse
cuencia de recom binaciones de exones cuya
ubicacin en el genom a se conoce. Lo m is
m o cabe decir para el receptor antignico de
los linfocitos T y para algunas interleuqui
nas, as com o para los antgenos H L A . En
este caso no slo se ha avanzado en lo que a
H L A y re s p u e s ta in m u n e se re fie re , sin o
tam bin a posibles relaciones entre H L A y
enfermedad.
Los estudios de difraccin de rayos X de
com plejos form ados por el fragm ento F ab de
inm unoglobulinas m onoclonales y m olculas
an tig n icas p e q u e as han p e rm itid o te n e r
una idea mucho ms precisa sobre el sitio de
com binacin de los anticuerpos y la topogra
fa de algunos determ inantes antignicos.
En el cam po del diagnstico, el em pleo de
reacciones inm unolgicas de tipo inm unoenzim ticas ha d em ostrad o su e x trao rd in aria
sensibilidad y la posibihdad de su desarrollo
sin necesidad de tener que recurrir a reacti
vos radiom arcados o al em pleo de m icrosco
pia ptica no convencional.
A nivel celular, en especial en lo referente
a la participacin que tienen las clulas acce

sorias y las diferentes poblaciones de lin fo c i


tos en los m ecanism os de reconocim iento de
los epitopes antignicos y en la regulacin de
la respuesta inm une, los avances tam bin han
sido notables.
T odos estos hechos son los que han d eter
m inado la reedicin de nuestro libro d e In
m unologa e Inm unoqum ica escrito en esp a
ol -c u y a liltim a edicin data de 1 9 8 2 - para
p o d er incorporar los grandes avances d e la
inm unologa que tuvieron lugar durante estos
ltim os seis a siete aos.
En esta o p o rtu n id ad p articip aro n v e in ti
cuatro colaboradores, aportando cada u n o su
experiencia en determ inados temas. E llo ha
h echo que algunos captulos fueran m o d ifi
cados sustancialm ente o reescritos y q u e fue
ra necesario incorporar otros nuevos com o:
El origen de la diversidad de los anticuerpos
y ontogenia linfocitaria B; Estructura y orga
nizacin gentica del receptor T; R espuesta
inm une humoral; Inm unologa de las m u co
sas; A nticuerpos no precipitantes de la clase
IgG y su relacin con los precipitantes; M e
canism os citotxicos m ediados por clulas;
R egulacin de la respuesta inmune; In flam a
cin; El com plejo m ayor de histocom patibili
dad humano: HLA.
Puesto que nuevas m etodologas sero l g i
cas y de uso inm unoqum ico han surgido l
tim am ente, captulos sobre R adioinm unoen
sayo (RIA), Enzim oinm unoensayo (ELISA );
H ib rid o m a s y a n tic u e rp o s m o n o c lo n a le s;
Electroforesis en gel de poliacrilam ida; isoe
lectro en fo cad o ; in m u n o tran sferen cia (im
m u n o b lo ttin g ), han sido in co rp o rad o s. El
captu lo sobre m todos cro m ato g rfico s ha

XVI

Prlogo de la cuarta edicin

sido am pliado, habindose incluido adem s


el crom atoenfocado. En el captulo Fraccio
nam iento de Inm unoglo b u lin as, se h a d e s
cripto la m etodologa para la degradacin en
zim tica de las diferentes clases de inm unog lo b u lin as de ratn, dado que no to d as se
com portan de m anera sim ilar a las de otros
vertebrados y al uso frecuente que se hace de
ellas por m edio de los anticuerpos m onoclo
nales obtenidos por hibridizacin.
La cuarta edicin de Inm unologa e Inm u
noqum ica, que en su versin original fuera
concebida para nuestros alum nos de la carre
ra de B ioqum ica, podr, en su versin ac
tual, ser til para todos aquellos que cursen
diferentes carreras con orientacin biolgica
com o medicina, veterinaria, biologa, ya que
no slo estn desarrollados los aspectos bsi
cos de la inm unologa, sino que tam bin es
tn d escrip tas d istin tas in m u n o p ato lo g as.
A dem s, dada la am plia m etodologa que el
libro contiene, sera nuestro deseo que pudie

ra encontrarse en la m esa de trabajo de aque


llos que desarrollen su actividad en los cam
pos de la inm unologa bsica y la aphcada.
El libro contina siendo una obra integra
da. N o obstante, se ha dejado en libertad a
los d istin to s c o la b o ra d o re s p ara que cad a
uno, sig u ien d o los lin cam ien to s gen erales
trazados, p u ed a expresar su punto de vista
sobre el tem a que relata y, en especial, sobre
aquellos tpicos que todava constituyen m o
tivo de discusin.
N o q u isiera cerrar este prlogo sin antes
agradecer profundam ente a los diferentes au
tores, especialistas en sus tem as, por el e x
traordinario aporte que ha significado cada
una de sus contribuciones.
A Editorial M dica Panam ericana, al igual
q u e en ed icio n e s an terio re s, m i a g ra d e c i
miento por el esftierzo realizado para que e s
ta cuarta edicin haya podido concretarse.
R

ic a r d o

A. M

argni

ASPECTOS BASICOS
DE LA INMUNIDAD

Mecanismos de defensa
contra la agresin

RICARDO MARGNI

El hombre y los animales normalmente no


sufren el impacto de los agentes patgenos y
de todos aquellos agresores reales o potencia
les que los rodean. Ello se debe a que poseen
m ecanism os defensivos protectores que les
aseguran cierta integridad, y slo por fallas de
esos m ecanism os se producen infecciones o
agresiones.
MECANISMOS DE LA INFECCIN
La mayor parte de las bacterias deben inva
dir los tejidos del husped parasitado y multi
plicarse en ellos para poder ejercer su accin
nociva, lo cual presupone que se encontrarn
con condiciones biolgicas y bioqumicas par
ticulares que harn posible esa invasin y m ul
tiplicacin.
Cuando un m icroorganism o penetra en el
husped por cualquier va, se instala en l, se
multiplica y, ya sea por efecto mismo de su ac
ceso a los tejidos o por accin de ciertos pro
ductos de su m etabolism o conocidos con el
nombre de toxinas, produce lesiones locales o a
distancia. Esto es, origina una infeccin.
Esta infeccin puede ser generalizada o loca
lizada. En el primer caso hay una invasin que
alcanza a diversos tejidos y se producen bacteriemias, septicemias, localizaciones en diferen
tes visceras. En el segundo se destaca la agre
sin que sufren los tejidos que circundan el lu
gar donde se ha producido la m ultiplicacin
bacteriana la cual est, en cierto modo, deter
minada por propiedades inherentes a la bacteria
misma en la mayora de los casos.
Existen qtros microorganismos que ejercen
su accin nociva de manera distinta. Si bien se
multiplican tambin en el tejido que han invadi

1
do o infectado, no alcanzan por s mismos otros
tejidos o visceras, sino que lo hacen por inter
medio de sustancias que, elaboradas por ellos
en el lugar donde se han localizado, son volca
das al medio interno y, vehiculizadas por la san
gre o la linfa, llegan a los diferentes rganos y
tejidos, donde producen lesiones caractersticas.
A los m icroorganism os que actan p o r el
primer mecanismo se los conoce con el nom bre
de infectantes, en tanto que a los segundos se
los denomina microorganistnos txicos. Estos,
a su vez, pueden ser toxiinfectantes o exclusi
vamente txicos. El inicroorganismo es toxiinfectante cuando penetra en el husped, prolifera en el tejido invadido, infecta, y elabora en
ese lugar las toxinas que por difusin van a
producir la sintomatologa clsica de 1a enfer
medad. Actan de este modo los bacilos dei t
tanos, de la difteria, de la gangrena gaseosa.
Hay tambin otro tipo de microorganismos
que no necesitan invadir para elaborar sus toxi
nas; por el contrario, no se multiplican en los
tejidos del hombre, pero son capaces de elabo
rar en el medio externo exotoxinas potentes, las
que, al ser ingeridas por aqul, pueden produ
cirle alteraciones sumamente graves, capaces
de llevarlo a la muerte. El caso tpico de m i
croorganismo que acta de esta manera, y que
es por ello considerado txico, es el C lo stri
dium botulinum.
Las bacterias txicas y toxiinfectantes son
las que ejercen su accin patgena por interm e
dio de sustancias de elevada toxicidad, difusi
bles, a las que se deben las lesiones y sntomas
caractersticos de la enfermedad. Las toxinas
bacterianas son de dos tipos: las exotoxinas,
que son eliminadas al medio externo, y las en
dotoxinas, que quedan unidas al protoplasm a
bacteriano.

Aspectos bsicos de la inmunidad

Por procesos de filtracin a travs de mem


branas filtrantes adecuadas es posible separar
las exotoxinas del medio de cuUivo donde ha
proliferado el germen productor. Son marcada
mente activas y sumamente antignicas; esto
significa que, inoculadas a un animal sensible,
estimulan la produccin de antitoxinas que las
neutralizan especficamente, reaccin para la
que unas y otras guardan proporcionalidad di
recta.
Las endotoxinas no pueden ser separadas por
simple filtracin; es necesario recurrir a otros
tratamientos fsicos, tales como congelacin y
descongelacin, empleo de solventes, ultraso
nidos, accin citoltica de detergentes, desinte
gracin mecnica, etctera. Su ndice txico es
inferior al de las exotoxinas y son, adems, ter
moestables y no precipitables por el sulfato de
am onio, propiedades que no com parten las
exotoxinas. Tienen muy escaso poder inmuno
gnico y en algunos casos resulta prcticamen
te imposible preparar sueros antitxicos.
Las exotoxinas son protenas, en tanto que
las endotoxinas son en su mayora complejos
glucidolipidoproteieos.
Inm unizando animales con endotoxinas se
consiguen antisueros que neutralizan pocas do
sis letales mnimas de ehas, pero nunca se con
sigue la relacin lineal entre las cantidades de
antitoxina y toxina en una mezcla exactamente
neutralizada que, en cambio, se logra en las
exotoxinas.
Es necesario recordar que, adem s de las
exotoxinas y endotoxinas, las bacterias pueden
producir otros metabolitos que a su vez son ca
paces de incidir de diferente manera en el curso
de las infecciones. Algunos microorganismos,
como los estafilococos por ejemplo, son activos
productores de coagulasa, que tiene la particula
ridad de coagular el plasma humano y de otros
vertebrados; los estreptococos producen fibrinolisinas, capaces de digerir los cogulos de fibri
na; varios microorganismos son productores de
hialuronidasa, factor de difusin que facilita la
penetracin, y muchos de ellos elaboran enzi
mas de diferentes tipos que pueden tener cierta
influencia en la infeccin al producir alteracio
nes en el metabolismo normal celular.
Adems de las bacterias, otros agentes agre
sores reales (virus, parsitos) o potenciales
pueden producir daos hsticos u orgnicos y
provocar como consecuencia de ello la reac
cin del husped.

MECANISMOS QUE IMPIDEN


LA INFECCIN
Los vertebrados poseen diferentes mecanis
mos para defenderse de la agresin originada

por agentes patgenos. Esos mecanismos pue


den ser inespecficos y especficos, siendo los
primeros de carcter general, capaces de defen
derlo contra cualquier agresor, en tanto que los
especficos slo actan contra entidades bien
definidas.
Mecanismos inespecfcos
Son de dos tipos: a) los constituidos por las
barreras naturales, y b) los de la inmunidad in
nata o inespecfica.
Las barreras naturales
Los microorganismos patgenos se caracteri
zan por su capacidad de penetrar y multiplicarse
en los tejidos que invaden. Para defenderse de
esa posible agresin, existen en los vertebrados
barreras naturales que, impidiendo la penetra
cin de los agentes patgenos reales o potencia
les, les permiten mantener su integridad.
Debemos considerar en primer lugar la piel,
la cual, intacta, acta como una efectiva barrera
que impide el paso de las bacterias, no slo co
mo mero hecho fsico, mecnico, sino tambin
por la presencia de cidos grasos que dificultan
e impiden la proliferacin bacteriana y actan
como verdaderos elem entos inespecficos de
defensa.
La boca, el estmago y el intestino tambin
lo son. Las bacterias que llegan a la boca son
retenidas en parte por fijacin a la secrecin
que recubre el epitelio bucal. A quellas que
pueden llegar al estmago sufren la accin bac
tericida del jugo cido de este rgano, el cual
las destruye en su mayora, y por ello los ex
menes bacteriolgicos del lquido duodenal y
de la porcin alta del intestino delgado denotan
frecuentemente ausencia de bacterias.
La nariz, la nasofaringe y las vas respirato
rias, por su estructura anatmica y su capa de
clulas vibrtiles, actan como elementos de
fensivos barriendo la capa mucosa que las re
cubre. En las fosas nasales, la cantidad de m i
croorganismos es indudablemente superior a la
que hay en trquea y bronquios; a nivel de es
tos ltimos, el nmero es escaso y puede a ve
ces ser nulo.
La conjuntiva ocular est ntimamente rela
cionada con las vas respiratorias superiores por
intermedio de los conductos lagrimales. El par
padeo y las lgrimas barren la superficie ocular
y eliminan por los lagrimales en las vas respi
ratorias altas las bacterias que pudieran hallarse
en ella; por otra parte, no hay que olvidar que la
secrecin lagrimal es muy rica en una sustancia
bacterioltica natural denominada lisozima, que
a alta dilucin tiene la particularidad de produ
cir la lisis de muchos microorganismos. Esta

Mecanismos de defensa contra la agresin


sustancia bacterioltica no slo se encuentra en
la secrecin lagrimal sino tambin en muchas
secreciones mucosas, y su presencia ha podido
ser demostrada hasta en la misma piel.
Las vas genitales estn totalmente recubier
tas por una capa drmica. En el hombre, la m a
yor parte de los microorganismos son barridos
por la orina. La vagina, por su parte, debido a
que normalmente posee una flora rica en lactobacilos, origina un medio con un pH bajo que
impide la proliferacin de otros microorganis
mos. Junto a estos mecanismos de barrido en el
caso del hombre y de produccin de cido lc
tico por los bacilos acidricos en la mujer, la
mucosa genital en ambos casos posee un mar
cado poder bactericida y ello se debe a su con
tenido en lisozima e inhibina.
Adems de la necesidad de vencer los meca
nismos anteriormente citados, para que un m i
croorganismo pueda penetrar e infectar, deben
darse ciertas condiciones, tales como tempera
tura adecuada para su supervivencia y multipli
cacin. Esto servira para explicar ciertos casos
de inmunidad natural hacia determinados m i
croorganismos ya que, experimentalmente, se
ha podido comprobar que algunos de los ani
males inmunes a la infeccin pueden contraera
cuando se los expone a variaciones trmicas; se
recuerda como ejemplo el clsico experimento
de Pasteur de la infeccin de la gallina por car
bunco al someterla a enfriamiento.
La tensin de oxgeno en los tejidos puede
crear condiciones favorables o por el contrario
desfavorables para la multiplicacin microbia
na; el caso de los clostridios, cuya proliferacin
en el torrente sanguneo re su lta dificu lto sa
cuando hay una oxigenacin acentuada de l,
es un ejemplo de ello.
La presencia de metabolitos, o su ausencia,
puede desem pear un papel importante en la
proliferacin de microorganismos que, habien
do franqueado las barreras anteriormente des
critas, llegan a los tejidos. La ausencia de algu
nas sustancias indispensables impide su m ulti
plicacin y ha podido demostrarse con mutan
tes particulares, en infecciones experimentales
efectuadas en animales, que el aadido de esos
metabolitos esenciales -en la dieta o mediante
inoculaciones- allana la dificultad y favorece
la infeccin.
Adems de la lisozima, ya referida, existen
en los tejidos del hom bre y de los anim ales
otras sustancias que tienen accin bactericida o
bacteriosttica, como la espermina y la esperrnidina, capaces de actuar sobre los bacilos tu
berculosos; la fagocitina, obtenida de los poli
morfonucleares; (3-lisinas; los pptidos antim i
crobianos sintetizados por clulas de mamfe
ros conocidos con el nombre de defensinas ;
etctera.

Si las barreras naturales han sido vencidas y


hay penetracin de los microorganismos pat
genos, se ponen en marcha otros mecanismos
de resistencia naturales, involucrados dentro
de lo que se conoce como inmunidad innata .
Inmunidad innata
Sus mecanismos comienzan a actuar in m e
diatamente despus de la penetracin del agente
agresor, a diferencia de lo que ocurre con la in
m unidad esp ecfica que requiere de c ierto
tiempo para que se haga efectiva. Lo que se
procura en primera instancia es la eliminacin
del agente infectivo y la reparacin del dao ti
sular originado, jugando un papel muy im por
tante en ello el denominado proceso inflam ato
rio. En este evento participan clulas (m onoci
tos, polimorfonucleares, neutrfilos, clulas NK
[natural killer, asesinas], clulas endoteliales),
molculas (citoquinas, componentes del sistema
complemento resultantes de la activacin por la
va alterna, metabolitos del cido araquidnico),
m o l c u la s de a d h esi n (L F A -1 , IC A M -1 ,
ICAM-2, ELAM-1, entre otras) y receptores de
componentes del sistema complemento (C R I,
CR2, CR3 y CR4) (vanse caps. 11 y 12).
Las clulas que actan en primera instancia
son los m acrfagos locales, que ligan a su
mem brana al agente agresor. Este mecanismo
tiene lugar a travs de la unin de un receptor,
frecuentemente CRI y CR2, con los productos
del sistema complemento C3b y C3bi unidos al
microorganism o y provenientes de su activ a
cin por la va altema, inducida por componen
tes de la pared celular de las bacterias. Esas
uniones tambin ocurren entre pares de m olcu
las de adhesin (vase cap. 11). Como conse
cuencia de esa interaccin los macrfagos sinte
tizan y liberan interleuquina 1 (IL-1), factor ne
crosante de tumores (TNF) y factor quimiotcti
co de neutrfilos (NCF). Estos factores inducen
la rpida emigracin de los pohmorfonucleares
neutrfilos circulantes a los sitios extravasculares donde se encuentra el agente patgeno, esta
migracin es mediada por la interaccin de m o
lculas que se expresan en la membrana de los
neutrfilos (L FA -l) y las molculas de ad h e
sin ELAM-1 (molculas endoteliales de adhe
sin de leucocitos), ICAM -l e ICAM-2 (m ol
culas de adhesin intercelular) que se expresan
en el endotelio de los vasos, inducidas p o r la
IL-1 y TNF de origen macrofgico. Estas citoquinas inducen, a su vez, alteraciones en el en
dotelio vascular a travs del cual se produce la
emigracin de los neutrfilos.
Las interacciones entre las molculas de la
membrana de los neutrfdos y las del epitelio
vascular transducen seales, en las que partici
pan protenas G, fosfolipasa C, proteinquinasa

Aspectos bsicos de la inmunidad

C, entre otras, y llevan a la activacin del neutrfilo. La injuria tisular inducida por ste es d e
bido a la liberacin de productos intermediarios
del oxgeno (H^Oj, anin superxido, radicales
hidroxilo) y a la exocitosis de los contenidos de
los grnulos citoplasm ticos, especialm ente
elastasa. Los oxidantes desnaturalizan a las pro
tenas y facilitan su degradacin por las enzimas
proteolticas. En este proceso de injuria partici
pan tambin los metabolitos del cido araquid
nico (tromboxanos, leueotrienos) y los fragmen
tos C3a y C5a del sistema complemento, resul
tantes de su activacin por la va alterna.
Todo este proceso hace que los polimorfonu
cleares neutrfilos sean Jas clulas defensivas
que acuden en primer trmino al lugar de la in
feccin, observndose acumulo de ellas en las
primeras 24 horas, y posterior destruccin, por
fagocitosis, de los neutrfilos que participaron
activamente en el proceso. A partir de ese m o
mento las clulas predominantes son los macr
fagos los que, dada su distribucin, tardan ms
tiempo en llegar y son las que al fagocitar las
bacterias habrn de provocar su destruccin.
La muerte de las bacterias tiene lugar por me
canismos endocelulares que ocurren en los ma
crfagos y por mecanismos exocelulares media
dos por el sistema complemento. La accin fa
goctica se ejerce no slo cuando un microorga
nismo llega al tejido celular subcutneo, sino
tambin cuando hay una invasin del torrente
circulatorio. Intervienen en este complejo pro
ceso, adems de los polimorfonucleares neutr
filos sanguneos, las clulas histioides libres y
aun las fijas, localizadas en hgado, bazo, sinu
soides venosos, etc. (Para mayor informacin
sobre inflamacin, vase cap. 23.)
Los m icroorganism os fagocitados son, en
gran parte, destruidos por accin enzimtica y
metabolizados como material extrao. El pasa
je de las partculas al citoplasma de los fagoci
tos no es simple y ello ocurre previa invagina
cin de la membrana citoplasmtica que engol
fa a la partcula en su fase inicial y la rodea fi
nalm ente, originando un fagosoma. Seguida
mente, los grnulos lisosomales se unen al fa
gosoma y forman un fagolisosoma; durante es
te proceso las enzimas de los grnulos lisoso
males pasan al interior del fagolisosoma y se
inician los procesos de digestin del material
fagocitado, que es consecuencia de la activa
cin que ha experimentado el macrfago. D u
rante este proceso hay un aumento de los re
ceptores para Fe y C3b que esta clula expresa
en su membrana. Entre las hidrolasas lisosoma
les que son liberadas durante la fagocitosis se
encuentran fosfatasas, ribonucleasas, desoxiribonucleasas, proteasas, lipasas, glucosidasas y
esterasas. Ocurren aqu cambios en el metabo
lismo celular caracterizados por mayor consu

mo de oxgeno y glucosa, con acumulacin de


cido lctico y disminucin del pH por aumen
to de la gluclisis, hiperproduccin de agua
oxigenada y de los llamados radicales de ox
geno (anin superxido, oxgeno singlete, radi
cal hidroxilo). Estos productos son marcada
mente txicos para las bacterias y las matan en
pocos segundos. (Para otros aspectos de la fa
gocitosis, vanse caps. 3 y 21.)
En casos particulares como las infecciones
virales, procesos citotxicos mediados por c
lulas NK pueden constituir efectivos mecanis
mos inespecficos de defensa (vase cap. 3).
Las clulas NK, cuyo origen no est bien defi
nido, presentan semejanzas con los linfocitos
T, de los que se diferencian por carecer de re
ceptores para el antgeno. Su unin a las clu
las blanco se hace por molculas de adhe
sin; de esa unin surge la formacin de poros
en la m em brana de la clula im pactada y su
consecuente destruccin. Este dao celular est
mediado por molculas de la familia de las porinas o perforinas que funcionan de manera si
milar al componente C9 del sistema com ple
mento (vase cap. 22).
En la defensa inespecfica del husped pue
den participar tambin las llamadas protenas
de la fase aguda, entre las que se encuentran la
protena C reactiva, la cx2-macroglobulina y la
al-a n titrip sin a . En determinadas circunstan
cias, estos componentes sricos normales pue
den incrementarse grandemente y, a travs de
diferentes mecanismos, amplificar las defensas
naturales contra la agresin exgena.
La inmunidad innata constituye, en realidad,
la etapa previa de la respuesta inmune especfi
ca, pues para que sta se lleve a cabo se necesi
ta la captacin de los agresores por los macr
fagos, su degradacin y procesamiento en pe
queos pptidos para su presentacin adecuada
en la membrana celular, requisito indispensable
para su reconocim iento por los linfocitos T,
elem entos de la respuesta inm une adquirida
(vase cap. 2).
Otros productos inespecficos de defensa son
los interferones (lEN). Son pptidos con activi
dad antiviral que desempean un papel impor
tante en la resistencia inespecfica a la infec
cin; en un comienzo se supuso que era una
sustancia tnica elaborada espontneamente co
mo respuesta a una infeccin viral. En estos
momentos se sabe que a! menos hay tres enti
dades distintas denominadas a , p y y, las que
no slo funcionan como antivirales, sino que
tambin han demostrado un efecto antiproliferativo y una participacin activa en los meca
nismos regulatorios de la respuesta inmune.
Si bien el interfern no es especfico para el
virus inductor, presenta ciertas caractersticas
de especificidad con relacin a las clulas res

Mecanismos de defensa contra la agresin


ponsables de su elaboracin. As, el interfern
logrado por induccin de un determinado virus
es eficaz contra cualquier otro tipo de infeccin
viral, pero nicamente protege a las clulas de
la especie animal de donde proviene. Ello se
debera a que su elaboracin es patrimonio de
la informacin gentica de la clula y no del vi
rus; de ah su especificidad para aqulla.
En condiciones normales, todas las clulas
somticas son potenciahnente capaces de pro
ducir interfern, pero slo lo elaboran por esti
mulaciones preferentemente virales. No es ste
el nico mecanism o para inducir su produc
cin; la inoculacin de virus atenuados ARN,
polirribonucletidos sintticos de doble cadena
como poli Lpoli C y algunos extractos bacteria
nos -entre otros- pueden resultar eficaces.
Hasta el momento se han identificado los in
terferones a , P y y, que presentan diferencias
antignicas y son sintetizados por poblaciones
celulares distintas. El IFN -a es producido por
leucocitos estimulados por virus y polirribonu
cletidos. Los mismos inductores, al actuar so
bre fibroblastos, dan origen al INF-p. El IFNy
es producido por leucocitos estimulados por vi
rus y polirribonucletidos. Los linfocitos esti
mulados con antgenos o mitgenos, producen
IFNy, de all que se lo conozca tambin como
interfern inmune, que funciona como una lin
foquina. Los tres interferones tienen pesos mo
leculares prximos (18, 20, 21-24 kD) y estn
constituidos por 189, 187 y 143aa, respectiva
mente. Presentan diferencias antignicas entre
ellos. (Para ms informacin vase captulo 12.)
Los genes que codifican para los tres interfe
rones han sido clonados. Se han identificado 14
genes para el IFN -a, 2 a 5 para el IFN-p y 1
para el IFN-y. Este ltimo no presenta homolo
ga con los otros genes de IFN, pese a que co
difica una protena de tamao similar en la que
ciertos aminocidos ocupan las mismas p o si
ciones en los IFN a y p. Los interferones a y P
son estables a pH 2 a 4C y se mantienen acti
vos en presencia de dodeciisulfato de sodio. El
IFN-y, en cambio, es sensible a ambos trata
mientos. Los IFN P y y son glucoprotenas, no
as el IFN -a.
Se han aislado IFN de pesos moleculares su
periores al indicado, lo cual podra deberse, en
parte, al hidrato de carbono acom paante, a
que el IFN formara dmeros o a que se asociase
con otras protenas no liberadas durante la puri
ficacin.
De todos los interferones, el a y el P son los
que han demostrado un efecto viral ms mani
fiesto, en tanto que el IFN-y, si bien conserva
esa actividad, funciona mejor como una linfo
quina.
El IFN no acta como un anticuerpo neutra
lizando al virus; en una mezcla de virus e inter

fern, el primero conserva su poder infectivo.


El cido nucleico viral al penetrar en una clula
com ienza a replicarse y es durante esta fase
cuando la clula, por algn tipo de informacin
recibida, reactiva el material gentico conteni
do en el ADN nuclear transcribiendo un m en
saje en un ARNm, que se pone en contacto con
los ribosomas del citoplasma. La traduccin de
ese mensaje significa la sntesis de la protena
interfern. Cada especie animal elabora su
propio IFN, que abandona la clula productora,
destinada a morir por la infeccin viral. Por s
solo es incapaz de salvar a una clula agredida,
pero resulta efectivo para la proteccin de clu
las no invadidas.
En relacin con la actividad antiviral, los
IFN interfieren en la formacin de nuevos vi
riones. No son protenas que inhiben a replica
cin viral, sino que inducen a las clulas a sin
tetizar las protenas responsables del efecto an
tiviral. Los interferones no penetran en las c
lulas; muy posiblemente interaccionen con un
receptor de la superficie de la clula y se expre
sen va un segundo mensajero. En apoyo de
ello est el hecho de cjue la inyeccin intracelu
lar de INF no induce efecto antiviral.
El mecanismo bsico de accin del IFN pa
recera que est relacionado con la interferencia
a que molculas de ARNm traduzcan m olcu
las tempranas o progenitoras de la sntesis vi
ral. Se ha demostrado que el IFN induce la sn
tesis de protenas celulares, algunas con activi
dad enzimtica. Una de ellas tiene capacidad
para convertir, en presencia de ARN de doble
cadena, al ATP en un oligo A particular, que a
su vez activara una endorribonucleasa que hidrolizara los ARNm virales, inhibiendo de este
modo la sntesis de protenas estructurales del
virus. El IFN tambin inhibira la sntesis pro
teica en forma indirecta al inducir una protein
quinasa que, en presencia de ARN de doble
cadena, fosforila el factor de elongacin, inter
firiendo de esta forma en el proceso de traduc
cin. Ei IFN puede, adems, potenciar la inhi
bicin de la sntesis proteica al in d u cir una
fosfodiesterasa, la que escinde las secuencias
term inales 3 CCA del ARNt, im pidiendo la
unin del aminocido. Si bien los mecanismos
descritos podran explicar la interferencia de
los IFN en la sntesis de las protenas v irales,,
existen todava interrogantes que no han recibi
do respuesta adecuada.
Elementos especficos de defensa
Si bien las barreras naturales y los m ecanis
mos de la inmunidad innata son de valor ex
traordinario para la defensa del husped, sabe
mos que, si se produjesen soluciones de conti
nuidad u otras alteraciones, pueden d e ja r de

Aspectos bsicos de la inmunidad

cumplir eficazmente su cometido. En esos ca


sos, los agentes agresores, al penetrar y ejercer
su accin nociva sobre tejidos y rganos, pro
ducen enfermedad. Significa ello que cuando
los mecanismos naturales inespecficos dejan
de actuar se han agotado nuestros medios de
lucha contra la agresin? En estos casos dispo
nemos de quim ioterpicos y antibiticos que
pueden ser eficaces en algunas oportunidades;
pero podemos adems crear mecanismos de
fensivos especficos, los de la inmunidad, cuyo
estudio habremos de encarar.
Cuando un agente agresor real o potencial
(antgeno) penetra en un vertebrado adulto (pri
mer estmulo), ste experim enta una serie de
modificaciones que determinan que su compor
tamiento ulterior frente a nuevas penetraciones
del mismo antgeno pueda ser de naturaleza di
ferente. Ello depende de las dosis antignicas
empleadas en cada caso, del tiempo transcurri
do entre el primer estmulo y los siguientes, de
la calidad de los anticuerpos especficos forma
dos, de ciertos factores genticos propios del
individuo, etc., todo lo cual configura modifi
caciones de la sensibilidad. Si las reestim ula
ciones antignicas provocan en el husped va
riaciones cuantitativas de la sensibilidad (normosensibilidad o hiposensibilidad) con respec
to a la accin directa que ejerce el antgeno, se
dice que hay inmunidad. El ejemplo clsico es
el de la inoculacin de una toxina microbiana a
dosis subletales en un animal de experimenta
cin. T ranscurrido cierto tiem po, el anim al
puede recibir dosis superiores sin sufrir trastor
nos, lo que significa, desde el punto de vista
cuantitativo, que ha modificado su sensibilidad
para la toxina. El animal es inmune a la accin
txica.
Cuando las inoculaciones de antgenos pro
ducen en el husped modificaciones tales que
hacen que reaccione con cambios cualitativos
de la sensibihdad frente a la reinoculacin del
mismo antgeno, se dice que hay alergia. As
ocurre, por ejemplo, al inocular un cobayo con
100 mg de ovoalbmina y reinocularlo tres se
manas despus, por va endovenosa, con canti
dades inferiores de antgeno. El animal reaccio
na frente al segundo estmulo con una sensibili
dad exagerada que puede llevarlo a la muerte
(choque anafilctico). Es indudable que esa hi
persensibilidad no es causada por el antgeno
en s, ya que se le inocularon dosis menores
que las del primer estmulo. Ello se debe a la li
beracin de mediadores qumicos como conse
cuencia de la interaccin del antgeno con sus
anticuerpos especficos fijados a clulas (mas
tocitos). Esos mediadores modifican la sensibi
lidad y sta es de una calidad distinta a la pro
vocada directam ente por el antgeno (vase
cuadro 1-1).

inmunidad. Conceptos generales;


mecanismos
El trmino inmunidad proviene del voca
blo latino inmun (in privativo; munus, carga; o
sea privado de carga, privilegiado). Este voca
blo se utilizaba en la poca del hiiperio Roma
no pai-a identificar a las personas eximidas del
pago de impuestos, beneficio que poda obte
nerse por herencia o adquirirse mediante algu
na accin particular que era prem iada por el
Estado. Pero desde el punto de vista mdico, y
para no incurrir en confusiones, es necesario
determ inar exactam ente qu se entiende por
inmunidad . Se la considera como sinnimo
de resistencia y sirve para expresar la resultante
de dos sistemas opuestos, el agente invasor y
las reacciones del husped invadido, resultante
que puede tener todos los valores, desde cero a
infinito. La inm unidad se caracteriza porque
como respuesta al estm ulo antignico no se
desencadenan manifestaciones colaterales per
judiciales para el husped, cosa que en cambio
ocurre en la alergia. En un sentido ms amplio,
y sobre la base de los conocimientos que ac
tualmente se tienen sobre los fenmenos inm u
nolgicos, debe considerrsela como la re s
puesta de un husped a un agente agresor real o
potencial y las consecuencias de ella derivadas.
Un vertebrado inmune posee ciertos elemen
tos especficos que actan sobre el antgeno o
agente agresor que les ha dado origen, neutrali
zndolo o impidiendo un dao real o potencial
en el organismo. Pero cmo y dnde se for
man esos elem entos? Por qu en un animal
sus componentes normales no expresan esa ac
tividad? En qu casos particulares y cm o
pueden formarse productos que acten contra
los propios componentes orgnicos dando lugar
a las llam adas enferm edades por autinm unidad? Cul es la causa del rechazo de los injer
tos homlogos y heterlogos? Si bien hasta no
hace mucho tiempo nuestra ignorancia al res
pecto era grande, num erosos hechos experi
mentales han facilitado su interpretacin.
Tipos de inmunidad
Dijimos ya que los inmunes eran privilegia
dos y que este privilegio podan tenerlo desde
el nacimiento -posean por lo tanto una inmu
nidad natural-, o conseguirlo ulteriormente -la
inmunidcid era en este caso adquirida- Desde
el punto de vista mdico existen tambin esos
dos tipos de inmunidad.
Inmunidad natural
Si bien es poco lo que se sabe de ella, es un
hecho cierto que diferentes especies animales

Mecanismos de defensa contra la agresin

Cuadro 1-1. Respuesta del husped a su agente agresor


Husped

R eaccin

F enm eno
Espontnea

A ctiva
Prim er estm ulo

M odificacin de
la capacidad
reactiva norm al

M odificaciones
cuantitativas de la_
sensibilidad (norraosensibilidad o
hiposensibilidad)

Experim ental
- Inm unidad

Espontnea
Pasiva
E xperim ental
A doptiva

Experim ental
A c tiv a

Estm ulos
poste-
riores

A nafilaxia

IVIodificaciones
cualitativas de la
sensibilidad
(hipersensibilidad)

Inm ediata

A nticuerpos
sricos fijos
a clulas

P a s iv a
A c tiv a

A topia

P a siv a

A lergia
A nticuerpos
sricos circu
lantes

Fenm eno
de A rthus

/Votivo
P asiv o

, [c lu la s esp ecfica m en - Alergia tipo tuberculnico


K ctaiaaa 4
sensibilizadas
1 ,
,.
,
,
[
Rechazo al nomoinjerto, etc.

presentan resistencia variada a la accin de los


distintos microorganismos o de sus toxinas. La
razn de ello puede residir en diferentes causas:
1) Factores genticos y raciales. Existen nu
merosos ejemplos que demuesti'an influencias
de ese tipo. Los animales carnvoros y las aves
son resistentes al carbunco; no ocurre as con
los hervboros, que son sensibles aunque dentro
de ciertas limitaciones. Entre las ovejas, las de
raza europea son sensibles, mientras que las ar
gelinas son resistentes a dicha infeccin.
Otro hecho curioso lo presenta el gonococo,
que, si bien enferma al hombre producindole
blenorragia, no tiene capacidad para infectar a
ninguno de os anim ales de experim entacin
normalmente utilizados.
Dentro del gnero humano hay factores ra
ciales que confieren a los individuos distinta
resistencia. La raza negra, por ejemplo, es m u
cho ms sensible que a blanca a la tuberculo
sis y algunas enfermedades tropicales, e inclu
so dentro de la ltima, hay individuos ms o
menos resistentes a diferentes m icroorganis
mos.
2) Edad. Es otro factor que debe tenerse en
cuenta. El virus del sarampin, cuando infecta
al hombre, por regla general no deja secuelas,
pero si la infectada es una embarazada con me
nos de tres meses de gestacin el embrin pue
de sufrir lesiones cardacas graves, cataratas,
sordera. Fetos de mayor edad son resistentes.
Otro ejem plo lo tenemos en el Trypanosoma

cruzi que, si bien no infecta a la rata adulta, tie


ne marcado poder infectivo sobre las cras lac
tantes de menos de una semana de vida.
3) Influencias hormonales. Variaciones hor
monales pueden producir modificaciones en la
resistencia a la infeccin por diferentes agentes
agresores. Los diabticos son susceptibles a las
infecciones de piel, en especial la furunculosis;
tanto los hipotiroideos como los hipertiroideos
-y se suman quienes padecen de hipoadrenalism o - poseen mayor susceptibilidad a la infec
cin que los individuos normales.
4) Anticuerpos naturales. En algunos anim a
les con marcada resistencia a distintos agentes
agresores se ha demostrado la existencia de an
ticuerpos especficos similares a los formados
en el proceso inmunitario adquirido. Se obser
va a veces que individuos que exhiben alta re
sistencia a ciertas exotoxinas bacterianas tienen
en su sangre circulante antitoxinas similares a
las que aparecen en infectados o vacunados
contra ellas. Esto podra deberse a infecciones
subagudas que pasaron inadvertidas, pero que
han servido para dejar algn grado de resisten
cia. Lo que resulta muy difcil de explicar es
que en determ inadas personas o anim ales se
encuentran anticuerpos contra numerosos m i
croorganismos, lo que significara, de acuerdo
con la concepcin anterior, que han sufrido in
fecciones m ltiples, cosa un tanto difcil de
aceptar, sobre todo teniendo en cuenta que esos
anticuerpos han sido observados a veces en
anim ales refractarios a la accin de lo s m i

1o

Aspectos bsicos de la inmunidad

croorganism os cuyos correspondientes an ti


cuerpos contienen. Cuando se iiaga referencia a
la incidencia de las mutaciones somticas en la
creacin de diversificacin en las inm unoglo
bulinas (cap. 6) se podr apreciar la posibilidad
de aparicin de estos anticuerpos como conse
cuencia de ese hecho.
Por hibridacin de clulas de bazo de ratones
embrionarios con clulas de plasmocitom a se
han conseguido hbridos que sintetizan an ti
cuerpos especficos de la clase IgM, de baja
afinidad. Dado que los embriones no fueron es
timulados ni expuestos a antgenos extraos,
ello significa que en sus clulas de bazo ya
exista informacin para la sntesis de ciertos
tipos de anticuerpos, los que, dadas las circuns
tancias expuestas, deben ser considerados co
mo naturales.
Sea cual fuere el mecanismo que confiere la
inmunidad natural, es innegable que hay una
resistencia particular, natural o gentica, que
hace que la resultante de la interaccin de ese
sistema opuesto agente invasor-husped infec
tado se desplace totalmente hacia este tiltimo
lado y ese privilegio natural o inmunidad natu
ral sea un hecho concreto.
Inm unidad adquirida
Es la que en realidad nos interesa, ya que se
trata de una lucha especfica entre el agente in
vasor y los anticuerpos y clulas sensibihzadas
por l originados. Puede ser de tres tipos: acti
va, pasiva y adoptiva.
1) La inmunidad activa se divide a su vez en:
a) Adquirida espontneamente
b) Provocada artificialmente
En la inmunidad activa adquirida espont
neam ente, las defensas especficas se co n si
guen como consecuencia de la penetracin en
el individuo de un agente invasor que lo enfer
ma. No obstante, el husped invadido consigue
activar las clulas del sistema inmune y elabo
rar anticuerpos especficos, los que perm ane
cen en el organismo aun mucho despus de ha
ber desaparecido el agente infectante.
La inm unidad activa provocada artificial
mente se consigue mediante la inoculacin de
antgenos, que pueden ser protenas com ple
jas, m icroorganism os vivos atenuados, m i
croorganism os m uertos, o bien las toxinas
m ism as, pero m odificadas de modo tal que
conserven su capacidad antignica aunque en
el proceso de modificacin hayan perdido su
accin txica (toxoides). El husped, ante es
tos estmulos, responde como en el caso ante
rior. La inmunidad es activa porque el infecta
do o vacunado elabora sus propios elementos

defensivos y adems es de larga duracin por


que - a pesar de que los anticuerpos elabora
dos, como protenas que son, se metabolizan y
eliminan por los emuntorios en un perodo no
superior al m e s- el aparato encargado de su
fo rm a ci n sig u e tra b a jan d o y re p o n ie n d o
constantemente, por un tiempo bastante largo,
los anticuerpos que van desapareciendo del
torrente circulatorio.
2) La inm unidad adquirida pasiva puede ser
tambin:
a) Espontnea (congnita)
b) Conferida artificialmente
La inmunidad adquirida en forma pasiva y
espontnea es la que tiene el recin nacido co
mo consecuencia de su transferencia por la ma
dre a travs de la placenta o el calostro; en
cambio, la pasiva conferida artificialmente es
la que se consigue por inoculacin de suero
proveniente de otros individuos o animales in
munizados con anterioridad y en los cuales hay
un alto contenido de anticuerpos especficos.
Este tipo de inmunidad es de corta duracin,
pues los anticuerpos son metabolizados como
todas las protenas y eliminados por los emun
torios a breve plazo, de modo que el estado in
munitario termina con la desaparicin de di
chos anticuerpos por no estar estim ulado su
propio aparato formador.
La inmunizacin activa artificial provocada
por vacunacin persigue el logro de una protec
cin de larga duracin para que acte preventi
vamente. Como las defensas en este caso tardan
un tiempo en aparecer, algo ms de una semana,
la vacunacin no puede ser utilizada como cura
tiva. Se apelar entonces a la inmunizacin pa
siva, mediante seroterapia o la administracin
de inmunoglobulinas hiperinmunes, ya que esos
anticuerpos introducidos actuarn de inmediato,
neutralizando el agente mrbido o sus toxinas y
favoreciendo el restablecimiento.
3) Inmunidad adoptiva:
Es la que se consigue cuando se transfieren
clulas inm unolgieam ente com petentes. Su
duracin ser distinta segn que las clulas
transferidas sean islogas, homlogas o heter
logas.
Mecanismo de la inmunidad antiinfecciosa
Cuando las bacterias se introducen directa
mente en la sangre, gran parte de ellas son en
globadas por los macrfagos e histiocitos fijos
del hgado, bazo, sinusoides venosos y en parte
son fagocitadas por los polim orfonucleares e
histiocitos de los pulm ones, donde floculan

Mecanismos de defensa contra la agresin


parcialmente. Si las bacterias que han penetra
do son avirulentas, este mecanismo las elimina
rpidamente, En el caso de bacterias de marca
do poder patgeno, a esa primera eliminacin
parcial le sigue una multiplicacin exagerada
en el sitio donde se han localizado y sobreviene
como consecuencia una invasin al torrente
sanguneo; del triunfo de la multiplicacin so
bre el mecanismo de la eliminacin, o vicever
sa, depende la infeccin.
La muerte del animal por septicemia aguda
se produce cuando esos mecanismos resultan
insuficientes.
Las bacterias que penetran por otras vas su
fren un mecanismo de eliminacin sim ilar al
anterior -n o tan intenso-, que depende funda
mentalmente de la naturaleza del tejido donde
se han localizado. Si la inoculacin es intrape
ritoneal, la invasin al torrente sanguneo es r
pida; lo es menos si la inoculacin ha sido he
cha por va intram uscular y menos aun si se
inocula por va subcutnea.
El pasaje de las bacterias desde el punto de
inoculacin a la sangre se realiza siempre por
los linfticos, y en la eliminacin de los m i
croorganismos invasores los macrfagos de los
ganglios linfticos regionales desempean un
papel preponderante. Si las bacterias son avirulantas o de virulencia relativa y penetran en al

11

gn tejido o zona donde el pasaje sanguneo es


muy lento, la infeccin puede no llegar a la san
gre y quedar en los ganglios, donde puede per
manecer por mucho tiempo aunque el animal no
experimente reacciones que indiquen enferm e
dad, En la eliminacin de algunas bacterias par
ticipan tambin, como ya se ha visto, sustancias
bactericidas elaboradas por el husped, que ac
tan por s solas o formando parte de sistemas.
Hemos considerado hasta ahora el m ecanis
mo por el cual son eliminadas hasta cierto pun
to las bacterias que han penetrado en un animal
normal, pero ese mecanismo puede increm en
tarse m ediante la inm unizacin esp ecfica a
partir de un cultivo muerto de dichos m icroor
ganismos.
Un animal inmunizado activamente reaccio
na frente a las bacterias como si stas fueran
avirulentas o de virulencia muy escasa y logra
entonces que el equilibrio se desplace de modo
que los mecanismos de fagocitosis y de elim i
nacin predominen sobre los de penetracin de
las bacterias e impidan la infeccin. Para con
seguir este desplazamiento en el equilibrio pue
de hacerse una inmunizacin activa, com o ya
hemos dicho, o en cambio inmunizarse pasiva
m ente mediante la inoculacin, en la m ayor
parte de los casos, de suero proveniente de ani
m ales in m u n izad o s activ am en te. A d em s,

Eliminacin

sanguneo

Fig. 1-1. Esquem atizacin de los diferentes fenm enos que pueden ocurrir cuando una bacteria penetra en un v erteb rad o
adulto. A, B acteriem ia, elim inacin por fagocitosis. B, Infeccin aguda, septicem ia y m uerte. C, Infeccin m oderada, fo r
m acin de anticuerpos, inm unidad.

12

Aspectos bsicos de la inmunidad

cuando ha habido infeccin en un individuo no


inmunizado, en los perodos finales de la infec
cin, y como consecuencia de la elaboracin de
anticuerpos especficos contra el microorganis
mo infectante, se crea un estado inm unitario
que hace que el proceso infeccioso pueda ser
vencido si no se debe a microorganismos m ar
cadamente virulentos (fig. 1-1). Este es el me
canismo ms comn de respuesta inmune a una
infeccin bacteriana; no obstante, en algunos
casos particulares, la inmunidad mediada por
clulas tiene participacin activa.
El suero de los animales inoculados con do
sis repetidas de toxina diftrica, tetnica u otras
exotoxinas, adquiere la propiedad de^ neutrali
zarlas por formacin de antitoxinas. stas, que
constituyen la base de la inmunidad antitxica
considerada como el tipo ms simple y sencillo
de inmunidad y que ejercen una accin neutra
lizante especfica sobre las exotoxinas, pueden
encontrarse en el suero del hom bre o de los
animales como consecuencia de procesos in
fecciosos por bacilos toxignicos, o por la ino
culacin experimental de toxinas o toxoides.
Adems de estas antitoxinas originadas por un
proceso inmunitario activo, puede conseguirse
cierto ttulo de las mismas en la sangre circu
lante del hombre o animales de experim enta
cin m ediante su inoculacin bajo form a de
suero antitxico. La inm unidad antitxica es
simple, ya que se produce mediante la neutrali
zacin directa de la toxina por su respectiva an
titoxina existente en el medio circulante, sin
que haya necesidad de que intervengan los ma
crfagos y otros fagocitos indispensables para
la inmunidad antibacteriana.
Su mecanismo en nada depende del comple
jo sistema de clulas que, en cambio, es funda
mental en el caso de que la infeccin sea pro
ducida exclusivamente por microorganismos y
no por sus toxinas. Un hecho muy caractersti
co de la inmunidad antxica es que la concen
tracin de la antitoxina microbiana presente en
el torrente circulatorio es relativam ente baja;
as, en el caso de la difteria hay inm unidad
cuando la concentracin de antitoxina circulan
te, conseguida como consecuencia de una in
munizacin activa, es alrededor de 0,01 U.A.
Esta pequea cantidad de antitoxina sera sufi
ciente para neutralizar la toxina originada en
una infeccin primaria. Si las cantidades de to
xina rebasan la capacidad neutralizante de la
antitoxina la infeccin puede producirse, pero
es necesario hacer notar que en los individuos
inm unizados activam ente, a diferencia de lo
que pasa con los no inmunes, pequeos estm u
los, conseguidos como consecuencia del nuevo
ingreso de toxina a los tejidos, hacen que rpi
damente y con suma facilidad elaboren gran
cantidad de antitoxina y de este modo aumen

ten enormemente las defensas especficas (va


se cap. 24).
Nuestros conocimientos sobre la inmunidad
antiviral no son tan claros como desearamos;
no obstante sabemos que en la defensa contra
los virus los principales elementos de defensa
son los linfocitos citotxicos. Es necesario te
ner en cuenta una serie de factores que pueden
incidir en dicha inmunidad, factores que estn
relacionados con la especie animal, la edad del
sujeto en experimentacin, el tejido donde se
im planta el virus, la va de inoculacin. Un
ejemplo lo tenemos en el virus de la influenza,
que inoculado por va subcutnea no infecta al
ratn pero, si en cambio es inoculado por va
intranasal, s le produce la tpica neumona vi
ral al cabo de una semana.
El mecanismo de invasin viral y las opera
ciones de limpieza llevadas a cabo por el macroorganismo infectado son muy similares a lo
que ocurre en las infecciones bacterianas pero
no debemos olvidar cul es la estructura y me
tabolismo de los virus y su exclusiva prolifera
cin en las clulas del husped.
Lo que s es evidente es que, cuando se ino
culan por las vas que corresponden suspensio
nes de virus atenuados, o en los casos de infec
ciones virales por enfermedad, se consigue una
inmunizacin activa de largo plazo, muchas ve
ces de por vida, mucho ms eficaz que la inmu
nidad bacteriana. Es tambin evidente que me
diante la inoculacin de esos virus atenuados a
animales adecuados puede conseguirse la pre
paracin de sueros antivirus para ser emplea
dos eficazm ente en la inm unizacin pasiva
(vase cap. 27).
In m u n id ad local
Desde hace mucho tiempo se sospechaba la
existencia de un estado inmunitario local, en
cierto modo independiente de la inm unidad
general, pero slo en los ltimos tiempos, con
el descubrimiento de los anticuerpos citoflicos
y la inm unoglobulina IgA secretoria (vase
cap. 5) se ha logrado una explicacin convin
cente.
Sabemos que en el hombre y ios animales
existen diferentes clases de inmunoglobulinas
que pueden tener especificidad para un mismo
determinante antignico; tenemos conocimien
to tambin de que los anticuerpos, como con
secuencia de modificaciones en sus estructu
ras, pueden variar en su comportamiento bio
lgico. Algunos de ellos tienen capacidad para
fijarse a clulas, en especial a macrfagos: son
los anticuerpos citoflicos y se caracterizan
porque al fijarse a receptores celulares del ma
crfago lo arm an con anticuerpos especfi
cos capaces de fijar al antgeno. El armado de

Mecanismos de defensa contra la agresin


los macrfagos con anticuerpos citoflicos, va
receptor para Fe, puede ocurrir en el curso de
una infeccin, en la zona inflamada donde se
ha originado el proceso o en los ndulos linf
ticos, por contacto de los macrfagos con clu
las form adoras de anticuerpos o anticuerpos
circulantes. Los macrfagos armados pueden,
regionalmente o a distancia de la infeccin ini
cial, posibilitar la fagocitosis del antgeno por
fijacin previa a su membrana, lo que favorece
su endocitosis, o facilitar su destruccin por un
mecanismo no fagoctico. No caben dudas de
que los m acrfagos que tienen fijados an ti
cuerpos citoflicos deben desempear un papel
im portante en la inm unidad local contra los
agentes agresores externos.
Bl hecho que ha contribuido a una m ejor
comprensin de la inmunidad local ha sido el
d escubrim iento de que la inm unoglobulina
IgA, que se encuentra en el torrente sanguneo
en pequeas cantidades, est presente en con
centraciones relativamente altas en el calostro,
sahva, lgrimas, secrecin bronquial e intesti
nal. En todas estas secreciones, la IgA no res
ponde a su estructura normal, sino que adquie
re una estructura dimrica asociada a un com
ponente S o secretorio, diferente de los pp
tidos constitutivos de las inm unoglobulinas,
elaborados por las clulas epiteliales glandula
res y que le confiere al anticuerpo resistencia a
la accin de las enzim as proteolticas. Esta
IgA es de origen local y est elaborada por las
clulas formadoras de anticuerpos ubicadas subepitelialm ente en las glndulas m ucosas y
membranas. Es de singular importancia en la

13

regulacin de la inmunidad local, por su parti


cipacin en la defensa de las membranas y ca
vidades abiertas contra los agentes de la agre
sin (vanse caps. 5 y 17).
B IB L IO G R A FIA
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La respuesta inmune

RICARDO MARGNI

En el captulo 1, al discutir los mecanismos


de la defensa contra la agresin de patgenos
reales o potenciales, se enfatizaba que en todos
los vertebrados adultos poda activarse un sis
tema de reconocimiento especfico del agente
agresor, conocido como sistema inmune. A fi
nes del siglo pasado y en los comienzos de esta
centuria, se discuti vivamente si ese mecanis
mo era mediado por molculas o por clulas,
siendo activos defensores de estas postulacio
nes Ehrlich y Metchnicoff. Este ltimo sostena
que la defensa inmune era ejercida por los m a
crfagos, los que al fagocitar las bacterias por
un proceso similar al que ocurre con las part
culas inertes, aseguraban su destruccin. Ehr
lich, en cambio, consideraba que las clulas
elaboraban receptores especficos en sus mem
branas los que, luego eran liberados al plasma
circulante, y que esas molculas eran las que
neutralizaban al antgeno o agente agresor.
Entre los aos 1930 y 1960, especialmente
en lo que a respuesta humoral se refiere, dos ti
pos de teoras fueron expuestas. Las instructi
vas postulaban que el antgeno inoculado, ac
tuando como molde o matriz, interfera en la
conformacin de la gamma globulina que nor
malmente se sintetizaba, haciendo que su es
tructura fuese complementaria de la del antge
no. Las otras teoras, denominadas selectivas,
consideraban que el antgeno no influa sobre
el tipo de anticuerpo que habra de formarse,
sino que aqul seleccionaba y estim ulaba las
clulas que elaboran el anticuerpo especfico,
para lo que estaban programadas desde el naci
miento.
Con el correr del tiempo los conceptos han
ido cambiando, en gran parte se han integrado
y actualmente sabemos que el sistema inmune
est formado por dos grupos fundamentales de

2
clulas. Por un lado macrfagos y clulas simi
lares que actuando en forma inespecfica parti
cipan, de la captacin del antgeno, su procesa
miento y presentacin para el reconocimiento
por los linfocitos, clulas con actividad espec
fica. Algunas estirpes de estas clulas slo son
capaces de reconocer al antgeno por contacto
directo, cuando les es presentado por el macr
fago en forma adecuada; otras secretan molcu
las denominadas anticuerpos, poseedoras de es
tructuras especiales, que pueden unirse al ant
geno especficam ente y neutralizar su efecto
agresor. A las clulas capaces de interaccionar
especficamente con el antgeno o de secretar
molculas que puedan hacerlo se las denomina
inmunocompetentes, y a las que participan en
otras etapas de la respuesta inmune clulas ac
cesorias.
En el hombre y dems vertebrados normal
mente existen estas clulas, de modo que ten
gan asegurada la posibilidad de poner en mar
chados mecanismos de defensa especfica con
tra los agentes patgenos, agresores reales o
potenciales. De dnde provienen esas clulas?
Cmo se originan y adquieren capacidad para
el reconocimiento especfico? Cmo es ese re
conocim iento y cules son los m ecanism os
efectores? Las clulas inm unocom petentes
constituyen una nica estirpe celular o hay va
rios tipos de ellas con funciones distintas?
Clulas indiferenciadas multipotentes
Las clulas del sistema inmune se originan
durante la hematopoyesis, proceso por el cual a
partir de elulas indiferenciadas multipotentes
o stem cells y en funcin del microambiente
que las rodea, estas clulas pueden diferenciar
se en distintas lneas celulares: mieloide, linfoi-

La respuesta inmune
de, eritroblastoide, monocitoide, megacariocitoide. Aquellas clulas de la serie linfoide ori
ginadas durante este proceso constituyen el
componente celular especfico del sistema in
mune (fig. 2-1).
Al comienzo del desarrollo embrionario las
primitivas clulas indiferenciadas desarrollan a
partir del m esnquim a; a m edida que el em
brin evoluciona se las encuentra en el saco vitelino, hgado fetal, bazo y mdula sea, lugar
ste donde perduran durante la vida extrauteri
na. Durante el desaiTollo seo las clulas mesenqui males se localizan en el rea subendostal, surgiendo por un lado los osteoblastos y os
teoclastos y por el otro las clulas indiferenciadas o stem cells pluripotentes. Estas clulas
se dividen dando clulas hijas, algunas de las
cuales retienen sus caractersticas subsistiendo
com o clulas in diferen ciad as, en tanto que
otras se diferencian en las distintas lneas celu
lares del sistema hematopoytico. Se han en
contrado stem cells con capacidad de desa
rrollo ms limitado dentro del linaje de las c
lulas sanguneas. As, algunas de ellas slo son

15

capaces de diferenciarse en clulas mieloides, o


clulas linfoides, o clulas eritroides.
Segtin el microambiente que las rodee, y su
posibilidad de interaccionar con matrices celu
lares como hialuronato, otras molculas pro tei
cas de membranas celulares y molculas libres
del tipo de las interleuquinas, especialm ente
IL-7, una clula indiferenciada podr derivar
en una determ inada lnea celular del sistem a
hematopoytico. Todo ello tiene lugar por in
teracciones protena-protena, jugando un p a
pel muy importante en este mecanismo la m o
lcula CD44, uno de los constituyentes de los
elu ster o grupos de diferenciacin (v ase
cap. 11) y el cido hialurnico. CD44 es una
protena trasm em brnica, cuyo gen tene 20
exones IO de los cuales pueden ser ensam bla
dos en forma alternativa, originando isoformas
cuyo dom ino extracelular expresa diferentes
aminocidos insertados en la forma estandard
de la protena, lo que hace que se pueda un ir a
diferentes ligandos, hecho regulado por el m i
croambiente en el que prolifera. En embriones
de ratn la molcula CD44 es deteetable cu an

Antiouerpos

Y A
AA

Progenitor eritroide

F ig. 2-1. G eneracin de clulas hem atopoyticas a partir de una clula indiferenciada o stem ceU" pluripotente. C 'FU:
unidad form adora de colonias; G M -CSF: factor estim ulante de colonias d e monocitos; G -CSF: factor estim ulante d e ca o lo - .
nias de granulocitos; 11.-1, lL -3, lL-7: interleuquinas ), 3 y 7.

16

Aspectos bsicos de la inmunidad

do se desarrolla el mesodermo y endodermo y


cuando ocurren las migraciones celulares, per
mitiendo de este modo, segn el sitio de reca
lada, las diferenciaciones de las stem cells .
Mediante el uso de anticuerpos monoclonales
especficos esta molcula ha sido detectada en
las clulas indiferenciadas, en progenitores de
la serie linfoide y en las clulas que penetran
al timo y son inducidas a diferenciarse en ti
mocitos.
Otras molculas que juegan un rol importan
te en la fijacin y migracin de estas clulas en
su entorno son los componentes de la familia
de las integrinas (vase cap. 12), glucoprote
nas constituyentes de los receptores de adhe
sin. Isoform as de una de ellas, la protena
VLA, pueden actuar como receptores para laminina, fibronectina y colgeno. Las integri
nas, de las que se han identificado 20 formas
distintas, son heterodmeros formados por las
cadenas peptdicas a y (3 no covalentem ente
unidas; de stas se conocen 14 y 8 cadenas di
ferentes, respectivam ente. V arias isoform as
son originadas por empalmes alternativos de
exones ocurridos a nivel gnico y algunas mo
dificaciones postraduccionales. Estas integrinas
parecen desempear un papel importante, fun
cionando como verdaderas seales durante la
migracin celular a distintos rganos y tejidos.
Linfocitos
A partir de estas clulas indiferenciadas deri
van las distintas estirpes de linfocitos o clulas
inmunolgieamente competentes. En los mam
feros, entre el 0,5% y 10% de las clulas pro
ducidas diariamente son linfocitos, muchos de
los cuales mueren en pocos das, mientras que
algunos se mantienen como clulas de larga vi
da (clulas con memoria).
Existen poblaciones de linfocitos funcionalmente distintas, hecho relacionado con el rga
no linfoide primario en el que han adquirido
competencia inmunolgica. Entre estas clulas,
los linfocitos B (LB) son los productores de an
ticuerpos o inmunoglobiilinas; los linfocitos T
(LT), en cambio, carecen de esa propiedad. Los
LT pueden ser efectores como los LT citot
xicos (Te) o citolticos (CTL) que matan y des
truyen aquellas clulas blanco que expresan
epitopes extraos en su superficie, o regulado
res como los linfocitos T cooperadores o helper (Th) que ayudan a los LB y Te a cumplir
su funcin eficientemente. Si bien con frecuen
cia se hace mencin de una poblacin de linfo
citos T reguladores, capaces de expresar una
funcin supresora (Ts), contraria a la desarro
llada por los Th, hasta el momento no se ha po
dido aislar ningn clon de clulas linfoides que
expresen exclusivamente tal funcin. Los me

canismos de supresin existen en una respuesta


inmune, y es muy probable que los mismos es
tn regulados a nivel molecular por interaccio
nes mediadas por molculas sintetizadas por
las otras estirpes linfoides conocidas.
Los linfocitos T y B no son diferenciables
morfolgica ni tintorialmente; no obstante ello
puede hacerse a travs de la deteccin, median
te el uso de anticuerpos monoclonales especfi
cos, de los marcadores de membrana propios
que cada uno de ellos expresa. A las clulas
linfoides que no poseen los marcadores clsi
cos de membrana se las denomina linfocitos T
nulos o TO.
Si una clula indiferenciada, inmunolgicamente incompetente, adquiere competencia in
munolgica en el ambiente de la bursa de Fabricius (aves) u otros rganos linfoides prima
rios de otros vertebrados (mdula sea, placas
de Peyer, amgdalas, apndice cecal), la clula
resultante ser un linfocito B. Si lo hace en el
ambiente del timo, el producto de diferencia
cin ser un linfocito T. El contacto de estas
clulas con clulas epiteliales de los rganos
linfoides primarios, bursa o bursa smilis y del
timo, inducen programas de expresin de genes
que sern especficos para los linfocitos B o los
linfocitos T, respectivamente. Dicha expresin
tiene lugar a lo largo de la diferenciacin que
experimentan estas clulas hasta lograr la com
petencia inmunolgica y su funcionalidad, por
lo que la identificacin de determinados marca
dores de membrana permitir, en cada una de
estas lneas celulares, establecer el grado de
madurez adquirido.
Linfocitos B: caractersticas y ontogenia
Durante el proceso de diferenciacin los lin
focitos B evolucionan, a partir de una stem
cell, en clula Pro-B o precursor B inmadu
ro, clula Pre-B , linfocito B inmaduro y lin
focito B maduro, el que a su vez puede diferen
ciarse en clula plasmtica. En los diferentes
estadios aparecen en la membrana celular pro
tenas especficas o marcadores, algunos de los
cuales perduran durante la mayor parte de la
evolucin y otros son propios de distintos esta
dios celulares.
La clula Pro-B se caracteriza por expresar
en su superficie marcadores tpicos del linaje
B, pero no sintetiza ninguna de las cadenas
constitutivas de inmunoglobulinas. En este es
tadio de diferenciacin slo se produce el rea
rreglo de los genes D^,, Jj_, y V,_, (vase cap. 6).
La enzima deoxinucleotidil transferasa termi
nal (TdT) est presente en el ncleo de los pri
meros progenitores de los linfocitos B y T y
tiene un papel importante en la creacin de di
versificacin, ya que su funcin es catalizar la

La respuesta inmune
incorporacin al azar de nucletidos en extre
mos expuestos de ADN. Ello lleva a la inser
cin de residuos de origen no germinal durante
ei rearreglo de los genes D,.,,
y Vj^, aumen
tando la diversificacin del sitio de combina
cin de la molcula anticuerpo, especialmente
a nivel de CDR3 (tercera zona de hipervariabi
lidad de las cadenas H). Esta enzima constituye
un excelente marcador del estadio inicial de di
ferenciacin de los linfocitos B y T, ya que en
el estadio siguiente esta enzima no se expresa.
Los antgenos del Complejo Mayor de H is
tocompatibilidad llamados HLA-DR son mol
culas que se expresan en los linfocitos B desde
los comienzos de su diferenciacin y perduran
durante todo el linaje de las clulas B, dejando
de hacerlo en los plasmocitos. Estos antgenos
son fundamentales para la expresin en mem
brana de los pptidos antignicos que habr de
reconocer el linfocito Th para ejercer su efecto
cooperativo (vase ms adelante).
Las molculas CDl 9 y CD24 son marcado
res que se expresan en las elulas Pro-B. El pri
mero de ellos se conserva hasta en el linfocito
B activado, mientras que CD24 se pierde du
rante la activacin.
Las clulas Pre-B expresan CDIO, una endopeptidasa neutra, y C D l9, glucoprotena trans
membrnica que puede asociarse no covalente
mente con los componentes del complejo que
constituye el receptor antignico del linfocito
B. CD20 y CD22 comienzan a expresarse tam
bin en este estadio, perdurando el primero en
los linfocitos B activados, lo que no ocurre con
CD22. E stu d io s estru ctu rales sugieren que
CD20 podra ser un canal inico que funciona
ra durante la activacin celular. Otra protena
detectada en los progenitores iniciales de la di
ferenciacin es CD34, con una estructura pare
cida a la mucina y que funcionara como m ol
cula de adhesin por un mecanismo similar al
de las leetinas.
Una molcula del linaje B maduro es CD21,
que muestra baja afinidad por el componente
del complemento C3d y constituye el receptor
del virus Epstein-Barr, productor de la mononucleosis infecciosa y el linfoma de Burkitt. La
molcula CD21 se pierde durante la activacin
linfocitaria.
El marcador tpico del linfocito B es su re
ceptor antignico, el que est constituido por
una molcula monomrica de inmunoglobulina
de la clase IgM (|0.k)2 o (jAA-jj], idntica al anti
cuerpo que habr de secretar luego la corresponcente clula plasmtica (vase cap. 5). El
reordenamiento de los genes que dirigen la sn
tesis de las cadenas pesadas (fj.) constitutivas de
la IgM tiene lugar en el estadio Pro-B. El pri
mer hecho suele ser la aproximacin de un seg
mento Dy (diversity) del gen de cadena pesa

17

da a un segmento J_, (joining), producindose


un rearreglo Dj^/Jj_,, el que a su vez se une a uno
de los varios segmentos VH (variable), origi
nando VjyDj.,Jj.j. En el hombre esto ocurre en
uno de los cromosomas 14. Si se logra ensam
blar un gen activo que codificar para el seg
mento variable de la cadena, el otro haplotipo
de cadena pesada presente en el otro crom oso
ma 14 permanece sin cambios o reordenamien
tos (en configuracin germinal). Si en el prim er
intento no se logra ensam blar un gen activo
(recombinacin abortiva), se procede a reordenar los genes de cadena pesada del otro crom o
soma. No se conocen las seales que regulan
estos hechos, pero ellos explican el fenmeno
de exclusin allica.
Las clulas Pre-B tienen reordenados su ge
nes para la sntesis de cadenas |Li, las cadenas H
o pesadas de IgM, pero no han adquirido an la
capacidad de expresar las cadenas livianas K o
X. Simultneamente aparecen cadenas |Li en el
citoplasma. En este estado se expresan dos ge
nes adicionales, X5 y VpreB, y sus productos ca
dena (X) (omega, 18 kDa) y cadena t (iota, 14
kD a), constituyen la denom inada cad en a L
su stitu a o pseudo cadena L que p u ed e
combinarse con una cadena naciente y expre
sarse en la membrana celular. Se ha demostrado
que la cadena se une covalentemente al produc
to del gen X5 (cadena (o) y se asocia no cova
lentemente al producto del gen VpB (cadena i).
Los genes X5 y VpreB tienen secuencias hom olo
gas con las cadenas ^ y no han experimentado
rearreglos antes de su expresin. Parecera que
la funcin que cumple esta asociacin, que no
tiene actividad de receptor de antgeno, es la de
facilitar interacciones del linfocito Pre-B con
clulas estromales y otros componentes del m i
croam biente de la mdula sea. No obstante,
estudios recientes parecen demostrar que la ex
presin de cadenas ja en la superficie celular es
condicin indispensable para que tenga lugar la
expresin de cadenas livianas.
En este estado de diferenciacin se expresan
tambin otros dos genes relacionados con el re
ceptor B. Son los identificados en el ratn como
mb-1 y B29, cuyos productos de expresin, las
protenas Ig a e gP, asociadas a la IgMm cons
tituyen el complejo que funciona como receptor
antignico del hnfocito B (vase cap. 11).
Las clulas proceden luego a reordenar los
genes de cadenas livianas (V^^ y Jj^). A parente
mente el orden de los sucesos no ocurre al azar,
sino que se observa un orden jerrquico. Se co
mienza con la familia k (kappa) en un crom o
soma 2; si el suceso es exitoso, el otro haploti
po k y ambos cromosomas 22 que llevan 1a fa
milia X (lambda) se conservan en configuracin
germinal. Si el primer intento X resulta aborti
vo, se procede a reordenar el segundo haplotipo

18

Aspectos bsicos de la Inmunidad

manteniendo X en configuracin germinal. Si


este intento tambin falla, recin se procede a
utilizar la familia X, intentando primero uno de
los dos alelos. La preferencia en la utilizacin
de cadena liviana K puede tener que ver con la
mayor posibilidad de diversidad que ofrece este
sistema respecto del X y se refleja en las inmu
noglobulinas circulantes: en el ratn el 95% de
los anticuerpos poseen cadenas liv ian as K,
mientras que en humano el 60% utiliza k . Ello
es consecuencia de que en el ratn existen apro
ximadamente 250 genes Vk, en tanto que hay
solo dos genes YX, mientras que en el hombre
esos valores son 50 y 30, respectivamente.
Finalmente, una vez que la cadena liviana se
transcribe y se traduce, en el citoplasma se une
a la cadena pesada para ensamlslar una IgM
monomrica que se expresar en la membrana
celular (IgMm). A continuacin por empalme
(splicing) alternativo del pre-ARNm, las c
lulas sintetizan en form a sim ultnea cadenas
pesadas p. y 5 y expresan en la superficie IgM e
IgD. Todos los hechos descritos en el proceso
de diferenciacin de los linfocitos B ocurren en
alrededor de tres das.
A partir de aqu la clula est madura y mi
gra hacia los rganos linfoides secundarios.
Luego de la activacin antignica las clulas
dejan de expresar IgM e IgD de superficie y
pasan a secretar IgM. El CD23, un receptor de
K,

baja afinidad para IgE, es un marcador exclusi


vo de este estadio de activacin del linfocito B.
La caracterstica fundamental del receptor de
los hnfocitos B es su capacidad para reconocer
antgenos en solucin, sin necesidad de inter
mediarios. En la membrana celular se encuen
tran asociadas a la IgM las cadenas peptdicas
Ig a e IgP, las que tienen una activa participa
cin en los mecanismos de transduccin de se
ales al interior de la clula cuando el receptor
antignico del LB interacciona con el antgeno.
Los linfocitos B experim entan durante su
evolucin un proceso que los lleva a la no reac
tividad contra los antgenos propios. Ello ocu
rre en los primeros estadios de la diferencia
cin, donde los contactos prematuros con esos
antgenos pueden inducir anergia, delecin clo
nal y muerte celular.
Los linfocitos B maduros se localizan en di
ferentes rganos linfoides secundarios, pasando
a formar parte de la poblacin de linfocitos B
recirculantes, los que estn en condiciones de
responder a un estmulo antignico. El 20% de
estas clulas se encuentran en sangre perifrica;
el 70%, repartido aproximadamente en partes
iguales, en el bazo, zona fohcular de los gan
glios linfticos y conducto torcico; el resto en
mdula sea y amgdalas.
La figura 2-2 esquematiza los distintos esta
dios de diferenciacin y los marcadores celula

Clula B
con memoria

Anticuerpos

Clula
indiferenciada

Clula Pro-B
Clula Pre-B
(Precursor inmaduro)
TdT (-h-H-t)
HLA-DR (+)
CD10 (-I-)
CD19 {+++)
CD24 (-I--H-)
CD72 {++)
Genes H reor
denados (-H-h)

HLA-DR {++++)
CD10 (+-H-H-)
CD19 (-t-t-i-H-)
CD20 {++++)
GD24 (-i-f++)
CD22 (+++)
CD72 (-t-h+-t)
CD78 {++)
|i en citoplas
ma (-)-i-++)
Genes H reor
denados (-H--H-)
Genes L, inicia
cin reordena
miento (-t-t)

Clula
plasmtica
HLA-DR (++++)
CD10 (-H-+H-)
GD19 (-I--I-+-!-)
GD20 (++++)
GD24 ^++-1-)
GD22 (+++)
GD72 (-H--H-)
GD78 {+++)
IgM sup (-r-H-t)
IgD sup (-(-+-M-)
Genes H reorde
nados (-t-t++)
Genes L reorde
nados {++++)

HLA-DR (++++)
CD19 (-t-t-H-)
GD20 {+++)
CD23 (+-H--F)
GD72 (++++)
GD78 (+++)
IgM sup (+-I-+H-)
Genes H reor
denados (-H--H-)
Genes L reor
denados (-H--H-)

CD38 (-t-t)
CD78 {+++)
(i en citoplas
ma (-H--H-)
Genes H reor
denados (-H--I-I-)
Genes L reor
denados (-H--H-)

Fig. 2-2. Evolucin y expresin de m arcadores durante el proceso de diferenciacin por los com ponentes celulares de la
lnea de linfocitos B.

La respuesta inmune
res que identifican a las clulas de linaje B. Por
inm unofluorescencia indirecta y usando anti
cuerpos m onoclonales especficos para cada
marcador, se los puede poner en evidencia. Por
el mismo procedim iento, usando suero an ti
gamma globulina, puede detectarse en los lin
focitos B su receptor antignico (vase cap. 3).
Linfocitos T: caractersticas y ontogenia
Las clulas indiferenciadas que migran al ti
mo encuentran el microambiente para su dife
renciacin en linfocitos T. Estas clulas pueden
participar en ciertos mecanismos inm unolgi
cos como el rechazo de injertos, reacciones de
hipersensibilidad retardada, reacciones de in

19

jerto contra husped, defensa contra virus y c


lulas tumorales, o en procesos de regulacin de
la respuesta inmune. Las clulas que entran al
timo provienen de la mdula sea y son TdT" y
HLA-DR+. Este ltimo marcador se pierde in
mediatamente. En el microambiente del timo,
como consecuencia del entorno y la influencia
de productos de naturaleza peptdica (timosina,
etc), la clula indiferenciada comienza a dife
renciarse. Los primeros cambios ocurren en la
zona cortical del timo; estos timocitos inm adu
ros (protim ocitos) expresan los m arcadores
CD2 y CD7, y posteriormente CD5 (tim ocito
inmaduro). En esta etapa los timocitos com ien
zan a reordenar los genes que codifican para el
receptor antignico, un heterodmero form ado
TIMO

dula
T dT

SANGRE
CIRCULANTE

F ig. 2-3. D iferenciacin de los linfocitos T. La p rim era etapa ocurre en la corteza del tim o, continuando luego en la zona
m edular. D urante este pasaje los linfocitos experim entan estadios de diferenciacin caracterizados por la ap a rici n en
m em brana de diferentes m arcadores antignicos. F inalm ente se separan en dos grupos, los que expresan los m arcadores
CD4 y C D 8, respectivam ente. A lcanzado ese grado de diferenciacin los tim ocitos se vuelcan al torrente linftico y san
guneo y constituyen las poblaciones de linfocito T que expresan CD 4 (T H I y TFI2) y CDS (Te).

20

Aspectos bsicos de la inmunidad

por dos cadenas peptdicas, a/|3 o X/b, unidas


covalentemente (vase cap. 7). Los genes que
se reordenan primero son los T[3 y Ty. Reorde
nados los genes, com ienza a expresarse en
ARNm. La etapa siguiente de maduracin tiene
lugar en la zona m edular del tim o (tim ocito
comn), y en su inicio incorporan nuevos an
tgenos y marcadores de membrana: C D l, CD4
y CD8. La denominacin de timocito comn
proviene de que estas clulas expresan ambos
marcadores CD4 y CD8. Dentro de la zona me
dular, en una etapa posterior de diferenciacin,
los LT pierden C Dl e incorporan el antgeno
CD3, asociado al receptor antignico, pero las
clulas ya se diferencian en dos grupos: el que
expresa CD4 y el que expresa CD8, marcado
res de los linfocitos Th y Te respectivamente.
Adems se reordenan y expresan los genes T a
(vase cap. 7). Teniendo en cuenta varias simi
litudes en el desarrollo entre los linfocitos B y
T, es de esperar que una cadena a sustituta
juegue en el linfocito T un papel similar al ejer
cido por la cadena L sustituta en el linfocito
B. En ratones CD3+CD4"CD8" deficientes en
cadenas a , se han encontrado timocitos grandes
que expresan cadenas |3 asociados, va puente
d isulfuro, a una glucopro ten a denom inada
gp33, cuyo gen ha sido clonado. ste codifica
una protena con un dominio extracelular, una
porcin transmembrnica que contiene dos re
siduos polares idnticos a los de la cadena a , y
una porcin citoplasmtica. En las cadenas a
normales estos dos residuos son necesarios pa
ra el ensam blado y transporte del com plejo
C D 3.TcR ap. Por este motivo a la gp33 se la
denomina cadena a sustituta del pre-receptor
T (pTa), la que tendra un papel similar al de la
cadena L sustituta codificada por los genes
A.5 y VpjeB. El receptor del linfocito T slo reco
noce pptidos antignicos provenientes del pro
cesado, por las clulas presentadoras: a) de an
tgenos endgenamente sintetizados (protenas
virales, antgenos tum orales), expresados en
membranas celulares y asociados a antgenos
del Complejo M ayor de H istocom patibilidad
(CMH) clase I (linfocitos Te), o b) de antge
nos extraos y asociados al CMH clase II (lin
focito Th). Esto constituye una restriccin del
reconocimiento antignico por los componen
tes del CM H clase I, para los linfocitos Te,
efectores y del CMH clase II, para los linfoci
tos Th, reguladores (vase cap. 7).
Cuando los timocitos completan su madura
cin se vuelcan al torrente sanguneo como lin
focitos T maduros, que expresan en membrana
como m arcadores ms representativos CD2,
CD3, CD4, CD5, CD7 (Th) y CD2, CD3, CD5,
CD7, CD8 (Te) (fg. 2-3).
CD2 es el responsable de la formacin de ro
setas que tiene lugar cuando se mezclan linfo

citos T y glbulos rojos de carnero, reaccin


que durante cierto tiempo fue considerada co
mo una de las ms efectivas en la identifica
cin de esta estirpe de Hnfocitos. El adveni
miento de los anticuerpos monoclonales y la
identificacin de diferentes molculas CD, le
han quitado primaca a las llamadas rosetas E.
Los linfocitos Th que expresan CD4 se dife
rencian en dos grupos, TH l y TE12. El primero
de ellos sintetiza IL-2 e lEN-y y normalmente
son los responsables de las reacciones de hiper
sensibilidad tarda (vase cap. 16). Los TH2,
que sintetizan IL-4, IL-5 e IL-10, son los que
ejercen el efecto cooperativo. A aquellos linfo
citos que sintetizan las interleuquinas produci
das por am bos grupos (T H l + TH2) se los
identifica como THO.
Los linfocitos CD8+, citotxicos, secretan IL10 e lEN-y, y ejercen un efecto supresor sobre
los T H l y la sntesis de inmunoglobulina IgE.
Un efecto similar, a travs de la IL-10 que se
cretan, ejercen los TH2 sobre la poblacin T H l.
La IL-10 secretada regula a su vez la actividad
de las clulas CD8+, lo que demuestra que estas
clulas pueden ejercer un efecto supresorio a
travs de molculas que ellas elaboran, y que la
IL-10, por otra parte, tiene un efecto regulatorio
en la proliferacin de clulas T. Estos datos
confirmaran la suposicin de la inexistencia de
una estirpe nica de linfocitos T (Ts) responsa
ble de los fenmenos de supresin que ocurren
durante una respuesta inmune.
En los linfocitos maduros ya est predeter
minado cul va a ser el elemento restrictivo pa
ra el reconocimiento antignico (CMH clase I o
II). Esta cualidad no es heredada, se la adquiere
durante la maduracin linfocitaria. Los linfoci
tos T han aprendido este reconocimiento parti
cular durante su evolucin en el timo, habiendo
experimentado en primer lugar una seleccin
positiva y luego una seleccin negativa. Duran
te la primera slo han sobrevivido aquellos ti
mocitos inmaduros que reconocen a los antge
nos del CMH de clase I o de clase II propios
expresados en el epitelio tmico, y durante el
proceso de seleccin negativa mueren aquellos
timocitos que reconocen a sus antgenos pro
pios asociados a sus antgenos del CMH de cla
se I o de clase II. Los que sobreviven son aque
llos que poseen receptores capaces de interac
cionar con antgenos extraos adecuadamente
procesados por las clulas presentadoras de an
tgenos y asociados a antgenos del CMH pro
pios. Este proceso selectivo evita que proliferen aquellos linfocitos capaces de reconocer
antgenos propios e inducir una respuesta in
mune de autoagresin, y hace que slo perdu
ren los que reconocen a los agentes agresores
extraos, contra los que ponen en marcha los
mecanismos de la inmunidad.

La respuesta inmune
Los linfocitos que mueren durante este pro
ceso de seleccin lo hacen por apoptosis o
muerte programada, la que es inducida por se
ales especficas. La muerte no es por necrosis;
hay fragmentacin del ncleo y destruccin ce
lular. De la poblacin total de clulas que se di
ferencian en el timo, slo el 5% sobrevive y
pasa a circulacin como linfocitos T maduros.
A aquellos linfocitos que han madurado pero
que no han sido impactados por el antgeno se
los identifica como clulas nve (cndidas,
inocentes, vrgenes). Cuando un antgeno inte
racciona con un linfocito no estimulado (naVve) ste se diferencia a clulas efectoras/reguladoras, parte de las cuales perdurarn como
clulas con memoria.
Estudios realizados por Prince y col. por ci
tometra de flujo bicolor y tricolor, han demos
trado que las clulas nave son CD45RO%
C D 45R A ""'" y las clu las con m em o ria
C D 45R O *'", C D 4 5 R A \ L as c lu la s
C D 4 5 R O ' '", C D 4 5 R A - y C D 4 5 R O '>^ ,
CD45RA*son exclusivam ente hnfocitos T,
en tanto que las CD45RO, CD45RA' pue
den ser clulas T, clulas B y clulas killer .
En la conversin nve a memoria se in
crementa la proporcin de CD25 y disminuye
ladeC D 38:
CD45RO-, CD45RA>"'......CD 25 (5% ); CD 38 (76%)
CD451, C D 45R A ' >......C D 25 (24% ); CD 38 (53%)
CD45RO'"", C D 45RA -......CD 25 (42% ); CD38 (27%)

Las molculas C D l la, CD2 y CD4 aumen


tan en las clulas con memoria . Ello ocurrira
despus de la prdida de CD45RA y aparicin
de CD45RO y no durante los estadios interme
dios como ocurre con CD25 y CD38.
Los linfocitos B y T que han adquirido com
petencia inmunolgica pasan a poblar los rga
nos hnfoides secundarios, en la proporcin y
distribucin ya indicada para cada uno de ellos.
En ese conjunto de linfocitos recirculantes estn
expresados los receptores capaces de reconocer
a los diferentes antgenos, cuyo nmero se esti
ma en 5 X 10*^ hasta 1 x 10, pudiendo cada uno
de ellos expresar entre 5 y 10 epitopes diferen
tes, en promedio. Dado que cada linfocito B o T
expresa un receptor capaz de reconocer sola
mente un epitope antignico, la poblacin nor
mal de linfocitos, calculada para el ratn en 10,
es suficiente para cubrir el panorama de especi
ficidades necesario para que la labor defensiva
contra los agentes agresores sea efectiva.
Clulas accesorias
Las clulas con funciones accesorias que
pueden presentar epitopes a los LT para su re
conocimiento dual (CPA) son los macrfagos.

21

monocitos, clulas dendrticas, astrocitos, clu


las de Langerhans, pudiendo tambin cum plir
esa funcin los linfocitos B activados y las c
lulas B de origen tum oral. La caracterstica
fundamental de estas clulas es expresar en sus
membranas antgenos codificados por el CM H
de clase II y adems, especialmente en los m a
crfagos, de sintetizar y excretar factores cono
cidos con el nombre de monoquinas, siendo el
principal de ellos la interleuquina 1 (IL-1), fac
tor estim ulativo de fundam ental im portancia
para que los linfocitos en estado de rep o so
(GO) puedan excitarse, pasar a la fase G1 e in
gresar al ciclo celular. Las clulas accesorias
son generalmente fagocticas y por ese m eca
nismo captan al antgeno, lo procesan y se acti
van, incrementando la produccin de lL-1.
A las CPA se las designa profesio n ales
cuando en condiciones normales expresan an t
genos del CMH en su superficie, as co m o
otras molculas de adhesin. Las CPA son no
profesionales, no clsicas, si slo bajo deter
minadas circunstancias expresan en su superfi
cie antgenos del CMH.
El contacto de los antgenos con las clulas
fagocticas se hace a travs de receptores, en
especial por intermedio de CRl y CRII, los que
tienen como ligandos a C3b y C3bi, co m p o
nentes del complemento resultantes de su acti
vacin por la va alterna. Estos componentes, al
estar unidos a los antgenos e interaccionar con
los receptores CRl y CRII actan como puentes
entre el antgeno y el macrfago facilitando su
en d o cito sis. La adhesin del antgeno a la
m em brana del macrfago puede ocurrir ta m
bin por interacciones protena-protena o por
la unin de ciertas protenas con funciones de
lectinas que se fijan a los hidratos de carbono
de algunas glucoprotenas aisladas o co m o
componentes de membranas celulares,
Los antgenos del CMH de clase I, que se ex
presan en la membrana de todas las clulas hu
manas, excepto los eritrocitos y espermatozoi
des, estn constituidos por una cadena a inserta
da en la membrana celular, asociada no covalen
tem ente a una cadena del p2 microglobulina.
Los antgenos del CMH clase II estn formados
por dos cadenas peptdicas, a y P y asociadas no
covalentemente, y ambas insertadas en la m em
brana celular. Dentro del citoplasma celular y
antes de su expresin en membrana, los antge
nos de clase II tienen una tercera cadena peptdi
ca llamada y o invariante, que no presenta iso
formas y cumple un rol importante en el trans
porte del pptido antignico (vase cap. 10).
Los pptidos resultantes de la degradacin de
los antgenos fagocitados constituyen los epito
pes que finalmente reaparecern en la superficie
de las clulas accesorias, asociados a los antge
nos del CMH mediante uniones hidrofbicas, y

22

Aspectos bsicos de la Inmunidad

Cambio
conformacional
CMH-clase I

TAP1

TAP2

Pptido
CITOPLASMA
Proteasoma

Complejo
proteasoma-pptido

F ig. 2-4. Procesado por la CPA y expresin en la m em brana celular de pptidos provenientes de antgenos de sntesis en
dgena asociados a CM H-L Parte de la figura por debajo de la lnea quebrada: visin am plificada del proceso de fragm en
tacin del antgeno (Ag) por interm edio de los proteasom as (PTS) y transporte al lum en del RE a travs de los transporta
dores de pptidos insertados en la m em brana del RE, a efectos de su interaccin con los antgenos del CM H -clase L Com o
consecuencia del proceso stos sufren cam bios conform acionales, los que aseguran una m ejor unin y transporte al Golgi.
P arte superior: pasaje del com plejo pptido-C M H -I a travs del aparato vesicular del Golgi y trans-G olgi h asta la m em bra
na celular para su presentacin al receptor antignico (R C T) de LT.

en ese contexto son presentados a los linfocitos


T. La nica excepcin a la restriccin para el re
conocimiento dual por los LT son los antgenos
del CMH extraos (alotpicos), ya que en ese
caso particular no es necesaria la participacin
de los antgenos del CMH propios.
Procesado y presentacin del antgeno
Qu acontece cuando un antgeno penetra
por primera vez en el hombre u otro vertebrado
que ya ha desarrollado su sistema inmune? Las
clulas que actan en primer lugar son los m a
crfagos y otras clulas presentadoras de ant
genos. El procesamiento de ese antgeno ser
distinto segn se trate: a) de un antgeno end
genamente sintetizado, como lo son las prote
nas virales correspondientes a virus que infec
tan las clulas, los neoantgenos producto de
clulas que han sufrido transformacin malig
na, etc, o b) que el agente agresor sea un coinponente antignico externo del tipo de las bac
terias, parsitos o protenas extraas.

En el primer caso, la protena viral u otra si


milar de origen citoplasmtico es degradada en
el citosol por un grupo de proteosomas (PRT),
-unidad que contiene sitios catalticos m lti
ples-, y se originan simultneamente y a partir
del mismo sustrato diferentes pptidos. Estos
sitios proteolticos mltiples facilitan la p ro
duccin preferencial de los pequeos pptidos
que habrn de constituir los epitopes antigni
cos secuenciales a reconocer por los linfocitos
T. Estos pptidos son transferidos a las unida
des transportadoras (TAP) que residen en la
m em brana del retculo endoplsm ico (RE) y
que transfieren a su vez los pptidos al lumen
del RE, los que en el Golgi se unen a las nue
vas inolculas del CMH de clase 1. Esta unin
induce cambios conformacionales en las mol
culas CMH, que habrn de llevar a su estabihzacin y facilitar el transporte del com plejo
pptido-CMH clase 1 a la superficie celular pa
ra su reconocimiento por el receptor antignico
del linfocito T (fig. 2-4).
Los antgenos extraos adheridos a la super

La respuesta inmune
ficie de la clula que habr de participar en su
presentacin sern endocitados por pinocitosis,
proceso que consiste en la ingestin de partcu
las solubles o fluidos, o por fagocitosis cuando
se trate de restos celulares, bacterias o produc
tos de agregacin. En ambos casos se forman
vesculas o vacuolas que se vierten en los en
dosomas tempranos, primer compartimento do
tado de proteasas eficientes a pH cidos, nece
sarias para iniciar la degradacin del antgeno.
Entre stas, las dos ms importantes son la catepsina B y D. El proceso contina luego en los
endosomas tardos y concluye con la participa
cin de las vesculas lisosomales, caracteriza
das por contener un elevado ntmero de enzi
mas proteolticas.
Las molculas de antgenos procesadas por
la va endoctica no tienen posibilidades de
unirse a los antgenos del CMH clase L Slo lo
hacen a molculas de clase IL El ensamblado
de tas cadenas a y P de los antgenos del CMH
clase II para formar el heterodmero tiene lugar
en el RE. Durante la biosntesis de estas mol
culas una tercera cadena denominada y o inva
riante (Ii) se une al heterodmero en forma tran

23

sitoria, impidiendo su unin a pptidos endge


nos en el RE y asegurndole de este modo su
participacin en la va endoctica. Si bien el en
samblado de la cadena no es un requerimiento
absoluto para la expresin del heterodm ero
aP , incrementa la eficiencia del proceso. Las
inolculas de clase II transportadas a partir del
RE lo hacen bajo la forma de un armazn com
plejo constituido por 3 cadenas y en el que se
insertan 3 hetrodmeros ap.
C u an d o las m o lcu las lleg an al re tc u lo
trans-G olgi (RTG) y como consecuencia de
una seal determinada, el complejo aP y se diri
ge, por alguno de los mecanismos de la v a en
doctica cuya localizacin no ha sido determ i
nada hasta el presente, a los endosom as que
contienen los antgenos procesados. D urante
este trnsito la cadena y es degradada y el h ete
rodmero a p puede entonces unirse a los p p ti
dos antignicos exgenos (fig. 2-5). El tiempo
que las molculas del CMH clase II tardan en
atravesar la ruta endoctica y aparecer en la su
perficie celular es de 1-3 horas. El pH cido
predominante en los endosomas/lisosomas con
tribuye a una mejor degradacin de las m olcu
Ag exgeno
Pptido exgeno
CMH-clase ['

Pptido e n d g e n o L iJ
CMH-clase II

F ig. 2-5. P rocesado p or la C PA y expresin en la m em brana celular de pptidos provenientes de antgenos de sn tesis ex
gena y endgena, asociados al CM H-II,

24

Aspectos bsicos de a inmunidad


LINFOCITO Th

CMH-clase II
CELULA PRESENTADORA DE ANTIGENO
Aminocidos componentes del epitope

Aminocidos componentes dei agretope


Fig. 2-6. E pitope y agretope. El conjunto de am inocidos identificados con
que contactan con el RCT, constituyen
el epitope-, los identificados con (), que contactan con el CM FI-clase II constituyen el agretope.

las de antgeno endocitadas y a un aumento de


la eficiencia de la unin de los pptidos a las
molculas del CMH clase II.
Si bien los antgenos del CMH clase II nor
malmente presentan pptidos provenientes de
antgenos exgenos, pueden tambin, en deter
m inadas circunstancias, presentar antgenos
endgenamente sintetizados. Ello ocurre en las
respuestas con formacin de anticuerpos de la

clase IgG contra antgenos procedentes de una


infeccin viral, las que slo tienen lugar si el
linfocito B es ayudado por un linfocito T
helper que ha aprendido a reconocer ppti
dos andgnicos asociados al CMH clase II. Su
mecanismo no est bien determinado; podra
ocurrir que antgenos endgenos expresados
en la membrana celular asociados a CMH cla
se I para su reconocim iento por las clulas
LINFOCITO Th

Ag procesado

Fig. 2-7. Procesam iento del an t


g eno por el m acrfago y p resen
ta c i n d e l c o m p le jo p p tid o C M H -II a las cadenas a y |3 del
R C T de un Th. Se in d ican a d e
m s las cadenas peptdicas cons
titutivas de CDS y la fam iha zeta,
C D 4 y la interaccin entre CD28
y B7 y de un par de m olculas de
adhesin (C D 2/LFA -3) com o re
presentativas de estos procesos.

La respuesta inmune
CD8+ fueran luego endocitados. En este caso
el proceso seguira la va endoctica que lleva
a la asociacin con antgenos clase II y su ex
presin en la superficie celular para su recono
cimiento por los receptores antignieos de las
clulas CD4+. Otra posibilidad es que se for
men autofagosomas que incorporen protenas
citoplasmticas y que despus de la fusin con
estructuras lisosomales esas protenas antig
nicas sean procesadas por la va de los antge
nos del CMH clase II.
La va endgena de procesamiento del ant
geno, utilizada cuando los pptidos resultantes
se van a unir a antgenos del CMH clase 1, es
distinta de la que tiene lugar cuando los antge
nos van a ser presentados por molculas de cla
se 11. En el primer caso el proceso puede ser
bloqueado con inhibidores de sntesis de pro
tenas o mediante brefeldina A, un inhibidor
especfico del transporte entre el RE y el Golgi,
y no es alterado por cloroquina. Esta droga en
cambio, al igual que el NH4C1, impide la acidi
ficacin de los endosomas y produce el conse
cuente bloqueo del procesamiento del antgeno
a ser presentado por molculas de clase II.
Un antgeno extrao, endgeno o exgeno,
ser procesado por los macrfagos y otras clu
las presentadoras del husped, y en el contexto
de los antgenos del CMH clase 1 y clase II, pe
queos pptidos de 8-15 aminocidos sern ex
presados en sus membranas. Los complejos es
tarn en condiciones de ser reconocidos por
aquellos linfocitos T maduros que se encuen
tran en los rganos linfoides secundarios for
mando parte del conjunto de clulas T recircu
lantes, dentro de las limitaciones de su restric
cin y especificidad.
Los pequeos pptidos antignieos se unen
en forma lineal, por uniones no covalentes, a la
parte variable de los antgenos del CMH clase I
y clase II, que en esa zona presentan una es
tructura en forma de celdilla que, por estudios
de cristalografa de rayos X, se ha demostrado
que est form ada por protena con estructura
secundaria de dos a-hlices cruzadas por es
tructuras en lmina p plegadas (vase cap. 10).
Los aminocidos del pptido que se unen al an
tgeno del CMH constituyen el agretope y no
son necesariamente los mismos que se exponen
para ser reconocidos por el RCT (epitope) (fig.
2-6). Experimentalmente se ha demostrado que
en el pptido obtenido de mielina de rata y pos
teriorm ente acetilado, compuesto de 11 am i
nocidos (A c.A la-Ser-G ln-L ys-A rg-Pro-SerGly-Arg-His-Gly), la Gln que ocupa el lugar 3
y la Pro hacen contacto con el RCT; la Ala y la
Lys lo hacen con los antgenos del CMH.
Pai'a que la unin CPA-LT se efectivice ade
cuadamente, adems de la unin RCT-pptido
otras interacciones entre molculas de adhesin

25

de las membranas de ambas clulas tienen lu


gar (vase cap. 11).
Sim ultneam ente las clulas m acrofgicas
sintetizan y secretan lL-1 y TNF, m olculas
que activan a los linfocitos que reconocieron al
antgeno por ellas presentado y se encuentran
en fase de reposo o GO e inducen su pasaje a
las fases G1 y S, o de sntesis, del ciclo de vida
celular (fig. 2-7). Si el linfocito T era del serotipo CD8+ y su RCT tena restriccin para ant
genos CMH clase I, el linfocito excitado habr
adquirido capacidad para reconocer y destruir,
como clula citotxica o linfoltica efectora, a
cualquier otra clula que exprese en su m em
brana ese producto CMH clase Lpptido. Si la
clula T era CD4+, su RCT posea restriccin
para CMH clase II y sintetizaba IL-2, el linfo
cito T estimulado adquirir capacidad para in
ducir respuestas de hipersensibilidad tard a
cuando encuentre al pptido antignico espec
fico presentado en el contexto del CMH clase
11. Estos linfocitos, como ya se indicara, son
identificados como T H l. Algunas de estas es
tirpes eelulai'es pueden ejercer efecto coopera
tivo o helper. Si la clula T CD4* que reco
noce al CMH clase 11-pptido es productora de
IL-4, IL-5 e IL-10, identificada como TH2,
ejercer un efecto cooperativo sobre los linfoci
tos B, asegurando una respuesta efectiva de es
tas clulas (fig. 2-8).
Un linfocito B reconoce al antgeno en fase
fluida, sin necesidad de degradacin p revia y
sin requerimiento de clula presentadora de an
tgeno o restriccin de antgenos del CM H,
Cuando el receptor B (IgM de membrana) cap
ta al antgeno, el LB se activa, se diferencia en
clula plasmtica y secreta inm unoglobulinas
de la misma especificidad que la de su recep
tor. Si el antgeno que indujo la respuesta es Tindependiente, ella ser con produccin de an
ticuerpos IgM ya que los antgenos de ese gru
po, por poseer efecto mitognico o determinan
tes antignieos prximos y repetidos, producen
agregacin de los receptores y transducen las
seales que llevan a la activacin y diferencia
cin celular, aparentemente sin la necesidad de
otros intermediarios. Hay estudios que parece
ran indicar que en algunos casos se necesitara
el estmulo de IL-1. Los antgenos T-independientes no inducen cambio o switch de clase
de inmunoglobulina por lo que la respuesta es
siempre de tipo IgM. El cambio de IgM a IgG
u otros isotipos de inmunoglobulinas es depen
diente del antgeno y de las diferentes interleu
quinas sintetizadas principalmente por los lin
focitos Th.
Si el inmungeno es un antgeno T-dependiente, el antgeno por s solo no es suficiente
para que la respuesta inmune sea efectiva. Para
que ello ocurra necesita de la cooperacin de

26

Aspectos bsicos de la inmunidad

los linfocitos Th. D urante mucho tiem po se


consider que el Th, para ejercer su efecto coo
perativo reconoca, del antgeno fijado por el
LB a travs del epitope, a la parte soporte o
carrier la que actuaba como puente entre am
bas clulas.
E.ste concepto dej de ser vlido cuando se
demostr que el LT slo reconoca pequeos
pptidos resultantes de la degradacin del ant
geno, asociados a antgenos del CMH. El LT
haba aprendido a reconocer al antgeno pre
sentado por el macrfago de una manera dife
rente a la efectuada por el LB, ya que ste lo fi
jaba por su epitope a travs de la IgM de mem
brana (IgMm). Actualmente esto ha sido clari
ficado, pues se ha demostrado que el linfocito
B cuando fija al antgeno por su receptor espe
cfico lo internaliza, procesa y expone en su
mem brana los diferentes pptidos resultantes
asociados a molculas de antgenos CMH clase
II, de modo anlogo al que hacen las clulas
presentadoras de antgeno. Este producto es el
que reconoce el linfocito Th. Esto implica que
el LT no reconoce el mismo epitope cjue el LB,
y que el efecto cooperativo lo pueden ejercer
los distintos Th capaces de identificar a cada
uno de los diferentes pptidos, resultantes de la
degradacin antignica, expuestos en membra
na del LB asociados a antgenos del CMH cla

se II. Al mismo tiempo el LB expresa recepto


res para IL-2 e IL-4, los que interaccionan con
la IL-2 o IL-4 secretada por el Th. Estas inte
racciones son las que estimulan al LB y lo lle
van a diferenciarse en piasmocito y a sintetizar
anticuerpos con la misma especificidad que su
receptor especfico (IgMm) (fig. 2-8).
Cuando un antgeno es inoculado por prime
ra vez en un animal virgen, los eventos que se
ponen en marcha son los indicados; la respues
ta primaria es iniciada por unos pocos linfoci
tos (clulas nai've) que poseen receptores es
pecficos para el antgeno (fig. 2-9). Adems,
linfocitos T y B que no se transforrnan en clu
las efectoras, perduran en el husped por pero
dos prolongados como clulas con memoria
inm unolgica. Nuevos estm ulos antignicos
contactarn rpidamente las clulas con mem o
ria las que, por el hecho de tener especificidad
definida y formar parte de una poblacin celu
lar ms numerosa que las que pudieron recono
cer al antgeno durante el primer estmulo, in
ducen una respuesta ms acelerada y de mayor
magnitud. El clon celular correspondiente a los
linfocitos T se habr incrementado y la produc
cin de anticuerpos por las clulas de la lnea B
ser de un nivel superior. En este caso la res
puesta inmune inducida se denomina secunda
ria, la que resulta mucho ms efectiva que la

Ag T-indOTendiente

Diferenciacin

Y Y Y
IgM

Proliferacin y
diferenciacin
IgM; IgG; IgA
IgD; IgE
Y

C lu la

'

' plasmtica

Epitope
Pptidos
CMH-I
C M H -ll

, < Receptor B
V ^R e ce p to rT (C M H -I)
S r'R s c e p to rT (CM H-ll)

Mastocito
oliferacln)

Fig, 2-8. Interacciones entre clulas presentadoras de antgenos (CPA ), linfocitos B, linfocitos T (Th, Te) y los productos
solubles por ellas sintetizados (interleuquinas), ante una estim ulacin con antgenos T-independientes (A) y T -dependien
tes (B)

La respuesta inmune

27

MDULA SEA

L1
Clulas
indiferenciadas
BURSAI

LB

TIMO

j J I d O I I ICtLIV

'^ m e m o r i a (

LTCD4+ (Th1)\
(hipersensibi
lidad tarda)

(efectores)

K qmM
Respuesta primaria

LT CD8", Te
Respuesta primaria

F ig. 2-9. R espuesta inm une prim aria y secundaria. L as clulas indiferenciadas de la m dula sea pueden adquirir c o m p e
tencia inm unolgica a travs del tim o o de rganos b u rsa sm ilis, diferencindose en linfocitos T y B, respectivam ente, los
que pasan a integrar la poblacin de linfocitos recirculantes que no ha sido im pactada p o r antgenos. C uando esto ocurre
los linfocitos B se replican y diferencian en clulas plasm ticas sintetizadoras de anticuerpos (IgM ); los linfocitos T o rig i
nan clones de clulas efectoras (CD4+ T H l y Te) y reguladoras (CD4+ TH 2). Parte de las clulas perd u ra por largos p e ro
dos com o clulas de m em oria, las que ante nuevos estm ulos antignicos se m ultiplican y diferencian rpidam ente, con
una respuesta secundaria m agnificada respecto de la respuesta prim aria.

respuesta primaria . Durante este proceso hay


maduracin de la respuesta inmune, caracteri
zada por el cambio de clase de inmunoglobuli
na, generalmente IgG y una mayor afinidad o
capacidad de unin del antgeno a los anticuer
pos que se sintetizan. En la induccin de este
fenmeno participan aspectos propios del ant
geno inductor usado y distintos tipos de linfo
quinas sin tetizad as por los lin fo cito s (fig.
2-10). El efecto resultante de las estim ulacio
nes repetidas es el que se busca cuando se quie
ren obtener inmunizaciones activas (vacunacio
nes) exitosas y cuando se intenta lograr inm u
nosueros de alto ttulo de anticuerpos y buena
afinidad.

B IB L IO G R A F A
1. A da GL, N ossal, G. The clonal selection th e o ry . S ci
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28

Aspectos bsicos de la inmunidad


Proliferacin de
linfocitos i

Sntesis de
anticuerpos

Fig. 2-10. D iferentes interleuquinas que participan en la activacin del linfocito B y en el cam bio o sw ich de clase de
inm unoglobulina.

7. G rey H M ., S ette A, B uus S. tio w T cells see a n ti


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La respuesta inmune

29

Compilado por: L. Fainboim


Anexo I: Listado de clusters de diferenciacin (CD) leucocitarios basado en los resultados del
V Taller Internacional realizado en Boston, en noviembre 1993. Referencia sobre los m ism os
pueden encontrarse en: Leuiiocyte Typing V.- wlrite cell differentiation antigens. Eds. S. Schlossman y col. Oxford University Press, 1994.
CD

O tras denom inaciones P M (kD)

CDl a
C D lb
D ]c
CD2
CD2R
CD3

T6
W M 25
M241

T3

49
45
43
50
50
5 cadenas

CD4

T4

55

CD5
CD6
CD7
CDS

TI
TI 2

67
100
40
34

^ ,| 1

TS (hom odm eros y


heterodm eros)

CD9
CDIO

CA LLA

24
100

C D l la

L FA ^

170

C D llb

CR3,M A C-1*

165

C D llc

p l5 0

150

C D I2
CD13

90-120
150

CD14

55 (mo)
64 (B)
trisacrido

CD15

Lew is X*

CD15S

sLex,*

CD16

FcR IIIA /
FcRIllB
FcR lIIB

C D l 6b
C D w l7

? Ligando para cl. T y8


Igual que C D l a
Igual que CD 1a
L igando para CD58
V a alternativa de activacin T
A sociado al TCR. T ransduccin
de seales T
Interacta con M HC clase II
T ransduccin de seales
Ligando para CD72
7
7
Interacta con M H C clase I
T ransduccin de seales
A ctivacin plaquetaria?
Idntica a la endopeptidasa neural (enkefalinasa)
CD 11 a/C D 18 ligando
IC A M -I e lC A M -2
C D l lb /C D 1 8 interacta con pro
tenas de la m atriz y es el re
ceptor para iC3b
C D l Ic/C D l 8 ligando de fibringeno
7
A m inopeptidasa

R eceptor del com plejo de LPS y


la protena que une LPS
El A cM inhibe fagocitosis y
efecto m icrobicida en N E
form a siali- Ligando para CD 62E
tada
R eceptor baja afinidad para IgG
50-65
agregada
Unin a m em brana po r G PI. No
48
enva seales
LacC er de los N e involucrado en
LacC er
exocitosis 0 em paquetam iento
granular
95
V ase C D l l

CD 19
CD20

cadena |32 de las inte


grinas
B4
Bl

CD2I

CR2

145

CD22

BL-CA M

130/I40

CD23
CD24

F ceRII, Blast-2

45
35-45

CD25

IL-2R

55

CD18

95
33-37

R egulacin proliferacin B
R egulacin activacin y prolife
racin B
R eceptor para C3d y EBV activa
cin B
C adena (3 ligando para C 45R 0 y
C D 72
R eceptor baja afinidad IgE
?
Induce activacin y proliferacin
cel. T ,B ,tim ., N K, M a.
P roteasa de superficie celular

CD26

110

CD27

55 hom od L igando de CD70, seal coestim uladora cl. T vrgenes


mero
44 hom od L igando de CD 80 (seal coesti
m ulatoria)
m ero
H eterodm eros C D 29/C D 49 me
130
dian adhesin clula-clula y a
m atriz

CD28
CD29

subunidad p i integri
nas

D Lnribucin celular

P apel biolgico

Tim ocito, CL
Igual que C D l a
Igual que C D l a, Subpob. B
T, N K
T activados
T
T que reconocen M H C clase II
T, subpob. B (B la )
A lgunos T y algunos B
T
T que reconocen M H C clase I
Pre-B, B inm aduros, M o, Pl
Pro, algunos Pre-B, algunos B m ad u ro s,
Gr
L
Cl. M i y NK

Cl. M i, altos niveles en Ma, m a rcad o r


de LCV
M o, G r, Pl
Prec. m ielom onocticos, Mo, Eo, N e,
CEp, intestino delgado, tbulos ren .,
m em b. sinpticas, F i, Oc
M o, M a, algunos Gr, B
N e, Eo
Igual a C D l5
N K, M a
Ne
Ne, M o, Pl

V ase C D l 1
Pro- B hasta B activadas, CFD
Pre-B hasta B activadas
B m aduras, CFD, subpoblacin tim m ica, epitelio farngeo
B m aduras (60-80% ), I.CV citop. d e
pro-B , pre-B, B
F cella: B. Fcellb: M o
Pro-B , pre-B y B, Gr, Ti (2%), n eu ro blastom a, T act.
Cl. activadas T, B y Mo
T y B en reposo y activadas. C E p ren al
e intest., canal, biliar
T, Ti m edulares, B activ,, Pl
T C D 4 (95% ), T CDS (50%)
L e en reposo y activados

C o n tin a

30

Aspectos bsicos de la inmunidad

Anexo I. (Continuacin)
CD

Otras denom inaciones

C D 30

Ki^ 1

105

CD31
C D 32

PECA M FcyRIIA

130-140
40

CRl

67
105-120
250

CD33
C D 34
CD 35

88

CD 36
CD 37
CD 38
C D 39
C D 40

TIO

P apel l)iolgico

P M (I D)

40-45
43
78
50

R eceptor baja afinidad IgG

M ediador de fagocitosis por su


unin a C 3b y C4b
? R eceptor eritrocitario para
Plasm odium falciparum

C ooperacin T-B a travs de


unin a gp39 en T activados
C adena a del heterodm ero con
C D 6 I, involucrado en adhesin
y agregacin plaquetaria. Une
fibringeno, fibronect, vitronect.
P arte del com plejo CD 42
U nin a factor de von W illebrand. R eceptor a trom bina
Parte del com plejo CD42
Parte del com plejo CD42
Ligando de CD 54

C D 41#

G PIlb

125/22

C D 42a
C D 42b

G PIX
G P IB ,a

23
135,23

C D 42c
C D 42d
CD43

G PIB ,p
GPV
Sialoforina

C D 44

Pgp-1

22
85
95 (T)
115-135 (Ne)
R eceptor para cido hialurnico.
80-95
por el cual une Li a HEV

210

C D 45

LCA ,B 220

V ariante de CD 44 con condroitn


sulfato
A ctividad fosfo-tirosino-fosfata180-240
sa. C D 45R O ligando de CD 22
240 (cl B) a
180 (Ti)

C D 46

M CP,TLX

51-58 y 59-

C D 44R

68
C D 47

C o 'facto r proteico de m em brana


(M CP) que al unir C3b o C4b
perm ite que el factor I degrade
C3b o C4b

47-52

C D 48

Blast-I

40-47

C D 49a

VLA-1 (cadena a l )

210

C D 49b

V LA -2 (cadena a 2 )

160

C D 49e
C D 49d

V LA -3 (cadena a 3 )
V LA -4 (cadena a 4 )

125
150

C D 49e
CD 49f
C D 50
CD51

V LA -5 (cadena a 5 )
V LA -6 (cadena a 6 )
ICA M -3

135,25
120,25
124
140
cadena a v

C D 52
CD 53

Cam path-1

21-28
32-40

H eterodm eros C D 49/C D 29 ad


hesin a m atriz extrace-m ediada por la secuencia Arg-GlyA sp (RG D ). C olgeno
(CD 49a,b), Lam i-(C D 49a,b,c),
fibronectina (CD 49c,d,e), HEV
de placas P eyer (CD 49d)
A diferencia de otras integrinas
C D 49/C D 29 m edia adhesin
clula a clula por su unin al
ligando VCAM -1
Ligando LFA-1
R eceptor para vitronectina,
(C D 51/C D 61). R econoce RGD
en m atriz extracelular, (von
W illcbrand, fibringeno, vitro
nectina)

D istribucin celular
T y B activ. Cl. R eed-Stem berg, linfo
mas a cl. grandes anaplsticas, Pl,
M o, Gr, CE
M o, Pl, Gr, Ce y sus uniones
Todas las form as en Mo, C E y trofo
blasto. FcyRIIA y C en Ne. FC^RIIB
en B
Prec. M i (luego de CD 34), M o
Cl. hem atopoyticas inm aduras y CE
Ne, Eo, subp T, B, M o, podocitos glom erulares
G licoprotena m ayor de Pl, M o, CE, v e
na um bilical
B. B aja expresin cls. M i
Prec. T y B tem pranos, T y B activ, P
B activ, N K activ, Subp. T, Ma, CD, C L
CD, B, algunas CEp
Pl, m egacariocitos

Pl, m egacariocitos
Pl, megacariocito.s
Pl, m egacariocitos
Pl, m egacariocitos
Ti, T, Gr, M o, Ma, NK, Pl, B activ, P,
stem cells de M O y timo
T, B, M o, Gr, Ti m edulares, Er, CEp,
cl m em oria
Sustancia b lan ca de SNC, miisculo esqueltico, tum ores
Li
Excepto Er, todas las clulas hem atopo
yticas. Las isoform as C D 45RA,
CD 45RB , CD 45RC y C D 45R O se ex
presan diferencialm ente en distintas
clulas (vase texto)
Ti, T, B, M o, Gr, NK, Pl, CE, C Ep, F,
placenta, esperm a

Todas las cl. hem atopoyticas, CEp,


CE, F, esperm a
T, B, Ti, M O (30% ), Eo, CEp bronquial
y salival
T reposo (CD49d)
T m em oria aum enta C D 49e,f
Ti (CD 49d,f), B (CD 49b,c,d)
M o (CD 49b,e,f), Pl (C D 49b,e,t)
C Ep (C D 49f a.sociado a cadena (34)

Ti, T, B, M o, Gr
Pl, m egacariocitos

T i , T , B , G r ( l 5 % ) , E o (30% )
Ti, T, B, M o, Pl, Gr, Oc, Ob

La respuesta inmune

31

Anexo I. (Continuacin)
CD
CD 54

IC A M -I

80-114

CD55

DAF

70

CD56

N^CAM
M ol. de adhesin
neural
HNK-1
LFA -3
M IR L

17.5-185

CD57
CD58
CD59

CD w 60* U M 4D 4
CD61
G P Illa
CD 62E

ELAM 4

CD 62L
C D 62P

LAM-1
PAD G EM

CD63
CD64

FcyRI

CDw65'' V lM -2
C D 66a BG P
CD66b CD 67
CD66c N CA
CD66d C G M l
C D 66e CEA
CD67
actual C D 66b
CD68
CD69

MLR^3

CD70
CD71

CD72
CD73
CD74
CDw75
C D w76 antes CD76
CD77*

BLA

CDw78 A ntgeno Ba
CD79a

lg a ,ra b -l

CD79b
CD80
CD8)

Igp,B 29
B7,BB1
T A PA -I

CD82
CD83

R 2 JA 4
HB15

CD w84 267,152-1D5
V M P-55
CD85
B 7.2, FUN ^l
CD86

P apel biolgico

P M (kD)

Otras denom inaciones

lio

7
L igando para CD2
R egula la accin del C por su
unin a C8 y C9
7
Trisacrido
Es la cadena (3 que se asocia a
110
CD41
Ligando del epitope sLe*
115
R eceptor para N e y T
Unen linfocitos a HEV
75-80
M edia la interaccin de plaq. ac
150
tiv. con neu. y mo. U ne sLex
7
53
R eceptor de alta afinidad IgG
75
U nico que une m onm eros
oligosacrido A ctivacin de neutrfilos
Los C D 66 pertenecen a la fila, de
180-200
A gs carcino-em brionarios de
95-100
m olculas de adhesin involu
90-95
crada en adhesin hom otpica
30
180-200
55-70
18-20

no

D istribucin celular

A m plia. Cl. hem atopoyticas y n o h e


L igando para L F A -1
m atopoyticas
(C D I I a /C D 1 8 ) y M a c - l. R e
ceptor para R inovirus
P rotege a los tejidos del dao por A m plia. Cl. hem atopoyticas y n o h e
m atopoyticas
el C autiogo, im pide el arm a
do de la C3 convertasa
N K, alg. tejidos neurales
A dhesin hom otpica

NK, 25% T y B, algunos Mo


A m plia en cl. hem atopoyticas, C E
Le, C E, CEp, Pl
T (25-45% ), Pl, M o
Pl, M eg, IVla, cl. no hem atopoyticas
C E activadas
L vrgenes
Pl activadas, IVIeg, CE
Pl activ., Mo, M a, dbil en Gr, B, T
Mo y Ma
G r y algunos M o
Ne, precursores m ieloides, ribete en ce
pillo de epitelio colnico

G rnulos citoplsm icos y su p erficie de


M o, M a, N e, Ba, L grandes
C onstitutiva en Pl, Ti CD4-^/CD8-^- T
activadas
B y T activ.

Es la m olcula que se expresa


28,32
m s tem prano en la activ. cel.
hom odm ero
55,75,95,110, L igando de CD27
120
T y B activ., Ma
R eceptor para transferrina
95
M etabolism o del hierro y creci
m iento y proliferacin celular
Pro-B a B activada, M a
42
L igando para CD5
hom odm ero
Ti, CD4-^ (10% ). C D 8+ (50%), B
Ecto. 5 nucleotidasa
69
(70% ), CEp, CE
C adena invariante (Ii) H L A clase B, M o, Ma, subp T act., CEp
43/41/35/53
II. P resentacin Ag.
(4 form as)
9
T (20% ), B (aum enta con activ.) C E p ,
53
precurs. eritroides
7
7
Subp. T , B. M elanocitos, CE, C E p , (he
patocitos, tub. renales)
7
B de centro germ inal. M arcador
epitope
Lin fo m a de B urkitt
carbohidrato
7
Pre-B a B (aum enta con activacin),
M a, CEp
Pre-B hasta B
Parte del com plejo recep to r de
33,40
antgeno B . Form a un heterod
m ero con CD79b
Pre-B hasta B
V ase C D 79a
33,40
Cd, subp. B y todas las B activ.
Ligando para CD28 y C T L A -4
60
A cM o anti-T A P A -l tien e efecto L, lneas de neuroblastom a y m e la n o
22
mas
anti-proliferativo
43

73
120
80

7
7
Seal coestim ulatoria en CPA

Alta: CID , CD, C L


Baja: L i activados
M a, Pl, B y T activados
B, M o, LCV , m ielom as
CD, B y M o activados
C ontina

32

Aspectos bsicos de la inmunidad

Anexo I. (Continuacin)
CD

Otras
denotninaciones

P M (kD)

P apel biolgico

CD 87

U PA -R

50-65

CD 88
C D 89
C D w 90
CD91

C5aR
F caR
Thy-1
a2 m R (heterod
m ero)

C D w 92
CD93
C D 94
CD95

p70
V1MD25
KP43
A P O -l,F a s

42
55-75
25-35
600
515
85
70
120
43
42

C D 96

T A C TIL E

160

CD 97
CD 98

VIM3
4F2

74,80,89
80,40

Receptor para el activador del


plasm ingeno tipo-urokinasa
que prom ueve actividad fibrinoltica
R eceptor de la anafilotoxina C 5a
U ne IgA srica y secretoria
?
Receptor a2-m acroglobulina.
M edia endocitosis del receptor
unido a proteinasa
7
7
A dhesin de NK con integrinas
A sociado con la induccin de
apoptosis
A dhesin de T y N K en fase tar
da de respuesta inm une
7
7

CD 99
C D 99R
C D l 00

E2, M IC2
B B I8,A 8

32
32
150

? (form acin de rosetas con Er)


7
7

C D w lO l
C D 102

BB27, BA27
IC A M -2

140
60

C D l 03

HML-1

150,25

7
Ligando para L F A -1 (no para
M ac-1)
? C adena a E de integrinas
Se asocia con integrina p7
? C adena (34 de integrinas
A sociada con a (CD 49f) une
lam inina y epiligrina
7
Ligando para V LA -4
Posible rol en adhesin

C D l 04

205

C D l 05
C D l 06
C D l 07a

Endoglin
VCAM -1
LAMP-1

95

C D l 07b
C D w l0 8
C D w l0 9
C D l 15

L A M P-2
8A 3,7D 1
C S F -IR ; M -CSFR

120
80
170-150
150

C D w ll6

G M -C SFR

150

C D l 17

c-K it

145

CD w 119
C D I 20a

IFNyR
T N FR; 55kd

90
55

C D l 20b
C D w l2 1 a
C D w l2 1 b
C D l 22
C D w l2 4
C D l 26
C D l 27
C D w l2 8

T N FR; 75kD
IL -IR tipo 1
IL - 1R tipo 2
1L-2RP
1L-4R
IL-6R
IL-7R
IL8R

75
80
68
75
140
80
75
58,67

C D w l3 0

g p l3 0 ,S IG

130

100, l i o
lio

D istribucin celular
Ne, M o, M a, Eo, CE, Fi, T acvadas, ti
mo fetal

Gr, M a, M astocitos, m. liso


Mo, Gr, Ma, subp. B y T
Pro-Ti, cerebro y otros tejidos no linfoides
M o, M a, Fi, m. liso, hepatocitos, sinciciotrofoblasto, neuronas
Gr, M o, CE, U -9 3 7 ,T H P -I
Gr, M o, CE, U -9 3 7 ,T H P -I
N K, subpob. T. Aum. con activ.
Linaje T y m ieloide
T y N K activadas
T y B act., M o, NK, Gr, Pl
Baja en T, B, N K, Gr. A lta en: M o, T y
N K act,, m. cardaco, queratinocitos b a
sales
Ti, Li perifricos
Form a ms restringida de CD99
A mplia. Subpob. CD4 y CD8 que se acti
van por CD28
Gr, M o
L, M o, C E (alta expresin no m odulada
por la inflam acin)
Li intraepit. de intestino
H em idesm osom as epitehales, cl,
Schw an, CE, neuro, trofoblasto

CE, M a activados
CE
A m plia en citop, sup, de Pl activadas, T
^ citotxicos
? 60% hom ologa con LA M Pl
dem
7
Li, leucem ias agudas
7
Pl, M eg, C E capilar y venular, T activ.
La unin de M -C SF induce la di M o, M a y sus precursores
m erizacin del receptor
C adena a del receptor une GM - M o, M a y sus precursores, Pl
CSF. Junto a la cadena |3 gene
ra receptor alta afinidad
R eceptor para factor de creci
,Stem cells, m astocitos
m iento de stetn cells
U ne IFN y con alta afinidad
M ac, M o, B, fibro., epit., endo.
C D l 20a y b unen T N F a y TN Fp La m ayora de las cl, expresan uno o am
con relativa alta afinidad. Cobos TN FR s
m odulan con el antgeno Fas
V ase C D I2 0 a
V ase C D l2 0 a
R eceptor IL -1
A m plia
R eceptor IL -1
A m plia
C adena P del 1L-2R
T ,B
R eceptor IL-4
A m plia
R ec ep to rIL -6
A m plia
R ec ep to rIL -7
Precur, hem atopoyticas
R eceptor de IL-8
Ne, M o, queratinocitos, basfilos, sub
pob, T
S ubunidad p del receptor de IL6, transduce seal

(*): ep ito p e h id ro ca rb o n a d o , ($): U n id as a la m em b ra n a p o r un io n es fo sfatid il inositol. (#): C D 41 = gpMb es un h e te ro d m e ro 120/63, q u e


fo rm a un c o m p lejo c o n g p llla (C D 61). E x p re si n en tejidos: B, T , N K : lin fo cito s B, T y N K ; P: p lasm o cito s; Pl: plaq u e ta s; L: leucocitos;
Li: linfocitos; M o: m o n o cito s; G r: g ra n u lo c ito s; M a: m ac r fa g o s; E o: eo sin filo s; N e: n eu tr filo s; Er: eritro cito s; M O : m d u la sea; M eg;
m eg a cario c ito s; C E p: clulas ep iteliales; C E; c lu la s e n d o te lia le s; F i: fib ro b la sto s; T i: tim o cito s; C D ; c lu la s d endrticas; C L; c lu la s de
L an g e rh a n s; Oc; osteo cla sto s; Ob: osteo b iaslo s; C ID : c lu la s in terd ig itad as; M i: c lu la s m ielo id es; LCV:. leucem ia de c lu la s vellosas.

Bases celulares de la respuesta


inmune. rganos linfoides primarios
y secundarios

MARTA BRAUN

CONCEPTOS PRELIMINARES
El ingreso de un antgeno no propio dentro
de un organismo induce una respuesta inmune
especfica dirigida contra ese mismo antgeno
que, por la adaptabilidad del sistema inmune,
puede tomar distintas modalidades: produccin
de inmunoglobulinas de diferentes clases, res
puesta celular con activacin de macrfagos,
efectos citotxicos, etc. Es el antgeno quien
elige los clones de linfocitos especficos, precomprometidos para reconocerlo, a los que va
a activar y que van a producir alguna de esas
respuestas. Pero, para que sucedan todos esos
mecanismos efectores especficos, no slo de
ben preexistir linfocitos que reconozcan al ant
geno, sino que deben interactuar varias pobla
ciones celulares, que colaboran entre ellas, an
tes de que sea patente uno o ms de esos meca
nismos efectores.
De estas poblaciones, la nica que reconoce
especficamente a los antgenos es la de los lin
focitos. Pero aunque stos aparezcan morfol
gicam ente idnticos entre s, son funcional
mente muy diferentes, no slo por su especifi
cidad, para la cual ya estn com prom etidos
desde su maduracin, sino tambin por sus fun
ciones.
Existen dos grandes poblaciones de linfoci
tos: los linfocitos B y los linfocitos T. Los pri
meros son los encargados, casi exclusivamente,
de la sntesis de inmunoglobulinas. Los linfoci
tos T tienen, por el contrario, una serie de fun
ciones, algunas de ellas efectoras y otras de co
laboracin y regulacin, que ejercen sobre los
linfocitos B y sobre otras subpoblaciones de T.
Adems, para que se inicie una respuesta inm u
ne deben colaborar otras clulas'no linfoides.

3
muy especialm ente las de la serie m onocitomacrfago.
As, para que se produzca una respuesta hu
moral, por ejemplo, si bien los linfocitos B pue
den reconocer por s mismos el antgeno para el
cual estn comprometidos, pero para que se es
timulen, se diferencien a plasmocitos y secreten
anticuerpos, deben recibir la colaboracin de
una subpoblacin de linfocitos T, los linfocitos
T colaboradores o helper (Th). Para que los
Th reconozcan al antgeno para el cual estn
' pre-comprometidos, ste debe haber sido proce
sado y presentado, junto con un antgeno de
histocompatibilidad (CMH) propio, por otra c
lula, ya sea un m acrfago u otro linfocito B
(vase cap. 10). A su vez, la respuesta inmune
efectora casi siempre se ejerce con la colabora
cin de clulas o factores inespecficos: por
ejemplo, para que las Igs secretadas tengan un
efecto de proteccin contra el antgeno extrao,
salvo contadas excepciones, como puede ser la
neutralizacin de virus o toxinas, deben interve
nir otras clulas, como fagocitos o clulas ki
ller, o factores, como el complemento.
Por todo esto, se comprende que la respuesta
inmune provocada por un antgeno extrao es
un proceso complicado en el cual intervienen,
en forma de cascada exquisitamente regulada,
una serie de clulas y factores de los que no to
dos pertenecen al sistem a especfico p ro p ia
mente dicho, constituido por los linfocitos.
Las clulas, tanto especficas como inespec
ficas, que intervienen en la respuesta inm une
tienen un origen comn, las clulas troncales
(stem cells) de la mdula sea, pero luego
tienen diferentes vas de diferenciacin, lo que
da por resultado poblaciones celulares con di
ferentes funciones. Esta diferenciacin se inicia

32

Aspectos bsicos de la inmunidad

Anexo I. (Continuacin)
CD

Otras
denominaciones

P M (IcD)

P apel biolgico

CD 87

U PA -R

50-65

CD 88
C D 89
C D w 90
CD91

C5aR
F caR
Thy-1
a2 m R (heterod
m ero)

C D w 92
CD93
C D 94
CD95

p70
V1MD25
KP43
A P O -l,F a s

42
55-75
25-35
600
515
85
70
120
43
42

C D 96

T A C TIL E

160

CD 97
CD 98

VIM3
4F2

74,80,89
80,40

Receptor para el activador del


plasraingerro tipo-urokinasa
que prom ueve actividad fibrinoltica
R eceptor de la anafilotoxina C 5a
U ne IgA srica y secretoria
?
Receptor a2-m acroglobulina.
M edia endocitosis del receptor
unido a proteinasa
7
7
A dhesin de NK con integrinas
A sociado con la induccin de
apoptosis
A dhesin de T y N K en fase tar
da de respuesta inm une
7
?

CD 99
C D 99R
C D l 00

E2, M IC2
B B I8,A 8

32
32
150

? (form acin de rosetas con Er)


7
7

C D w lO l
C D 102

BB27, BA27
IC A M -2

140
60

C D l 03

HML-1

150,25

7
Ligando para L F A -1 (no para
M ac-1)
? C adena a E de integrinas
Se asocia con integrina p7
? C adena (34 de integrinas
A sociada con a (CD 49f) une
lam inina y epiligrina
7
Ligando pitra V LA -4
Posible rol en adhesin

C D l 04

205

C D l 05
C D 106
C D l 07a

Endoglin
VCAM -1
L A M P -1

95

C D l 07b
C D w l0 8
C D w l0 9
C D l 15

LAMP~2
8A 3,7D 1
C S F -IR ; M -CSFR

120
80
170-150
150

C D w ll

G M -C SFR

150

C D l 17

c-K it

145

CD w 119
C D l 20a

IFNyR
T N FR; 55kd

90
55

C D l 20b
C D w l2 1 a
C D w l2 1 b
C D l 22
C D w l2 4
C D l 26
C D l 27
C D w l2 8

T N FR; 75kD
IL -IR tipo 1
IL - 1R tipo 2
1L-2RP
IL-4R
IL-5R
IL-7R
IL8R

75
80
68
75
140
80
75
58,67

C D w l3 0

g p l3 0 ,S IG

130

100, l i o
110

D istribucin celular
Ne, M o, M a, Eo, CE, Fi, T acvadas, ti
mo fetal

Gr, M a, M astocitos, m. liso


Mo, Gr, Ma, subp. B y T
Pro-Ti, cerebro y otros tejidos no linfoides
M o, M a, Fi, m. liso, hepatocitos, sinciciotrofoblasto, neuronas
Gr, M o, CE, U -9 3 7 ,T H P -I
Gr, M o, CE, U -937,T H P-1
N K, subpob. T. Aum. con activ.
Linaje T y m ieloide
T y N K activadas
T y B act., M o, NK, Gr, Pl
Baja en T, B, N K, Gr. A lta en; M o, T y
N K aet,, m. cardaco, queratinocitos basales
Ti, Li perifricos
Form a ms restringida de CD99
A mplia. Subpob. CD4 y CD8 que se acti
van por CD28
Gr, M o
L, M o, C E (alta expresin no m odulada
por la inflam acin)
Li intraepit. de intestino
H em idesm osom as epiteliales, cl,
Schw an, CE, neuro, trofoblasto

CE, M a activados
CE
A m plia en citop, sup, de Pl activadas, T
^ citotxicos
? 60% hom ologa con LA M Pl
dem
7
Li, leucem ias agudas
7
Pl, M eg, C E capilar y venular, T activ.
La unin de M -C SF induce la di- M o, M a y sus precursores
m erizacin del receptor
C adena a del receptor une GM - M o, M a y sus precursores, Pl
CSF. Junto a la cadena |3 gene
ra receptor alta afinidad
R eceptor para factor de creci
,Stem cells, m astocitos
m iento de stem cells
U ne IFN y con alta afinidad
M ac, M o, B, fibro., epit., endo.
C D l 20a y b unen T N F a y TN Fp La m ayora de las cl. expresan uno o am
eon relativa alta afinidad. Cobos TN FR s
inodulan con el antgeno Fas
V ase C D l2 0 a
V ase C D l2 0 a
R eceptor IL -1
A m plia
R eceptor IL -1
A m plia
C adena P del IL-2R
T ,B
R eceptor IL-4
A m plia
R ec ep to rIL -6
A m plia
R ec ep to rIL -7
Precur, hem atopoyticas
R eceptor de IL-8
Ne, M o, queratinocitos, basfilos, sub
pob, T
S ubunidad p del receptor de IL6, transduce seal

(*): ep ilo p e h id ro ca rb o n a d o , (::): U n id as a la m em b ra n a p o r un io n es fo sfatid il inositol. (#): C D 41 = gpMb es un h e te ro d m e ro 120/63, q u e


fo rm a un c o m p lejo c o n g p llla (C D 61). E x p re si n en tejidos: B, T , N K : lin fo cito s B, T y N K ; P: p lasm o cito s; Pl: plaq u e ta s; L: leucocitos;
Li: linfocitos; M o: m o n o cito s; G r: g ra n u lo c ito s; M a: m ac r fa g o s; E o: eo sin filo s; N e; n eu tr filo s; Er: eritro cito s; M O : m d u la sea; M eg;
m eg a cario c ito s; C E p: clulas ep iteliales; C E; c lu la s e n d o te lia le s; F i: fib ro b la sto s; T i; tim o cito s; C D ; c lu la s d endrticas; C L: c lu la s de
L an g e rh a n s; Oc; osteo cla sto s; Ob: osteo b lasto s; C ID : c lu la s in terd ig itad as; M i; c lu la s m ielo id es; LCV:. leucem ia de c lu la s vellosas.

Bases celulares de la respuesta


inmune. rganos linfoides primarios
y secundarios

MARTA BRAUN

CONCEPTOS PRELIMINARES
El ingreso de un antgeno no propio dentro
de un organismo induce una respuesta inmune
especfica dirigida contra ese mismo antgeno
que, por la adaptabilidad del sistema inmune,
puede tomar distintas modalidades: produccin
de inmunoglobulinas de diferentes clases, res
puesta celular con activacin de macrfagos,
efectos citotxicos, etc. Es el antgeno quien
elige los clones de linfocitos especficos, pre
comprometidos para reconocerlo, a los que va
a activar y que van a producir alguna de esas
respuestas, Pero, para que sucedan todos esos
mecanismos efectores especficos, no slo de
ben preexistir linfocitos que reconozcan al ant
geno, sino que deben interactuar varias pobla
ciones celulares, que colaboran entre ellas, an
tes de que sea patente uno o ms de esos meca
nismos efectores.
De estas poblaciones, la nica que reconoce
especficamente a los antgenos es la de los lin
focitos. Pero aunque stos aparezcan morfol
gicam ente idnticos entre s, son funcional
mente muy diferentes, no slo por su especifi
cidad, para la cual ya estn com prom etidos
desde su maduracin, sino tambin por sus fun
ciones.
Existen dos grandes poblaciones de linfoci
tos: los linfocitos B y los linfocitos T, Los pri
meros son los encargados, casi exclusivamente,
de la sntesis de inmunoglobulinas. Los linfoci
tos T tienen, por el contrario, una serie de fun
ciones, algunas de ellas efectoras y otras de co
laboracin y regulacin, que ejercen sobre los
linfocitos B y sobre otras subpoblaciones de T.
Adems, para que se inicie una respuesta inm u
ne deben colaborar otras clulas'no linfoides.

3
muy especialm ente las de la serie m onocitomacrfago.
As, para que se produzca una respuesta hu
moral, por ejemplo, si bien los linfocitos B pue
den reconocer por s mismos el antgeno para el
cual estn comprometidos, pero para que se es
timulen, se diferencien a plasmocitos y secreten
anticuerpos, deben recibir la colaboracin de
una subpoblacin de linfocitos T, los linfocitos
T colaboradores o helper (Th). Para que los
Th reconozcan al antgeno para el cual estn
' pre-comprometidos, ste debe haber sido proce
sado y presentado, junto con un antgeno de
histocompatibilidad (CMH) propio, por otra c
lula, ya sea un m acrfago u otro linfocito B
(vase cap. 10). A su vez, la respuesta inmune
efectora casi siempre se ejerce con la colabora
cin de clulas o factores inespecficos: por
ejemplo, para que las Igs secretadas tengan un
efecto de proteccin contra el antgeno extrao,
salvo contadas excepciones, como puede ser la
neutralizacin de virus o toxinas, deben interve
nir otras clulas, como fagocitos o clulas ki
ller, o factores, como el complemento.
Por todo esto, se comprende que la respuesta
inmune provocada por un antgeno extrao es
un proceso complicado en el cual intervienen,
en forma de cascada exquisitamente regulada,
una serie de clulas y factores de los que no to
dos pertenecen al sistem a especfico p ro p ia
mente dicho, constituido por los linfocitos.
Las clulas, tanto especficas como inespec
ficas, que intervienen en la respuesta inm une
tienen un origen comn, las clulas troncales
(stem cells) de la mdula sea, pero luego
tienen diferentes vas de diferenciacin, lo que
da por resultado poblaciones celulares con di
ferentes funciones. Esta diferenciacin se inicia

34

Aspectos bsicos de la inmunidad

en los rganos primarios del sistema inmune,


en ausencia de antgenos externos, y luego se
contina en los rganos secundarios, a conse
cuencia de la entrada de esos antgenos.
RGANOS LINFOIDES PRIMARIOS
Y SECUNDARIOS
Concepto
Se entiende por rganos primarios (tambin
llamados centrales) del sistema inmune a aque
llos que proveen un microambiente en el cual
los linfocitos maduran y adquieren inm unocompetencia. Los linfocitos inmaduros provie
nen de clulas troncales (stem cells) de la
m dula sea (vase ontogenia) y, al salir de
ella, ya estn precom prom etidos para la fun
cin T o B, o sea, son linfocitos pro-T y pro-B,
respectivamente. El microambiente de los r
ganos primarios se caracteriza no slo por la
presencia de clulas y factores que estimulan la
maduracin de los linfocitos, sino tambin por
la ausencia de antgenos provenientes del me
dio externo. El rgano primario para la madu
racin de los linfocitos T es el timo en todos
los vertebrados superiores. Para los linfocitos
B, en las aves es la bursa de Fabricius y en los
m am feros, sus equivalentes (vase cap. 2,
fig. 2-1).
A estos rganos llegan lin fo cito s p ro v e
nientes de la mdula que, pese a ser m orfol
gicam ente iguales a los maduros, no son in
munocompetentes, es decir, son incapaces de
reconocer antgenos. Los linfocitos, en gene
ral, no salen de los vasos, pero llevan en su
superficie molculas de adhesin (vase cap.
11) que les perm iten adosarse a las vnulas
p o scap ilares del rgano p ara el cual estn
comprometidos y as penetrar en la intimidad
de su tejido.
Los rganos secundarios o perifricos del
sistema inmune son aquellos que proveen un
microam biente donde los linfocitos maduros,
tanto B como T f provenientes de los rganos
primarios, pueden interactuar tanto con los an
tgenos externos como entre ellos y con otras
clulas accesorias, muy especialmente con las
clulas presentadoras de antgenos de las lnea
monocito-macrfago. Esta interaccin o cola
boracin intercelular es la que permite el com
plicado proceso de la respuesta inmune espec
fica.
Los principales rganos secundarios son los
ganghos linfticos, el bazo y el tejido linftico
asociado a las mucosas: amgdalas, placas de
Peyer, tejido linftico asociado al intestino
grueso y delgado, etc. y clulas linfoides libres
de la submucosa.

TIMO
Origen y desarrollo
El timo es un rgano bilobulado y es el pri
mer rgano linfoide en aparecer durante el de
sarrollo fetal. Deriva del endodermo de la ter
cera y cuarta bolsas branquiales: el endodermo
de dichas bolsas, con parte del ectodermo, pe
netra en el mesodermo que lo rodea para iniciar
la formacin del timo y las glndulas paratiroides; ms tarde, el rudimento tmico se separa y
penetra dentro de la cavidad torcica.
La poblacin celular tmica es variada, pues
est compuesto por clulas provenientes de los
procesos branquiales, sobre todo de origen epi
telial, y clulas que penetran en oleadas sucesi
vas de migraciones a partir de la sangre: son las
de la serie monocito-macrfago y los linfoci
tos, que aqu son llamados timocitos. En la m a
durez de un individuo, el 99% de las clulas t
micas son timocitos.
Luego de migrar al trax, el rudimento tmi
co recibe una primera oleada de hnfocitos, que
es seguida rpidamente de otra oleada de pre
cursores de linfocitos T. A partir de ese m o
mento, en condiciones fisiolgicas, ya no pene
trarn al timo nuevas oleadas de clulas inma
duras provenientes de la mdula sea, pero su
funcin se conserva y podra actuar como re
servorio para una regeneracin masiva del ti
mo, si fuera necesaria en etapas posteriores de
la vida.
Durante el desarrollo fetal y las etapas tem
pranas de la vida extrauterina, el timo aumenta
de tamao absoluto y llega a su mximo en la
pubertad, cundo comienza su involucin hasta
llegar a una marcada atrofia. Pero debe remar
carse que, en la mayora de las especies inclui
da la humana, antes del nacimiento, desde el
segundo tercio del desarrollo fetal, comienzan
a salir del timo hnfocitos T maduros inmunocompetentes, que migrarn hacia los rganos
secundarios y los poblarn. Adems, la vida
media de los linfocitos T es muy larga y sus
clones podran durar incluso ms que la vida
del individuo; de hecho, el establecimiento in
vitro de lneas celulares T es muy fcil y mu
chas han perdurado durante tiempos muy pro
longados. Estos dos hechos hacen que, en el
momento del nacimiento, en la mayora de las
especies (salvo en la especie experimental por
antonom asia de la inm unologa - e l ra t n - y
otras pocas excepciones), la funcin del timo
ya est cumplida y pueda ser extirpado sin in
convenientes. De hecho, en los albores de la ci
ruga cardaca correctora de m alform aciones
fetales, cuando an el timo era un rgano en
docrino de funcin desconocida, los cirujanos
extirpaban el timo de los recin nacidos some

Bases celulares de la respuesta Inmune


tidos a operaciones cardacas, pues les impeda
un acceso fcil al trax; esos nios no padecie
ron despus deficiencias notables de su sistema
inmune.
Organizacin
El timo presenta una corteza perifrica, una
corteza profunda y una regin medular. Es de
hacer notar que en la corteza, tanto profunda
como superficial, existe ima barrera hemato-tmica que impide, o por lo menos disminuye en
gran medida, el paso de protenas sanguneas
hacia la intim idad del tejido; esta barrera no
existe en la mdula (vase cap. 2, fig. 2-3),
En la corteza superficial, el endotelio de las
vnulas poscapilares presenta una zona ms
densa con estructura particular. Los linfocitos
pro-T reconocen estas estructuras por sus m o
lculas superficiales, se adosan a ellas y de esa
forma llegan a la corteza, donde forman una
delgada capa de pocas clulas de espesor. All
se dividen activamente y dan origen a todos los
otros timocitos. En esta regin, los timocitos
son grandes, de aspecto inmaduro y presentan
un alto ndice de mitosis. En condiciones nor
males, esta capa representa menos del 5% del
total de timocitos.
Los timocitos de la corteza superficial migran hacia la corteza profunda, que contiene un
85% de los timocitos. Esta regin se caracteri
za por la presencia de clulas de tipo dendrtico, de origen epitelial y de aspecto estrellado,
que contactan con otras clulas similares por
medio de pequeos desmosomas. Hay adems
clulas originadas en precursores hematolinfoides, de la serie monocito-macrfago, como c
lulas dendrticas y macrfagos, stos ms abun
dantes en la mdula tmica. En esta regin, los
timocitos tienen menor tamao y estn en nti
mo contacto entre s y, especialmente, con las
clulas de tipo dendrtico, que han sido deno
minadas clulas nodrizas, en cuyos repliegues
se alojan en forma tal cjue hasta parecen pene
trar en ellas. En esta regin los linfocitos inm a
duros sufren una nueva etapa de maduracin y
de .seleccin, para pasar luego a la mdula.
En la regin m edular, los tim ocitos estn
raenos compactados que en la cortical; algunos
son ya linfocitos T maduros, listos para pasar a
la sangre. Aqu tambin se encuentran clulas
epiteliales, organizadas a veces en corpsculos
de Hassall, y un nmero importante de macr
fagos. Los vasos de esta zona son altam ente
permeables a las protenas plasmticas; los lin
focitos en su ltima etapa de maduracin en
tran en ntimo contacto con las protenas pro
pias y sufren aqu el ltimo proceso de selec
cin, que hace a la poblacin migrante alta
mente tolerante hacia las protenas propias.

35

Los tim ocitos inm aduros de la co rteza no


sintetizan la enzima 20-hidroxil-esteroide dehi
drogenasa y son muy sensibles a las hormonas
esteroides. Durante la pubertad, a consecuencia
de la secrecin aumentada de estas hormonas,
disminuyen en forma notable, lo cual origina la
involucin tmica tpica de esa edad. En la m
dula, los timocitos ms maduros ya expresan
esa hormona y son corticoide resistentes.
Como veremos ms adelante, en el tim o no
slo se producen y maduran los linfocitos T, si
no que tambin sufren una rigurosa seleccin,
por la cual los linfocitos no aptos son elim ina
dos. Esta seleccin hace que menos del 1% del
total de los linfocitos producidos emigren del
tim o: el 99% restan te m uere por ap o p to sis
(m uerte programada) en el mismo timo. Este
gasto aparentemente enorme tiene una im por
tancia biolgica tambin enorme: por una par
te, slo emigran los linfocitos capaces de reco
nocer los antgenos de histocompatibilidad pro
pios (seleccin positiva) y los que no reaccio
nan ni contra stos ni contra los otros antgenos
propios (seleccin negativa), lo que hace que la
produccin del timo no slo sea funcionalmen
te apta, pues reconoce los antgenos de histo
com patibilidad propios (base de la respuesta
inmune T, vase cap 10), sino tambin autotolerante, pues no agrede a los tejidos propios.
ORGANOS PRIMARIOS
DEL SISTEMA B
Como se dijo antes, existe en la aves un r
gano primario de maduracin de los linfocitos
B, que es la bursa de Fabricius: si se extirpa
qumica o quirrgicamente la bursa durante el
desarrollo fetal, su sistema B no se desaiTolla.
Sin embargo, la ablacin quirrgica de este r
gano en un animal adulto no impide la produc
cin constante de linfocitos B maduros, lo que
indica cjue esta funcin cambia de sitio en eta
pas posteriores al nacimiento.
En los m am feros, el rgano prim ario del
sistema B puede variar segn la especie. E n los
ovinos, la maduracin de los linfocitos B suce
de en el tejido linfoide asociado al intestino
delgado; en el ratn y en el hombre no se ha
encontrado un rgano similar, y se admite que
la produccin y maduracin de los linfocitos B
se realiza ntegramente en la mdula sea. Las
placas de Peyer han sido propuestas com o r
ganos primarios B en otras especies y, en algu
nos casos, la m aduracin de los linfocitos B
podra lograrse en rganos, como el bazo, en
los que los linfocitos pro-B estn en contacto
estrecho entre s. Sea cual fuere el rgano de
m aduracin de los linfocitos B, stos tienen
una vida media corta y, a diferencia de lo que

36

Aspectos bsicos de la inmunidad

sucede con los linfocitos T, su produccin y


maduracin contina durante toda la vida del
individuo.
RGANOS SECUNDARIOS
Organizacin de los ganglios linfticos
Los ganglios linfticos son pequeos rga
nos redondeados u ovoides, que se encuentran
generalmente en grupos, en el tejido adiposo
que rodea a los grandes vasos sanguneos del
abdomen y el trax, el de la nuca, el cuello, las
axilas, las ingles y el hueco poplteo. Dentro de
una cpsula que rodea al rgano y se prolonga
en trabculas en un estrom a reticular, se en
cuentra un gran nmero de linfocitos y clulas
de las serie monocito-macrfago, no slo m a
crfagos sino tambin clulas propias de los
ganglios, las clulas dendrticas.
La circulacin de los ganglios linfticos pro
viene tanto de la sangre como de los vasos lin
fticos y tiene una gran importancia en la mi
gracin de los linfocitos y en la provisin de un
microambiente adecuado para la interaccin de
los antgenos con las distintas clulas inmunocompetentes y con los anticuerpos (vase fig.
3-1), importante no slo en la induccin de res
puestas inmunes sino tambin en su regulacin.
La sangre penetra por el hilio por una arteria
cuyas ramas llegan hasta la corteza superficial.
En esa zona se incurvan y se forman las vnulas
que luego se juntan para formar una vena que
sale por el hilio. En la zona de la curvatura, su
endotelio presenta un aspecto ensanchado parti
cular y es la regin que permite el paso de los
linfocitos de la sangre al interior del gangho.
Los vasos linfticos tienen su origen en los
diferentes tejidos del organismo y forman una
red de canales, paralelos a la circulacin san

gunea, que recogen el fluido extravasado de


los capilares que, en los vasos linfticos, recibe
el nombre de linfa. La linfa contiene tambin
clulas provenientes de la sangre o los tejidos,
muy especialmente linfocitos y clulas veladas.
Estas ltimas se originan de las clulas de Lan
gerhans de la piel y son las encargadas, junto
con los macrfagos, de llevar los antgenos a
los ganglios locales: en stos se convertiran en
clulas dendrticas residentes, capaces de cap
tar antgenos y de mantenerlos in situ por tiem
pos prolongados.
La linfa llega al ganglio local por los vasos
aferentes que desembocan en un seno que ro
dea a la corteza, en la periferia del ganglio. De
all filtra por el interior del ganglio, en un ca
mino paralelo al de la sangre, y luego sale por
el hilio, por un linftico eferente. Los linfticos
eferentes de varios ganglios se juntan entre
ellos y, eventualmente, desembocan en la san
gre, a travs del conducto torcico u otros co
lectores linfticos. De esta forma se establece
una recirculacin constante entre la sangre y la
hnfa, que permite el pasaje no slo de los flui
dos sino tambin de las clulas, a travs de los
ganglios linfticos. Esta recirculacin permite
la migracin permanente de los linfocitos entre
la sangre y los rganos linfoides secundarios y,
eventualmente, los tejidos.
Los ganglios linfticos estn divididos en
tres reas principales; la corteza superficial, la
corteza profunda y la regin medular (fig. 3-1).
En las dos primeras predominan los linfocitos,
y entre ellos corre esa red de canales linfticos
que van de la corteza a la mdula.
En la corteza superficial, los linfocitos estn
en ntimo contacto, muchos de ellos organiza
dos en ndulos o folculos, compuestos en gran
proporcin por linfocitos B; entre los folculos
hay linfocitos repartidos sin organizacin parti
cular; la mayora de ellos son T. Si, a partir de
Vnulas

F ig . 3 -1 . E s q u e m a de
un ganglio linftico. N
te n se las d ife re n te s r e
giones tim odependientes
y tim o in d e p e n d ie n t e s
(vase el texto) y la cir
c u la c i n d e lin fa y d e
lin fo c ito s p ro v e n ie n te s
de la sangre.

Bases celulares de la respuesta inmune


la zona que drena ese ganglio penetra un ant
geno y se estimula la respuesta, los folculos se
agrandan y dan lugar a los llamados folculos
secundarios; en ellos aparece un rea central
con clulas grandes y en mitosis: son los llama
dos centros germinativos.
Los linfocitos T predominan entre los folcu
los y en la zona medular: es la llamada zona ti
mo-dependiente pues no se desarrolla en ani
males timoprivos o en pacientes con deficien
cias tmicas, en los que slo se aprecian los fo
lculos primarios bien desarrollados.
En la zona que rodea a los folculos, adems
de los linfocitos T y entre las clulas del estro
ma, se encuentran numerosas clulas dendrti
cas, cuya importante funcin es retener y pre
sentar los antgenos a los linfocitos: se han en
contrado determinantes antignieos sobre clu
las dendrticas mucho tiempo despus que el
antgeno fuera inyectado.
Es interesante tener en cuenta que, pese a
que en el caso de una estimulacin antignica
se producen mitosis en los ganglios regionales,
la gran mayora de los linfocitos que estn en
un momento dado en los ganglios no son de
produccin local, sino que provienen de la
sangre. Los vasos sanguneos son normalmen
te impermeables a los linfocitos, pero en la re
gin subcapsular de los ganglios, las vnulas
poscapilares ya m encionadas expresan m ol
culas de adhesin que son reconocidas por glu
coprotenas superficiales de los linfocitos, tan
to los T como los B de memoria. stos se ado
san a la pared del vaso, lo atraviesan y pene
tran en el tejido linftico, pero slo permane
cen unos pocos das en el ganglio, pues van
migrando hacia la mdula, para salir luego por
la linfa y comenzar un nuevo ciclo de recircu
lacin.
Es de hacer notar que existe una importante
selectividad en la recirculacin de los linfoci
tos: si se marcan e inyectan linfocitos prove
nientes del conducto torcico o de ganglios su
perficiales, la gran mayora se encontrar luego
en los ganglios superficiales mientras que, si se
inyectan linfocitos de bazo, se hallarn en el
bazo en grandes proporciones. Los hnfocitos
de los rganos linfoides asociados a las m uco
sas tienen tambin sus rutas propias de recircu
lacin (vase cap. 17). Todas estas rutas estn
dirigidas por una serie de molculas superficia
les, muchas de ellas ya conocidas (vase cap.
11), que permiten el pasaje de los linfocitos de
la sangre al tejido.
Organizacin del bazo
El bazo es un rgano abdominal cuya fun
cin inmune en el adulto es filtrar partculas de
la sangre y concentrar antgenos circulantes; en

37

efecto, la respuesta inmune frente a antgenos


circulantes se hace principalmente en el bazo.
Tiene adems funcin de reservorio sanguneo,
poco importante en el hombre pero muy im por
tante en algunas especies, es el encargado de la
hemocatresis (destruccin de eritrocitos enve
jecidos) y en ciertas patologas puede retom ar
funciones de hemopoyesis propias del feto. Es
tas ltimas funciones se cumplen en la pulpa
roja, rica en capilares sinusoides y con alto
contenido en eritrocitos, que forma la m ayor
parte del bazo.
La pulpa blanca, donde se cumplen las fun
ciones inmunes del bazo, forma pequeos hu
sos alrededor de las pequeas arterias y las ar
teriolas. Cada huso rodea a una arteriola, que
termina en una vnula, que nace al final de la
arteriola y se vuelve hacia atrs, formando el
seno marginal, que separa la pulpa blanca de la
roja. Por este seno los linfocitos penetran direc
tamente de la sangre al tejido linfoide y luego,
a semejanza de lo que sucede en los ganglios,
migran lentamente a travs del tejido del m an
guito. Pasan despus a la pulpa roja y abando
nan el bazo por su vena y por sus vasos linfti
cos. En los husos, al igual que los ganglios, hay
regiones timodependientes y timo independien
tes: la primera, rica en linfocitos T y en clulas
dendrticas y macrofgicas, es un manguito arteriolar de tejido linfoide difuso que rodea in
mediatam ente a la arteriola; la segunda com
prende folculos y ndulos que rodean a ese
manguito.
Tejido linfoide asociado a las mucosas
Todas las mucosas presentan acmulos subepiteliales de tejido hnfoide, que en estas regio
nes tiene la particularidad de no estar rodeado
por una cpsula de tejido conectivo. Este tejido
linfoide puede presentarse como colecciones
difusas de linfocitos, plasmocitos y macrfagos
dispersos en la lmina propia de los rganos, o
bien como acmulos ms organizados con fol
culos semejantes a los de otros rganos secun
darios: en el hombre stos incluyen las am gda
las, las placas de Peyer y el apndice cecal. En
su superficie mucosa, estos acmulos presentan
clulas epiteliales especializadas capaces de
captar antgenos. Los hnfocitos que fueron esti
mulados en los acmulos pasan a la linfa y de
all a los ganghos mesentricos y a la sangre.
Del torrente sanguneo migran a la lmina p ro
pia de las mucosas, donde aparecen dispersos y
se transforman en clulas productoras de IgA o
IgE.
La importancia de este sistema, la migracin
especializada de los linfocitos que lo com po
nen y su papel en la proteccin del individuo se
vern con ms detalle en el captulo 17.

38

Aspectos bsicos de la Inmunidad

La mdula sea como rgano secundario


Si bien en el ratn y en el hombre la mdula
sea acta como rgano primario del sistema
inmune, tambin tiene funcin de rgano se
cundario; los linfocitos B estim ulados en los
ganglios perifricos migran a la mdula donde
se diferencian a plasm ocitos. La m dula se
convierte as en un importante sitio de sntesis
de Igs, sobre todo en los perodos tardos de la
respuesta inmune primaria y en las respuestas
secundarias.
Captacin de los antgenos
en los rganos secundarios
Los antgenos que penetran del exterior se
rn tomados por los distintos rganos secunda
rios segn sea su va de entrada y su estructura
fsico-qumica. En general, los antgenos solu
bles, salvo que sean captados por alguna clu
la, no van a quedarse en un rgano secundario:
por esta razn, es raro que induzcan respuestas
inmunes positivas y tendrn tendencia a indu
cir tolerancia (vase cap. 18). Generalmente,
las sustancias extraas, muy especialmente si
son particuladas, y ms an si estn opsonizadas, son captadas por las clulas fagocticas.
Estas los van a digerir y procesar, para luego
presentar sus determinantes antignicos en la
superficie unidos a los antgenos de histocom
patibilidad de clase II. Si penetran a los espa
cios intercelulares de cualquier tejido y son
captados por macrfagos, stos migran a los
ganglios drenantes. En la piel, pueden ser to
mados por clulas de Langerhans, que luego
migran hacia el ganglio en form a de clulas
veladas. En el caso de antgenos que no hayan
sido englobados por un fagocito, pueden toda
va ser captados en los rganos secundarios,
siempre que exista por lo menos una pequea
cantidad de anticuerpos contra ese antgeno y
se formen complejos; en este caso, las clulas
dendrticas, que tienen receptores para el Ec de
las inmunoglobulinas, pueden fijar el complejo
sobre su superficie. En algunos tejidos existen
macrfagos fijos (clulas de Kupffer del hga
do, macrfagos alveolares). A qu el antgeno
queda en el lugar y no interviene en la estim u
lacin del sistema inmune, pero podra actuar
como reservorio y estimularlo ms tarde, pues
to que se ha comprobado que el antgeno del
interior de estas clulas est en equilibrio con
el antgeno circulante.
Los antgenos que penetran en los ganglios
junto con un macrfago, por la particular circu
lacin en los ganghos pueden llegar hasta las
zonas tim odependiente y tim oindependiente.
Dado que los linfocitos estn migrando perma
nentemente por estas zonas, la posibilidad de

que cada determinante se encuentre con un lin


focito que lo reconozca aumenta notablemente.
En el caso de que penetre un antgeno libre
por la zona cortical, puede interactuar con clu
las dendrticas, siempre que exista suficiente
proporcin de anticuerpos. La concentracin
del antgeno va disminuyendo de la corteza a la
mdula y la de los anticuerpos va aumentando
paralelamente, en razn de la particular circula
cin del ganglio; en esta forma aumentar las
posibilidades de que sea fijado por clulas den
drticas. Estas diferencias en las concentracio
nes de los antgenos y los anticuerpos en la di
ferentes zonas de los ganglios tiene tambin
importancia en la regulacin de la respuesta in
mune.
En el bazo sucede un fenmeno parecido a
partir de la sangre, pues all tambin los antge
nos penetran a contracorriente de la migracin
de los linfocitos, lo que favorece la interaccin
entre ambos.
M ADURACIN DEL SISTEMA INMUNE
Las clulas que intervienen en las respuestas
inmunes provienen de los rganos hematopo
yticos, donde clulas troncales darn origen a
los distintos elem entos formes de la sangre.
Provengan de una misma clula troncal o de
clulas diferenciadas para precursores de linfo
citos T o B, los linfocitos que migran de la m
dula sea ya son pro-B o pro-T pero, para con
vertirse en clulas inmuno-competentes, nece
sitan (sobre todo los T) del microambiente pro
picio que les ofrece el rgano primario. Como
ya se mencion, ste es elegido por el linfocito
inmaduro circulante mediante sus molculas de
adhesin superficiales. En estos rganos, los
linfocitos inmaduros comenzarn a sintetizar y
expresar en su superficie una serie de molcu
las que les permitirn, por una parte, reconocer
a un determinante antignico particular y, por
la otra, interactuar con las otras clulas involu
cradas en la respuesta inmune (vase cap. 2,
figs. 2-2 y 2-3).
De todas las molculas superficiales, la ms
indispensable es el receptor para el antgeno.
Este se adquiere durante la maduracin, m e
diante un reacomodamiento del material gen
tico en clulas somticas, que implica prdida
de su ADN. Este proceso, que se describe en
detalle en los captulos 6 y 7, se realiza en au
sencia de antgenos extraos e implica que ca
da linfocito que madur y sus descendientes
tengan una secuencia particular y nica en la
zona que codifica para su receptor antignico,
que le da una especificidad fija. En los linfoci
tos T, esta secuencia no vara para nada durante
toda la vida de la clula, que es larga, ni vara

Bases celulares de la respuesta inmune


tampoco durante sus mitosis, de modo que ca
da linfocito maduro formar un clon, capaz de
reconocer un nico determ inante antignico.
Debe tenerse muy en cuenta que estos clones
existen independientem ente de la entrada del
antgeno que sern capaces de reconocer. Si
uno o ms de los linfocitos de ese clon interac
ciona con el antgeno para el cual estn com
prometidos, sucedern nuevas mitosis, sin cam
bios nuevos para los linfocitos T pero con la
posibilidad de mutaciones puntuales para los
linfocitos B (vanse caps. 6 y 7).
Es de hacer notar que, en la mayora de las
especies, en el momento del nacimiento el pro
ceso de maduracin de los linfocitos y su m i
gracin a los rganos secundarios ya se ha rea
lizado, es decir, que el individuo es inmunolgicamente maduro.
Maduracin de los linfocitos B
La maduracin y activacin de los linfocitos
B se cumple en una serie de etapas; comienza
durante la vida fetal y se contina durante toda
la existencia del individuo, pues los linfocitos
B tienen vida corta y son renovados constante
mente. En el rgano primario, los linfocitos B
adquieren esa molcula importantsima que, no
slo los distingue de otros linfocitos no B, sino
que es fundamental para su funcionalidad, que
es la inmunoglobulina (Ig) de superficie y que
acta como receptor para el antgeno (vase
cap. 2, fig. 2-2).
La existencia de Ig sobre la superficie de los
linfocitos B y slo de los B, se conoce desde
hace tiempo, y se la considera, como el princi
pal marcador de la serie B, Luego se demostr
que esta Ig es sintetizada por el propio linfocito
y que, si bien puede cambiar en la regin cons
tante, es prcticam ente idntica en su regin
variable a la Ig que secretar ese linfocito y sus
descendientes luego de su estimulacin por el
antgeno. A este respecto, cabe remarcar que la
Ig de superficie es algo ms larga que la circu
lante, puesto que en el extremo C terminal tie
ne dos dominios ms, uno hidrofbico, que es
el que atraviesa la membrana y un ltimo h i
droflico, que permanece en el citoplasma. La
capacidad del sistem a inm une para producir
tantos clones con tantas especificidades distin
tas se debe al reacomodamiento del ADN que
codifica para la regin variable de esta Ig.
Dado que la membrana celular es fluida, las
molculas superficiales pueden moverse. La in
teraccin de las Igs superficiales con ligandos
polivalentes, ya sean antgenos o anticuerpos
,dirigidos contra ellas, que puedan form ar un
enrejado sobre su superficie, lleva a la form a
cin de casquetes (capping) o sea, a la acu
mulacin de todas las molculas sobre un polo

39

de la clula. Estas m olculas y sus ligandos


pueden ser luego interiorizados por pinocitosis,
lo cual tiene gran importancia en la capacidad
del linfocito B de presentar antgenos a los lin
focitos T, o para eliminarlos.
N um erosos experim entos han dem ostrado
que la Ig superficial es la que acta com o re
ceptor antignico del linfocito B y que la unin
de una ligando a esta Ig inicia una serie de
eventos que culmina con el envo de una seal
activadora del linfocito. Si bien la Ig es la en
cargada de reconocer especficamente al ant
geno, para su funcin receptora no est sola si
no t]ue forma un complejo multimolecular su
perficial, pues est acompaada por otras mollulas que no slo la fijan sobre la membrana si
no que contribuyen al envo de la seal al inte
rior de la clula.
En una primera etapa, el linfocito en m adu
racin reacomoda el ADN que codifica para la
cadena pesada y comienza a sintetizar cadenas
de clase p,. Estas no se expresan en la m em bra
na, pero pueden ser detectadas en el citoplas
ma; es la etapa de linfocito pre-B. Luego reaco
moda la cadena liviana y, ahora s, esta m ol
cula puede expresarse en la membrana.
A partir de este momento, el linfocito B pue
de reconocer al antgeno, pero es un linfocito B
inmaduro, que tiene la particularidad de que el
encuentro con el antgeno especfico lo lleva a
la tolerancia. Si bien se discute an cules son
los m ecanism os que llevan a la tolerizacin
de los linfocitos B inmaduros, su efecto fisiol
gico es la eliminacin funcional de los linfoci
tos autorreactivos, pues los Ags propios entran
en contacto con ellos durante esta etapa.
En un paso siguiente, por empalmado (sphcing) alternativo del ARN de la cadena pesa
da, el linfocito com ienza a sintetizar Ig D e
IgM. Se trata ahora de un linfocito maduro, al
cual el encuentro con su Ag especfico llevar
a la activacin. Estos linfocitos maduros, que
sintetizan simultneamente IgM e IgD y expre
san ambas en la membrana, salen de los rga
nos primarios y migran a los rganos secunda
rios donde formarn los folculos prim arios.
Algunos linfocitos expresan tambin IgA en la
superficie desde esta etapa y se encuentran en
el tejido linfoide asociado a las mucosas (vase
cap. 17). De no mediar un estmulo antignico,
este linfocito maduro virgen tiene vida corta,
no recircula y muere en menos de 30 das en la
m ayora de las especies. Si hay un contacto con
el Ag y con factores de los linfocitos T (vanse
caps. 2 y 13), suceden una serie de nuevas eta
pas de mitosis y diferenciacin, que converti
rn al linfocito B maduro en plasmocitos, p ro
ductores de Igs, tambin de vida corta, o bien
en linfocitos B de memoria, de vida ms larga
y recirculantes. Esta diferenciacin est gene-

40

Aspectos bsicos de la inmunidad

ramente acompaada de otros dos fenmenos:


por una parte, puede haber una nueva prdida
de ADN, y el linfocito ya no podr sintetizar
IgM e IgD y slo sintetizar otras clases de Igs:
es el llamado sw itch o cambio de Igs; por
otra parte, por empalme o splicing alternati
vo del ARN, se pueden perder los dominios intramembrana e intracitoplasmtico de la Ig, de
modo que sta no queda fijada a la membrana
sino que se secreta; las clulas que sufren este
proceso son las que se diferencian a plasmoci
tos (vase cap. 2, fig. 2-2).
Plasmocitos
En el caso de diferenciacin a plasmocito, la
clula sufre varios procesos, entre los que se
incluye una diferenciacin morfolgica, pues
adopta el tpico aspecto de clula ovoide, de
abundante citoplasma y ncleo excntrico y en
rueda de carro. La iniciacin de la diferencia
cin a plasmocito se hace en las regiones timoindependientes de los rganos secundarios,
y muchos de los plasmocitos se encuentran en
folculos de bazo, ganglios o tejido linfoide
asociado a las mucosas. Una proporcin impor
tante de ellos migra y puede establecerse en
otras regiones del ganglio o bazo, en la mdula
sea o como clulas linfoides no organizadas
en las submucosas.
El plasmocito es una clula terminal, que vi
ve pocos das y cuya nica funcin es la secre
cin de Igs. Toda la Ig que produce es de tipo
circulante, sin regin intram em brana ni cito
plasmtica. Esta clula ha perdido la Ig de su
perficie, as como otros receptores funcionales
de linfocitos B. Por lo tanto, ya no podr ser
activada ni ser pasible de regulacin negativa.
Maduracin de los linfocitos T
Las primeras observaciones que permitieron
comprobar que el sistem a inm une posee dos
grandes tipos de respuestas, humoral y celular,
adjudicaron slo la funcin de inmunidad m e
diada por clulas al sistema T y a sta, casi ex
clusivamente la de vigilancia inmunolgica antitumoral. Poco despus, se comprob que la
funcin de las clulas derivadas del timo era
muchsimo mayor, pues se vio que su colabora
cin es indispensable para prcticamente todas
las respuestas humorales. Al adjudicrsele tam
bin una importante funcin de regulacin, por
medio de los linfocitos T supresores, el timo
pas a ser considerado como el director de la
orquesta inmunolgica. Ninguno de estos con
ceptos ha perdido vigencia hoy, pero debe te
nerse en cuenta que no es el timo, p er se, el que
dirige la orquesta, sino las clulas que en l
maduraron, que poblaron los rganos secunda

rios y que permanecern recirculando durante


la vida del individuo. A este respecto, en vista
de la dispensabihdad del timo desde el naci
miento en la mayora de las especies incluida
la humana, muchos autores han postulado que
existiran rganos extra-tm icos que cum pli
ran la funcin de maduracin de los linfocitos
T durante la vida extrauterina. Sin embargo, en
vista de la larga vida de los linfocitos, cuyos
clones pueden perdurar in vitro indefinidamen
te, muchos autores aceptan hoy que tales rga
nos no son necesarios y que los clones m adu
rados en el timo durante la poca fetal pueden
acompaar al individuo durante toda su vida.
Otra consideracin que conviene hacer al res
pecto, es que existen mecanismos, an no co
nocidos, que mantienen ms o menos estable
la poblacin total de hnfocitos T de un indivi
duo. Despus de cada estimulacin antignica
se produce una im portante expansin de los
clones que reconocen al inmungeno y, a dife
rencia de lo que pasa con los plasmocitos, un
gran nmero de los hnfocitos T no mueren lue
go de cumplir su funcin, sino que se diferen
cian a clulas T de memoria. Ello no significa
que la poblacin total de linfocitos T aumente
indefinidamente durante toda la vida a conse
cuencia de los estmulos antignieos repetidos
que recibe cualquier individuo normal. Si bien
existen mecanismos homeostticos que inter
vienen para mantener constante la poblacin T
total, muchos de esos mecanismos no son co
nocidos an.
As como el conocimiento sobre la im por
tancia del timo se logr mediante estudios en
el ratn, una de las pocas especies en que la ti
mectoma neonatal lleva a la desaparicin de la
funcin T, la maduracin de los linfocitos T se
estudi tambin en el ratn y luego en el hom
bre. Si bien no se ha estudiado en todas las es
pecies, los datos obtenidos hasta ahora en es
pecies dom sticas de vertebrados superiores
sugieren que seguiran pasos similares en to
dos stos.
Durante su maduracin, los hnfocitos T ad
quieren la molcula principal para su funcin,
el receptor antignico o TCR, en una forma si
milar a la adquisicin de la Igs por parte de los
linfocitos B, es decir, por reacomodacin con
prdida del ADN que codifica para el receptor.
Pero tambin adquieren y pierden otra serie de
molculas, con importantes funciones, cuya lis
ta y modo de deteccin se detallan en el captu
lo 2 (fig. 2-3).
Como ya se mencion, los linfocitos pro-T
provenientes de la mdula, se alojan en la cor
teza superficial del timo y comienzan a sufrir
varios ciclos de mitosis. Durante estos ciclos,
se hace el reacomodamiento del ADN que co
difica para las diferentes cadenas del TCR.

Bases celulares de la respuesta nmune


En los primeros estadios de maduracin, las ca
denas que se reacomodan son las j y 5, que dan
origen a linfocitos j/5 positivos. Estos, por lo
menos en el hombre, tienden a disminuir en pe
rodos posteriores de la vida, y se los encuentra
especialmente en los tejidos linfticos asocia
dos a las mucosas. Luego comienza la reaco
modacin del ADN de las cadenas (3 y a , segn
se datalla en el captulo 7. El TCR se expresa
en la membrana en un complejo polimolecular,
unido al CD3, cuya funcin ser, no slo la de
anclar el TCR a la membrana, sino tambin la
de contribuir para el envo de la seal de acti
vacin del linfocito T. Tambin comienzan a
sintetizarse y expresarse otras dos molculas
importantes en la activacin del linfocito T: el
CD4 y el CD8.
Estos linfocitos CD4+-CD8^ positivos se en
cuentran en gran cantidad en la corteza profun
da del timo. En estos momentos el linfocito en
maduracin es capaz de reconocer antgenos,
pero conviene tener en cuenta desde ya que lo
nico que puede reconocer un linfocito T ma
duro son los antgenos de histocompatibilidad
propios, de clase I o IL unidos a un pptido
propio o extrao. Comienza ahora el proceso
que en una poca se llam aprendizaje tmico,
pero se trata ms bien de una seleccin tmica,
pues los linfocitos no seleccionados mueren.
Esta seleccin tiene dos etapas: una selec
cin positiva y una negativa. La primera, es la
que permite vivir a aquellos linfocitos inmadu
ros que s reconocen antgenos propios de Cla
se I o II. En efecto, el reordenamiento de las
cadenas a y P del TCR se hace al azar, por lo
que slo una proporcin relativamente pequea
de los linfocitos que reacomodaron su TCR re
conocer los alelos propios, ya sean de Clase I
o II. Las clulas de origen epitelial del timo ex
presan ambas clases de antgenos de histocom
patibilidad. En esta etapa, el timocito en madu
racin ha activado su sistema de muerte pro
gramada o apoptosis: si en este momento no es
capaz de reconocer algunas de las protenas de
clase I o II que las clulas le muestran, muere
por apoptosis. Si en cambio reconoce alguna de
esas molculas de histocompatibilidad, recibe
una seal que anula la muerte program ada y
contina su ciclo.
Este linfocito as rescatado pasa entonces a
alojarse entre los repliegues de la membrana de
las clulas nodrizas, dnde puede continuar su
maduracin. La clase del antgeno que ha reco
nocido tambin es importante; si reconoci una
molcula de Clase I, se reprime el gen que co
difica para CD4 y el linfocito contina sinteti
zando slo CD8, Por el contrario, si reconoci
Clase II, se reprime el gen para el CD8 y el lin
focito slo sintetizar CD4, La consecuencia fi
siolgica de esta seleccin positiva es que slo

41

saldrn del timo linfocitos funcionales, es de


cir, linfocitos capaces de reconocer los antge
nos de histocompatibilidad propios (vase cap.
2, fig. 2-3).
D ado que el reacom odam iento se hace al
azar, pueden surgir linfocitos capaces no slo
de reconocer sino tambin de reaccionar contra
antgenos de histocompatibilidad propios uni
dos a pptidos propios, es decir, capaces de ini
ciar reacciones autoagresivas. Este hecho ha
llevado a que evolucione una segunda form a de
seleccin, una seleccin negativa, que se lleva
a cabo mayoritariamente en la mdula del timo.
No est demostrada cul es la diferencia entre
reconocim iento simple y reconocim iento con
reaccin, pero muchos autores la atribuyen a
una diferencia en la afinidad de unin del TCR
con su antgeno especfico. Sea por interaccin
de alta afinidad o por otra causa, un reconoci
miento de antgenos propios seguido de reac
ci n , lleva al lin fo c ito en m ad u raci n a la
muerte, en este caso a cargo de los macrfagos
medulares.
Debe tenerse en cuenta que, en la mdula, la
barrera hematotmica ya no existe, y las prote
nas plasmticas pueden penetrar all. P o r otra
parte, las clulas propias del timo sintetizan un
gran nmero de molculas tpicas de otros r
ganos. Esto perm ite que, para casi to d o s las
protenas propias del organismo, cuyos ppti
dos sean presentados junto con antgenos tanto
de clase I como II, exista tolerancia, pues los
clones capaces de reaccionar contra ellos han
sido eliminados por esta seleccin negativa.
Los linfocitos que han terminado su madura
cin y han sido as seleccionados estn en con
diciones de abandonar el timo y dirigirse a los
rganos secundarios, a travs de los cuales, co
mo ya se explic, recirculan en forma de linfo
citos maduros vrgenes, hasta tanto encuentren
al antgeno para el cual estn precomprometi
dos para reconocer y reaccionar.
Subpoblaciones funcionales
de los linfocitos T
De lo expresado antes, se d esp ren d e que
ex isten dos grandes clases de lin fo cito s T:
aquellos que reconocen antgenos de C lase I y
expresan CD8 y los que reconocen los de Cla
se II y expresan CD4, La distribucin y fun
ciones de estas dos molculas se detallan en el
captulo 10, pero conviene tener desde ya en
cuenta que los de Clase I se expresan en casi
todas las clulas del organismo y salen a la su
perficie unidos a pptidos de protenas sinteti
zadas en la mism a clula; en cambio, los de
Clase II, se expresan casi exclusivam ente en
los linfocitos B y las clulas de la lnea mono
cito-macrfago, que son clulas especializadas

42

Aspectos bsicos de la Inmunidad

para la presentacin de antgenos a los linfoci


tos T, y salen a la superficie unidos a ppfidos
de protenas que han sido fagocitadas o pinocitadas por la clula.
Es de comprender entonces que los linfoci
tos T CDS positivos pueden interactuar con ca
si cualquier clula del organismo y pueden re
conocer y reaccionar con cualquiera de ellas
que est sintetizando protenas no propias, co
mo pueden ser las protenas de un virus. La
funcin de estos linfocitos es principalm ente
citotxica, pero tambin producen factores de
colaboracin y regulacin. T am bin en esta
subpoblacin se ha determinado la presencia de
funcin supresora, muy discutida en este mo
mento.
Por el contrario, los linfocitos CD4-I- slo
pueden interactuar con clulas presentadoras de
antgeno y reconocen y reaccionan contra ant
genos que hayan sido internalizados y procesa
dos previamente por una de ellas. Esta pobla
cin CD4-H no tiene en general funcin efectora
directa sino que produce factores solubles de
colaboracin y constituyen la poblacin de Th.
No se han encontrado diferencias entre los
linfocitos CD4+ vrgenes, es decir entre los que
atin no han encontrado a su antgeno. Pero en
tre los Th previamente sensibilizados o de me
moria, pueden reconocerse dos subpoblaciones:
los Thl y los Th2, que se diferencian por la
concentracin en que expresan un biotipo de la
molcula CD45. No hay acuerdo en si los lin
focitos Th estn precomprometidos para dife
renciarse a una de estas dos subpoblaciones an
tes de la estimulacin por el antgeno, pero evi
dencias recientes apuntan a que el m icroam
biente y las seales que reciben al ser estimula
dos por el antgeno son esenciales para que se
conviertan en una u otra subpoblacin luego de
su primer contacto con el mismo (vase cap.
18). Sea cual fuere el origen de estas dos sub
poblaciones, sus funciones son diferentes.
Los Thl son efectores y capaces de llevar a
la agresin: al ser estimulados por el antgeno
producen y secretan al medio una serie de lin
foquinas, cuyo efecto es activar a los macrfa
gos y aumentar su capacidad citoltica, lo que
da por resultado una reaccin inflamatoria cr
nica, cuyo exponente ms tpico es la hipersensiblidad tarda. Por el contrario, los Th2, al ser
estimulados, producen y secretan al medio una
serie de interleuquinas, cuya funcin es colabo
rar con los linfocitos B, lo que da por resultado
una respuesta humoral. Adems, ambas supoblaciones pueden ser tambin regulatorias e in
cluso citotxicas.
Como se ver en detalle en otros captulos,
los linfocitos T ejercen realmente un nmero
grande de funciones muy diferentes y son, ver
daderamente, directores de la orquesta inmuno-

lgica. Lo que no es real es dividirlos, como se


hace muy a menudo, en subpoblaciones funcio
nalmente rgidas, y atribuir a los CD8-H las fun
ciones citotxicas y supresoras y a los CD4, las
de colaboracin e hipersensibilidad tarda, pues
todas estas funciones son influenciables por las
seales que va recibiendo cada linfocito T du
rante su larga vida.
Linfocitos no-T no-B
Adems de las dos grandes poblaciones de
linfocitos T y B, existe otra poblacin de linfo
citos que no presenta molculas superficiales
propias de los linfocitos T ni de los B. Estos
linfocitos nulos no pertenecen al sistema in
mune especfico, pues no tienen receptores pa
ra el antgeno, por lo que no se los puede consi
derar funcionalmente como linfocitos propia
mente dichos, sino que son clulas pertenecien
tes a los sistemas inespecficos de proteccin.
Estas clulas son adems distinguibles morfo
lgicamente de los linfocitos especficos, pues
son ms grandes que ellos y presentan granula
ciones en su citoplasma, por lo que se los ha
llamado linfocitos grandes granulares (LGL).
Su funcin es principalm ente citotxica: son
las encargadas de la citotoxicidad espontnea,
es decir, son las clulas citotxicas naturales o
NK y tambin ejercen funcin de citotoxicidad
celular anticuerpo dependiente (vase cap. 21).
Clulas de la lnea monocito-macrfago
Los linfocitos T y B son las nicas clulas
capaces de reconocer y distinguir entre s a los
diferentes antgenos y de reaccionar contra
ellos, es decir, son las nicas clulas especfi
cas. Pero para ejercer su funcin inmune nece
sitan de la colaboracin de otras clulas, tanto
en la fase aferente de la respuesta como en su
fase eferente o efectora. Las principales clulas
que colaboran con ellos son las de la lnea monocito-m acrfago, pertenecientes al llam ado
sistema reticuloendotelial.
Estas clulas tambin se originan en la m
dula, a partir de clulas troncales, que por dife
renciacin producen monocitos que salen a la
circulacin sangunea (vase cap. 2, fig. 2-1).
Estos abandonan la sangre y, en los diferentes
tejidos, se diferencian tomando formas distin
tas pero manteniendo, en general, funciones si
milares. Una gran proporcin se diferencia a
macrfagos residentes (por ej., macrfagos al
veolares en el pulmn, clulas de Kupffer en el
hgado), de vida larga, con funcin macrofgi
ca pero que, como ya se dijo, no intervienen
activamente en la presentacin de antgenos y
no expresan normalmente antgenos de histo
compatibilidad de clase II.

Bases celulares de la respuesta inmune


Los macrfagos propiamente dichos son c
lulas migratorias que se encuentran en todo el
tejido conectivo, en especial rodeando la m em
brana basal de los pequeos vasos sanguneos;
como ya se mencion, se encuentran tambin
en los rganos linfoides primarios y secunda
rios. Estas clulas tienen vida larga y presentan
un retculo endoplsmico bien desarrollado y
m itocondrias. Una proporcin im portante de
estas clulas expresa antgenos de histocompa
tibilidad de clase II y son capaces de presentar
antgenos a los linfocitos Th. Tambin ejercen
funciones efectoras, pues son fagocticos y
pueden lisar la m ayora de las partculas que
han ingerido. Como veremos en otro captulo,
son activados por las linfoquinas de los hnfoci
tos T hl, lo que los hace mucho ms activos en
su funcin ltica.
En otros tejidos, los monocitos se diferen
cian en otros tipos celulares: clulas de Langer
hans en la piel, clulas veladas en la linfa y c
lulas dendrticas de los ganghos, que ya fueron
mencionadas. En los glomrulos renales, cons
tituyen las clulas mesangiales, en el sistema
nervioso central, la m icroglia y en el tejido
seo, los osteoclastos.
Todas estas clulas tienen caractersticas su
perficiales propias, reconocibles por anticuer
pos monoclonales dirigidos contra sus molcu
las de superficie y, adems de los antgenos de
histocompatibilidad de clase I y II, expresan re
ceptores comunes, funcionalmente muy im por
tantes, como son los receptores para el Ec de
las Igs y para el C3b del complemento. Estos
receptores, que actan sinergsticamente, p er
miten la fijacin de partculas opzonizadas so
bre su superficie, lo cual produce un importan
te aumento de su capacidad fagoctica.
Fagocitosis y lisis
La fagocitosis es un mecanismo inespecfico
de defensa, pero es a menudo el primer paso
que llevar a la iniciacin de una respuesta in
mune. Es una funcin ejercida por los macrfa
gos y tambin por los leucocitos polimorfonu
cleares o neutrfilos. Estos ltimos son clulas
tambin provenientes de la mdula, pero son de
vida corta y no expresan antgenos de h isto
compatibilidad de clase II, por lo cual no ejer
cen funcin de presentacin antignica. Tienen
abundante cantidad de glucgeno y poseen tres
tipos de grnulos: los primarios o azurfilos,
que contienen m ielopero x id asa, liso zim a y
otras protenas catinicas; los secundarios, que
poseen lactoferrina y lisozima, y los terciarios,
parecidos a los hsosomas convencionales, que
contienen hidrolasas cidas.
Tanto los macrfagos como los neutrfilos
ingieren partculas no solubles, no por recono

43

cerlas como antgenos extraos, sino en forma


mecnica, al envolverlas con sus seudopodios.
La fagocitosis es ms eficiente si, por alguna ra
zn, la adherencia entre la membrana del fago
cito y la partcula se ve aumentada. Esto puede
suceder por cargas elctricas diferentes y com
plementarias y, muy especialmente, cuando la
partcula est recubierta por Igs y/o C3b; los fa
gocitos, que tienen receptores que ligan ambas
sustancias, se pegan en ellas, con lo cual la ad
herencia de la partcula est asegurada.
La partcula adherida a la membrana celular
es rodeada por los seudopodios de la clula,
que la abrazan y terminan unindose entre s,
dejando englobada la partcula en un fagosoma,
dentro del citoplasma. La fagocitosis de part
culas viables, como las bacterias, es seguida
muy a menudo (pero no siempre) de lisis. Esta
se lleva a cabo por dos mecanismos. Por una
parte, los grnulos se unen al fagosoma, que
pasa a convertirse en un fagolisosoma, en el
cual vuelcan sus enzim as preformadas. Estas
enzimas tienen accin bactericida o hacteriosttica, sobre todo a pH cido, y tienen tam bin
accin proteoltica, por lo que se digieren los
microorganismos muertos. Este mecanismo no
es oxgeno dependiente.
Por otra parte, la ingestin de una partcula
aumenta la actividad de la va de las hexosas
monofosfato, lo que genera NADPH, el cual,
en ltima instancia, reduce el citocromo b245
propio de la membrana plasmtica, con un au
mento explosivo del consumo de oxgeno, co
nocido como estallido metablico. Este oxge
no se convierte en anin superxido, perxido
de hidrgeno, o libre o naciente y radicales hi
droxilo, todos ellos de potente accin m icrobi
cida. Adems, la mieloperoxidasa acta sobre
el perxido y sobre iones haluro, dando como
resultado un sistem a halogenante de p otente
accin bactericida. Finalmente, el consumo de
iones hidrgeno eleva el pH de manera que se
permite la funcin ptima de las protenas canicas de los grnulos (vase cap. 21).
Ambos mecanismos, oxgeno dependiente e
independiente, dan por resultado la lisis de las
bacterias fagocitadas, constituyendo as un im
portante mecanismo de defensa inespecfico.
Interaccin con el sistema inmune especfico
Si bien el sistema inmune especfico es filogenticamente ms avanzado que todos los sis
temas inespecficos de defensa, al igual que en
otros casos de la evolucin, por ejemplo el sis
tem a nervioso central, el sistem a n u ev o no
reemplaz al ms antiguo sino que pas a ac
tuar en ntimo acuerdo con l.
En la rama aferente de la respuesta inmune,
las clulas fagocticas tienen un importante pa-

44

Aspectos bsicos de la Inmunidad

pe, no slo en la eliminacin del exceso de ant


geno y su digestin, sino tambin en la produc
cin de factores quimiotcticos e inflamatorios,
que acumulan clulas especficas en el sio de
entrada del agente extrao. Adems, la funcin
de presentacin antignica de los macrfagos a
los linfocitos T es esencial para la iniciacin de
una respuesta inmune T, sin la cual la respuesta
humoral tampoco puede existir.
En la rama efectora de la respuesta inmune
tambin juegan los fagocitos un papel esencial
y son muchas veces los encargados de eliminar
al invasor que ha sido marcado como blanco
por los anticuerpos. Einalmente, la acum ula
cin y la activacin de los macrfagos, con au
mento de su poder ltico, es el resultado de una
reaccin de inmunidad mediada por los linfoci
tos T hl.
Todo esto ejemplifica una vez ms la com
pleja relacin intercelular que implica una res
puesta inmune, pues abarca no slo las clulas
especficas sino tambin los sistemas inespec
ficos.
DETECCIN E INDIVIDUALIZACIN
DE LAS CLULAS QUE COMPONEN
EL SISTEMA INMUNE
La inmunologa, sobre todo en sus aspectos
celulares, es una ciencia muy joven y en cons
tante expansin, que ha estado durante muchos
aos muy atrasada con respecto a otras ramas
de la fisiologa y la biologa. Este atraso se de
bi, en gran parte, a las dificultades para identi
ficar diferentes poblaciones de linfocitos que,
pese a parecer todos iguales, cumplen funcio
nes distintas. Adems, el sistem a inm une no
cuenta con un rgano fijo, como casi todos los
otros sistemas de un individuo, sino que est
repartido por diferentes regiones del vertebra
do. Para terminar de hacer difciles las cosas,
las clulas que componen el sistem a inmune
muestran una tendencia a la migracin no com
parable con la de ninguna otra clula, pues pa
san de los rganos primarios a la sangre, al r
gano secundario que les corresponde, a la linfa,
a la sangre, a un tejido o nuevamente al rgano
secundario, etc., en una sucesin constante y
mediante vas y sistemas regulatorios no todos
completamente conocidos. Por otra parte, son
capaces de cam biar su m igracin fisiolgica
habitual obedeciendo a factores quimiotcticos
que se producen en zonas de inflamacin. Nin
guna de estas migraciones es al azar, sino que
van siendo reguladas y dirigidas por las mol
culas superficiales de cada linfocito y por las
m olculas presentes en cada uno de los microambientes para los que est comprometido
el linfocito.

Desde hace muchos aos se conoce la exis


tencia de factores protectores en el suero, los
anticuerpos, y de otras reaccioties inmunes no
transferibles por el suero. Pero para conocer la
base de la dualidad del sistema inmune, debi
recurrirse a la ablacin de rganos primarios de
animales inmunolgicamente inmaduros: el ti
mo en ratones recin nacidos y la bursa de em
briones de pollos. Esto dio lugar a un gran
avance, pues permiti el estudio de animales T
o B privos, pero tambin indujo a confusiones,
porque ni todos los vertebrados parecen tener
rganos equivalentes a la bursa de Eabricius, ni
todos nacen con su sistema T inmaduro.
Otro avance muy importante fue la deteccin
de un aloantgeno, presente en el cerebro y en
los linfocitos T de los ratones, que fuera deno
m inado 0 (theta) y actualm ente es llam ado
Thy. 1, que permiti identificar los linfocitos T
murinos mediante inmunofluorescencia. Ade
ms, con anticuerpos anti-Thy.l ms comple
mento, pudieron prepararse poblaciones despro
vistas de linfocitos T, lo que permiti trabajar in
vitro o inyectar ratones previamente irradiados
con poblaciones desprovistas de linfocitos T ; de
esta manera pudo descubrirse la necesidad de
colaboracin entre los linfocitos T y B.
Pero tambin la necesidad de trabajar in vi
tro para establecer la mayora de los conoci
mientos sobre la respuesta inmune ha trado
otros inconvenientes a la inmunologa. En la
mayora de los casos no se tiene en cuenta el
resto del organismo y la interrelacin del siste
ma inmune con los otros sistemas del indivi
duo, muy especialmente con el sistema nervio
so central y con el endocrino. Estas interaccio
nes tien en gran im p o rtan c ia en la fu n ci n
homeosttica del sistema inmune y recin en
estos ltimos aos se estn empezando a cono
cer (vase cap. 17, 2da. parte).
La identificacin de las subpoblaciones lin
foides es til, no slo para el m ejor conoci
miento de la maduracin, diferenciacin, fun
ciones y otras caractersticas fisiolgicas del
sistema inmune, sino tambin desde un punto
de vista aplicado o clnico, para el diagnstico
y pronstico de enfermedades linfoproliferativas o con compromiso inmunolgico.
En una primera instancia, se utilizaron sue
ros inmunes, generalmente producidos en co
nejos o cabras, dirigidos contra molculas ais
ladas de la superficie de los linfocitos o, en el
caso de las Igs, del suero sanguneo. Luego se
pas a la produccin de anticuerpos monoclo
nales, generalmente a partir de esplenocitos de
ratones inyectados con clulas enteras de esa u
otra especie. Los diferentes grupos que produ
jeron estos anticuerpos intercam biaron infor
macin, y esto permiti la identificacin de una
serie de grupos o acmulos (clusters) de mono-

Bases celulares de la respuesta inmune


clnales dirigidos contra una misma estructura
de diferenciacin, lo que defini las diferentes
molculas superficiales, que llevan ahora, en el
hombre y otras especies pero no en el ratn, el
nombre de CD (cluster of differentiation) se
guido de un ntimero. A ctualm ente se cuenta
con una batera de anticuerpos monoclonales
contra los CD humanos. En el Apndice del
cap. 2, se da la lista de los CD conocidos hasta
hoy y sus funciones.
Para individualizar cada clula se las puede
incubar con el anticuerpo marcado con sustan
cias fluorescentes y luego observarlas en m i
croscopio con luz ultravioleta. Tambin se pue
de usar este mismo tipo de reactivo para apre
ciar las proporciones de cada subpoblacin en
una suspensin dada mediante el uso del cito
fluormetro. Este mtodo permite tambin te
ir una clula con dos o ms sustancias dife
rentes y medir simultneamente otras caracte
rsticas de cada una de las clulas de la pobla
cin, como tamao, cantidad de ADN, etc., lo
que puede aportar mucha informacin sobre la
poblacin celular estudiada. Adems, permite
separar subpoblaciones por diferencias en bri
llo, equivalente a la concentracin de la mol
cula marcada en la superficie celular, u otra ca
racterstica.
Tambin se puede aislar una poblacin m e
diante el uso de estos anticuerpos absorbidos
sobre superficies, ya sea fondos de recipientes
o grnulos, sobre las que se pegarn las clulas
con la molcula en cuestin, y pueden ser res
catadas en pureza. Por fin, se puede eliminar
una poblacin con esos mism os anticuerpos
ms complemento.
La identificacin y aislamiento de los linfo
citos B se hace, principalmente, por la Ig de la
membrana; dado que los otros linfocitos no sin
tetizan ni expresan Ig superficial, su presencia
es el mejor marcador para reconocer los linfo
citos B. Para identificarlos, los mejores m to
dos estn basados en la incubacin de pobla
ciones mixtas, viables o fijadas, con anticuer
pos anti-Ig marcados con sustancias flu o res
centes, que luego pueden ser detectadas por
microscopia de fluorescencia o citofluorome
tra. Como se comprende, para visualizar los
linfocitos B se deben incubar con anti-Ig de
modo que no se formen casquetes, ya sea im pi
diendo el metabolismo celular con temperatura
baja o antimetabolitos, o fijando el sistema de
microtbulos y microfilamentos celulares.
Mediante estas tcnicas no slo se pueden
identificar los hnfocitos B, sino que se pueden
determinar las clases de Igs que sintetizan y ex
presan, utilizando anticuerpos, monoclonales o
polielonales, especficos para una clase de Ig de
la especie. As se pudo determinar la secuencia
de expresin de diferentes clases de g durante

45

la maduracin de los linfocitos B y su diferen


ciacin a plasmocitos o linfocitos B de m em o
ria. M s an, utilizando anticuerpos dirigidos
contra dos o ms clases de Igs, marcados con
diferentes sustancias, se pudo demostrar la exis
tencia de clulas doble y triplemente positivas,
lo cual llev a la demostracin del fenmeno de
splicing alternativo en los linfocitos.
La identificacin de los linfocitos T en los
ratones se hizo mediante el uso de sueros antiT hy.l, como se dijo antes. En el hombre no se
encontr un antisuero similar y durante mucho
tiempo se utihz la particular tendencia a la ad
hesin a otras clulas que tienen los linfocitos
T, que forman rosetas con los eritrocitos de
carnero; estas rosetas permitieron tam bin la
purificacin de poblaciones T hum anas m e
diante centrifugacin en gradientes. Hoy se sa
be que estas rosetas se hacen a travs del C D 2.
Actualmente, para identificar, aislar o eliminar
poblaciones de linfocitos T humanos, se utili
zan anticuerpos dirigidos contra molculas co
munes a todos los hnfocitos T (anti-pan T), co
mo CD2 o CDS. La identificacin de la subpo
blacin Th se hace, generalm ente, con anti
CD4 y de la poblacin citotxica/supresora,
con anti CDS.
Aqu tambin, la medicin de las proporcio
nes relativas de las subpoblaciones T puede te
ner gran importancia clnica. Por ejemplo, un
d e sc e n s o en la re la c i n de lin fo c ito s
CD4+/CD8+ es ndice de avance de la enferm e
dad en el SIDA.
Otras molculas superficiales
Todos los hnfocitos expresan molculas de
histocompatibilidad de Clase I en alta concen
tracin y otras molculas sumamente im portan
tes para su funcin inmune. Los linfocitos B
expresan tambin antgenos de histocom patibi
lidad de clase 11; estos ltimos, que aumentan
con la estimulacin antignica, permiten al lin
focito B presentar antgenos al linfocito T, co
mo se indica en el captulo 10. Los linfocitos T
no expresan, en reposo, antgenos de clase II,
pero pueden hacerlo cuando estn activados.
La m ayor parte de los linfocitos B tien en
tambin en su superficie receptores capaces de
ligar la regin Ec de las Igs modificadas por
unin con el antgeno. Su funcin est relacio
nada principalm ente con la regulacin d e la
respuesta inmune. Los linfocitos T activados
tam bin expresan a veces receptores para Fe.
Aproximadamente un 50 a 75% de los linfoci
tos B expresan receptores para la fraccin C3b
del com plem ento, de tipo CRI y CR2, cuya
funcin est relacionada con la regulacin.
La identificacin de estas molculas, que se
realizaba mediante la formacin de rosetas con

46

Aspectos bsicos de la inmunidad

eritrocitos recubiertos con anticuerpo (rosetas


EA) o con anticuerpo y las primeras fracciones
del complemento (rosetas EAC), hoy se hace
con anticuerpos monoclonales dirigidos contra
estos receptores.
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view o f Im m unology, 1 0 ,7 5 9 , 1992.
Jorggensen, I. L. y col. M o lecu lar com ponents o f T-C ell
reco g n itio n . A n n u al R eview o f im m u n o lo g y , 10, 835,
1992.
Janew ay, Ch. A. T he T. Cell receptor as a m ulticom ponent
signalling m achine: CD 4/C D 8 coreceptors and CD45 in
T cell activatio n . A nnual R eview o f Im m unology, 10,
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M acL ennan, I. C. M . G erm inal Centers. A nnual R eview o f
Im m unology, 12, 117, 1994.
Pfeffer, K., M ak, T. W . Lym phocyte ontogeny and activ a
tion in gene targeted mice. A nnual Review o f Im m unology, 12, 367, 1994.
Robey, E., Fow lkes, B. J. S elective events in T cell developmenL A nnual R eview o f Im m unology, 12, 635, 1994.

Antgenos

RICARDO MARGNI

GENERALIDADES
Son antgenos las sustancias que introducidas
en el organismo de un vertebrado adulto indu
cen una respuesta inmune, dando lugar a la pro
duccin de otras sustancias denominadas anti
cuerpos o a la proliferacin de clulas sensibili
zadas con las que especficamente reaccionan.
La palabra antgeno, que significa formador
de anticuerpos, es una contraccin de an/somatgeno, vocablo propuesto por Deutsch en 1899.
Por definicin, antgeno significa capacidad
para inducir la produccin de anticuerpos y es
pecificidad para reaccionar con ellos. En la na
turaleza existen ~o pueden obtenerse a partir de
ciertas sustancias- fracciones capaces de reac
cionar con los anticuerpos (especificidad), pero
no de engendrarlos (poder inm unognico) y
que Landsteiner,^ para identificarlas, las deno
min haptenos. Estos a su vez pueden ser hap
tenos complejos cuando la reaccin haptenoanticuerpo efectuada in vitro es visible, o hap
tenos simples cuando ella no origina un fen
meno deteetable a simple vista.
A la zona restringida de la molcula antig
nica que determina la especificidad se la deno
mina determinante antignico. Dado que pue
den existir varios determinantes antignieos di
ferentes en una molcula, la inoculacin de s
ta originar en el receptor anticuerpos con dis
tinta especificidad (fig. 4-1).
Un hapteno o grupo haptnico definido, tal
como:
O^N

C1

0
NH,

d)

puede conjugarse covalentemente a una m ol


cula proteica que, al ser inoculada a un Verte
brado, induce la formacin de anticuerpos con
especificidad para aqul. Un hapteno sim ple,
dentro de la molcula antignica, constituye un
determinante antignico estructural (vase
fig. 4-2).
En protenas complejas resulta difcil diluci
dar cul es la estructura del determinante anti
gnico. No obstante, estucos llevados a cabo
con protenas de las que se conoce su estructu
ra primaria y terciaria, como la mioglobina, li
sozim a, insulina, nucleasa e sta filo c cic a y
otras, han demostrado que en algunos casos el
determinante antignico est ntimamente rela
cionado con uno o pocos aminocidos c o n ti
guos presentes en la secuencia primaria (deter
m inante continuo), m ientras que en otros es
responsable de la conformacin de una restrin
gida zona de la molcula (determinante confor
macional) (fig. 4-3 1),
Actualmente se sabe que en muchas m acro
m olculas, entre ellas lisozim a de huevo, la
parte del antgeno que interacciona con el sitio
de combinacin del anticuerpo est constituida
por residuos aminoacdicos localizados distan
tes dentro de la secuencia de su estructura p ri
maria pero prximos uno a otros como conse
cuencia de la estructura terciaria o cuaternaria.
Estos determinantes antignieos topogrficos
slo funcionan mientras la molcula conserve
su estructura nativa (fig. 4-3 11). Se los identifi
ca tam bin con la denom inacin de determ incmtes antignieos discontinuos (para m ayor
informacin, vase cap. 5).
Jem e ha propuesto para el sitio, grupo o rea
del determinante antignico el nombre de epitope, y el de epitipo para el conjunto o fam ilia

46

Aspectos bsicos de la inmunidad

eritrocitos recubiertos con anticuerpo (rosetas


EA) o con anticuerpo y las primeras fracciones
del complemento (rosetas EAC), hoy se hace
con anticuerpos monoclonales dirigidos contra
estos receptores.
B IB L IO G R A FA
G eneral
C entner, J., de W eck, A. L. A tlas o f Imm uno-AU ergology.
H ogrefe & H uber Publishers, Bern, 1995. (H ay versin
en castellano.)
Fainboin, L., Satz, M . L.: Introduccin a la Inm unologa
H um ana. 3 edicin. E dicin del autor, B uenos A ires,
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logy, 12, 367, 1994.
Robey, E., Fow lkes, B. I. S elective events in T cell d ev e
lopm ent. A nnual R eview o f Im m unology, 12, 635, 1994.

Antgenos

RICARDO MARGNI

GENERALIDADES
Son antgenos las sustancias que introducidas
en el organismo de un vertebrado adulto indu
cen una respuesta inmune, dando lugar a la pro
duccin de otras sustancias denominadas anti
cuerpos o a la proliferacin de clulas sensibili
zadas con las que especficamente reaccionan.
La palabra antgeno, que significa formador
de anticuerpos, es una contraccin de an/somatgeno, vocablo propuesto por Deutsch en 1899.
Por definicin, antgeno significa capacidad
para inducir la produccin de anticuerpos y es
pecificidad para reaccionar con ellos. En la na
turaleza existen ~o pueden obtenerse a partir de
ciertas sustancias- fracciones capaces de reac
cionar con los anticuerpos (especificidad), pero
no de engendrarlos (poder inm unognico) y
que Landsteiner,^ para identificarlas, las deno
min haptenos. Estos a su vez pueden ser hap
tenos complejos cuando la reaccin haptenoanticuerpo efectuada in vitro es visible, o hap
tenos simples cuando ella no origina un fen
meno detectable a simple vista.
A la zona restringida de la molcula antig
nica que determina la especificidad se la deno
mina determinante antignico. Dado que pue
den existir varios determinantes antignicos di
ferentes en una molcula, la inoculacin de s
ta originar en el receptor anticuerpos con dis
tinta especificidad (fig. 4-1).
Un hapteno o grupo haptnico definido, tal
como:
O^N

C1

0
NH,

d)

puede conjugarse covalentemente a una m ol


cula proteica que, al ser inoculada a un Verte
brado, induce la formacin de anticuerpos con
especificidad para aqul. Un hapteno sim ple,
dentro de la molcula antignica, constituye un
determinante antignico estructural (vase
fig. 4-2).
En protenas complejas resulta difcil diluci
dar cul es la estructura del determinante anti
gnico. No obstante, estudios llevados a cabo
con protenas de las que se conoce su estructu
ra primaria y terciaria, como la mioglobina, li
sozim a, insulina, nucleasa e sta filo c cic a y
otras, han demostrado que en algunos casos el
determinante antignico est ntimamente rela
cionado con uno o pocos aminocidos c o n ti
guos presentes en la secuencia primaria (deter
m inante continuo), m ientras que en otros es
responsable de la conformacin de una restrin
gida zona de la molcula (determinante confor
macional) (fig. 4-3 1).
Actualmente se sabe que en muchas m acro
m olculas, entre ellas lisozim a de huevo, la
parte del antgeno que interacciona con el sitio
de combinacin del anticuerpo est constituida
por residuos aminoacdicos localizados distan
tes dentro de la secuencia de su estructura p ri
maria pero prximos uno a otros como conse
cuencia de la estructura terciaria o cuaternaria.
Estos determinantes antignicos topogrficos
slo funcionan mientras la molcula conserve
su estructura nativa (fig. 4-3 II). Se los identifi
ca tam bin con la denom inacin de determ incmtes antignicos discontinuos (para m ayor
informacin, vase cap. 5).
Jem e ha propuesto para el sitio, grupo o rea
del determinante antignico el nombre de epitope, y el de epitipo para el conjunto o fam ilia

48

Aspectos bsicos de la inm unidad

''
3

inoculacin a
vertebrado
adulto

B = antgeno
poliespecfico
1, 2, y 3 = determinantes
antignicos

Reaccin Ag - Ac

R eaccin Hp - Ac

entre un antgeno monoespecfico y su corres


pondiente anticuerpo

entre el determinan
te antignico y el
anticuerpo originado
por el antgeno monoespectico

a, b, c = anticuerpos
con especificidad para
los determinantes
antignicos 1, 2 y 3
respectivamente

Reaccin Ag - Ac
entre un antgeno poliespecfico y los diferentes
anticuerpos formados

Fig. 4-1. R eacciones antgeno-anticuerpo y iiapteno-anticuerpo.

0,N
.(CH,),

NO,
Hapteno

Determinante antignico

Antgeno

de epitopes relacionados. Al sitio conaplementario de la estructura del determinante antigni


co ubicado en el anticuerpo lo llama paratope.
Esta denominacin resulta litil en algunos ca
sos, como ocurre con los antgenos somticos
de las salmonelas, o con los constituyentes an
tignicos de los hemates correspondientes al
sistema ABO, en que todos poseen un polisido
comiin y slo difieren por la naturaleza del
azijcar no reductor terminal.
Esta nomenclatura ha tenido gran aceptacin
y en estos momentos la mayora de los inm u
nlogos la ha adoptado, identificando el deter
m inante antignico como epitope, cualquiera
que sea su naturaleza.
Los determinantes antignicos o epitopes por
unidad de antgeno, sea sta una tnolcula o
una partcula, varan grandemente, y la periodi
cidad de su repeticin es funcin del nmero
de determinantes antignicos diferentes presen-

Fig. 4-2. R epresentacin esquem tica de una m olcula de


antgeno, su determ inante antignico estructura! y e! grupo
haptm ico.

Antgenos

49

F ig . 4 -3. Estructura hipottica de un fragm ento proteico. Las zonas A y B, deUmitadas por h'neas de puntos, se alan
reas que podran constituir determ inantes antignieos conform acionales, de los que form an parte m uy pocos re sid u o s y
que afectan a una o a las dos cadenas peptdicas. La reduccin del puente S-S de la zona A o el desplegam iento de la B p o
dran hacer perder la especificidad de los determ inantes antignieos all locahzados. La zona C podra corresponder a un
determ inante antignico estructural.

tes en la misma. Se ha comprobado que una


m olcula de ovoalbtim ina posee 30 epitopes
efectivos y 62 epitopes potenciales sobre su su
perficie, cifras que contrastan con las halladas
en una partcula enormemente mayor, un bacilo
tfico, en el que se han calculado 5,6 x 10* epi

F ig . 4 -3 II. L os residuos id e n tifi


cados con crculos rojos dentro de
la zo n a d elim itad a por lneas de
p u n to s, co n stitu y en un d e te rm i
nante anignico topogrfico h ipo
ttico.

topes, los cuales, segtin diferentes iiavestigadores, no se encuentran aislados sobre la superfi
cie bacilar, sino dispuestos en placas. La valen
cia total del antgeno est dada por el nmero
de determ inantes antignieos presentes en la
molcula, expuestos y ocultos. La valencia fu n

50

Aspectos bsicos de la inmunidad

cional corresponde a los determinantes antig


nicos expuestos, capaces de reaccionar directa
mente con los anticuerpos.
Existen ciertos hechos relacionados con la
definicin de antgenos que conviene dejar
aclarados. Sustancias de peso m olecular no
muy elevado pueden ser excretadas rpidamen
te y por esta circunstancia estimular deficiente
m ente la produccin de anticuerpos; pero, si
aqullas son inoculadas junto con adyuvantes,
los resultados pueden m odificarse favorable
mente. Por otra parte, macromolculas que re
nan todas las condiciones para la antigenicidad
pueden ser buenos agentes inmunizantes para
algunos anim ales y m alos para otros, como
ocurre con los polisacridos neum occicos,
que inducen buena respuesta inmunolgica en
el hombre y el ratn, no as en el conejo. He
chos similares suelen ocurrir en animales ino
culados con antgenos para cuyas especificida
des pueden tener cierta tolerancia inmunolgi
ca como consecuencia de poseer antgenos em
parentados, lo que hace que su reactividad sea
escasa o nula.
Por este motivo se prefiere reservar el nom
bre de inmungeno para las sustancias capaces
de inducir respuesta inmune y el de antgeno
para aquellas que interaccionan con los produc
tos de dicha respuesta. No obstante, son trmi
nos que frecuentemente se emplean como sin
nimos.
CARACTERSTICAS DE LAS QUE
DEPENDE LA ANTIGENICIDAD
O CAPACIDAD PARA INDUCIR
RESPUESTA
A qu se debe que ciertas macromolculas
al ser introducidas en el organismo induzcan
respuesta inmune y otras en cambio no tengan
capacidad inmunognica? Para que una sustan
cia pueda actuar como antgeno, aun cuando
ella rena todas las condiciones para la antige
nicidad, es indispensable que su concentracin
sea la ptima cuando se la inocula al husped,
pues pequeas dosis podran ser inefectivas y
un exceso podra actuar como inhibidor.
Tamao molecular
Los antgenos completos son protenas o hi
dratos de carbono, pero para que puedan en
gendrar anticuerpos deben tener un peso mole
cular exageradamente grande, como la albmi
na; 70 kD, globulinas; 150 a 900 kD, polisac
ridos de los neumococos: 150 kD. Se admite
que para que una sustancia pueda actuar como
antgeno, su peso molecular debe ser superior a
10 kD. No obstante ello, hay algunas de peso

m olecular bajo, como el glucagn (P.M. 3,8


kD), y las insulinas (P.M. 6 kO), que inocula
das junto con adyuvantes originan anticuerpos.
Por copulacin de cuplena con isocianato de
fenilo se obtiene un complejo de peso molecu
lar no superior a 4,5 kO, que inoculado a cone
jos da lugar a la formacin de anticuerpos pre
cipitantes.
Los polipptidos de sntesis han sido muy
tiles para los estudios de antigenicidad. Han
sido empleados con tal fin homopolmeros (po
lmeros de un solo aminocido); pequeos pp
tidos de secuencia conocida unidos a bloques
de copolmeros; copolmeros obtenidos al azar,
en los que se conoce su composicin, pero no
su secuencia; copolmeros con multicadenas,
con un pptido funcionando com o colum na
vertebral con sitios de recepcin mltiples a los
que pueden unirse cadenas peptdicas. Han sido
elaborados exclusivamente con D-aminocidos
o L-aminocidos o con mezcla de ambos. Esta
variedad de productos ha servido para tener
una informacin ms acabada de las exigencias
que rigen en la induccin de la respuesta inm u
ne. Se ha comprobado que los polmeros de Daminocidos generalmente no inducen form a
cin de anticuerpos, cosa que hace la mayora
de las preparados con L-aminocidos.
Sela, Maurer, Benacerraf y otros han puesto
en evidencia que polipptidos de sntesis de pe
so molecular aproximado de 4 kD, y aun me
nos, pueden form ar anticuerpos cuando son
inoculados a vertebrados adultos, pero ese peso
molecular debe ir asociado a una estructura es
pacial determinada, ya que algunos polippti
dos hneales de bajo peso molecular no forman
anticuerpos, en tanto que lo hacen los ramifica
dos. Por otra parte, existen protenas de peso
molecular elevado, como la histona, las protaminas, la gelatina, etctera, que normalmente
no inducen la produccin de anticuerpos.
Grupos qumicos activos
No slo el tam ao m olecular es un factor
preponderante en la capacidad inmunitaria de
las molculas antignicas, sino que muchas de
ellas, fundamentalmente las protenas, necesi
tan de la preponderancia de ciertos radicales,
sobre todo los cidos, para que ella se cumpla.
La no antigenicidad de la gelatina, cuando se
la inyecta en solucin sin adyuvantes, se debe
ra a la ausencia de aminocidos tales como la
tirosina y la fenilalanina, que seran factores
preponderantes. Protenas copuladas con los
diazoderivados de los cidos p-am inobencenoarsnico (cido arsalnico) y p-aminobencenosulfnico (cido sulfanlico), cuando son
inoculadas, originan anticuerpos especficos
para dichos radicales, lo que nos habla de la

Antgenos
importancia de stos en la estructura de la m o
lcula. Un hecho anlogo ocurre con protenas
a las que se les han fijado grupos dinitrobence
no o trinitrobenceno.
Grupos bsicos fuertes dentro de la molcula
proteica tienen una accin efectiva, al igual que
los grupos cidos, en la direccin de la especi
ficidad. Otro prerrequisito para la antigenicidad
es la rigidez en la estructura para los grupos de
terminantes; la alta especificidad de los grupos
aromticos en los antgenos de sntesis obteni
dos por diazotacin y copulacin es debida pre
cisamente a la rigidez del benceno. En cambio,
la inactividad com o grupo antignico de las
grandes molculas de los cidos grasos se debe
a que las largas cadenas de los hidrocarburos
son fcilmente distorsionadas y sufren altera
ciones constantes.
Con respecto a la de los determinantes anti
gnicos de los polisacridos, generalmente es
consecuencia de combinaciones de dos o ms
unidades de hexosas. Ha podido establecerse
que en el dextrano los grupos determ inantes
consisten en unidades de, por lo menos, tres
aD-glucopiranosa, las que se repiten. Para es
tos antgenos, el determ inante antignico d e
pender de la secuencia de los azcares que lo
componen y su modo de unin, ms que de su
conformacin.
Posicin de los radicales
en el ncleo aromtico
Cuando el determinante de un antgeno es un
grupo aromtico sin radicales cidos, la especi
ficidad es menos precisa que en estos ltimos
casos y depende en gran parte de la posicin
que los diferentes radicales ocupan en dicho
ncleo. Si se inoculan conejos con un antgeno
obtenido por diazotacin de la p-cloroanilina y
copulacin con albmina bovina, se obtienen
anticuerpos especficos para la p-cloroanilina,
pero que tambin reaccionan con la p-nitrosoanilina y la p-metilanilina. Esta especificidad, en
cambio, est enormemente reducida o anulada
cuando se vara la posicin del radical determi
nante, como ocurre al hacer reaccionar estos

anticuerpos con la o-cloroanilina, m-cloroanilina o cualquiera de los otros derivados m encio


nados en posicin orto y meta. En estos casos
las reacciones cruzadas son menos m arcadas
que las o b servadas cuando los an ticu erp o s
reaccionan con los otros derivados, con radica
les diferentes, pero ubicados en la misma posi
cin del ncleo aromtico (cuadro 4-1).
Influencia de la estructura espacial
del determinante antignico
Ya hemos visto en el caso anterior la im por
tancia que tiene la posicin de un determinado
radical o grupo aromtico con respecto a la es
pecificidad, lo que nos est indicando que la
posicin de stos en el espacio es significativa
para aqulla. Landsteiner pudo diferenciar serolgicam ente los cidos D- y L-paminobenzoilfenilaminoactico.
Del mismo modo, copulando con protenas
los cidos levo, dextro y meso-p-aminotartranlico e inoculndolos a conejos, se obtienen anti
cuerpos capaces de reaccionar especficamente
con los respectivos cidos tu-tricos, ya sea uni
dos a la protena a la cual fueron copulados para
transformarlos en antgenos y emplearlos en la
inm unizacin de los conejos, ya sea unidos a
otras seroprotenas de diferente origen animal.
El cuadro 4-2 esquematiza lo expuesto ante
riormente.
Sela y col. demostraron en materia de anti
genicidad la im portancia de los am inocidos
que contienen grupos aromticos y de su posi
cin en las cadenas proteicas. Estos autores,
trabajando con polipptidos de sntesis, p(Tyr,G lu)-pA la-pL ys, pA la-p(T yr-G lu)- -p (L y sAla), han llegado a la conclusin de que, para
los polipptidos lineales y ramificados de peso
molecular 4 kDa, la posicin que el am inoci
do aromtico ocupa en la cadena polipeptdica
es factor preponderante en la antigenicidad. Por
otra parte, han llegado a establecer que p o li
pptidos lineales de ese peso molecular, p o r re
gla general, no son antignicos, en tanto que
los m ism os, como polipptidos ram ificados,
adquieren poder inmunognico. Ello indica que

Cuadro 4-1. Posicin de los radicales en el ncleo aromtico.

cc

ra

'(D
2
N=N ( o

Cl
)
NH2

51

52

Aspectos bsicos de la inmunidad

C u ad ro 4-2. Especificidad inmunolgica de diferentes cidos tartricos


A N T G E N O S
C O O H ^ (R)

H C O H
COOH
A cido ]-tartrico

cido 1-tartrico
cido d-tartrico
cido m -tartrico

ho - - c ^ h

CO O H
A cido d-tartrico

CO O H - (R)
H C OH

H C OH

C O OH
A cido m -tartrico

+++
+

los ncleos aromticos y la posicin espacial


de las cadenas constitutivas de las protenas o
de los determinantes antignieos son factores

------ p (Glu, Tyr)


< ------ p-DL-Ala
= - < - p-Lys

-p-DL-Ala
p (Glu, Tyr)
^ p -L y s

Fig. 4-4. Polipptido.? A y C antignieos. P olipptido B:


no antignico.

(R)

H-^C^OH

-O C H
Suero inm une
contra

CO O H

de suma importancia en lo relativo a la antige


nicidad de la sustancia. Resultados similares
con otros tipos de experiencias han sido obteni
dos por otros investigadores, entre ellos Maurer
y Benacerraf.
Mediante el empleo de copolmeros con multicadenas se ha podido comprobar que es indis
pensable que la regin antignicamente impor
tante de la molcula sea accesible al mecanis
mo que induce la formacin de los anticuerpos,
pero ello no significa que dicha regin antigni
ca deba encontrarse al final de las cadenas pep
tdicas, segn se deduce del siguiente hecho ex
perim ental. Se prepararon copolm eros con
m ulticadenas de la mism a composicin y un
pptido de polilisina como columna vertebral.
En un caso las cadenas laterales unidas a la lisina fueron polialanina, con sustituciones termi
nales de poliglutamiltirosina. En el otro fue in
vertido el orden de unin. Slo el primero de
los polmeros fue antignico en el conejo. Se
pudo comprobar adems que, cuando el pptido
que funcionaba como columna vertebral era un
copolmero de lisina y alanina, la unin de la
cadena peptdica p (Glu, Tyr)-pAla le confera
antigenicidad, cosa que no ocurra en el caso
anterior. Ello probablemente se deba al mayor
espacio existente entre los e-aminogrupos de la
lisina a los que se unen las cadenas peptdicas,
lo que permite una mejor exposicin de la re
gin antignicamente importante; esto demues
tra que no necesita ser terminal en todos los ca
sos. La figura 4-4 esquematiza lo expuesto.
Es de hacer notar que lo anteriormente dicho
es vlido cuando se inmuniza con un solo ant
geno o determinante antignico ya que, si se
utilizan varios a la vez, por fenmenos de com
peticin puede estar inhibida la actividad de al
guno de ellos. Esto significa que, al inmunizar
con varios antgenos simultneamente, debe re
gularse su concentracin para conseguir buena
respuesta inmune para todos.

Antgenos
Hidrofliddad y prediccin de epitopes
El desconocim iento de la estructura trid i
mensional de muchas protenas ha hecho que
se buscaran otros parm etros que perm iten
predecir si las superficies expuestas de estas
m olculas hacen que sean antignicas o no.
Dado que los sitios hidroflicos son general
mente hallados en la superficie de la protena
expuesta al agua, se considera que los mismos
podran ser blanco de los anticuerpos. Los
anlisis de numerosas protenas han dem ostra
do que estos sitios son componentes de deter
minantes antignicos. Sin embargo, una gran
parte de los sitios de la superficie son no pola
res, y en varios casos se ha demostrado que re
siduos aromticos e hidrofbicos forman parte
del epitope.
Prediccin de epitopes
El inters de predecir y definir sitios antig
nicos de una protena comenz en parte con la
produccin de vacunas sintticas.
Los mayores avances sobre los conocimien
tos del sitio antignico fueron realizados con
siderando la carga y polaridad de los am ino
cidos involucrados. Esto no descarta que inte
racciones hidrofbicas puedan estabilizar la
unin antgeno-anticuerpo (Ag-Ac). Sin em
bargo, es probable que la naturaleza direccional carga-carga y otras interacciones polares
(p. ej., uniones hidrgeno) contribuyan como

F ig. 4-5. P erfil de hidrofilicidad de


la m ioglobina. A daptada de V an Reg e n m o rte l M . H . V. I m m u n o lo g y
Today, 10:266, 1989.

53

elemento crtico de la especificidad geomtrica


de los sitios de unin. Los residuos polares son
necesarios en las interacciones proteicas; los
grupos no polares ayudan, pero no son absolu
tamente necesarios.
La reciente literatura indica que muchos la
boratorios, para localizar sitios antignicos so
bre una protena, se basan en la prediccin de
sitios hidroflicos como probables regiones de
alta antigenicidad, lo que puede incluir, ade
ms, consideraciones sobre la estructura se
cundaria (p. ej., a-hlice, hoja plegada en p,
curvaturas en (3).
Mtodos para determinar hidrofilicidad
y estructura secundaria
Es apropiado determinar simultneamente la
prediccin de la estructura secundaria e hidrofi
licidad, ya que la estructura secundaria depen
de de la hidrofbica e hidroflica de los seg
mentos de aminocidos considerados.
La representacin del perfil hidroflico de
una protena se ha estandarizado con una escala
en la que se indican las secuencias hidroflicas
hacia arriba y las hidrofbicas hacia abajo (fig.
4-5). Si se superponen las secuencias secunda
rias con la hidrofilicidad/hidrofobicidad se ob
serva una significativa correlacin entre ambas.
Los valles profundos generalmente ocurren en
las zonas a-hlices ms largas o cerca de las
zonas de hojas plegadas en |3, las que constitu
yen el fino paquete hidrofgico del centro de la

100

50

Aminocidos

54

Aspectos bsicos de la Inmunidad

molcula. Las a-hlices ms cortas son las zo


nas ms expuestas de la molcula y, por lo tan
to, estn relacionadas con los sitios antignicos
de la misma. Para los estudios de prediccin de
epitopes en base a estructuras secundarias, se
han elaborado mtodos com putacionales que
usan la informacin proveniente de unas pocas
protenas bien definidas y en las que se encuen
tran determinadas las escalas de giro o torsin.
Un giro es la secuencia de la columna vertebral
de un polipptido involucrada en el cambio de
direccin de la cadena principal.
Papel de la movilidad atmica en la
antigenicidad e inmunogenicidad
de protenas
El mecanismo de la especificidad depende
de la complementariedad entre el epitope anti
gnico y el sitio de combinacin o paratope del
anticuerpo, estando comprometidos en ello los
puentes de hidrgeno, uniones polares, fuerzas
de Van der Walls, etc., que puedan originarse
entre ambos (vase cap. 5). Su eficiencia de
pende de un buen acomodamiento entre ambas
estructuras.
Para determinantes antignicos conformacio
nales o discontinuos (topogrficos) es difcil
determinar si la movilidad estructural que invo
lucra residuos distantes, ubicados en la secuen
cia aminoacdica, y que pueden diferir signifi
cativamente en la movilidad relativa, juega un
papel im portante en la determ inacin de la
complementariedad de la interaccin antgenoanticuerpo. Incluso, en este caso, el desplaza
miento de alguno/s de los residuos comprome
tidos puede dar lugar a cambios en la superficie
de contacto originada por los residuos vecinos.
En el caso de los determ inantes antignicos
contiguos (secuencia continuada de un niimero
determinado de residuos), la interpretacin de
la movilizacin local en el mencionado fen
meno es menos ambigua.
La informacin sobre movilidad relativa de
diferentes tomos en protenas, llamado factor
de temperatura atmica, proviene de estructu
ras moleculares refinadas, y es sumamente til
para entender aspectos dinmicos de estructu
ras proteicas, en especial acerca de la flexibili
dad de residuos aminoacdicos individuales y
elementos estructurales. Han sido muy tiles en
este sentido estudios de difraccin de rayos X
desarrollados con protenas cristalizadas.
Esos factores de temperatura atmica indivi
duales no representan diferencias trmicas lo
cales dentro de la molcula, sino que son lla
mados as por la temperatura dependiente de la
velocidad del movimiento atmico y la corres
pondiente energa trmica disponible para su
perar esas barreras de energa potencial confor

macional. Generalmente, cuando se hace refe


rencia a pptidos localizados en regiones de
una protena, se emplea el trmino caliente
para identificar una zona muy mvil (factores
de temperatura altos) y fro para las regiones
bien ordenadas (factores de temperatura bajos).
Los datos provenientes de anticuerpos antipptidos y del mapeo de epitopes proteicos
sugieren que el reconocimiento antignico en
general involucra la interaccin de anticuerpos
con zonas de la protena que puede adoptar for
mas mltiples, distintas de la estructura prome
dio observada por cristalografa de rayos X.
Todo perm ite suponer que la interaccin del
paratope del anticuerpo con el epitope antigni
co es suficiente en primera instancia para el re
conocimiento, pero que luego, debido a la m o
vilidad atmica, hay una induccin a la estruc
tura del epitope que mejor se adapte. En el caso
de las interacciones entre pptidos de protenas
y sus correspondientes anticuerpos, el pptido
se une al paratope cuando su conformacin se
asemeja a la que le corresponde en la protena
nativa, acomodndose luego, como consecuen
cia de movilizacin atmica, a la estructura que
reaccione m ejor con el sitio de combinacin
del anticuerpo.
En este sentido resulta muy interesante que
en diferentes protenas relativamente pequeas,
como la neurotoxina alfa de escorpin, mioglobina, lisozima nativa, citocromo c, etc., las zo
nas de antigenicidad de la molcula (epitopes)
estn relacionados, en su mayora, con regiones
de alta movihdad o cahentes, con factores de
tem peratura atmica altos. En el citocromo c
los residuos 44, 60/62 y 89/92, integrantes de
los tres epitopes detectados en esa molcula,
estn asociados con reas identificadas como
mviles en los factores de temperatura cristalo
grficos. Lo mismo ocurre con los tres epitopes
de la ribonucleasa, en cuya estructura partici
pan los residuos 1/10, 63/75 y 98/104.
No obstante lo expuesto, esa relacin no de
be ser considerada como un hecho general, ya
que en algunos casos no se ha podido demos
trar que dicha relacin exista.
A LT E R A C I N D E LOS A NTG EN OS
Desnaturalizacin
Los antgenos, en su gran mayora protenas,
pueden sufrir alteraciones derivadas de la ac
cin que algunos agentes fsicos o qum icos
pueden ejercer sobre ellos. El proceso por regla
general es progresivo, se cumple en dos o tres
etapas, y determina que esa protena desnatura
lizada, cuando es inoculada a un animal, esti
mule la produccin de anticuerpos, que en al

Antgenos
gunos casos pueden reaccionar con la protena
primitiva, no as en otros. Ello se debe a las
profundas modificaciones que pueden sufrir los
determinantes antignieos originales a causa de
la desnaturalizacin de la protena. La desnatu
ralizacin suele producirse ya sea por trata
miento con cidos y bases fuertes, por calenta
miento a altas temperaturas o por otros proce
dimientos.
Oxidacin
M ediante el empleo de perxidos como el
permanganato de potasio, pueden modificarse
las protenas antignicas, las que una vez ino
culadas al animal dan lugar a la formacin de
anticuerpos, que presentan la particularidad de
no precipitar con otras protenas modificadas,
ni aun con la protena primitiva no oxidada.
Reduccin
Por este mecanismo pueden alterarse algunasprotenas, pero generalmente las modificaciones
son nfimas y los anticuerpos que se originan al
inocular animales exhiben reactividades cruza
das para la protena primitiva y la reducida.
Digestin
Las enzimas, actuando en medio cido o en
medio alcahno, segn sus condiciones ptimas,
pueden producir escisiones profundas en las
molculas proteicas antignicas haciendo que
las mismas se desdoblen en varios polippti
dos, algunos de los cuales, si bien no reaccio
nan aparentemente con el anticuerpo respecti
vo, pueden llegar a neutralizarlo, lo cual indica
que esta digestin muchas veces libera deter
minantes antignieos con capacidad reactiva.
A cidificacin y alcalinizacin
Los cidos y los lcalis pueden reaccionar
con las protenas formando metaprotenas ci
das o alcalinas. La actividad antignica de stas
disminuye menos en las metaprotenas alcahnas que en las cidas, y estas ltimas presentan
frecuente reactividad cruzada con otras prote
nas como consecuencia de las modificaciones
experimentadas.
Desaminacin
La remocin de los grupos aminos libres en
las protenas no produce modificaciones gran
des en la antigenicidad y caractersticas de s
tas. La remocin de ms o menos un tercio de
los aminogrupos de la casena y la albmina de
huevo no provoca alteraciones manifiesta.s.

55

Esterifcacin
La esterifcacin de protenas origina altera
ciones que hacen que pierdan su capacidad pa
ra reaccionar con los anticuerpos producidos
por la protena no modificada.
Por su parte, la acilacin, halogenacin, diazotacin, tratam iento con gas de m o staza y
otros agentes qumicos dan lugar a m odifica
ciones de resultados anlogos. Algunos proce
dimientos fsicos, como los ultrasonidos, pue
den tambin provocar modificaciones y liberar
a veces grupos antignieos de la m olcula no
evidenciados anteriormente.
C O M P O S IC I N Q U M IC A
DE LOS ANTGENOS
La mayor parte de los antgenos son prote
nas de alto peso molecular que contienen algu
nos aminocidos particulares, sobre todo po
seedores de ncleos aromticos, y una estructu
ra espacial definida. Carbohidratos de alto peso
molecular pueden tambin actuar como antge
nos y habitualmente la antigenicidad est dada
por la condensacin de grupos hexosas.
Estas distintas estructuras moleculares hacen
que los antgenos puedan inducir respuesta in
mune directa sobre los linfocitos B (antgenos
T-independientes: polisidos, lipopolisacri
dos, flagelina polim erizada), sin la participa
cin de los linfocitos T, o que necesiten de di
cha cooperacin (antgenos T-dependientes:
antgenos proteicos, haptenos fijados a soportes
proteicos).
Los ratones nude -q u e por padecer de una
aplasia tmica carecen de linfocitos T -, cuando
son inoculados con el antgeno T-dependiente
T N P-protena (protena trinitrofenolada), no
dan respuesta anti-TNP, pero lo hacen si el in
culo es T N P-dextrano (antgeno T -independiente).
Los antgenos T -independientes h a n sido
agrupados en dos categoras; los de tipo I y los
de tipo II.
Los de tipo I son mitognicos de los linfoci
tos B e inducen respuesta policlonal de anti
cuerpos. Forman parte de este grupo los lipo
polisacridos (LPS) componentes de la pared
celular de las bacterias. Estos antgenos son
tam bin activadores de macrfagos e inducen
produccin de interleuquinas (IL -1, IL-6, IL8), factor necrosante de tumores (T N F -a), in
terfern a (IFNa), prostaglandinas, etctera.
Los antgenos de tipo II son polm eros de
polisacridos; poseen secuencias repetidas que
actuando como epitopes favorecen la polimeri
zacin de los receptores antignieos de los lin
focitos B (Ig de membrana), iniciando la trans-

56

Aspectos bsicos de la inmunidad

duccin de seales que llevan a la activacin


de la clula.
Las clulas B purificadas no responden in
vitro a los antgenos tipo IL lo que sugiere la
necesidad de algin requerimiento, aunque mo
desto, de alguna citoquina. Las clulas B en
reposo (resting cells) estim uladas con ant
genos T-independientes de tipo II no secretan
anticuerpos hapteno-especficos o policlonales, pero lo hacen si al medio se le aade IL-2
o IL-5, respectivamente.
Los polisacridos antignicos ms simples
son dextrano y levano, los cuales se obdenen
por accin enzimtica bacteriana sobre sacaro
sa. La dextransucrasa origina el dextrano, y la
levansucrasa, el levano. El primero resulta de
la condensacin de molculas de glucosa y el
segundo, de molculas de fructosa. La unin
glucosdica es principalmente a (1 > 6) en el
dextrano y a (2 ^ 6) en el levano. Hay cepas
microbianas que pueden originar otros tpos de
uniones, tales como a ( l - 3 ) o a ( l
A).
En algunas oportunidades, sustancias sim
ples de bajo peso molecular al ser inoculadas
pueden originar anticuerpos, pero ello no sig
nifica que por s solas tengan antigenicidad si
no que, por combinacin con las protenas pro
pias del husped, se trasform an en antgenos
complejos capaces de dar lugar a la formacin
de anticuerpos. Se ha dado el caso de que el
plasma extrado de una persona y conservado
por el aadido de M erthiolate, cuando le fue
reinoculado produjo un choque anafilctico
despus de la tercera inoculacin. Ello se de
bi a que la sal mercurial orgnica se combin
con las protenas sricas originando un antge
no que sensibiliz en las primeras inoculacio
nes, desencadenando finalm ente la reaccin
alrgica.
Algunas enzimas pueden formar anticuerpos
cuando son inoculadas a vertebrados adultos.
No todas ellas tienen capacidad inmunognica
e incluso, cuando forman anticuerpos, stos
pueden tener especificidad para la funcin en
zimtica, neutralizndola, o para otros deter
minantes antignicos presentes en la molcula,
sin que la actividad enzim tica especfica de
sta se vea modificada.
Los cidos nucleicos (ADN y ARN) pue
den, en determinadas condiciones, inducir la
formacin de anticuerpos, pero generalmente
con reactividad cruzada para algunas de las ba
ses o azcares relacionados.
En general, los cidos nucleicos desnaturali
zados por calentamiento y enfriamiento rpido
con el objeto de romper la doble hlice, fun
cionan m ejor com o inm ungenos, esp ecial
mente cuando se los inocula mezclados con se
roalbm ina bovina metilada, la que funciona
como adyuvante. Al esterificarse los grupos

carboxilos de la albmina, los grupos aminos


rem anentes, positivam ente cargados, forman
complejos con los grupos fosfato cargados ne
gativamente, existentes en los cidos nucleicos
desnaturalizados, los que, por esta circunstan
cia, resultan accesibles a la complejacin.
Los cidos grasos no son antignicos, pero
s lo son algunos lpidos complejos, sobre todo
cuando se encuentran asociados a glcidos y
protenas, como ocurre con algunos constitu
yentes m icrobianos y componentes de m em
branas celulares. La cardiolipina y la citolipina
H son ejemplos al respecto.
A ntgenos m odificados qumicamente
Por diferentes procedimientos es posible in
troducir grupos qumicos en protenas. Muchas
veces los compuestos fijados inducen respues
ta especfica y tienen capacidad para neutrali
zar a los anticuerpos form ados. Son grupos
haptnicos entre los que figuran anillos arom
ticos esteroides, pequeos pptidos, drogas,
etc. Otras veces, el objeto de la modificacin
del antgeno es el de introducir marcas capaces
de ser detectadas, como lo son las sustancias
fluorescentes del tipo de la rodamina y la fluo
rescena, materiales densos al flujo de electro
nes como la ferritina, o tomos radiactivos.
Los fundamentos de los mtodos ms usa
dos para la introduccin de grupos qumicos
en protenas son los siguientes:
Diazotacin y copulacin
Se utiliza para haptenos con grupos -NH li
bres, como los cidos sulfanlico, arsanlico,
paminobenzoico, etc. El producto de diazota
cin se copula a la tirosina, en posicin orto,
pudindolo hacer tambin, en menor grado, a
la lisina e histidina. Vase esquema pg. 57,
parte A.
Dinitrofenil derivados
Se obtienen por reaccin entre el fluordinitrobenceno y los grupos amino libres de las
protenas, en especial los residuos de lisina.
Vase esquema pg. 57, parte B.
Reaccin con carbodiimidas
Su frmula general es RN = C = NR y son
muy usadas para la fijacin, a temperatura am
biente, de grupos carboxilos a aminos libres de
protenas, form ando uniones p eptdicas. El
grupo a fijar debe tener un carboxilo libre o lo
grrselo por oxidacin, como ocurre con el hi
droxilo prim ario de los nuclesidos. V ase
esquema pg. 57, parte C.

Antgenos

CO-NHR;,
Residuo tirosina

Residuo histidina

Residuo lisina
pH 9,5

4 C

OI

OH

\ /

N<^

( h ,),
CHNH-COR,

HNH-COR,

NH,

NO,

A '

CO-NHR,

C O -N H R ,

CO-N H R ,

Na,GO,

P
J
V NO,

4C

NO,

/ \

2)4

P NO,

i; .h n h - c o r ,

Fl

+ NaPi

NH

to^NHR,
ic

(CH

i HNH-COR,
i 0 -N H R ,

Residuo lisina

/
R ,- COOH + R ,- N = C = N - R,-------------

,0 n
\
^ /
N^R,
R 1 -C -0
J-H

NH,
R -C -N -C H ,-P ro te n a + R ^-N -C -N -R g ^
H

H O H

CH,
Protena

57

58

Aspectos bsicos de a inmunidad


Reaccin mixta con anhdridos

Reaccin con isocianatos (R -N =C =0)


y tiocianatos (R-N=C=S)
La fijacin se produce por interaccin con
grupos amino libres de la protena
Fluorescena - N = C = S +
+ H jN - CHj - Protena
Fluorescena - N - C - N - CH, - Protena

I SI I HI

Se la usa para fijar compuestos con grupos


carboxilos a grupos amino libres de protenas.
Aqullos pueden formar parte de la molcula
original o puede introducrselos, por conve
niencia, para la fijacin. Es un mtodo muy
empleado para la unin a protenas de esteroi
des y azcares cidos.

CH,

H aC ^ ^C H 3
CH

GH

COOH
CH,

Tributilamina

CHj

----------
R

0=G C I

0 = C -0 -C = O

+
H jN -C H j-P rotena
OH-

HgC^

;C H - CHj,OH + CO 2+ R - C - N - CH^- Protena


H ,C O

DIFERENTES TIPOS DE A N TG EN O S
Antgenos bacterianos
Cuando una bacteria es inoculada a un ani
mal se forma ms de un anticuerpo y ello se
debe a que un microorganismo debe ser consi
derado com o un verdadero saco antignico
dentro del cual podemos encontrar antgenos
diferentes, cada uno de ellos con capacidad in
munognica y en condiciones, por lo tanto, de
originar anticuerpos. Estos antgenos microbia
nos pueden ser protenas, que frecuentemente
estn situadas en la membrana celular y el es
pacio periplasmtico; hidratos de carbono, que
constituyen sobre todo los antgenos de super
ficie; y en algunos casos particulares, como el
de las enterobacterias, complejos glcido-fosfolipdicos que son verdaderas endotoxinas y
forman parte de la pared celular. No todos los
constituyentes antignieos de una bacteria tie
nen la misma capacidad inmunognica; algu
nos originan anticuerpos con suma facilidad
mientras que otros necesitan concentraciones
altas para conseguirlo y, casi siempre, a un t
tulo o nivel exageradamente bajo.
A los antgenos bacterianos ubicados en el so
ma se los denomina antgenos O, a los de envol
tura o capsulares, antgenos y a los ciliares, H.

Algunos microorganismos producen sustan


cias que son volcadas al medio externo, de ca
rcter proteico y con marcado poder toxignico
para los animales y el hombre. Esas sustancias,
conocidas con el nombre de exotoxinas, inmu
nizan bien, son antgenos eficaces en pequeas
dosis y pueden ser neutralizados totalm ente
por los anticuerpos que ellos originan. Como
muchas bacterias son productoras de enzimas,
la inoculacin de un caldo de cultivo a un ani
mal puede originar anticuerpos para todos los
antgenos mencionados e incluso para las enzi
mas de referencia. El hecho de que un m i
croorganismo sea un complejo antignico ca
paz de originar anticuerpos para cada uno de
ellos hace que muchas veces no se interpreten
correctamente las reacciones serolgicas, sobre
todo las reacciones cruzadas que ocurren cuan
do se enfrentan sueros inmunes logrados por la
inoculacin de un animal con un microorganis
mo diferente al empleado como antgeno de
reaccin. Estas reacciones pueden ocurrir con
microorganismos que poseen cierto grado de
parentesco y se las observa a veces en especies
de ubicacin totalmente diferente.
No todos los m icroorganism os tienen una
estructura similar. En algunos hay predominio
de componentes protenicos, en tanto que en
otros los hidratos de carbono constituyen los

Antgenos
antgenos que permiten la diferenciacin en ti
pos dentro de una especie, tal el caso de los
neum ococos. D istin to s in v estig ad o res han
abordado el estudio de la estructura qumica de
estos polisacridos, preferentemente por m to
dos que utilizan la metilacin. El polisacrido
del neumococo tipo II contiene 7 partes de 2:4
di-o-m etilram nosa, 2:3 di-o-m etilglucosa, 1
parte de cido 2:3:4 tri-o-metilglucurnico y 2
partes de cido 2:3 di-o-m etilglucurnico, lo
que ha hecho que la estructura del mismo sea
considerada como muy ramificada, con una ca
dena principal de molculas de ramnosa y ca
denas laterales de cido glucurnico y glucosa.
Del neumococo tipo VI se ha aislado un oligo
sacrido cristalino que responde a la estructura
galactosil-(l
3)-glucosil-(l - 3)-ramnosil(1 -> 3)-ribitol.
Sobre la base de ensayos de metilacin y ais
lamiento de oligosacridos, se ha propuesto pa
ra el neumococo tipo VIII una unidad estructu
ral que se repite y que responde al siguiente es
quema:
[-4-|3-D -cido g lu c u r n ic o 1 > 4-3-Dglucosa 1 ^ 4-a-D-glucosa 1 -h >4-a-D-galactosa 1 ^ ] .
En otros microorganismos, como los estrep
tococos, los constituyentes poliosdicos no son
superficiales y perm iten la diferenciacin en
grupos. En los estreptococos del grupo A este
polisacrido es de peso molecular 8 kD y est
compuesto por ramnosa y glucosa en la propor
cin 5 a 2, sin capacidad inmunognica y con
caractersticas de hapteno. De estos microorga
nismos, por extracciones cidas, se han obteni
do antgenos protenicos, tipo especficos, ubi
cados superficialmente, conocidos como M y
T. El primero es una protena soluble en alco
hol, termoestable y rpidamente digerible por
enzimas proteolticas, en tanto que el antgeno
T es insoluble en alcohol, resistente a la diges
tin, termolbil en medio cido, pero muy re
sistente al calentamiento en medio alcalino.
De los estafilococos patgenos y no patge
nos se han aislado polisacridos diferenciales.
Ambos tienen aproximadamente un 4% de ni
trgeno, pero se distinguen por su rotacin p
tica especfica y los tipos de azcares obtenidos
por hidrlisis.
Un constituyente muy particular forma parte
de la cpsula del Bacilus anthracis. Se trata de
un polipptido del D-cido glutmico, form a
no natural del aminocido, hecho que podra
estar relacionado con la virulencia del microor
ganismo.
Un grupo importante de bacterias lo consti
tuyen las salmonelas, de las que se conocen va
rios cientos de especies. La mayora son m vi

59

les y poseen antgenos som ticos y ciliares.


Los antgenos O forman parte del cuerpo celu
lar y se los identifica con nmeros arbigos.
Como las diferentes salmonelas pueden conte
ner uno o ms de esos antgenos, compartidos
por varias especies, han sido subdivididas en
grupos. Los antgenos ciliares pueden ser de
dos tipos, especficos e inespecficos. U na mis
ma salmonela puede presentar las dos varieda
des de antgenos ciliares aunque no sean com
partidos concomitantemente por la especie mi
crobiana. Los antgenos ciliares especficos se
identifican con letras minsculas que van de a
a z, designndose con z y subndices a los des
cubiertos posteriormente. Los inespecficos se
encuentran en menor cantidad.
En la Salm onella typhi se ha identificado
adems un antgeno superficial termolbil, de
nominado Vi. No es un componente exclusivo
de este microorganismo, sino que puede hallar
se en otras salmonelas como la S- paratyphi C,
e incluso en otras enterobacterias no pertene
cientes al gnero Salmonela.
La estructura antignica somtica y ciliar ha
servido para la elaboracin del esquem a de
Kauffmann-White de identificacin de las sal
monelas.
Los estudios qumicos han demostrado que
el antgeno H es una protena fibrosa, del tipo
de la miosina y la queratina. La protena flage
lar purificada, llamada flagelina, de peso m ole
cular 41 kD, no contiene fsforo y s slo tra
zas de lpidos e hidratos de carbono. No contie
ne histidina, triptfano ni hidroxiprolina y slo
pequeas cantidades de cistena. El antgeno O
es un complejo polimolecular formado p o r un
polisacrido especfico, una protena y un fosfolpido. Los anlisis qumicos indican que en
la fraccin hidrocarbonada de las salmonelas y
otras enterobacterias existe un ncleo central
formado por cinco componentes: 2keto-3 deoxi-octonate (KDO), heptosa fosfato, D -gluco
samina, D-galactosa y D-glucosa. Las diferen
tes especies se caracterizan por tener azcares
adicionales que forman cadenas de oligosacri
dos unidos al ncleo central. La Salmonella p a
ratyphi A, que forma parte del grupo A, posee
los antgenos 0: 1, 2 y 12, y el polisacrido
contiene glucosa, galactosa, maosa, ram nosa
y paratosa (3,6-dideoxi-D-glucosa); el antgeno
2 es el caracterstico de este grupo. El polisac
rido de la Salmonella typhi murium, del grupo
B, eon los antgenos 1, 4, 5 y 12, contiene glu
cosa, galactosa, m aosa, ram nosa y abecosa
(3,6-dideoxi-D-galactosa), el que provee las ca
ractersticas al antgeno 4, especfico de este
grupo. En el caso de la Salmonella typhi, perte
neciente al grupo D, la especificidad c o rres
ponde al antgeno 9, que contiene tivelosa (3,6dideoxi-D -m anosa). En otras enterobacterias

60

Aspectos bsicos de ia inmunidad

tambin han sido hallados azicares particula


res, como la colitosa (3,6-dideoxi-Lgalactosa)
en la Escherichia coli.
El antgeno Vi es de naturaleza glucolipdica
y difiere qumicamente del antgeno somtico 0.
Existe un grupo particular de microorganis
mos, denom inados bacilos acidorresistentes,
entre los que se encuentra el M ycobacterium
tuberculosi.'s, ricos en componentes lipdicos.
Por diversos mecanismos se han podido sepa
rar de la bacteria citada tres fracciones, consti
tuidas por glicridos, fosftidos y ceras. Los
fosfolpidos pueden extraerse de los microorga
nismos por tratamiento con alcohol y separar
los por su insolubilidad en acetona. Se ha en
contrado que la parte ms activa de aqullos es
una sustancia fosforada, sin nitrgeno, consti
tuida por cidos grasos, cido ghcerofosfrico
y trazas de inositol. Entre los cidos grasos se
parados del fosfolpido, el principal componen
te es el palmtico, y el oleico entre los no satu
rados. Del bacilo tuberculoso tipo humano se
ha aislado un cido ismero del certico, deno
minado cido phthioico, y de las ceras prove
nientes del mismo bacilo, un cido graso satu
rado denominado cido miclico, que es acidorresistente. Las ceras purificadas de los bacilos
tuberculosos humano y bovino contienen un al
cohol, el phthiocerol, y polisacridos que por
hidrhsis dan diferentes azcares, entre los que
se encuentran la maosa, d-arabinosa y galac
tosa. Ha sido identificado tambin un cido le
vgiro llamado cido mycocertico.
De los bacilos tuberculosos se ha extrado
una cera soluble en cloroformo, la cera D. En
la variedad humana, la misma se encuentra uni

da a una cadena peptdica ausente en los otros


bacilos tuberculosos y los acidorresistentes sa
profticos. Esta cera ha sido fraccionada en un
pptido-glucolipoide, de extraordinaria impor
tancia en la potenciacin de los vehculos oleo
sos con bacilos tuberculosos constitutivos del
llamado adyuvante de Freund completo, activa
dor de la antigenicidad (fig. 4-6).
Adems de los lipoides, se han extrado po
lisidos capaces de interaccionar con sueros
provenientes de enfermos tuberculosos. Consti
tuyen verdaderos haptenos adsorbibles a la su
perficie de hemates, transformndose de esta
m anera en antgenos aglutinables muy tiles
para estudios inmunoserolgicos.
Uno de esos polisacridos, que posee carac
tersticas de hapteno, tiene un peso molecular 9
kD, y est constituido principalmente por ma
osa y arabinosa. Otro polisacrido aislado de
bacilos tuberculosos aviarios tiene un peso mo
lecular prximo a 100 kD y por s solo se com
porta como antgeno. Est constituido por un
poliglucosn que por hidrlisis da nicamente
molculas de D-glucosa.
Como constitutivos de los bacilos tuberculo
sos, se han encontrado tambin protenas, co
nocidas con el nombre de tubereulinas, que son
liberadas en los medios de cultivo por autlisis.
A partir de cultivos en medios sintticos se ha
obtenido un derivado protenico purificado que
se conoce con el nombre de P.P.D. {Protein
Purified Derivative). Por migracin electrofo
rtica, se ha com probado que existen por lo
menos tres protenas diferentes denominadas
A, B y C, de las cuales parecera que A es la
ms efectiva. Estas protenas inducen poca sen-

Mycoloil

[Arabinosa
:Galactosa

:Ac. N-glicolil murmico


O

Lactil
:N-acetilglucosamina o
:N-acetilgalactosamina

o Lactil
:Pptido

F ig. 4-6. Estructura esquem tica de a cera D.

Antgenos
sibilidad tuberculnica, pero puede increm en
tarse si se las inocula mezcladas con ceras pro
venientes de extractos de bacilos tuberculosos,
en especial la cera D. (Para ms detalles sobre
antgenos bacterianos, vase cap. 24.)
Antgenos de rickettsias y virus
Los estudios sobre estructura antignica de
rickettsias slo han adquirido alguna claridad
despus de la obtencin de suspensiones de
aquellas libres de protenas de tejido. Varias de
las rickettsias conocidas dan reacciones cruza
das, como la R. prowazeckii con la R. mooseri.
Se han identificado dos antgenos, uno termol
bil, capaz de ser destruido por calentamiento
durante una hora a 60C, altamente especfico,
y otro termoestable, no especfico, relacionado
con una parcela del constituyente antignico
som tico del P roteus 19, responsable de la
aglutinacin de dichos bacilos por el suero de
enfermos de tifus exantem tico (reaccin de
Weil-Flix).
Si Jos conocimientos sobre estructura antig
nica de rickettsias son poco claros, menos cla
ros aun son los que poseemos sobre los antge
nos virales, y ello est relacionado con su ta
mao, su simplicidad constitucional y su capa
cidad para multiplicarse nicamente en presen
cia de clulas vivas.
En cuanto a su antigenicidad, los virus se pa
recen a las bacterias y en algunos de ellos ha
sido posible demostrar varios antgenos; la es
tructura antignica est frecuentemente sujeta a
variaciones.
E ntre los virus anim ales del grupo ADN,
uno de los que mejor se ha estudiado ha sido el
virus de la vacuna. Inicialmente se describi la
presencia de dos antgenos solubles, uno llama
do L, que se destruye por calentamiento a 56C
durante una hora, y el otro S, que resiste una
hora a 65C. Se crey que ambos antgenos es
taban separados y que el componente S era un
poiisacrido con caractersticas de hapteno.
Actualmente se sabe que son constituyentes de
una misma molcula proteica. En los corpscu
los elementales de la vacuna se han identifica
do adems otros dos antgenos llamados N P o
antgeno nucleoproteico y el antgeno X, que es
un aglutingeno. Un suero inmune animal ad
sorbido con los antgenos SL, N P y X conserva
todava poder aglutinante sobre los corpsculos
elementales y poder neutralizante sobre el vi
rus, lo que est indicando que adems de los
descritos deben existir otros antgenos con las
propiedades indicadas.
Por exmenes serolgicos se han demostrado
relaciones antignicas entre los virus ECHO,
Coxsackie y de la pohomielitis, todos ellos per
tenecientes al grupo ARN. Las cepas del virus

61

de la poliomielitis conocidas hasta el momento


corresponden a tres tipos antignieos diferen
tes, I, II y III, y cualquiera de eUos puede ser
responsable de epidemias.
Los estudios serolgicos acerca del virus de
la influenza, principalmente mediante virus ad
sorbidos sobre hem ates, han dem ostrado la
existencia de dos variedades fundamentales, la
A y la B. En la primera de ellas han sido identi
ficados varios subtipos que difieren e n tre s
respecto de la especificidad dominante.
Ultimamente ha sido muy estudiado el virus
de la hepatitis B (HBV), Es un virus de tipo
ADN, de 42 nm de dimetro, de doble envoltu
ra, inicialm ente conocido com o partcu la de
Dae. Posee un compuesto antignico que for
ma un ncleo o core, de 27 nm de dimetro, y
antgenos de envoltura. Los antgenos del HBV
identificados hasta el momento son:
HBsAg = antgeno de superficie
HBcAg = antgeno del core
HBeAg = antgeno e ntimamente relaciona
do con la infeccin por HBV
El HBsAg posee un componente a, com n a
los diferentes subtipos, y componentes desig
nados como d, y, w, r, que son codificados por
el genoma viral y no por el husped. Los subti
pos principales que resultan de la combinacin
de a con ellos, se comportan como si constitu
yeran dos tipos allicos: d e y por un lado, y
wJ, w2, w3, w4, y r por el otro. Las 10 catego
ras de antgenos de superficie del virus HBV
son las siguientes: ayw l, ayw2, ayw3, ayw4,
ayr, adw2, adw4, adr, adyw y adyr. Tambin
han sido identificados otros antgenos de super
ficie denominados q, x, f t, j, n y g. Hasta estos
mom entos no se conoce claramente qu rela
ciones pueden existir entre stos y los ya co
rrectamente identificados.
Del antgeno e (HBeAg) se conocen dos va
riedades denominadas HBeAg/1 y HBeAg/2.
Los antgenos mencionados son inm unog
nicos y tienen capacidad para engendrar anti
cuerpos especficos (vase cap. 27).
La estructura antignica del HIV o virus del
sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SI
DA) ha sido ampliamente estudiado en los lti
mos aos. Es un retrovirus de la subfamilia de
los lentivirus constituido por ARN, transcripta
sa inversa, protenas estructurales y glucopro
tenas de envoltura. Entre las protenas estruc
turales internas o del core se han identificado
las p24, p25, p l7 y p l5 ; enzimas con actividad
polimerasa como las p66, p51 y p33, y las glu
coprotenas de envoltura g p l2 0 y gp41, entre
otras (vase cap. 27). La g p l20 es la que se une
a la molcula de superficie CD4, presente prin
cipalm ente en los linfocitos T cooperadores.

62

Aspectos bsicos de la inmunidad

cuya infeccin y destruccin inhiben su partici


pacin en los mecanismos inmunolgicos, ori
ginndose como consecuencia una inmunodefi
ciencia.
Los virus productores de enfermedades en
plantas han sido en conjunto los menos estudia
dos, no obstante haber sido uno de ellos, el del
mosaico del tabaco, el primero en ser obtenido
en estado cristalino. Estudios serolgicos efec
tuados con estos virus han demostrado la pre
sencia de componentes comunes responsables
de reacciones cruzadas. Lo mismo puede decir
se sobre los bacterifagos o virus de bacterias,
acerca de los cuales ltimamente se han inten
sificado estudios de este tipo.
Toxinas microbianas
Numerosos microorganismos elaboran sus
tancias difusibles o no en el medio externo y
capaces de provocar, en animales susceptibles,
lesiones o sntomas caractersticos. A las que
difunden en los medios nutricios donde esos
microorganismos son cultivados, se las designa
exotoxinas, mientras que a aquellas que forman
parte del soma microbiano y que slo son libe
radas por autlisis se las denomina endotoxi
nas. Ambas son antignicas, sobre todo las pri
meras, dado su carcter eminentemente protei
co, mientras que las segundas son polimoleculares y forman complejos glcido-lpidoproteicos. Los anticuerpos respectivos las neutralizan
especficam ente y esta caracterstica precisa
mente es la que permite diferenciarlas de otros
venenos qumicos, de los alcaloides, etctera.
Los microorganismos exotxicos ejercen su
accin a distancia por difusin de sus venenos
por va hemtica y linftica. Muchos producen
ms de una toxina, pero por regla general una
es la que posee accin preponderante. Elay co
cos que elaboran exotoxinas, entre ellos los es
tafilococos dorados y los estreptococos hemol
ticos, pero los grmenes toxignicos ms acti
vos son bacilos pertenecientes principalmente
al gnero anaerobio Clostridium.
Algunas exotoxinas, como la tetnica y la
diftrica, han sido altamente purificadas y cris
talizadas. De esta ltima se sabe que su peso
molecular oscila entre 62 y 63 kDa y que tien
de a formar dmeros y agregados de alto peso
m olecular sin prdidas apreciables del efecto
txico. Se conoce tambin parte de su secuen
cia primaria. Posee dos puentes disulfuro que
al ser reducidos con mercaptoetanol y alquila
dos hacen que la molcula pierda algo de su to
xicidad. Si a continuacin la molcula es some
tida a digestin trptica se originan dos ppti
dos, uno correspondiente al fragmento N-terminal (pptido A), de P.M. 23 kD, que se man
tiene soluble en agua, y otro constituido por el

fragmento C-terminal (pptido B), de P.M. 38


kD, que se agrega con mucha facilidad y resul
ta muy difcil recuperarlo en su estado nativo,
lo que dificulta su estudio biolgico. El pptido
A no es txico (fig. 4-7).
Las caractersticas de las endotoxinas extra
das de los distintos microorganismos son muy
parecidas, y en los animales de experim enta
cin producen sintomatologa anloga, caracte
rizada por elevacin trmica, postracin y fe
nmenos hem orragparos viscerales. La pro
duccin de anticuerpos en el hombre y anima
les es escasa o nula. El poder txico es varia
ble, y algunos investigadores han aislado de
salmonelas, especialm ente Salm onella typhi,
glucidolpidos con distintos grados de pureza,
capaces de provocar reacciones febriles en el
ratn blanco con dosis que van de 0,1 ig a
0,005 |ig.
Desde el punto de vista de la antigenicidad,
las ms importantes son las exotoxinas, mien
tras que las endotoxinas no son muy activas y
su poder txico, de muy difcil valoracin bio
lgica, se expresa en miligramos por gramo de
peso animal. Las exotoxinas pueden ser medi
das sin inconvenientes por procedimiento bio
lgico, y se ha establecido al respecto una serie
de unidades.
Dosis mortal mnima (DMM o DLM)
Es la menor cantidad de toxina que inocula
da a un animal sensible le produce la muerte en
un determinado perodo. Esta definicin, para
el caso de la toxina diftrica, tal como lo hizo
Ehrlich, es la siguiente: la menor cantidad de
toxina que inoculada a un cobayo de 250 g de
peso, por va subcutnea, le produce la muerte
a las 96 horas de la inoculacin. Para otras to
xinas vara el animal a inocular y la va de in
troduccin del antgeno. Es preciso respetar es
tas condiciones para que los resultados puedan
ser comparables.
Dosis letal 50 (DL 50)
Es la menor cantidad de toxina que, inocula
da a cada uno de los animales de un lote o gru
po, produce la muerte del 50% de stos en un
perodo determinado. Para el caso de la toxina
diftrica, los animales a emplear son cobayos
de 250 g de peso, la va de inoculacin la sub
cutnea y el tiempo de lectura 96 horas.
Lmite nulo (Lo)
Es la mayor cantidad de toxina que, unida a
una unidad antitxica e inoculada al animal re
ceptivo, no produce sntomas de intoxicacin
en un perodo preestablecido.

Antgenos

63

Lmite muerte ( L+)

Dosis lmite floculante (Lf)

Es la menor cantidad de toxina que, unida a


una unidad antitxica e inoculada por va subcu
tnea, a un cobayo de 250 g de peso, le produce
la muerte a las 96 horas. Esta definicin as ex
presada corresponde a toxina diftrica ya que, si
valoramos toxina tetnica (tetanoespasmina), los
animales a utilizar sern cobayos de 350 g de
peso y la cantidad de antitoxina 0,1 U.A. Para
otras toxinas la cantidades de antitoxinas a em
plear varan; estn especificadas en cada caso y
dependen de la actividad de la toxina. Esta uni
dad es una de las ms utilizadas en la medicin
de actividad de toxinas y antitoxinas.
Como la cantidad de unidades de antitoxina
a utilizar para los diferentes toxinas microbia
nas es U.A./n, los valores de n establecidos son:

Fue establecida inicialmente por Ramn para


la toxina diftrica, y actualmente se la emplea
tambin para la valoracin de otras toxinas. La
unidad de floculacin o Lf es la cantidad de to
xina que, mezclada con una unidad antitxica,
flocula en el menor tiempo, cuando se ha utili
zado para la medicin una serie de mezclas que
co n tien en cantidades variab les de to x in a y
constantes de antitoxina. Al tiempo de flocula
cin se lo denomina Kf y sirve para expresar la
avidez de los sueros o antitoxinas en estudio,
ya que dos antitoxinas diferentes con el mismo
valor de unidades antitxicas pueden provocar
la floculacin y consiguiente neutralizacin de
la toxina en diferentes tiempos. Esto expresa
distinta rapidez en la neutralizacin, fenmeno
que es tenido en cuenta en teraputica.
En el cuadro 4-3 figura una serie com parati
va de las propiedades de las endo y exotoxinas
bacterianas.

U.A.

Antitoxina
D iftrica
Tetnica
Cl. welchii
Cl. septicum
Cl. histolicum
Cl. sordelli
Cl. aedem atiens

10
5
2
1
5
50

0,1
0,2
0,5
1
0,2
0,02

Dosis lmite reaccional (LR)


Esta unidad ha sido definida para la toxina
d ift ric a despus de las o b se rv a c io n e s de
Roemmers sobre el eritema que produca sta
cuando se la inoculaba por va intradrmica y
la inhibicin de este fenmeno por la corres
pondiente antitoxina.
Se la define como la mnima cantidad de to
xina que mezclada con 1/300 de unidad antit
xica e inoculada por va intradrmica en el co
bayo, en un volumen de 0,2 ml, le produce una
lesin cutnea mnima. Inicialmente se us co
mo dosis de antitoxina una unidad antitxica;
actualmente se emplea tal como ha sido defini
da e incluso hay autores que establecen la ca
pacidad reaccional de la toxina frente a 1/250
U.A. o 1/500 U.A.

V enenos de vegetales superiores


De distintos vegetales han sido aisladas sus
tancias txicas con carcter antignico, desta
c n d o se entre ellas la ab rin a, e x tra d a del
A brus precatorius; la crotina, del C roton gliun; la ricina, del Ricinus comunis; la curcina,
del Jatropha curcas, y la robina, de la Robinia
pseudoaccacia. Todas estas sustancias txicas
son de carcter proteico, poseen actividad anti
gnica y son capaces, cuando se las trata por el
formol, de transformarse en toxoides, o sea to
xinas que han perdido su efecto txico, pero
que conservan su funcin antignica.
Algunas de estas fitotoxinas han sido purifi
cadas por cristalizaciones y estudiadas desde el
punto de vista fisicoqumico y biolgico.
De otros vegetales se han aislado algunas he
maglutininas y hemotoxinas, pero por regla ge
nera] no son txicas para el hombre cuando son
ingeridas. Slo las cuatro nombradas en primer
trmino poseen aquella caracterstica.

C uadro 4-3. Caracteres diferencales de las toxinas microbianas

N autraleza qum ica


S olubilidad en cido tricloroactico
Excrecin al m edio de cultivo
Toxicidad
Estabilidad a 80C
Estabilidad a tem peratura am biente
Estabilidad a las radiaciones ultravioleta
A ntigenicidad
C om portam iento frente al aldehido frm ico

Exotoxina.'i

Endctoxincks

Protenas
Insolubles
Son excretadas
M uy txicas (DEM = 0,001 mg)
Inestables
M uy po co estables
Poco estables
M uy antignicas
F orm an toxoides (antignicos y no txicos)

G lucolipoides
Solubles
No son excretadas
Poco txicas (DEM s 0,1 mg)
Estables
Estables
Estables
Poco antignicas
No se convierten en to x o id es

64

Aspectos bsicos de a inmunidad


-Gly-NH3

-OOC - ArgSH
SH

SH

H,N-

SH

i- c o o Pptido B (PM: 38 kD)

-o o c Toxina (PM: 62 kD)


F ig . 4-7. E structura esquem tica de la toxina diftrica y de los pptidos resultantes de la hidrlisis triplica. (Segn A. M.
Pappenheim er, Jr. y D. M ichael Gil. Sciece 182: 353, 1973.)

Venenos de origen animal


Numerosos animales producen secreciones
txicas para el hombre; figuran entre ellos es
pecies de serpientes, escorpiones, araas, sala
mandras e incluso abejas. Los mejor estudiados
han sido los ofidios. Estos venenos son prote
nas antignicas transformables en anavenenos
por accin del formol. Del veneno de la vbora
cobra (Naja flava) se ha aislado una potente
neurotoxina, con un niimero de DMM para el
ratn superior a las 100.000 por gramo de ve
neno. Esta es de bajo peso molecular, entre 2,5
kD y 4 kD, y dializa a travs de membranas de
celofn. Los venenos de estos tipos de vboras
son neurotxicos y hemolticos, pero muy poco
o nada hemorragparos y citolticos. De otros
tip.os de serpientes, entre ellos la cascabel
(Crotalus terrificus), se han aislado protenas
txicas de peso molecular de aproximadamente
30 kD. Del gnero Bothrops, especialmente de
la Bothrops alternata o vbora yarar, se han
obtenido sustancias sum am ente txicas cuya
principal caracterstica, al igual que en el caso
del Crotalus terrificus, es su alto contenido en
azufre. Por habero hallado tambin en el vene
no de escorpiones y de abejas, algunos autores
consideran que todos los venenos o toxinas de
origen animal son ricos en ese elemento.
Los venenos crotlicos, a diferencia de los
de cobra, son poco neurotxicos, pero son he
molticos, coagulantes, muy hemorragparos y
citolticos. Los venenos de escorpiones y algu
nos arcnidos ejercen sobre el hombre una ac
cin muy parecida a la que se ha descrito para
los venenos de serpientes.
La m ayor parte de los venenos anim ales,
tanto los provenientes de serpientes como los
de insectos, deben su accin txica a neurotoxinas, enzimas proteolticas y fosfatidasas, an
tignicas en su mayora.
Antgenos de zooparsitos
H abida cuenta de que en los zooparsitos

existen constituyentes de naturaleza proteica y


glucdica con propiedades antignicas, es lgi
co suponer que en los casos en que aqullos
lleguen a la intimidad de los tejidos, estimula
rn al sistema reticuloendotelial y originarn
anticuerpos.
En algunas parasitosis tales como el paludis
mo y la amebiasis, en los perodos de cronicidad
hay una marcada resistencia a la reinfeccin. En
estos casos no siempre es posible demostrar la
presencia de anticuerpos, pero todo hace supo
ner que esa resistencia es consecuencia de una
refractariedad especfica por inmunidad.
En los parsitos unicelulares, por sus condi
ciones particulares de vida, resulta difcil el
aislamiento de sustancias qumicas especficas,
en tanto que en los pluricelulares, dada su es
tructura compleja, los estudios no son del todo
satisfactorios. Las reacciones inmunoserolgicas ms utilizadas para el diagnstico de estas
parasitosis son las de fijacin del complemen
to, de precipitacin, inm unofluorescencia y
ELISA, principalmente para la identificacin
de protozoarios, no as de vermes. Ello no se
debe a que los primeros tengan antgenos con
mayor poder inmunizante que los segundos, si
no que est relacionado con el hbitat normal
del parsito. Las tenias, scaris, oxiuros, anquilostomas, viven en el intestino y dan pocas m a
nifestaciones serolgicas, a diferencia de lo que
ocurre con las triquinas, leishmanias, tripano
somas, plasmodios, que indudablemente provo
can la formacin de anticuerpos.
Estudios efectuados in vitro con anquilostomas y triquinas demuestran que cuando estos
parsitos vivos se ponen en contacto con sus
respectivos anticuerpos aparecen precipitados
m icroscpicos en form a de burbujas o capu
chones que recubren electivamente los orificios
bucales de las larvas.
Con respecto a la composicin qumica de
los antgenos parasitarios, se han aislado poli
sacridos que dan reacciones especficas con
los sueros de conejos inmunizados con los pa
rsitos de los que provienen. El poiisacrido

Antgenos
del Ascaris lumbricoides y de la mayor parte
de los parsitos es glucgeno, formado por ca
denas de glucosa y muy similar al glucgeno
de los mamferos, aunque de peso m olecular
ms bajo.
Las protenas presentes en los zooparsitos
son poco conocidas porque su estudio no ha si
do encarado a fondo.
En cuanto a los lpidos, son los comunes ha
llados en otras especies animales.
Dado el carcter crnico de las infecciones
parasitarias, el desarrollo de alergia es muy fre
cuente, y puede ser utilizada con fines diagns
ticos si se emplean extractos parasitarios como
antgenos desencadenantes.
Es conveniente recordar que sobre todo en
los cestodes y nematodes, como consecuencia
de la presencia de antgenos de grupo, son co
munes las reacciones cruzadas (vase cap. 26).
De algunos hemoflagelados como el Tripanosoma cruzi, en especial de la forma epimastigote del parsito, obtenida por cultivo en m e
dios bifsicos y rota por compresin y descom
presin, se ha conseguido separar por centrifu
gacin diferencia] distintos componentes rela
cionados con las fracciones nuclear, flagelar,
ribosomal, mitocondrial, etc., que han sido ana
lizadas desde el punto de vista antignico. La
fraccin separable a 1.000 g es rica en ncleos,
flagelos y membranas, las que a su vez pueden
separarse por centrifugacin en gradientes de
densidad de sacarosa; las correspondientes a
11.500 g y 30.000 g estn muy enriquecidas en
membranas mitocondriales, y el sobrenadante
de 105.000 g tiene un alto contenido en prote
nas citoplasmticas. Algunos de esos antgenos
son muy tiles para reacciones serolgicas, co
mo lo es la fraccin soluble de 105.000 g, la
que, por otra parte, ha demostrado carecer de
poder protector en la infeccin experim ental
del ratn. La fraccin flagelar, en cambio, es la
que mejor protege.
En nuestros laboratorios, por tcnicas com
binadas de inm unoqum ica y el uso de an ti
cuerpos monoclonales, ha sido posible separar
componentes antignicos de T. cruzi. Uno de
ellos, el A gl63B 6, constitutivo de la mem bra
na del parsito ha resultado ser muy til para la
elaboracin de reacciones serolgicas de diag
nstico de la enfermedad de Chagas. Presenta
la caracterstica de no dar reacciones de cruce
con componentes de Leishmanias, otro parsito
que pulula en zonas endmicas de tripanoso
miasis americana y que muchas veces puede
confundir el diagnstico (vase cap. 26).
Antgenos especficos de especies y rganos
Cuando un antgeno es propio de una espe
cie y se encuentra en todos sus miembros se

65

dice que es especfico de especie. Inyectados a


especies homlogas no producen anticuerpos,
cosa que ocurre si se inoculan a especies hete
rlogas. En los animales de una misma especie
es p osible encontrar protenas que cum plen
distintas funciones en el organismo, presum i
blem ente con estructuras diferentes, las que
pueden ser diferenciadas serolgicamente. As,
por ejemplo, la hemoglobina del hombre pue
de ser serolgicamente diferenciada de las pro
tenas renales e, incluso, los distintos com po
nentes del plasma sanguneo pueden ser dife
renciados fcilmente por los mtodos inmunoserolgicos. Por otra parte, protenas q u e en
diferentes especies animales cumplen una m is
ma funcin, tenen, por regla general, una es
tructura parecida y por lo comn dan reaccio
nes cruzadas.
Cuando los antgenos son particulares de un
rgano de una especie animal se llaman espe
cficos de rgano, los que a su vez pueden ser
especficos de rgano y de especie, si la espe
cificidad es propia y particular para ambos. El
ejemplo clsico de este tipo de antgenos es la
tiroglobulina. Otras veces la especificidad slo
es de rgano, ya que el mismo antgeno puede
encontrarse en diferentes especies; en estos ca
sos los antgenos son especficos de rganos,
pero heterogenticos. El ejem plo ms re p re
sentativo es la protena del cristalino del ojo,
la que puede hallarse en especies tan diferentes
como el hombre y los peces, con la m ism a es
pecificidad.
E x isten antgenos, en esp ecial p ro ten as,
que cumplen la m ism a funcin en diferentes
especies animales y que poseen gran similitud
en sus estructuras, siendo capaces de dar reac
ciones cruzadas. Un ejem plo de ello son las
insulinas, las que, si bien en un principio se
crey que eran idnticas, difieren entre s por
modificaciones en la secuencia de sus am ino
cidos, de los cuales aproximadamente tres son
los que estn comprometidos. Este tipo de es
pecificidad se conoce con el nombre de fu n cional.
No todas las protenas y clulas de los dis
tin to s anim ales de una m ism a esp ecie son
idnticas, ya que hay posibilidades de diferen
ciaciones serolgicas, las que llevan a la esp e
cificidad individual o alotpiea, a diferencia de
la especificidad de especie o isotpica. Son
ejem plos de estos tipos de especificidad los
antgenos de los diferentes sistemas de los gru
pos sanguneos, ya sean los mucopolisacridos
del sistema ABO, o los constituyentes proteicos
de otros grupos, como los MN. Existen en los
distintos individuos de la misma especie otros
antgenos que se heredan, cuya presencia que
da dem ostrada por la im posibilidad de tra s
plante de tejidos homlogos.

66

Aspectos bsicos de la inmunidad

Antgenos heterfilos
Forssman fue el primero en demostrar la pre
sencia del mismo tipo de antgeno o antgenos
muy similares distribuidos en forma variada en
la naturaleza, los cuales pueden ser com parti
dos por bacterias, hongos, vegetales superiores,
vertebrados, etc. El ms conocido y estudiado
de estos antgenos ha sido el de Forssman. Se
encuentra muy repartido y es posible hallarlo
en distintas bacterias, como las shigelas en su
form a rugosa, los neum ococos, el B a cilu s
anthracis\ se lo encuentra tambin en algunos
parsitos animales, como las triquinas, en algu
nos moluscos y crustceos, en reptiles, en el
caballo, la cabra, el carnero, el cobayo, el ra
tn, el perro, el gato y otros felinos e incluso en
el homljre del grupo sanguneo A.
Forssm an lo describi por prim era vez al
comprobar que conejos inyectados con riones
triturados de cobayo producan anticuerpos lti
cos a alta concentracin para los hemates de
carnero. Si bien a este antgeno se lo ha encon
trado muy distribuido en la naturaleza, el con
cepto primitivo de unidad antignica ha cam
biado, ya que actualmente se considera como
tales a aquellos antgenos que, inoculados a co
nejos, producen lisina para los hemates de car
nero. Estos antgenos son solubles en alcohol,
resisten a la ebullicin y, desde el punto de vis
ta qumico, han sido estudiados por Landstei
ner y Levine, quienes han encontrado un alto
contenido en hidratos de carbono, aproximada
mente 55 a 58%, y un 2 a 3% de nitrgeno. En
tre los azcares obtenidos por hid r lisis se
identificaron hexosaminas.
El concepto de antgeno de Forssman ha sido
sustituido por el de hapteno y se lo concibe,
desde el punto de vista serolgico, como un
conjunto de sustancias similares cuya caracte
rstica particular sera la de producir en el cone
jo hemolisinas para los glbulos rojos de carne
ro. Ese hapteno es de naturaleza glucidolipdica, y la especificidad, atribuible al hidrato de
carbono.
En el curso de algunas enfermedades, como
la mononucleosis infecciosa, es posible encon
trar anticuerpos heterfilos capaces de agluti
nar los hemates de carnero. En un comienzo se
los consider como anticuerpos contra el ant
geno de Forssman, pero trabajos posteriores
han permitido comprobar que actan no slo
sobre constituyentes existentes en el estroma
de los hemates de carnero, sino tambin en los
del ganado vacuno, especie que por otra parte
no posee antgenos de Forssman, lo que est in
dicando diferencias en estos tipos de antgenos.
La identificacin de stos puede hacerse por la
aglutinabilidad de los hemates de carnero y de
vacuno por los anticuerpos de este tipo. Los an-

Cuadro 4-4. Antgenos heterfilos


A glutinacin de hem ates de carnero

Anticuerpos
Forssm an
M ononucleosis
infecciosa
Enferm edad
del suero

Suero
sin
adsorber

Suero
adsorbido
con rin
de cobayo
hervido

+
+

+
-

0+

0 +

Suero
adsorbido
con hem ates
bovinos
h ervidos

ticuerpos anti-Forssman slo aglutinan los he


mates de oveja, no as los de vacuno.
Aquellos pacientes a los que se les han ino
culado dosis repetidas de suero de caballo, pue
den formar anticuerpos capaces de aglutinar a
los hemates de oveja, pero no reaccionan con
los antgenos de Forssman, ni con los hemates
de bovinos. El determinante de la formacin de
estos anticuerpos constituira, pues, otro tipo de
antgeno heterfilo.
Teniendo en cuenta que los anticuerpos antiForssman son adsorbidos por suspensiones de
rin de cobayo, pero no por los hemates bo
vinos; que los anticuerpos de la mononucleosis
infecciosa no son adsorbidos por las suspensio
nes de rin de cobayo, pero s por los hema
tes de bovinos, y que los anticuerpos de la en
fermedad del suero son dbilmente adsorbidos
por las dos suspensiones mencionadas, es posi
ble, por ensayos de aglutinacin frente a hema
tes de carnero, del suero del paciente no adsor
bido y previa adsorcin con rin de cobayo y
hemates bovinos, establecer la identidad del
anticuerpo en estudio (cuadro 4-4).
Otros antgenos compartidos
Existen microorganismos que, sin tener pa
rentesco inmediato de gnero o especie, com
parten determinantes antignicos, lo que hace
que en muchas circunstancias ocurran reaccio
nes cruzadas entre algunos de ellos con los sue
ros de pacientes o animales inmunizados con
los otros microorganismos.
Un caso es el del Proteus OX, cuya variedad
OX 19 posee un antgeno comn con la Pickettsa prowazeckii y \'d Rickettsia ricketsli, y la
variedad OXK posee un antgeno compartido
con la Rickettsia tsutsugamushi. For este m oti
vo, en la reaccin de W eil-Flix se emplean
suspensiones de esos microorganism os como
antgenos para la investigacin de anticuerpos
contra Jas rickettsias nombradas, productoras
del tifus exantemtico, la fiebre manchada de
las Montaas Rocosas y fiebre tsutsugamushi.

Antgenos
El diagnstico preciso de sfilis puede lograr
se cuando se emplea como antgeno el Trepone
ma pallidum, microorganismo no cultivable en
los medios artificiales y slo mantenido viable
por pasajes sucesivos en conejos inoculados por
va testicular. Pero este microorganismo tiene
una protena muy similar a otra protena aislada
de un treponem a cultivable, el treponem a de
Reiter, con la que comparte determinantes anti
gnicos. Con esta protena aislada puede efec
tuarse una serorreaccin de fijacin del comple
mento para el diagnstico de certeza de la sfilis.
Compartir antgenos por algunos microorga
nismos y antgenos constitutivos de clulas o te
jidos en el hombre no siempre es beneficioso;
tal el caso de los dextranos y polisacridos de
algunos neumococos, como los del tipo II, XII y
XX. Personas que como consecuencia de infec
ciones por estos microorganismos han formado
anticuerpos contra sus polisidos, pueden sufrir
accidentes graves (choque anafilctico) al ser
trasfundidos con soluciones de dextranos.
Tambin se ha observado que el neumococo
tipo XIV posee un polisacrido cuya estructura
antignica es compartida al menos por dos hi
dratos de carbono de los isoantgenos sangu
neos hum anos A, B y 0. Existen num erosos
ejemplos similares a los anteriores, lo que nos
muestra la caprichosa distribucin en la natura
leza de ciertos constituyentes,que, por el hecho
de compartir determinantes antignicos, al inmunizai' sensibilizan para ambos antgenos, cu
yo resultado puede ser til en algunos casos o
francamente desfavorable como acabamos de
ver.
C onstituyentes antignicos de los glbulos
rojos hum anos
Las comprobaciones efectuadas inicialmente
por Landsteiner y completadas luego por nu
merosos investigadores, con respecto a la pre
sencia en h em ates hum an o s de d ife re n te s
constituyentes antignicos, han permitido subdividir a aqullos en distintos sistemas, llam a
dos ABO, MN, S, P, Rh, etc., los que a su vez,
de acuerdo con subgrupos y frecuencia, han
llevado al encasillamiento del hombre en dife
rentes grupos sanguneos. Como todos estos
factores son hereditarios y cumplen las leyes
mendelianas, la im portancia de su estudio en
medicina legal, antropologa, etc., es de valor
significativo.
De todos estos constituyentes antignicos,
los mejor estudiados en lo relativo a su compo
sicin qumica son los del sistema ABO.
Desde el punto de vista gentico se ha pro
puesto la existencia de tres genes allicos. A, B
y O, siendo A y B dominantes respecto de 0.
Los genes A y B rigen la formacin de las sus

67

tancias A y B, en tanto que el O no dirige la sn


tesis de ningn isoantgeno.
No obstante, las clulas O tienen un antgeno
que ha sido reconocido por sueros normales de
algunos animales -e n especial los provenientes
de terneras y anguilas-, sueros de cabra antishigela y algunas protenas de origen vegetal.
Como el antgeno de las clulas O no slo est
presente en el hombre sino tambin en algunos
anim ales, es heterogentico; de ah que se lo
llame sustancia H. Esta no puede ser conside
rada como producto del gene O, ya que es posi
ble, con sueros anti-H, obtener aglutinaciones
positivas de glbulos A (homocigotas) y AB.
Siendo el hombre diploide, homocigota o he
terocigota, los dos alelos por individuo pueden
dar lugar a seis genotipos y cuatro fenotipos.
Las sustancias de los grupos sanguneos A, B
y O no han podido obtenerse puras o serolgicamente muy activas a partir de los hemates hu
manos; pero de tejidos y secreciones animales e
incluso de secreciones humanas ha sido posible
su extraccin en estado de relativa pureza.
Sustancias del grupo A se obtuvieron de peptonas comerciales, mucosa de estmago de cer
do, del cuarto estmago de la vaca, de la saliva
hum ana y otros materiales. De estm agos de
cerdos se han aislado sustancias A, B y sustan
cia con especificidad para el grupo O (H ), al
igual que de estmagos de bovinos y de algunas
plantas. Cabe sealar que no siempre los pro
ductos extrados como sustancia A de diferentes
materiales eran activos, no obstante la similitud,
en algunos casos, de su contenido en hexosamias, azcares reductores, acetilo, nitrgeno, vis
cosidad relativa, etc. Las denominadas sustan
cia A aisladas de materiales de origen humano
por diferentes autores, si bien son semejantes en
cuanto a su peso molecular y ciertas propieda
des fsicas y qumicas, algunas son dextrgiras
y otras tienen poder levorrotatorio.
La sustancia A aislada de diferentes anim a
les tiene mucha similitud con la de origen hu
mano; no obstante, en algunos casos, sobre to
do cuando se efectan estudios m ediante las
tcnicas del bloqueo o inhibicin de la hem oa
glutinacin, se observan diferencias.
Las sustancias de los grupos sanguneos A,
B y O (H) reaccionan con suero antineumoccico tipo XIV, debido muy prob ab lem en te al
contenido de glucosa en todas ellas. La distinta
especificidad de aqullas indudablem ente es
debida a otras diferencias estructurales. Todas
son polisacridos que, inyectados en estado de
pureza a conejos, no producen anticuerpos y
slo lo hacen si previamente son trasformados
en antgenos completos por complejacin con
protenas, preferentemente las de Shigella dy~
senteriae. Inoculadas al hombre en estado de
pureza, tal como se obtienen, por extraccin fe-

Aspectos bsicos de la inmunidad

68

C u ad ro 4-5. Los antgenos ms importantes


de los diferentes sistemas de los glbulos rojos
humanos

C u ad ro 4-5. (Continuacin)
SISTEM A Rh
A glutingenos

Sistem a ABO
Progenitores

G enotipo

Fenotipo

A A x AA
A A x AB

AA
AA
AB
AA
AO
AB
AB
AO
AO
AA
BB
AB
AA
AO
AB
BO
BB
AB
BB
BO
AB
AO
AO
BO
AA
00
AO
AB
BO
00
AO
BO
AB
00
AO
BB
BB
BO
BO
BB
00
BO
00
BO
00

A
A
AB
A
A*
AB
AB
A*
A*
A
B
AB
A
A*
AB
B*
B
AB
B
B*
AB
A*
A*
B*
A
0
A*
AB
B*
0
A*
B*
AB
0
A*
B
B
B*
B*
B
0
B*
0
B*
0

AA

AO

A A xBB
AA X BO
AA X 00
A B xA B

A BxA O

A BxBB
AB x B O

A B xO O
A O x AO

AO X BB
A O xB O

AO

00

BBxB B
BB x B O
BB X 00
BOX BO

BOX 00
00x00

L os g rupos san g u n eo s A y B m arc ad o s con * son h ete ro cig o lo s.


E n cl c u a d ro slo se in d ica el gru p o A y n o sus su b tip o s A , y A j

nlico-alcohlica a partir de estmagos de cer


do, producen aumento de los anticuerpos co
rrespondientes, lo que dem uestra el distinto
comportamiento en uno y otro caso. Hay auto
res que sostienen que ello se debe a que, como
en el hombre ya existen anticuerpos contra las
mismas, al penetrar y combinarse con dichos
anticuerpos, dado su carcter proteico, haran
que los productos de combinacin fueran verda
deros antgenos y actuaran como estimulantes.
A aquellos individuos en cuyos fluidos exis
tan las sustancias A, B o O (H) se los denomina

Nom enclatura
de Fisher-Race

N om enclatura
de W iener

(lee
dCe
dCe
dcE
dCE
Dce
DCe
DCe
D cE
D CE
D"ce
D Ce
D cE
IDCE

rh
rh'
rh'
rh "
rhv
Rh
Rh,
R h ,
Rhj
Rhj
Rh
Rh,
RH,
RH,

O tros sistem as
MN

Ss

P
Lutheran
Kell
Lewis
D uffy
Kidd

Fenotipo
M
N
MN
S
s
Ss
P,
P,
P
Lu
L u
K+
KLe>
Le"
Fyo
Fy"
Jk
Jk"

secretores, dndose el nombre de no secretores


a quienes carecen de ellas. Esta propiedad no
es exclusiva de las sustancias A, B y O (H), si
no que tam bin parece estar relacionada con
otros constituyentes de los glbulos rojos, co
mo el Lewis Le'*,
Las sustancias de los grupos sanguneos que
se encuentran en gran cantidad, principalmente
en los fluidos de los quistes de ovario, estn
constituidas aproximadamente por un 25% de
aminocidos y 75% de polisacridos. Tanto las
de origen humano como animal contienen ga
lactosa, fucosa, n-acetil galactosamina y nacetil
glucosamina.
Los aminocidos presentes parecen no tener
mucha significacin en cuanto a la especifici
dad del producto. Ella se modifica por hidrli
sis ligeras que no remueven los aminocidos

Antgenos

Sustancia H

Sustancia A

69

Sustancia B

N-acetilgalactosamina

N-acetilglucosamina

D-galactosa

L-fucosa

Fig. 4-8. R epresentacin esquem tica de las estructuras qum icas de las sustancias H , A y B y sus relaciones.

presentes, pero s producen alteraciones del hi


drato de carbono.
Trabajando con extractos de Triciomonas
foetus, ricos en enzimas contra las sustancias
A, B y O (H), se demostr que algunos glcidos
simples pueden actuar como inhibidores. La fucosa actiia como inhibidora de la sustancia O
(H), la n-acetil D-galactosamina inhibe la des
truccin de la sustancia A, y la D-galactosa la
de la sustancia B.
Los monosacridos indicados son en reali
dad los azcares terminales no reductores cons
tituyentes de los polisidos responsables de la
especificidad. Con respecto a la sustancia B se
cree que no es exactamente la D-galactosa, si
no la 6-acetil glucosamina. Por la potencia de
la respuesta en los ensayos de inhibicin, se es
tima que la parte activa son los polisacridos y
que los aminocidos hallados son secundarios.
Todo hace suponer que la sustancia H es ela
borada por un gene H distinto de los genes al
licos ABO. A qulla constituira un precursor
m acrom olecular sobre el que se fijaran los

grupos determinantes de la especificidad de las


sustancias A y B. En los casos de grupo O, al
no actuar como soporte de grupos activos, que
dara expuesta y podra expresarse como recep
tor especfico (fig. 4-8 y cuadro 4-5).
Existen otras sustancias de grupos san g u
neos relacionadas con el sistema ABO: los fac
tores Lewis Le.j y Le,^. El primero de ellos se
encuentra en la saliva de la mayora de los no
secretores A, B y O (H). Son glucolpidos no
sintetizados in situ sino adquiridos del plasma,
donde son transportados por lipoproteinas. El
mecanismo de fijacin a la superficie de los he
mates es desconocido, se ignora si existen re
ceptores especficos o slo se encuentran ad
sorbidos.
Con respecto a otros constituyentes antigni
cos de los hemates, como los M y N, poco es
lo que se conoce sobre su naturaleza qum ica y
parecen localizarse exclusivamente en los he
mates. Se sabe que son glucoprotenas y que la
especificidad estara relacionada con la existen
cia de pequeos oligosacridos; la galactosa es

70

Aspectos bsicos de la Inmunidad

el carbohidrato predominante. Desde el punto


de vista fsico, difieren de los A, B, O (H) en su
solubilidad y extractibilidad.
Sobre los antgenos S, P, Rh y otros menos
significativos, se conoce bastante sobre su po
der inm unognico, herencia, im portancia en
medicina legal y antropolgica, pero se conoce
poco de su estructura qumica. De los antge
nos Rh se sabe que su sntesis est dirigida por
tres pares de alelos, Cc, Dd y Ee. Segn las ca
ractersticas de homocigotas o heterocigotas de
los progenitores, surgen los genotipos y fenoti
pos de los distintos individuos (cuadro 4-5).
El nmero de determinantes o receptores an
tignicos en la superficie de los hemates no es
el mismo para los diferentes sistemas. Para el
ABO se estim a en 800.000 y para el Rh en
30.000. Para otros sistemas su nmero es aun

Lo.s antgenos de
histocompatibilidad
La identidad o no identidad entre los antge
nos de histocom patibilidad del husped y los
de un tejido u rgano trasplantado es lo que de
termina su aceptacin o rechazo. Son antgenos
de superficie y en el hombre han sido detecta
dos en los diferentes tipos de clulas, incluidos
los linfocitos. Su presencia no ha sido demos
trada en eritrocitos y espermatozoides.
Estos antgenos, insertados en la bicapa lip
dica de la membrana celular, son de diferentes
tipos. Los del hombre son codificados por ge
nes ubicados en el cromosoma 6 y forman par
te del complejo mayor de histocompatibilidad
(antgenos HLA). Los de clase I estn consti
tuidos por dos cadenas peptdicas, de P.M. 12
kD y 43 kD, respectivamente. La ltima contie
ne hidratos de carbono, no as la de P.M. bajo
que ha sido identificada como la p2 microglo
bulina, protena cuya presencia en la orina de
pacientes con tubulopatas ha sido establecida
hace tiempo.
Los antgenos de clase II estn constituidos
por dos cadenas peptdicas de P.M. 28 kD y 33
kD.
En los captulos 12 y 20 se encontrar infor
macin detallada sobre las principales caracte
rsticas de esos antgenos.
M itgenos y superantgenos
A diferencia de lo que ocurre con los ant
genos, que activan a los linfocitos interaccionando a travs de receptores especficos, los
mitgenos son capaces de inducir divisin de
linfocitos T y B en forma no especfica. Algu
nos de ellos son efectivos sobre clulas B,
otros sobre clulas T o ambas. Son activado

res policlonales pues inducen al mismo tiem


po la proliferacin de clulas provenientes de
diferentes clones. Entre los mitgenos se en
cuentran las leetinas, como la concanavalina
A (Con A) y la fitohemaglutinina (PHA), pro
tenas con actividad mitognica sobre los lin
focitos T, con capacidad para unirse a grupos
de carbohidratos distintos. Ello les permite in
teraccionar con glucoprotens de membranas
iniciando la transduccin de seales y activa
cin celular.
La Con A es un tetrmero que fija hidratos
de carbono que contienen grupos a-D maosa
o a-D glucosa terminales o grupos relaciona
dos. Otras leetinas tienen capacidad para unirse
a otros azcares.
Los lipopolisacridos bacterianos (LPS) ob
tenidos de la pared celular de bacterias Gram
negativas son activos mitgenos de linfocitos B
y su efecto se ejerce por interaccin del lpido
A, uno de sus constituyentes, con componentes
de la membrana plasmtica.
Hay mitgenos capaces de activar los hnfo
citos T y B; uno de ellos es el extrado de la
hierba carmn o pokeweed (PWM).
En los ltimos aos se han descrito antge
nos exgenos de origen bacteriano, en especial
la enterotoxina de Staphylococcus aureus, y de
otros m icroorganism os como Streptococcus,
Micoplasma, que para inducir una respuesta in
m une especfica no necesitan procesam iento
previo y su degradacin a pptidos para su pre
sentacin por los antgenos del CMH-II al re
ceptor de los linfocitos T (RCT) (vase cap. 2).
Tienen capacidad para activar clulas T que ex
presan secuencias comunes en sus RCT, inde
pendientemente de la efectividad por el com
plejo pptido-CMH. Dada esta peculiaridad se
los denom ina superantgenos. En el ratn se
han demostrado que los antgenos endgenos
M is, al igual que algunos antgenos virales,
presentan tambin esta caracterstica.
Los superantgenos son activos mitgenos;
la mayor parte son protenas bsicas pequeas
de 20-30 kD y para inducir una respuesta se
unen a la parte lateral de los antgenos del
CMH-II, que no es la convencional. Su unin
al RCT no se efecta a travs del complejo po
lim o rfo c o d ific a d o p o r lo s g e n es V a JaVpD(3jp, o sitio de unin al antgeno, sino
que se une lateralmente a determinadas secuen
cias codificadas por genes V|3 (fig, 4-9), Este
puente de unin que se crea entre el CMH-II y
el RCT es el que provoca la agregacin del re
ceptor y la activacin celular,
A diferencia de lo que ocurre con los antge
nos convencionales donde el reconocim iento
por el linfocit T est restringido a pptidos del
antgeno procesado asociados a antgenos el
CM H-II propios, para los superantgenos no

Antgenos
existe tal restriccin; pueden ser presentados
por antgenos CMH-II alogeneicos y sin nece
sidad de procesado previo por las clalas pre
sentadoras del antgeno.
Aproximadamente 1/10-^ a 1/10 de la pobla
cin total de linfocitos responden al estmulo
de un antgeno dado. Teniendo en cuenta que
en el ratn el nmero de genes V[3 identifica
dos es 20 y en el hombre 50, y asumiendo que
todos los genes se expresaran con igual fre
cuencia, sera lgico esperar que 1/20 a 1/50 de
la poblacin de linfocitos T interaccionen con
un determ inado superantgeno. Sin embargo
ese nmero es 4-5 veces menor porque los superantgenos no a reconocen los productos co
dificados por todos los genes V(3, sino a algu
nos de ellos. Este elevado nmero de clulas
que se activan producen una exagerada sntesis
de citoquinas las que son responsables, en gran
parte, del shock txico que se produce en es
tos casos.
A NLISIS ANTIGNICO
Su empleo en bacteriologa, micologa, viro
loga, hematologa y aun en gentica es muy
til y frecuente, ya que mediante l se puede
llegar a demostrar diferencias entre microorga
nismos, clulas o protenas que por otros m
todos hubiese sido imposible. Consiste en esta
blecer, utilizando antisueros especficos m ono
valentes, cules son los constituyentes antignicos del agente en estudio. Claro est que en
cada caso ser necesario disponer de reactivos
obtenidos con el mximo de garanta, pues ad
sorciones insuficientes o inadecuadas, o inm u
nizaciones incorrectas de los animales de ex
perim entacin, pueden llevar a confusiones.
En la actualidad el uso de anticuerpos mono
clonales ha resuelto muchos de esos inconve
nientes.
Gran parte del adelanto de la microbiologa,
de la inm unologa aplicada, de la serologa
diagnstica y del esclarecim iento de nuestra
ignorancia sobre problemas transfusionales y
de incom patibihdad maternofetal, se deben a
que, mediante correctos anlisis antignieos,
han podido establecerse relaciones entre entes
que no se supona em parentados. El conoci
miento de la composicin antignica correcta
y completa de muchos microorganismos, como
el complejo grupo de la familia de las Enterobacteriaceae, ha p erm itid o seleccio n ar los
reactivos adecuados para un diagnstico de
certeza y muchas veces una correcta teraputi
ca, as como, en stos y otros casos, establecer
las caractersticas de una bacteria que permiten
utilizarla en la preparacin de una vacuna.

71

DEM OSTRACION
DE LA A N TIG EN IC ID A D
Cuando un vertebrado adulto es inoculado
con una sustancia extraa, si sta posee cap a
cidad inmunognica pondr en marcha los m e
c an ism o s que e n g e n d ra rn la re s p u e sta al
agente agresor real o potencial.
Cmo puede ponerse en evidencia esa trasformacin? Ello puede lograrse por la investi
gacin en la sangre circulante de los agentes
inmunolgicos, los anticuerpos; o mediante la
inoculacin de una nueva dosis de antgeno y
la investigacin de la modificacin de la cap a
cidad reactiva normal de los tejidos, si es que
el mismo rene las condiciones necesarias.
En el primer caso el nivel de los anticuerpos
form ados puede establecerse por d iferentes
mecanismos, ya sea por precipitacin especfi
ca en medios lquidos o gelosados; por dosaje
del complemento consumido, en especial con
lecturas del 50%de hemlisis; por hem oagluti
nacin pasiva; por radioinmunoanlisis (RIA);
inm unofluorescencia (IF); enzim oinm unoan
lisis (ELISA), o bien por cuak]uier otro m eca
nism o inm unolgico que perm ita evidenciar
anticuerpos en sangre.
La investigacin de la capacidad reactiva al
terada de los tejidos puede efectuarse ex p eri
mentalm ente por anafilaxia activa, anafilaxia
pasiva o anafilaxia cutnea pasiva. Todos estos
mecanism os se describen en los captulos 11
y 13.
Como algunos antgenos tienen capacidad
para estim ular una respuesta inmune m ediada
por clulas, ms que por anticuerpos, en casos
particulares la inmunogenicidad de una sustan
cia debe ser investigada mediante el empleo de
mtodos inmunolgicos destinados a detectar
la inmunidad celular (vanse caps. 13 y 36).

D IN M IC A DE LO S A NTG EN OS
La accin de los antgenos, su dinm ica,
puede demostrarse de diferentes maneras. La
anafilaxia activa y pasiva ha aportado datos de
valor sobre el particular. Estando dicha dinm i
ca establecida por la intensidad de la pro d u c
cin de anticuerpos, slo las dos primeras eta
pas de la anafilaxia, la sensibilizacin y la fase
de incubacin, sirven para ponerla de m anifies
to, ya que en el desencadenamiento de la reac
cin alrgica intervienen otros factores ajenos a
la interaccin antgeno-anticuerpo que no son
especficos y ponderables en la determinacin
de la antigenicidad. Cuando un animal es in o
culado con un antgeno y se sensibiliza, indica
que ha elaborado anticuerpos, y el tiempo de

72

Aspectos bsicos de la inmunidad


Linfocito Th

CDS

RCT

Fiia

F ig . 4 -9 . M ecan ism o de in te ra c
ci n d e un s u p e ra n tg e n o co n el
C M H y el RCT. H ay una unin la
teral con el CM H y con estructuras
codificadas por V p en el RCT, am
bas por fuera de las zonas a las que
.se unen los antgenos convenciona
les. C o m p rese eo n la fig u ra 2-7,
captulo 2.

Ciuia presentadora de Ag

latencia mnimo mide el lapso necesario para


desencadenar el choque anafilctico, cuando se
inocule la segunda dosis.
Si la determinacin de la actividad la haceinos en la priinera etapa, la evaluacin se hace
por la dosis de antgeno capaz de sensibilizar,
en tanto que en la segunda se mide por el tiem
po m nim o necesario para d esen cad en ar la
reaccin. Indudablem ente que esto es vlido
para aquellas respuestas inm unes que cursan
con formacin de anticuerpos homocitotpicos,
pero no para los que carecen de esa propiedad.
Si bien este mtodo fue muy usado en un co
mienzo para estudiar la inmunogenicidad, en la
actualidad, el desarrollo de una m etodologa
muy sensible para el dosaje de anticuerpos, co
mo lo son la hemoaglutinacin pasiva de Boyden, la inmunofluorescencia, la inmunoenzimo
loga, el empleo de radioistopos, y muy espe
cialmente la determinacin del ntimero de clu
las linfoides formadoras de placas de hemlisis,
etc., permiten evaluar la actividad de los antge
nos sin recurrir al estudio de la anafilaxia; esto
es muy iinportante sobre todo para los antge
nos o conjuntos antignicos de gran tamao, co
mo las bacterias, los hemates y las clulas.
A dyuvantes y exaltacin de la antigenicidad
Si bien mediante estmulos a repeticin pue
de mejorarse la respuesta inmune como conse
cuencia de la capacidad adyuvante intrnseca
que tienen algunos antgenos, en otros casos se
consigue una exaltacin de su inm unogenici
dad aadindoles productos con capacidad ad
yuvante extrnseca, los que pueden convertir
en inmunognicas a sustancias que no lo son, o

hacer que antgenos dbiles induzcan una ade


cuada respuesta inmune. Estos productos se co
nocen con el nombre genrico de adyuvantes,
los que pueden ser antignicos o no. Entre los
primeros se encuentran los bacilos acidorresistentes, bacterias gramnegativas y sus endotoxi
nas, la Bordetella pertussis, los anticuerpos, la
fitoheinaglutinina, etc. Los no antignicos pue
den tener distinto origen, como el hidrxido de
aluminio, el alumbre, el fosfato de calcio, la
protamina-cinc, la tapioca, la lanolina, aceites
minerales, agentes tensioactivos, etctera.
No todos los adyuvantes acttian de la misma
manera, ya que algunos exaltan la respuesta in
mune humoral y otros la mediada por clulas.
Se considera que los macrfagos, los linfoci
tos B y los hnfocitos T son las clulas que par
ticipan en la exaltacin de la antigenicidad. Los
antgenos particulados o solubles transform a
dos en particulados por accin de un adyuvante
seran procesados por los macrfagos, los que
im pediran su fuga y facilitaran su presenta
cin a las clulas inm unocompetentes, m ejo
rando de este modo la respuesta. Para algunos
de los adyuvantes parecera necesitarse la parti
cipacin de los linfocitos T y B en la exaltacin
de la respuesta inmune humoral. Experimental
mente se ha comprobado que hay adyuvantes
que no aumentan la produccin de anticuerpos
en animales depletados en clulas T; otros en
cambio parecen actuar directamente sobre las
clulas B, ejerciendo sobre las tnismas un efec
to mitognico. La dosis de antgeno influye en
estos casos, ya que se ha observado una menor
dependencia T cuando la cantidad de inmun
geno inoculada es grande. El requerimiento de
clulas T o B ha sido estimado experimental

Antgenos
mente sobre la base de la influencia del adyu
vante en la produccin, por parte del husped,
de anticuerpos de tipo IgM o IgG. Como se sa
be, los primeros no son T dependientes, y s lo
son los segundos.
Varios son los mecanismos por los cuales los
adyuvantes pueden ejercer su efecto. Este pue
de deberse a una liberacin lenta y gradual del
antgeno cuando se encuentra adsorbido a geles
coloidales como el hidrxido de aluminio, fos
fato de calcio, etctera, o emulsionado en veh
culos oleosos. La vida media del antgeno au
menta, con prolongacin de su capacidad estim ulativa, lo que asegura una m ayor y m s
efectiva produccin de anticuerpos.
Otro hecho que asegura una mejor respuesta
inmune es la acumulacin de clulas inmunocompetentes en los rganos linfoides estimula
dos por el antgeno, el que se produce a expen
sas de las clulas circulantes. La mayor parte
de los adyuvantes inducen este fenmeno y al
gunos de ellos -especialm ente el adyuvante de
Freund completo constituido por un vehculo
oleoso adicionado de b acilo s tu b ercu lo so s
m uertos- producen un granuloma en el punto
de inoculacin, donde se observa acumulacin
de macrfagos y linfocitos, los que de este m o
do estn ms expuestos a la accin del inm un
geno. Este fenmeno es ms evidente para los
antgenos particulados, con adyuvancia intrn
seca, y para los de alto peso molecular adsorbi
dos o emulsionados. El secuestro de clulas de
la circulacin y su reclutam iento en rganos
linfoides se logra con adyuvantes no inmunognicos, y este efecto es ms duradero que el
producido directamente por los antgenos. A de
ms, el sitio de acumulacin de clulas linfoi
des depende de la va de inoculacin del ant
geno; el bazo es el destinatario si la inyeccin
se hizo por va venosa o intraperitoneal, y el
ndulo linftico drenante si se us la va subcu
tnea. Parecera que este reclutamiento de clu
las inmunocompetentes sera indispensable pa
ra iniciar la respuesta inmune, y que la funcin
de los adyuvantes sera la de exaltarla.
Hay adyuvantes que actuaran activando a
los macrfagos, los que por intermedio de la
interleuquina 1 (IL-1) sintetizada estimularan
a los linfocitos y facilitaran su respuesta. Otros
en cambio estimularan directamente la prolife
racin y diferenciacin celular. Algunos, como
los lipopolisacridos, son mitgenos selectivos
de los linfocitos B, mientras que otros, como la
vitamina A, lo hacen directamente sobre las c
lulas T. Podran actuar tambin modificando la
permeabilidad de la membrana citoplasmtica
de los linfocitos facilitando la captacin del an
tgeno.
Se considera que ciertos adyuvantes pueden
ejercer su accin variando la cintica de la

73

reaccin inmune humoral y celular, interfirien


do en la regulacin de la sntesis de los anti
cuerpos de tipo IgM, estimulando la adenilci
clasa con aumento de AMP cclico, el que par
ticipa en la regulacin de la sntesis de cidos
nucleicos y proliferacin celular, etctera.
M ediante la participacin de uno o varios de
los mecanism os m encionados los adyuvantes
exaltan la inmunogenicidad, haciendo que ant
genos dbiles se transformen en buenos induc
tores de la respuesta inmune.
En los ltimos aos se ha aislado un pptido
de la pared celular de las bacterias que forman
parte del adyuvante de Freund completo, que
luego fue sintetizado. Es el A^-acetilmuramil-Lalanil-D-isoglutamina, al que se lo designa muramil dipptido (MDP), y constituye la copia
de un fragmento del peptidoglicano bacteriano.
Este producto y otros derivados han dem ostra
do poseer un notable poder adyuvante y ser
moduladores activos de la respuesta inmune.
O tra manera de conseguir inmunopotenciacin es incorporando los antgenos proteicos en
vesculas lipdicas o liposomas y en los llam a
dos complejos lipoflicos inmunomoduladores
(ISCOMs), usando como intermediarios deter
gentes o saponina, los que luego son. elim ina
dos. Los liposomas se preparan mezclando, en
determinadas condiciones, la protena antigni
ca con fosfolpidos. Se forman vesculas rodea
das por una bicapa en la que se incorporan las
protenas, las que orientan sus residuos hidroflicos hacia la fase acuosa y los hidrofbicos ha
cia el centro de la vescula. Los ISCOMs resul
tan de la interaccin entre colesterol, Quil A y
residuos hidrofbicos de las protenas a incor
porar como inmungenos. Dado que el Q uil A
es una m ezcla de varias saponinas, distintas
partidas de Quil A pueden incidir en la obten
cin de ISCOMs inmunognicos.
Los ISCOMs tienen capacidad para inducir
la formacin de anticuerpos y de activar linfo
citos Te especficos, as como de Th.
Para la formacin de los ISCOMs las prote
nas a incorporar deben tener restos hidrofbi
cos. Es por ello que las protenas liberadas de
membrana, que contienen un fragmento trans
membrnico de naturaleza hidrofbica, form an
buenos ISCOMs. Tambin han resultado efec
tivas protenas modificadas por tratamiento con
cido palmtico, el que es fijado covalentemen
te. Por este procedimiento protenas no hid ro
fbicas como ovoalbmina y seroalbmina bo
vina, pueden originar ISCOMs inmunognicos.
Los ISCOMs pueden ser usados como inm u
ngenos por va parenteral y oral, con buenos
resultados. En el ltim o caso inducen buena
respuesta de IgA.
En los liposomas e ISCOMS las protenas
incorporadas se expresan como inm ungenos

74

Aspectos bsicos de la inmunidad

multivalentes. Estos adyuvantes han comenza


do a usarse en la inmunizacin humana, sobre
todo en la formulacin de vacunas que usan
pptidos como inmungenos, los que por s so
los, en su mayora, son poco efectivos.
Tiem po de perm anencia de los antgenos
La mayora de los investigadores adm iten
que los antgenos permanecen un tiempo relati
vamente corto en el organismo y se metabolizaran de la mism a m anera que lo hacen las
restantes protenas que llegan al organism o.
Otros han podido dem ostrar, trabajando con
azoprotenas y protenas unidas a haptenos
marcados con '^'I, ^C, ^S o
su permanen
cia por tiempo prolongado en el organismo ino
culado. Es de hacer notar que en estas investi
gaciones se ha demostrado, en clulas obteni
das de bazo, radiactividad correspondiente a
1.000 molculas de antgeno por clula, cinco
meses despus de la inoculacin, y que se redu
ca a 100 a los ocho o nueve meses. Estas expe
riencias m uestran la perm anencia por cierto
tiempo de materiales antignieos marcados, no
as la totalidad del antgeno. Es probable que el
material proteico, que acta como transporta
dor no especfico, experimente la degradacin
que normalmente ocurre en esas sustancias. La
posibilidad de que la radiactividad detectada
sea consecuencia de productos de radilisis no
puede ser descartada.
Investigaciones recientes han dem ostrado
que las clulas dendrticas localizadas en el ba
zo retienen antgeno sin procesar, fijado a su
mem brana, por largos perodos. E ste hecho
cumplira un papel muy importante en el man
tenimiento de la memoria inmunolgica; esos
antgenos seran los que estimularan en forma
repetida a los linfocitos que cumplen esa fun
cin, asegurando la presencia de clulas capa
ces de reaccionar con sus antgenos especficos
por largos perodos.
Cabe sealar que lo expuesto corresponde a
antgenos proteicos, ya que los de naturaleza
poliosdica, que se degradan con dificultad,
permanecen en el organismo del husped por
largos perodos. Esta eliminacin lenta puede
producir acumulacin, la que a su vez puede
dar lugar a una parlisis inmunolgica con au
sencia de respuesta inmune (vase cap. 15).
B IB L IO G R A FA
A lien, P. M.; A ntigen processing at the m olecular level .
Im m unology Today <S: 210-213, 1987.

B en jam in y col.: T h e an tig en ic stru ctu re o f p ro tein s: a


reappraisal. En: A n n Rev Im m unol (W E Paul, C G arrison
Fathm an, H M etzger, Eds), 67-102, 1984.
Berzofsky, J. A. & Berkow er, I. J.: Im m unogenicity and
an tig en s tru c tu re . En F u n d a m en ta l Im m u n o lo g y (W .
Paul, Ed.) Cap. 8, 1993, 3" ed. R aven Press.
C iba F oundation Sym posium : Im m unopotentiation. E lse
vier Publ. N. Y ork, 1973.
C ohn S, Sadun EH: Im m unology o f Parasitic Infections.
Blackw ell Sci Publ O xford, 1976.
C hase M W , K uhns W J (Ed): S p ecificity o f S ero lo g ical
Reactions: L andsteiner C entenial. N Y A c a d Sci 169: I293, 1970. N Y ork A cad Sci Publ N York.
G lynn LE , Stew ard M W ; Im m unochem istry: A n A d va n ced
Textbook. J W iley and Sons. N Y ork y Londres, 1978.
In te rn a tio n a l A ss o c ia tio n o f B io lo g ic a l S ta n d a riz a tio n
(Eds): Use a n d Standarization o f C hem ical D efin ed A n
tigens. S. K arger, 1986.
K ab at EA : B lo o d G roup S u sta n ces. A cad em ic P ress N
Y ork, 19.56.
K abat EA: Stru ctu ra l C oncepts in Im m unology an d Im m unochem istry. H olt, R inehart y W inston. N Y ork, 1976.
Ludevitz O, S taub AM , W estphal O: Im m unochem istry of
O and R antigens o f S alm onella and related Enterobacteriaceae. B act R ev 30:192, 1966.
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P ap p en h e im er A M , G il D M : D ip h te ria. R ec en t stu d ies
h av e cla rifie d the m o le c u la r m e ch an ism s in v o lv ed in
this pathogenesis. S cience 182:353, 1973.
R ace R R; S anger R: B lo o d G roups in M an, 6th ed, B lack
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Rini, J. M ., S chultze-G ahm en V. & W ilson, 1. A.: S tru c
tu r a l e v id e n c e fo r in d u c e d it as a m e e h a n is m fo r
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1992.
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P o ly s a c c h a r id e s . E ls e v ie r N o rth H o lla n d P u b lis h in g
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Sela M; Im m unological studies with synthetic p o ly p ep ti
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A cadem ic Press, N Y ork, 1965,
S tew art-T u ll D E S , D av ies M (Eds): Im m u n o lo g y o f the
b acterial cell envelope. John W iley and Sons Ltd,, 1985,
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antigenicity. En A n n R ev Im m unol (W E Paul, C G arrison
F athm an, H M etzger, Eds), pp 501-536, 1985,
S zentivanyi A, F ried m an H (Eds); Y irus, Im m u n ity an d
Im m unodeficiency. P lenum Publ, 1986,
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W illiam s CA, C hase M W (Ed): M ethods in Im m u n o lo g y
cmd Im m u n o c h em istry, vols I y II, A cad em ic P ress. N
Y ork, 1967-68.

Anticuerpos

RICARDO MARGNI

GENERALIDADES
Son protenas que elaboran los vertebrados
al ser estimulados con un antgeno y que tienen
capacidad para reaccionar especficamente con
el inductor.
Esto permite excluir de la definicin a otras
sustancias que se encuentran en los humores de
los animales, que reaccionan de manera ms o
menos especfica con ciertos agentes, pero que
no son anticuerpos; nos referimos a algunos in
hibidores de enzimas proteolticas presentes en
el organismo que, si bien tienen accin espec
fica sobre ellas, sus concentraciones no aumen
tan ni sufren modificaciones por la inoculacin
de dichas enzimas.
La mayor parte de los anticuerpos se halla en
el plasma circulante como constituyentes pro
teicos de aqul. Antes de analizar y tratar de
establecer su ubicacin entre las protenas, es
conveniente aclarar conceptos que nos van a
permitir comprender mejor algunos resultados.
Los anticuerpos reaccionan especficamente
con los antgenos que les han dado origen y co
mo consecuencia de esa reaccin se produce la
neutralizacin. Cuando esto ocurre en el tubo
de ensayo generalmente sigue un fenmeno vi
sible que puede ser precipitacin, aglutinacin,
bacterilisis, citlisis, etctera, segn las carac
tersticas del antgeno y la presencia o no de
sustancias complementarias. En un comienzo
se dio nombre particular al anticuerpo capaz de
producir uno u otro tipo de reaccin, y se lo lla
m precipitina, aglutinina, anticuerpo fijador
del complemento, bacteriolisina, citolisina, et
ctera, pero estudios posteriores perm itieron
comprobar que un mismo antisuero poda dar
todas o casi todas las reacciones serolgicas in
dicadas, lo que llev a la postulacin de la teo

5
ra unitaria del anticuerpo. Esto ha simplificado
los hechos, pero debemos aclarar que no es ab
soluto ya que, como se ver ms adelante, un
antgeno puede originar ms de un tipo de anti
cuerpo con caractersticas fisicoqumicas dife
rentes, de ah su distinta manera de reaccionar
frente al antgeno y su particular co m p o rta
miento biolgico. Debemos admitir que un an
ticuerpo puede dar una o ms de las reacciones
seiialadas, pero no necesariamente todas. Son
pluripotentes, pero sin alcanzar la totalidad.
Por anlisis electroforticos de sueros de
animales normales e inmunizados, se com pro
b que estos ltimos diferan de los prim eros
en un aumento de la fraccin gammaglobulnica (fig. 5-1), y que haba un gradiente progresi
vo de aumento de dicha fraccin si esos sueros
provenan de un mismo animal en el transcurso
de una inm unizacin. Esto hizo suponer que
los anticuerpos estaban localizados en la frac
cin gammaglobulina, y la demostracin feha
ciente de que as era se tuvo cuando se hicieron
electroforesis simultneas de un suero p ro ce
dente de un animal inmunizado y del m ism o
suero previamente adsorbido con el respectivo
antgeno a efectos de eliminar el anticuerpo.
Como puede verse en la figura 5-2, la depre
sin del pico de las gammaglobulinas es m ani
fiesta en el segundo caso. Esto a su vez indica
que no toda la gammaglobuhna plasmtica tie
ne actividad anticuerpo para el antgeno en es
tudio, sino parte de ella, a la que ha dado en
llamrsela gammaglobulina inmune.
La introduccin de otros mtodos analticos
como la ultracentrifugacin, la electroforesis
en geles en la inmunoelectroforesis sirvi para
com probar que la gammaglobulina no es una
fraccin homognea, sino que puede ser subdividida en diferentes componentes. Ya los in-

74

Aspectos bsicos de la inmunidad

multivalentes. Estos adyuvantes han comenza


do a usarse en la inmunizacin humana, sobre
todo en la formulacin de vacunas que usan
pptidos como inmungenos, los que por s so
los, en su mayora, son poco efectivos.
Tiem po de perm anencia de los antgenos
La mayora de los investigadores adm iten
que los antgenos permanecen un tiempo relati
vamente corto en el organismo y se metabolizaran de la mism a m anera que lo hacen las
restantes protenas que llegan al organism o.
Otros han podido dem ostrar, trabajando con
azoprotenas y protenas unidas a haptenos
marcados con '^'I, *C, ^S o ^H, su permanen
cia por tiempo prolongado en el organismo ino
culado. Es de hacer notar que en estas investi
gaciones se ha demostrado, en clulas obteni
das de bazo, radiactividad correspondiente a
1.000 molculas de antgeno por clula, cinco
meses despus de la inoculacin, y que se redu
ca a 100 a los ocho o nueve meses. Estas expe
riencias m uestran la perm anencia por cierto
tiempo de materiales antignicos marcados, no
as la totalidad del antgeno. Es probable que el
material proteico, que acta como transporta
dor no especfico, experimente la degradacin
que normalmente ocurre en esas sustancias. La
posibilidad de que la radiactividad detectada
sea consecuencia de productos de radilisis no
puede ser descartada.
Investigaciones recientes han dem ostrado
que las clulas dendrticas localizadas en el ba
zo retienen antgeno sin procesar, fijado a su
mem brana, por largos perodos. E ste hecho
cumplira un papel muy importante en el man
tenimiento de la memoria inmunolgica; esos
antgenos seran los que estimularan en forma
repetida a los linfocitos que cumplen esa fun
cin, asegurando la presencia de clulas capa
ces de reaccionar con sus antgenos especficos
por largos perodos.
Cabe sealar que lo expuesto corresponde a
antgenos proteicos, ya que los de naturaleza
poliosdica, que se degradan con dificultad,
permanecen en el organismo del husped por
largos perodos. Esta eliminacin lenta puede
producir acumulacin, la que a su vez puede
dar lugar a una parlisis inmunolgica con au
sencia de respuesta inmune (vase cap. 15).
B IB L IO G R A FA
A lien, P. M.; A ntigen processing at the m olecular level .
Im m unology Today <S: 210-213, 1987.

B en jam n y col.: T h e an tig en ic stru ctu re o f p ro tein s: a


reappraisal. En: A n n Rev Im m unol (W E Paul, C G arrison
Fathm an, H M etzger, Eds), 67-102, 1984.
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an tig en s tru c tu re . En F u n d a m en a l Im m u n o lo g y (W .
Paul, Ed.) Cap. 8, 1993, 3" ed. R aven Press.
C iba F oundation Sym posium : Im m unopotenliation. E lse
vier Publ. N. Y ork, 1973.
C ohn S, Sadun EH: Im m unology o f Parasitic Infections.
Blackw ell Sci Publ O xford, 1976.
C hase M W , K uhns W J (Ed): S p ecificity o f S ero lo g ical
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G lynn LE , Stew ard M W ; Im m unochem istry: A n A d va n ced
Texlbook. J W iley and Sons. N Y ork y Londres, 1978.
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Rini, J. M ., S ehultze-G ahm en V. & W ilson, 1. A.: S tru c
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a n tib o d y -a n ig e n r e c o g n itio n . S cien ce 2 55: 9 6 9 -9 6 5 ,
1992.
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p ro te in an tig en . M o le c u la r Im m u n o lo g y 2 J.-8 0 7 -8 1 0 ,
1986.
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A cadem ic Press. N Y ork, 1965.
S tew art-T u ll D E S , D av ies M (Eds): Im m u n o lo g y o f the
b acterial cell envelope. John W iley and Sons Ltd., 1985.
T aim er E y col: T he atom ie m obility com ponent o f protein
antigenicity. En A m R ev Im m unol (W E Paul, C G arrison
Fathm an, H M etzger, Eds), pp 501-536, 1985.
S zentivanyi A, F ried m an H (Eds): Virus, Im m u n ity an d
Im m unodeficiency. P lenum Publ, 1986.
In te rn a tio n a l A ss o c ia tio n o f B io lo g ic a l S ta n d a riz a tio n
(Eds): Use an d S tandarization o f C hem ical D efin ed A n
tigens. S K arger, 1986.
W eir DM (Ed): H a n d b o o k o f E xp erim en ta l Im m unology,
vol. I. Im m u n o ch em istry . B lack w ell S ci P ubl O xford,
1986.
W illiam s CA, C hase M W (Ed): M ethods in Im m u n o lo g y
cmd Im m u n o c h em istry, vols I y II. A cad em ic P ress. N
Y ork, 1967-68.

Anticuerpos

RICARDO MARGNI

GENERALIDADES
Son protenas que elaboran los vertebrados
al ser estimulados con un antgeno y que tienen
capacidad para reaccionar especficamente con
el inductor.
Esto permite excluir de la definicin a otras
sustancias que se encuentran en los humores de
los animales, que reaccionan de manera ms o
menos especfica con ciertos agentes, pero que
no son anticuerpos; nos referimos a algunos in
hibidores de enzimas proteolticas presentes en
el organismo que, si bien tienen accin espec
fica sobre ellas, sus concentraciones no aumen
tan ni sufren modificaciones por la inoculacin
de dichas enzimas.
La mayor parte de los anticuerpos se halla en
el plasma circulante como constituyentes pro
teicos de aqul. Antes de analizar y tratar de
establecer su ubicacin entre las protenas, es
conveniente aclarar conceptos que nos van a
permitir comprender mejor algunos resultados.
Los anticuerpos reaccionan especficamente
con los antgenos que les han dado origen y co
mo consecuencia de esa reaccin se produce la
neutralizacin. Cuando esto ocurre en el tubo
de ensayo generalmente sigue un fenmeno vi
sible que puede ser precipitacin, aglutinacin,
bacterilisis, citolisis, etctera, segn las carac
tersticas del antgeno y la presencia o no de
sustancias complementarias. En un comienzo
se dio nombre particular al anticuerpo capaz de
producir uno u otro tipo de reaccin, y se lo lla
m precipitina, aglutinina, anticuerpo fijador
del complemento, bacteriolisina, citolisina, et
ctera, pero estudios posteriores perm itieron
comprobar que un mismo antisuero poda dar
todas o casi todas las reacciones serolgicas in
dicadas, lo que llev a la postulacin de la teo

5
ra unitaria del anticuerpo. Esto ha simplificado
los hechos, pero debemos aclarar que no es ab
soluto ya que, como se ver ms adelante, un
antgeno puede originar ms de un tipo de anti
cuerpo con caractersticas fisicoqumicas dife
rentes, de ah su distinta manera de reaccionar
frente al antgeno y su particular co m p o rta
miento biolgico. Debemos admitir que un an
ticuerpo puede dar una o ms de las reacciones
seiialadas, pero no necesariamente todas. Son
pluripotentes, pero sin alcanzar la totalidad.
Por anlisis electroforticos de sueros de
animales normales e inmunizados, se com pro
b que estos ltimos diferan de los prim eros
en un aumento de la fraccin gammaglobulnica (fig. 5-1), y que haba un gradiente progresi
vo de aumento de dicha fraccin si esos sueros
provenan de un mismo animal en el transcurso
de una inm unizacin. Esto hizo suponer que
los anticuerpos estaban localizados en la frac
cin gammaglobulina, y la demostracin feha
ciente de que as era se tuvo cuando se hicieron
electroforesis simultneas de un suero p ro ce
dente de un animal inmunizado y del m ism o
suero previamente adsorbido con el respectivo
antgeno a efectos de eliminar el anticuerpo.
Como puede verse en la figura 5-2, la depre
sin del pico de las gammaglobulinas es m ani
fiesta en el segundo caso. Esto a su vez indica
que no toda la gammaglobuhna plasmtica tie
ne actividad anticuerpo para el antgeno en es
tudio, sino parte de ella, a la que ha dado en
llamrsela gammaglobulina inmune.
La introduccin de otros mtodos analticos
como la ultracentrifugacin, la electroforesis
en geles en la inmunoelectroforesis sirvi para
com probar que la gammaglobulina no es una
fraccin homognea, sino que puede ser subdi
vidida en diferentes componentes. Ya los in-

76

Aspectos bsicos de a inmunidad

Fig. 5-1. Eleetroforesis en acetato de eelulosa de suero de


conejo norm al (a) y sueros del m ism o anim al despus de la
inoculacin de ovoalbm ina (b, c). A m edida que el ttulo
de anticuerpos aum enta se observa increm ento de la frac
cin gam m aglobulina,

munlogos haban observado que algunos anti


cuerpos con igual especificidad para un mismo
antgeno, pero provenientes de animales de dis
tinta especie, tenan caractersticas fisicoqumi
cas diferentes. Igual fenmeno se haba obser
vado en los anticuerpos que aparecan en los
perodos iniciales de una inmunizacin y en los
tardos. Los anticuerpos contra el soma bacilar
y contra las cilias obtenidos por inmunizacin
con Salmonella typhi tenan pesos moleculares
muy distintos.
Todos estos hechos y el desarrollo a un alto
nivel de metodologas analticas fisicoqumicas
aplicadas a la biologa permitieron abordar el
estudio de los anticuerpos y de clulas compro

metidas en su biosntesis en un sentido mucho


ms amplio. Se ha llegado a la conclusin de
que la gammaglobulina inmune no es un tipo
tnico de protena, sino que es una familia a la
que se denomina inmunoglobulinas y en la que,
segtin Heremans, se incluyen todas las globuli
nas con actividad anticuerpo. En el hombre se
han identificado las IgG, IgM, IgA, IgD, IgE
gammaglobulinas, y relacionadas con ellas es
tn las protenas de Bence-Jones halladas en la
orina de enfermos de mieloma (fig. 5-3).
Se las considera como una familia porque en
todas ha sido posible demostrar la funcin de
anticuerpo; son elaboradas por un mismo tipo
de clula, las plasmticas; y adems, actuando
como antgenos, cada una de ellas da reaccio
nes cruzadas con los anticuerpos elaborados
por las restantes. El anlisis qumico ha servido
para reafirmar este agrupamiento. Se ha com
probado que todas tienen una estructura tetrapeptdica bsica, con pptidos compartidos y
diferenciales. Estos pptidos, llamados L y H,
estn unidos entre s covalentemente y se en
cuentran repetidos en la molcula (fig. 5-4).
Estas estructuras tetrapeptdicas pueden en
contrarse bajo form a de m onm eros, com o
ocurre con la IgG, IgD e IgE; de pentmeros,
como en el caso de la IgM; o de monmero, d
mero y trmero, como en la IgA.
Las inmunoglobulinas son glucoprotenas y
el contenido en hidratos de carbono vara para
cada una de las clases.
Las diferentes clases de inm unoglobulinas
normales constituyen una poblacin heterog
nea de molculas y son de origen policlonal.
Esa heterogeneidad es consecuencia de la va
riabilidad de los aminocidos constitutivos, la
que puede deberse a variaciones isotpicas, que

F ig. 5-2. G raficacin de la corrida inm unoelectrofortica de un suero inm une antes y despus de la adsorcin con el an t
g eno especfico. I, eleetroforesis en acetato de celulosa de suero de conejo inm unizado con ovoalbm ina. II, eleetroforesis
d el m ism o suero previa adsorcin con ovoalbiim ina en zona de equivalencia (m uestra concentrada al volum en original
d espus de la adsorcin).

Anticuerpos
son comunes a todos los individuos de la m is
ma especie y que afectan a las distintas clases y
tipos de inmunoglobulinas; a variaciones alot
picas, que diferencian formas polimorfas de in
munoglobulinas, las que no se encuentran pre
sentes en toda la poblacin molecular de una
determinada clase de inmunoglobulina de una
especie animal, y a variaciones idiotpicas, pro
pias y particulares de cada molcula (fig. 5-5),
Las inmunoglobulinas que poseen especifici
dad para un antgeno (anticuerpos) son ms ho
mogneas que las inmunoglobulinas normales,
pues su sntesis depende de un ntmero restrin
gido de clones celulares. Las protenas de m ie
lomas son inmunoglobulinas homogneas por
ser de origen monoclonal (fig. 5-6). Estas han
resultado de extraordinario valor para estudios
secuenciales, ya que, en cambio, por su hetero
geneidad, no se prestan para ello las inmunoglobulinas normales y la mayor parte de los an
ticuerpos.
En los ltimos aos se ha desarrollado una
metodologa que permite obtener por fusin de
clulas tumorales y clulas productoras de anti
cuerpos, hibridomas, con capacidad para pro
liferar in vitro y sintetizar anticuerpos homog
neos. Estas poblaciones moleculares se estn
usando en diferentes laboratorios y en distintas
lneas de investigacin, ya que por clonado y
seleccin se pueden conseguir hbridos que sin
tetizan anticuerpos de la clase y la especifici
dad deseadas.
La diferencia ms apreciable entre las inm u
noglobulinas normales y los anticuerpos es la
capacidad de estos ltimos para reconocer sus
correspondientes antgenos, es decir, su especi
ficidad. En realidad, las inmunoglobulinas nor
males del suero en nada difieren de los anti-

77

F ig. 5-3. Inm unoelectroforesi de su ero hum ano. C o m o


inm unosueros precipitantes se usaron: 1, suero de co n e jo
andhum ano total, i , suero de conejo anti-lgG , 3, su ero de
conejo anti-IgA . 4, suero d e conejo anti-IgM .

cuerpos. Aquellas estn constituidas por una


poblacin molecular infinitamente grande, te
niendo cada una de esas molculas una especi-

Pepsina

Pepsina

Fig. 5-4. Esquem atizacin de una m olcula de IgG (Ig G l). Los nm eros indican las posiciones de los residuos d o nde tiene lugar el clivaje enzim tico. CH O significa hidratos de carbono. Las porciones trazadas con lneas de puntos co rresp o n
den a los fragm entos variables d e las cadenas L y H.

78

Aspectos bsicos de ia inmunidad

F ig . 5-5. a, variaciones isotpicas. A fectan a todos los com ponentes de la clase o subclase de inm unoglobulina y estn lo
calizadas en la parte constante de la cadena H, preferentem ente en el fragm ento Fe; b, variaciones alotpicas. N o estn presentes en todos lo.s com ponentes de una m ism a clase o subclase y perm iten diferenciar poblaciones m oleculares dentro de
ellas. C orresponden a determ inantes antignieos codificados por form as allicas de un m ism o locus. N orm alm ente estn
localizadas en los fragm entos constantes de las cadenas L y H; y c, variaciones idiotpicas. Son propias de cada m olcula y
afectan a los fragm entos variables de las cadenas L y H.

IV

VI

VII

Clones celulares

IgG elaborada -

> a
o
1 ^ 2

Inmunoelectroforesis

4 . ^ / ! \ /\

*\ *\ / t \ / ! \

r T - T T
Suero anti-IgG

F ig. 5-6. Esquem atizacin de una IgG policlonal y monoclonal.

Anticuerpos
ficidad definida. La enorme dilucin de cada
molcula en la poblacin total y el hecho de no
conocer sus especificidades hace que genrica
mente se consideren como no reactivas, cuando
en realidad lo que no tienen es capacidad para
reaccionar con un determinado antgeno en en
sayo.
Para un mejor anlisis nos ocuparemos del
estudio de las caractersticas generales de los
componentes de esta fam iha y sus relaciones
con la actividad anticuerpo, as como de los di
ferentes factores que regulan su produccin y
condicionan la especificidad.
De todas las inmunoglobulinas, la mejor es
tudiada ha sido la IgG ; las investigaciones
efectuadas en las restantes estn en su mayora
relacionadas con esos estudios. Es por ese m o
tivo que habr de ser analizada en forma ms
pormenorizada.
La nomenclatura con que se identifican es la
recomendada por la Organizacin Mundial de
la Salud.
IN M U N O G L O B U L IN A G (IgG )

Sinonimia. 1 S y globulina; globulina.


Por electroforesis aparece como una banda
algo difusa, en la zona catdica. El ancho de la
banda depende del soporte de corrida usado.
Cuando se usan geles la misma es estrecha, a
diferencia de lo que ocurra en los prim eros
anlisis efectuados, en los que se empleaba pa
pel como soporte. Por inmunoelectroforesis, la
IgG da una banda de precipitacin que se ex
tiende desde la zona de menor movilidad hasta
las a 2 globulinas, con zonas de precipitacin
de mayor intensidad para las molculas menos
mviles, que son las evidenciables por electro
foresis en soportes inertes.
La IgG tiene una constante de sedimentacin
de aproxim adam ente 7 u n id ad es S vedberg
(6,56 0,32) y ste es el motivo por el que se
la conoce comnmente como 7 S gammaglobu
lina. Su peso molecular, calculado por diferen
tes mtodos, oscila entre 140 y 160 kD. Es la
inmunoglobulina de menor contenido en hidra
tos de carbono, un 2,6%, de los cuales 1,2%
corresponden a hexosa y 1,14% a hexosamina;
la relacin hexosamina/hexosa es de 0,94.
Frente al antgeno especfico se com porta
como anticuerpo bivalente y tiene capacidad
para fijar el complemento, fijarse a piel heter
loga y atravesar la placenta. Porter estudi la
degradacin sufrida por la gammaglobulina de
conejo cuando era tratada con papana cristali
zada activada con cistena y posteriorm ente
cromatografiada en columna de resinas celul
sicas de intercambio inico. Estudios similares
se han efectuado con gamm-aglobulina humana.

79

Por este procedim iento se obtienen dos fra g


mentos, uno de movilidad electrofortica lenta
(Fab) y el otro de desplazamiento rpido (Ec).
En ei primero de ellos se encuentran locali
zados la actividad anticuerpo, los factores ge
nticos Km (anteriormente designados Inv) y
los determinantes antignicos comunes a otras
inmunoglobuhnas, en tanto que el Ec, fragm en
to cristalizable, si bien carece de actividad anti
cuerpo, est relacionado con otras propiedades
inherentes a la molcula entera y posee los d e
terminantes antignicos propios y los factores
genticos Gm exclusivos de la IgG. Este frag
mento es el que contiene la mayor proporcin
de los hidratos de carbono, calculada en apro
ximadamente un 75%. Es el responsable de la
fijacin de los anticuerpos a piel heterloga; el
que fija el complemento cuando forma parte
del complejo antgeno-anticuerpo; el que d eter
mina la capacidad de esta inmunoglobulina p a
ra atravesar la placenta; el que contribuye al
control del ritmo catablieo, y el que se fija a la
protena A del Staphylococcm aureus.
El fragmento Fab, si bien rtiene la actividad
anticuerpo, se comporta como univalente. Los
pptidos Fab y Fe tienen la misma constante de
sedimentacin, 3,5 S y un peso molecular apro
ximado de 55 kD. Esto ocurre cuando el tiem
po de digestin vara entre 1 y 4 horas; en cam
bio, si se lo prolonga a 16 horas, aparece un
pptido F e antignicamente deficiente con re s
pecto a Fe (figs. 5-7 y 5-8).
P or digestin trp tic a parcial se o b tien en
p p tid o s sim ilares, a los que se d en o m in a
Fab(t) y Fc(t).
Si la IgG es clivada con pepsina durante 18
horas, se obtienen fragmentos con una constan
te de sedimentacin de 5,5 S y peso molecular
90 kD. Siguen comportndose como anticuer
pos bivalentes precipitantes y se denom inan
F(cb)2. Los fragmentos Fe obtenidos por d i
gestin papanica son destruidos durante el tra
tam iento ppsico, por desdoblamiento en p e
queos pptidos dializables. Si el tiempo de di
gestin es menor, se obtiene un pptido deriva
do del Fe, el pF c, muy similar al fragm ento
F e resu ltan te de la digestin papanica. El
fragmento F (ab)2 tratado con mereaptoetanol
u otro reductor se transforma en un pptido que
tiene una constante de sedimentacin de 3,5 S e
inm unolgieam ente se com porta como a n ti
cuerpo univalente. Esto fue lo que llev a co n
siderar que los anticuerpos bivalentes estn
constituidos por dos subunidades Fab unidas
por un puente disulfuro y un fragmento Fe que
aparece en el digesto papanico y es degradado
por la pepsina, ello deducido de su comporta
miento frente a los agentes hidrolizan tes. Si la
digestin papanica se lleva a cabo con papana
insoluble en agua (papana unida a un copol-

80

Aspectos bsicos de a inmunidad


F ig. 5 -7. 1, IgG h u m an a d ig erid a c o n .
p a p a n a -c is te n a , d u ra n te 4 h o ra s , a,
Protena no digerida; b, m ezcla de Fab y
Fe; c, pptidos pequeos (F e ). 2, IgG
h u m a n a d ig e rid a con p apana-ci.stena
durante 16 horas. En am bos casos la se
paracin se hizo por filtracin a travs
de S ep h ad ex G-IOO, y la elu ci n con
buffer de fosfatos 0,01 M, NaCl 0,15 M.
pH 7,6. 3, separacin de los fragm entos
Fab y Fe, provenientes del pico b, por
c ro m a to g ra fa en D E A E -c e lu lo sa . La
elucin se hizo con gradiente de fo sfa
tos 0,005 M /0 ,1 M, pH 7,6.

10

20 30 40 50

60

70

90 100 110 120 130 140

O*'*

Tubos

mero de p-aminofenilalanina y leucina), solubilizando luego los productos con detergentes


(dodecil sulfato de sodio), se obtiene un frag
mento F (ab)2 similar al anterior, pero de P.M.
84 kD, que se desdobla con cistena en dos
fragmentos Fab. En la figura 5-4 se encuentran
sealados los residuos donde las enzimas m en
cionadas producen las escisiones.

En condiciones especiales de clivaje, el frag


mento constituido por las porciones variables
de las cadenas L y H puede ser escindido del
resto de la molcula de inmunoglobulina. Se
designa fragmento Fv.
Cuando la IgG se reduce con m ercaptoeta
nol, se alquila con iodoacetamida para evitar la
reoxidacin y se trata con cido actico o pro-

F ig. 5-8. Inm unoelectroforesis de IgG hum ana y sus fragm entos obtenidos por digc^iiiMi paj)aiiis'a. i. a la^ - loras; I I , a
las 16 horas.

Anticuerpos

81

mi de eluido
Fig. 5-9. Separacin de cadenas H y L por filtracin a travs de Sephadex G-lOO estabilizado con cido propinico 1 M,
El producto filtrado proveniente de una IgG hum ana tratada con m ereaptoetanol, alquilada con iodoacetam ida y d ia liz ad a
contra cido propinico 1 M. C om o eluyente se utiliz cido propinico 1 M.

pinico, se desdobla en cadenas peptdicas de


dos tipos; las livianas L {ligltt), de peso mole
cular aproximadamente 23 kD, portadoras de
factores Km y determinantes antignieos com
partidos con las restantes inmunoglobulinas, y
las pesadas, H {heavy), de peso molecular 52
kD, con especificidad propia y factores genti
cos Gm. Su separaciSn se consigue filtrando
por Sephadex G-lOO y empleando como elu
yente la misma solucin cida (fig. 5-9).
Las cadenas L, comunes a todas las inmunoglobulinas, son de dos tipos, llamadas kappa
( k ) y lambda {X), que se encuentran presentes
en la poblacin de cada inmunoglobulina. No
obstante, las molculas son simtricas y cada
una posee dos cadenas K o dos cadenas X, las
cuales difieren en su antigenicidad y aminoci
dos constitutivos. En una poblacin normal de
molculas de IgG, aproxim adam ente un 6065% de ellas posee cadenas L tipo k , y un 3035%, cadenas L tipo % (relacin k!X = 1,5). El
aminocido C terminal de las cadenas k es cis
tena, y el de las cadenas X, serina, precedido
de cistena, aminocido ste de suma importan
cia que contribuye a la formacin de los puen
tes S-S entre las cadenas L y H.
Distintos investigadores han efectuado anli
sis secuenciales de cadenas L tipo K y X y han
dem ostrado que estn constituidas por 214
(213-218) aminocidos. Para estos estudios se
han empleado los mtodos generales usados en

el anhsis proteico. Se han efectuado hidrlisis


previas con bromuro de ciangeno (BrCN), que
rompe las uniones del grupo -COOH de la metionina con el grupo -NH^ del aminocido si
guiente, transformando la metionina en hom oserina u homoserina lactona; y estos pptidos,
o sus productos de digestin por accin de la
tripsina, quimotripsina u otros degradantes, han
sido analizados para tratar de establecer, con
todos esos datos, la estructura de la protena
inicial. Para la determinacin del aminocido
C-terminal generalmente se us el mtodo de la
carboxipeptidasa y para el N -term inal el de
dansyl o el de Edman, sobre todo para las de
gradaciones seriadas.
Todas estas investigaciones han perm itido
com probar que las cadenas L estn form adas
por dos fragmentos de 107 aminocidos cada
una. La porcin N-terminal es variable, con un
total de 75-77 residuos sustituibles (-70% de
variabilidad), en tanto que la C-terminal es esta
ble para cada tipo de cadena. Cuatro residuos
cistena, dos en la zona variable y dos en la es
table, originan puentes -S-S-, los que form an
dos anillos o bucles, de aproximadamente 60
aminocidos cada uno, denominados Vj y C,
que le confieren cierta estabihdad a la molcula.
La fraccin variable presenta zonas estables
(fig. 5-10). Dicha variabilidad, sobre todo la
correspondiente a algunos residuos, com o se
ver m s adelante, desem pea un papel m uy

82

Aspectos bsicos de la Inmunidad

C uadro 5-1. Relaciones entre el fenotipo Km


y estructura primaria de la regin constante de
las cadenas K
Fenotipo
Km

()

( 1. 2)
(3)

R esiduo de am inocidos
153
V al
A la
A la

191
Leu
Leu
Val

importante en la actividad anticuerpo de la mo


lcula. Cuando se habla de secuencia variable
se quiere significar que existen muchos lugares
ocupados por aminocidos diferentes, en otras
cadenas del mismo tipo estudiadas.
En la regin constante de las cadenas k se
han observado variaciones, que estn relacio
nadas con tipos serolgicos hereditarios {aloti
pos). Los marcadores genticos Km se heredan
por una serie de tres alelos; K m , Km''^ y K m l
Los anlisis secuenciales han perm itido esta
blecer las relaciones entre -la estructura prima
ria de estas cadenas y los antgenos Km (1),
Km (1,2) y Km (3) (cuadro 5-1).
Variaciones similares ocurren en las cadenas
X, pero aqu no se trata de marcadores genti
cos, ya que estn distribuidos entre las diferen
tes cadenas X de todos los individuos. Se deno
minan isotipos y a esas variedades serolgicamente identificables se las conoce como marca
dores Oz, Kern, Mz y Mcg, que pueden ser po-

C u a d ro 5-2. V ariaciones iso tp ica s en la


estructura prim aria del fragm ento constante
de las cadenas X
Isotipo

Posicin

Oz

193

Kern

156

fvlz

147/174

M cg

116/118/167

Residuo

Variante

Lys
Arg
Gly
Ser
V al/A sn
Ala/Lys
A sp/Thr/l^ys
A la/Se/Thr

+
+
_

~
+
-

sitivos o negativos segn que den reacciones es


pecficas o no con los correspondientes antisue
ros. Las relaciones entre ellos y la estructura
primaria del fragmento constante de las cadenas
\ comprometido figuran en el cuadro 5-2.
Si bien los primeros 20-25 residuos de las
cadenas L de tipo K y pueden presentar varia
ciones consideradas cada una de ellas en con
junto, actualmente y sobre la base de un mayor
conocimiento de secuencias, el anlisis detalla
do de esos residuos ha permitido subdividir a
las cadenas K en los subgrupos Kj, k , . k y
y a las cadenas A. en los subgrupos
>.j,
Xjy,
y
cada uno de ellos con los prime
ros 22 residuos constantes. Estos residuos son
los ubicados antes de la primera cistena N-ter
minal.

I Cadena H
F ig . S-10. Representacin esquem tica de una cadena L de tipo K. (Elaborada con datos publicados por Puttnam y M ils
tein.)

Anticuerpos

83

C uadro 5-3. Secuencia amino-terminal de los subgrupos de cadenas L humanas de los tipos K y X
S e c u e n c ia
Sub^
grupo 1

Vk, A.sp
Vk,i Asp
VKhi Glu
V k,v A sp

lie
lie
lie
le

la,

S er
Ser
Tyr
S er
S er
Phe

PCA
i a PCA
KX.||j Ser
(-)
PCA
KX^^ Asp

11

12

M el
M et
Leu
M et

Thr
Thr
Thr
Thr

Gln
Gln
Gln
G ln

S er
S er
S er
Ser

P ro
P ro
P ro
P ro

S er
L eu
Gly
Asn

Ser
Ser
Thr
Ser

Leu
L eu
L eu
L eu

S er
Pro
S er
A la

Ata
Ser Val
V al T hr Pro
Leu
S e r P ro
V al
S e r Leu

Val
Val
Val
V al
A la
Val

S er
S er
S er
Ser
S er
S er

G ly
Gly
V al
Val
G ly
Glu

Val
Ala
Glu
Glu
A la
M et

L eu
L eu
L eu
L eu
L eu
I.e u

T h r Gln P ro P ro S er
Thr G ln P ro Ala S er
Thr Gln P ro P ro S er
Thr G ln Asp Pro Ala
T h r G ln P ro P ro S er
Thr Gln P ro His S er

(-)
(- )
(- )
(- )
(- )
(-)

13

14

3
Gln
Val
V al
V al

16
G ly
G ly
G ly
G ly

A la P ro G ly
S e r P ro G ly
Ser P ro G ly
A la Leu G ly
S e r Pro G ly
S e r P ro G ly

17
A sp
G lu
G lu
G lu

18
Arg
Pro
Arg
Arg

79
V al
A la
A la
A la

20

21

Thr lie
Ser lie
Thr L eu
T h r He

Glu Agr Val T hr lie


G ln Ser
lie
iT. h r lie
Gln Thr A la Arg lie
Gln Thr Val Arg lie
G ln S er
V al T h r le
Lys Thr Val Thr Phe

22
Thr
Ser

23

S er
A sn

Cys
Cys
Cys
Cys

S er
er
oSc.
Thr
Thr
S er
S er

Cys
Cys
Cys
Cys
Cys
Cys

P C A es el s m b o lo para el re sid u o d erivado del cido p irro lid -2 -o n a-5 ca rb o x lic o


L os am in o c id o s d estac ad o s co rresp o n d e n a residuos in v aria b le s en todas las c a d e n a s secuenciadas.

El cuadro 5-3 muestra los prototipos de los


diferentes subtipos de cadenas L, y el cuadro
5-4 los productos de combinacin de los frag
mentos VL y CL para cada tipo de cadena.
Las cadenas K y X que se diferencian entre s
por la secuencia de los aminocidos de la mitad
C-terminal, poseen tambin ciertas fracciones
comunes (cuadro 5-5). Las fracciones N-termi~
nal en ambos tipos de cadenas presentan varia
ciones individuales, razn por la cual no pue
den tenerse en cuenta para la diferenciacin.
Como consecuencia de su distinta estructura
secuencial, las cadenas k y difieren antigni
camente. Teniendo en cuenta que se encuentran
presentes en todas las inmunoglobulinas, stas
han sido subdivididas en dos grupos, las llama
das tipo L (I) que se caracterizan por tener ca
denas L de tipo K y las llamadas tipo L (II), que
contienen cadenas L tipo X (fig. 5-11).

C uadro 5-4. Recombinacin de los fragm en


tos variables de las cadenas K y X con sus
respectivos fragmentos constantes para form ar
los diferentes subtipos de cadenas L

Las cadenas H tienen diferente denom ina


cin segn la inmunoglobulina de que p ro ce
den. Se las designa y para la IgG, \i p a ra la
IgM, a para la IgA, 8 para la IgD y e para la
IgE. De todas ellas la mejor conocida es la y,
de la cual han sido hallados en el hombre cua
tro tipos diferentes: y,, y^, yj y y^ (cuadro 5-6).
Se conocen estudios secuenciales completos
de cadenas H (y) (cuadro 5-7) y exmenes par
ciales de algunas cadenas y de p rotenas de
mielomas y de enfermedad de Franklin o de
las cadenas pesadas .
Se ha podido comprobar que la fraccin Nterminal de cadenas y, obtenidas por pronasa,
es Glu-Val-Thr, pero el NH^ grupo del am ino
cido terminal est bloqueado, formando un ani
llo derivado del cido pirrolidn carboxlico; de
ah que su secuencia sea PC A -V al-Thr. Los
primeros 107 a 132 residuos N-terminales de la
cadena H presentan gran variabilidad. Se ha
observado en cambio gran identidad entre pp
tidos correspondientes a la zona C-terminal, de
las protenas de mieloma pertenecientes al m is
mo tipo antignico y gentico.
El octadecapptido C-terminal, separable por
BrCN, ha sido estudiado en diferentes cadenas
H, presentando gran estabilidad. Se han obser
vado mnimas variaciones para las cadenas y, y
y^ de origen humano y para las cadenas y de co
nejo y caballo (cuadro 5-8).
Sobre la base de estos estudios, las cadenas
H pueden ser divididas en dos porciones, la Fd,
que posee el aminocido N-terminal y se co
rresponde con la cadena L, y la Fe, poseedora
del aminocido C-terminal. Esta fraccin nor
malmente es constante en el mismo tipo de ca
dena, no as la Fd. En el fragmento Fe se en
cuentran ubicados los determinantes antignicos especficos de la IgG y la mayor parte de
los factores genticos Gm. La porcin Fd pue
de ser dividida tambin en mitades. La N-ter-

84

Aspectos bsicos de la inmunidad


Tipo K

Tipo L

ic
)T
-jy

IgA

X
XI

|K

X,
X|
X

X
XI

IgE
|K

|K
B.Jones

__JK

X mmmrnmmium

Fig. 5-11. E s t r u c t u r a t e t r a p e p t d i c a d e l a s c i n c o c l a s e s d e i n m u n o g l o b u l i n a s d e o r i g e n h u m a n o c o n s u s d o s t i p o s ( k a p p a y
la m b d a ) d e c a d e n a s liv ia n a s .

C u ad ro 5-5. Cadenas L de tipo Ky X. Comparacin de los fragmentos C-terminales


lio

115

120

125

C ad en a K A R G -T H R -V A L -A L A -A L A -P R O -S E R -V A L -P H E -IL E -P H E -P R O -P R O -S E R -A S X -G L U -G I.N 4 .E U -L Y S -S E R
C ad en a X G I.N ^ P R O -L Y S ~ A L A -A L A -P R O -S E R -V A L -T H R -L E U 4 > H E -P R O -P R O -S E R -S E R -G L U -G L U -E E U -G L N -A L A

'TyCT

130

140

145

GLY-THR-ALA-SER-VAL^VAL-CYS-LEU-LEU-ASN-ASN-PHE-PRO-TYR-ARG-GLU-ALA-LYS-VAL-GLN-TRP-I.YS
A S N iY S ^ A L A -T H R -L E U ^ V A L -C Y S -JJU -IL E ^ S E R ^ A S P -P H E -T Y R ^ P R O -G L Y -A L A -V A L -T H R ^ V A L -A I.A -T R P -L Y S
150

155

160

165

170

VAL-ASP-ASN-ALA-I,EU-GLN-SER-GLY-ASN-SER-GLN-GLU-SER-VAL^THR-GLU-GI.N^ASP-SER-LYS-ASP-SER
ALA-ASP-SER-SER-PRO-VAL-LYS-AEA~GLY-VAL-GLU^THR-THR-THR-PRC>SERT.YS^GLN-SER-ASN-ASN-I.YS
175

180

185

190

THR-TYR-SER^LEU-SER-SER-THR-LEU-THR-LEU-SER-LYS-ALA-ASP-TYR-GLU-LYS-HlS-I.YS^j''g'^TYR-ALATYR-ALA-ALA-SER-SER-TYR-LEU-SER-LEU-THR-PRO-GLU-GLN^TRP^LYS-SER-HIS-ARG^SER-TYR-SER

195

200

205

210

C Y S -G L U -V A L -T H R -H IS -G L N -G L Y -L E U -S E R -S E R -P R O -V A L -T H R -L Y S -S E R J> H E -A S N -A R G -G L Y -G L U -C Y S
C Y S -G L N -V A L -T H R -H IS -G L U -G L Y -

'E E l

S E R -T H R -V A L -G L U -L Y S -T H R ^ V A L -A L A -F R O ^ T H R -G E U -C Y S -S E R

Anticuerpos
Fragmento
variable

F ig . 5 -1 2 . E s
q u e m a d e la e s
tr u c tu r a d e u n a
c a d e n a H (y).

Fragmento constante

minal, constitutiva del fraginento Fv, es muy


variable y participa en la formacin del sitio de
combinacin, en tanto que la otra mitad consti
tutiva del fragmento Fb, es estable. El fragmen
to Fd presenta hom ologa con la cadena L.
Anlisis estructurales han permitido comprobar
que en las cadenas H existen cuatro bucles o
anillos similares a los observados en las cade
nas L, denominados Vj_j, C l, C,_,2 y C,_,3, los
dos primeros ubicados en el fragmento Fd y los
dos restantes en el Fe (fig. 5-12).
El cuadro 5-9 define los diferentes fragmen
tos constitutivos de una molcula de inmunoglobulina, los que se encuentran representados
en las figuras 5 -13a y 5 -13b.
La secuencia de aminocidos de las regiones
variables de las cadenas pesadas (Vj.,) de las in
m unoglobulinas hum anas, p ro v en ien tes de
mieloinas, fueron clasificadas originalm ente
por Kabat en tres grupos, de acuerdo con la ho
mologa en la secuencia aminoacdica. E stu
dios posteriores han hecho posible el reordena
miento de stos, sobre la base del 80% por lo
menos de homologa a nivel de secuencia de
nucletidos, en 6 fam ilias ( V h I , V h2, V h 3 ,
Vh4, V h5 y V h6), de manera similar a lo que
ocurre con las cadenas L. Las seis secuencias
prototipos de dichos subgrupos figuran en el
cuadro 5-lOa. Recientemente la familia V h I ha
C uadro 5-6. Cadenas H (humanas)
inm uno- D enom inacin
globulinas de la cadena H Subtipos

IgG

Yl
Y2

y.
y.

Ig M
IgA

IgD
IgE

8
e

1
2
-

85

D enom inacin
del subtipo de
inm unoglobulinas
Ig G l
lg G 2
Ig G 3
Ig G 4
Ig A l
Ig A 2
-

sido reclasificada en V H I y V H 7, quedando


estas familias conformadas por 11 y 1 genes
V h funcionales, respectivamente. Por otro lado,
estas fam ilias, sobre la base de su filogenia,
han sido agrupadas en 3 clanes. El clan I con
tiene las famihas V h I , V h5 y V h7; el clan 2
contiene las familias V h2, V h4 y V h6; el clan
III contiene la fatnilia Vh3.
De los aproximadamente 95 genes VH cono
cidos (vase cap. 6), slo 51 tienen reordenado
el marco de lectura (open reading frame) por
lo que son funcionales y participan en la crea
cin de la variabilidad de las cadenas H; los res
tantes no tienen abierto el marco de lectura, son
seudogenes o no han sido secuenciados (cuadro
5 -10b). Estos fragmentos variables de cadenas
H son comunes a las diferentes inmunoglobuli
nas, de lo que se deduce que las distintas cade
nas H resultan de la recombinacin de un frag
mento H variable (V^,) comn y un fragmento H
constante (Cj^) propio para cada inmunoglobuli
na, aspecto que se discutir ms adelante.
Protenas de mielomas, completas, han sido
analizadas con el objeto de obtener pptidos
constituidos nicamente por fragmentos de ca
denas L, de cadenas H y mezcla de ambas uni
das por puentes S-S. Despus de la reduccin
de dichos puentes con mercaptoetanol se hicie
ron los anhsis de los pptidos, algunos de los
cuales coincidieron con los ya conocidos en los
estudios efectuados separadamente en las cade
nas L y H de dichas protenas. Esto ha perm iti
do determinar la ubicacin de los puentes S-S
dentro de las cadenas FI y las uniones L-H, as
como del hidrato de carbono ligado a las inm u
noglobulinas.
Del anlisis de inmunoglobulinas de mielomas, que son homogneas, se ha concluido que
hay cuatro subclases de IgG. En la Ig G l, la
unin H-L se produce entre la cistena C-terminal o preterminal de las cadenas L y la cistena
de la cadena H ubicada en el residuo 220. Po
see adems dos puentes disulfuro intercadenas
H-H. En las Ig02, IgG3 e IgG4 la unin H-L

86

Aspectos bsicos de la inmunidad

C u ad ro 5-7. Secuencia de los aminocidos constitutivos de una cadena H (y) de Ig G l humana


1

10

20

PC A -V al-G In-L eu-V al-G ln-Ser-G ly-A la-G lu-V al-L ys-Lys-Pro-G ly-Ser-Ser-V al-Lis-V al30

40

Ser-C ys-L ys-A Ia-Ser-G ly-G ly-T hr-Phe-Ser-A rg-Ser-A la-Ile-Ile-Trp~V al-A rg-G ln-A la50

60

Pro-G ly-G ln-G ly-Leu-G lu-Trp-M et-G ly-G ly-Ile-V al-Pi'o-M et-Phe-G ly-Pro-Pro-A sn-Tyr70

80

A la-G ln-Lys-Phe-G ln-G ly-A rg-V al-Thr-IIe-T hr-A la-A sp-G lu-Ser-Thr-A sn-T hr-A la-Tyr90

100

M et-G lu-L eu-Ser-Ser-L eu-A rg-Ser-G lu-A sp-T hr-A la-Phe-T yr-Phe-C ys-A la-G ly-G ly-T yr110

120

G ly-Ile-Tyr-Ser-Pro-G lu-G lii-Tyr-A sivG ly-G ly-Leu-V al-T hr^V al-Ser-Ser-A la-Ser-T hr130

140

L ys-G ly-P ro-Ser-V al-Phe-Pro-L eu-A la-P ro-Ser-Ser-L ys-Ser-T hr-Ser-G ly-G ly-T hr-A la150

160

A la-L eu-G ly-C ys-L eu-V al-L ys-A sp-T yr-Phe-Pro-G lu-P ro-V al-T hr-V al-Ser-T rp-A sn-S er170

180

G ly-A la-lxu-T hr-Ser-G ly-V al-H is-T hr-Phe-Pro-A la-V al-L eu-G ln-S er-S er-G ly-L eu-T yr190

200

Ser-Leu-S er-S er-V al-V aL T hr-V al-P ro-S er-S er-Ser-L eu-G ly-T hr-G ln-T hr-T yr-Ile-C ys210

220

A sn-V al-A sii-H iS'Lys-Pro-Ser-A sn-Thr-Lys-V al-A sp-L ys-A rg-V al-G lu-Pro-Lys-Ser-C ys230

240

A sp-L ys-T hr-H is-T hr-C ys-Pro-Pro-C ys-Pro-A la-Pro-G lu-L eu-L eU 'G ly-G ly-Pro-Ser-V al250

260

Phe-Leu-Phe-Pro-Pro-Lys-Pro-L ys-A sp-Tlir-Leu-M et~ lle-Ser-A rg-T hr-Pro-G lu-V al-T hr270

280

C ys-V al-V al-V al-A sp-V al-Ser-H is-G lu-A sp-Pro-G ln-V al-Lys^^Phe-A sn-Trp-Tyr-V al-A sp290

300

G ly-V al-G ln-V al-H is-A sn-A la-L ys-T hr-L ys-Pro-A rg-G lu-G ln-G ln-T yr-A sx-S er-T hr-T yr310

320

A rg-V al-V al-S er-V al-L eu-T hr-V al-L eu-H is-G ln-A sn-T rp-L eu-A sp-G ly-L ys-G lu-T yr-L ys330

340

C ys-L ys-V al-S er-A sn-L ys-A ia-L eu-P ro-A la-Pro-Ile-G lu-L ys-T hr-Ile-Ser-L ys-A la-L ys350

360

G ly-G ln-P ro-A rg-G lu-P ro-G ln-V al-T yr-T hr-L eu-P ro-Pro-S er-A rg-G lu-G ln-M et-T hr-L ys370

380

A sn-G ln-V al-Ser-L eu-T hr-C ys-L eu-V al-L ys-G ly-Phe-T yr-Pro-S er-A sp-lle-A la-V al-G lu390

400

Trp-G Iu-S er-A sn-A sp-G ly-G lu-P ro-G lu-A sn-T yr-L ys-T hr-T hr-P ro-Pro-V al-L eu-A sp-S er410

420

A sp-G ly-S er-P he-P he-L eu-T yr-S er-L ys-L eu-T hr-V ai-A sp-L ys-S er-A rg-T rp'G ln-G lu-G ly430

440

A sn-V al-Phe-Ser-C ys-S er-V ai-M et-H is-G lu-A la-L eu-H is-A sn-H is-T yr-T hr-G ln-L ys-S erLeu-Ser-L eu-Ser-Pro-G ly

Anticuerpos

87

C uadro 5-8. Secuencia del octadecapptido carboxiterminal de cadena,s pesadas de diferentes


inmunoglobulinas IgG
/ i , (Humina):
^G^ (H um ana):
(Conejo):
(Caballo):

(M et) - HLS - G L U - A LA ^ LE U ^ HiS ^ ASN - HLS ~ T Y R - TH R - G L N ^ LY S ^ SER - LE U - SER - LEU - SER - PRO - GLY - (C O O H )
(M et) - HLS - G LU - ALA - LE U - HIS - ASN - A R G -

PHE - T H R - G L N - LYS - SER - LE U - SER - LEU - SER - PRO - GLY - (C O O H )

(M et) - H IS - G LU - ALA - LEU - HiS - ASN - HLS - TY R - T H R - G L N - LYS - SER -

ILE - SE R - A R G - SER - PRO - GLY - (C O O H )

(M et) - HLS ^ GLU ^ A LA ^ LE U - HS ^ ASN - H IS - TY R - T H R - G L N - LYS - SER - V A L - SE R - LYS - SER - PRO - GLY - (C O O H

C u a d ro 5-9. D efinicin y caractersticas de los diferentes fra g m en to s constitutivos d e las


inmunoglobulinas
Fragm ento
H

Cadena peptdica pesada, con caracteres propios para cada clase de inm unoglobulina. Existen dos cad en as
H idnticas po r m olcula de inm unoglobulina.

C adena peptdica liviana, com partida p or las diferentes clases de inm unoglobulinas. Existen dos ca d en as L
idnticas po r m olcula de inm unoglobulina.

Fab

C onstituido po r una cadena L y el fragm ento H y-C ^l de u n a cadena pesada. Se lo obtiene por d ig e sti n papanica. Se com porta fi'ente al antgeno com o ligando univalente.

Fe

D m ero constituido por dos fragm entos


de ca d en a pesada unidos por los puentes disulfuro c o rres
pondientes a la zona de la bisagra. Se obtiene por digestin papanica. N o expresa actividad anticuerpo.

F(ab)2

C onstituido p or dos fragm entos F ab unidos por puentes disulfuro. Se lo obtiene por digestin p p sic a d u
rante 18 hs. Se com porta frente al antgeno com o ligando bivalente. T iene capacidad p ara p recip itarlo p e
ro no expresa otras propiedades del anticuerpo com o fijacin del com plem ento, pasaje placentario, etc.

F ab

Se obtiene por reduccin del fragm ento (F (ab)2 con m ereaptoetanol y bloqueo de los grupos-SH co n io
doacetam ida. Est constituido por el fragm ento Fab y restos de la regin bisagra.

F e

Es un dm ero del fragm ento Cj_j3 de ca d en a H. Se obtiene por digestin p rolongada con papana.

Fd

E st form ado por el fragm ento V jj-C^l de cadena H. Se lo obtiene por reduccin y desnaturalizacin del
fragm ento Fab,

Fv

Constituye la parte variable del fragm ento Fab. Es un dm ero de V h-V, .

p F c

Es sim ilar al F e , R esulta de digestiones cortas con pepsina,

Fb

Constituye la parte constante del fragm ento Fab, Es un dm ero de Cj^,l-C,,

C uadro 5-lOa. Secuencia de los primeros 30 aminocidos N-terminales (F R l) correspondientes


al fragmento variable de las 6 familias de cadenas H humanas
V H l ( / I g G l )
P ca-V a l-G ln -L e v i-V a l-G to -S e r-G ly -A la ~ G lu -V a l-L y s-L y s-P ro -G iy -S e i-S e i-V a l-L y s-V a l-S e r-C y s-L y s-A la -S e r-G ly -G ly -T h r-P h e -S e r(;)
V H 2 (COR I g G l )
P ca-V al-T Iir-L e u -A rg -G lu -S er-G ly -P ro -A Ia-L e u -V a l-L y s-P ro -T h r-G ln -T h r-L eu -T h r-L eu -T h r-C y s-T lir-P h e-S er-G ly -P h e-S e r-L e u -S er('2 )
V H 3 ( I g G A l)
G lu -V a l-G ln -L e u -L e u -G lu -S er-G ly -G ly -G y -L e u -V a l-G ln -P ro -G ly -G ly -S e r-L e u -A rg ~ L eu -S er-C y ,s-A la-A la-S er-G ly -P h e-T lir-P h e -S er (3)
V H 4 (X A C /lg M )
P ca-V al-G ln -L eu -G ln -G ln -T rp -G iy -A la-G ly -L eu -L eu -L y s-P ro -S er-G lu -T h i-L eu -S er-L eu -T h r-C y ,s-A la-V al-T y r-G ly -G ly -S e r-P h e-S e r (4)
V H 5 (gen 5 J R f)
G lu -V a l-G ln -L e u -V a l-G ln -S e r-G ly -A la -G lu -V a l-L y s-L y s-P ro -G ly -G lu -S e r-L e u -L y s-V a l'S e r-C y s-L y s-G ly -S e r-G Iy -T h r-S e r-P h e -T h r (5)

V m ig e n lG l)
G ln-V al-G Jn -L eu -G ]n ~ G ln -S er-G ly -P ro -G ly -L eu -V al-L y s-P ro -S e r-0 1 n -T h r-L e u -S e r-L eu -T h r-C y s-A la-l)e-S er-G ly -A ,sp -S e r-V a l-S er6 )

(I), (2), (3): S eq u en c es o f p ro te in s o f im m u n o lo g ica l in tere st, F o u rth E dil,, 1987 (K a b a t E, y col,)
(4): J. Biol. Chem., 2 6 6 :2 8 3 6 -2 8 4 2 , 1991
(5): EM BO J., 7:727-738, 1988
(6: Eur. J. Immun., 20:351-3,56, 1990
P C A es el s m b o lo p a ra cl re s id u o deriv a d o del cido p irro ld -2 -o n e-5 -ca rb o x lic o

88

Aspectos bsicos de la Inmunidad

C u ad ro 5-lOb. Contenido en genes Vh del locus funcional en cromosomas 14


Vh I

Con m arco de lectura reordenado


C on m arco de lectura no reordenado
Pseudogenes
N o secuenciados
Total

II
1
4
1
17

Vh 2

V h3

Vh 4

Vh 5

Vh 6

3
0
1

22
6
21
2
51

11
0
)
1
13

2
1
O

0
4

0
3

0
O
0
1

Vh 7

Total
51
9
30
5
95

E lab o rad o con datos to m ad o s d e G. P, C o o k e l.M .T o n iliso n . Immunology Today, 16: 237, 1995.

se produce entre los residuos cistena de las ca


denas L en las posiciones indicadas y los de las
cadenas H ubicados al comienzo de la porcin
constante del fragmento Fd (aproxiinadamente
residuo 140). Adems, el nmero de puentes
disulfuro intercadenas FI-H es cuatro, once y
dos, respectivamente. La zona de la bisagra de
la IgG3 es de mayor tamao que en las restan
tes subclases, a causa de que un fragmento del
ADN del gen que codifica para Cy (vase cap.
6) se ha cuadruplicado. Tiene 62 residuos re
sultantes de la unin de un segmento de 17 re
siduos seguidos en posicin C-terminal de tres
F (a b )2

fragmentos idnticos de 15 residuos cada uno.


Ello hace que su peso m olecular sea de 170
kD. La IgG4 no fija el complemento, la IgG2
no se fija a piel heterloga, y slo las IgGl e
igG3 tienen capacidad opsonizante y son sensi
bles a la accin proteoltica de la papana en
ausencia de cistena (fig. 5-14). La subclase
con mayor actividad fijadora del complemento
es la IgG3, que a su vez es la de menor vida
media (8 das).
La relacin cadenas k/X para las diferentes
subclases de IgG es la siguiente: IgG l = 2,4;
IgG 2= l,l;Ig G 3 = l,12;IgG 4 = 5.

Anticuerpos

89

F ig . 5 - 1 3 b . D ib u jo s d el
esqueleto de los earbonos
a co rresp o n d ie n tes a una
m olcula de IgG com pleta,
su fragm ento Fv, la regin
de la bisagra y el fragm en
to Fe. (C o m p o sic i n e la
borada con partes de las fi
guras publicadas p or P ad
lan E A , A n a to m y o f lite
antibody m olecule. M o le
cular Im m unology, 31: 169,

1994.)

Bisagra

CH2

Fe

Todas estas investigaciones efectuadas sobre


estructuras primai'ias de inmunoglobulinas han
llevado a la formulacin de la hiptesis de una
evolucin estructural de las cadenas L tipo K o
X, a partir de un gen ancestral comn. La ho

mologa estructural observada entre las cadenas


L y H sostiene la hiptesis de una evolucin
comn y una diferenciacin primaria de los ge
nes que gobiernan esta sntesis (fig. 5-15).
Es posible que el ancestro slo tuviera 300

90

Aspectos bsicos de la inmunidad

IgG,

IgG,

C/3
i L

lgG4

F ig . 5-14. E squem a estructural de las diferentes subclases


de IgC hum ana.

ERA

AOS
(millones)

nucletidos y que codificara para un pptido de


100 aminocidos (un bucle); por duplicacin
gnica y plegadura intragnica se originaron los
genes que gobiernan la sntesis de las distintas
cadenas L y H. Ello habra surgido con la evo
lucin. De las cadenas H, las primeras en dife
renciarse fueron las jj. y luego lo habran hecho
las restantes. En la figura 5-15 puede verse esa
evolucin en el curso del tiempo y las especies.
Cada m olcula de IgG es bivalente, o sea
que tiene dos sitios de combinacin para el de
terminante antignico especfico, que est si
tuado en el dominio formado por las regiones
variables de las cadenas L y H, y ambas contri
buyen a la formacin del sitio de combinacin.
En la naturaleza slo han sido hallados anti
cuerpos bivalentes para un solo determinante
antignico. No se conocen anticuerpos heteroligados naturales.
Todos estos estudios sobre productos de de
gradacin de IgG y su reactividad han llevado
a la esquematizacin de su molcula. Una de
las ms aceptadas ha sido la propuesta por Por
ter (fig. 5-4).
Se han analizado con el microscopio electr
nico los productos de interaccin de la IgG an
ticuerpo antidinitrofenol con el dihapteno co
rrespondiente unido por cadenas de -C H ^ -.
Igualmente han sido examinados los productos
de reaccin del anticuerpo completo y los obte
nidos por digestin ppsica (Eab^) y papanica
(Eab). Se pudo comprobar que, cuando el que
reacciona es el anticuerpo completo, se forman

A, X

|J,,

Ii^a,

ttj Y, Yj, Y3 Y4 8

ESPECIES
Primates

Kenozoica

-6 0

Aves

-200

IVIesozoica

Reptiles
Anfibios
Peces
Paleozoica

-5 0 0

plegadura intragnica
duplicacin gnica

F ig . 5-15. E volucin de las cadenas L y H de las inm unoglobulinas a partir de un gene ancestral comiin. (Tom ado de E.
V an Loghem . A nn. N . Y ork A cad. Sci. 190: 137, 1971.)

Anticuerpos

91

Fig. 5-16. Microscopa clcclriiiica. A: l"Ci de concjo ainidiiiilriilv-iuil al nlcr.iccoiiar cdu IXNI- M l - i ( '!Ij;, N(I l)X I'. H:
La misma imnunoglobulina previamente tratada con pepsina. (Tomado de Valentine, R.A. y Green, N. iVI. J. M ol. Biol.,
27:615, 1967.)

predom inantem ente figuras triangulares con


mamelones en los extremos, los cjue desapare
cen si el anticuerpo ha sido sometido previa
mente a digestin ppsica (fig. 5-16). Si el trata
miento fue papamico no se forman figuras geo
mtricas. De ello se dedujo que la IgG se ase
meja a una Y con los dos sitios reactivos en los
extremos superiores (fig^. 5-17). Su tamao ha
sido calculado en 200 de ancho. La figura
5-18 representa los tringulos formados por la
interaccin de tres molculas de IgG con tres
molculas del dihapteno, que corresponden a
las figuras observadas al microscopio electrni
co. Los trabajos mencionados han servido, ade
ms, para poner en evidencia que la formacin
de figuras geomtricas triangulares slo tiene
lugar cuando el puente que une los dos radicales
difenilo tiene un mnimo de seis -CH^-. Si bien
la estructura en Y es la que se observa cuando
la IgG ha reaccionado con el ligando, no se tie
ne seguridad sobre su conformacin cuando se
encuentra libre en solucin. Hay quienes sostie
nen que la indicada en la figura 5-4 podra ser la
correcta, en tanto que otros, basados en estudios
de diferentes tipos, consideran que la estructura
de la IgG libre es una T, la que dada su flexibi
lidad adquirira la forma de Y al reaccionar con
un ligando, exponiendo de este modo ciertos re
ceptores ocultos como seran los que facilitan la
fijacin del componente C lq del sistema com
plemento (fig. 5-19). Estudios de difraccin de
rayos X efectuados con inmunoglobuhnas mo
noclonales cristalizadas parecieran confirmar la
estructura en forma de Y.
Todas las inmunoglobulinas contienen hidra
tos de carbono, pero ellos no molestan en el es

tudio de sus estructuras-, pues se encuentran uni


dos a sus molculas a travs de restos de aspa
ragina y son fcilmente separables por hidrli
sis.
Las frmulas representativas de la IgG se
ran Y2K2 y 72^2IN M U N O G L O B U L IN A M (Ig M )

Sinonimias: yM globulina: 19 S inm unoglo


bulina; macroglobulina. Representa la m s pe
sada de las globulinas del sistema gamma.
Desde hace tiempo se conoca la existencia
de anticuerpos de alto peso molecular, pero sus
caractersticas fisicoqumicas y relaciones in
munolgicas y genticas con las otras globuli
nas inmunes han sido determinadas con poste
rioridad a los estudios reahzados con IgG.
Su concentracin en el suero normal es esca
sa, pero en los ltimos tiempos se ha logrado
conocerla m ejor com o consecuencia d e una
profundizacin en los estudios sobre algunas
p ato lo g as, com o la m a cro g lo b u lin em ia de
Waldenstrom y el hallazgo del factor reum atoi
deo. Este y la globulina aislada de la enferm e
dad citada son 19Sy globulinas y se encuentran
en altas concentraciones. La designacin de
19Sy globuhna se hace con el objeto de recor
dar su velocidad de sedimentacin equivalente
a 19 unidades Svedberg. Su peso molecular es
970 kD y ha sido calculado por ultracentrifuga
cin. Exmenes de este tipo evidencian hetero
geneidad de a IgM y ello se debe a que, si bien
el componente ms importante tiene una cons
tante de sedimentacin de 19 unidades Sved-

92

Aspectos bsicos de la inmunidad

Fig. 5-19. Representacin esquem tica de la m olcula de


IgG segn Edelm an. ; hidratos de carbono.

F ig . 5-17. Estructura propuesta para la IgG por V alentine


y O reen de acuerdo con observaciones hechas a nivel de
m icroscopia electrnica.

berg, existen siempre fracciones adicionales


que se encuentran en menor proporcin y po-

seen velocidades de sedimentacin de 29 S y


35-40 S, que constituyen polmeros de la 19 S
gammaglobulina.
Esta protena tiene una movilidad electrofo
rtica que va desde la zona media de las gam
ma hasta las betaglobulinas.
Su contenido en hidratos de carbono es apro
ximadamente del 12% con un 5,2% de hexosa

NOg
F ig . 5-18. Esquem atizacin de las figuras triangulares con m am elones en los extrem os observadas al m icroscopio electr
nico cuando interaccionan anticuerpos (IgG ) de conejo anti-D N P y el dihapteno correspondiente. Si la reaccin se realiza
con los productos de digestin ppsica y el dihapteno, se form an figuras triangulares carentes de m am elones, de lo que se
deduce que los m ism os corresponden al fragm ento Fe de la IgG. Para que la reaccin se produzca, el nm ero de - d i z
que unen los dos grupos dinitrofenol (D NP) debe ser superior a seis.

Anticuerpos

T ~T

t/5

- 88-

SS

-88h b h h h b b

93

-S 9 ~

88-

Ii b i

aCOOI

O co

-S S

coo-

nK

SS

/
00

\ i

F ig. 5-20. Estructura esquem tica de IgM m onm era (A) e IgM polim rica (B).

y 2,9% de hexosamina, lo que determina una


relacin hexosamina/hexosa de 0,55. Por ultracentrifugacin preparativa, crom atografa en
columnas de D EA E-celulosa o filtracin por
geles se la puede obtener pura. C antidades
apreciables se pueden conseguir a partir de sue
ros de pacientes con m acroglobulinem ia de
Waldenstrm.

Cuando su peso molecular es el indicado, se


ha determinado que su valencia es predom inan
temente pentavalente, aun cuando posee otras
cinco valencias de menor afinidad. Su frm ula
sera (iJ-jKj), y (M-25^2)5- Recientemente se h a de
mostrado en el plasma humano la presencia de
IgM constituida por la polimerizacin de 6 uni
dades monomricas, lo que estara relacionado

94

Aspectos bsicos de ia inmunidad

F ig . 5-2 1 . M icro sco p ia e lectr n ica de u n a m o lcu la de


IgM en la que se puede apreciar su estructura en form a de
estrella. (T om ado de F einstein, A. y col.: A nn. N. York
A cad. Sci., 190: 104, 1971.)

con la cantidad de cadenas J que sintetiza el


plasmocito (vase ms adelante). Aquellas c
lulas con bajos contenidos de cadenas J secre
tan IgM-exmero (igM)6, secretando IgM-pentmero (IgM)5 las clulas plasmticas que tie
nen alto contenido de cadenas J. Los mitgenos
y polisacridos de la pared celular de bacterias,
con subunidades de carbohidratos repetidas, in
ducen en los linfocitos B produccin de IgM en
ausencia de linfocitos Th cooperadores y sin la
participacin de IL-2. En estos casos la sntesis
de IgM-exmero se ve favorecida. Fija el com
plem ento y su capacidad de com binacin es
mayor con antgenos particulados que con los
solubles (fig. 5-20). Observada al microscopio
electrnico por el mtodo de la tincin negati
va, tiene aspecto estrellado, con un centro en
forma de pentgono y cinco prolongaciones la
terales (fig. 5-21).
Cuando la IgM es tratada por mercaptoetanol, se disocia en subunidades 7 S, que conser
van las caractersticas de antigenicidad de la
molcula total, no as la actividad de anticuer
po plurivalente, si es que la molcula la posea.
La recom binacin de las 7 S subunidades se
consigue si el mereaptoetanol es eliminado por
dilisis. Estas 7 S subunidades son estables si
despus del tratamiento con mereaptoetanol se
impide la reoxidacin con iodoacetamida. Se
comportan como anticuerpos univalentes aun
cuando estn constituidas por dos cadenas L y
dos cadenas H (P.M. 65 kD). Ello se debe a
que al combinarse con el antgeno no originan
complejos suficientemente grandes como para
precipitar o aglutinar, como consecuencia de
algn im pedim ento estrico. Que se trata de
anticuerpos bivalentes, no obstante su aparente
com portam iento de univalentes, ha sido de
mostrado mediante la preparacin de hbridos y
por estudios de interaccin primaria.

La IgM da reactividad cruzada con la IgG,


siendo responsable de ello el pptido L. La trip
sina d iv a la molcula de IgM por encima del
puente disulfuro in tercadena H, originando
Fab|i monomrico y Fc|0.5 (pentamrico). Si la
IgM es reducida por mereaptoetanol en presen
cia de urea, se obtienen cadenas L similares a
las que se encuentran en las IgG, siendo esta
fraccin de la molcula, al igual que en el caso
anterior, el lugar donde se encuentran locahza
dos los determinantes antignieos comunes y
los factores genticos Km. Las cadenas H tie
nen caractersticas propias y particulares. Se co
noce el anlisis secuencial de cadenas jj, com
pletas. Fi logenti camente se considera que stas
son las cadenas H ms antiguas, de las que se
diferenciaron las cadenas y hace 200 millones
de aos y las a hace 300 millones de aos.
Los factores genticos Gm, especficos de la
inmunoglobulina, no se encuentran en la IgM.
Algunos anticuerpos, que se forman por in
m unizacin con antgenos T -independientes
(polisidos, antgenos somticos de Salmonella
typl%i) y algunas isohemoaglutininas, son IgM
globuhnas. En algunos animales de experimen
tacin e incluso en el hombre, en el curso ini
cial de una inmunizacin con antgenos T-dependientes, se forman anticuerpos IgM, pero
nuevas estimulaciones con los mismos antge
nos dan lugar a IgG inmunes. Las caractersti
cas de estas variaciones en el curso de la res
puesta inmune se exponen en el captulo 8.
Hasta el momento no se ha podido demostrar
fehacientem ente que la IgM atraviese la p la
centa. Algunas pocas comunicaciones sobre el
hallazgo de esta protena en la sangre del cor
dn umbilical deben ser tomadas con cuidado,
hasta tanto no se conozca bien la capacidad de
sntesis de aqulla por parte del feto, ya que el
aporte de datos acerca de la sntesis temprana
de esta globulina es cada vez mayor.
La cadena polipeptdica designada cadena J
(joining) se encuentra asociada con las formas
polimricas de IgA y con el pentmero de IgM
(19S). Es un producto de sntesis de las clulas
p lasm ticas, tiene un peso m olecular de 15
kDa, es rica en restos -S H y se une a las men
cionadas inmunoglobulinas mediante uniones
disulfuro. Cuando la cadena J no es detectada
en los polmeros no tratados, puede ser eviden
ciada por la adicin, previa al anlisis inmunoelectrofortico o a la inm unodifusin, de
agentes reductores.
Es interesante destacar que en los diferentes
polmeros de IgA y en IgM 19S slo se ha de
tectado una cadena J por polmero.
La cadena J desempea un papel muy impor
tante en el proceso de polimerizacin. Hay for
macin de uniones covalentes de una cadena J
a dos unidades monomricas vecinas, indepen-

Anticuerpos
dientemente de los monmeros que compongan
el polmero. El hallazgo de pptidos a - J - a es
un argumento de valor en ese sentido. Estos es
tudios han servido tambin para demostrar que
la cistena preterminal de la regin C-terminal
de las cadenas a y probablemente de las ja. se
une a las cadenas J. La figura 5-22 muestra la
estructura esquemtica de la cadena J.
En clulas plasmticas elaboradoras de IgG
no polimriea se ha demostrado la presencia de
cadenas J, lo que indica que su hallazgo no
siempre significa polimerizacin. En los pol
meros su presencia es constante.
La IgMs (subunidad monomrica) intracelu
lar aislada no polimeriza espontneamente, si
no con previa reduccin; esto hace suponer que
los residuos de cistena responsables de las interuniones de las subunidades estn bloqueados
dentro de la clula.
Inmediatamente antes de la secrecin se in
corporan la cadena J y los hidratos de carbono
terminales.
Si bien la cadena J participa en la polimeriza
cin, no se tiene una idea clara de cmo ocurre
ello, ya que la IgM es siempre un pentmero, en
tanto que las clulas que sintetizan IgA, dispo
niendo de toda la maquinaria para la polimeri
zacin, dan productos constituidos por m on
meros, dmeros, trmeros y aun tetrmeros.
INMUNOGLOBULINA A (IgA)
Sinonimia: 7-13 S y globulina; p^A globuli
na; Y, A globulina.

95

SH
Met

"r

-----.A s p COOH

J _ _ _ ------- L _ pca

SH

F ig . 5-22. C adena J, estructura esquem tica.

Durante mucho tiempo ha sido inexplorada y


la mayor parte de la informacin que se tiene
proviene del estudio de mielomas de tipo IgA.
Se ha demostrado su actividad anticuerpo y
com probado que se encuentran ubicados en
ella algunos autoanticuerpos, tales como el an
tincleo, antitiroglobulina y antiinsulina. N o es
fijadora del componente Clq del sistema com
plem ento y el monm ero no es precipitante.
Fue considerada en un comienzo como porta
dora de la reagina alrgica, sensibilizante de la
piel, pero hoy sabemos que ello es patrimonio
de la IgE.
Una caracterstica muy particular de la IgA es
su marcada heterogeneidad, la que se debe a un
conjunto de componentes con constantes de sedi
mentacin que van de 7 S a 13 S, que se forman
por polimerizacin y son disociables por mercaptoetanol y urea en medio cido (fig. 5-23).
Su contenido en hidratos de carbono ocupa
un lugar interm edio entre la IgG e IgM . Los
valores son algo superiores al 7% y la relacin
hexosamina/hexosa es de 0,8. La IgA, al igual
que la IgM, no atraviesa la placenta.

Dmero (IgA)j

Fig. 5-23. Inm unoglobulina A (IgA).

96

Aspectos bsicos de ia inmunidad


F ig. 5-24. Estructura pro-,
puestci para la IgA.

La degradacin enzimtica con papana pro


duce subunidades 3,5 S constituidas por ppti
dos Fab y pequeos pptidos resultantes de la
degradacin enzimtica del fragmento Fe. Por
reduccin y alquilaein se obtienen pptidos L
y H. Las cadenas L son similares a las de otras
inmunoglobulinas: contienen los factores gen
ticos Km y los determinantes antignicos co
munes. Las cadenas H, en cambio, tienen ca
ractersticas propias. En cadenas
(IgA^) se
ha demostrado la presencia de factores genti
cos, a los que se denomina Am.
Dada la dificultad en la obtencin de frag
mentos proteolticos de esta inmunoglobulina,
similares a los logrados con IgG, las investiga
ciones inmunoqumicas se han hecho ms dif
ciles, en especial las relacionadas con su estu
dio secuencial. Se admite que su estructura es
la indicada en la figura 5-24.
La separacin y purificacin de una enzima
p roteoltica elaborada por el Streptococcus
sanguis, una bacteria aislada de heces hum a
nas, ha significado un aporte im portante al es
tudio de la IgA. Esa proteasa d iv a a la inm u
noglobulina en la zona de la bisagra, por enci
ma de los puentes S-S intercadenas H-H, dan
do origen a los pptidos F a b a y F ea, similar
este ltimo a los pptidos Fe de las otras inm u

Fig. 5-25.

noglobulinas. La separacin de ambos se con


sigue por filtracin a travs de Bio-gel P-200.
El F e a obtenido por este procedimiento puede
aislarse como monmero, con una constante
de sedimentacin 3,0 S y P.M. de 41,5 kDa, o
como dmero con un coeficiente de sedimenta
cin de 5,3 S. Por reduccin con ditiotreitol, el
dmero se transforma en monmero. La men
cionada enzima ha resultado efectiva en el elivado de IgA srica e IgA secretoria, perm itien
do en ambos casos obtener F ea. Segn algu
nos autores es efectiva sobre la Ig A l, no as
sobre la IgA2.
Se conocen dos subclases de IgA (IgA l e
IgA2), que difieren antignicamente y por su
contenido en galactosamina, aminoazcar que
slo est presente en la primera. Los pesos mo
leculares de las cadenas a , y
son de 58 kDa
y 52 kDa, respectivamente. En una forma alotpica de lgA2 (AmJ) se ha observado la ausencia
de puentes disulfuro intercadenas L-H, lo que
hace presumir que la integridad de la molcula
se debe a fuertes uniones no covalentes. La otra
forma alotpiea (Am^O tiene una estructura si
m ilar a la IgA l y en ambas las uniones L-H
son por puentes disulfuro (fig. 5-25).
En todos los casos su estructura normal es
Kj o

Subtipos de IgA.

Anticuerpos
Resulta interesante conocer que, si bien el
contenido de IgA es bajo en el suero sanguneo
normal (1,5-2,0 mg/ml), es relativamente alto
en otros fluidos tales como la saliva, lgrimas,
secrecin intestinal, fluido prosttico y calos
tro, especialmente en este tiltimo. Puede sepa
rarse de stos por filtracin a travs de Sepha
dex G-200 o por cromatografa en DEAE-celu
losa. A esta inmunoglobulina se la conoce co
mo IgA secretoria y difiere en ciertos aspectos
de la srica. Es predominantemente 11 S y est
asociada a un fragmento antignicamente dis
tinto de las cadenas L y H, llamado componen
te secretorio (S). El peso molecular de la IgA
secretoria es de 385 kD y consiste en dos subu
nidades monomricas de IgA (7 S) y el compo
nente secretorio de P.M de 70 kD, el que pare
ce estar unido covalentemente a slo una de las
unidades m onom ricas (fig. 5-26). La unin
entre las unidades 7 S es por puentes disulfuro
y en ella participa la cadena J de manera simi
lar a lo que ocurre en la formacin de los pol
meros 19 S de la IgM. La fijacin al com po
nente S es por uniones covalentes de puentes
disulfuro y uniones no covalentes.
La IgA secretoria, cuya frmula genrica es
(a^ k ^)2 S o ( a ^ ^ 2)2 S, es sintetizada por las c
lulas plasmticas ubicadas en el subepitelio, de
donde una pequea parte puede pasar a la cir
culacin general, mientras que el resto durante
el transporte a travs del epitelio glandular o de
la superficie intestinal fija el componente se
cretorio, previo a la secrecin. Este componen
te, que es elaborado por las clulas epiteliales,
le confiere a la inm unoglobulina propiedades
particulares, entre eUas una marcada resistencia
a la accin de las enzim as proteolticas (fig.
5-27). Actualmente se sabe que el componente
S est constituido por los cinco dominios extracelulares del RPolylg (receptor de IgM e IgA
polimricas, que normalmente transporta estas
formas de IgM e IgA a travs del epitelio intes
tinal y heptico) liberados por protelisis. Para
mayor informacin vase ms adelante Super
familia de las inmunoglobulinas y cap. 17.
La re s iste n c ia c o n fe rid a p ro b ab lem en te
constituya una necesidad biolgica, ya que se
considera que la IgA de las secreciones desem
pea un papel importantsimo en los m ecanis
mos de defensa de las m ucosas frente a los
agresores, especialmente bacterias y virus (in
munidad local). Para mayor informacin, van
se caps. 24 y 27.

97

el suero normal es de 0,03 m g.m f. M igra en la


zona de las beta lentas o gamma rpidas. Su
constante de sedimentacin es 7S.
Por digestin con papana y cistena da Ec y
Fab. Por reduccin y alquilacin con mercaptoetanol y iodoacetam ida libera cadenas L y
H(5) (P.M. 69,7 kD). Las cadenas L son comu
nes a las de las otras inmunoglobulinas y perte
necen a los tipos K y
(fig. 5-28). La relacin
cadenas k/X es 0,25.
No posee determinantes especficos de las
IgG, IgM, IgA e IgE, pero en cambio posee de
terminantes especficos propios correspondien
tes a sus cadenas H. Responde a la frmula
y
y ha sido identificada en otras especies
animales. En la superficie de linfocitos B del ra
tn se ha identificado una IgD similar a la hu
mana, con la que presenta reactividad cruzada.
Actividad especfica relacionada con esta in
munoglobulina ha sido demostrada en anticuer
pos antipenicilina, antiinsulina y antitoxina dif
trica. De su importancia fisiolgica se conoce
muy poco. Ha sido hallada como inmunoglobu
lina de membrana en linfocitos B, donde fun
ciona como unidad de reconocimiento de ant
geno en la respuesta inmune.

IN M U N O G LO BU LIN A D (IgD)
En el hombre, inicialmente fue hallada en un
caso de mieloma. Constituye el 1% de las in
munoglobuhnas totales y su concentracin en

IN M U N O G LO BU LIN A E (IgE)
Investigaciones efectuadas en la dcada de
los 60, han demostrado que el hasta entonces

98

Aspectos bsicos de a inmunidad


F ig . 5-2 7 . B io sn tesis de
IgA secretoria.

a circulacin
general

%
i
(igA),S

Epitelio glandular

Clula plasmtica

denominado anticuerpo reagnico humano, res


ponsable de la alergia atpiea, estaba localiza
do en una nueva inmunoglobulina, a la que se
denomin IgE o gamma E la que migra en la
zona de la IgA.
Su velocidad de sedimentacin en gradiente
de sacarosa es 7,8 S y su P.M. 185 kD. Por re
duccin y alquilaein se liberan cadenas H(e)
especficas (P.M. 72,5 kD) y cadenas L de tipo
K y A, de caractersticas similares a las otras ca
denas L ya conocidas. Su estructura es
y
y predominan las que contienen cadenas
K (fig. 5-29). Se fija a piel homloga, no as a
piel heterloga, y es la responsable de la anafi
laxia activa y pasiva homloga en el hombre.
Se fija a tejidos de primates, hecho que ha sido
aprovechado para numerosos estudios experi
mentales.

ss-

M ielom as identificados como de tipo IgE


han provisto material adecuado para completar
estos estudios.
Anticuerpos similares han sido reconocidos
en otras especies animales pero debido a su pe
quea cantidad no han podido ser estudiados
inmunoqumicamente.
Una inm unoglobulina del cobayo que re s
ponde a esas caractersticas ha sido aislada y
purificada por nosotros.
La IgE reducida con mercaptoetanol pierde su
propiedad de inducir reaccin anafilctica, no
porque haya modificado su capacidad para unirse
al antgeno, sino porque la reduccin de los
puentes S-S intercadenas H-H altera la capacidad
del fragmento Ec pai'a fijarse al receptor presente
en el mastocito o basfilo sanguneo. La IgE ca
lentada a 56C se comporta de manera similar.

0
1

o
X

o
X
o

H(5).
SS

-S S

OHC

-SS .

-SS

o
X
o

Fig. 5-28. P robable estructura de IgD.

o
X
o

Anticuerpos
Mayor informacin sobre el comportamiento
de la IgE podr hallarse en el captulo 32.
Protena de Bence-Jones
Sinonimia: gam m aglobulina microm olecular, yL globulina; 1,0-3,5 S y globulinas.
En la orina de mielomatosos se encuentra la
protena de B ence-Jones, de peso m olecular
aproximadamente 40 kD y constante de sedi
mentacin 3,5 S, que da reacciones inmunoserolgicas cruzadas con las inmunoglobulinas.
Se ha encontrado tambin que la orina normal
contiene vestigios de IgG y de gammaglobuli
na de bajo peso molecular, de aproximadamen
te 1,6 unidades de sedimentacin, que antigni
camente y por sus propiedades fisicoqumicas,
aun para el ensayo del calor, se comportan co
mo la protena de Bence-Jones. Fueron halla
das tambin en sueros humanos normales y se
las denomina y^ globulinas o microglobulinas.
Se han identificado dos tipos diferentes de
protenas de Bence-Jones, con cuyos antisueros
pudo clasificarse a las inm unoglobulinas en
dos grupos. La profundizacin de estas investi
gaciones ha permitido establecer que las prote
nas de Bence-Jones estn constituidas por ca
denas L y que contienen factores genticos Km
y los determinantes antignieos comunes pre
sentes en las inm unoglobulinas. Se conocen
formas monomricas de P.M. 23 kD, dmeros
de P.M. 45 kD y aun tetrm eros de P.M. 85
kD.
Experiencias efectuadas con radioistopos
indican que el aum ento de las protenas de
Bence-Jones en la orina, en los casos de mielomas, no es una consecuencia de la exagerada
metabolizacin de la IgG mielomatosa srica;
seran productos secundarios, colaterales, de la
sntesis globulnica. Su aumento en la orina en
estos casos se explicara como una consecuen
cia de la exagerada sntesis de la globulina
m ielom atosa por parte de clones de clulas
plasm ticas que han sufrido degeneraciones

t l 's s ^

o
X
O

H (e ).

L s s I
co

malignas y han adquirido la capacidad de pro li


ferar sin tasa, sin haber perdido el poder de sin
tetizar la globulina normal. Las protenas de
Bence-Jones son cadenas L libres que pueden
escapar como producto colateral y, como con
secuencia de su bajo peso molecular, ser excre
tadas por la orina, donde las formas dimricas
son las halladas con ms frecuencia. D ada su
homogeneidad, estas protenas han sido m uy
utilizadas para los anlisis secuenciales de las
cadenas L (fig. 5-30).
ltimamente se ha demostrado que el amiloide de las amiloidosis est constituido por el
dominio V ,, mezclas de V, y C; y cadenas L
enteras. Esto aclara una serie de hechos, en es
pecial los relacionados con la aparicin de am i
loidosis en los mielomas, ya que el amiloide no
sera ms que producto de la degradacin enzi
mtica de cadenas L.
En el cuadro 5-11 se encuentran resumidas
las propiedades ms significativas de las inm u
noglobulinas del hombre.
LOS HIDRATOS DE CARBONO
DE LAS MOLCULAS DE
INMUNOGLOBULINAS
Las inmunoglobulinas contienen hidratos de
carbono (heteropolisacridos), que norm alm en
te estn localizados en las cadenas H. Las cade
nas J, participantes de la polimerizacin de la
IgM e IgA, y el componente secretorio (CS) de
la (IgA)^S estn glucosilados; no lo estn, en
cambio, las cadenas L.
El contenido en hidratos de carbono v ara
para las diferentes clases de inmunoglobulinas,
o scilando esos valores entre 2% y 3% p ara
IgG, 7% y 11% para la IgA, 12% para la IgM ,
9% y 14% para la IgD y 12% para la IgE.
La unin de los hidratos de carbono puede
tener lugar por iV-glucosilacin u 0-glucosilacin, siendo sta muy poco frecuente en las in
munoglobuhnas. En el primer caso ocurre por

O O

0 o
1 1

L s s J 1' ls's 1

-SS

1ss -J

co co w
co co co

o
X

I
m

99

X
o

Fig. 5-29. Inm unoglobulina E (IgE).

r T

0
1
o

o
o

L s s 1

100

Aspectos bsicos de a inmunidad


cd
>

o
O
'O

hir
O

o
Fluidos en los que est p resente

3
o
(U

oUt
O
1
i

.2 1
g '&
o 'c^3
00

Fijacin a protena G

+ + , +
+ + + +

+ +

Fijacin a protena A

+ + 1+
+ + ' +

+ +

F ijacin a polim orfonucleares neutrfilos

+ 1+ +

+ +

4-

Reaccin con protena A del S. aureus

+ + 1+

Fijacin a m acrfagos

+ +

1 1

Fijacin a m astocitos heterlogos

+ 1+ +

1 1

1 1

Fijacin 0 m astocitos hom logos


P asaje placentario

+ +

Fijacin del com plem ento (va alterna)

l i l i

Fijacin del com plem ento (va clsica)

C antidad sintetizada (m g/kg/da)


Vida m edia fdas)
% de intravascular cataboUzada p o r da
D istribucin intravascular (%)
C oncentracin srica (m g %)

D om inios de la cadena Fl

Peso m olecular de la cadena H (kD)

+ +

1 1

m
co

CN
'O

r- r- r-- r-

-o

1 1

^ O r-- -H
CN r j
(N

CN

o o o o
(N On0^
00 (N

O O
r- ^

<DJS'O
2

^ '|O O O O
o o o o
p q q q
vn VT) 'vO'T'i

3 P
^

<N

lO

Tipo de cadena H

Flidratos de carbono %

1
i

q q
vn VT)

S o C
\D C
\jT> Ij

1 . 3

b a
ro ro co ro
(N CN CN r-1

3 *=: z3

Peso m olecular (kD)

T<3u o
^^g

\0 'O "O ''O


^ ^ ^ ^

Coefic. sedim entacin

00 00 00 00
!> i> i>

00 00
r- r--

Subclase

(N ro ^
OOO
OJ) bi) OX) b)

es
s
U

Clase

co
00

I ^
3si
~..o P

r-i fSj
< <

6
<OJj H
o

Anticuerpos

101

C u ad ro 5-12. Estructura de los oligosacri


dos obtenidos de una mezcla de inmunoglobu
linas de origen humano. /, ll, l l l y IV: estructu
ra de diferentes core hallados en conejo
Oligo.sacrido.s unido.'i a la.'i inm uno globulina.'^ po r N -g lu
cosilacin
A) Tipo com plejo
N euA ca2^6G al(3 1 -4 G lc N ac P | -2 M a n a I
^4M aii|3~4G lcN acf3|
-4G lcN ac-A sn

G lc N a c P i-

NeuAca2-6GaiPi-4GlcNacP|~2Mana )
B) R ico en m a osa
M a n a l- 2 M a n a K

'6
|-S-SR

M ana 1

M a n a l- 2 M a n a 1 '

Monmero

Dmero

M an P I -4 G lc N ac P | '4G lcN aC A sn
3

Fig. 5-30. P rotena de Bence-Jones,

M a n a 1-2 M a n a l-2 M ana 1 '

C) D iferentes C ore
M ana 1
M anP I-4 G lcN a cP (-4 G lc N ac -A sn
- 3

M ana 1 ^
Fuca 1

M ana U
6

' o

M an p |-4 G lc N a c P )-4 G lc N a c -A s n
3

III

G lcN ac p I -4 M a n |3 1 -4G lcN ac(3 ] -4G lcN ac-A sn

M ana 1

M ana 1
V

Pu= 1.

'b

G lc N a c P , -4 M a n P , -4 G lc N a c P , -4 G lc N ac -A sn

^^3

M an a 1

unin de un residuo de iV-acetilglucosamina al


amido grupo de una asparagina, el que debe es
tar formando parte del triplete Asn-X-Ser/ Thr,
mientras que en el segundo la unin se produce
por interaccin entre un residuo de N-acetilgalactosamina o galactosa con el grupo oxidrilo
de una serina o treonina.
Los azcares identificados en los polisacri
dos existentes en las diferentes inmunoglobuli
nas han sido A-acetil-D-glucosamina, A^-acetilD-galactosamina, cido A-acetil-neuramnico,
L-fucosa, D-galactosa y D-manosa. No todos es-

tn presentes en los polisidos ni guardan las


mismas relaciones inoleculares, aunque g en e
ralmente lo hacen en una combinacin p refe
rencial, constituida por un oligosacrido neutro
o core y el resto del polisido conform ado
por los restantes azcares. Este polisacrido de
tipo complejo se encuentra en todas las cla
ses de inmunoglobulinas. En algunas de ellas
se han identificado unidades de hidratos de car
bono ricas en maosa, carentes de cido si
lico y galactosa, las que son olivadas de la m o
lcula de inmunoglobulina por tratamiento con
la enzima endo-(3-glueosidasa H (cuadro 5-12).
La glucosilacin de las cadenas H y de las L
que tienen el aceptor Asn-X-Ser/Thr, norm al
mente ocurre por transferencia a una cadena
naciente del core de oligosacrido, a partir de
un lpido transportador, el dolicoldifosfato. La
transferencia del core a una cadena H nacien
te retrasa la elongacin del polipptido, dism i
nuyendo su velocidad de sntesis, hecho que
contribuye a corregir el desequilibrio entre la
sntesis de cadenas H y cadenas L. Durante el
perodo de glucosilacin, el core fijado es
procesado y elongado por adicin de azcares
terminales.
Las unidades de hidratos de carbono estn
localizadas principalmente en el fragmento Fe,
y en algunos casos (IgM, IgE) han sido detecta
das tambin en el Fd. En condiciones normales,
la IgG tiene una unidad por cada cadena H, y la
unin ocurre en el dominio Cj2. La IgM tiene
un promedio de cinco oligosacridos por cade
na ji,, cuatro en el Fe: (Cu^2:l; 0^3:2; C ^4 :l) y
uno en el Fd (C|^l); la IgE tiene seis unidades

102

Aspectos bsicos de la inmunidad

hidrocarbonadas, de las cuales tres estn en el


do m in io C e l (Fd) y las re sta n te s en el Fe
(C g2:l; Ce3:2). En la IgA l se han detectado
unidades de oligosacridos; cinco estn en el
dominio C a l, una en el C qc2, una en el C(x3 y
una unidad ha sido localizada en la zona FRl
del dominio variable (V a). En la (IgAj^S, ade
ms de las unidades sealadas deben aadirse
otras dos, una correspondiente a la cadena J,
presente tambin en la IgM, y otra en el com
ponente secretorio (CS). La IgD posee cuatro
unidades hidrocarbonadas en el dominio C51,
una en el C2 y dos en el CgS.
Un residuo de A^-acetilglucosamina unido a
una treonina, ha sido identificado en la zona de
la bisagra de slo una cadena y del 80% de las
molculas de IgG de conejo. Parecera que en
esta glucosilacin asimtrica el azcar protege
ra a la molcula de degradaciones biolgicas,
impidiendo el acceso de las enzimas proteolti
cas a dicha zona. Sobre el particular resulta su
gestivo el hallazgo en IgA e IgD de un residuo
azucarado similar, en la misma regin.
Los anlisis de protenas de mielomas han
demostrado que cadenas H y L de diferentes
inm unog lobulinas que poseen la secuencia
A snX-Ser/Thr pueden presentar glucosilaciones anmalas, que llegan a afectar diferentes
dominios, incluido el Fd.
Recientemente hemos podido demostrar que
los anticuerpos IgG no precipitantes (coprecipi
tantes) de diferentes especies anim ales estn
constituidos por molculas funcionalmente asi
mtricas (cap. 19), debido a que un oligosacri
do predominantemente rico en maosa se halla
insertado en slo uno de los Fab de la molcu
la. Ese oligosacrido, que se encuentra unido al
fragmento Fd, es el que altera el sitio de com
binacin y hace que el anticuerpo tenga un
comportamiento biolgico particular. La con
canavalina A -lectina que interacciona con po
lisacridos con grupos m anosilo o glucosilo
terminales-, covalentemente unida a Sepharosa
(Con A-Sepharosa), fija esos anticuerpos.
Ms curioso aun resulta el hecho de que
aproximadamente el 10% de las molculas de
IgG normales del hombre y del conejo se fijan
a Con A-Sepharosa, y que el ohgosacrido interactuante est localizado en el fragmento Fd
de slo uno de los Fab. Al igual que en el caso
de los anticuerpos coprecipitantes, la unidad hidrocarbonada predom inantem ente es del tipo
rica en maosa, y es clivada de la molcula
por tratamiento con endo-p-glucosidasa H.
Todava no est claro cul es la funcin que
cumplen los hidratos de carbono en la molcula
de los distintos isotipos de inmunoglobulinas.
En algunos casos parecera que juegan un papel
protector de la molcula al chvaje por enzimas
proteolticas, dificultando la exposicin de los

sitios de ataque. Hay datos experimentales que


hacen suponer que estos ohgosacridos partici
paran activamente en la secrecin de las mol
culas de anticuerpos. Si bien durante el pasaje
de la inmunoglobulina a travs de los elemen
tos membranosos de la clula hay incorpora
cin de carbohidratos, ello no es prueba sufi
ciente de la importancia de la glucosilacin en
la secrecin, ya que hay clulas plasm ticas
que slo secretan cadenas L que carecen de hi
dratos de carbono.
INMUNOGLOBULINAS DE
DIFERENTES CLASES DE
VERTEBRADOS
En distintas especies de vertebrados se han
descrito diferentes clases y subclases de inmu
noglobulinas a las que se ha tratado de relacio
nar con las identificadas en mamferos, espe
cialmente el hombre, dado que todas ellas tie
nen un ancestro comn (cuadro 5-13). El crite
rio seguido ha sido el de comparar propiedades
fisicoqumicas y biolgicas, tales como peso
molecular, movihdad electrofortica, coeficien
te de sedimentacin, contenido en hidratos de
carbono, capacidad para fijar el complemento,
pasaje placentario, sensibilizacin de piel ho
mloga y heterloga, reactividad frente a sue
ros especficos, etc. Pero esto no puede ser to
mado como definitorio ya que en algunas espe
cies de peces, reptiles y aves la ubicacin de
las inm unoglobulinas aisladas resulta difcil.
En variedades de ranas se han descrito anti
cuerpos de alto peso molecular, similares a la
IgM de mamferos, que resultan de la conden
sacin de seis subunidades. En algunos peces,
como las carpas, estos anticuerpos son tetramricos. Si bien son similares, no puede decirse
con certeza que sean realmente IgM.
Una mayor definicin se consigue a veces
comparando anlisis secuenciales. Como ejem
plo podra citarse el caso de la IgG (T) del ca
ballo, considerada por mucho tiempo relacio
nada con la IgA. Cuando se comparan los lti
mos nueve residuos C-terminales de la cadena
H de esta inm unoglobulina y los correspon
dientes a las cadenas y, a y )J, de IgG, IgA e
IgM humanas, no caben dudas de que su es
tructura presenta similitud con la IgG (cuadro
5-14). Si bien la comparacin de secuencias li
mitadas en algunos casos es suficiente para la
diferenciacin, en otros no lo es. En el cuadro
5-14 puede verse que los cuatro ltimos resi
duos C-terminales de IgA e IgM son idnticos
(Gly-Thr-Cys-Tyr).
Con respecto a la distribucin de las cadenas
K y
en las inm unoglobulinas de diferentes
animales, se ha observado que ms del 95% de

Anticuerpos

103

C uadro 5-13. Inmunoglobulinas de algunas especies de vertebrados


Inm unoglobulinas

Especie
7S
IgG
7S
5 ,7 S ,7 S

14S, I9S
IgM
I9S
19S

IgG l
IgG 2
IgG3
IgG 4

IgM

IgA

IgD

IgE

ratn

Ig G l
IgG 2,
IgC 2,
Ig 0 3

IgM

IgA

IgD

IgE

rata

Ig G l
IgG 2
IgG2,
lgG 2,

IgM

IgA

IgE

cobayo

Ig G l
IgG 2

IgM

IgA

IgE

conejo

IgG

IgM

IgA

IgE

perro

IgG

IgM

IgA

IgE

vaca

Ig G l
IgG 2

IgM

IgA

IgE

caballo

IgG ,
IgG ,
IgG ,
IgG (T)
IgB

IgM

IgA

IgE

oveja

IgG l
IgG 2

IgM

IgA

IgE

cabra

IgG l
IgG2

IgM

IgA

IgE

P eces
A nfibios
Reptiles
Aves
M am feros
hom bre

E n los casos en q u e slo fig u ra n los c o e ficien te s d e sed im entacin las in m u n o g lo b u lin as aisladas no estn relacionadavS c o n las clases d e i n
m u n o g lo b u lin a s co n o c id as o n o se co n o c en dato s estructurales p a ra estab le cer re la cio n es.

las inmunoglobulinas sricas del caballo con


tienen cadenas X, en tanto que no menos del
95% de las inmunoglobulinas del ratn contie
nen cadenas K. Es posible que ello sea conse
cuencia de las diferentes clases de inmunoglo

bulinas involucradas en las distintas etapas de


la respuesta inmune, sobre todo si se tiene en
cuenta que ambos animales poseen varias sub
clases de IgG y la distribucin kJX no es la m is
ma para todas ellas.

C uadro 5-14. Anlisis secuencial comparativo del nonapptido C-terminal


humanas y de IgG (T) equina
Secuencia
Inm unogtoblinas
1
IgG hum ana
IgG (T) equina
IgA hum ana
IgM hum ana

-G lu
- Glu
-M et
- M et

- Lys
- Lys
.- A la

- Ser

- Ser
- A sn
- G lu
- A sx

L eu
Val
V al
Thr

Ser
- Ser
- A sp
- A sp

6
-

Leu
H is
G ly
G ly

7
-

Ser
Ser
Thr
Thr

- Pro - G ly
- Pro - Gly
- Cys - Tyr
- Cys - Tyr

-C O O H
.-C O O H
- COOH
- C O O H

IgG, IgA e Ig M

104

Aspectos bsicos de la inmunidad

HOMOGENEIDAD
Y HETEROGENEIDAD
DE LAS INMUNOGLOBULINAS
Como ya indicramos al comienzo del cap
tulo, las inmunoglobulinas normales y los anti
cuerpos no son homogneos. A causa de ello,
en los anlisis electroforticos en acetato de ce
lulosa a pE[ 8,2 se observa en la zona de corrida
correspondiente una banda ancha, ms intensa
mente teida en el centro y difusa hacia los ex
tremos. Esto se comprende fcilmente si recor
damos que la carga neta de una protena, que es
la que determ ina su m ovilidad en un campo
elctrico, resulta de la suma de las cargas par
ciales de cada uno de sus aminocidos constitu
tivos. Siendo estas cargas, como consecuencia
de la heterogeneidad, distintas para cada una de
las molculas que componen las inmunoglobu
linas norm ales, el cam ino a recorrer por las
mismas ser diferente.
Si se hace una corrida electrofortica en ge
les de una IgG normal purificada y se separan
las zonas de mayor y menor movilidad, al co
rrerlas nuevamente se observar que ambas se
desplazan de una manera diferente. Las cade
nas L y H obtenidas de esas inmunoglobulinas
habrn de mostrar tambin distinta movilidad
electrofortica, evidenciable en forma de ban
das en gel de pohacrilamida.
Las protenas de mielomas y sus respectivas
cadenas L y H generalmente muestran por co
rrida electrofortica una banda neta que corres
ponde a la de una de las tantas molculas cons
titutivas de las inm unoglobulinas norm ales.
Las protenas de Bence-Jones y cadenas L de
inmunoglobulinas de mielomas dan, por elec
troforesis en gel de poliacrilamida, una o dos
bandas, las que corresponden a monmeros y
dmeros a diferencia de las 8 a 1 0 bandas que
se observan en las cadenas L de inmunoglobu
linas normales y que obedecen a fenmenos de
carga.
En algunas protenas de mielomas, no obs
tante su homogeneidad constitutiva se ha ob
servado ms de una banda electrofortica. La
causa de ello no es bien conocida. Experiencias
realizadas in vitro con cultivos de linfocitos
provenientes de ratones portadores de mielomas permitieron comprobar que la inmunoglo
bulina recientem ente sintetizada, que era ho
mognea, si se la marcaba con un tomo ra
diactivo y se la inoculaba a otro ratn de la
m ism a endocra, se volva heterognea en el
suero, dando por electroforesis en geles hasta
cinco bandas. Ello ha hecho que la heteroge
neidad electrofortica observada en protenas
de mieloma sea atribuida a variaciones de car
ga elctrica, causadas por la accin sobre aqu
llas de enzimas sricas, que provocaran prdi

das de grupos lbiles que no produciran dife


rencias en la estructura secuencial primaria, co
mo cido silico, grupos amido, etctera.
La heterogeneidad puede deberse tambin a
distintas glucoformas del pptido que contie
nen diferentes restos hidrocarbonados, como
consecuencia de la accin de distintas glucotransferasas.
LOS SITIOS ACTIVOS DE
LAS MOLCULAS DE
INMUNOGLOBULINAS
Edelm an, al considerar la hom ologa exis
tente entre los fragmentos constitutivos de las
cadenas L y H como consecuencia de la forma
cin de puentes disulfuro que originan bucles
de aproxim adam ente 60 residuos cada uno,
propuso la divisin de la molcula de inmunoglobuhna en dominios, identificados como V,
y V (variables) y C ,, Cj_, 1 ,
y C^,3 corres
pondientes a las zonas constantes, pivoteando
la molcula en la zona denominada gozne o de
la bisagra, ubicada en las proximidades de los
puentes disulfuro intercadenas H-H, la que no
muestra homologa con ninguna otra parte de la
cadena peptdica H. Esta zona es rica en resi
duos de prolina, aminocido incapaz de formar
una hlice a porque su tomo de nitrgeno for
ma parte de un anillo rgido y no es posible la
rotacin del enlace N-C. Esta interrupcin de la
hlice a origina un rizo o curvatura en la cade
na peptdica, que condicionara la flexibilidad
de los fragmentos Fab (fig. 5-31). Los dom i
nios de las inmunoglobulinas estn separados
entre s por cadenas peptdicas de 60-70 resi
duos, siendo la correspondiente a la zona de la
bisagra de mayor tamao. Se considera que ca
da dominio tiene una estructura tridimensional
similar y que origina un sitio activo relaciona
do con diferentes funciones de la molcula. El
dominio variable participa en la formacin del
sitio de combinacin o paratope del anticuerpo,
responsable de la especificidad, mientras que
los dominios ubicados en las zonas constantes
son efectores de funciones, algunas de las cua
les slo se expresan despus de la interaccin
antgeno-anticuerpo.
Los estudios sobre estructura tridimensional
de las inmunoglobulinas efectuados por difrac
cin de rayos X han demostrado que son pro
tenas multimricas con subunidades globula
res (dominios), formadas cada una de ellas por
aproxim adam ente 1 1 0 am inocidos, los que
despliegan un perfil comn de plegamiento tri
dimensional (folding). La estructura secun
daria predominante de estas subunidades es la
de hoja antiparalela plegada en |3 (p pleated
sheef). Cada subunidad contiene dos hojas pa

Anticuerpos

105

Inmunoglobulina
IgG
Fig. 5-31. D om inios de la IgG .

ralelas formando un sandwich o emparedado,


constituida cada hoja por 3 o 4 fibras antipara
lelas de aminocidos. El volumen interno est
formado por un empaquetamiento de sitios hi
drofbicos. Alrededor del 50% de los aminoci
dos de las inm unoglobulinas estn formando
parte de esta estructura. Las dos hojas plegadas
en P se hallan covalentemente unidas por un
puente S-S intracatenario, en una direccin
aproximadamente perpendicular al plano de las
hojas. Las diferentes fibras estn unidas entre s
por segmentos en P turn o codos (fig. 5-32).
Varias de las protenas presentes en superfi
cies celulares que participan en el reconoci
miento del antgeno, como el receptor de los
linfocitos T (RCT), el complejo CD3, las mol
culas Ig a e Igp asociadas al receptor de los lin
focitos B, incluidas dentro de la denominada
superfamilia de las inm unoglobulinas, p re
sentan esta estructura.
En las IgM e IgE existe un dominio Cj^4, co
mo consecuencia de que las cadenas H de estas

inmunoglobulinas, a causa de su mayor tam a


o, poseen cinco bucles por cadena. El nuevo
dominio en estas cadenas no est insertado d es
pus del Cj,3, sino que est ubicado entre los
dominios C^l y C,.,2 correspondientes a las ca
denas H de las otras inmunoglobulinas.
Estudios recientes de difraccin de rayos X,
realizados con inm unoglobulinas IgG m o n o
clonales cristahzadas, muestran que los dom i
nios V-Vj^ presentan una estructura tridim en
sional estable que se adapta a su funcin de si
tio de combinacin con el antgeno. Los dom i
nios Cj^ 1 y C,.,3 de una cadena H se encuentran
apareados con los de la cadena opuesta, en fo r
ma entrecruzada, dando lugar a una estructura
rgida. Los dominios C,.,2, en cambio, no se e n
trecruzan y se encuentran separados por dos ca
denas ramificadas de hidratos de carbono una
en cada dom inio- de aproximadamente 2 0 uni
dades, unidas por A^-glucosilacin. La estractura particular de esas cadenas es la que hace que
los dos dominios Cj^2 de la molcula se m an

106

Aspectos bsicos de la inmunidad


Cadena L

F ig . 5-32. Estructura de lm ina plegada en p de los dom inios variable (V L) y constante (CL) de una cadena L. (A daptado
d e M . Schiffer y col., Biochem istry, 12:4620, 1973.)

tengan separados, con la suficiente flexibilidad


com o para perm itirle cum plir determ inadas
funciones (fig. 5-33).

F ig , 5 -3 3 . E s tru c tu ra esq u e m tic a de u n a m o lcu la de


IgG , con sus dom inios, elaborada sobre la base de los da
tos conocidos, especialm ente los provenientes de estudios
cristalogrficos (C^HO hidratos de carbono).

Sitio de combinacin de los anticuerpos


En las inmunoglobulinas los fragmentos Fab
son los portadores de la actividad anticuerpo,
en tanto que el Fe es el responsable de las otras
propiedades biolgicas inherentes a la molcu
la entera.
En lo referente a la actividad anticuerpo, el
problema que se plante era saber; a) si ello era
consecuencia del plegamiento proteico o de la
secuencia de sus aminocidos constitutivos; b)
si estaba localizada en las cadenas L o FI, si
ambas participaban de esa actividad y cules
eran los fragmentos comprometidos; c) si el si
tio de combinacin era uniespecfico o pluriespecfico y d) cul era el tamao aproximado de
dicho sitio.
Diferentes hiptesis se plantearon
a)
La hiptesis sostenida inicialm ente por
Haurowitz de que la actividad anticuerpo era
consecuencia de una adaptacin de la inmunoglobulina al determinante antignico producida
durante su plegamiento dej de tener vigor des
de el momento en que se demostr, en un m is
mo animal, la heterogeneidad de los anticuer
pos para distintos determinantes antignieos.
Lo mismo ha ocurrido con la sustentacin de
Karush de que ella sera consecuencia del reor
denamiento de los puentes S-S que forman par
te de la molcula, ello sobre la base de que su
nmero es de 20-25 y posibilitara, estadstica
mente, la elaboracin de ms de 1 0 * molculas
diferentes. El hecho de que el fragmento Fab
tenga actividad anticuerpo y los S-S que con
tiene sean mnimos con respecto al total, res

Anticuerpos

107

tringe enormemente el ntimero de anticuerpos trar que la capacidad de unir ligando se encon
diferentes que podran lograrse. Adems, ac traba principalmente en las cadenas H. El expe
tualmente se sabe que una molcula de inm u rimento desarrollado en este sentido por M etz
noglobulina reducida y alquilada, que no posee ger y Singer consisti en reducir con mercapuniones covalentes de S, sigue manteniendo su toetanol y alquilar con iodoacetamida la IgG
actividad anticuerpo.
anticuerpo, que luego fue dializada en cido
Todo esto hizo suponer, teniendo en cuenta propinico 1 M, mezclada con e DNP-lisina y
las diferencias estructurales observadas entre filtrada por una colum na de Sephadex G -75
los anticuerpos, que su especificidad estaba re equilibrada con cido propinico 1 M que co n
lacionada con su estructura secuencial, la que a tiene 8 DNP-hsina 6 x 10 '^ M. La absorbancia
su vez determinara qu fuerzas termodinmicas de los productos de elucin fue medida a 280
obligarn a la molcula a adquirir una configu nm y 360 nm. Como control se efectu una e x
racin energticamente estable, que le permiti periencia anloga sustituyendo el anticuerpo
ra a sta cumplir con su funcin especfica.
antiDNP por IgG normal de conejo. Las lectu
b)
Los exmenes electroforticos en gel de ras espectrofotomtricas a 280 nm de los elu i
almidn de inmunoglobulinas normales de co dos permitieron ubicar los picos proteicos c o
bayo y anticuerpos con diferente especificidad, rrespondientes a las cadenas H (el que eluye en
previamente reducidas y alquiladas, mostraron primer trmino) y las cadenas L. Las lecturas a
diferencias que hicieron suponer en un comien 360 nm hicieron posible la ubicacin de la E
zo que las cadenas L fuesen responsables de la DNP-lisina por ser mxima su absorcin a esta
actividad especfica.
longitud de onda. Como puede verse en la fig u
A partir de IgG (T) de caballo, neutralizante ra 5-34, la cantidad mxima de ligando est fi
de la toxina diftrica y de anticuerpos antitet jada en las cadenas H, mientras que es insigni
nicos y antilecitinasa del mismo tipo, se pudo ficante en las L. Las cadenas H y L de IgG n o r
demostrar que la ruptura de los puentes S-S de mal no muestran fijacin de ligando.
la molcula por reduccin y alquilacin no m o
Por estudios de recombinacin de cadenas L
d ificab a su activ id ad anticu erp o . A dem s, y H se ha podido demostrar que hay complecuando se separaron las respectivas cadenas L mentacin entre ellas, que es ms m anifiesta
y H, se comprob que gran parte de dicha acti cuando derivan de una m ism a m olcula de
vidad estaba localizada en las cadenas H, la IgG, segin se deduce de los ensayos competiti
que era potenciada por cadenas L provenientes vos y no competitivos que a continuacin se
de la mism a molcula, no as por cadenas L transcriben. A partir de dos IgG homogneas,
procedentes de otra inmunoglobulina de la m is IgG() e IgG*'^ se obtuvieron sus respectivas ca
ma clase, pero eon diferente especificidad. Las denas L y H (HW,
H'W y U '>) y con esos
cadenas L, por su paite, prcticamente carecan productos se efectuaron ensayos de recom bina
de actividad anticuerpo. Todo esto hizo supo cin con los siguientes resultados:
ner que la especificidad estaba localizada en
una determinada secuencia de las cadenas H,
C adenas
Tipo
% de Ig G
que sera com plem entada por las cadenas L,
de ensayo
recoinhinadas gG fo rm a d a ob ten id o
asegurando de ese modo estabilidad al sitio de
H () + L <
H (>L <)
80
combinacin.
Que en la fijacin del determinante antigni N o com petitivo
H <) + L <>
HwL
80
co intervienen principalmente las cadenas H, se
deducira de los estudios de equilibrio de dili
H <"> L I
65
H () + L + LW
sis de cadenas L y H aisladas de IgG anti-p-azoH
w
L
<
>
)
20
fenil-p-lactsido y hapteno monovalente desa
C om petitivo
rrollados por Karush en los que se demostr una
H < L <">
20
mayor afinidad de las cadenas H por el ligando.
H w + L <) + L<w
H <) L <1
65
En este caso, el aislamiento de las cadenas H,
despus de la reduccin y alquilacin, fue he
cho por filtracin a travs de Sephadex G-200
usando buffer Tris IM pH 8 , adicionado de doTrabajando con anticuerpos IgG obtenidos
decil sulfato de sodio 0,03 M, lo cual evita el del mismo conejo, con igual especificidad pero
agregado de cadenas H que generalm ente se de distinta afinidad, se comprob que, al reproduce a pH cido, base de algunas de las crti combinar cadenas H y L, las molculas form a
cas a los resultados obtenidos por otros autores das de mayor afinidad para el antgeno eran las
que no haban tenido en cuenta este hecho.
obtenidas con cadenas H y L procedentes de
Aprovechando que anticuerpos de conejo an anticuerpos de alta afinidad, y que ella era infe
ti-DNP de alta afinidad pueden fijar hapteno rior cuando la IgG de recombinacin provena
(e DNP-lisina) a pH cido, fue posible demos de cadenas H obtenidas de anticuerpo de alta

108

Aspectos bsicos de la inmunidad

100

15 0

200

250

F ig . 5-34. G raficacin de los picos de elucin correspondientes a protenas (DO 280 nm ) y D PN -lisina (D O 360 nm ) de
Ig G de conejo norm al (-----) y anti D PN ( ) reducidas y alquiladas y filtradas por Sephadex G-75 equilibrado con cido
propinico 1 M y D N P-lisina 6 x IO'*M.

afinidad y cadenas L de baja afinidad. Ello es


una prueba evidente de la com plem entacin
entre las cadenas El y L en la elaboracin del
sitio da combinacin con el antgeno, y que esa
complementacin es ms efectiva entre las ca
denas H y L de una misma molcula.
Que la complementacin entre dos cadenas
es fundamental para la elaboracin de la estruc
tura tridimensional que cumple las funciones
de sitio de combinacin lo da el hecho de que
dmeros de cadenas L pueden fijar ligandos. En
la molcula de anticuerpo, esa complementa
cin tiene lugar entre los fragmentos V, y Vj,.
El interrogante que surgi es si hay residuos
particulares del sitio de combinacin compro
metidos en la determinacin de la especificidad
y en la conformacin de esa estructura comple
mentaria a la del ligando, que asegure la pro
duccin de una unin firme con ste mediante
la creacin de diferentes tipos de fuerzas no co
valentes estables.
Respecto de los posibles residuos compro
metidos en la elaboracin del sitio de combina
cin, se ha podido determinar, analizando anti
cuerpos de conejo antiovoalbmina, antseroalbmina bovina y antifenilarzonato que, al m e
nos en estos casos, un aminocido capaz de fi
jar iodo radiactivo, identificado luego como un
residuo de tirosina, form a parte del sitio de
combinacin. Ello ha sido posible por iodacin
mediante la tcnica diferencial, que consiste en
marcar el anticuerpo purificado con
y con
'^' al mismo anticuerpo previamente mezclado
con el hapteno, el que ha sido modificado de
modo que pueda dar con algn residuo del sitio
de combinacin una unin covalente estable.
Se mezclan luego los dos productos marcados
y se procede a la separacin de las cadenas L y
El, las cuales son sometidas a digestin trptica.
Los pptidos obtenidos son separados por cro
matografa en placa y electroforesis de alto vol
taje combinadas (mapas peptdicos), determi
nando en cada uno de ellos el contenido en '^^1

y '^'I y estableciendo la relacin


Para
aquellos que demuestren radiactividad y no es
tn comprometidos en la elaboracin del sitio
de combinacin, esa relacin ser prxima a la
unidad, siendo superior en el caso contrario.
Ello se debe a que, como consecuencia de su
interaccin con el hapteno, el pptido que for
ma parte del sitio de combinacin es inaccesi
ble al '^'I durante la iodacin. El anlisis se
cuencial posterior de ese pptido ha permitido
tener conocimiento de algunos de los residuos
de las cadenas L y H que participan en la unin
del anticuerpo al antgeno.
No obstante esos resultados, hasta el presen
te no existen argumentos vlidos que muestren
que uno o ms residuos particulares tengan par
ticipacin activa en la elaboracin del sitio de
combinacin de todos los anticuerpos.
Los estudios comparativos sobre variabili
dad de cadenas L y H de inm unoglobulinas
monoclonales de diferentes clases y especies
animales, y de las provenientes de anticuerpos
homogneos logrados en conejos por inocula
cin de algunos polisidos, entre ellos los de
neumococo tipo III (S-III) y tipo VIII (S-VIII),
son los que han suministrado la mayor infor
macin sobre posibles relaciones entre residuos
y especificidad. En los fragm entos V^ y V,_,
pueden observarse variaciones ocasionales, al
ternativas y mltiples. Las primeras responden
a variabilidad originada por mutaciones som
ticas, la segunda a alotipos y la tercera muy
probablemente a la relacin de dicho residuo
con la elaboracin de la especificidad del sitio
de combinacin del anticuerpo. Como puede
verse en la figura 5-35, el grado de variabilidad
(nmero de aminocidos diferentes en una de
terminada posicin/frecuencia del aminocido
ms comn en esa posicin) de las cadenas L
es mximo en las zonas de los residuos 24-34,
50-56 y 89-97. Analizando cadenas L de anti
cuerpos anti-DNP y de protenas de mieloma

Anticuerpos
Cadenas H

Cadenas L

100

100

90

90

80

80

70

70

60

60

50

50

40

40

30

30

20

20

ii

l .1-

si

10

10

109

o 10 20 30 40 50

m i

60 70

80 90 100 110 120

Posicin de ios am inocidos

O
O 10

20

1
30 40 50

60

70 80 90 100 110 120

Posicin de ios am inocidos

F ig . 5-35. Z onas de hipervariabilidad de cadenas L y H de origen hum ano. Las flechas verticales indican residuos s itu a
dos en las zonas de hipervariabilidad o prxim os a ella, y en los que m ediante estudios de afinidad se h a dem ostrado la
unin a haptenos. (Tom ado de C apra, J. D. y Edm unson, A. B. Scientific Am erican, 1977.)

de ratn con actividad anti-DNP, se encontr


que en el primer caso el residuo 87 fijaba hap
teno y en el segundo el residuo 32, situado este
liltimo en la primera regin hipervariable y el
primero muy prximo a los residuos que cons
tituyen la tercera regin de hipervariabilidad.
En las cadenas H, regiones de mayor variabili
dad estn com prendidas entre los residuos
31-35, 50-65 y 95-102, similares en su ubica
cin a las de las cadenas L.
Las zonas de hipervariabilidad determinan
tes de complementariedad se identifican como
C D R l, CDR2 y CDR3 (complementarity determining regin) y F R l, FR2, FR3 y FR4 (jramewori) a las zonas invariables interpuestas
entre ellas, que sirven para su organizacin.
- Estudios de estructuras prim aria y trid i
mensional de anticuerpos revelan que los ami
nocidos Tyr, His y Asn tienen cierta prepon
derancia a formar parte de los CDR.
Es evidente que en las cadena L y H dos de
las zonas de marcada hipervariabilidad se en
cuentran ubicadas posteriormente y prximas a
los residuos de cistena (23 y 8 8 para las cade
nas L y 22 y 92 para las cadenas H), que son
los que originan el puente disulfuro que da lu
gar al bucle de la regin variable de ambas ca
denas. Esta simetra en la localizacin de las
zonas de hipervariabilidad de las cadenas L y
H provee la estructura tridimensional del sitio
de combinacin, el que contiene los residuos
complementarios para su unin al determinante
antignico.
- Si bien la unin al antgeno involucra a los
fragmentos CDR del Fab, en ocasiones resi
duos de los fragmentos FR pueden estar com

prom etidos en estas interacciones. Se ha d e


mostrado, entre otros, que los residuos Trp 47H (HyHEL-5) y Thr 30-H (HyHEL-10) co m
ponentes de los FR de los respectivos anticuer
pos, interaccionan con la hsozima.
Como quedara especificado al referirnos a la
estructura de cadenas L, existen residuos fijos
de ghcina. En la posicin 99-101 la secuencia
ms comn es Gly-Gln-Gly o Gly-Gly-Gly. En
las cadenas H hay dos glicinas situadas en la
misma posicin y las secuencias ms comunes
son Gly-Gln-Gly, Gly-Arg-Gly o GlyGly. Se
considera que, dada su posicin, podran fu n
cionar como pivote para permitirle a esa zona
de la m olcula el mximo de flexibilidad de
modo de asegurar un buen contacto del antge
no con el sitio de combinacin del anticuerpo.
La figura 5-36 esquematiza la zona variable del
fragmento Fab (Fy) donde puede verse la u b i
cacin de las regiones de hipervariabilidad.
Los aminocidos con cadenas laterales aro
mticas constitutivas de los CDR pueden co n
tribuir significativamente en la unin al ligando
como consecuencia de su mayor tamao - l a
que im plica un mayor efecto hidrofbico--, su
mayor polarizacin -co n una mayor contribu
cin a la interaccin por fuerzas de Van d er
W aals-, y su habilidad para formar puentes de
hidrgeno - a travs de sus anillos aromticos o
de tomos polares en las cadenas laterales y,
adems, por su relativa rigidez ya que tienen
pocos grados de libertad y, como consecuencia
una menor prdida de entropa conformacional,
luego de la complejacin con el ligando.
Las cadenas alifticas apolares laterales de
Val, le y Leu son incapaces de participar en

110

Aspectos bsicos de la inmunidad


H,N

NH,

F ig . 5-36. Sitio de com binacin. E structura del fragm ento


v ariable de las cadenas L y H; ubicacin de las respectivas
zonas de hip e rv ariab ilid a d y de los resid u o s de cistena
(vase texto).

interacciones inicas y slo pueden hacerlo en


la unin al ligando a travs de interacciones de
Van der W aals y de efecto hidrofbico. T e
niendo en cuenta su grado de libertad rotado-

F ig . 5-37. D iagram a del esqueleto de los carbonos a del


com plejo lisozim a-Fab (anticuerpo m onoclonal anti-lisozima). En el fragm ento Fab (parte superior derecha), la cade
na H est indicada con trazo grueso, y con trazo delgado la
correspondiente a la cadena L, E n la parte inferior izquier
da, adosada al sitio de com binacin, est ubicada la lisozi
ma. (C orresponde al estudio tridim ensional de un com plejo
antgeno-Fab, analizado por difraccin de rayos X. R. Polja k y col., 1986. G entilm ente cedida por .su autor.)

nal, que puede ser congelado despus de la for


macin del complejo Fab-ligando, estos am i
nocidos tienen una contribucin negativa en
esta unin.
Las Asp estn involucradas en la formacin
de puentes de hidrgeno y resultan ms efecti
vas cuando estn localizadas en los CDR que
en los FR. Se supone que podran participar en
la estabilizacin de los bucles o loops.
La alta incidencia de residuos aromticos ex
puestos, as como el carcter apolar de las ca
denas alifticas laterales en parte de la superfi
cie del Fv, daran lugar a una estructura com
pacta que le conferira a la molcula su capaci
dad para unir diversos ligandos. La especifici
dad para un determinado antgeno provendra
de la precisa complementariedad de las superfi
cies interaccionan tes y de la correcta posicin
de los posibles grupos reactivos.
La variabilidad de las cadenas L, y conse
cuente creacin de diversificacin, resulta de la
asociacin de genes VI y JL (vase cap. 6). D i
cha asociacin genera diversidad en la tercera
zona de complementariedad (CDR3). Investi
gaciones recientes realizadas por Kimberly y
Capra con transcriptos de cadenas L de tipo k
generados con hgado fetal humano y linfocitos
de sangre perifrica, han demostrado que apro
ximadamente un tercio exhiba una variacin
de la longitud de CDR3, independiente del seg
mento gnico J k usado. El anlisis de la se
cuencia de nucletidos, revel que algunos de
los nuclotidos resultantes de la unin V k -J k y
que presentaban variaciones de CDRS, eran co
dificados por los genes V k y J k usados en estos
transcriptos. No obstante, cerca del 20% de los
transcriptos contenan adiciones de segmentos
N-terminales, resultados coincidentes con una
actividad sim ilar a la TdT (deoxinucleotidil
transferasa terminal). Esas observaciones su
gieren que TdT o una enzima anloga podra
ser activada en un porcentaje significativo de
linfocitos B humanos durante el rearreglo de
las cadenas L (vase cap. 2). Las variaciones en
la longitud de CDR3 en las cadenas L aumenta
el repertorio potencial y constituye una posibi
lidad adicional de generar diversificacin en la
molcula de anticuerpo.
De acuerdo con estudios de Padlan, del total
de la superficie de los CDR del Fv, slo el
26,5% y 28,4% es usado en la unin con el an
tgeno por los anticuerpos anti-lisozim a HyHEL-5 y HyHEL~10, respectivamente. Los re
siduos de los CDR que contactan con el ligan
do representan slo el 37,0% y 35,8% del n
mero total de residuos de los CDR.
Con respecto a los CDR3-L y CDR3-H se
presume que deben jugar un rol prominente, no
slo en la unin al ligando, sino tambin en la
unin con el dominio opuesto y en el contacto

Anticuerpos

111

con otros CDR. Probablemente no sea coinci llo, sino que es una superficie que presenta p ro
dencia que los dos CDR3 presentan el mximo tuberancias y depresiones con posibilidades de
de variabilidad y que CDR3-H sea quien presu interaccin con diferentes ligandos. La mayor o
me la mayor variabilidad en tamao y confor menor posibilidad de cpe el sitio de combina
macin, como lo han demostrado recientemen cin se una a ligandos diferentes depender del
te Wu y colab.
balance entre las fuerzas de unin y de repul
c)
Otro hecho que se debe considerar es la sin que se originen en esas interacciones, d on
uniespecificidad del sitio de combinacin del de muchas veces un nico residuo aminoaedianticuerpo. La pregunta que se formula es si las co del ligando o del sitio de combinacin del
zonas de hipervariabilidad de una determinada anticuerpo puede jugar un papel importante.
molcula configuran especificidad para un solo
Por ello, la especificidad de un suero inmune
ligando, o si en el sitio de combinacin existen debe ser considerada como un fenmeno de la
subsitios para ms de uno de ellos. Estas dudas poblacin total de molculas de anticuerpos y
surgen despus de haberse demostrado, en pro no necesariamente la propiedad de cada m ol
tenas monoclonales provenientes de mielomas cula de inmunoglobulina.
humanos y de ratn, la capacidad de algunas de
Estudios desarrollados por Poljak y col. so
ellas para fijar ms de un ligando. La IgM (K) bre estructura tridimensional de un com plejo
EH, aislada de un paciente con macroglobuli Ag-Ac cristalizado (lisozima de huevo de conemia de Waldenstrom, por ejemplo, fija gru dorniz-antilisozima) y del mismo antgeno con
pos dinitrofenol, grupos nitronaftil, ADN des el correspondiente fragmento Fab, hechos por
naturalizado, ARN, heparina, sulfato de dextra difraccin de rayos X a una resolucin de 2,8
no, cido poliestirensulfnico, cido ribitol tei A, muestran aspectos muy interesantes. La es
choico y polmero ribosa-fosfato de origen bac tructura terciaria del antgeno lisozima, d e s
teriano. La IgAj 460 de ratn fija DNP-lisina y pus de reaccionar con el Fab no presenta cam
menadiona (vitamina Kj), haptenos no relacio bios conformacionales respecto de la lisozim a
nados. En este caso se ha demostrado que, por nativa, y se comporta como un determ inante
modificaciones qumicas introducidas en el si antignico topogrfico en el que participan re
tio de combinacin, es posible conseguir que la siduos ubicados en diferentes partes de la m o
capacidad ligante sea para el grupo DNP o vi lcula, algunos bien distantes entre s. Estos e s
ceversa. Si bien esto sugerira en forma indi tudios muestran adems que la estructura cua
recta la existencia de subsitios no continuos pa ternaria del sitio de combinacin del anticuer
ra estructuras de determinantes antignicos no po, no constituye un simple bolsillo en el que
relacionados, en inmunoglobulinas monoclona se insertara el epitope y en cuya formacin in
les provenientes de mielom as, estos estudios tervendran las regiones determinantes de com
deben ser extendidos a poblaciones de an ti plem entariedad de los fragm entos v ariables
cuerpos para obtener respuesta definitiva. En
(CDR), sino que se extendera a lo largo de
un comienzo se hipotetiz (Richards y Konigs- ellos como una superficie plana con protube
berg) que podran existir diferentes clulas for rancias y depresiones originadas por las cade
madoras de anticuerpos que originaran inm u nas laterales. Un rea extensa del antgeno se
noglobulinas con sitios de combinacin m lti pone en co ntacto con el Fab, y lo hace de
ples, no iguales, en los que la especificidad pa acuerdo con la topografa de ambos. Las protu
ra un ligando podra estar repetida en varias de berancias y depresiones del ligando y del anti
ellas. Por estim ulacin antignica se origina cuerpo facilitan el contacto y las interacciones
ran inmunoglobulinas diversas con especifici entre los residuos para formar las uniones no
dad para ligandos distintos (no esencialmente covalentes, de una manera similar a lo que o cu
los mismos en cada molcula), pero todos eon rre en las interacciones protena-protena. En el
especificidad para el antgeno inductor. Ello sistema estudiado, 16 residuos de la lisozima y
hara que en una poblacin de molculas de an 17 residuos del Fab hacen contacto, correspon
ticuerpos para un ligando todas tuvieran espe diendo 10 de ellos a la cadena H. La m ayor
cificidad para ste, y que la relacionada con los parte de esos 17 residuos estn ubicados en la
restantes se viera diluida como consecuencia tercera zona de hipervariabilidad (CDR3).
de la participacin de clones mltiples.
En algunos casos la simple sustitucin de un
Estas especulaciones fueron hechas conside aminocido en el antgeno vara enormemente
rando el sitio de combinacin como un bolsillo, la especificidad, como se ha observado en lisocon varios subsitios, y que cada ligando para zimas de huevo de distintas especies animales
interaccionar tendra que insertarse en l. In cuando reaccionan con el fragmento Fab del
vestigaciones recientes que se describen ms anticuerpo monoclonal especfico para la liso
adelante, desarrolladas con anticuerpos mono zima de huevo de codorniz. Este hecho y otros,
clonales, muestran que el sitio de combinacin como la diferente afinidad de anticuerpos espe
del anticuerpo con el antgeno no es un bolsi cficos para un m ism o ligando, las bases e s

112

Aspectos bsicos de la inmunidad

tructurales de las reacciones cruzadas de un an


ticuerpo con antgenos heterlogos, los anti
cuerpos heteroclticos y las reacciones idiotipoantiidiotipo, son fcilmente entendibles con el
modelo de sitio de combinacin del anticuerpo
descrito por estos autores. Estudios hechos por
Padlan y col. con diferentes anticuerpos mono
clonales especficos para hsozima de clara de
huevo, permitieron demostrar que, para el mis
mo ligando (lisozima), los aminocidos de los
Fab que interaccionan con el antgeno no son
los mismos para los distintos anticuerpos (cua
dros 5-15A y 5-15B).
La figura 5-37 corresponde a un diagram a
del esqueleto de los carbonos a del complejo
lisozima-Fab antilisozima, y la figura 5-38 a
esa misma interaccin con indicacin de los re
siduos del ligando y hgante que interaccionan.
A diferencia de lo que se supona, se ha
comprobado que los paratopes o sitios de com
binacin con el antgeno no adoptan mltiples
conformaciones surgidas al azar como conse

cuencia de sus aminocidos constitutivos. Tra


bajando con varias inmunoglobulinas monoclo
nales se demostr que usaran para cada regin
variable CDR slo unas pocas conformaciones
a las que se denomina estructuras cannicas,
las que estaran determinadas por un reducido
nmero de aminocidos ubicados en sitios es
pecficos de las zonas hipervariables. Esas es
tructuras bsicas son las que se indican en la fi
gura 5-39.
d)
Una apreciacin sobre el tamao del sitio
de combinacin de un anticuerpo fue inicial
mente lograda por ensayos de inhibicin, ha
biendo resultado tiles en este sentido los anti
cuerpos antidextrano (poli-D-glucosa), antipolialanina y DNP-polilisina.
La inhibicin de la interaccin especfica an
tgeno-anticuerpo por oligosacridos y oligopptidos, medida al 50% de efectividad, permi
ti comprobar que aqulla se consigue con oligmeros de 5 a 6 residuos. En el caso del DNP
(lisina)n se ha observado que el mximo de in-

F ig . 5 -3 8 . E n el m o d e lo q u e se
m u e s tra lo s to m o s d e l a n tg e
n o ( li s o z i m a ) y d e l F a b a n t i
c u e rp o e s t n r e p r e s e n ta d o s en
su t o ta l id a d c o m o e s f e r a s d e
1,7 d e r a d io . A-. e s tr u c tu r a
d e l c o m p le jo a n tg e n o F a b ( a n
t ic u e r p o ) , L a s c a d e n a s H d e l
f r a g m e n to F a b e s t n c o l o r e a
d o s en a z u l, y e n a m a r illo las
c a d e n a s L, L a lis o z im a e s t c o
l o re a d a en v e rd e y su r e s id u o
G ln 1 2 1 , q u e j u e g a u n p a p e l
m u y im p o rta n te e n la e s p e c ifi
c id a d , e n ro jo , B : lo s m o d e lo s
c o rr e s p o n d ie n te s a l is o z im a y
al F a b h a n s id o s e p a ra d o s p a ra
m o s t r a r la s p r o t u b e r a n c i a s y
d e p re s io n e s en las s u p e rf ic ie s
c o m p le m e n ta ria s.

Anticuerpos

113

F ig . 5-38 (cont.) C: s u p e rfic ie d e c o n ta c to del F ab y d e l a n tg e n o . L o s r e s id u o s in te ra c tu a n te s e st n n u m e ra d o s y c o lo r e a


d o s en ro jo , a e x c e p c i n d e la G ln 121 d e l a n tg e n o , q u e lo e s t en v io le ta . L o s re s id u o s d e la c a d e n a L q u e c o n ta c ta n c o n
e l a n tg e n o s o n ; 1 (H is 3 0 ), 2 (T y r 3 2 ), 3 (T y r 4 9 ), 4 ( T y r 5 0 ), 5 (P h e 9 1 ), 6 (T rp 9 2 ) y 7 (S e r 9 3 ). L o s d e la c a d e n a H : 8
(T h r 30), 9 (G ly 31), 10 (T y r 3 2 ), I I (T rp 5 2 ), 12 (G ly 5 3 ), 13 (A sp 5 4 ), 14 (A rg 99), 15 ( A s p 100), 16 (T y r 101) 17 ( A r g
102). L os re s id u o s d e la lis o z im a q u e c o n ta c ta n co n el a n tic u e rp o son: 1 (A s p 18), 2 (A sn 19), 3 (A rg 2 1 ), 4 (G ly 2 2 ) , 5
(T y r 23), 6 (S e r 2 4 ), 7 (L e u 2 5 ), 8 (A sn 2 7 ), 9 (L ys 1 16), 10 (G ly 117), 11 (T h r 118), 12 (A s p I 19), 13 (V a l 120), 14 ( G ln
121), 15 (lie 124), 16 (L e u 129). (L o s n m e ro s e n tre p a r n te s is in d ic a n el o r d e n d e s e c u e n c ia .) (C o rre s p o n d e al m is in o e s
tu d io in d ic a d o e n la fig u ra 5 -3 6 . F o to g ra fa s g e n tilm e n te c e d id a s p o r el D r. R . P o ja k .)

hibicin se consigue con DPN (lisina), y que


igual potencia inhibitoria tienen DNP (hsina)g y
DNP (lisina),. Resultados similares se han obte
nido con anticuerpos antidextrano (fig, 5-40).
Ello indica que el tamao del sito de combina
cin debe ser tan grande como para rodear a
aqullos, lo que significa el compromiso de
aproximadamente 15-30 residuos de los 1.300
que constituyen una molcula de anticuerpo.
Eos estudios cristalogrficos han permitido
calcular que el rea del anticuerpo que interacciona con un epitope tiene un tamao aproxi
mado de 700 A^.
Otros sitios efectores de
las inmunoglobulinas

Localizacin de los sitios. Como ya se indi


cara, adems de los dominios V^j y Vj^ que par
ticipan en la formacin del sitio de combina
cin de la molcula de anticuerpo, o paratope
segn la propuesta de Jem e (vase cap. 4),
existen en los fragmentos constantes de las ca
denas H otros dominios, que son efectores de
funciones, algunas de las cuales se ejercen di
rectamente, en cambio otras slo tienen lugar
despus de la unin antgeno-anticuerpo. Entre
esas propiedades figuran la capacidad de acti
var el sistema complemento a travs de la va
clsica (fijacin de Clq) o de la va alterna, de

fijarse a mastocitos homlogos o heterlogos,


de unirse a linfocitos B, de atravesar mem bra
nas biolgicamente activas (placenta, pared in
testinal del recin nacido), de fijarse a la prote
na A del Staphylococcus aureus, de regular el
ciclo catablico de la molcula proteica de la
que form a parte, de fijarse a macrfagos,, de
reaccionar con factor reumatoideo, etc, La m a
yor parte de esas funciones estn localizadas en
el fragm ento Fe, en los dominios
y C^S
para la IgG e IgA, y en los C,_,2, Cj^3 y Cj^4 p a
ra la IgM e IgE.
Si bien el fragmento Ec completo separable
por tratam iento papanico conserva prctica
mente intacta la actividad de la molcula com
pleta, los dominios aislados se muestran m uy
poco efectivos no obstante existir pruebas indi
rectas de que algunos de ellos son los responsa
bles de determinadas funciones. Se ha observa
do que los fragmentos Ec y pEc de IgG, cons
tituidos casi exclusivam ente por el dom inio
Cjj3, si bien conservan algunos determinantes
antignicos de la molcula entera y la capaci
dad de reaccionar con algunos factores reumatoideos, carecen de la mayor parte de las pro
piedades del fragmento Fe, lo que hace suponer
que gran parte de la actividad de este fragmen
to est localizada en el dominio Cj^2. Un frag
mento de IgG2a de ratn, obtenido por trata
miento enzimtico, que responde a las caracte-

114

Aspectos bsicos de la inmunidad


Fig. 5-39. A . E l s itio d e c o m b in a c i n d e lo s
a n tic u e rp o s e s t f o rm a d o p o r se is b u c le s o c o
d o s, tre s c o rre s p o n d ie n te s al d o m in io V. ( L l ,
L 2 y L 3 ) y tre s al d o m in io V ( H l , H 2 y H 3 ).
B . E s tru c tu ra s c a n n ic a s p ro p u e s ta s p a ra la s r e
g io n e s h i p e r v a r i a b le s d e lo s d o m in io s V k y
V H . L a s u p e rf ic ie a c c e s ib le al a n tg e n o es la
u b ic a d a e n la p a rte s u p e rio r d e las fig u ra s y en
la p a rte in fe rio r la c o rre s p o n d ie n te a la e s tr u c
tu ra rg id a . S e m u e s tra n la c o n fo rm a c i n d e la
c a d e n a p r in c ip a l y a lg u n a s c a d e n a s la te ra le s
d e te r m i n a n te s d e la s e s tr u c tu r a s c a n n ic a s .
(A d a p ta d o d e C h o th ia C ., L e s k A . M ., T r a m o n
ta n o A . y c o l., N ature 3 4 2 :8 7 7 , 1989).

al a n tg en o

Vk

Ll
26

26

||g

L2

L3

VH

26
Phe 2 9 ^

Anticuerpos
rsticas de ese dom inio, ha dem ostrado fijar
Clq, pero su capacidad para activar el sistema
complemento es menor que la del Fe entero.
Se ha demostrado que en la fijacin de C lq a
la IgG l (Ejj.) humana, tienen activa participa
cin los residuos Glu (318), Lys (320) y Lys
(322), ubicados en la parte externa del dominio
CH2, disposicin que facilitara un contacto di
recto con C lq . La unin de protema A (frag
mento B) a IgG l tiene lugar en las proximida
des de la unin de CH2 y CH3.
En la IgG l de cobayo, el dominio responsa
ble de la activacin del complemento por la va
alterna (vase cap. 22) pareciera que es el C H l,
contenido en el fragmento Fd.
El fragmento Fe de la IgA humana es el que
fija el componente secretorio y las cadenas J, y
en el caso de la IgE, slo el Fe entero (P.M. 94
kDa) conserva la capacidad de fijacin a m as
tocitos hom logos, no as el F e de P.M. 57
kDa.
Resulta difcil establecer con seguridad la lo
calizacin de los sitios activos de la porcin
constante de las cadenas H, ya que la inefecti
vidad de dom inios aislados puede deberse a
modificaciones conformacionales derivadas de
los tratamientos enzimticos usados para su ob
tencin. Parecera que los puentes S-S intercatenarios ubicados en la regin de la bisagra y
que form an parte del fragm ento Fe tuvieran
cierta significacin en el mantenimiento de la
actividad de este fragmento. La reduccin de
esos puentes eon mereaptoetanol determina que
la capacidad de la IgG de unirse a Clq y de fi
jarse a m acrfagos dism inuya considerable
mente. La IgE sometida al mismo tratamiento
pierde su capacidad para fijarse a mastocitos
homlogos.
Si bien inmunoglobulinas diferentes pueden
tener propiedades biolgicas similares, ello no
significa que los sitios implicados sean los m is
mos. Dos inmunoglobulinas pueden fijarse a un
mismo receptor pero con distinta afinidad, por
no ser iguales sus estructuras, lo cual puede de
mostrarse por competicin. Pueden unirse tam
bin a receptores muy prximos y la fijacin de
una de ellas crear un impedimento estrico para
la unin de la otra, o ejercer la misma funcin
por unin a receptores distintos no prximos.
En consecuencia, es difcil establecer correla
ciones entre dominios de diferentes inmunoglo
bulinas con respecto a una funcin biolgica
compartida por ambas.
Las inmunoglobulinas IgG e IgM fijan Clq
con distinta afinidad, siendo la ltima la ms
efectiva. De las subclases de IgG humana, la
IgG3 es la que fija ms firmemente Clq, h a
cindolo en orden decreciente la IgG l e IgG2.
La IgC4 no fija el complemento. Los dominios
responsables de ello no son los mismos y esa

115

actividad corresponde al CH2 (P.M. 17 kDa)


de la IgG y al C4 (P.M. 6 ,8 kDa) de la IgM.
En el caso del ratn, la fijacin a macrfagos
de los anticuerpos de tipo IgM e IgG n o es
competitiva; la primera es Ca^+ dependiente.
En el cuadro 5-15 figuran algunas de las pro
piedades atribuidas a los diferentes dom inios
de la IgG.
Cmo fu n cio n a n los sitios efectores. Hay
funciones que son puestas en marcha p o r la
molcula de inmunoglobulina, sin necesidad de
interaccin previa con el antgeno. Entre ellas
est la capacidad para atravesar la placenta, la
unin a la protena A del Staphyococcus a u
reus y el control del ritmo catablieo. Se h a de
mostrado que esas funciones son inherentes al
fragmento Fe sin la participacin del fragmento
Fab. La estructura del fragmento Fe, segn la
clase o subclase de inmunoglobulina de la que
provenga, determ ina que su funcionam iento
pueda ser distinto. En el caso de la regulacin
del ritmo catablieo, la degradacin de IgG es
t en relacin directa con su concentracin sri
ca, no as para la IgM e IgA. El catabolismo de
la IgD est en relacin inversa a su concentra
cin.
La IgG humana intravascular catabolizada
por da vara segn la subclase, siendo del 17%
para la IgG3 y del 7% para cada una de las res
tantes, lo que determina que la vida m edia de
estas ltimas sea de 21 das y slo de 7 das la
de la IgG3.
En la puesta en m archa de otros procesos
biolgicos mediados por anticuerpos es in d is
pensable la interaccin previa con el antgeno
para que aqullos se efectivicen. Numerosas in
vestigaciones han sido desarrolladas con el ob
jeto de conocer el m ecanism o de esa activ a
cin, y todas ellas apuntan a dos posibilidades.
Una es la que considera que la interaccin del
antgeno eon el anticuerpo induce en ste cam
bios conform acionales, y que esa estru ctu ra
adaptada sera la que tendra mayor afinidad
por el receptor, dando una unin firme y esta
ble capaz de poner en marcha un proceso. Si
bien por estudios de dicrosmo circulai' se han
podido detectar cambios de esa naturaleza, y en
algunos casos considerrselos como responsa
bles, la m ayor parte de los autores p arecen
coincidir en que no constituyen una regla gene
ral. La otra posibilidad estima que lo que debe
jugar un papel muy importante es la formacin
de un retculo estable que, consecuentemente,
aumentara la afinidad por el receptor y, si esto
ocurre sobre una membrana celular, el retculo
formado inducira modificaciones que podran
llevar a una redistribucin de los receptores de
superficie. Esta modificacin sera la que indu
cira a la clula a cumplir una funcin determ i
nada. Entre los argumentos en favor de esta in-

116

Aspectos bsicos de la inmunidad

II

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Anticuerpos

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117

118

Aspectos bsicos de ia inmunidad


F ig . 5-40. 50% de in
hibicin por o ligosac
ridos de isom altosa a la
p r e c ip ita c i n d e 1 m i
de suero anti-d ex tran o
por dextrano.

Inmoles de oligosacrido aadido

terpretacin est el hecho de que la IgE entera


fijada a mastocito slo puede desencadenar una
reaccin de hipersensibilidad inmediata cuando
reacciona con un antgeno bivalente o poliva-

C u a d ro 5-16. A lgunas de las pro p ied a d es


atribuidas a los dominios constantes de la IgG
Fragm ento

Fe

F c

pF c

D om inios constitutivos

C 2 C 3

C3

C3

Especificidad de cla.se

-1-

E specificidad de subcla
se

Especificidad alotpica

C apacidad de com bina


cin con el Ag
U nin al factor reum a
toideo

Fijacin del com plem en


to (va clsica)

-1 -0 -*

0- *

lente. Los haptenos simples y antgenos monovalentes carecen de esa propiedad, al igual que
los fragmentos Fab del anticuerpo reagnico.
E sta ltim a interpretacin estara ms de
acuerdo con los hechos, ya que la IgE sola se
fija firmemente al receptor de los mastocitos,
pero la liberacin de histamina recin ocurre
cuando se produce la interaccin con un ligan
do bivalente.
La fijacin de Clq a la molcula de IgG e
IgM libre es un hecho conocido, pero esta fija
cin no lleva a la activacin del sistema com
plemento si la inmunoglobulina no ha formado
un complejo Ag-Ac o ha sido agregada por m
todos fsicos o qumicos. Se presume que ello
puede deberse a que la agregacin expone un
nmero mayor de receptores por Clq -m olcu
la con seis sitios reactivos sim ilares- y que, co
mo consecuencia, se originara un aumento en
la afinidad de la unin. Esta unin firme y esta
ble, con cambios en la conformacin de Clq o
sin ellos, sera la que asegurara su capacidad
para iniciar la activacin de los restantes com
ponentes del sistema complemento (fig. 5-41).

F ijacin a m astocitos he
terlogos

-t-

VARIACIONES ALOTPICAS

C om binacin con la pro


tena A del S. aureus

-1-

H-

En las cadenas L y H de las inmunoglobuli


nas del hombre y de otros vertebrados se han
sealado variaciones alotpicas, correspondien
tes a la presencia de ciertos pptidos que fun
cionan como epitopes o determinantes antignicos y que son heredados de acuerdo con las
leyes de Mendel. Algunos de los alotipos son
conform acionales, por lo que necesitan estar
asociados a otras cadenas polipeptdicas para
que puedan expresarse, de modo que su estruc
tura tridimensional se mantenga. Se los deno
mina tambin factores genticos, son recono
cidos por los receptores antignieos de las clu-

C apacidad para atravesar


m em branas biolgica
m ente activas:
placenta
intestino
C ontrol del ritm o catablico

S lo algunos factores gen tic o s h an sido d e te ctad o s en el d o m i


n io C,.,3
** C o rre s p o n d e a en sa y o s efe c tu a d o s en ra to n e s re c i n n a c id o s,
c o n frag m en to s de IgG de co n e jo (M o rris, T, G. Proc. R. Soc. B.
160: 276, 1964.)

Anticuerpos

119

F ig . 5-41. Posibles m ecanism os de iniciacin de funciones biolgicas reguladas por los sitios activos ubicados en el frag^
m ent Fe de las inm unoglobulinas. A. U nin de inm unoglobulina libre a un receptor (pasaje placentario, regulacin d e rit
m o catablieo; fijacin a la protena A del Staphyococcus aureus). B. F orm acin de un retculo A g-A c-receptor q ue o rig i
na m odificaciones en la m em brana celular (hipersensibilidad m ediada po r anticuerpos citotrpicos). C. 1) Form acin d e un
com plejo de baja afinidad (fijacin de C lq a la IgG libre, sin activacin de los restantes com ponentes de com plem ento). II)
Form acin de un com plejo de alta afinidad (fijacin de C lq a un com plejo A g-A c con subsecuente activacin de los otro s
com ponentes del com plem ento.

las B y T y pueden ser simples o complejos. El


origen de los primeros puede explicarse fcil
m ente por m utaciones som ticas, las cuales
pueden haber originado formas allicas de un
mismo locus. El origen de los alotipos comple
jos es ms difcil de concebir y sobre el parti
cular se han formulado diferentes hiptesis.

Los distintos alotipos estn bajo el respecti


vo control gentico de locus segregados in d e
pendientem ente. Son autosmicos y codom inantes, lo cual significa que se expresan en heterocigotas y son independientes del sexo.
En las cadenas L de tipo k humanas han sido
identificados los alotipos Km, y los Gm y Am

C uadro 5-17. Nomenclatura y localizacin de los alotipos ms frecuentes del hoi.ibre y conejo
Especie

L ocus

Localizacin

A lotipos

G lm

C yl (C I)

G lm (4 )
G lm (1 7 )
G lm ( I)
G lm (-I)
G2m (23)
G 2m (-23)
G 3m(5)
G 3m(-5)
G3m (15)
G3ni(16)
G3m (21)
G 3m (-2I)
G 3m(6)
G 3 m (ll)
G 3 m (-ll)
G 3m (13)
G 3m (I4)
G 4m (4a)
G 4m (4b)
A 2 m (l)
A 2m (2)
K m (l)
K m (l,2 )
Km(3)

Aminocido.^ com prom etidos*

H om bre

Cyl (C3)
G 2m

Cy2 (C2)

G3m

Cy3 (C,.,2)

Cy3 (C3)

Cy4 (G2)
C a 2 (C3)
G 4m

C[-

A 2m
Km

A rg (214)
Lys (214)
A sp(356)-G lu-L eu(358)-T hr-L ys
G lu(356)-G lu-M et(358)-T hr-L ys

Tyr(296)
P he(296)
P he(436)
Tyr(436)

P h e(4 1 1 )-A sp(428)-V al(458)-V aI(467)


T h r(4 1 1)-G lu(428)-Ile(458)-A la(467)
V al(I5 3 ), Leu(191)
A la(I5 3 ), L eu(19I)
A la(I5 3 ), V al(191)

Conejo

V
c,
c.
Ms

c.

A l, A2, A3
B4, B5, B6, B 9
C l, C21
d ll
d l2
e l4
e l5
M sl6 , M sl7

' E n m ero e n tre p arn tesis c o rresp o n d e a la ubicacin en la s e c u e n c ia am in o ac d ic a.

S ustituciones mltiples
Sustituciones miiltiples
M et(225)
Thr(225)
Thr(309)
A la(309)

120

Aspectos bsicos de la inmunidad

en las cadenas y y a de las inmunoglobulinas


IgG e IgA, respectivamente. Los alotipos de las
cadenas H (Gm y Am) estn asociados con las
diferentes subclases de inmunoglobulinas y go
bernados por loci relacionados, algunos de los
cuales son multiallieos.
Si bien en un comienzo existi cierta anar
qua en la nomenclatura de los alotipos, actual
mente se identifican con las letras que se co
rresponden con la clase y subclase de cadenas
H, seguido de m y de inmediato y entre parn
tesis el nmero del alelo. Ejemplos: G lm (l) y
G lm ( 1 7 ); G 3 m (6 ), G 3 m (1 3 ), G 3 m (1 4 );
A 2m (l) y A2m(2). En las cadenas L de tipo k
han sido identificados tres alotipos, K m (l),
K m (l,2 )y Km(3).
Cada alotipo Gm est localizado en slo una
subclase de cadena y. Los alotpos Gm y Am
estn ubicados en el fragmento constante, espe
cialm ente en los dom inios C2 y Cj,3 (Ec),
aunque algunos de ellos estn en el dominio
Cj^l (Ed). Los alotipos Km se encuentran en el
fragmento constante C, de las cadenas K (cua
dro 5-17). Los alotpos Km estn presentes en
todas las clases de inmunoglobulinas, mientras
que los Gm y Am lo estn exclusivamente en
las IgG e IgA.
En subclases de IgG se ha dem ostrado la
presencia de marcadores genticos (Gm) que
pueden existir como isoantgenos en otras sub
clases de cadenas y. Se los designa no marca
dores o isoalotpos, y es posible que sean se
cuencias bsicas comunes a genes de las dife
rentes subclases de IgG. Las variantes 4a y 4b
son alelos presentes en las cadenas y^ y se los
denomina G4m(4a) y G4m(4b). Este ltimo ha
sido hallado en la cadena y^, pero expresado en
ambos genes parentales, lo cual no constituye
un marcador diferencial. Es posible que la re
gin del ADN que codifica para estos antge
nos en uno de los genes haya podido ser altera
da por mutaciones, generando polimorfismo en
una de las subclases. El alotipo G lm (l), por
ejemplo, se ha encontrado en las cadenas yj, y
cuando est presente el fragmento responsable
es el pentapptido Asp-Glu-Leu-Thr-Lys en la
posicin 355-360, Cuando en esta cadena se
halla ausente [G lm (-l)], la secuencia del ppti
do es Glu-Glu-Met-Thr-Lys, difiriendo del an
terior en dos aminocidos. La secuencia corres
pondiente al alotipo G lm (l) se encuentra tam
bin en la IgG2 y en la IgG3, pero no en la
IgG4. Puede originar anticuerpos especficos,
est siempre presente por lo que no es un aloti,po, y por tanto en estas subclases de inmunoglobulina IgG slo es un no marcador (cua
dro 5-18).
Los alotipos Km estn relacionados con va
riaciones aminoacdicas en las posiciones 153
y 191 [K m (l): Val(153), Leu(191); K m (l,2):

Fig. 5-18. Factores genticos no m arcado


res o isoalotipos en el hombre
'No m a rca d o res
Subclase
de cadena

N om enclatura
original

N om enclatura
actual

no-Uj

n G m l(l)
n G m 3 (5 )
m G m 3 (l 1)
n O m 3 (2 1 )
n G m 4 (4 b )

n o -b
llO-b

no-g
y.,

4b

A la (1 5 3 ), L e u (1 9 1 ); K m (3) : A la (1 5 3 ),
Val(191)].
En el conejo el conjunto de alotipos es muy
extenso, y marcadores que corresponden a esta
categora han sido identificados en las cadenas
y (IgG), a (IgA), |i (IgM), k (L) y A (L). Al
igual ciue en los alotipos humanos, son multiallicos, codominantes y segregados indepen
dientemente.
El locus a tiene tres alelos (al, a2 y a3) y los
alotipos se expresan en la parte variable de to
das las cadenas H. Son alotipos complejos, ya
que cada uno difiere del otro en no menos de
seis aminocidos. Siendo el fragmento variable
de las cadenas H la expresin de un producto
de recombinacin de genes, que aparentemente
ocurre al azar, este alehsmo es difcil de expli
car. Algunos suponen que podra estar localiza
do en un fragmento regulatorio adyacente a di
chos genes.
El locus b, con nueve alelos, cuatro de los
cuales (b4, b5, b 6 y b9) son predominantes, de
terminan caractersticas antignicas localizadas
en el fragmento constante de las cadenas L de
tipo K. Son alotipos com plejos, y cuando se
compu-an las secuencias de aminocidos entre
ellos, muestran diferencias prximas al 30%,
El locus c codifica para cadenas L de tipo k .
Se conocen los alelos c l y c21, y hay conejos
homocigotas que no expresan ninguno de ellos.
Estos animales se identifican como c-negativos.
Los alotipos d l l , d l2 , e l4 y e l5 , correspon
dientes a los locus d y e, estn localizados en
las cadenas y de la IgG de conejo. Los alotipos
d i 1 y d i 2 estn ubicados en la zona de la bisa
gra. El di 1 est asociado con la presencia de
un residuo de metionina en posicin 225 (adya
cente y aminoterminal de la cistena que parti
cipa en la formacin del puente disulfuro inter
cadenas H), mientras que el d i 2 est asociado a
una treonina en esa posicin. Los alelos e l4 y
e l 5 estn ubicados en la porcin terminal del
fragmento Fe (residuo 309). En el alotipo e l4
en esa posicin hay treonina, la cual es sustitui
da por alanina en el e l 5.

Anticuerpos
En las cadenas (i ha sido identificado el lo
cus del alotipo Mn, del que se conocen ocho
alotipos.
En ratas, ratones y otros mamferos tambin
se han identificado alotipos de inmunoglobuli
nas. l^a rata presenta alotipos en el fragmento
constante de las cadenas L k , mientras que en el
ratn no existen alotipos para ninguno de los
subtipos de cadenas k y X,. Ambos anim ales
presentan alotipos en los fragmentos constantes
de las cadenas H (y). Para su identificacin se
han usado diferentes nomenclaturas.
Es posible obtener anti sueros contra los dife
rentes alotipos de las inm unoglobulinas del
hombre, conejo y otros animales; ello ha per
mitido la tipificacin serolgica y determina
cin del tipo gentico a que pertenecen, en es
pecial las inm unoglobulinas hom ogneas de
mielomas. La tipificacin de la IgG provenien
te de un suero humano normal, constituida por
una mezcla de IgG l, IgG2, IgG3 e IgG4, slo
perm ite conocer los alotipos presentes en la
mezcla, pero no los individuales. En el conejo,
el fenotipo hallado depende del carcter homocigoto o heteroeigoto del animal en estudio.
Los mtodos serolgicos empleados para es
tos ensayos se basan en la inhibicin de la
aglutinacin que la inmunoglobulina en estudio
puede producir, al actuar sobre un sistem a
aglutinante constituido por hemates que tienen
fijada IgG de genotipo conocido, y su corres
pondiente anticuerpo. Su determinacin puede
efectuarse tambin por ELISA.
VARIACIONES IDIOTPICAS
Kunkel pudo dem ostrar que al inocular un
conejo con una determinada IgG de mieloma se
obtena un antisuero y que, al ser absorbido con
otra IgG de mieloma distinta a la anterior pero
perteneciente a la misma subclase, quedaba un
remanente de anticuerpos que slo reacciona
ban con la IgG usada como inmungeno. C on
cluy que la especificidad estaba dirigida con
tra determinantes antignieos presentes en la
parte variable de las cadenas L y H de la m ol
cula, los que se identificaron con el nombre de
idiotipos.
Un determinante simple del fragmento varia
ble (Fv) se denom ina idiotopo y se llam a
idiotipo a la suma de todos aquellos que se
encuentran presentes en un dominio variable.
Los anticuerpos capaces de reconocerlos se lla
man antiidiotpicos. Se han identificado idio
tipos localizados en las cadenas L, H y algunos
que involucran a am bas. T am bin se los ha
identificado en los fragmentos variables de las
cadenas L y H que no estn relacionados con la
zonas de hipervariabilidad. Teniendo en cuenta

121

el mecanismo por el cual se genera diversificacin en las inmunoglobuhnas, que es el resulta


do de recombinacin de mltiples genes V^,
V|^, D|,, y
que aparentemente ocurre al azar,
es comprensible que un mismo idiotipo pueda
estar localizado en sitios de combinacin o p a
ratopes correspondientes a anticuerpos con dis
tinta especificidad, y que en algunos casos ha
ya sido posible agruparlos en familias, en las
que pueden estar incluidos anticuerpos con es
pecificidad no relacionada. A estos idiotipos se
los llam a pblicos , y privados si slo se
hallan presentes en una determinada molcula.
El hecho de que un epitope antignico pueda
ser reconocido por paratopes que no comparten
el m ism o idiotipo y que un m ism o id io tip o
pueda estar en paratopes diferentes constituy
la base de la hiptesis de Jeme sobre la regula
cin del sistema inmune a travs de la red idiotipo-antiidiotipo.
A GLUTIN IN AS PR O C E D E N TE S
DE PLAN TAS E IN VERTEBRAD OS
A partir de diferentes variedades de h a b i
chuelas (Phaseolus limensis, Vicia craca, Vicia
gramnea, Vicia fava. Vicia ervlia), de sem i
llas de ricino {Ricnus comunis), Bauhina p u r
purea, etc., se han preparado extractos en los
que se han encontrado sustancias con capaci
dad para interaccionar con componentes antignicos de los glbulos rojos y prc lucir agluti
nacin. Estas sustancias, cuya especificidad es
para componentes hidrocarbonados, son cono
cidas con el nombre de lectinas; pueden fijar
m onosacridos y oligosacridos y precip itar
glucoprotenas. La actividad ms comn es anti-A, anti-H, anti-N y a veces anti-B y anti-M.
No se han encontrado lectinas contra antgenos
del sistema Rh. Ello podra deberse a que estos
antgenos son lipoprotenas y en las lectinas s
lo ha podido dem ostrarse especificidad para
azcares (cuadro 5-19).
Estas sustancias han sido empleadas en for
ma rutinaria en la agrupacin sangunea, en es
pecial en la determinacin de subgrupos A y
AB y en la investigacin de secretores.
Los estudios fisicoqumicos han demostrado
que, si bien interaccionan con antgenos hem
ticos, no son inmunoglobulinas. Se fijan a re
ceptores hemticos expuestos en la membrana
de la clula y en algunos casos se ha consegui
do, con monosacridos y oligosacridos, inhi
bir su accin aglutinante. Se han intentado es
tudios de interaccin primaria con el objeto de
determinar la valencia de las lectinas, pero en
su mayora se han visto dificultados por no ha
berse podido determ inar con certeza el peso
molecular de las sustancias ensayadas.

122

Aspectos bsicos de la inm unidad

C u ad ro 5-19. Especificidad de diferentes leetinas para eritrocitos humanos


Especificidad

mentos constantes en las cadenas L y H (fig.


4-29) y de subtipos para ambos tipos de cade
nas, propuso la siguiente nomenclatura:

O rigen

Anti-A

P haseolus limensis
Phaseolus lunatus
C rotolaria aegyptica
C rotolaria fa lca ta
Vicia peregrina
Vicia vilosa
D olichos biflorus
H elix pom atia
CUtocyba nebularis
O tala lactea
H yptos siiayeolens

Anti-B

M arasm ius oreales


B andeiraea sim plicifolia
Polysporus fom entarius
Sophora ja p n ica

A nli-H

U lex europaeus
L otus tetragonolohus
Cytisus sessifolis
Laburnurn alpinum
O nonis spinosa
Xylaria polym orpha
Tetragonolobus purpureas

A nti-M

Iberis am ara

Anti-N

Vicia gram nea


Bauhinia purpurea

En la hemolinfa de crustceos, moluscos y


otros invertebrados se han encontrado tambin
aglutininas similares a las anteriores, capaces
de aglutinar bacterias y glbulos rojos de verte
brados. Son sustancias proteicas de alto peso
molecular, muy resistentes a las enzimas pro
teolticas. En el fluido celnico de loinbrices de
tierra portadoras de injertos heterlogos se han
encontrado sustancias no presentes en lombri
ces portadoras de injertos autlogos, las que re
presentaran aglutininas contra los antgenos
extraos.
Algunas de las leetinas conocidas son mito
gnicas de determinados tipos de clulas linfoi
des; de ah que ltimamente se las haya utiliza
do con xito en la diferenciacin de linfocitos
T y B. Tambin, dada su capacidad para inte
raccionar con hidratos de carbono, algunas de
ellas, como la concanavalina A, ha sido utiliza
da para aislar y purificar glucoprotenas, inclui
das inmunoglobulinas.
N O M EN CLA TU RA
DE LAS INMUNOGLOBULINAS
Un comit de expertos de la Organizacin
M undial de la Salud, teniendo en cuenta la
existencia de segm entos variables y de seg

C adenas L
C k y Cy para los segmentos constantes de
ambas cadenas.
VKp V k , Vk,jj, V k ,.^, para los subtipos de
cadenas K con variabilidad localizada en el seg
mento variable.
V^,, VI,j, V l|, VX,y, VA,av^, VXy,, para los
subtipos de cadenas A, con variabilidad locali
zada en el segmento variable.
C adenasH
Cy, Cft, C a , C5, Ce, para los segm entos
constantes de las cadenas H de IgG, IgM, IgA,
IgD e IgE, respectivamente.
Vy, Vji, V a, V 8 , Ve, para los segmentos va
riables de las mismas cadenas.
Para la IgG que tiene cuatro subtipos de ca
denas H, con diferenciacin en el segm ento
constante, Cy se ampla a Cy,, Cyj, Cy, y Cy_^.
De igual modo C|J, C a l, Ca2.
C om o cada segm ento H constante puede
subdividirse en tres dominios, uno correspon
diente al segmento Fd y los restantes al frag
mento Fe, cada fragmento H constante estar
constituido por CH,, CH^ y CH,,.
Sobre la base de lo expuesto, las frmulas de
las inmunoglobulinas pueden expresarse de una
manera ms compleja, pero a su vez ms expl
cita.
La IgG del tipo 1, es decir la IgG l, con ca
denas K del tipo II, tiene la frmula
1(Vk . C k) (V y . Cyl)]^
Si se quiere hacer referencia a los com po
nentes de las fracciones constantes de las cade
nas H, la frmula se ampla:
[ ( V K . C K ) ( V y . C y , ' . Cy, 2. Cy,3)

La frmula general de la IgM ser:


I [ (V k . C k ) (V ^ . C[i) ], 1,
El mismo esquema se utiliza para las restan
tes inmunoglobulinas.
Estas frm ulas son tiles para expresar la
composicin de algunas inmunoglobulinas, en
especial un tipo de IgA en que las dos cadenas
L estn unidas entre s al igual que las cadenas
H, y las uniones L-H no son de tipo covalente
por puentes S-S. Para ellas la frmula sera:
(V k . C k) (V a . C a),

Anticuerpos
Para el caso de las IgA halladas en secrecio
nes, la frmula resultante es la siguiente:
[ [ (V k . C k) (V a . C a)

J^S

Siendo S el componente secretorio.


O T R A S M O L C U L A S R E L A C IO N A D A S
CO N L A S INMUNOGLOBULINAS
L a superfam ilia
de las inm unoglobulinas

Bajo este rubro se incluyen molculas pro


teicas cuya principal caracterstica es la de pre
sentar en su estructura bucles o loops simila
res a los que se observan en los fragmentos va
riables (V) y constantes (C) de las cadenas L y
H de las inmunoglobulinas. El nmero de bu
cles no es constante y -vara segn el origen de
la molcula. Estos bucles como en las inmunoglobulinas, estn constituidos por dos hojas an
tiparalelas plegadas en p, formando un sand
wich o emparedado, presentando cada una de
las hojas 3 o 4 fibras. En la mayora de los ca
sos ambas hojas estn unidas por un puente disulfuro perpendicular a las mismas, estando los
residuos hidrofbicos orientados hacia el cen
tro del ncleo.
A los dom inios que presentan hom ologa
con el dominio variable de las cadenas L o H,
constituidos por 65-75 residuos, se los designa
V, y con C a los que presentan homologa con
los dominios constantes, los que estn consti
tuidos por 55-60 residuos. En este caso se los
designa C l , y con C 2 a aquellos que poseen es
tructuras intermedias con los dominios V y C.
Por regla general la secuencia de aminocidos
es menor que la correspondiente al C l, origi
nando un bucle ms pequeo.
Cabe hacer notar que a aquellos dominios de
las molculas de la Superfamilia que presentan
hom ologa con los dominios variables de las
inmunoglobulinas se los denomina V, por su
similitud con estos dominios, sin que ello sig
nifique variabilidad tal como ocurre con los do
minios V de las cadenas L y H (fig. 5-42).
Los estudios estructurales de estas protenas
llevan a suponer un origen comn a partir de
un gen ancestral correspondiente a un receptor
primordial de superficie, que codificara para
1 0 0 residuos, con dos restos de cistena que al
unirse y originar un puente disulfuro daran lu
gar a un bucle. Los genes que codifican para
los diferentes miembros de la Superfamilia ha
bran surgido por duplicacin gnica y diver
gencia a partir de ese dominio primordial. Los
genes que codifican para estas protenas estn
distribuidos en distintos cromosomas.

123

Las protenas que forman parte de la Super


familia de la inmunoglobulina pueden incluir
se en diferentes grupos segn la funcin que
cumplen y el tejido con el que estn relaciona
das. Los grupos ms importantes son: a) inm u
noglobulinas: cadenas H, cadenas k y cadenas
A; b) complejo RCT-CD3: cadenas a ,p o yS del
RCT y cadenas y,5,e de CD3; c) complejo m a
y o r de h isto c o m p a tib ilid a d : cadenas oc de
CMH-I y pj-microglobulina, cadenas a y i de
CMEl-II; d) antgenos asociados a (i^-microglobulina: cadenas a de los antgenos TL, Qa
y C D l a; e) molculas de adhesin: CD2, LFA3; f) a ntgenos de su p erficie de lin fo cito s:
CD4, cadenas T y II de CD 8 y CTLA-4; g) an
tgenos localizados en cerebro y linfocitos:
Thy-1, MRC OH-2; h) receptores de inmunoglobulinas: RPolylg, RPcy2b/yl; i) m olculas
re la c io n a d a s con tejid o n ervio so : N C A M
(m o lcu la de adhesin de tejido n erv io so ),
MAG (glucoprotena asociada a m ielina), Po
(protena de mielina); j) antgenos tumorales:
CEA (antgeno carcinoembrionario; k) recep
tores de factores de crecimiento: RPDGF (re
ceptor del factor de crecim iento derivado de
plaquetas), RCSE-1 (receptor del factor esti
m ulante de colonias- 1 ); 1) molculas que no
form an parte de la superficie celular: a ,B g p
(glucoprotena a,B ), LINK (protena de unin
a membrana basal).
En el cuadro 5-20 figuran algunas de las ca
ractersticas ms importantes de estas p ro te
nas.
Casi todas las protenas de la Superfamilia
asociadas a clulas tienen una parte citoplas
mtica, la C-term inal, seguida de una tra n s
membrnica de carcter hidrofbico y una por
cin extracelular donde se encuentran localiza
dos los dominios V y/o C. Algunas de estas
protenas no estn insertadas en la mem brana
celular, sino que estn unidas a sta por un an
claje de tipo glucofoslipdico (fig. 5-42: prote
nas THy-1, LEA-3, CEA).
En los receptores antignicos de los linfoci
tos B y T la unin al ligando (antgeno o CM Hpptido) tiene lugar a travs de la superficie
que en la parte superior de la molcula forman
los fragmentos V, y C, de la Ig y las cadenas a
y p del RCT. Las otras interacciones de los do
minios de las inm unoglobulinas tienen lugar
por contacto entre las caras de las hojas plega
das en p como ocurre con C, y C,., (fragmento
Fb, unin heteroflica) y Cj,3...C^3 (fragmento
Fe, unin homoflica). Ello hace suponer que
las interacciones entre molculas de la Superfa
milia tienen lugar por un mecanismo sim ilar,
que los dominios V, C l o C2 pueden interac
cionar con otras molculas a travs de alguna
parte accesible de sus superficies, y que las
uniones son no covalentes y de distinta afini-

124

Aspectos bsicos de la inmunidad

C uadro 5-20. Principales componentes de la Superfamilia de las inmunoglobulinas, la mayora


de las cuales se expresan en la superficie de diferentes clulas
M olcula

Tejido en el que se expresan

Ig (inm unoglobulinas)

Slo en linfocitos B

R C T (receptor del LT)

En linfocitos T y tim ocitos

CD3 (cadenas y, 5, e)
C M H (antgenos del com plejo m ayor
de de histocom patibilidad)
P,-m globulina
C b 2 y LFA-3

En linfocitos T y tim ocitos


D iferentes tipos celulares; inducidos
po r interfern
D iferentes grupos de clulas linfoides
Linfocitos y tim ocitos

C D 4 y CD8
C TLA -4

CD 4 y CD8 en tim ocitos y poblaciones


de linfocitos T
CD 4 en m acrfagos
CD 8 en clulas N K
C TL A -4 en clulas T activadas
C lulas linfoides y cerebro. Se locali
zan en neuronas, fibroblastos y dife
rentes clulas linfoides

Thy-1

Funcin
R eceptor antignico del LB, A nticuer
pos
R eceptor antignico del LT, N o se co
nocen form as solubles del R C T
Form an parte del com plejo RCT-CD 3
Presentan pptidos de antgenos ex tra
os al RC T
Se desconoce su funcin
C D 2 de clula T interacciona con
LFA -3 presente en otras clulas m e
diante reacciones de adhesin. F un
ciones sim ilares cum plen las m olcu
las CA M (molculas de adhesin ce
lular)
C D 4 y CD8 controlan la interaccin de
los L T con los antgenos CM H clase

lyll,
C TLA-4: funcin desconocida
A nticuerpos anti-Thy-I inducen divi
sin de los linfocitos T, No se cono
cen sus receptores en el sistem a ner
vioso
Se desconoce su funcin

M R C OX-2

Se localiza en neuronas, endotelio y d i


ferentes linfocitos

R P o ly lg (receptor de IgM e IgA poli


mricas)

E pitelio intestinal y heptico

RFC-ylb/yl (receptor de IgG)


N C A M (m olcula de adhesin del sis
tem a nervioso)

P o (protena de m ielina)

M acrfagos
Form a parte del grupo de molculas
asociadas al sistem a nervioso. Se la
encuentra en las neuronas y gla
C orresponde al m ism o grupo de m ol
culas que N CA M , Se localiza en
m ielina central y perifrica y algunas
neuronas
M ielina perifrica

CEA (antgeno carcinocm brionario)

Clulas epiteliales y sus tum ores

R P D G F (receptor del factor de creci


m iento derivado de plaquetas)

C lulas m esenquim al es

R C S F l (receptor del factor estim ulante


de co lo n ias-1)
L IN K (protena de unin a m em brana
b asal)
a l B-gp (glucoprotena a IB)

M onocitos

Constituye el 50% de la protena de


m ielina perifrica
M arcador tum oral. F uncin desconoci
da
Interacciona con factores de creci
m iento para iniciar divisin celular y
otras actividades
Sim ilar a R PD G F

M em brana basal (no es una m olcula


de superficie celular)
G lucoprotena hallada en suero

Actiia com o m olcula de unin entre


proteoglicano y hialuronatos
Se desconoce su funcin y ligandos

M A G (glucoprotena asociada a m ieli


na)

dad segn la funcin que esas interaceiones po


nen en marcha.
Considerando el supuesto origen comn de
estas diferentes molculas de la Superfamilia de
las inmunoglobuhnas, se ha sugerido que el rol
primitivo de estas molculas ha sido el de reco
nocim iento celular, y que una diferenciacin
posterior las ha llevado a cumplir distintas fun
ciones como la adhesin celular, la captacin de
ligandos actuando coino receptores, etc. Estas

T ransporta form as m nltim ricas de


IgM e IgA a travs del epitelio. El
p rim er dom inio fija IgA, Los dom i
nios extracelulares liberados de
m em brana por protelisis constitu
yen el Com ponente Secretorio (S)
Fija IgA agregada
M edia la adhesin de clulas nerviosas

Podra funcionar en m ielinizacin

funciones las cumplen no slo a travs de las


clulas y tejidos comprometidos con la respues
ta ininune, sino tambin con otros tejidos, entre
ellos los componentes del sistema nervioso.
Si bien las m olculas descritas han sido
identificadas en vertebrados, sera muy impor
tante tener conocimiento sobre su posible exis
tencia en invertebrados; ello sera de gran utili
dad para establecer su evolucin estructural y
funcional.

Anticuerpos
Inmunoglobulina
(IgM)

125

Complejo RCT-CD3

F ig . 5-42. Superfam ilia de las imrrunoglobulinas. Las siglas con las que se identifican las diferentes protenas com i^onentes de esta fam ilia son las indicadas en el cuadro 5-18. Los dom inios sealados con V y Cl presentan sim ilitud con lo s d o
m inios V y C de las cadenas H de las inm unoglobulinas. Los identificados con C2 corresponden a estructuras interm edias
com partidas con V y C y son de m enor tam ao por estar constituidos po r un nm ero de residuos inferior al co rresp o n d ien
te a los dom inios constantes de las inm unoglobulinas. L as m olculas en las que se representan dom inios distintos a lo s b u
cles, corresponden a estructuras no sim ilares a los dom inios V o C de las inm unoglobulinas. El signo () indica h id ra to de
carbono. El anclado a m em brana por unin gluco-fosfatidilinositol de algunas de las protenas est indicado por una flech a
( i ) . (A daptado de W illiam s, A. F., Barclay, A. N. Ann. Rev. Inim unol, 6:381, 1988).

126

Aspectos bsicos de ia inmunidad

Cuadro 5-21. Receptores para Fe (humanos)


A fin id a d para

Am inocidos
N om enclatura

Cadenas PM (kD ) Citopl. Transm.. E xtracel.

huR IFcy
huR IlF cy
huR IIIFcy
huR lF ce

S im ple 72
S im ple 40
a-y2aC 2 50-80
a|3Y2

45-65

63
76
25
31

21

28
21
21

273
186
191
180

Receptores para Fe
Por regla general los fragmentos Fe de las
inmunoglobulinas pueden ser fijados a la su
perficie celular por molculas del grupo de las
glucosiltransferasas que reconocen la parte hidrocarbonada de la molcula, por molculas si
milares a leetinas y por los receptores para Fe.
Desde com ienzo de siglo se tena conoci
miento de la existencia en el suero de factores
termoestables y termosensibles conocidos co
mo opsoninas, con capacidad para unirse a bac
terias y facilitar su captacin y fagocitosis por
los macrfagos. Actualmente se sabe que esos
factores son anticuerpos y componentes del sis
tema complemento, los que se unen a los fago
citos por intermedio de receptores para esos li
gandos. A los que tienen capacidad para-fijar
inmunoglobulinas se los designa receptores Fe
(RFC).
Los RFc fueron identificados en el hombre y
otros vertebrados a partir de 1972, cuando se
hicieron los primeros estudios sobre los meca
nismos de la fijacin de complejos Ag-Ac so
bre linfocitos B y T . Esos estudios estuvieron
dificultados por la metodologa disponible en
esos momentos. El advenimiento de los anti
cuerpos monoclonales, el clonado de lneas ce
lulares, la citometra de flujo y los estudios a
nivel de genes han permitido tener un concepto
claro sobre estructura, funcin y relaciones en
tre los receptores para Fe de las distintas clases
y/o subclases de inmunoglobulinas. Estos re
ceptores juegan un rol fundamental en aquellos
mecanismos celulares de defensa iniciados por
la fijacin del Fe de molculas de anticuerpos o
complejos inmunes sobre diferentes clulas del
sistema hematopoytico, entre los que cabe ci
tar la fagocitosis, la citotoxicidad dependiente
de anticuerpo (ADCC), la citotoxicidad por c
lulas NK (natural killer), la captura y presen
tacin de antgenos, procesos en los que se ha
demostrado que el evento inicial para los RFc
es la agregacin.
Adems de participar en funciones efectoras
de la respuesta inmune, los RFc, al interaccio
nar con los Fe de las molculas de anticuerpos,

CD

IgG (Ka)

Ig E (K a )

CD 64
I0**-109
C D w 32 <10
CD 16
<10
10'

E specificidad
I g G l> Ig G 3 > Ig G 4 Ig G 2
I g G l= Ig G 3 Ig G 2 ,Ig G 4
I g G I= lg G 3 Ig G 2 ,Ig G 4
IgE

pueden regular otras funciones como la expre


sin de linfoquinas, otros receptores celulares e
iniciar procesos de diferenciacin celular.
Para identificar la inmunoglobulina que son
capaces de fijar, los RFc llevan adicionada la
letra griega de la correspondiente cadena Bl:
RFcy, RFc|i., R F ca, RF ce, RF c5. En aquellos
casos que exista ms de un receptor por clase
de inmunoglobulina, la letra R va seguida del
n m ero ro m a n o c o rre s p o n d ie n te : R IF cy,
RIIFcy, RIIIFcy, RIFce, RIIFce.
Los receptores para Fe han sido estudiados
en el hombre y otras especies animales como
ratn y rata. Se los identifica anteponiendo a la
letra R las siglas hu(humano), mu(murino),
rt(rata): huRIFcy, muRFcy2b, rtRIFce, etc.
Los receptores para Fe estn formados por
un nmero variable de unidades segn el recep
tor; tien en p o rcio n es in trac ito p la sm tic as,
transmembrnicas y extracelulares, y presentan
dominios similares a los C2 de la Superfamilia
de las inmunoglobulinas, en la que han sido in
cluidos. Hace excepcin a esta regla el RIFce,
que fija molculas de IgE con uniones de baja
afinidad.
Se han descrito receptores para todos los iso
tipos de inmunoglobulinas, no obstante, son los
RFcy y los RFce los que han sido mejor estu
diados y sobre los que se han volcado la mayo
ra de los anlisis estructurales correspondien
tes a estas molculas.
Receptores para Fe de IgG en humanos
(huRFcy)
Los receptores para Fe de origen hum ano
con esp ecificid ad para IgG (huRFcy) estn
agrupados en tres categoras de acuerdo con su
e stru c tu ra y re a c tiv id a d : R IFcy, R IIF cy y
RIIIFcy. En la figura 5-43 se encuentran esque
m atizadas dichas estructuras y en el cuadro
5-21 resumidas sus propiedades.
El R IF cy es de alta afinidad, capaz de fijar
IgG monomrica con una constante de afinidad
(Ka) del orden 10-10 M*. Este receptor est
presente en monocitos y macrfagos, y en poli
morfonucleares neutrfilos humanos puede ser

Anticuerpos

127

inducido por interfern gamma (INF-y). En al nas estirpes de linfocitos T perifricos. La prin
gunas lneas de monocitos el INF-y puede in cipal caracterstica de este receptor es que en
crem en tar h asta 2 0 veces la expresin del macrfagos y clulas NK se expresa como una
RIFcy, cuyo nmero normal por clula oscila protena transmembrnica, en tanto que en neu
entre 1 x IO'* a 5 x lO"*. La Reunin de Expertos trfilos lo hace como una protena fijada por
en Antgenos de Diferenciacin ha designado a una unin glucano-fosfatidilnositol (fig. 5-43).
huRIFc y como CD64. A diferencia de los otros O tra caracterstica de este receptor es que la
receptores de baja afinidad, que poseen dos do protena posee cido asprtico, aminocido car
minios extracelulares del tipo C2, el huRIFcy gado, en la porcin correspondiente al sector
tiene tres. Los dos primeros dominios extrace- transmembrnico. La expresin transmembrni
luiares son homlogos a los dominios corres ca del RIIIFcy es dependiente de la coexpresin
pondientes a los receptores RIIFcy y RIIIFcy. de la subunidad y del RIFce o de la subunidad ^
Todo hace presumir que el tercer dominio del del complejo RCT-CD3, ambas con residuos
RIFcy debe desem pear un rol importante en cargados en el dominio transmembrnico.
Aproximadamente 10^ copias de R IIIFcy se
las uniones de alta afinidad del receptor a li
gandos. El RIFcy tiene una masa relativa de 72 expresan en la superficie de los neutrfilos hu
kD y la capacidad para fijar los diferentes sub manos. Estos receptores estn altamente gluco
clases de IgG humanas vara en el siguiente or silados y en geles migran como protenas de 50den: IgG l> IgG 3> IgG 4IgG 2.
80 kDa, en tanto que los expresados en m acr
Todos los ensayos sealados parecen indicar fagos lo hacen como protenas de 53 kD. El fac
que el RIFcy es univalente. La principal fun tor de transformacin de crecimiento-p (TGFcin efectora en la que el receptor participa es p) aumenta la expresin del RIIIFcy en las su
perficies celulares. Se identifica al RIIIFcy con
la ADCC.
El segundo receptor para IgG humano {hu- el antgeno de diferenciacin C D l 6 .
En los macrfagos, en los que el receptor es
RIlFcy) es una protena de 40-50 kD, presente
en una variedad de tipos celulares entre los que de tipo transmembrnico, activa la fagocitosis.
se incluyen monocitos, macrfagos, plaquetas, En los neutrfilos, en los que el anclado del re
eosinfilos y linfocitos B; no se lo encuentra en ceptor a membrana es por unin glucano-fosfatidilinositol, se discute que funcin cum ple.
clulas T.
Siguiendo las recomendaciones del Comit Ello porque el entrecruzamiento de este recep
de Expertos en Antgenos de Diferenciacin se tor mediado por un anticuerpo anti-receptor es
lo designa CDw32. A nivel genmico se han pecfico induce en los neutrfilos aumento de
identificado tres genes denominados IIA, IIB y calcio libre en el citosol y de actina F, lo que
IIC los que codifican seis transcriptos. Todos estara indicando que es capaz de mediar algu
ellos se expresan en monocitos; IIA y IIC se na seal transm em brnica aunque no se en
expresan en polimorfonucleares neutrfilos y cuentre insertado en ella.
En cuanto a la especificidad por las inmunoalgunas clulas pluripotenciales, y no lo hacen
en linfocitos y clulas NK. HuRIIBFcy se ex g lo b u lin as es sim ila r a la in dicada p a ra el
presa preferencialm ente en linfocitos. Su n RIIFcy.
mero por clulas es variable, siendo del orden
de 10- en plaquetas, 3 x 10 en neutrfilos y 2,6 Receptores para Fe de IgE en humanos
X lO"en macrfagos alveolares.
(RFce)
A diferencia del RIFcy, el receptor RIIFcy es
Se conocen dos receptores capaces de inte
de baja afinidad para IgG monomrica; los va
lores de Ka son inferiores a 10 M . No obstan raccionar con el fragmento Fe de IgE; el RIFce
te, la funcin de receptor ha sido demostrada lo hace con una unin de alta afinidad y el
por la capacidad para fijar inmunocomplejos y RIIFce con baja afinidad. Solo el RIFce est re
se considera que podra participar en fagocito lacionado con la Superfamilia de las inm unosis mediada por clulas mononucleares y poli globulinas.
morfonucleares neutrfilos. Se estima tambin
El RIFce es el componente de la superficie
que RIIFcy puede mediar ADCC y la liberacin celular que inicia las reacciones alrgicas (va
de anin superxido y factor necrosante de tu- se cap. 32) y a diferencia de los receptores Fcy
y slo est presente en mastocitos y clulas bamores-(x (TNF-a).
La especificidad de huRIIFcy para las sub .sfilas. Su activacin induce en estas clulas
clases de IgG humanas es similar para IgG l e degranulacin y liberacin de contenidos gra
IgG3, la que a su vez es mayor que la corres nulares como histamina, la sntesis y secrecin
de cido araquidnico y sus metabolitos como
pondiente a IgG2 e IgG4.
El huR IIlF cjes un receptor que no se expre ias prostaglandinas y los leucotrienos. Adems,
sa en monocitos, pero que lo hace en macrfa esta activacin celular induce la sntesis y se
gos, neutrfilos, eosinfilos, clulas NK y algu crecin del factor estim ulante de colonias de

128

Aspectos bsicos de a inmunidad

CD64
RIFcy
CDw32

CD16

RIIFCy

RIIIFCy

C D 16TM
RIIIFOy

Extracelular

(T/Q2
GPI

Membrana
celular

Citoplasma

Extracelular

(y/02
Membrana
celular

RIFCe

RFC,

Citoplasma

F ig. 5-43. Estructura esquem tica de los receptores para el fragm ento Fe de inm unoglobulinas.

granulocitos y macrfagos (GM-CSF) e inter


leuquinas (IL -la, lL-3, IL-4, IL-5, IL- 6 , INF-y)
entre otras. Para que la activacin celular tenga
lugar se necesita, en primer trmino, que la IgE
sintetizada por linfocitos B se fije al RIFce, y
luego que la IgE fijada, a travs de su paratope
interaccione con su antgeno especfico multi
valente. El receptor es univalente y fija IgE mo
nomrica y la interaccin con el antgeno multi
valente determina agregacin del receptor, he
cho fundamental para que el fenmeno se haga
efectivo. La interaccin previa de la IgE con el
antgeno y su posterior unin al RIFce no es su
ficiente para la acvacin celular.
El RIFce est constituido por 3 cadenas pep
tdicas denominadas a , |3 y y. Su unin al Fe de
IgE es con alta afinidad (Ka = 10" M"' y al
igual que el RIIIFcy, la cadena a , necesita de la
coexpresin de las cadenas p y y para un co
rrecto ensam blado y transporte a membrana.

Esta cadena y es la misma que usa el RIIIFcy;


en cuanto a la cadena p, relacionada con CD20,
no se conoce qu funcin cumple.
Se ha demostrado que en el RIFce, la cadena
a est asociada con una cadena p y dos cade
nas y unidas entre s por un puente di sulfuro. El
sitio de unin en el receptor consiste en tres re
giones localizadas en el segundo dominio ex
tracelular de la cadena a . Este receptor se ex
presa muy temprano durante la diferenciacin
celular de los mastocitos y clulas basfilas;
clulas en los primeros estadios de diferencia
cin ya lo expresan en sus membranas.
De los tres dominios que integran el frag
mento Fce (Ce2, Ce3, Ce4), una porcin ubica
da entre Ce2 y Ce3 es la que se une al RIFce.
La unin de IgE a RIFce es relativamente es
pecfica. Otros isotipos no coinpiten con IgE,
pero IgE de otras especies como las de rata y
ratn se unen al huRIFce.

Anticuerpos
El huRIlFce, identificado como la protena
de membrana CD23, es una protena glucosila
da de 45 kD la que ha sido clonada y secuenciada. Est constituido por un segmento cito
plasmtico de 23 aminocidos, uno transmem
brnico que contiene 2 1 residuos hidrofbicos
y un resto extracelular de 277 residuos. El
CD23 tiene una orientacin inusual, con el re
siduo N-terminal en el citoplasma y el C-termi
nal extracelular.
Se han identificado dos formas allicas de
nominadas RlIaEce y RIlbFce.
Se expresa en la m em brana de monocitos,
macrfagos, eosinfilos, plaquetas y linfocitos.
Es un receptor que une IgE con baja afinidad y
no est comprometido en el desencadenamien
to de reacciones alrgicas.
Se desconoce cul es su funcin; no obstante
se ha descrito que la isoforma RIIbEcs expresa
da en monocitos y eosinfilos, y no la RIIaEce
expresada en linfocitos B, es capaz de mediar
fagocitosis de complejos formados por anticuer
pos de la clase IgE. Otras funciones atribuidas
como liberacin de cido araquidnico y sus
metabolitos cuando linfocitos interaccionan con
inm unocom plejos de IgE son dubitativas, ya
que en esos experimentos no puede descartarse
que los resultados obtenidos estn mediados por
otros receptores diferentes al RIIFce o CD23.
Conviene recordar sobre el particular que re
cientem ente se ha dem ostrado que RIIEcy y
RIIIFcy fijan inmunocomplejos de IgE.
La presencia de un factor soluble de unin a
IgE o CD23 soluble, resultante del clivaje pro
teoltico de RIIFce, ha sido demostrada y se es
pecula que el mismo podra jugar un papel im
portante en la regulacin de la sntesis de IgE.
Receptor para Fe de IgM
Hace tiempo fu descrito un receptor espec
fico para IgM, el RFc|ii, presente en linfocitos
B humanos y murinos. Es inhibido por IgM
pentamrica, en tanto que resultan inefectivas
protenas monoclonales de las clases IgG, IgA
e IgE, ensayadas a concentraciones 200 veces
superiores a las usadas para IgM. La unin del
Fc|j, al receptor se hace a travs del dominio
Cj.,3, sin la participacin de C,_,l, Cj^2 o Cj^4. Se
ha demostrado que el receptor fija nicamente
IgM pentamrica, por lo que se estima que es
de baja afinidad.
No se conoce su estructura. No se tiene in
formacin sobre clonado o secuenciacin de
este receptor, ni cul es la funcin que real
mente cumple.
Receptor para Fe de IgA
En granulocitos neutrfilos, m onocitos y

129

macrfagos humanos se ha descrito la presen


cia de un receptor para IgA de masa relativa de
60 kD, cuyo ADNc codifica una protena de
287 aminocidos que presenta homologa con
receptores para Fcy y con el receptor para IgE
de alta afinidad (RIFce). Presenta una arginina
en la regin transmembrnica, hecho anmalo
que recuerda lo ya descrito para RIIIFcy.
Este receptor, que es distinto al RPolylg que
transporta IgA polimriea a travs de epitelios,
media por parte de neutrfilos y monocitos fa
gocitosis de partculas recubiertas con IgA y
secrecin de anin superxido.
Receptor para Fe de IgD
E stu d io s prelim in ares parecen in d ic a r la
existencia de un receptor para IgD, denomina
do RFc 6 , presente en clulas B normales y neo
plsicas. Esos datos reflejan la posible existen
cia de un receptor para Fe de IgD, pero la m is
ma deber ser confirmada.
Receptores similares a los descritos para los
fragmentos Fe de los diferentes isotipos de in
munoglobulinas humanas se han encontrado en
otras especies animales, como ratn y rata, en
los que se ha demostrado, especialmente para
los REcy, la especificidad de subclase que p o
seen, las funciones que cumplen y sus relacio
nes con ios receptores para Fe de origen h um a
no.

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130

Aspectos bsicos de la inmunidad

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groups on the basis o f com m on antigenic characters. .!
E xp M ed 6.-859, 1962.

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El origen de la diversidad
de los anticuerpos

M. LEONARDO SATZ
RICARDO MARGNI

T eoras sobre el origen de la diversificacin


de los anticuerpos
A principios de siglo, Ehrlich postul la teo
ra de los receptores celulares especficos, se
gn la cual el antgeno (Ag) interacta con re
ceptores especficos en la superficie de las c
lulas productoras de anticuerpos (Ac) y activa
las mismas para producir ms Acs. Esta idea es
bastante aproximada a la concepcin actual de
la seleccin clonal. En la dcada del 30, Haurovitz y luego Pauling postularon las llamadas
teoras instructivas, que intentaron explicar el
am plio repertorio de reconocim iento de los
Acs, aun contra molculas sintticas. Se postu
l que exista una nica molcula de Ac, de es
tructura flexible, a la cual el Ag, al actuar como
molde, instrua de forma de determinar su es
tructura tridimensional nica y especfica con
tra l. Hacia la dcada del 60, los avances en
la determinacin de las secuencias aminoacdi
cas de los primeros Acs mostraron su diversi
dad en molculas dirigidas contra Ags distintos
e hicieron insostenibles estas teoras.
Predominaron luego las llamadas teoras se
lectivas y, en especial, la nocin de la seleccin
o expansin clonal sugerida por Burnett y Jerne. Se postul que cada linfocito B es capaz de
producir Acs de una especificidad nica y que
el Ag selecciona, activa y expande el clon es
pecfico. Para explicar el origen de la diversi
dad de los Acs en cada clon, se postularon dos
ideas alternativas esenciales; la existencia de
miles de genes para cadenas pesadas (H) y li
vianas (L) en la lnea germinal, o la existencia
de un solo gen sobre el cual se acumulan muta
ciones especficas para cada clon (ya sea du
rante la vida embrionaria o durante la diferen

6
ciacin linfocitaria B). Teniendo en cuenta la
longitud de las cadenas L y H, se ha estimado
que se requerira un 15% del genoma de un
mamfero para codificar los Acs diferentes. Los
entusiastas de estas nociones justificaban que
los anim ales superiores destinasen una gran
fraccin de su genoma para un mecanismo in
mune de gran valor para su supervivencia.
Hacia principios de la dcada del 60 se d e
terminaron las secuencias aminoacdicas de va
rias cadenas L diferentes. Se observ que todas
las cadenas difieren entre s y que todas las di
ferencias estn localizadas en los primeros 106
aminocidos del extremo aminoterminal (lo que
llamamos regin variable de la cadena liviana o
VL). En 1965, Dreyer y Bennet razonaron que,
si es que existen cientos de miles de genes, de
ba existir un mecanismo especial por el cual
luego de millones de aos de evolucin se haya
preservado sin cambios la regin constante (C)
y s se hayan acumulado variaciones o m utacio
nes sobre la regin V. Postularon como explica
cin alternativa que, en el genoma, la informa
cin para una cadena L no se halla en una se
cuencia nucleotdica continua, sino fragmenta
da, con la presencia de uno o muy pocos genes
que codifican para la regin C y cientos o miles
de genes para la regin V. Estos postulados p re
decan que, si existe un solo gen para la regin
C, una mutacin que altere sus secuencias en un
gameto o cigota, el cambio se ver reflejado en
todas las cadenas. Postulaban adems que, n e
cesariam ente, la informacin presente en los
bloques separados deba generar un gen o un
ARNm continuo para garantizar la sntesis de
una cadena proteica. Estas nociones, sumamen
te radicales en su momento, resultaron ser esen
cialmente correctas, como lo han dem ostrado

130

Aspectos bsicos de la Inmunidad

D ay, E. D. A dvanced Im m unochem estry, 2 ed. W ileyLiss Publ. N ew Y ork, 1990.


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294:9 \, 1976.
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C D R H 3 in an tib o d ies , Proteins: Struct. Funct. Genet.
16:1, 1993.

El origen de la diversidad
de los anticuerpos

M. LEONARDO SATZ
RICARDO MARGNI

T eoras sobre el origen de la diversificacin


de los anticuerpos
A principios de siglo, Ehrlich postul la teo
ra de los receptores celulares especficos, se
gn la cual el antgeno (Ag) interacta con re
ceptores especficos en la superficie de las c
lulas productoras de anticuerpos (Ac) y activa
las mismas para producir ms Acs. Esta idea es
bastante aproximada a la concepcin actual de
la seleccin clonal. En la dcada del 30, Hau
rovitz y luego Pauling postularon las llamadas
teoras instructivas, que intentaron explicar el
am plio repertorio de reconocim iento de los
Acs, aun contra molculas sintticas. Se postu
l que exista una nica molcula de Ac, de es
tructura flexible, a la cual el Ag, al actuar como
molde, instrua de forma de determinar su es
tructura tridimensional nica y e.specfica con
tra l. Hacia la dcada del 60, los avances en
la determinacin de las secuencias aminoacdicas de los primeros Acs mostraron su diversi
dad en molculas dirigidas contra Ags distintos
e hicieron insostenibles estas teoras.
Predominaron luego las llamadas teoras se
lectivas y, en especial, la nocin de la seleccin
o expansin clonal sugerida por Burnett y Jerne. Se postul que cada linfocito B es capaz de
producir Acs de una especificidad nica y que
el Ag selecciona, activa y expande el clon es
pecfico. Para explicar el origen de la diversi
dad de los Acs en cada clon, se postularon dos
ideas alternativas esenciales; la existencia de
miles de genes para cadenas pesadas (H) y li
vianas (L) en la lnea germinal, o la existencia
de un solo gen sobre el cual se acumulan muta
ciones especficas para cada clon (ya sea du
rante la vida embrionaria o durante la diferen

ciacin linfocitaria B). Teniendo en cuenta la


longitud de las cadenas L y H, se ha estimado
que se requerira un 15% del genoma de un
mamfero para codificar los Acs diferentes. Los
entusiastas de estas nociones justificaban que
los anim ales superiores destinasen una gran
fraccin de su genoma para un mecanismo in
mune de gran valor para su supervivencia.
Hacia principios de la dcada del 60 se d e
terminaron las secuencias aminoacdicas de va
rias cadenas L diferentes. Se observ que todas
las cadenas difieren entre s y que todas las di
ferencias estn localizadas en los primeros 106
aminocidos del extremo aminoterminal (lo que
llamamos regin variable de la cadena liviana o
VE). En 1965, Dreyer y Bennet razonaron que,
si es que existen cientos de miles de genes, de
ba existir un mecanismo especial por el cual
luego de millones de aos de evolucin se haya
preservado sin cambios la regin constante (C)
y s se hayan acumulado variaciones o m utacio
nes sobre la regin V. Postularon como explica
cin alternativa que, en el genoma, la informa
cin para una cadena L no se halla en una se
cuencia nucleotdica continua, sino fragmenta
da, con la presencia de uno o muy pocos genes
que codifican para la regin C y cientos o miles
de genes para la regin V. Estos po.stulados pre
decan que, si existe un solo gen para la regin
C, una mutacin que altere sus secuencias en un
gameto o cigota, el cambio se ver reflejado en
todas las cadenas. Postulaban adems que, n e
cesariam ente, la informacin presente en los
bloques separados deba generar un gen o un
ARNm continuo para garantizar la sntesis de
una cadena proteica. Estas nociones, sumamen
te radicales en su momento, resultaron ser esen
cialmente correctas, como lo han dem ostrado

132

Aspectos bsicos de la inmunidad

independientemente Tonegawa y Leder una d


cada ms tarde, mediante el uso de tcnicas de
ADN recombinante.
Los genes de inmunoglobulinas
se reordenan durante la ontogenia:
su hallazgo experimental
Los primeros experimentos que analizaron la
complejidad de los genes de Igs fueron realiza
dos por P. Leder y col. en los Institutos Nacio
nales de la Salud (NIH, E E.U U .) en el ao
1974. E stos in v estig ad o re s p u rifica ro n un
ARNm para cadena liviana kappa y sintetiza
ron un ADN complementario (ADNc) para la
porcin constante del mismo, al cual marcaron
con ^H. Usaron esta sonda para evaluar su ci
ntica de hibridacin a ADN de distintos tipos
celulares, en forma comparativa con la cintica
de un gen de beta globina, para el cual haban

demostrado previamente la existencia de dos


copias por clula. Sus resultados sugirieron la
existencia tambin de slo dos genes por clula
para la regin constante de la cadena Lj^.
En 1976, Hozum i y T onegaw a usaron un
ARNm purificado de un mieloma (tumor plasmocitario) productor de cadenas livianas lamb
da, para analizar la organizacin de los respec
tivos genes en el ADN nuclear. Para ello, puri
ficaron ADN embrionario y ADN del mieloma
de ratn (que representan tejidos indiferenciado
y diferenciado en produccin de anticuerpos,
respectivamente) y los fragmentaron con una
endonucleasa de restriccin. Luego fracciona
ron por eleetroforesis el ADN, purificaron nu
merosas fracciones segn su tamao molecular
e hibridaron cada una de las mism as con el
ARNm antes mencionado (fig. 6-1). El ARNm
hibrid con dos fragm entos distin to s en el
ADN em brionario pero hibrid con un solo
ADN DE MIELOMA

ADN EMBRIONARIO

Fragmentacin con
endonucleasas de
restriccin

Separacin de los
fragmentos segn
tamao por electroforesis

/ - V jI

i
Dos bandas de hibridacin
una posee el gen V y otra el C

Hibridacin con
ARNm radioactivo

Una sola banda de hibridacin


conteniendo los genes V y C en
el mismo fragmento de ADN

F ig . 6 -L Experim entos que m ostraron la diferente organizacin de los genes de inm unoglobulinas en el ADN em brionario
y en el ADN de clulas productoras de anticuerpos.

El origen de la diversidad de ios anticuerpos


fragmento (diferente de los anteriores) en el
ADN del mieloma. Los datos sugirieron que
las secuencias que codifican para las regiones
C y V se hallan separadas en el ADN e m
brionario y que se han rearreglado en un solo
fragmento en el ADN de hnfocitos B maduros.
Los mismos resultados fueron confirmados m e
diante la tcnica de Southern b lo f, mediante
la cual el ADN fragmentado, luego de su frac
cionamiento por eleetroforesis, es desnaturali
zado y transferido a una m em brana para su
posterior hibridacin.
Familia de genes de cadena liviana
k ap p a ( k )
En humanos, est localizada en el cromoso
ma 2 banda p l l y en el ratn en el cromosoma
6 . La regin constante de la cadena liviana ka
ppa est codificada por un nico gen constante
denominado C k , cuya secuencia nucleotdica
mostr la presencia de informacin para los re
siduos 109 hasta el 214 de la cadena polipeptdica.

133

La inform acin p ara regin variable est


segmentada en dos familias de genes, denom i
nadas V K y Jk, locahzadas en el mismo crom o
soma, aunque a decenas de miles de nucleti
dos de C k (fig. 6-2). Hay aproximadamente 50
genes V k distintos, cada uno precedido p o r un
pequeo exn (bloque codificante de ADN) pa
ra el pptido seal (leader peptide), del cual es
t separado por un pequeo intrn (bloque no
codificante de ADN). Este pptido seal le per
mite a la cadena su traslocacin a travs de las
m em branas del retculo endoplasm tico (du
rante el cual es chvado) para su expresin su
perficial o secrecin. La secuencia de A D N de
cada gen V k revela la informacin para los l
timos tres residuos del pptido seal y los pri
meros 95 aminocidos de la regin variable. En
el hom bre hay cinco genes J k , muy cercanos
entre s, cada uno de los cuales puede codificar
para los residuos 96 a 108 de la cadena liviana.
Esta fam ilia est localizada entre los genes V k
y el gen C k , a unas 3 kb (3.000 bases) de este
ltimo (fig. 6-2). Esta organizacin de la fam i
lia kappa es la hallada en todas las clulas del

CADENA K
Vk,

ADN"
germinal

V k,

Vk

k -i

Ck

Jk

-it1 2 3 4 5 Reordenamiento del ADN


L Vk

ADN
reordenado

Ck

4 5

Transcripcin y empalme del pre ARNm

ARNm

L Vk J
I

Ck

Traduccin y transporte de la protena


Protena madura
presente en el
anticuerpo

Sk

QX.

Sk CA.3

J?. QX,

JA,

c:

40kb
F ig. 6-2. A . O rganizacin genm ica en las familias de cadena liviana kappa. Se indican los residuos codificados p o r los
bloques L, V, J y C. Se m uestra un reordenam iento hipottico de un gen Vj^ hacia un gen
B. O rganizacin gen m ica
en la fam ilia de cadena liviana lambda. El tramo de A I)N que contiene a los genes CA.2 y C a3 posee una longitud v ariab le
en los distintos individuos, con la presencia de 2, 3, 4 o 5 genes constantes (polim orfism o poblacional); esto d eterm in a
que el nm ero total de genes C a oscile entre 6 y 9, segtin el individuo. Los tres p rim eros genes constantes se c o rre sp o n
den con los m arcadores isotpicos M cg, Ke-Oz- y K e-O z+,

134

Aspectos bsicos de la inmunidad

organismo, excepto las del linaje B, y se deno


mina organizacin germinal. El ratn posee 4
J k funcionales. Durante la diferenciacin linfocitaria B, cada linfocito elige uno de los genes
V k (acompaado de su propio exn lder) y lo
reacomoda delante de alguno de los genes J,^.
A parentem ente la seleccin del gen V k y Jk
por cada clula es al azar. Luego de este reor
denamiento gentico, los genes V k y Jk previa
mente localizados entre el V k y Jk elegidos, se
pierden. Ntese en la figura 6-2 que ahora se
ha ensamblado un bloque variable kappa conti
nuo (la suma de V -i- J), a continuacin del cual
todava pueden hallarse otros genes Jk. Esta
nueva disposicin de los genes se denom ina
configuracin reordenada y es la que ser
transcripta por la clula B en un precursor del
ARNm. Este precursor com ienza con la se
cuencia del exn lder, contina con el intrn
que lo separa del gen Vk, el gen V k contiguo a
un gen Jk, los restantes Jk presentes a conti
nuacin del usado (separados por pequeos in
trones), y un intrn hasta el gen C k , Durante su
m igracin del ncleo al citoplasma, este preARNm madura, adquiere las modificaciones en
los extremos 5 y 3 (cap y poli A) y empal
m a el exn seal con el V k-Jk y el C k , elimi
nando los intrones y los Jk presentes a conti
nuacin del usado (splicing o empalmado del
pre ARNm). Ya en el citoplasm a, el ARNm
maduro se traduce en polirribosomas de retcu
lo rugoso.
Complejidad de la fam ilia Vk: Los genes
V k humanos se agrupan en siete familias dis
tintas, segn el grado de hom ologa que po
seen entre s. Existen a! menos 76 genes V, de
los cuales 40 estn localizados en un tramo de
600 kb de AND proximales al locus Ck; 38 de
estos 40 genes Vk, poseen la mism a orienta
cin de transcripcin que el locus Jk-C k y se
reordenan por mecanismos de acercamiento y
delecin (vase ms adelante Mecanismos de
reordenamiento gentico). H acia 5 de esta re
gin de genes Vk, hay un segmento de ADN
de 800 kb que aparentemente carece de genes
V y a continuacin hay un segmento de 440
kb que posee los otros 36 genes V k ; los genes
V de este segmento distal tienen orientacin
de transcripcin inversa al locus J k - C k y se
re o rd e n a n p o r m e c a n ism o s de in v e rs i n
(vase ms adelante). De los 76 genes identi
ficados, 26 no seran funcionales (seudogeoes) y de los otros 50, slo la mitad (los ms
proximales al locus C k ) se reordenan frecuen
temente. Un estudio reciente de W inter y col.
mostr que en ms de 200 ADNc de cadenas
livianas k , los V k ms distales al locus C k es
taban representados en m enos del 5%; esto
podra deberse a las distancias relativas de las
regiones proximales y distales respecto de Jk-

Ck, o al mecanismo diferente de recom bina


cin que se requiere para producir un rearre
glo productivo. Es interesante notar que en la
poblacin existe un haplotipo frecuente (deno
minado haplotipo 11) que carece de un seg
mento de aproximadamente un milln de nu
cletidos (1 Mb) de la regin distal y por lo
tanto le faltan los 36 genes V k de esta regin;
los portadores homocigotas de este haplotipo
son tan inmunocompetentes como los que po
seen la dotacin gentica completa.
Familia de genes de cadena liviana
lambda (X)
Aproximadamente un tercio de los anticuer
pos humanos poseen cadenas hvianas lambda;
en el ratn constituyen menos del 10%. Los ge
nes para esta fam ilia estn en el crom osom a
22ql 1 humano y cromosoma 16 murino. A di
ferencia de la familia kappa, existen varios ge
nes que codifican para la porcin constante,
Ck, cuyo nmero vara entre 6 y 9 segn el in
dividuo. Cada uno de estos genes constantes
est precedido por un gen iX propio (fig. 6 -2 ).
La secuencia nucleotdica de los prim eros
tres genes constantes revel que se correspon
den con los marcadores isotpicos Mcg, Ke-Ozy Ke-Oz+ presentes en el suero humano (fig.
6-2). Estas tres cadenas son muy parecidas en
tre s, difieren en 1-4 aminocidos, lo que hace
sospechar de una duplicacin reciente de estos
genes.
Por otro lado, existen numerosos genes VX,
cada uno de los cuales codifica para los prime
ros 95 aminocidos de la protena, y cada uno
acompaado de su propio exn seal. Para el
ensamblado de una configuracin reordenada,
uno de los genes V k se reacomoda prximo a
uno de los genes J?i, donde ya queda definido
cul de los genes CA, se usar. Ntese que aun
cuando el gen C k no contribuye con diversidad
de reconocimiento, s lo hace cada uno de los
JA. que lo acompaan.

Complejidad de lafamilia VX. Se han identificado


en el humano al menos 67 genes VA en un segmento
de 850 kb de DNA, aunque un 40% de los mismos
parecen ser seudogenes. Se los agrupa en diez fami
lias, con ms de 75% de homologa entre miembros
de una misma familia y 55-69% de homologa nterfamilia. En esta regin tambin se localiza el gen pa
ra la cadena VpreB cuyo producto forma parte del
receptor pre B (vase ms adelante).
En el ratn se han identificado cuatro genes cons
tantes (aunque uno no es funcional), cada uno tam
bin acompaado de un gen J. Como se observa en
la figura 6-2, se los halla en unidades agrupadas de a
dos, cada uno precedido de un solo gen VA. El ratn
posee entonces, slo dos genes YA.

El origen de la diversidad de los anticuerpos


Familia de genes de cadena pesada
Estn localizados en el cromosoma 14q32.3
humano, estimndose la longitud total del lo
cus en 1500 kb. Esta familia posee una organizacin algo ms compleja: existen varios ge
nes constantes, uno por cada isotipo de cadena
pesada conocido; cada gen constante est a su
vez organizado en intrones y exones que co
rresponden a los diversos dominios constantes
CHI, CH2, etc.; finalmente la informacin pa
ra regin variable de la cadena pesada est
subdividida en tres familias de genes (en lugar
de dos), denominados V,.,,
y
(vase fg.
6-3).
Cada gen
posee informacin para los pri
meros 99 am inocidos de la regin variable.
Hacia 5, luego de un intrn de unas 80-100 bp,
cada gen
est precedido de un exn que co
difica los primeros 15 residuos del pptido se
al (los cuatro aminocidos restantes estn co
dificados al comienzo del exn V^,),

Complejidad de la familia
En el ser humano,
esta regin se extiende por una lO Kb, que co
mienzan a unas l Kb 5 de la regin D|_|. Los estu
dios ms recientes de mapeo han identificado 87 ge
nes V,_|, de los cuales 29 son seudogenes y al menos
46 han sido hallados en inmunoglobulinas (esto es,
son funcionales). Al igual que en los loci de cadenas
livianas, aqu tambin hay algunos segmentos (con
teniendo 1 a 4 genes V^,) duplicados o deleccionados, segn el individuo estudiado. De acuerdo a su
homologa se los agrupa en siete familias, con ms
de 80% de homologa entre los miembros de una
misma familia; las familias V3, V,j4 y V^^l son las
que ms miembros poseen.
La familia de genes D est compuesta por
un nmero aproxim ado de 20 miembros. En
general estn agrupados en un tramo de 1 0 0 kb,
aunque otros estn intercalados con genes
y
uno solo est junto a la familia J,_|. l^a secuencia
nucleotdica de estos genes indica que cada
segmento D codifica para 3-4 aminocidos.
La familia de genes
en humanos posee 9
miembros de los cuales 3 no son funcionales
(seudogenes); el ratn posee cuatro J^. Cada
uno codifica para un tramo de 1 0 - 1 2 aminoci
dos. Todos los genes
y C,_, poseen la
misma orientacin de transcripcin, lo que tie
ne implicancias con los mecanismos de reorde
namiento (vase ms adelante).
Hacia la derecha de la familia
(hacia 3), y
a una distancia de 8 kb de la misma, comienza
la familia de genes Ch, esparcidos a lo largo de
unas 150 kb (fig. 6-3). El orden de los mismos
es el siguiente: C|a., C 8 , Cy 3, C yl, Ce2 (un
seudogn). C a l, Cy2, Cy4, C el y C a2. Esta
organizacin sugiere que estos genes se han

135

originado de la duplicacin de un bloque an


cestral y-y--a.
Durante la diferenciacin de los linfocitos B,
uno de los prim eros eventos m adurativos lo
constituye el reordenamiento de los genes de
cadena pesada. wSe produce primero la eleccin
de un gen D,_j que ser reacomodado prxim o a
uno de los genes J^,, con la prdida de los genes
comprendidos entre ellos. En una segunda eta
pa, se produce el reordenamiento de uno de los
genes Vj_j prximo al bloque Djj/J|,. Esta orga
nizacin reordenada V/D/J-C|J, es la que ser
transcripta y los intrones y genes Jj, adicionales
sern eliminados durante el splicing del preRNAm.
En el ratn el locus H se halla en el crom o
soma 1 2 . Todos los genes C_, son funcionales,
para la generacin de cadenas pesadas mu,
delta, gamma 3, gamma 1, gamma 2b, gam m a
2a, epsilon y alfa. Por lo tanto el ratn ha du
plicado sus genes gamma sin afectar los psilon y alfa.
Cambio de isotipo de cadena
pesada
Durante la activacin de los linfocitos B en
la respuesta primaria, la mayora de las clulas
producen activam ente IgM. Algunas clulas
del clon en expansin dejan de sintetizar cade
na pesada mu y comienzan a sintetizar algn
otro isotipo: gamma, psilon o alfa. Para ello,
la clula padece un nuevo evento de reordena
m iento gentico, por el cual todo el b loque
VDJ se reacom oda prxim o a un nuevo gen
constante; se elim inan los genes constantes
presentes entre Ci (incluido l) y el nuevo gen
C,_| elegido (fig, 6-3). Ntese que todo el con
junto VDJ contina codificando a la porcin
variable de la cadena pesada, por lo que la es
pecificidad de reconocimiento antignico no se
modifica luego del switch isotpico.
Se han id en tificad o las secuencias en el
ADN que intervienen en estos procesos de re
combinacin: se denominan sitios S y estn lo
calizadas previo a cada gen C^, excepto a C5
que no la posee. Se trata de secuencias repetiti
vas de ADN que interactan entre s, diferentes
a las que operan en los reordenamientos antes
descritos. Hay evidencias de que un m ism o
clon celular puede realizar cambios sucesivos
de isotipo de cadena pesada, hacia genes Cj^
ms distales.
El cambio de isotipo es un fenmeno que de
pende de la cooperacin de las clulas T (vase
cap. 2). Las clulas T proveen seales a travs
de molculas de membrana (como CD40) y a
travs de citoquinas; por ejemplo IL-4 prom ue
ve el cambio a isotipos IgE e IgG4, T G F p e
IL -6 a IgA, IIv-10 a IgG, e IgG^,

136

Aspectos bsicos de la inmunidad

ADN GERMINAL

LVH, LVH,D

LVH

Dh

Cfx

C5

Cy.

C'/i

xj/Eg Ccx.,

100

1500

Cy|

C e^

CXg

51

58

Reordenamiento durante la diferenciacin


CYj Cy, \|/ej Ca,
Cy^
Cy^ Ce, Ca^

Ii cC|j,
u C5

L V DJJ

Cy,

ADN
REORDENADO
Cambio (switch) isotpico
durante la expansin clonal
L V DJ J

Ca,

H O lK t

pre-RNAm

ADN

Transcripcin y
ensamblado (splicing)

L V DJ Ca^
Produccin
simultnea de
cadenas n y y

L V DJ CS

Produccin de
cadena pesada

lOIII

F ig . 6-3. O rganizacin genm ica en la fam ilia de cadena pesada. El crculo negro que precede a cada gen constante (ex
cepto C8) indica los sitios S. El pequeo cuadrado que sigue a la fam ilia de genes J representa al enhancer de cadena p e
sada. Los genes pesados estn esquem atizados sin la subdivisin en exones e intrones. V ase texto para seguir los proce
sos de reordenam iento y expresin.

9
7
9
23
M r , A r , A G T G | ------- ------- [ a CATAAAC c !-------- / / -------(g GTTTTTG t ]

7
12

CACTGTG

CADENA K

IJ k

23

CADENA PESADA

23

A ......

12

12

23

F ig . 6-4. A. H eptm eros, nonm eros y espaciadores que acom paan a los genes de las tres lam ilias de cadenas de inm u
noglobulinas.

El origen de la diversidad de los anticuerpos

137

L Vk,3

F ig. 6-4 (coni.). B. A proxim acin espacial de los genes V y J que recom binan. La estructura secundaria estara esta b iliza
d a por el apaream iento de las bases com plem entarias de heptm eros y nonm eros.

Mecanismos de reordenamiento gentico


El anlisis de las secuencias de ADN flan
queantes a los genes V, D y J de cadena pesada
y V y J de cadena liviana, mostr un patrn
muy conservado de nucletidos, que se denomi
nan secuencias de reconocimiento o RS, y que
tienen un papel muy importante en los mecanis
mos de reordenamiento. Los genes de inmunoglobulinas con RS mutados (por ej. en ciertos
seudogenes o por mutaciones realizadas delibe
radamente in vitro) no pueden reordenarse.
En posicin 3 a cada gen V existe un tramo
de siete nucletidos, heptmero (idntico en to
dos los genes); a continuacin se halla un tra
mo de 12 o 23 nucletidos (segtn la familia)
conservados en longitud pero no en secuencia
(denominado espaciador o spacer). F inal
mente, sigue un nonmero (9 nucletidos) con

servados en longitud y secuencia (fig. 6-4A).


Un ordenamiento similar de heptmeros, espa
ciadores y nonmeros est presente tambin al
comienzo y fin de cada gen D y precediendo a
cada gen J,
Una inspeccin cuidadosa de las secuencias
de los heptmeros y nonmeros que siguen al
final de los genes V y D revela que es com ple
mentaria a la presente en los heptmeros y no
nmeros que preceden a los genes D y J (vase
fig. 6-4A). Esto hace pensar que estas secuen
cias podran facilitar el acercamiento de los ge
nes que interactan, prom oviendo el ap area
miento de los tramos complementarios en una
de las hebras del ADN (fig. 6-4B). Estas hor
quillas poseen en su base a los genes acerca
dos, con los tramos de ADN entre ambos hacia
arriba. Esta estructura secundaria se generara
por el apareamiento de las bases complementa

138

Aspectos bsicos de la inmunidad

rias antes m encionada, y sera la reconocida


por un sistema enzimtico especializado en su
eliminacin.
En cada familia de genes, la organizacin de
los espaciadores hace que siempre el reordena
miento ocurra entre un gen con espaciador de
12 y otro de 23. Los espaciadores de 12 y 23
bases equivalen, respectivamente, a una y dos
vueltas de la doble hlice del ADN. Estas ca
ractersticas peculiares de la regla 12/23 sugie
ren que esta organizacin aportara seales im
portantes para la recombinacin.
M a q u in a r ia e n z im tic a in v o lu c r a d a e n la r e c o m
b in a c i n . Al conjunto de enzimas y protenas res

ponsables de los reordenamientos genticos recin


descritos, se denomina r e c o m b in a s a . Hay tres evi
dencias indirectas que sugieren que una misma re
combinasa V(D)J opera en el naje B y el T (vase
cap. 7): (a) los loci que reordenan estn flanqueados
por RS (heptmeros, espaciadores, nonmeros) con
servados; (b) ocurren reordenamientos D-J en los lo
ci beta del receptor T y de la cadena pesada mu en
linfocitos B y T respectivamente; (c) los mismos dos
genes R A G (vase ms adelante) que pueden inducir
recombinaein V(D)J en clulas de linaje no-linfoide, se expresan coordinadamente en linfocitos B y T
en los estadios de diferenciacin donde ocurre activa
recombinacin.
R A G -1 y R A G -2 (gen activante de la recombina
cin): son dos genes estrechamente ligados en el
cromosoma 11 humano (slo distantes 8 kb entre s),
extremadamente conservados entre los vertebrados,
aunque no poseen homologa entre s. Los mismos
fueron aislados por Baltimore y col. mediante expe
rimentos en los que se transfectaron fibroblastos en
cultivo con ADN genmico total y donde un 0,1%
de los transfectantes dio origen a clulas eon activi
dad de recombinasa estable (evaluada por su capa
cidad de reordenar genes V/D/J contenidos en un
plsmido); luego de sucesivos ciclos de transfeccin,
se identificaron estos loci por mtodos clsicos de
clonado molecular, con una estrategia similar a la
usada para aislar los primeros oncogenes. Por lo tan
to, aunque la actvidad de recombinasa se expresa
reguladamente slo en lneas linfoides inmaduras, la
expresin constitutiva de estos dos genes en otras
clulas es suficiente para activar la recombinasa.
Adems, estos dos genes son esenciales para esta ac
tividad; ratones mulantes en uno u otro gen RAG
son inmunodeficientes ya que carecen de linfocitos
B y T. Se desconoce ain el mecanismo de accin de
los genes RAG. Se han propuesto dos modelos: (a)
los productos de RAG tendran actividad enzimtica
y participaran directamente en la reaccin de recOmbinacin o (b) tendran actividad regulatoria y
activaran la maquinaria de recombinacin. El anli
sis estructura! de los genes favorece la idea de un rol
directo de los RAG en la reeombinacin: el extremo
C-terminal de RAG-1, que posee un dominio con

homologa a topoisomerasas (enzimas asociadas a


recombinaciones de ADN en una gran variedad de
sistemas), es esencial para su funcin; sin embargo,
la eliminacin de otros segmentos gnicos homlo
gos a dominios con funcin regulatoria (tales como
el extremo N-terminal de RAG-1 que incluye un do
minio tipo dedo de Zn, o un dominio acdico de
RAG-2) no anula la actividad recombinasa.
Otras enzimas: hay numerosas evidencias que
involucran a otros productos adems de los RAG.
Por ejemplo, los ratones mutantes s c id son inmunodeficientes severos, carecen de linfocitos T y B, y
tienen recombinaciones V(D)J defectuosas. La mu
tacin mapea en un locus distinto al de los genes
RAG y adems, las clulas no linfoides exhiben de
fectos en la reparacin del ADN daado por radia
ciones X. Recientemente fue identificada una de las
protenas involucradas en estos procesos de repara
cin enzimtica del ADN y que tambin es necesaria
para la actividad de recombinasa V(D)J: se trata del
llamado autoantgeno Ku, una protena capaz de
unirse a extremos libres de hebras de ADN. Final
mente, se sabe que la enzima deoxinucleotidil trans
ferasa terminal es la responsable del agregado de nu
cletidos al azar en los sitios de yuxtaposicin
V(D)J (vase ms adelante).
Diversidad originada
por recombnacin somtica
Teniendo en cuenta el niimero de genes en
cada familia, se puede estimar el potencial de
diversificacin que tiene este sistem a. Si la
eleccin de genes se produce al azar, es vlido
aphcar combinatoria para el clculo:
Familia kappa: 50 genes
x 5 genes Jj^ =
250 cadenas livianas kappa
Familia H: 50 genes
x 20 genes Dj^ x 6
genes
= 6 . 0 0 0 cadenas pesadas
Recurdese que el ensamblado entre cadenas
pesadas y livianas para generar un anticuerpo
involucra uniones covalentes entre residuos de
cistenas. Vale decir que a priori no hay cons
tricciones estructurales que impidan la combi
nacin de cualquier cadena pesada con cual
quiera liviana. Por lo tanto, parece vlido vol
ver a aplicar combinatoria para estimar el total
de anticuerpos distintos posibles, segn el po
tencial de genes existentes:
250 c a d e n a s L x 6 .0 0 0 c a d e n a s H =
1.500.000 anticuerpos diferentes
Un nm ero para nada despreciable, si se
considera que se requiere de menos de 300 ge
nes en el genoma para su generacin y que no
se incluy en este clculo a las cadenas livianas
lambda, que en humanos poseen un repertorio

El origen de la diversidad de los anticuerpos


similar al de kappa. Cabe mencionar que aun
cuando casi todos los genes eucariotas estn
fragm entados en exones e intrones, inform a
cin que se empalma durante el splicing de
los pre-ARNm, los reordenamientos que ocu
rren en los genes de inmunoglobulinas acercan
la informacin a nivel del ADN, algo no des
crito para ninguna otra familia de genes euca
riotas.
Mecanismos adicionales de diversificacin
a) Imprecisiones en la recombinacin: Habi
tualmente el codn 95 en las cadenas livianas
es aportado por el gen
y el 96 por el gen
Sin embargo no existe un lmite preciso de fin
y comienzo de estos genes. Por esta flexib ili
dad en el sitio de yuxtaposicin se generan co
dones alternativos para el residuo 96, segn
cul sea el ltimo nucletido contribuido por el
gen
(vase fig. 6-5). En el primer ejemplo
de la figura, el codn 95 y el 96 son contribui
dos por V y J respectivamente. En el segundo
ejemplo, el gen V contribuye con un nucletido
adicional, por lo que el gen J comienza con el
segundo nucletido del codn 96; esto genera
un nuevo triplete que reemplaza triptfano por
arginina en el residuo 96. En el tercer ejemplo
el gen V aporta dos bases extras y J slo una
del codn 96; ahora el triplete codifica para
prolina en lugar de arginina o triptfano. Hay
situaciones en donde el gen V contribuye con
un triplete entero adicional y esa cadena ser
un aminocido ms largo (cuarto ejemplo), o
con un codn de menos, lo que producir una
cadena ms corta. Esta flexibilidad en el enlace
de los genes que recombinan se extiende hacia
el codn 95 y 97 de la cadena liviana y por otro
lado, el fenmeno tambin se observa en la re
combinacin V/D y D/J de la cadena pesada.
Hay ejemplos bien documentados en donde el
cambio de un solo residuo en esta tercera re
gin hipervariable afecta dram ticam ente la
afinidad de un anticuerpo por un epitope.
b) D iversificacin N-terminal: Al analizar
las secuencias de nucletidos de los ARNm o
de los genes reordenados, se observa frecuente
mente en el sitio de recombinacin la presencia
de 1 a 6 nucletidos adicionales no codificados
por los respectivos genes de la lnea germinal.
Asimismo, la longitud de las secuencias Dj_, y
Jj_, es frecuentemente menor que la codificada
en lnea germinal. Este fenmeno aporta obvia
mente diversidad adicional al repertorio de es
pecificidades y ha sido denominado diversifi
cacin N-terminal. La enzima deoxinucleotidil
transferasa terminal estara involucrada en este
agregado de nucletidos libre de templado.
Para resumir, dos anticuerpos cuyas cadenas
han utilizado idnticos genes V ,,
V,^, Dj^ y

139

Jjj, pueden poseer especificidades de reconoci


miento diferentes debido a estos fenmenos de
flexibilidad en el sitio de enlace y diversifica
cin N-terminal. Como consecuencia de estos
dos fenmenos, es frecuente que en la configu
racin reordenada de los bloques no se respete
el marco de lectura de los codones (por ej., en
la fig. 6-5, si el tercer nucletido del codn 95
se enlazara con el segundo nucletido del co
dn 96 en el gen J). La consecuencia del cam
bio del marco de lectura es la aparicin de co
dones de terminacin de sntesis proteica en las
secuencias D o J y ese reordenamiento no ser
viable (abortivo). De este ejemplo se desprende
que los dos m ecanism os recin descritos, si
bien contribuyen para generar diversidad, pue
den por otro lado conducir a reordenamientos
abortivos.
La flexibihdad en el sitio de recombinacin
y la diversificacin N-terminal, se estim a que
aumentan el repertorio de especificidades por
un factor de 1 0 en las cadenas livianas y p o r un
factor de 100 en las cadenas pesadas. P o r lo
tanto, el nm ero total de p osibilidades que
ofrece el sistema es superior a 1 0 ^ (6 . 0 0 0 x fO^
x 2 5 0 x 10= 1,5 X 109).
El lector no debe pensar que un individuo
debe expresar simultneamente el total de este
repertorio en sus linfocitos perifricos. Las c
lulas B maduras que salen a periferia recirculan
con una vida m edia relativam ente co rta, de
unas pocas semanas y, si no se produce el en
cuentro con un antgeno apropiado, m ueren.
Diariamente la mdula sea produce y exporta
al menos 5 x 1 0 linfocitos B, que irn reno
vando el pool de especificidades. Si se re
cuerda que los microorganism os enfrentan al
sistema inmune no con uno, sino con un m osai
co de epitopes diferentes, lo ms probable es
que exista alguna clula B capaz de reconocer
alguno de los epitopes extraos. Aun si la afini
dad de ese anticuerpo es modesta, podr iniciar
la respuesta inmune, a la que contribuirn otros
clones dirigidos contra otros epitopes en los
das sucesivos.
Mutacin somtica
Durante la expansin clonal de los Hnfocitos
B en la respuesta primaria, las primeras clulas
sufren una diferenciacin terminal hacia plas
mocitos productores de IgM. Otras clulas pro
ducen el cambio de isotipo (switch) que perm i
tir la secrecin de anticuerpos con otras cade
nas pesadas. Una porcin de las clulas activa
das es la que se expande para generar el pool
de clulas B de memoria. Este proceso ocurre
en los linfocitos B activados (centroblastos)
presentes en los centros germinales de los gan
glios linfticos. A continuacin, las clulas pa-

140

Aspectos bsicos de la inmunidad


^ H
RESIDUO:

94

95

4)

H
97

CCC :
' Pro :

2)

g e n j

CGC :
Pro

C
Arg

CGC :
Pro :

CC

CCC :
Pro ;

CCA
: Pro

TGG
Trp

A ce
Thr

Gt3 ^

ACG
Thr

Pro

TGG
Trp

ACG
Thr

ACG
Thr

F ig . 6-5. Flexibilidad en la recom binacin V-J. Se m uestran las secuencias finales de un gen V k y las iniciales de un gen
J k que recom binan (vase descripcin en el texto).

saran a recircular a la espera del segundo con


tacto.
Durante este proceso de expansin clonal, al
cabo de 7-10 das de iniciada la respuesta, los
genes reordenados de cadena liviana y pesada
comienzan a acumular una serie de mutaciones
puntuales, a un ritmo de 10 '^ por nucletido por
generacin. Estas mutaciones se evidencian al
determinar la secuencia nucleotdica de los ge
nes reordenados o del ARNm en hibridom as
secretantes de anticuerpos especficos. Si se
compara esta secuencia con aquella de los ge
nes de lnea germinal se observan los cambios
puntuales mencionados. Las mismas mutacio
nes, al estar presentes tambin en las clulas de
memoria, se evidenciarn en la respuesta se
cundaria, durante la cual se agregarn cambios
adicionales.
Todas las mutaciones se esparcen en una re
gin de 1 .0 0 0 nucletidos que incluyen a los
genes VJ y VDJ y los intrones que los flan
quean; no afectan al gen constante, ni a los ge
nes no reordenados, aunque s a los reordena
dos abortivamente en el otro cromosoma (si los
hubiere). I^a afinidad de los anticuerpos secre
tados por los clones mutados es usualm ente
5-100 veces mayor que aquella de los anticuer
pos de la respuesta primaria; se detectan tam
bin unos pocos clones cuya afinidad es igual o
menor, Muchos de los cambios afectan a resi
duos crticos en las regiones CDRl y CDR2 de
las cadenas. Durante la generacin de las elula.s de memoria, el antgeno seleccionara y fa

vorecera la expansin de los clones cuya in


munoglobulina superficial posee mayor afini
dad. En la respuesta secundaria sern predomi
nantes estos clones, as como otros que utilicen
otros genes variables.
Expresin de los genes: promotores
y enhancers
En un linfocito B, la transcripcin de los ge
nes de inmunoglobulinas (comenzando desde
el exn seal que precede a los genes V) no
ocurre en los genes en configuracin germinal
pero s en los genes reordenados. Ello se debe
fundam entalmente a la presencia de unas se
cuencias aumentadoras ce la transcripcin o
"enhancers, localizadas en el intrn que sepa
ra al ltimo gen J y el gen constante, tanto en
cadenas livianas como en pesadas. Los enhan
cers se definen como secuencias regulatorias
que aumentan la transcripcin de promotores
vecinos. El promotor (regin en el ADN donde
la ARN polimerasa inicia la transcripcin) de
los genes de inmunoglobulinas se localiza pre
vio a cada exn seal de cada gen V. Este pro
motor est normalmente alejado del enhancer,
excepto cuando ocurre el reordenamiento, que
lo lleva contiguo a un gen J y prximo a la r
bita de accin del enhancer. El enhancer de es
tos genes tiene una longitud de menos de 300
bases y despus del cambio de clase (en los ge
nes de cadena pesada) acom paa al bloque
V/D/J hacia su nueva localizacin.

El origen de la diversidad de los anticuerpos


A unos pocos nucletidos previos al sitio de
iniciacin de transcripcin de todos los genes
V, se halla un octanucletido conservado, cu
ya secuencia complementaria se encuentra en
un sitio anlogo en los genes de cadenas livia
nas y en el enhancer de las cadenas pesadas.
El enhancer de las cadenas vianas tambin
posee una secuencia conservada. Estas secuen
cias son esenciales para la expresin de estos
genes, a los que les conferira la especificidad
de expresin en tejido linfoide. Se han identifi
cado las protenas nucleares que se unen a estas
secuencias regulatorias; las llamadas oct J y
oct 2 se unen al octanuclotido y NF-kB se une
al enhancer.
Reordenaraientos y expresin durante
la maduracin Iinfocitaria
Uno de los primeros eventos en la diferen
ciacin del linaje B lo constituye el reordena
miento de los genes de cadena pesada de inm u
noglobulinas. La clula procede primero con la
recom binacin D/J (habitualm ente en ambos
cromosomas 14) y luego con la V > D/J en
uno slo de los crom osomas 14: si logra en
samblar correctamente los genes, se transcribe
y traduce la cadena pesada (X. Si el reordena
miento no es productivo (abortivo) debido a
deleciones, mutaciones o cambios en el marco
de lectura de los codones, la clula procede a
reordenar el otro cromosoma 14 del par alco.
Si ambos intentos son aborvos, la clula m ue
re por apoptosis. Luego de un reordenamiento

141

exitoso, la cadena pesada p, se asocia tem pora


riamente en el retculo endoplasmtico con una
protena chaperona de 78 kD denominada BiP,
y una pequea proporcin de las molculas se
asocian covalentemente a la llamada cadena li
viana sustitua ( surrogate light chain) con la
cual migra a superficie.
Esta c a d e n a liv ia n a s u s titu a es un dmero no co
valente de dos pptidos llamados (X^ (26 kD) y
(16 kD), que adopta una conformacin espacial si
milar a una cadena liviana. A travs de la porcin
se une por enlace disulfuro a la cadena pesada ju y
todo el complejo se expresa en superficie junto a las
m.olculas accesorias Ig e Igfi. Este complejo mole
cular, denominado r e c e p t o r p r e - B , sera importante
en el envo de seales de diferenciacin por parte de
clulas del estroma de la mdula sea y/o sus citoquinas.
y X5 estn codificados por genes loca
lizados en el cromosoma 22, dentro de la familia de
genes de cadena liviana lambda; son genes muy
conservados en distintas especies y n o se r e o r d e n a n
previo a su expresin. Esta c a d e n a liv ia n a s u s t itu a
es crtica para e! desarrollo linfocitario B, ya que en
ratones mutantes donde se ha alterado deliberada
mente su estructura para evitar su expresin, la on
togenia B se afecta profundamente, con una dismi
nucin en 40-veces del nmero total de linfocitos
pre-B.
La presencia de una cadena |a, funcional en
este estadio parece constituir una seal para
dos eventos: 1 ) que la clula no proceda a reo r
denar los genes del otro cromosoma 14 (si el

ARNm p ara
c a d e n a 5 de
su p e rfic ie

F ig. 6-6. Sntesis sim ultnea de dos A R N m maduros p ara cadena pesada |i. y cadena p esada delta en linfocitos B m ad u ro s
vrgenes. U n pre A RN m que incluye a todos los exones de C p y C8 se procesa en form a diferencial {splicing alternativo)
para generar dos A RNm m aduros, uno para cadena p y otro para delta, q u e incluyen en am bos casos los ltimos ex o n es h i
drofbicos M p y M 5 . Los linfocitos B activados transcriben un pre A R N m ms corto q u e excluye los exones de C ; al
m adurar, se elim inan los exones hidrofbicos M p y la cadena term ina en un tram o hidroflico (S), q ue evitar su an c lad o a
ia m em brana. Las flechas indican los sitios de poli-adenilacin.

142

Aspectos bsicos de la Inmunidad

primer intento fue productivo); 2) que comien


cen los reordenamientos de los genes de cadena
liviana. Para las mismas hay una jerarqua en la
eleccin de los cuatro loci disponibles; primero
siempre se intenta con la familia kappa, en uno
de los cromosomas 2. Si el evento es producti
vo, el otro locus kappa y la familia lambda per
manecen en configuracin germinal. Si el pri
mer intento falla, se reordenan los loci kappa
en el otro cromosohia 2 y, si ste tambin falla,
recin entonces se reordenan los genes lambda
(tambin un cromosoma por intento). En otras
palabras, un clon que expresa cadenas lambda,
posee ambos loci kappa abortivamente reorde
nados, Estos fenm enos explican m olecular
mente la llamada exclusin allica, por la cual
una clula B slo expresa uno de los dos alelos
posibles (materno o paterno) de cadena liviana
y pesada, y slo una de las dos cadenas livianas
posibles.
Una vez que la clula produce una cadena li
viana funcional, su ensamble con la cadena pe
sada ocurre dentro del retculo endoplasmtico,
ya sea a travs de un intermediario de hemimocula H-L o de un dmero H-H al cual se unen
luego ias cadenas vianas; estas vas dependen
del isotipo de cadena pesada involucrada. En el
retculo tambin comienza la glucosilacin de
la protena, que contina durante su trnsito ha
cia la membrana a travs del Golgi.
En el estadio ms avanzado de diferencia
cin, la clula expresa simultneamente IgM e
IgD en la superficie, marcadores con los que
migra a la periferia. La clula puede producir
las dos cadenas pesadas, ya que transcribe un
pre-ARNm muy largo que incluye el bloque
variable VDJ, el gen constante C |i y el gen
constante C5. Por empalme o splicing alterna
tivo del pre-ARNm, se producen dos mensaje
ros m aduros, uno para cada cadena p esad a
(vase fig. 6-6). Ellos incluyen a los dos lti
mos exones de cada gen pesado, que poseen
aminocidos hidrfobos, y que le permiten a la
cadena pesada expresarse como una protena
integral de superficie celular.
Cuando comienza la activacin y expansin
clonal inducida por el antgeno, slo se sinteti
za IgM; el pre-ARNm no incluye ai gen C5, En
las clulas plasmticas, el anticuerpo no se ex
presa en superficie sino que se secreta. Para
ello, se produce un ARNm para C |l algo ms
corto, que excluye a los ltimos exones hidr
fobos y termina al final del dominio CH4 con
20 codones hidrofiicos. Los niveles acumula
dos de ARNm son 20-100 veces mayores a los
presentes en un linfocito B en reposo y es con
secuencia, en partes iguales, de un aumento en
el ritmo de transcripcin y un aumento en la es
tabilidad de los ARNm. Cuando las cadenas
pesadas carecen de los dominios de transmem

brana, se transportan como molculas solubles


dentro de vesculas que liberan su contenido al
exterior por exocitosis. Un plasmocito maduro
puede secretar hasta 10 molculas de anticuer
po por minuto.
Existe un nmero muy pequeo de linfocitos
B maduros que exhiben simultneamente anti
cuerpos con dos isotipos distintos de cadena
pesada, por ejemplo IgG -i- IgE, etc. El anlisis
molecular de este tipo de poblacin fue realiza
do en muy pocos casos, en los que se demostr
la presencia de pre-ARNm largos que incluyen
a ms de un gen constante. El procesamiento
diferencial del mismo (similar al que ocurre pa
ra la expresin simultnea de IgM e IgD) gene
rara ARNm maduros para dos cadenas pesadas
diferentes. Se desconoce si estas clulas perte
necen a una subpoblacin con relevancia fun
cional.

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Estructura y organizacin
gentica del receptor T

M. LEONARDO SATZ

Antecedentes histricos
Desde el descubrimiento de los fenmenos
de restriccin en el reconocimiento antignico
por los linfocitos T a principios de la dcada
del 70, y durante ms de una dcada, la natu
raleza del receptor T (TCR) ha sido tem a de
gran controversia en inmunologa. La existen
cia de Jgs como elemento de reconocimiento y
la existencia de uno o dos receptores para ex
plicar la restriccin por los linfocitos T fueron
quiz las reas ms debatidas durante se tiem
po.
A lo largo de muchos aos, numerosos estu
dios contribuyeron a la nocin de que el reco
nocimiento antignico por parte de los linfoci
tos T es diferente del de los linfocitos B. En lo
que se refiere al repertorio o espectro de reco
nocimiento, queda claro que aun cuando puede
haber epitopes reconocidos por clulas de am
bos linajes, los linfocitos B reconocen determi
nantes nativos en el Ag (sean lineales o con
formacionales), mientras que el TCR slo reco
noce pptidos antignicos generados por las
maquinarias de procesamiento (vase cap. 1 0 )
y presentados en la superficie de las clulas
presentadoras de Ag (CPA) por molculas de
histocompatibilidad (MHC).
Hubo dos estrategias de estudio que, inde
pendientemente, han permitido la dilucidacin
de la estructura del TCR. La primera de ellas
analiz el efecto de Acs monoclonales sobre el
reconocimiento de Ag por clulas T y, even
tualmente, llev a la caracterizacin bioqumi
ca del TCR. La segunda encar directamente el
aislamiento de los genes que codifican para el
TCR.

Efectos de ACs monoclonales sobre


el reconocimiento T
La herram ienta esencial en estos estudios
constituy la disponibilidad de clones de linfo
citos T, tanto humanos como murinos. Ellos se
obtienen estimulando repetidas veces in vitro
linfocitos T inmunes con el Ag especfico (y
CPA) y en presencia de IL-2 en el medio de
cultivo. Luego de un tiempo, las clulas son ca
paces de crecer y dividirse, teniendo como tni
co requisito la provisin de IL-2 exgena. Las
clulas pueden ser clonadas por dilucin y el
clon resultante manifestar un reconocimiento
antignico especfico, de naturaleza monoclo
nal. Se han generado clones T con actividad
helper que, ante la presentacin de Ag por
CPA singeneicos, aceleran su proliferacin y
secretan IL-2 y citoquinas. Tambin se han ge
nerado clones T con actividad citotxica espe
cfica.
La caracterizacin fenotpica de los clones T
citotxicos mostr que la mayora de ellos son
CD 8 -I- y estn dirigidos contra epitopes presen
tados en el contexto de MHC de clase 1. Sin
embargo, un pequeo porcentaje de ellos son
de fenotipo CD4-h y reconocen epitopes p re
sentados por MHC de clase II. La asociacin
entre el fenotipo superficial y la clase de mol
culas reconocidas sugiri que quiz las mol
culas CD4 y CDS facilitan el reconocimiento
y/o la lisis de las clulas blanco. Si se preincuban los clones T citotxicos con Acs monoclo
nales anti-CD4 y anti-CD 8 , previo al ensayo de
su actividad biolgica, los primeros inhiben la
citotoxicidad de los clones CD4+ y los segun
dos la de los clones CD 8 -1-. Este efecto se ob

Estructura y organizacin gentica del receptor T


serva sobre clones dirigidos contra blancos dis
tintos y el grado de inhibicin de la citotoxici
dad vara.
Las molculas CD4 y CD8 (vanse cap. 2 y
cap. 13), presentes en la superficie de las dos
poblaciones T predominantes en periferia, es
tn codificadas por genes no polim rficos e
idnticos en las distintas clulas. Por lo tanto,
se especul como poco probable que ellas sean
parte del TCR. Sabemos hoy que estas molcu
las, reconocen estructuras conservadoras (monomrficas) sobre las MHC de clase I y clase II
(de all la asociacin CD4-clase II y CD8-clase
1). No slo ayudaran a la estabilizacin de la
interaccin de la clula T con la CPA, sino que
adems transducen seales de activacin celu
lar (vase cap. 13).
El complejo molecular CD3 est presente en
la superficie celular del 95% de los hnfocitos T
maduros. Est compuesto por un complejo de 5
cadenas polipeptdicas cuyos PM oscilan entre
16 y 26 kD. Se ha observado que durante la ac
tivacin antignica la cadena CD3-zeta es fosforilada en residuos de serina. Cuando se preincuban clones de linfocitos T con Acs monoclo
nales contra CD3, segn las circunstancias ex
perimentales, s'e bloquea la activacin antigni
ca o se induce la activacin de las clulas, aun
en ausencia del Ag especfico. Estos efectos
tambin se manifiestan sobre diversos clones
T, independientemente de la especificidad anti
gnica. El complejo molecular CD3 no exhibe
variaciones en las distintas clulas o in d iv i
duos, y por ello no constituye la estructura pri
maria del reconocimiento.
Los experim entos clave con estos mism os
clones T se hicieron cuando se los us para in
munizar ratones y preparar Acs monoclonales
contra ellos. Los Acs fueron caracterizados, se
gn su capacidad para bloquear o inhibir el re
conocimiento antignico o la activacin de los
clones. Algunos de los Acs obtenidos reaccio
naron e inhibieron especficamente el reconoci
miento antignico por el clon utilizado en la in
munizacin y se los denomin Acs clonotpi
cos. Estos Acs clonotpicos fueron utilizados
para caracterizar bioqumicamente las molcu
las contra las cuales estaban dirigidos en la su
perficie celular T.
En los diversos clones T, independientemen
te de su fenotipo superficial (CD4 o CD8) su
funcin (helper o citotxica), o su especificidad
antignica, estos Acs reconocen glucoprotenas
de alrededor de 90 kD. En estos experimentos
de inmunoprecipitacin, con frecuencia se copurifican tambin los componentes del comple
jo CD3. Por otra parte, si previamente se entre
lazan las protenas con Acs contra CD3, se copurifican las molculas de 90 kD arriba mencio
nadas; estos experim entos sugieren que los

145

componentes del CD3 estn locahzados fsica


mente muy cercanos a las molculas de 90 kD.
Los Acs clonotpicos tambin fueron utiliza
dos para purificar estas molculas. Cuando se
analizaron digestiones trpticas de las m olcu
las aisladas de diversos clones, la crom atogra
fa revel pptidos comunes y otros especficos
de cada clon. Esta caracterstica sera la que
puede esperarse de una molcula con funcin
de TCR, con regiones C y V, como en las Igs.
Una de las cadenas se llam T a y la otra Tp.
Luego se obtuvo informacin parcial de las se
cuencias aminoacdicas de las cadenas purifica
das con estos Acs y se demostraron pequeos
tramos de homologa con las cadenas pesadas y
livianas de las Igs.
Todas estas evidencias experimentales fue
ron obtenidas durante los aos 1983-1984 y su
girieron, obviamente, que las estructuras reco
nocidas formaban parte del TCR. La confirm a
cin provino de los estudios moleculares de ca
racterizacin de los genes de la cadena p del
TCR, lograda en form a independiente en el
transcurso de los mismos aos (vase ms ade
lante). La segunda fam ilia de genes de TCR
identificada se crey que era la correspondiente
a la cadena T a; se trataba en realidad de los ge
nes Ty, que codifican para un TCR diferente.
Pronto qued claro que existen dos estructuras
diferentes de TCR, presentes en distintas po
blaciones de linfocitos T, que se denom inan
a /p y y/8 y cuyo origen, distribucin y funcin
parecen ser diferentes. Ambos tipos de recepto
res estn estrechamente asociados en la mem
brana al complejo molecular CD3 que, como
vim os antes, se requiere para el correcto en
samblado y transporte del TCR a la superficie
y tambin para la transduccin de seales al in
terior de la clula. El cuadro 7-1 resume las ca
ractersticas de ambos tipos de clulas T.
Estrategias de aislamiento
de los genes de! T C R
Durante 1983 M ark Davis y col. establecie
ron una estrategia para el aislamiento de los ge
nes del TCR, basada en las siguientes presun
ciones: a) los genes deben expresarse en clu
las T y no en clulas B, b) los ARNm para el
TCR deben hallarse en polisem as adosados a.
membranas del retculo endoplasmtico rugo
so, con la protena naciente unida al retculo
por el pptido seal, c) los genes que codifican
el TCR deben sufrir reordenamientos genticos
de hnfocitos T para generar diversidad con es
trategias similares a las usadas por las Igs, y d)
al igual que en los genes de Igs, debe haber re
giones V y regiones C.
Sobre la base de estas suposiciones se desa
rroll una estrategia de clonado, teniendo en

146

Aspectos bsicos de la inmunidad

C u ad ro 7-1. Descripcin comparativa de los linfocitos con receptores a jiy yS


R eceptor yS

R eceptor aj3
Estructura:
D iversidad;
D istribucin:
Fenotipo:

Ontogenia:
F uncin:

H eterodm ero unido S-S


a : - 6 0 V, -6 0 J, 1 C
P: - 7 0 V, 2D , 13 J, 2 C
Sangre perifrica 60-70%
G anglios, bazo
60% CD 4 + CDS 35% CD 4 - CDS +
<1% C D 4 - C D S 100% CD 2+ CD34-, > 95% CD5 -F
T m ica (tarda)
Extratm ica im probable
Reconoce pptidos presentados sobre m ol
culas de histocom patibilidad de clase I y II
clsicas

cuenta que los linfocitos B y T difieren sola


mente en la expresin de unos 200-300 genes y
que slo un 3% de los ARNm se hallan unidos
a polisomas de retculo rugoso. Se prepar una
coleccin de ADNc a partir de ARNm purifica
do de polisomas de retculo de clulas T, usan
do uno de los precursores de la sntesis de
TCRP

H eterodm ero unido S-S o no covalente


8: 5 - I 0 V , 3 D , 4 J , 1 C
y: 9 V, 5 J, 2 C
Sangre perifrica < 10%. Epitelio intestinal, genital, piel.
lquido sinovial
< 1% CD 4 + CDS 20-50% C D 4 - CDS dbil
50-80% CD 4 - CDS 100% CD 2+ CD 3+, C D 5- o dbil
Tm ica (tem prana)
Extratm ica probable
Posibles: prim era lnea de defensa contra antgenos m icro
bianos conservados. R econocim iento de pptidos sobre
m olculas de histocom patibilidad clsicas o no clsicas
(C D l en hum anos,
TL /Q a m urinos)

ADN m arcado por


Se hibridizaron con
ARNm proveniente de linfocitos B para elimi
nar las secuencias comunes a ambos linajes ce
lulares y los ADNc especficos T restantes se
utilizaron como una sonda para identificar clo
nes con secuencias de ADN homlogas, en otra
coleccin de ADNc especficos de clulas T
TCRa

F ig . 7 -1 . E s q u e m a d e l
c o m p le jo C D 3 /r e c e p to r
T a.p en la su p erficie c e lu
lar. Los signos (+) y (-) en
las porciones transm em br
nicas representan am inoci
dos cargados en las cadenas
del receptor y de las m o l
culas CD3. H ay evidencias
a h o ra d e la p r e s e n c ia d e
dos cadenas e en C D 3, u na
aso ciad a a C D 3-8 y o tra a
CD3~y.

Estructura y organizacin gentica del receptor T


construidos como antes. Se aislaron clones po
sitivos, y con cada uno de ellos se evalu su
expresin exclusiva en linfocitos T y si sus se
cuencias se hallaban reordenadas en linfocitos
T y no en B (patrones e hibridizaein diferen
tes al cortar el ADN de linfocitos B y T con nu
cleasas de restriccin). Uno de los clones aisla
dos cumpli con todos estos requisitos. Se tra
t, en efecto, de la cadena T(3 murina, cuya se
cuencia nucleotdica revel tramos de homolo
ga con las Igs. Este primer clon fue usado a su
vez como sonda para identificar secuencias ho
mlogas en una coleccin de ADNc preparada
a partir de ARNm tmico. Se identificaron nue
vos clones, cuya secuencia nucleotdica era va
riable en los primeros 100 codones, pero cons
tante en los ltimos 200.
Con estrategias sim ilares se identificaron
otros genes de los TCR murino y humano. Los
primeros clones de ADNc perm itieron aislar
luego clones genmieos y conocer la organiza
cin de las familias de estos genes.
Heterodmero a p
La cadena a posee unos 260 aminocidos y
la P unos 300, de los cuales los primeros 100120 (del extrem o N -term in a l de cada una)
constituyen la regin variable. La yuxtaposi
cin espacial de la regin V a y v p determina
el sitio de reconocim iento del receptor (fig.
7-1). El dominio ms prximo a la membrana
es conservado y se lo llama regin constante,
C a y C3. Los dominios V y C en ambas cade
nas poseen puentes di sulfuro intraeatenarios, t
picos de la estructura general que poseen las
inmunoglobulinas y MHC. Ambas cadenas es
tn unidas covalentemente por cistenas locali
zadas prxim as a la m em brana plasm tica.
Luego de un segmento hidrfobo transmembr
nico (19-22 aminocidos), las cadenas term i
nan con 5-12 residuos intracitoplsmicos. A m
bas cadenas estn glucosiladas, y poseen una
masa relativa de 45-60 kD y 40-50 kD para la
a y p respectivamente.
La estructura tridimensional de los dominios
variables de las cadenas a y p del receptor T
(RCT), determinada por cristolografa de rayos
X se observa en la figura 7-2.
Gentica del receptor ap
U ICR est codificado por genes que, en lnep generales, siguen la misma estrategia que
k' genes de inmunoglobulinas para generar di
versidad. Esto es, durante la diferenciacin los
linfocitos T reacom odan blo q u es de genes
V(D)J para ensam blar una regin variable y
traerla prxima a la regin constante.

147

Familia de genes a. En humanos, est locali


zada en el cromosoma 14, en el sitio alejado del
locus de cadena pesada de inmunoglobulinas;
en ratn, se hallan en el cromosoma 14. E st
compuesta por un nico gen constante, denom i
nado Ca, dividido en cuatro exones. La infor
macin para la porcin variable de la cadena al
fa est fragmentada en dos familias, una deno
minada V a y otra Ja. Esta ltima est com pues
ta por al menos 61 miembros, esparcidos en un
tramo de unas 70 kb vecinas a C a (fig. 7-3); al
menos cinco J a son seudogenes. Cada J a posee
una longitud de unos 55-65 bp y por lo tanto
codifica para unos 18-21 residuos. A continua
cin del locus Ja , se halla el locus de genes 5
(vase ms adelante) y luego el conjunto de g e
nes V a , cada uno de ellos est precedido por un
exn seal. Existen como mnimo 60 genes V a
clasificados en 29 subfamilias. Esta regin del
genom a est extrem adam ente conservada en
murinos, donde tambin hay unos 60 segmentos
J a y unos 100 genes V a.
Para generar diversidad en esta cadena, du
rante la diferenciacin intratmica, cada clula
elige un gen del pool V a y lo reacomoda v e
cino a alguno de los genes Ja. Al cabo de este
proceso se eliminan todos los genes localizados
entre ambos V a -Ja que reordenan, incluyendo
a todo el locus delta (fig. 7-3). Por el gran espaciam iento de la fam ilia Ja , los pre-ARNm
que se generan por transcripcin del locus re o r
denado son notablemente largos. La transcrip
cin de este locus est regulada por un enhan
cer, localizado a 4,5 kb hacia 3 del gen C a ,
que afecta al promotor de cada gen V a luego
de la reeombinacin V a /Ja . Por la gran exten
sin de la regin Ja , se presume que este e n
hancer debe ser lo suficientemente activo para
afectar la transcripcin de genes V a que han
reordenado a J a muy distales.
F a m ilia de genes 3. Est localizada en el
cromosoma 7 humano y 6 murino (alejado de
la familia de genes de cadena liviana k). Tanto
en el humano como en el ratn, existen dos g e
nes constantes denominados C/37 y C}2. A m
bos son genes funcionales, subdivididos en
cuatro exones, con muy alta homologa (>95% )
entre s. Poseen cierta homologa ancestral (3237%) con los genes Ce y el dominio CHI de la
cadena pesada gamma de inmunoglobulinas.
C p l est precedido en un tramo de -4-5 kb
por un grupo de seis genes 7/3 y un gen D5,
mientras que CB2 est precedido por siete j p y
un D p (fig. 7-3). Cada gen Dp codifica p ara
3-5 aminocidos y cada Jp para 15-17 residuos.
Existen adems no raenos de 70 genes V3
humanos, cada uno precedido de un exn seal.
Esta fam ilia est localizada previo a D p i, e x
cepto para un gen v p ubicado unos 10 kb a
continuacin de CP2, con una orientacin de

148

Aspectos bsicos de la Inmunidad


F ig . 7-2. A. E structura tridim ensional
determ inada por cristalografa de rayos
X de los dom inios variables (V) de las
cadenas a (am arillo) y p (celeste) del
receptor para antgenos de las clulas T
(RCT). Las regiones de com plem enta
riedad hipervariables que interaccionan
eo n el co m p lejo p p tid o -m o lcu la de
clase II del C M H estn in d icad as en
a z u l ( C D R I ) , b la n c o (C D R 2 ), ro jo
(C D R 3) y en m agenta /a regin de iipervariabiU dad 4 (HVA). B. La mism a
estru c tu ra m o stran d o la su p erficie d e
contacto eon el com plejo pptido-m ol
cula clase II del CM H con el mism o c
digo de colores. Fotografas gentilm en
te cedidas por los Dres. B. A. Fields, E.
L. M alchiodi y R. A. M ariuzza.

transcripcin inversa a la del gen constante. Es


te ltimo gen Vp es funcional. La diversidad
v p murina es menor, con aproximadamente 25
miembros.
Para generar diversidad en la familia p, du
rante la diferenciacin intratm ica una clula
procede a reacomodar estos genes. En primer
trmino se produce la recom binacin D p-Jp:
D p i tiene 13 opciones Jp para elegir (seis del
prim er grupo y siete del segundo), m ientras
que Dp2 slo tiene siete (fig. 7-3). En una se
gunda etapa, uno de los genes VP es elegido y
reacomodado vecino al bloque Dp/Jp. Los ge
nes C pi y CP2 son utilizados indistintamente
en los linfocitos T, independientemente del fe
notipo de superficie o funcin de los mismos.
Funcin del receptor aP
L as clulas T p o rtad o res el rec e p to r a p
constituyen el 60-70% de los linfocitos de san
gre perifrica y son tambin los predominantes
en ganglios y bazo. Esta molcula est presen
te en la superficie tanto de las clulas CD4-{-

como las CD8+, secm colaboradoras o citotxicas/supresoras. Su funcin es la de reconocer


MHC de clase I o clase II que acarrean ppti
dos antignicos en su sitio de presentacin.
Correlacin en tre la estructura del recep
tor T y la especificidad antignica. La des
cripcin de los genes a y p como responsables
de la codificacin de las cadenas del receptor
antignico presente en la mayor parte de los
linfocitos T permiti luego encarar estrategias
experimentales para conocer cul es la contri
bucin de ambas cadenas en la especificidad fi
na del reconocimiento. Numerosos experimen
tos demuestran que ambas cadenas son necesa
rias para el reconocimiento T. Por ejemplo, Yague y col. aislaron tres clones T murinos espe
cficos contra ovalbmina de pollo junto a la
MHC de clase II, I-A'. Los tres clones utilizan
los mismos genes a y P; lneas mutantes que
dejan de expresar una u otra cadena, pierden su
capacidad de reconocer Ag, lo que se restaura
al fusionar dos mutantes (una a y otra P). En
otros modelos de mutantes similares, la intro
duccin exgena del gen, cuya expresin end

Estructura y organizacin gentica dei receptor T


gena se ha perdido en ei mutante, tambin res
taura ia expresin dei receptor T. Recurdese
que ias m utantes que no expresan ei dm ero
T a, P, tampoco expresan CD3 y que ia reex
presin dei RCT tambin restaura CD3.
Con ei objeto de saber si ia cadena a o ia p
participan independientem ente dei reconoci
miento dei epitope antignico y de ia MHC, se
hicieron ios siguientes experimentos: a partir
de un clon T citotxico se aislaron ios genes
reordenados T a y Tp y se introdujeron para su
expresin en otro cion citotxico, de especifici
dad distinta. Luego de ia transferencia, ias nue
vas ciuias conservaron su especificidad originai, adquirieron ia especificidad de ias ciuias
donantes de ios genes, pero no adquirieron
nuevas especificidades combinadas para reco
nocer cada uno de los pptidos antignieos en
ei contexto de ia MHC del otro cion. Estos re
sultados sugieren una vez ms que ambas cade
nas son ias responsables dei reconocim iento
dei complejo pptido-MHC.
Por otra parte, no hay una utilizacin preferenciai de determinados genes variables ( a o p)
por una u otra subpoblacin CD4 o CD8 de lin
focitos T. Estas observaciones coinciden con ia
nocin de que ia MHC de ciase I y de clase II
posee una estructura tridimensional similar.

149

Heterodmero jd
Se expresa en ia superficie asociado ai com
plejo m olecular CD3, en linfocitos T que no
expresan el dimero a p . Las cadenas y tienen
una m asa relativa de 45-55 kD (algo m s de
300 aminocidos) y las 8 de 40-50 kDa (~ 275
aminocidos). Ambas estn glucosiladas.
En humanos hay dos tipos de cadenas g a
mma que difieren en su posicin constante, de
nominadas T y l y Ty2 segn utilicen genes Cyl
o Cy2 (vase ms adelante). Tyl forma un d
mero unido por puentes disulfuro con ia cadena
5, m ientras que Ty2 se enlaza no co valente
mente con 5 ya que carece de cistenas por fue
ra del dom inio transm em brana. En el rat n
aparentemente todos los TCR y8 poseen enla
ces covalentes.
Gentica del receptor y
Est codificado por segmentos gnicos que
tambin se reordenan durante la ontogenia para
generar diversidad.
F a m ilia de genes y. Est localizada en ei
cromosoma 7 humano, en un locus alejado del
que codifica para los genes beta; en el ratn se
halla en el cromosoma 13. Existen dos genes

CADENA p

2 5 kb

CADENA a
L Va

Ja

Ja Ja Ja J a Ja

Ja Ja Ja

Ca

80 Kb
CADENA.8
'L V a

LV5

D5,_3

LVa

J5,_,

C5

lf

V8 L

15 Kb

CADENA Y
L Vy

L Vy

Jy

Cy,

Jy

Cy,

F ig. 7-3. O rganizacin genm ica en las cuatro fam ilias de cadenas del TCR. El locus delta est entre los genes V a y J a .
V ase el texto para ms detalles. Un C om it de N om enclatura de la O N U acord recientem ente designar a los resp ectiv o s
genes con letras m aysculas, por ej.: T C R A C , es el gen constante C a , T C R A J se refiere a los genes J a , etctera.

150

Aspectos bsicos de la inmunidad

constantes funcionales denom inados C yl y


Cy2, separados entre s por unas 16 kb (fig.
7-3). Cyl es precedido por tres genes J y y
por dos Jy adicionales. Se han identificado 14
genes Vy, agrupados en 4 familias. La primera
incluye 5 genes funcionales y cuatro seudoge
nes, las otras tres poseen un miembro cada una
aunque slo un gen (V9) es funcional. Al igual
que en las otras cadenas, el apropiado reorde
namiento Vy-Jy permite la transcripcin de un
gen funcional. La organizacin murina es simi
lar, aunque hay cuatro clusters Jy-Cy, uno de
ellos no funcional. Hay al menos siete Vy mu
rinos funcionales.
Familia de genes 5. Este locus se halla en
tre los genes V a y J a (fig. 7-3). Existe un ni
co gen constante CS, organizado en cuatro exo
nes. Est precedido de cuatro segmentos J5 y
tres genes D5. Se han identificado hasta el pre
sente por lo menos cuatro genes VS, uno locali
zado a continuacin de C5 en orientacin de
transcripcin invertida y los otros parecen estar
esparcidos entre los genes de la familia V a. A
unas 2 kb hacia 5 del segmento C5 (entre C5 y
J5), se halla el enhancer que regula la trans
cripcin de los genes. La familia est extrema
damente conservada entre humanos y murinos.
Funcin del receptor y
En humanos, las clulas T con receptores y5
constituyen una fraccin minoritaria de los lin
focitos T de sangre perifrica (<10% ), gan
glios, bazo y timo (<1%), esto es, en rganos
donde predominan las clulas T a p . Sin embar
go en rumiantes, la sangre perifrica posee pre
dominio de Ty5. Estas clulas se hallan en di
versos epitelios y se acumulan en lesiones in
flamatorias causadas por numerosos patgenos.
La mayora no expresa en superficie las mol
culas accesorias CD4 y CDS; las presentes en
epitelio intestinal expresan un hom odm ero
C D Saa. Se desconoce la funcin precisa de es
tos linfocitos, aunque las evidencias sugieren
que pueden ejercer diversas funciones efectoras
y regulatorias (vase ms adelante).
Hay evidencias que sugieren que los linajes
que se diferencian hacia clulas a[3 y y6 en el
timo, son independientes. Se ha postulado la
existencia de una clula precursora que inten
ta reordenar productivam ente el locus gamma:
de lograrlo, contina su m aduracin reorde
nando el locus delta. Si falla el reordenam ien
to de gamma, la clula reordenara genes -beta
y finalmente genes alfa. Durante la diferencia
cin, las clulas Ty6 realizan seleccin positi
va y seleccin negativa y hay evidencias de
que tanto las molculas de histocom paribilidad clsicas como las no clsicas estn invo
lucradas en este proceso. A lgunas subpobla

ciones Ty5 parecen ser seleccionadas en en


tornos extratmicos, presumiblemente por an
tgenos ambientales.
En humanos existen fundamentalmente dos
subpoblaciones de linfocitos Ty6. La subpobla
cin V8l usa preferentemente una combinacin
V81/D51 y D82, y se une en forma no covalen
te a cadenas gamma que usan Cy2 y el Jy ms
vecino que lo precede, pero no tienen preferen
cia por un dado Vy. Esta poblacin aparece en
timo 4-6 meses despus del nacimiento, posee
gran diversidad en el sitio de yuxtaposicin
V/(D)J, son minoritarias en sangre, donde exhi
ben un fenotipo CD45 RA. La subpoblacin
V52 es de ontogenia ms temprana, aparecen
en timos fetales de 10 semanas y con el desa
rrollo pasan a sangre perifrica, donde son ms
abundantes que las V 8 l y poseen fenotipo
CD45RO. Estn form adas por cadenas delta
V82/D83 unidas covalentemente a cadenas ga
mma con uso preferencial Vyl o Vy9/Jyl/Cyl.
Es como si ambas subpoblaciones balancearan
el uso recproco de genes.
La poblacin V82 de sangre perifrica hu
mana exhibe una citotoxicidad inespecfica, ti
po NK, contra determinadas clulas tumorales,
luego de su activacin in vitro con mitgenos
(PHA) e IL-2. Tambin expresan receptores Ec
y algunos clones Ty8 pueden ejercer ADCC.
La poblacin V81, tiene menor potencial citotxico. Algunos clones T con estas caractersti
cas responden con intensa proliferacin ante
ciertos HLA-DR alogeneieos respecto de las
clulas T; esta estimulacin se bloquea con an
ticuerpos anti HLA-DR, demostrando el reco
nocimiento por el receptor y5 de una molcula
de histocom patibilidad. Algunos clones TyS
murinos tam bin m ostraron esta reactividad.
Tanto clones humanos como murinos secretan
algunas citoquinas in vitro.
En el ratn, los linfocitos Ty8 son los prime
ros en colonizar el timo en el da 14 de la gesta
cin, donde reordenan y expresan predominan
temente el gen Vy3. En el da 17 se produce otra
onda de expansin de timocitos y8, que expre
san predominantemente el gen Vy3. En el da 17
se produce otra onda de expansin de timocitos
y8, que expresan predom inantem ente el gen
Vy4. Estos linfocitos fetales migran para coloni
zar la piel y epitelios genitales, respectivamente,
donde exhiben muy limitada diversidad de reco
nocimiento (vase ms adelante. Diversidad).
En ratones adultos se halla una poblacin Ty8
con mucha diversificacin, que coloniza epitelio
intestinal y parece desarrollarse (o al menos ex
pandirse) en entornos extratmicos.
Papel de las clulas T yS en infecciones. Se
ha comprobado recientemente que en determi
nadas patologas infecciosas, se acumulan lin
focitos Ty8 en sitios inflamatorios. En reaccio

Estructura y organizacin gentica del receptor T


nes granulomatosas cutneas en pacientes con
lep ra tu b e rc u lo id e , hay ap ro x im a d a m e n te
25-35% de linfocitos Ty5, comparado con un
-5% presente en piel normal. Se pudieron ge
nerar algunas lneas celulares de estos pacien
tes, que proliferaron intensamente ante lepromina y PPD, aunque no se estableci claramen
te la necesidad o no de reconocimiento del an
tgeno junto a m olculas HLA. En pacientes
con Leishmaniasis cutnea tambin se observ
un incremento de 7 veces en el nmero de lin
focitos TyS en las lesiones granulomatosas. Por
otro lado, en el lquido sinovial de pacientes
con a r tr itis re u m a to id e a , se a cu m u la un
10-20% de linfocitos TyS. Cuando se incuba in
vitro esta poblacin con extractos antignicos
de Mycobacterium tuberculosis y protenas de
estrs trmico (HSP-60) purificadas, se induce
la activacin celular. Una estimulacin similar
se observa con clulas Ty5 de sangre perifrica
de individuos positivos al PPD. Clones TyS
(Vy9-i-) de sangre de individuos normales ejer
cen citotoxicidad contra clulas preincubadas
con enterotoxinas de estafilococos. Durante la
fase aguda de infeccin con el virus de Epstein
BaiT, aumentan en sangre perifrica los nm e
ros de linfocitos Ty5 Vy9/Vy2. Las Ty5 tam
bin aumentan en humanos infectados con Sal
monella o Brucella.
Los modelos experimentales murinos aporta
ron en los ltimos ao numerosos ejemplos del
papel de las clulas Ty8. Los ratones donde se
eliminaron las clulas T y5 (por tratamientos in
vivo con anticuerpos monoclonales anti-Ty5, o
con animales donde se mutaron deliberadamen
te los genes y5 de forma tal que no se permite
la m aduracin de estas clulas), son m ucho
menos eficientes en la depuracin de bacterias
o parsitos tales como Listeria, Salmonella o
Leishmania. En experimentos muy recientes se
ha docum entado que las clulas TyS pueden
constituir parte de la inmunidad innata produ
ciendo diferencialm ente citoquinas que indu
cen respuestas T hl y Th2. As, ratones infecta
dos por va intraperitoneal con Listeria, acum u
lan en esta cavidad durante 10 das clulas TyS
que secretan INFy; por otra parte, ratones in
fectados con un parsito extracelular {Nipostrongylus), acumulan linfocitos TyS que secre
tan IL-4. Evidentemente las clulas TyS pueden
discrim inar am bos patgenos en las etapas
tempranas de la infeccin y producir citoquinas
asociadas de respuestas Thl o Th2.
El rol de ias clulas TyS no se hmita a este
papel regulador de las respuestas inmunes: ra
tones que carecen de clulas T ap , pero que po
seen nm eros norm ales de clulas TyS, son
mucho ms eficientes en la eliminacin de L is
teria comparados con animales en donde am
bas poblaciones T estn ausentes; esto indica

151

que las clulas TyS pueden jugar un papel ms


directo en la eliminacin de patgenos.
En los casos donde se la analiz, la partici
pacin de las molculas de histocompatibilidad
(M HC) clsicas en el reconocim iento p o r la
TyS constituye una excepcin; en algunas si
tuaciones, se requiere una MHC aunque no se
observa restriccin gentica. Por otro lado, nu
merosos clones TyS reconocen clulas que ex
presan determ inadas MHC no-clsicas, tales
como TL/Qa murinas o C D l y CD48 humanas.
M ecanismos de reordenamiento gentico
Los miembros de las cuatro familias de ge
nes del TCR poseen seales de recombinacin
con heptmeros, nonmeros y espaciadores de
12 y 23, muy similares a los presentes en los
genes de inmunoglobulinas (cap. 6). Su organi
zacin muestra que tambin se cumplira la re
gla 12/23 para los genes que interactan (fig. 74). Por la disposicin de las seales en el locus
Tp, ntese que podra ocurrir una recom bina
cin V[3-Jp directa, o una recombinacin D p iDp2, sin violar esta regla (fig. 7-4). Sin em bar
go, estos fenmenos no parecen ser habituales.
Otro mecanismo de recombinacin sera el utihzado por los genes Vp y VS hallados en posi
cin in v ertid a a co n tin u aci n de los genes
constantes CP2 y CS respectivamente.
Diversidad de los receptores T
La diversidad exhibida por los receptores aP
es de una magnitud similar a la de las inmunoglobulinas. En todas las familias de genes del
TCR existe flexibilidad en el sitio de yuxtapo
sicin de los genes que recombinan y tambin
ocurre el agregado de 1-12 nucletidos libre de
tem plado en dichos sitios (diversificacin Nterm inal). Esta di versificacin en el sitio de
yuxtaposicin vara en las diferentes etapas de
ios ontogenia TyS murina, desconocindose los
factores que la regulan.
Por otro lado, en la familia de genes TP, am
bos elementos Dp pueden ser usados en los tres
marcos de lectura sin la aparicin de codones
de terminacin. Esto permite eodificai' distintos
residuos, lo que aumenta notablemente la di
versificacin. Lo mismo sucede con los genes
DS, donde adems se han identificado num ero
sas cadenas que utilizan simultneamente dos
regiones DS. Estos mecanismos proveen al sis
tem a yS de un enorme potencial pese a que es
tas familias disponen de un aparente reducido
nmero de genes variables.
En el ratn, los linfocitos TyS de la piel y
epitelio genital expresan predom inantem ente
un par de cadenas yS, donde sus genes poseen
muy reducida variabilidad en los sitios de re-

152

Aspectos bsicos de la inmunidad

CADENA a
7
Va

23

12

Ja

CADENA p

vp

I_____-/ /_

Dp

12

Jp

CADENA y
23

12

Jy

CADENAS
,

D5
23

V8.

//-

12

23

-//

12

J8

F ig. 7-4. H eptm eros, nonm eros y espaciadores que anciuean a los genes de las cuatro cadenas de los receptores T. O b
srvese que, por la disposicin de los espaciadores vecinos a D p y D6, se perm ite la recom binacin entre dos genes D.

combinacin. Por lo tanto, el repertorio de re


conocimiento de estas clulas es muy limitado.
A diferencia de lo que sucede con los genes
de inm unoglobulinas, no hay evidencias que
sugieran la existencia de mutacin somtica en
lo genes de receptor T.
Molculas accesorias
E l complejo molecular CD3. Ambos heterodmeros de reconocim iento T estn estrecha
mente unidos en la superficie celular con un
grupo de molculas que colectivamente se de
signan complejo CD3 (fig. 7-1). Como se ha
mencionado antes, se trata de cinco cadenas
polipep tdicas de 150-180 residuos, dos de
ellas glucosiladas llam adas CD3y y CD3s, y
dos no glucosiladas, denominadas CDSsipsilon) y CD3( (zeta), habiendo dos m.olculas de
esta ltima por complejo molecular. No se dehe confundir a estas cadenas con las molculas
del receptor Tpropiam ente dicho.
Son protenas integrales de membrana, uni
das no covalentemente entre s, excepto las dos
molculas
que estn unidas por enlaces di
sulfuro. Excepto CD3i;, el resto de las molcu
las poseen los dos tercios de la protena e x
puestos al exterior, seguidos a continuacin de

una regin transmembrana de unos 26 residuos.


Este tramo posee un aminocido con carga ne
gativa, que puede constituir uno de los m eca
nismos que estabilizan su interaccin con las
cadenas del heterodmero receptor, que poseen
en esta porcin uno o dos residuos con carga
positiva.
Las porciones intracitoplasm ticas de los
componentes son significativamente ms largas
que las de los receptores, por lo que se cree que
pueden interactuar con otros componentes del
citoplasm a en la transduccin de seales. Su
secuencia no es homloga a dominios de act
vidad quinasa o protenas que ligan GTP. Co
mo se describir en el captulo 13, los compo
nentes de CD3 participan en la transduccin de
seales durante la activacin celular.
El complejo molecular CD3 es esencial, ade
ms, en el ensamblado y transporte del TCR a
la superficie. La unin de las molculas ocurre
en el retculo endoplasmtico, donde participa
una cadena adicional denominada CD3co(omega). Clulas mutantes para la expresin de al
guna de las cadenas de CD3 no exportan el re
ceptor T hacia la superficie.
Las cadenas CD3 y, 5 y e se sintetizan desde
estadios muy tempranos de maduracin tmica,
pero permanecen en el interior celular. Recin

Estructura y organizacin gentica del receptor T


en los estadios ms avanzados de maduracin,
ei reordenamiento y la expresin de los genes
del TER permiten el ensamblado del conjunto
para su exposicin superficial.
Los genes que codifican CD3 7 , 8 y e estn
estrechamente ligados en un tramo de 60 kd del
cromosoma 1 lq23 humano y 9 murino.
Otras molculas accesorias. En las clulas
portadoras del receptor a p , las molculas CD4
y CD 8 juegan un papel importante en el mconoeimiento de porciones no polimrficas de las
MHC de clase II y I respectivamente. Tambin
participaran en la transduccin de seales al
interior, ya que estn asociadas a una tirosina
quinasa que puede fosforilar a cadena CD3 ^
(vase cap. 13).
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Reaccin antgeno-anticuerpo in vitro


interaccin primaria

RICARDO MARGNI

GENERALIDADES
L a reaccin inm unolgica depende de la
complementariedad que pueda existir entre un
antgeno y un anticuerpo y constituye una inte
raccin tpica entre macromolculas. En el de
terminante antignico y en el sitio de combina
cin del anticuerpo especfico hay estructuras
que se corresponden y la regulan. No solamen
te las estructuras primarias son las responsables
sino que, tal como ocurre con algunas enzimas,
las estructuras secundarias y terciarias tambin
participan facilitando el acoplamiento, como la
llave a la cerradura segn la expresin clsica.
Las fuerzas que facilitan esta unin no son
de tipo covalente, son ms lbiles, lo que per
mite en ciertas condiciones la disociacin de
complejos Ag-Ac ya formados.
Cuando antgeno y anticuerpo se encuentran
en fase acuosa, la interaccin de las molculas
de agua con ambos reactivos juega un papel
muy im portante en la combinacin ligante-ligando. Las fuerzas responsables de esa unin
se producen en prim er trm ino como conse
cuencia de una disminucin de la entalpia que
lleva a la sustitucin de las interacciones de fi
jacin entre el agua y el antgeno o el anticuer
po, por interacciones ms estables entre el ant
geno y el anticuerpo y, en segundo lugar, por
un aumento de la entropa originariamente de
pendiente de la liberacin de agua por ambos
reactivos. La energa libre de fijacin es la que
tiene que vencer la disminucin de la entropa
originada a consecuencia de la com binacin
del antgeno con el anticuerpo para formar un
complejo Ag-Ac ms estable.
D iferentes formas de unin no covalentes
contribuyen a la formacin de la unin Ag-Ac,
las que estn determ inadas por la naturaleza

8
qumica del solvente. Entre ellas figuran unio
nes electrostticas (atraccin entre tomos car
gados positivam ente y negativamente), unio
nes o puentes de hidrgeno (atraccin entre
tomos polarizados opuestos de hidrgeno y
oxgeno), fuerzas de Van der Waals (atraccin
entre electrones y ncleos atmicos), fuerzas
de dispersin de London (dependen de la pola
ridad electrnica de los grupos interactivos),
etc. Una caracterstica de todas esas fuerzas de
atraccin es que son inversamente proporcio
nales a la distancia entre los grupos interaccionantes. As, las uniones inicas son inversa
mente proporcionales al cuadrado de la distan
cia que los separa, en tanto que las fuerzas de
Van der Waals son inversamente proporciona
les a la sexta potencia de la distancia entre los
grupos. Adems, en estas interacciones partici
pa la llamada repulsin estrica, que es inver
samente proporcional a la dcima potencia de
la distancia entre los grupos reaccionantes. Es
tas fuerzas se deben a la interpenetracin de
las nubes electrnicas de los tomos no uni
dos.. C uando hay co m p lem en taried ad entre
ellos, estas fuerzas se minimizan, ocurriendo
lo contrario cuando el ligando no es especfico
para los grupos reactivos del sitio de combina
cin del anticuerpo. La contribucin de esas
fuerzas a la energa libre de unin es del orden
de -1 a -2 Kcal/mol para las interacciones i
nicas; de -1 Kcal/mol para los puentes de hi
drgeno, y m enos de -1 K cal/ mol p ara las
fuerzas de London, La mayor contribucin a la
energa libre de unin no proviene de las unio
nes dbiles entre superficies apolares, sino del
aumento de la entropa como consecuencia de
la liberacin de molculas de agua alrededor
de grupos apolares de los reactivos interaccionantes, que es de aproximadamente -4,1 Kcal-

Reaccin antgeno-anticuerpo in vitro


/mol. Cuando residuos hidrofbicos de un de
terminante antignico interaccionan con resi
duos hidrofbicos del sitio de combinacin del
anticuerpo, las molculas de agua que estaban
en contacto con cada uno de ellos se excluyen,
lo cual facilita la estabilizacin de la interac
cin. Ocurre algo similar a lo que acontece con
molculas proteicas ricas en residuos hidrof
bicos superficiales, las que en solucin acuosa
no pueden permanecer como monmeros pues
dimerizan con facilidad. La contribucin de los
puentes de hidrgeno a la energa lib re de
unin del complejo Ag-Ac, que podra ser sig
nificativa, -4,5 Kcal/mol, se ve muy disminui
da como consecuencia de que las molculas de
agua compiten eficazmente con el antgeno y el
anticuerpo en esas interacciones. La energa li
bre de fijacin total de la unin del antgeno
con el anticuerpo, que es aditiva, oscila entre
-8 y -1 5 Kcal/mol.
Una de las mayores dificultades para el estu
dio de las interacciones antgenos-anticuerpos
sricos es la gran heterogeneidad de stos. El
advenimiento de los anticuerpos monoclonales
homogneos, obtenidos de hibridomas habr de
facilitar los hechos. No obstante, esos resulta
dos sern vlidos para estudios experimentales,
ya que la homogeneidad no es la caracterstica
de la poblacin total de anticuerpos sricos de
una respuesta inmune, donde la poblacin mo
lecular, de origen policlonal, est formada por
anticuerpos de diferente afinidad, que a su vez
pueden reconocer diferencias en los epitopes
para los cuales tienen especificidad.
En el laboratorio es factible realizar el estu
dio fisicoqumico de esa interaccin y la medi
cin de las fuerzas que la regulan en cada caso.
Para ello, partculas antignicas tales como
bacterias, hem ates, clulas, etc., no resultan
tiles pues son muchos los componentes anti
gnicos que las forman. Tampoco son eficaces
la m ayor parte de las protenas sim ples por
contener varios determinantes antignicos dife
rentes por molcula, lo que llevara a la medi
cin de la interaccin simultnea de distintos
sistemas ligando-anticuerpo. Los mejores siste
mas son los constituidos por anticuerpos con
especificidad para grupos qumicos definidos
(anticido arsanlico, antidinitrofenol, antilactsido, etc.) y sus correspondientes haptenos.
Puede recurrirse tambin al empleo de inmunosueros obtenidos por inmunizacin con deter
minadas bacterias capsuladas, las que por con
tener en sus polisidos constitutivos algunos
residuos simples, tales como el cido cellobiurnico en el neumococo tipo ll, originan anti
cuerpos con especificidad para ellos.
Si se inmuniza un animal y se lo sangra pe
ridicam ente, los anticuerpos formados reac
cionan con el agente inmunizante a velocidades

155

diferentes y originan precipitados o aglutinados


que se disocian de distinta m anera segn la
sangra de la que fueron obtenidos. Ello es con
secuencia de su distinta afinidad, que depende
del tipo de fuerzas que gobiernan esas uniones.
Cmo puede medirse esa afinidad?
Si consideramos un hapteno con un solo gru
po reactivo por molcula (Hp), cuando reaccio
ne con su anticuerpo especfico lo har de la si
guiente manera;
Ac + Hp ^ A c H p
k i
AcHp + Hp

AcHp^
k .

AcHp_, + H p ^ AcHp
k
n representa el nmero mximo de molculas
de ligando m onovalente capaces de unirse a
una molcula de anticuerpo, o sea el nmero de
sitios de com binacin o valencia de ste; en
tanto que k y k son las constantes de las velo
cidades de asociacin y disociacin (constantes
cinticas) para las distintas etapas de la reac
cin, y su relacin k /k = K la constante de
asociacin. El valor de K puede calcularse de
terminando la concentracin de cada uno de los
reactivos cuando el sistema se haya equilibra
do. El valor de K determinado en esas condi
ciones se denomina constante de asociacin in
trnseca, y la ecuacin que expresa ese estado
de equilibrio es la siguiente;
(AcHp)
(Ac) (Hp)

= K

(1)

Es necesario, para poder comparar los resul


tados obtenidos con diferentes sistemas, deter
minar las condiciones de equilibrio para el cl
culo de K. Se ha establecido que ste corres
ponde al caso en que ia mitad o el 50% de os
sitios de combinacin del anticuerpo estn ocu
pados por ligando monovalente. Este valor de
K se denomina constante de asociacin intrn
seca mediana, se identifica como
y es sin
nimo de afinidad. Suele representarse tambin
con
(constante de afinidad).
De la ecuacin (1) deriva la siguiente;
K (Ac) (Hp) = (AcHp)

(2)

La concentracin total de anticuerpo (Act) es


igual a la suma de sus molculas unidas al hap-

156

Aspectos bsicos de la inmunidad

teo (AcHp) y las que se encuentran libres en


el medio (Ac):
(Act) = (Ac) + (AcHp)

(3)

Ello considerando al anticuerpo como univa


lente, pero dado que ste posee ms de un sitio
de combinacin por m olcula (n), este valor
debe ser tenido en cuenta, como se ver ms
adelante.
La ecuacin (3) puede reescribirse:
(Ac) = (Act) - (AcHp)

cul debe ser la concentracin aproximada de


ligando (Hp) que se debe aadir para poder lo
grar la saturacin de aqul.
La ecuacin (7) es una expresin de la ley de
accin de las masas, similar a la derivada por
Langmuir para la adsorcin de gases sobre sli
dos.
De la ecuacin (7) puede derivarse otra, que
permite calcular K q determinando las concen
traciones de hapteno libre y combinado para
los diferentes sistem as en equilibrio. Si esa
ecuacin es invertida:

(4)

Sustituyendo el valor (Ac) en la ecuacin (2)


por el de la ecuacin (4) resulta:

(Act)

1 -I- K (Hp)

(AcHp)

K (Hp)

(8)

Si se pasa (Act) al lado derecho de la ecuacin:


K (Hp) l(Act)-(AcHp)] - (AcHp)

(5)

Resolviendo el lado izquierdo de la ecuacin


y reordenando

1 + K (Hp)

(AcHp)

(Act) K (Hp)

(9)

Desarrollando el lado derecho de la ecuacin:


K (Hp) (Act) - K (Hp) (Ac Hp) = (Ac Hp)
K (Hp) (Act) = (AcHp) 4- K (Hp) (AcHp)
K (Hp) (Act) = (AcHp) [ 1 K (Hp)]
(6)
Transfiriendo (Act) del lado izquierdo de la
ecuacin hacia el derecho y [1 4- K (Hp)] en
sentido inverso, resulta;
(AcHp)
(Act)
(AcHp)

(7)

constituye la relacin entre el nmero

de molculas de hapteno combinado por mol


cula de anticuerpo y equivale a la fraccin de la
molcula de anticuerpo unida al hapteno.
Si en la ecuacin (7) (Act) se lo transfiere al
lado derecho, se transforma en
K (Hp) (Act)
(AcHp) = ---------------1 -f K (Hp)

(AcHp)

(Act) K (Hp)

(Act)

(7 )

Siendo K q expresado en M y (Hp) en M, el


producto K (Hp) no tiene unidades. Este valor,
relativo de 1 determina el grado de saturacin
del anticuerpo (Act) por el ligando (Hp). As, si
K; es 10*' M ' y la concentracin del ligando
(rfp) es 10 '' M, Ko (Hp) = 0,1, por lo tanto, de
acuerdo con la ecuacin (7^), el total de anti
cuerpo ocupado sr
0,1
0,1
--------- = ------ = 9 %
1-1-0,1
1,1
Esta observacin es muy interesante ya que
permite saber, para una determinada concentra
cin de anticuerpo (Act) y conociendo su Kq,

(10)

Si sustituimos (AcHp) = hapteno combinado,


por b y (Hp) = hapteno hbre, por c, la ecuacin
anterior puede escribirse:
1

K( Hp)
1 -HK (Hp)

---------- =

---------------

+ --------

( 11)

Act

Act K c

Graficando por el mtodo de Scatchard 1/fo ver


sus 1/c (fig. 8-1) se obtiene una curva que per
mite calcular, adems de Kq, los sitios de com
binacin o paratopes existentes en la muestra
por extrapolacin de la curva a Mb, ya que en
ese punto c y 1/c = O y, de acuerdo con la
ecuacin (11), la ordenada al origen es MAct.
Si se trabaja con anticuerpo purificado, puede
determinarse su valencia dividiendo la concen
tracin de sitios de combinacin por la concen
tracin de anticuerpo total.
La ecuacin (7) est referida a un anticuerpo
o ligante que posee un solo sitio de combina
cin pero, teniendo en cuenta que en los anti
cuerpos existen n sitios, ella debe escribirse
(AcHp)

n K (Hp)

(Act)

1 -)- K (Hp)

( 12)

(AcHp)
--------- y c a la
( Act)
concentracin de hapteno libre (Hp), la ecua
cin anterior puede escribirse:
Si llamamos r a la relacin

nK C
1 - hKc

(13)

Reaccin antgeno-anticuerpo in vitro

157

obtener una lnea cuya pendiente es - K (vase


fig. 8-2A). sta no es una recta, ndice de la he
terogeneidad de los anticuerpos.
Cuando la concentracin de hapteno libre c
es enormemente grande, r se aproxima a n, y
para r/c = O, el punto en que la curva intercepta
a r ser la valencia del anticuerpo o nmero
mximo de molculas de ligando monovalente
capaces de fijarse a una molcula de anticuer
po. Esta graficacin, como se ver ms adelan
te, sirve para determinar el valor de Kq.
Pasando 1 -i- Kc al lado izquierdo de la ecua
cin y reordenando se obtiene;
r -(- r K c = nKc
r = n K c - r K c = c (nK - r)
= nK-rK
1/cxlo^M '
F ig . 8-1. E laborada con los datos del cuadro 8-2. La curva
experim ental fue linealizada por el mtodo del anlisis re
gresivo. In te rcep ci n d e la ln ea a )/b = 8,4 x 10 M -'.
C oncentracin de sitios de com binacin = 0,119 x 1 0 M.
C o n c e n tra c i n de in m u n o g lo b u lin a a n tic u e rp o = 0,95
m g .m l-';K o = 0 ,9 x 1 0 M -'.

Esta expresin resulta muy til ya que si me


diante la aplicacin de alguna de las metodolo
gas conocidas es posible lograr diferentes esta
dos de equilibrio para una misma concentra
cin de anticuerpo y concentraciones variables
de hapteno monovalente, pueden obtenerse di
ferentes valores de r y de c. Esto permite grafi
car por el mtodo de Scatchard r/c versus r y

(14)

Al igual que la ecuacin (11), la (14) no es


una recta, razn por la que no son las expresio
nes ms recomendadas para los clculos de Kq.
En este sentido es m uy til la ecuacin deriva
da por Sips de la de Langmuir (9) para la ad
sorcin de un gas en un slido y que, para el
equilibrio de protenas e iones en solucin, uti
lizando la nomenclatura ya indicada, resulta:
n (K c)
I -t (K c)

(J5)

en la que a es el ndice de heterogeneidad de


los anticuerpos o grado de disp ersi n de la
constante de equilibrio en torno a Ko-

F ig . 8-2. E laborada con los datos del cuadro 9-1. A. graficacin por el m todo de Scatchard. B, g raficacin por el mto
do de Sips.

158

Aspectos bsicos de la Inmunidad

Pasando 1 + (Kc) al lado izquierdo de la


ecuacin (15) y resolviendo se obtiene:
r + r(Kc) = n(Kc)^'
r = n(Kc)>- r(Kc^'
r = (n - r) (Kc)=>
(16)

= (K c )

Su representacin grfica se muestra en la figu


ra 8-2C. Por esta va es posible estudiar la ho
mogeneidad funcional de un anticuerpo mono
clonal directam ente de los sobrenadantes de
cultivos de los hibridomas o de las ascitis que
se prepararon para su expansin.

Act-b

la que mediante la aplicacin de logaritmos se


transforma en:
= a log K - a log c

log

(17)

Cuando se grafican los valores de log


versus log c se obtiene una recta (fig. 8-2B),
siendo a el valor de la pendiente. Tericamente
el valor de a (o a , como tambin se lo designa)
oscila entre 1 y 0. El valor 1 correspondera al
de un anticuerpo en el que todas sus molculas
tuviesen el mismo valor de K, cosa que a ex
cepcin de los anticuerpos monoclonales, en la
prctica difcilm ente ocurre. Valores de a =
0,5-0,7 se obtienen con mucha frecuencia. Para
valores de c = 0,5, el 75% de los sitios de com
binacin dei anticuerpo analizado tienen valo
res de K que oscilan entre 0,025 Kq y 40 Kq.
Esta dispersin es menor cuando el valor de a
se aproxima a la unidad. Para a = 0,8, ella osci
la entre 0,27 y 3,7 de K^.
La ecuacin de Sips puede expresarse de dos
maneras; una de ellas es la (17).
En esta forma, para su clculo es necesario
aislar y purificar el Ac especfico involucrado,
ya que es requisito para la determinacin de r.
Ai igual que con la ecuacin de Scatchard,
donde existen dos formas de expresin, una en
trminos de r (ecuacin 14) y otra independien
te de r y que, por ende, no requiere conocer
concentracin de inmunoglobulina Ac por una
va independiente (vase cap. 39, ecuacin 16),
la equacin de Sips puede expresarse indepen
dientemente de r. Partiendo de una equacin
que veremos ms adelante (ecuacin 27).
1

Act K c"

1
Act

donde Act corresponde a la concentracin total


de sitios, tal como se lo defini para la ecua
cin (11) y cuya determinacin puede hacerse
por un experimento de desplazamiento, se de
duce que
log

Act-r

= a log K -I-a log c

(17)

Afinidad y avidez
La ecuacin (14) puede escribirse as:
= K (n-r)

(18)

= K

(19)

de la que deriva
(n-r) c

Esta ecuacin permite establecer el valor de


K q, cualquiera que haya sido el mtodo de gra
ficacin empleado. Si se trata de un anticuerpo
b ivalente, cuando la m itad de sus sitios de
combinacin estn ocupados, r = 1 y n-r = 1, de
donde
r
1
-------- = K =
(n-r) c
c

(20)

o sea, que K q ser igual a la inversa de la con


centracin de hapteno libre.
Cuando se determina Kq usando como ligan
do un hapteno simple se habla de afinidad y, si
para ello se utiliza un antgeno, se considera
que el valor obtenido expresa la avidez, ya que
las fuerzas de unin en este caso estn aumen
tadas. Lo que se determina es una constante de
asociacin aparente, m agnificada respecto de
K(), pues otras fuerzas, que no son las corres
pondientes a la unin entre el sitio de combina
cin y un epitope aislado, pueden participar.

Reaccin antgeno-anticuerpo in vitro


Cuando lo que interacciona con un anticuerpo
es un antgeno que posee un solo epitope y un
paratope de la molcula de anticuerpo, puedan
ocurrir otras uniones protena-protena entre la
estructura soporte del antgeno y del anticuerpo
no involucradas en el sitio de com binacin.
Puede ocurrir tambin que su interaccin con
un sitio de com binacin del anticuerpo -p o r
creacin de mecanismos alostricos- haga que
el otro sitio de combinacin pueda reaccionar
con el ligando de una manera ms efectiva. Si
el antgeno posee repetido un mismo epitope, y
siempre que no haya im pedim entos estricos
que le permitan interaccionar con ms de un si
tio de combinacin de la molcula de anticuer
po (interaccin m onogm ica), originar una
fuerza de unin mayor que cuando interacciona
un ligando simple. Termodinmicamente signi
fica que para su disociacin, no obstante tratar
se de una molcula de antgeno y una molcula
de anticuerpo las que interaccionan, se necesi
tar mayor energa que si estuviera unido slo
un sitio de combinacin.
En sntesis, toda transgresin a la unin sim
ple entre un sitio de combinacin y un ligando
univalente pequeo como lo es un hapteno (afi
nidad, K q), dar lugar a una constante de aso
ciacin aparente magnificada respecto de Kq.
El valor de esa constante de asociacin mlti
ple o
se llama avidez. Singer y Campbell
analizaron la interaccin entre un anticuerpo y
un antgeno con un epitope repetido varias ve
ces. Llegaron a la conclusin de que la posibili
dad de interaccin mltiple sitios de combinacin-antgeno dependa del nm ero de esos
epitopes por unidad de antgeno. Ello les per
miti, para estos casos, expresar la ecuacin
= E Ko/n como representativa de la avi
dez, siendo F la valencia del antgeno y n el
nmero de sitios de combinacin de la molcu
la de anticuerpo interviniente.
Por este motivo puede ocurrir que anticuer
pos con valores de K q bajos determinados con
un hapteno tengan valores mayores cuando el
ligando es un antgeno. En algunos casos, esas
diferencias han llegado a ser 10.000 veces ms
efectivas.
Todo lo expresado est relacionado con el
estudio de las fuerzas que regulan la unin de
los complejos Ag-Ac o afinidad^ que no debe
confundirse con especificidad. Esta es mayor
para aquellos determinantes antignicos idnti
cos a los utilizados en la inmunizacin y dismi
nuye a medida que se diferencian. Determinan
tes antignicos con grupos compartidos pueden
dar reacciones cruzadas con los anticuerpos
o rig in ad o s p o r uno de ellos. In ic ia lm e n te
Landsteiner y posteriormente otros investiga
dores han efectuado experiencias bien demos
trativas sobre el particular (cap. 4).

159

Fig. 8-3.
A = inm ungeno.
B = ligando que d a reactividad cruzada d e tip o I.
C = ligando que da reactividad cruzada d e tip o II.
R = relacin B /F del ligando radioinarcado.
R o = lm ite de R, cuando la concentracin d e todo el ligan
do, incluido el trazador, se aproxim a a O (cero ).

Recientemente Berzofsky y Schetchter, utili


zando el radioinm unoanlisis de competicin
como mtodo analtico (vase cap. 38), han de
finido dos tipos de reacciones cruzadas. La del
tipo I es la originada por un ligando distinto del
usado en la inmunizacin, que reconoce al anti
cuerpo originado por ste, pero con menor afi
nidad. En este caso, las curvas de competicin
muestran que el segundo ligando puede llegar a
desplazar totalmente al trazador, pero con ma
yor consumo de antgeno que el correspondien
te al inductor de la respuesta inm une. Ello es
consecuencia de su menor afinidad (fig. 8-3).
La reactividad cruzada de tipo II tiene lugar
cuando en el suero en anlisis hay una mezcla
de anticuerpos originados por el antgeno in
ductor. En este caso, el segundo ligando slo
reconoce algunos de ellos y puede hacerlo con
una afinidad similar a la de! ligando original,
pero aunque se aumente su concentracin no
interacciona con los otros anticuerpos presentes
-q u e s reconocen al prim ero-, de all que el
desplazamiento del trazador no sea total.
La afinidad de un anticuerpo para dos deter
m inantes antignicos relacionados es mayor
para el homlogo, esto es, para el inductor de
ia respuesta inmune. Existen anticuerpos deno
minados heteroclticos, que tienen mayor afi
nidad de fijacin por antgenos relacionados
con el inmungeno que por ste.
Cuando un suero contiene anticuerpos de al
ta afinidad, stos pueden reaccionar con deter
minantes antignicos relacionados, cosa que
generalmente no ocurre con los de baja afini
dad. En efecto, un anticuerpo de este tpo, ca-

160

Aspectos bsicos de la inmunidad.

paz de dar una dbil reaccin visualizable con


su determ inante antignico especfico, no da
reacciones visibles con antgenos relacionados,
cosa que puede hacer uno de alta afinidad. Ello
significa que los sueros con anticuerpos de alta
afinidad pueden tener una especificidad menor
que los de baja afinidad, usados a la mism a
concentracin. El problema por lo general se
resuelve diluyendo convenientemente el anti
suero.

Al formarse los complejos antcuerpo-hapteno producen cambios de la energa libre estn


dar A F, que puede medirse a partir de K q de
acuerdo con la siguiente ecuacin:
(21 )

en la que R es la constante universal de los ga


ses (1,9871 cal/grado/mol) y T la temperatura
absoluta, que se obtiene sumando la temperatu
ra en "C a 273,15; In K q es el logaritmo natural
de Ko, que es igual a 2,303 log Kq. Se emplea
el signo menos (-) porque, por convencin, un
cambio negativo en la energa libre correspon
de a uniones positivas. De todo ello resulta
A F = 4,576 T = log K q

(I) A F" = -4,576 X 293,15 X 5 = ^6,7 Kcal/mol


(II) A F = -4,576 X 293,15 x 6 = -8,0 Kcal/mol
(III) A F" = -4,576 X 293,15 x 7 = -9,4 Kcal/mol
Ello indica que una diferencia de 100 veces
en la afinidad (anticuerpos I y III) significa una
variacin de AF en -2 ,7 Kcal/mol, prctica
mente la energa de algo ms de medio puente
de hidrgeno (4,5 Kcal/mol) o de dos interac
ciones inicas (1 a 2 Kcal/mol).
La entalpia A H puede calcularse haciendo
dos determinaciones de Kq a diferentes tempe
raturas, de acuerdo con la siguiente ecuacin:
Kn,

AH
(23)
2,303 R

2,303 R
log Ko2 - log Ko,
1

( t i)

A H>

A H

2,303 R

4,576

4,576 (log K 02 - log Kq,)


AH ------------------------------- ^----1

T,

T^

(24)

La entropa A S se calcula a partir de:


A F = A H - A S

(25)

de donde:
A S T = A H - A F
A H - A F
AS" = ---------------

(26)

(22 )

La ecuacin (22) es muy interesante, ya que


muestra que grandes variaciones de la afinidad
pueden significar muchas veces pequeos cam
bios de la energa libre estndar A F.
Si consideramos tres anticuerpos (I, II y III)
con valores de 10^ M *, 10' M ' y 10^ M ', res
pectivam ente, y la reaccin tu v iera lugar a
20C, los valores de A F seran:

log

AH / 1
log K ()2 - log Ko, =

TERMODINMICA
D E LA INTERACCIN
H A PT E N O -A N T IC U E R PO

A F = -R T In K,-o

en la que K q y
son las constantes de asocia
cin determinadas a las temperaturas absolutas
T, y T^ respectivamente.
Resolviendo la ecuacin (23) se obtiene:

D ET E R M IN A C I N DE
(CONSTANTE DE ASOCIACIN
INTRNSECA PROMEDIO)
Puede hacerse por equilibrio de dilisis, ex
tincin iquenching) de fluorescencia, polariza
cin de fluorescencia, por precipitacin con
sulfato de amonio de los complejos Ag-Ac for
mados, por ultracentrifugacin o filtracin por
geles, etc. La mayora de estos mtodos no ne
cesitan que el anticuerpo en estudio est purifi
cado, y usan para su anlisis suero entero o su
fraccin gam m aglobulnica. O tros, como el
quenching de fluorescencia slo pueden llevar
se a cabo con el anticuerpo aislado.
Equilibro de dilisis
Se funda en los siguientes hechos: si separa
dos por una membrana hemipermeable coloca
mos en un compartimiento de la cmara una
solucin de hapteno dializahle y en la otra el
anticuerpo no dializahle, despus de cierto
tiempo parte del hapteno que ha atravesado la
membrana se combinar con el anticuerpo, lle
gndose finalm ente a un estado de equilibrio
estable entre las concentraciones de hapteno li

Reaccin antgeno-anticuerpo in vitro

161

Anticuerpo

H apteno

Inicial

Final

F ig. 8-4. R epresentacin esquem tica de un equilibrio de dilisis.

bre de ambos com partim ientos (fig. 8-4). La


cantidad de hapteno com binado, de acuerdo
con la ley de accin de las masas que regula es
te equilibrio, depender de la concentracin de
hapteno colocado inicialmente en su correspon
diente celda. Es posible, mediante el empleo de
varios juegos de cmaras en las que se coloca
la misma cantidad de anticuefpo y cantidades
variables de hapteno en cada una de ellas, con
seguir diferentes estados de equilibrio en los
que el anticuerpo estar bloqueado por el hap
teno a distintos grados de saturacin. Si obteni
dos los estados de equilibrio se miden las con
centraciones de hapteno libre y combinado, se
podrn calcular los diferentes valores necesa
rios para la graficacin de los resultados y de
terminar K q = 1/c. La concentracin de hapteno
en la celda donde originariamente se la coloc
dar el valor de hapteno libre, mientras que la
concentracin de hapteno en la celda donde se
coloc el anticuerpo corresponder a hapteno
libre ms hapteno combinado. La concentra
cin de este ltimo se determina por diferencia
entre.los valores obtenidos.
P arte

e) Pequeas lm inas de papel celofn. Se


utilizan para separar los compartimientos de la
cmara y permitir el equilibrio. Antes de su uso
conviene lavarlas con agua destilada para eli
minar el apresto que pudieran contener.
f) Pipetas de 1, 2 y 10 mi.
g) Agitador adecuado.
h) Espectrofotmetro.
Mtodo
Armar las cmaras de dilisis. Para ello co
locar entre dos compartimientos una lam inilla
de papel celofn y unirlos mantenindolos fijos
mediante el ajuste de los correspondientes tor
nillos. Numerar las cmaras de modo que pue
dan ser identificados los diferentes com parti
mientos. En un compartimiento de cada una de
ellas colocar 2 mi de la solucin de anticuerpo
y en los restantes las diferentes soluciones de
hapteno, procurando que quede una burbuja de
aire para facilitar la agitacin. Cerrar las aber
turas de carga.

e x p e r im e n t a l

Material necesario
a) Anticuerpo antidinitrofenol purificado. Se
obtiene a partir de suero de ovejas inmunizadas
con gamm aglobulina humana dinitrofenoiada
(GGH-DNP). El mtodo de preparacin y las
indicaciones para la purificacin del anticuerpo
son los especificados en el captulo 44, Para el
ensayo se prepara una solucin 2,5 x 10"^ M
(3,75 mg mi *) en solucin salina fosfatada.
b) Hapteno. Se utiliza dinitrofenol disuelto
en solucin salina fosfatada. Para el ensayo se
preparan soluciones 1 x 10"^ M; 5 x 10 '* M; 2,5
X lO-'* M; 1 X lO-"* M; 5 x 10-^ M y 1,5 x 10- M,
c) Solucin salina fosfatada. NaCl 0,15 M,
fosfatos 0,01 M, pH 7,6.
d) Cmaras para equilibrio de dilisis. Pue
den usarse distintos modelos. Son muy tiles
las de acrlico que se muestran en la figura 8-5.

F ig. 8-5. Pequeas cm aras de acrlico, para eq uilibrio de


dilisis.

162

Aspectos bsicos de la inmunidad

C uadro 8-1. Resultados obtenidos p o r equilibrio de dilisis en la determinacin de la capacidad


de combinacin del anticuerpo con su hapteno especfico

H apteno libre

(c)

H apteno
com binado

H apteno
com binado

(h)

Cm ara

Anticuerpo

xia^M

X 10-^ M

X 70-5 M

2.5
2.5
2.5
2.5
2.5
2.5

0,18
0,50
1.65
4.66
8,50
31,60

1.95
2,80
3,50
3.95
4,75

anticuerpo
(r)

1,02

r/c

10* M-'
22,8

0,41
0,78

15,6
7,2
3
1,9

1,12

1,40
1,58
1,90

0,6

A n ticu e rp o an a liz ad o : Ig G l a n ti-D N P d e oveja; P .M .: 160.000; IO/e S


H a p te n o : D in itro fe n o l (D N P -O H ); P .M .: 184;
14.900.

lo g c

log r/n-r

-5 ,7 4 4 7
-5 ,3 0 3 6
-^ ,7 8 2 5
-4 ,3 3 1 6
-4 ,0 7 0 6
-3,5 0 0 3

-0 .5 8 5 0
-0 ,1 9 3 8
0.1038
0,3674
0,5712
1,2788

: 0,68.

D O (280 nm ) 0,68
C lcu lo d e la.s m olaridade.s: A n ticu e rp o

=
160.000

D O (3 6 0 nm )
14.900

Es necesario colocar como controles cma


ras que contengan solucin salina fosfatada y
hapteno (dosis media) y otra con anticuerpo de
especificidad diferente y hapteno. La primera
de ellas permite determinar si se ha logrado el
equilibrio (igual concentracin final de hapteno
en ambos compartimientos), y la segunda, si el
hapteno se ha fijado inespecficamente.
Todas las cmaras son colocadas en el agita
dor, que es puesto en funcionamiento. La agita
cin se mantiene durante 18 horas a temperatu
ra ambiente, tiempo suficiente para lograr los
equilibrios. Transcurrido el lapso, desobturar
ios compartimientos de las cmaras, retirar los
contenidos y determ inar la concentracin de
hapteno por lectura espectrofotomtrica de las
DO a 360 nm. Las lecturas de los contenidos
de los compartimientos en que inicialmente se
coloc el hapteno permitirn calcular el hapte
no libre, y las correspondientes a los comparti
mientos en que se ubic el anticuerpo, el hapte
no libre ms el hapteno combinado. Este lti
mo se calcular por diferencia entre ambas de
terminaciones.
Para transformar las DO (360 nm) en molari
dades, dividir las lecturas espectrofotomtricas
por 14.900 (E rom del dinitrofenol).
Conociendo las concentraciones de anticuer
po, hapteno libre y hapteno combinado calcular
las relaciones necesarias para graficar segn las
ecuaciones (11), (14) o (17) (cuadros 8-1, 8-2 y
8-3; figs. 8-],8-2A y8-2B ),
Si se dispone de hapteno marcado con -H y
espectrmetro de centelleo lquido para las lec
turas, el ensayo puede hacerse con cantidades
menores de anticuerpo (10 ^ M), ya que en este
caso las concentraciones de hapteno, que son
muy bajas y no pueden determinarse por espec-

trofotomctra, se calculan sobre la base del n


mero de c.p.m. de la solucin.
El equilibrio de dilisis no excluye la posibi
lidad de que el ensayo se efecte con suero to
tal o la fraccin globulnica precipitada con
sulfato de amonio al 50% de saturacin. En es
tos casos es necesario colocar controles para
establecer la fijacin inespecfica del hapteno,
que debe ser descontada para los clculos. Es
preferible usar las globulinas precipitadas por
el sulfato de amonio, dada la gran captacin de
dinitrofenol por la albmina, o en su defecto
usar otros haptenos, como la e-dinitrofenil lisi
na o el cido dinitrofenil e-aminocaproico, de
fijacin inespecfica mniina.

C u ad ro 8-2. Determinacin de la concentra


cin de anticuerpo en un suero mediante inte
raccin primaria anticuerpo-hapteno

N"

H apteno
libre
(c)
JO-I M

H apteno
com binado
(b)
10-'''M

]/c
W M -'

]/b
l(P M -i

1
2
3
4
5
6
7

1,14
1,64
2,38
2.94
5,26
7,14
10,12

1,10
1,60
1,99
2,40
4,31
4,75
5,81

0,87
0,61
0,42
0,34
0,19
0,14
0,10

90,90
62,50
50,24
41,55
23,15
21,03
17,20

M to d o d e m edicin de la in tera cci n prim aria; P rec ip itac i n c o n


s u lfato d e am onio al 50% d e satu ra ci n d e los c o m p lejo s an tic u e r
p o -h a p te n o form ados.
D iiuvenle; Ig G l d e o veja (20 m g m l') aislad a d e un suero norm a]
d e oveja, djlu id a 1:5 para .su uso.
H apteno; A cido d in itro fen il y-a m in o b u trico (D N P -G A B A ).
A ntisuero; A n ti-D N P d e o veja (ttulo ap ro x im a d o 4 m g ml'*)'
P M IgG ^ ONq-a = 1 6 0 k D .

Reaccin antgeno-anticuerpo in vitro

163

C uadro 8-3. Resultados obtenidos por extincin (quenching) de fluorescencia en la determina


cin de la capacidad de combinacin del anticuerpo con. su hapteno especfico

Hapteno
----------------------

nm ol

Lectura

Hapteno
Quench Quench comh.
Corree- Lectura
%
%
l(A e )x 2 x
cin p o r corre(Qmx (Qm x Quench.
volumen
gida
=100% ) = 7 8 % )
nm ol

100

100
0,01

0,02
0.03
0,04
0,05
0,06
0,07
0,08
0,09
0,10
0,12
0,14
0,16

0,20

0,25
0,50
0,75
1

1.25
1.50
1,75

2.25
2.50
3
3.50
4
5

91,7
84
77
59
63

5<

5!
46,5
46
44
40
38
37
35

0,5
0,8
1,2
1,4

1,6
1.7
1.8
1,9

2,5
2,9
3,2
3,7

92,2
85
78
70.5
64.5
57.7
52.8
48.5
48
46
42.5

41
40
39

O
7,8
15
22
29.5
35.5
42,3
47,2
51.5
52
54
57.5
59
60
61

O
10
19
28
38
46
54
60
66
67
69
75
76
77
78

0,23
0,44
0,65
0,87
1,05
1,24
1,38
1,51
1,54
1,59
1,72
1,75
1.77
1.78

Hapteno
Ubre
Hapteno
(c)
comh./Ac
nm ol
(r)

0,02

0,20

0,06

0,38
0,56
0,76
0.91
1,07

0,10
0,13

0,20
0,26
0,37
0,49
0,71
0,91
1,28
1,75
2,23
3,22

1,20
1,31
1,34
1,38
1,50
1,-52
1.54
1.55

r/n-r

0,11
0,23
0,38
0,61
0,83
1.15
1,50
1,89
2,03

2,22
3,0
3.16
3,34
3,44

r/c*
n m oles''

10,0
6,3
5,6
5.8
4.5
4.1
3.2
2.6

1.8
1,5
1,17

0,86
0,64
0,48

log
r/n-r

^0,959
-0,638
-0,420
-0,215
-0,081
0,60
0,176
0,276
0.307
0,346
0.477
0,499
0,524
0.536

log c

-1,699
- 1,222
-0,999
- 0,886
-0,699
-0,585
-0,432
-0,310
-0,149
-0,041
0,107
0,243
0,348
0,508

A n ticu e rp o Ig G l a n ti-D N P d e o v eja , 0,575 [xM (2 m i = 1 ,1 5 m |0,m ol); Q tnx = 7 8 % ,


H apteno: D in itro fe n o l (D N P -O H ), 25 |jM (25 m nm ol/nil).
P ara e x p re s a r K q en L /M , al v alo r de 1/c en n m oles- ' o b te n id o (en este ca so p re v ia m u ltip licac i n p o r 2 ya q u e se trabaj c o n 2 m i de
solucin d e a n ticu e rp o ) m u ltip licarlo p o r 10^

Extincin (quenching) de fluorescencia


Una protena irradiada con luz ultravioleta a
una longitud de onda correspondiente a su m
xima absorcin (280 nm) adquirir fluorescen
cia porque la energa absorbida es emitida co
mo luz de una m ayor longitud de onda (350
nm). El principal crom foro que acta como
absorbente es el triptfano. Si un hapteno se
une al sitio de combinacin del anticuerpo, par
te de la energa que debe ser em itida com o
fluorescencia por el triptfano puede ser trans
ferida al hapteno. Ello traer como consecuen
cia una dism inucin de la fluorescencia que
normalmente debe emitir la protena anticuer
po, que estar en relacin directa con la con
centracin de hapteno fijado. La mxima efec
tividad se obtiene cuando el hapteno absorbe
en la regin de la emisin de fluorescencia. El
mtodo resulta muy til para los anticuerpos
antidinitrofenol, pues sus haptenos (dinitrofe
nol, cido dinitrofenil e-aminocaproico, e-dinitrofenil lisina, cido dinitrofenil y-aminobutrico) tienen su mxima absorcin a 360 nm.
Para el empleo de este mtodo en los estu
dios sobre capacidad de combinacin del anti
cuerpo, es necesario saber cul es la extincin
(quenching) mxim a de fluorescencia que un
hapteno puede provocar sobre su anticuerpo es
pecfico. Este valor debe ser determinado expe
rim entalm ente para cada anticuerpo y su co
rrespondiente hapteno, aadiendo a una canti
dad conocida de anticuerpo exceso de hapteno,
de manera que su concentracin final sea no
menos de cien veces superior a la concentra

cin de anticuerpo, lo que asegura que en esas


condiciones prcticam ente todos los sitios de
combinacin del anticuerpo estn ocupados por
el hapteno. La mxima extincin de fluorescen
cia conseguida en esas condiciones constituye
el quenching mximo (Qmx) (fig. 8-6).
A diferencia del equilibrio de dilisis, slo
puede hacerse con anticuerpo purificado. Ade
ms no se puede determinar valencia, dato que
ha de conocerse previamente para poder efec
tuar los clculos.
P a rte

e x p e rim e n ta l

M aterial necesario

a)

Anticuerpo purificado. Solucin ap ro x i


madamente 1 |xM de anticuerpo bivalente
antidinitrofenol de oveja (IgGl).
Hapteno. Solucin de dinitrofenol aproxi
madamente 25 |iM.
Pipetas de 10 a.1,1 mi, 2 mi y 10 rnl.
Espectrofluormetro.

Mtodo
C olocar 2 mi de la solucin de anticuerpo en
la cuba del espectrofluorm etro, previam ente
calibrado y ajustar a 100% de fluorescencia.
Aadir 10 |il de hapteno, mezclar por rotacin
con una pequea varilla de vidrio con su extre
midad doblada en ngulo y leer. Continuar con
adiciones sucesivas de 10 )t1 de hapteno hasta
com pletar 150-200 xl, anotando el porcentaje
de fluorescencia de la mezcla despus de cada

164

Aspectos bsicos de la inmunidad

mi de DNP-OH 50 xM
F ig . 8-6. D eterm inacin dei Q m x para Ig G l de oveja anti-D N P. Cuando el anticuerpo est saturado por el hapteno slo
se consigue reducir la fluorescencia en un 78% (Qmx).

adicin. Con los resultados obtenidos, efectuar


los clculos, tenietido en cuenta para ello las
variaciones de volumen que ocurren despus
de cada adicin y el valor de la extincin mxi
ma de la fluorescencia o quenching mximo
(Qmx) para el anticuerpo y hapteno en estu
dio. El hapteno combinado se calcula multipli
cando el valor del quenching por 2 (anticuerpo
bivalente) y por la molaridad del anticuerpo de
ensayo, ello sobre la base de que el quenching
logrado est en relacin directa con la cantidad
de hapteno que se uni al anticuerpo. El hapte
no libre se determina por diferencia entre el to
tal de hapteno aadido y el combinado (vase
cuadro 8-3).
Precipitacin c o n s u lf a t o de amonio de los
complejos anticuerpo-hapteno formados
Si una mezcla de anticuerpo y hapteno des
pus que ha alcanzado el estado de equilibrio
es precipitada con sulfato de amonio al 50% de
saturacin, el hapteno libre quedar en el so
brenadante y el combinado en el precipitado.
Conociendo la concentracin de anticuerpo, la
cantidad total de hapteno aadida y la del so
brenadante, es fcil calcular hapteno libre y
combinado y las relaciones de ellos derivadas.
Si el ensayo se hace en una serie de tubos, para
una misma concentracin de anticuerpo y con
centraciones variables de hapteno, los resulta
dos obtenidos pueden graficarse.
Este mtodo puede utilizarse para anticuer
pos puros o antisueros sin purificar. En este l

timo caso es conveniente separar previamente


la albmina por precipitacin salina pues para
algunos haptenos, dinitrofenol en especial, tie
ne un marcado poder de fijacin inespecfico.
Puede usarse para ligandos de mayor tamao
siempre que no precipiten con sulfato de amo
nio al 50% de saturacin.
Para la descripcin del mtodo se usar sue
ro de conejo antidinitrofenol como fuente de
anticuerpo, y cido dinitrofenil e-aminocaproi
co como hapteno.
P a r te e x p e rim e n ta l

Material necesario
a) Suero de conejo normal (diluyente). El
suero de conejo no inm unizado es m ezclado
con un volumen igual de solucin saturada de
sulfato de amonio (760 g de sulfato de amonio
disueltos en 1.000 mi de agua destilada y ajus
tados a pH 7 con NaOH IN). Se deja a tempe
ratura am biente una hora y se cen trifu g a a
5.000 r.p.m. durante 30 minutos. Se elimina el
sobrenadante y se disuelve el precipitado en
NaCl 0,15 M en un volumen cinco veces supe
rior al inicial. Esta dilucin 1:5 de globulinas
normales es lo que se usa como diluyente.
En los casos en que el hapteno no se fije a
albmina, se emplea directam ente suero nor
mal de conejo diluido 1:5 en NaCl 0,15 M.
b) Suero para valorar o anticuerpo purificado
(antidinitrofenol). Si se tratara de anticuerpo
purificado, se prepara con l una solucin de 2

Reaccin antgeno-anticuerpo in vitro


mg/ml, usando como diluyente el indicado en
a). En el caso de sueros totales es conveniente
separar la fraccin globulnica y preparar con
ella una solucin diluyente 1:5, que contenga 2
mg-ml' de anticuerpo, determinados por curva
de precipitacin de acuerdo con las especifica
ciones del captulo 34.
c) Hapteno (cido dinitrofenil e-aminocaproi
co). Se preparan soluciones de distintas concen
traciones. Para la experiencia, usar las siguien
tes; l X lO^' M; 7 x 1 0 -5 M; 5 x 10 ^ M; 2,5
x 10-5 M; l x 10-5 M; 8 x 10-<> M y 5 x 10-^ M.
Las diluciones de hapteno se hacen en NaCl
0,15 M, fosfatos 0,01 M, pH 7,6.
d) Tubos de hemlisis.
e) Pipetas de 0,1, 1 y 5 mi.
f) Centrfuga; espectrofotmetro.
^
Mtodo
Numerar dos series de tubos del l al 7 (A) y
del r al 7 (B). A todos los tubos de la serie A
aadirles 0,5 mi de la solucin de anticuerpo, y
a los de la serie B, 0,5 ral de diluyente (suero
normal o fraccin globulnica normal 1;5). A
los tubos 1 y r agregar ) mi de la primera di
lucin de hapteno; a los tubos 2 y 2 1 ral de la
segunda y, de m anera similar, a los tubos si
guientes las restantes soluciones de hapteno.
Dejar en contacto a temperatura ambiente (o a
la deseada) por 30 minutos. Aadir a todos los
tubos 1,5 mi de solucin saturada de sulfato de
amonio y dejar a la misma temperatura durante
una hora. Centrifugar a 5.000 r.p.m. por 30 m i
nutos, separar los sobrenadantes y en ellos cal
cular las concentraciones de hapteno por lectu
ra de las DO a 360 nm. Las concentraciones
molares resultan de dividir las DO (360 nm)
por 17.800 (Efcm del cido dinitrofenil e-aminocaproico).

165

Los valores obtenidos con los tubos de la se


rie A corresponden a concentraciones de hapte
no libre y los de la serie B a hapteno total. El
hapteno combinado se determina por diferen
cia. Con los valores hallados se calculan las re
laciones (cuadro 8-4) y se grafica.
Al igual que para equilibrio de dilisis, el
empleo de haptenos marcados con tom os ra
d iactivos perm ite desarrollar el m todo con
concentraciones de anticuerpo diez veces infe
riores a las indicadas.
CLCULO DE K(), n, a, Ac
Ko puede calcularse a partir de cualquiera de
los valores graficados utilizando las ecuaciones
(11), (14) y (17). La eleccin depende de los
datos experimentales disponibles.
Si no se conoce la valencia ni la concentra
cin en anticuerpo de la muestra en estudio, el
clculo de Kq puede hacerse graficando l/b
versus 1/c (ecuacin 11) (fig, 8-1). En el punto
en que la curva intercepta a l/b , el valor sea
lado corresponde a la inversa de la concentra
cin de ligando monovalente que satura to tal
mente al anticuerpo. El doble de dicho valor es
la inversa de la concentracin de ligando cjue
slo satura el 50% de los sitios de com bina
cin. Buscando ese valor en el eje de las orde
nadas y trazando una perpendicular a l, sta
cortar la curva experimental en un punto. El
valor correspondiente de la inversa de la con
centracin de ligando libre (eje de las abscisas)
ser 1/c = Kq.
La graficacin de la figura 8-1 puede servir
tambin para establecer la concentracin total
de anticuerpo (Act) de la m uestra analizada,
sobre todo cuando se trata de anticuerpos de
muy baja afinidad que no dan uniones firm es
con el antgeno y resultan difciles de valorar

C uadro 8-4. Precipitacin con sulfato de amonio de los complejos form ados en la determinacin
de la capacidad de combinacin del anticuerpo con su hapteno especfico

N"
I
2
3
4
.5
6
7
8

Anticuerpo
xlO '> M
2 ,2 2
2 ,2 2
2^22
2 ,2 2
2^2
2 ,2 2
2,2 2

222

H apteno
total
X 10 ' M

H apteno
libre
(c)
X /0- M

1,63
2 ,5 2
3 ,9 3
4 ,9 2
5 ,4 7
6 .2 9
8,2 5
11,69

0,1 3
0,41
1,01
1,70
1,59
2 ,5 5
4 ,3 7
7 ,5 2

H apteno
H apteno com binado
com binado
anticuerpo
X 10-''
M
(r)
1,50
2,11
2 92

X22
3 ,8 8
3 ,7 4
3 ,8 8
4 ,1 7

0 ,6 7
0 ,9 5
1,31
1,45
1,74
1,68
1,74
1,87

r/c
xW
M'i
51
23
13
12
11
6 ,2
3,9
2.4

r/n-r
0 ,5 0
0 ,9 0
1,89
2 ,6 3
6 ,6 9
5 ,2 5
6 ,6 9
14,3

log r/n-r

log c

^ 0 ,3 0 1
- 0 ,0 4 6
0 ,2 7 6
0 ,4 2 0
0 ,8 2 5
0 ,7 2 0
0 ,8 2 5
1,155

- 0 ,8 8 6
- 0 ,3 8 7
0 ,0 0 4
0 ,0 7 9
0 ,2 0 1
0 ,4 0 6
0 ,6 4 0
0 ,8 7 6

A nticuerpo an a liz ad o : IgG 2 a n ti-D N P p re cip ita n te d e oveja.


H apteno: ^H D N P^G A B A
= 17.500).
L as m olaridades d e h ap te n o en los tubo,; de re acc i n fueron c a lc u la d o s por co n v e rsi n d e c.p.m . en JM, co n o c ien d o la re la ci n M /c.p .m . d el
h ap te n o aadido.

1 (56

Aspectos bsicos de la inmunidad

por otros procedimientos especficos. Cuando


la curva experimental intercepta a I/b, el valor
de la ordenada al origen corresponde a la inver
sa de la concentracin de anticuerpo total [1/
Act, ecuacin (11)]. Para determinar esa con
centracin hay que tener en cuenta que los va
lores de la grfica para 1/b corresponden a li
gando monovalente (moles.litro '), y que por lo
tanto debe considerarse la concentracin de an
ticuerpo expresada en sitios de combinacin,
cuyo PM es de 75 kD (si el anticuerpo es IgG).
Para el caso de la figura 8-1, la curva intercepta
a 1/b en el valor 8,4 x 10'' M ', cuya inversa
equivale a la concentracin de sitios de combi
nacin del anticuerpo, igual a 0,19 x 10 ' M. Si
se considera para cada sitio de combinacin un
PM de 80 kD (IgGl de oveja, PM = 160 kD),
la concentracin de anticuerpo en la m ezcla
analizada ser de 0,95 mg.mk'.
Cuando la concentracin de anticuerpo es
conocida, no as su valencia, K q puede ser de
terminado graficando r/c versus r (fig. 8-2A),
recordando que para el valor r = 1 (mitad de los
sitios de combinacin de un anticuerpo biva
lente ocupados por el hapteno), r/c = 7/c, que
por definicin es igual a K q. Levantando una
perpendicular a r en el punto equivalente a la
mitad de la saturacin (en este caso r/2 = 1), el
valor de r/c correspondiente a la interseccin
de dicha recta con la curva graficada con los
valores experimentales ser i/c == Kq.
Cuando el valor de r/2 es diferente de 1, para
obtener el valor de K q el resultado experimen
tal hay que dividirlo por r/2. Si la curva hubie
se interceptado a r = 2,4, el valor de r/2 sera
1,2. Si para ese valor el resultado experimental
fuera r/c = 8 x 10'' M ', para transformarlo en
]/c es necesario dividirlo por 1,2. En este caso,
Ko = 1/c - 8/1,2 X 105
= 6,6 x 10= M >.
Por este procedimiento es posible, adems,
calculu' (valencia o nmero mximo de mo
lculas de ligando monovalente que se fijan por
molcula de anticuerpo), ya que en el punto en
que la proyeccin de la curva experimental in
tercepta a r corresponde al valor r/c - O y r oo, o sea aquel en que el anticuerpo est total
mente saturado por el ligando. Que r = n s t de
duce de la ecuacin:

cuando

luego r K = n K y por lo tanto r

Esta graficacin perm ite tam bin calcular


Kav o constante de afinidad media pesada o
ponderada, que corresponde al promedio de

las afinidades pesada o ponderada por la. con


centracin de los anticuerpos con cada afini
dad. La pendiente de la recta que une los pun
tos en que la curva intercepta a r/c y r constitu
ye Kav, y experimentalmente se calcula deter
minando el cociente entre esos dos valores de
r/c y r.
Si Kq se calcula graficando log r/n-r versus
log c (fig. 8-2B), para lo cual es necesario co
nocer previamente la valencia y concentracin
del anticuerpo en anlisis, cuando r/2 = 1 (mi
tad de los sitios de combinacin saturados), log
r/n-r = 0. Trazando una perpendicular a log r/
n-r en el valor O, dicha recta cortar a la traza
da con los valores experimentales, lo que per
mitir determinar el log c en ese punto. Con
ese dato se calcula c, y 1/c = K(>.
La graficacin de Sips (fig. 8-2B) permite
adems calcular a o ndice de heterogeneidad
de los anticuerpos. Dado que ste no es ms
que el valor de la pendiente de la recta grafica
da, puede hallarse determinando
A y

----- = a
AX
El valor a puede tambin calcularse a partir
de la ecuacin (16) o de la siguiente:
(27)
Act Kc

Act

deducida a partir de la (7), pero adaptada para


un sistema policlonal, elevando K y c a la po
tencia a, y con la nomenclatura utilizada en la
ecuacin (11)
Los estudios de interaccin primaria liganteligando pueden servir tambin para determinar
el nmero de receptores y determinantes anti
gnicos existentes en una membrana celular,
as como su constante de afinidad. En estos ca
sos, la graficacin que mejor resulta es l/b ver
sus 1/c (fig. 8-1), derivada de la ecuacin de
Langmuir adaptada (11).
1

L.K.c.

donde L es el ligante, b y c las concentraciones


de ligando combinado y libre, respectivamente.
Si se quiere determinar, por ejemplo, el n
mero de receptores para Fe en la superficie de
un eritrocito, es necesario hacer interaccionar
cantidades iguales de una suspensin de un n
mero conocido de clulas mh* con el ligando
especfico (en este caso gM monomrica mar
cada con
= ^^'LIgM.7S) a concentracio
nes variables. Transcurrido el tiempo suficiente
para que la reaccin se equilibre se centrifugan
los tubos y se determina la radiactividad del so

Reaccin antgeno-anticuerpo in vitro


brenadante (ligando libre = c) y del sedimento
(ligando combinado = b), las que se transfor
man en molaridades conociendo previamente la
relacin c.p.m./concentracin molar del ligan
do usado. Con los resultados obtenidos se gra
fica 1/b versus 1/c y la curva obtenida, linearizada por anlisis regresivo o por el mtodo de
los cuadrados mnimos, es extrapolada hasta
interceptar 1/b. Este valor corresponde a la in
versa de ligando combinado ('^'I.gM.7S, PM =
180 kD ), que satu ra to talm en te al lig an te
(FcR), y con los datos obtenidos se calcula la
concentracin molar del ligando y el nmero
de moles en el volumen usado. Asumiendo que
a cada FcR se une una molcula de ^LIgM.7S,
multiplicando los moles fijados por 6,02 x 10^^
(nmero de Avogadro) se obtiene el nmero de
molculas fijadas por la totalidad de las clulas
reaccionantes cuando el ligante est saturado,
valor que equivale al nmero total de FcR exis
tentes. Dividiendo ese valor por el nmero de
eritrocitos usados en el ensayo se obtiene el n
mero de FcR por clula.
Por este procedim iento hemos podido de
mostrar que la densidad de receptores hemti
cos para Fe por clula es 1,2 x 10^ en los eritro
citos de carnero y 1,2 x 10^ en los de pollo.
Los valores de la constante de afinidad entre
ligante y ligando se calculan en la forma ya in
dicada (fig. 8-1).

-t- B
F Ka
La capacidad fijadora de antgeno ,

(28)
[H] [S]
Si sustituimos [HS] por B (ligando unido o
bound y [H] por F (ligando libre o fre e ), la
ecuacin (28) puede escribirse
Ka

So - B

(31)

ABC puede expresarse tambin en trminos


de sitios de fijacin:
So (no diluido)
ABC = -------- ------------- B
So

(32)

donde So (no diluido) es la concentracin total


de sitios de combinacin en el suero sin diluir y
So la concentracin total de sitios de combina
cin en la dilucin del suero en la que B sitios
estn combinados; es decir.
So (no diluido)
So

1
dil. suero

Se ha observado que la ABC de u n suero,


medida a diferentes concentraciones de ligando
total, est relacionada con la avidez de los anti
cuerpos contenidos en ese suero. Para deducir
una expresin que describa esa relacin, se ha
definido un nuevo trmino;
ABCx
(33)

en la que ABCi es la capacidad de fijacin de


antgeno con una concentracin total de ligan
do referida com o concentracin n d ice (i) y
ABCx es la capacidad de fijacin de antgeno
con una concentracin de ligando diferente, ge
neralmente menor, llamada concentracin en
anlisis o experimental (x).
Sustituyendo en la ecuacin (33) los equiva
lentes de la (32), resulta;
So (no diluido)
-----^-------------- B (x)
So (x)
So(i) B(x)
R = .---------------------------- = --------------- (34)
So (no diluido)
Sox) B(i)

Usando ia expresin (30), la ecuacin (34) pue


de escribirse;
[(B/F)i (1/Ka) 4- Bi] Bx
R =
^--------- ^------------- (35)
[B/F)x (1/Ka) + Bx] Bi

(29)

La concentracin de [SJ libres es igual a la


concentracin total de So menos la concentra
cin de sitios combinados B, luego [S] = So - B.
La ecuacin (29) puede reordenarse para re
solver So

(30)

1
ABC = ------------ B
dil. suero

R =

jHS]

So =

Capacidad fija d o ra de antgeno

En 1975, W. E. Paul y G. J, Elfenbein des


cribieron un mtodo que permite calcular afini
dades relativas, utilizando la tcnica de Farr de
precipitacin con sulfato de amonio. En los en
sayos tipo Farr, los resultados generalm ente
son expresados en trminos de capacidad fija
dora de antgeno o ABC {antigen binding ca~
pacity).
Cuando un hapteno H interacciona con un
anticuerpo que tiene S sitios de combinacin
con el ligando y el sistema se equilibra.

167

de donde
(B/F) X Bi - (B/F)i Bx
Ka =
--------- ^ ^ ------(36)
(l-R )B i Bx

168

Aspectos bsicos de la inmunidad

La expresin (36) permite calcular Ka sin re


querir el valor de la concentracin de los sitios
totales (So).
Para estas determinaciones de afinidades re
lativas, es conveniente comparar slo ABC ob
tenidos cuando el 33% del ligando est unido
(ABC33), en cuyo caso B/F 0,5. En estas con
diciones, la ecuacin (36) se simplifica:
Ka =

R B i-B x
2(1 -R ) Bi Bx

(37)

Es conveniente sealar que Ka (37) corres


ponde a la afinidad relativa Kr o Ka 33%, lo
que no significa Ko o constante de asociacin
intrnseca mediana.
Parte experimental:
10 jj,l de ligando especfico radioisotpieamente marcado, a concentraciones 10 M (con
centracin ndice) y 10 M o 10 M (concen
tracin experimental) se mezclan con 10 |u,l de
diluciones seriadas del antisuero. Las mezclas
se dejan 30-60 minutos a 4C y se les aade a
cada una de ellas 20 [xl de solucin saturada de
sulfato de amonio. Se incuba 30 minutos a 4C,
se centrifuga a 2.500 r.p.m. por 30 minutos a la
misma temperatura. En 20 jul de los sobrena
dantes (si el radioistopo em ite radiaciones
gamm a) o en las m ism as cantidades p revia
mente mezcladas con 6 ml de Aquasol (si el ra
dioistopo emite radiaciones beta) se mide la
radiactividad, utilizando en cada caso el conta
dor de radiaciones correspondiente.
Se incluye una serie testigo en la que el anti
suero es sustituido por suero normal de la mis
ma especie.
El porcentaje de ligando unido se define co
mo:

100- 100

APENDICE
Cuando para estudios de interaccin prima
ria se grafican resultados, en especial ///? ver
sus 7/ t', muchas veces resulta difcil trazar la
lnea que une esos puntos experimentales. Co
mo la ecuacin matemtica que representa a di
cha curva es y = a + bx, puede lograrse el traza
do de una lnea corregida mediante la aplica
cin de anlisis regresivo, o bien, por el mto
do de los cuadrados mnimos.
Tomemos como ejemplo el cuadro 8-2 y la
curva resultante de la graficacin de dichos da
tos experimentales (fig. 8-2). En ella x = 1/c, y
= I/b, siendo N = nmero de determinaciones.
Para dichos datos experimentales
S X = 2,67
E x2 = 1,4867
x = 0,38
(Ex)2 = 7,13
Exy =159
N=7
Conociendo las varianeias (S^) de x e y, y la co
variancia, esos datos pueden ser computados y
usados luego para la elaboracin de la recta.
/
(2 x)2 \
S2(x) =
(z x = - - - ) = 0 .0 *
N -l
1

La dilucin de anticuerpo requerida para tal


unin (ABC33) se determina experimental mente
graficando porcentaje de ligando fijado con
tra logaritmo de la dilucin del suero . Ello
permite determinar

dil.

y con los resultados obtenidos calcular R de


acuerdo con la ecuacin (33) y Ka mediante la
ecuacin (37).

(Z y f \
\ = 705

S 2 ( y ) = ------ / X y 2 ---- ^

N-l
Covariancia (xy) =

N -l
g

< radiactividad del sobrenadante '


en presencia de antisuero
radiactividad del sobrenadante
\ en presencia de suero norm al ,

Zy = 304
Sy^ = 17.384
y = 43,39
(Ey)2 = 92,416

X )( y)

N
El coeficiente de correlacin r =
covariancia (xy)
~ 1 s (X )

Siendo S (x) =

S (yT

(x) y S (y) =

= 0,97

(y )

El resultado obtenido es un buen valor para


una correlacin ya que r est matemticamente
restringido a estar situado dentro del rango -1 a
-1-1. La ecuacin de la lnea regresiva de la figu
ra 8-1 es
y = a + bx

Reaccin antgeno-anticuerpo in vitro


covariancia (xy)
b = ---------------- ^
=91,3
(X )

siendo:
a = y - bx = 8,7
por lo tanto, la ecuacin que m ejor une los
.puntos experimentales de la figura 8 -1 es
y

= 8,7 + 91,3

Para dos diferentes valores de ;c, dentro de la


escala de la grfica, se obtienen otros tantos va
lores de y, con los que puede trazarse la recta
deseada. Ello puede lograrse tambin calculan
do un solo valor de 3; para determinado valor de
X ya que el otro punto de la recta sera a pues
sta es la ordenada al origen. La recta que une
los puntos experimentales de la figura 8 - 1 lia
sido trazada con los valores antes indicados.
Otro mtodo que puede usarse para hallar los
valores de a y > en la ecuacin (28) es el de los
cuadrados mnimos. En este caso se determinan
de la siguiente manera:
Z x^ Ey ^ Lx i: xy
N x 2 ^ (X x y
b =

N 2 : xy - E X E y
N E x2 - (E

X) 2

ALGUNAS R EA C C IO N ES
DE INTERACCIN PRIMARIA
USADAS PARA LA D ET E C C I N DE
ANTGENOS Y ANTICUERPOS
En los ltimos 25 aos se han descrito una
serie de mtodos de interaccin primaria para
la deteccin de antgenos y anticuerpos, de
gran sensibilidad y marcada especificidad, en
tre los que merecen destacarse el radioinm u
noanlisis, el enzimoinmunoanlisis, la inm u
nofluorescencia y, muy recientemente, el inm u
noanlisis por quimioluminiscencia. Por regla
general se designan con siglas: RIA (radioinmunoanlis; IRMA (anlisis radioinm unom
trico); ELISA (anlisis con reactivo inm une
marcado con enzima); IF (inmunofluorescencia
directa); IFI (inm unofluorescencia indirecta).
Algunas de estas tcnicas han sido modificadas
y no obstante constituir simples variantes de
ellas, se han usado siglas para su identificacin,
las que muchas veces se prestan a confusiones.
Todas ellas se caracterizan porque la identi
ficacin del antgeno o del anticuerpo tiene lu
gar por una interaccin simple, sin la participa
cin de fenmenos asociados, como ocurre en
las reacciones de interaccin secundaria.

169

INMUNOFLUORESCENCIA (IF)
Los mtodos serolgicos comunes resultan
inapropiados para investigar la presencia de an
tgenos en la superficie de clulas, bacterias y
parsitos, as como su distribucin, o cules
son las clulas comprometidas en la biosntesis
de los anticuerpos.
Para estas investigaciones, as como para la
identificacin de microorganismos en m ateria
les infectados y algunas reacciones antgenoanticuerpo desarrolladas con cantidades m ni
mas de reactivos, ha sido descrito un m todo
de alta sensibilidad y que ha permitido resolver
problem as insolubles hasta el momento. L la
mado inmunofluorescencia, se basa en el em
pleo de anticuerpos marcados con sustancias
fluorescentes como el isotioeianato de fluores
cena o lisamina-rodamina. Estas sustancias, al
ser excitadas eon longitudes de onda del rango
ultravioleta, emiten luz de mayor longitud, la
que se demuestra por fluorescencia am arilloverdosa o anaranjadorrojiza, respectivamente.
La inmunofluorescencia puede ser directa o
indirecta. En el primer caso lo que se m arca es
el anticuerpo que habr de interaccionar direc
tamente con el antgeno. En la forma indirecta
se emplea como reactivo marcado un suero angam m aglobulina (contra la gam m aglobulina
de la especie animal de la que proviene el anti
cuerpo). Se lo hace actuar sobre el com plejo
antgeno-anticuerpo no marcado que ha reac
cionado en una primera etapa.
La metodologa consiste en colocar sobre un
portaobjetos el material que contiene el antge
no para analizar. En la tcnica directa, ste se
cubre con el antisuero marcado con fluorescena y, despus de lavado para eliminar el m ate
rial fluorescente no fijado especficamente, se
hace la observacin microscpica, utilizando
una fuente de luz ultravioleta y los filtros ade
cuados. Cuando se emplea la tcnica indirecta,
lo que se aade al portaobjetos que contiene el
m aterial antignico es el antisuero especfico
sin marca. Luego de cierto tiempo de contacto
el preparado se lava, se cubre con suero anti
gammaglobulina marcada, se deja reaccionar y
se lava nuevamente. Se observa con el m icros
copio en la forma ya descrita. En el prim er ca
so, si el antgeno ha fijado el anticuerpo con
marca, el complejo emite fluorescencia. En el
segundo caso, el antgeno fija el anticuerpo sin
marcar, pero sobre ste se acopla la antigam
maglobulina marcada, que es la que emite fluo
rescencia (figs. 8-7 y 8 - 8 ).
C om o en toda reaccin inm unolgica, son
necesarios controles adecuados. El tratamiento
previo del material antignico con antisuero es
pecfico sin marcar debe inhibir la fijacin del
mismo anticuerpo con marca y, por otra parte.

170

Aspectos bsicos de la inm unidad


Fig. 8-7. In m u n o flu o re s c e n c ia
d irecta e i,udicecta.

Anticuerpo
marcado

Antgeno
sin marca

Complejo
Ag-Ac marcado

I: Esquema de reaccin de inmunofluorescencia directa

Primera etapa

Anticuerpo
sin marca

Antgeno
sin marca

Complejo Ag-Ac
sin marca

Segunda etapa

^\U/, si/-4;
~Vs'*
Complejo Ag-Ac
sin marca

'/ a''
Complejo Ag-Ac
marcado

Anticuerpo marcado
(antigammaglobulina)

II; Esquema de reaccin de inmunofluorescencia indirecta

la adicin de antgeno soluble en exceso al an


ticuerpo marcado debe inhibir su fijacin pos
terior al antgeno fijado al portaobjetos.
Se obtiene un buen reactivo cuando el anti
cuerpo ha fijado dos o tres grupos fluorescentes
por molcula. Si est muy marcado puede teir
inespecficamente tejidos. Para reducir al mni
mo este inconveniente, y con el objeto de eli
minar la mayor parte de la protena muy mar
cada, es necesario filtrar por Sephadex G-25,
resinas intercam biadoras o adsorber el suero
con polvo de tejidos, en especial hgado de ra
tn desecado con acetona. Si el suero tiene un
alto ttulo de anticuerpos (3-5 mg/ml), la dilu
cin para su uso minimiza las tinciones inespe
cficas.
La inmunofluorescencia ha sido muy utiliza
da, sobre todo para la investigacin rpida y es
pecfica de agentes infectivos en m ateriales
sospechosos. Empleando anticuerpos con mar
cas diferentes, ha sido posible investigar ms
de un antgeno en un mismo preparado micros

cpico. E sta m etodologa es la que provey


una de las evidencias de que las clulas plas
mticas son las principales elaboradoras de los
anticuerpos, y que en los linfocitos B existen
inmunoglobulinas de superficie.
De las tcnicas descritas, la directa tiene el
inconveniente de que debe disponerse de anti
cuerpo m arcado con especificidad para cada
antgeno. La indirecta, en cambio, solamente
utiliza antigammaglobulina marcada con fluo
rocromo.
Para detalles metodolgicos vase el captu
lo 34.
RADIOINMUNOANLISIS (RIA)
Y A N LISIS RADIOINMUNOMETRICO
(IRMA)
La cuantificacin de pequeas cantidades de
antgenos, no detectables por los mtodos con
vencionales, puede lograrse sin inconvenientes

Reaccin antgeno-anticuerpo in vitro

171

Big. 8-8. Epim astigotes de T ripanosom a cruzi,


visualizados por inm unofluorescencia indirecta.

si estn marcados con tomos radiactivos. M e


diante su em pleo ha sido desarrollado el ra
dioinmunoanlisis, mtodo sensible y especfi
co, muy utilizado sobre todo en endocrinologa
para Ja cuantificacin de hormonas peptdicas.
Se ha usado tambin con xito en estudios de
interaccin hapteno-anticuerpo y en el anlisis
de hormonas esteroides.
El hecho ms significativo del radioinm u
noanlisis es el de que utiliza una marcacin
radioisotpica para discriminar entre antgeno
unido al anticuerpo y antgeno libre. El radioi
stopo es un tomo inestable que se va desinte
grando y em ite partcu la s subatm icas y/o
energa en la forma de radiacin, que pueden
ser medidas en aparatos apropiados. Cada is
topo radiactivo tiene una vida media (t 1/2) es
pecfica, factor limitante para su uso en algu
nos casos. Los tomos radiactivos ms utiliza
dos con 3H (t 1 /2 = 1 2 aos), '^'C (t 1/2 = 5.730
aos), 57Co (t 1/2 = 270 das),
(t 1/2 = 60
das),
(t 1/2 = 8 das); la energa emitida es
t constituida por radiaciones P en los dos pri
meros y Y en los restantes.
El marcado de los antgenos con radioisto
pos puede hacerse por diferentes mtodos.

Para la separacin del antgeno libre y com


binado, valores que se usarn para las graficaciones, pueden emplearse mtodos fisicoqumi
cos como la electroforesis, adsorciones cromatogrficas, resinas intercarabiadoras, filtracin
por geles, precipitacin salina o con polietilen
glicol, etc., o mtodos inmunolgicos mediante
el em pleo de un anticuerpo con especificidad
para la especie animal del anticuerpo q u e en
prim era instancia reaccion con el antgeno
(mtodo del doble anticuerpo).
Uno de los radioinmunoanlisis ms utiliza
dos es el de competicin que se basa en el si
guiente principio; si a una serie de tubos que
contienen una mezcla de anticuerpo y antgeno
radiactivo en cantidad suficiente para saturar el
50% de los sitios de combinacin, se le aade
cantidades crecientes de antgeno sin m arca,
habr competicin por la ocupacin de esos si
tios. Se producir una cada secuencial del ant
geno marcado combinado a lo largo de la serie.
Con los datos obtenidos puede graficarse ant
geno marcado combinado (escala lineal) versus
antgeno sin marcado aadido (escala lo gart
mica). Dentro de cierto rango, la curva regresi
va es lineal, lo que permite por interpolacin de

172

Aspectos bsicos de la Inmunidad

los resultados obtenidos en un ensayo similar


con un antgeno sin marca, de concentracin
desconocida, hacer su cuantificacin.
El anlisis radioinm unomtrico (IRMA), o
inmunoanlisis utihzando anticuerpo marcado
con un tomo radiactivo, es cada vez ms utili
zado y con frecuencia es ms sensible y espec
fico que el RIA. El fundamento es similar al
del RIA, pero invariablemente usa una tcnica
. de separacin en fase shda del anticuerpo li
bre, para discriminar entre ste y el anticuerpo
unido al ligando. En este ensayo, la cantidad de
antgeno es medida en funcin de la cantidad
de anticuerpo marcado que se ha unido. Para
ms detalles sobre el tema vase el captulo 38.
ENZIMOINMUNOANLISIS
(ELISA)
La histoqum ica ha provisto los principios
que han servido de base para el desarrollo de
una nueva metodologa inmunolgica, la inmu
noenzimologa, que en forma directa o indirec
ta permite identificar antgenos. Los fundamen
tos son similares a los de la inmunofluorescen
cia, de la que se diferencia en que emplea anti
cuerpos (mtodo directo) o antigammaglobuli
na (mtodo indirecto) marcados con una enzi
ma capaz de desarrollar una reaccin colorea
da. La enzima usada con ms frecuencia para el
marcado es la peroxidasa y el sustrato la o-fenilendiamina y H , 0 2 .
A provechando la propiedad que tienen las
protenas de adsorberse a pH 9-10 a tubos, es
feras, discos o concavidades en placas de pls
tico (poiiestireno y polipropileno), se han desa
rrollado mtodos de ELISA que perm iten la
cuantificacin de pequeas cantidades de ant
genos, con una sensibilidad prxim a a la del
RIA, y tiene la ventaja de no tener que usar
m aterial radiactivo ni aparatos especiales de
medicin de radiactividad.
El m todo puede desarro llarse fijando al
plstico cantidades limitantes de anticuerpo, el
cual se hace interaccionar con diferentes con
centraciones del antgeno que se ha de valorar
y la cantidad adecuada del m ism o antgeno
marcado con la enzima. La fijacin de sta es
tar en proporcin inversa a la del antgeno no
marcado. Existiendo una fase slida que retiene
al antgeno combinado, la discriminacin entre
ste y el antgeno libre, ser fcil, datos funda
mentales para la graficacin y cuantificacin.
El ELISA puede hacerse tambin con anti
cuerpo al que se ha fijado la enzim a o anti
gammaglobulina (segundo anticuerpo) marca
da. En el primer caso, a cantidades variables
de antgeno fijadas al plstico se le aaden
concentraciones constantes de anticuerpo enzi

ma marcado. Por lavado se elimina el anticuer


po que no se fij, y el anticuerpo fijado se de
tecta aadiendo el sustrato correspondiente,
que desarrollar color en forma proporcional a
la de anticuerpo presente. Como en la inmunofluorescencia indirecta, el ELISA puede desa
rrollarse usando antigammaglobulina contra la
especie animal a la que pertenece el anticuerpo
usado en la primera etapa, hecho que lo hace
ms general y evita el uso del antisuero espec
fico marcado para cada una de las oportunida
des. En este caso se fijan al plstico diferentes
c o n cen tracio n es de antgeno que se hacen
reaccionar con anticuerpo especfico sin m ar
ca. D espus de lavar se aade la correspon
diente antigammaglobulina marcada con la en
zima, y transcurrido el tiempo conveniente y
luego de lavar se adiciona el sustrato adecuado
para el desarrollo de color y lectura de los re
sultados.
Para detalles tcnicos vase el captulo 37.
INMUNOANLISIS CON REACTIVOS
M ARCADOS CON SUSTANCIAS
LUMINISCENTES
La luminiscencia es un fenmeno similar al
de la fluorescencia. La diferencia radica en que
en la fluorescencia la energa excitante es luz
ultravioleta, mientras que en la luminiscencia
es provista por una reaccin qumica.
Existen dos tipos de luminiscencia. La bioluminiscencia es una reaccin en la que parti
cipa un organismo viviente, tanto del reino ani
mal como vegetal. Lo hacen a travs de un sis
tema enzimtico, el de la luciferasa. Algunas
luciferasas son especficas para el ATP, casi
siempre con produccin de un fotn por cada
molcula de TP que reacciona. Otras lucifera
sas, especialmente las de origen bacteriano, son
menos eficientes y tienen especificidad para
NADH o NADPH. La reaccin de quimioluminiscencia produce luz a partir de reacciones
qumicas simples, que involucran la accin del
oxgeno o de perxidos en la oxidacin de sus
tratos orgnicos. Como consecuencia de la ex
citacin, algunas molculas del sustrato lumi
n iscente em iten fotones m ientras que otras
emiten calor. Los sistemas ms eficientes son
aquellos en los que la emisin de fotones es
mxima. En los sistemas bioluminiscentes, esa
eficiencia puede variar entre un 10% y un 90%,
m ientras que en los quim iolum iniscentes los
valores oscilan en alrededor del 1%.
Recientemente se han desarrollado mtodos
de inmunoanhsis que utilizan este principio,
especialmente la quimioluminisceneia por ser
de menor costo, no obstante la mayor eficien
cia de los sistemas bioluminiscentes.

Reaccin antgeno-anticuerpo in vitro

173

Biotina
Ac

F ig . 8-9. Inm unoanlisis po r form acin de com plejos avidina-biotina.

Una de las reacciones de quimioluminiscencia ms estudiada es la produccin de luz por el


lum inol en presencia de perxidos, reaccin
que requiere pH alcalino y algunos metales o

heminas como catalizadores. La reaccin pue


de ser catalizada tambin por peroxidasa a pH
neutro.
La luz producida puede ser medida y su in

174

Aspectos bsicos de la inmunidad

tensidad depende de la cantidad de sustancia


lum iniscente presente. Si el lum inol u otras
sustancias quimioluminiscentes como el isoluminol, pirogalol, derivados del luminol y steres ele acridinio, entre otras, son unidas cova

lentem ente a antgenos o anticuerpos, estos


productos pueden ser usados para inmunoanli
sis de quimioluminiscencia.
La reaccin de quimioluminiscencia del lu
minol es la siguiente;
O
II
C O-

NH
- Luz

+ 2 H ,0 , + OH---------

ilH

^ ^

catalizador

X mx. 430 nm)

C O'
NH.,

NH,

O
Luminol

FORMACION DE COMPLEJOS
AVID IN A-BIOTIN A
La avidina es una glucoprotena que fija la
biotina con una unin de muy alta afinidad (K^
= 10^-^ M). Ambos reactivos pueden ser fijados
en forma covalente a anticuerpos, antgenos,
enzimas, sustancias fluorescentes, clulas, etc.,
productos que pueden obtenerse en el com er
cio. Esto ha hecho que la formacin del com
plejo avidina-biotina sea usado con buenos re
sultados en estudios de interacciones anticuer
po-ligando, facilitando el desarrollo de enzi
moinmunoanlisis, radioinm unoanlisis, estu
dio de interacciones antgeno-anticuerpo a n i
vel celular, etctera.
La biotina es un factor soluble del complejo
vitamnico B y acta como coenzima de enzi
mas involucradas en mecanismos de carboxilacin. Se puede copular fcilmente a anticuer
pos o enzimas sin prdida de su actvidad. Esta
unin, de tipo covalente, se produce entre el
grupo carboxilo de la biotina -p rev ia activa
cin- y los grupos amino libres de las prote
nas.
La avidina, compuesto proteico de la clara
de huevo, es muy estable y presenta varios si
tios de unin por lo que puede actuar como
puente entre dos molculas biotiniladas o unir
se covalentemente a enzimas formando un con
jugado capaz de reaccionar con anticuerpos o
antgenos biotinilados.
Los enzimoinmunoanlisis que aprovechan
la formacin del complejo avidina-biotina ge
neralmente se desarrollan fijando el anticuerpo
especfico sin marca a una fase slida. Despus
de interaccionar con su correspondiente antge
no el complejo se lava y se le aade el mismo
anticuerpo al que previamente se le ha fijado

a-aminoftaiato
+ N ,+ 3H ,0

biotina covalentemente. Despus de producida


la reaccin se lava y se aade avidina marcada
con peroxidasa, y luego se contina la reaccin
aadiendo el sustrato correspondiente, como se
indic en enzim oinm unoanlisis (fig. 8-9A).
Tambin ha dado muy buenos resultados para
la identificacin de anticuerpos monoclonales
(de origen murino). En este caso, al antgeno
fijado a una fase slida se le aade el material
que contiene los anticuerpos monoclonales que
se han de valorar. Los complejos formdos se
hacen interaccionar luego con suero antiinmunoglobulina de ratn, obtenido de otra especie
animal, al que previamente se le fij biotina.
Despus de lavar se aade avidina marcada con
peroxidasa y luego se desarrolla la reaccin co
loreada mediante el aadido del sustrato co
rrespondiente (O-fenilendiamina y H^O,) (fig.
8-9B),
Han sido descritas diferentes variantes de los
dos mecanismos generales sealados.
B IB L IO G R A F A
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Reaccin antgeno-anticuerpo in vitro


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Reac^in antgeno-anticuerpo in vitro


Interaccin secundaria

RICAF^DO MARGNI

Dada Ja especificidad de la reaccin antgeno-anticuerpo, sta ha sido utihzada con m ag


nficos resultados en "a diferenciacin e identi
ficacin de microor mismos, hemates, antge
nos solubles, as como en la investigacin y
cuantificacin de anticuerpos sricos, sobre to
do con fines de diagnstico. En este sentido
han sido muy tiles las diferentes metodologas
aportadas por la serologa.
En un principio se crey que los diferentes
fenmenos visuaiizables de las reacciones antgeno-anticuerpo, como ya se seal al comien
zo del captulo 5, dependan exclusivamente de
las caractersticas propias y particulares de s
tos. Hoy se sabe que en ello participan distintos
factores.
En la interaccin in vitro de un antgeno
con su correspondiente anticuerpo se distin
guen dos etapas, la reaccin prim ara no visualizable y la reaccin secundaria, que sigue
a !a anterior y se caracteriza por la aparicin
de un fenmeno visible como la aglutinacin,
la precipitacin, etc. Cuando la reaccin ocu
rre in vivo, como consecuencia de esta inte
raccin pueden aparecer fenm enos b iolgi
cos colaterales como la necrosis en la reaccin
de Arthus; los fenmenos vasgenos y de conractura de la musculatura lisa en la anafilaxia
como resultado de la liberacin de histam ina y
otros mediadores qum icos, etc. Estas m ani
festaciones se consideran com o reacciones
terciarias.
Los mecanismos que regulan la reaccin pri
maria ya han sido expuestos en el captulo 8.
Los complejos iniciales que se forman rpi
damente y sobre los que, dentro de ciertos lmi
tes, las variaciones de temperatura y concentra
cin salina tienen poca influencia, se agregan
luego para dar diferentes fenm enos visibles

cuyas caractersticas dependen en gran parte


del estado fsico del antgeno. Esta etapa se
acelera con la tem peratura, la agitacin y es
electrlito-dependiente.
Es importante separar las etapas de la reac
cin antgeno-anticuerpo. Puede ocurrir que se
demuestre la presencia de anticuerpo por inte
raccin primaria, pero que ste no sea detectable por interaccin secundaria o terciaria. Esto
puede ser consecuencia de variaciones cuanti
tativas, ya que para conseguir fenmenos visi
bles son indispensables deternrinadas concen
traciones de anticuerpo, y cualitativas inheren
tes a las propiedades de la clase de inmunoglo
bulina comprometida en la respuesta inmune,
as como de las caractersticas del ligando. Si
bien es posible detectar un anticuerpo mediante
estudios de interaccin primaria, como ya se ha
visto, ello no significa cjue siempre deban ocu
rrir reacciones secundarias o tei'ciarias.
Las diferentes m anifestaciones de tipo se
eundario sern estudiadas en sus pormenores,
en tanto que las terciarias podrn ser halladas
en los distintos captulos, en especial en el refe
rente a m anifestaciones de hipersensibilidad.
Las metodologas utilizadas para el desarrollo
de las diferentes reacciones secundarias figuran
en el captulo 35.
P K E C IP IT A C I N
Cuando un anticuerpo, excepcin hecha de
los bloqueantes y no precipitantes, es puesto en
contacto con una solucin de la macromolcula
que lo origin, se form an com plejos Ac-Ag
que se insolubilizan luego en su mayor part:
dando una reaccin de precipitacin, que p u e
de ser total o zonal (fig. 9-1).

Reaccin antgeno-anticuerpo in vitro


Como expresramos al comienzo del libro,
sta es una propiedad de la mayor parte de los
anticuerpos y no una caracterstica particular de
un determinado tipo al que originalmente se lo
llam anticuerpo precipitante.
Precipitacin en medios lquidos
Precipitacin cualitativa
E^sta reaccin se produce en dos etapas. En la
inicial, que se desarrolla rpidamente y es in
fluida muy poco por la temperatura y los elec
trlitos, se forman los complejos Ac-Ag prima
rios. A medida que el tiempo transcurre, .esos
complejos iniciales se agregan, originando micelas de diferentes tamaos, las que finalmente
precipitan. Algunos complejos no alcanzan a
hacerlo y quedan en solucin. La velocidad de
sedimentacin es proporcional a V-((p-(po) g,
siendo V el volumen de la partcula, (p y cpo las
densidades de las partculas y el solvente, res
pectivamente, y g, el campo gravitacional.
La'tem peratura acelera esta segunda etapa,
siendo adems electrlito-dependiente. Cloruro
. sdico al 0,85% (0,15 M) es la concentracin
ptima en la mayor parte de los casos, excep
cin hecha de los anticuerpos de origen aviario,
en que se eleva al 8%. Es rnucho ms lenta que
la inicial, puede durar minutos, e incluso horas,
para que se complete.
La form acin de agregados es una co n se
cuencia de la bivalencia de los anticuerpos y
multivalencia de los antgenos. Con haptenos
monovalentes o antgenos que poseen un solo
determinante antignico por molcula, la preci
pitacin no se produce. Experiencias muy inte
resantes sobre el particular se han realizado con
ribonucleasa pancretica marcada con dinitro
fenol (D NP-RNAsa) en la que las relaciones
molares eran 1:1. Los sueros de animales in
munizados por DNP-BSA no precipitan con ri
bonucleasa monodinitrofenilada, pero s lo ha
cen los de animales inm unizados con ribonu
cleasa.; Ello es consecuencia de la presencia de
u solo grupo DNP y de varios determinantes
atigjcos especficos para ribonucleasa por
molcula de DNP-ARNsa.
Un hecho muy particular lo constituyen los
anticuerpos m onoclonales, que en su m ayor
parte no muestran actividad precipitante. Ello se
debe a que en muchos de los casos, especial
mente cuando estn dirigidos contra macromo
lculas en solucin, reconocen a un nico epito
pe no repetido, lo que les impide formar agrega
dos. Con los sueros inmunes obtenidos de ani
males inoculados con macromolculas, a preci
pitacin tiene lugar, pues en esos sueros hay
una mezcla de anticuerpos capaces de interac
cionar con diferentes epitopes del mism.o ant

177

geno, lo que posibilita la formacin de com ple


jos mixtos Ac-Ag, insolubles (fig. 9 -Ib).
Si se utiliza un antgeno marcado fcil de d e
mostrar en el precipitado, es posible conocer la
composicin de los complejos Ac-Ag que p re
cipitan, y si se analizan los precipitados que se
forman en una serie de tubos en los que se han
colocado cantidades iguales de anticuerpo y
variables de antgeno, se ver que las relacio
nes molares Ac/Ag son aproximadamente 1 en
la zona de exceso de antgeno, 4 en la zona de
equivalencia o proporciones ptimas y 7 en la
de exceso de anticuerpo. El peso molecular del
antgeno ejerce marcada influencia en esa rela
cin. Siendo el peso molecular y la valencia del
anticuerpo constantes, mayor nmero-de m o l
culas de ste podrn interaccionar con molctllas de antgeno grandes que con pequeas. En
la zona de exceso de anticuerpo la relacin es
40 para el sistema tiroglobulina-antitiroglobulina (tiroglobulina PM, 700 kD) y 5 para ovoal
bmina-antiovoalbmina (ovoalbmina PM , 43
!cD). Con otras protenas de diferentes pesos
m oleculares esas relacio n es varan. P a ra la
gammaglobulina humana (PM, 150 kD) es 7,
para la ribonucleasa pancretica bovina (PM ,
13,6 kD) es 3 y para si virus del mosaico del
tabaco (PM, 40.000 kD) es 650. Estos valores
estn influidos por la especie animal de donde
proviene el anticuerpo y su grado de inm uniza
cin, ello como consecuencia de la calidad de
los anticuerpos elaborados. Es conveniente re
cordar que, en el curso de una inm unizacin,
los anticuerpos que aparecen primero son IgM
y luego IgG, si el inmungeno es T-dependien
te y no debe olvidarse adems la existencia de
anticuerpos no precipitantes capaces de origi
nar uniones Ac-Ag, pero no de precipitar, por
ser funcionalmente univalentes.
La formacin de estos diferentes complejos
ha sido exphcada mediante la llamada teora
dl enrejado, que considera que la composicin
del precipitado formado es una consecuencia
del modo en que anticuerpo y antgeno se han
unido. Dada la bivalencia del anticuerpo y m ul
tivalencia del antgeno, las posibilidades de
com binacin varan segn que en la m ezcla
exista exceso de antgeno, exceso de anticuerpo
o equivalencia de ambos (fig. 9-2). Las frm u
las de dichos complejos son; Ac^Ag, Ac^Ag pa
ra la zona de exceso de anticuerpo; ACjAg,
Ac^Ag para la zona de equivalencia; y AcAgj,
Ac^Agj para la zona de exceso de antgeno,
constituyendo complejos solubles, que se for
man en la zona de marcado exceso de Ag.
Precipitacin cuantitativa
Si
bien la precipitacin en medios lquidos
es muy til para ia identificacin de antgenos

178

Aspectos bsicos de la inmunidad


F ig. 9 - la . P recipitacin en m edio lquido. T ubos a y d,
precipitacin zonal con form acin de un precipitado anu
lar. Tubo b, precipitacin total con enturbiatniento. Tubo
c, testigo.

A n tgen o

A nticuerpo m on oclon al

S u e ro inm une

V Y VV V
anti-a

anti-a

anti-b

anti-c

V
y
C om plejo A g-A c
n o precipitable

C om plejo insoluble

Fig. 9 - lb . Interaccin de un antgeno que presenta m ltiples epitopes (a, b, c) no repetidos, con un anticuerpo m onoclo
nal (anti-a) y con un suero inm une que contiene anticuerpos anti-a, anti-b y anti-c. Slo el suero inm une puede originar
com plejos A c-A g insolubles.

Reaccin antgeno-anticuerpo in vitro


Fig. 9-2. F orm acin de precipita
dos o com plejos solubles segin las
concentraciones de antgeno y an
ticuerpo presentes en la mezcla.

179

Precipitados

Ac/Ag = 3

Ac/Ag = 2

Complejos solubles formados en exceso de antgeno

O O aAc/Ag = 0,5
= 0 ,6 7

Complejos formados en exceso de anticuerpo

Antgeno
( )

Anticuerpo
Ac/Ag = 5

Ac/Ag = 6

y anticuerpos, teniendo en cuenta lo expuesto


anteriormente, en lo relativo a la formacin de
los precipitados, ella puede usarse con fines
cuantitativos y constituye un buen mtodo, para
la medida de la concentracin de los anticuer
pos presentes en un suero. Puede usarse tam
bin para medir niveles de antgeno.
Si
suponemos que se desea valorar un suero
antineumoccico tipo III y disponemos del polisacrido antignico suficientemente purifica
do, el mtodo que se ha de seguir es el siguien
te: en una serie de tubos se colocan voliimenes
iguales del suero para valorar y cantidades cre
cientes del poiisacrido. Despus de la incuba
cin, y producida la precipitacin, todos los tu
bos son centrifugados y los precipitados lava
dos con solucin salina tamponada (NaCl 0,15
M, fosfato 0,01 M, pH 7,6) para elim inar las
protenas sricas no especficas contaminantes.
Si por cualquier procedim iento sensible (microKjeldahl, Folin-Ciocalteau, espectrofotometra) valoramos la protena de los precipitados,
ella corresponder al anticuerpo, ya que el ant
geno no tiene carcter proteico (cuadro 9-1 y
fig. 9-3), Cuando se hacen estas valoraciones
es necesario aadir EDTA al suero para evitar
la copreeipitacin del complemento.

Un hecho que llama la atencin, y que pare


cera que est en desacuerdo con lo expresado
respecto de la formacin de. los precipitados, es
que la cantidad de anticuerpo no aum enta con
el incremento de antgeno, sino que existe una
zona ptima, llamada zona o punto de equiva
lencia, ubicada entre las zonas de exceso de an
ticuerpo y exceso de antgeno, donde la preci
pitacin es mxima. Si se analiza el sobrena
dante de ese tubo, recurriendo a mtodos sufi-

C u a d ro 9-1. Valoracin de anticuerpos antipolisacridos neumoccico tipo III

Suero
mi
1
1
1
1
1
1
1
1

Poiisacrido
neum occico Protena
tipo III
del ppdo^
Hg/0,5 rnl
(Ac) mg
25
50
75
100
150
200
300
400

1,61
3,32
4,15
4,75
4,96
4,07
3,19
2.53

A n lisis
del sobi'en a d a n te
Exceso
E xceso
de Ag
d e Ac

....

+
+

-1-

-h
+
+

180

Aspectos bsicos de la inm unidad


Sobrenadante
E

|j,g de Ag aadido
Fig. 9-3. Curva de precipitacin correspondiente al sistem a polisacrido neum occico tipo Ill-antipolisacrido, elaborada
con los datos del cuadro 9-1.

cientemente sensibles, se observa que en l no


hay exceso de anticuerpo ni de antgeno. Ello
significa que el anticuerpo contenido en ese
precipitado corresponde a la totalidad de l,
existente en el suero para valorar.
Este hecho se explica si se tiene en cuenta
que la reaccin de precipitacin es reversible y
que tiene lugar bajo rigurosas condiciones de
equilibrio:

DNP-SAB (dinitrofenil seroalbmina bovina),


por lectura espectrofotom trica a 360 nm se
puede determinar la concentracin de antge
no y a 280 nm su contenido proteico. C ono
ciendo este hecho de antemano es posible, por
simple sustraccin, calcular la protena anti
cuerpo del precipitado (vanse cuadro 9-2 y
fig. 9-4).
En caso de que el antgeno no tuviese marca,
ovoalbmina por ejemplo, es necesario por el
Ag . Ac
anlisis de los sobrenadantes frente a antgeno
: + Ac
y frente a anticuerpo, por separado, determinar
(precipitado)
la zona de equivalencia. Como en ese punto la
En exceso de Ag el equilibrio se desplaza, precipitacin del antgeno es total, restando del
formndose complejos solubles, y disminuye precipitado la cantidad de l aadida conocere
por lo tanto la cantidad de anticuerpos en el mos la cantidad de protena anticuerpo (vase
precipitado:
cuadro 9-3).
Cuando en la valoracin de anticuerpos por
Ag Ac + Ag
Agj Ac
precipitacin el punto de equivalencia se deter
(precipitado)
(soluble)
mina mediante la investigacin de exceso de Ac
El mismo efecto anterior puede lograrse aa o de Ag en el sobrenadante, es indispensable
diendo exceso de hapteno al precipitado. En es que el antgeno empleado en este examen sea de
tas condiciones pueden form arse com plejos la mxima pureza. Si no fuese as, la mayor pre
Hp^ Ac solubles, hecho ste que se emplea con cipitacin podra corresponder a mezcla de anti
suma frecuencia cuando quieren disociarse pre cuerpos y adems podra ocurrir que anticuer
cipitados para la purificacin de anticuerpos. pos contra la im pureza, que se encuentran a
La mayor o menor cantidad de Hp^ Ac formado concentraciones distintas de las del anticuerpo
depender de la afinidad de aqul por el antge para valorar, tengan zonas de equivalencia dife
no y el hapteno.
rentes y dificulten el anlisis (fig. 9-5).
Si
el anticuerpo para valorar fuera especfi Si
el antgeno empleado en la inmunizacin
co contra un antgeno proteico, el mtodo de y en la valoracin es una protena con varios
valoracin para emplear sera el mismo, pero determ inantes antignicos, ovoalbm ina por
en este caso la protena del precipitado no se ejemplo, el ttulo obtenido corresponder a ms
ra exclusivaiiente anticuerpo. Si el antgeno de un anticuerpo que han precipitado simult
tuviera una m arca identficable, por ejem plo neamente. El problema se complica aun ms si

Reaccin antgeno-anticuerpo in vitro

181

ng de Ag aadido

F ig . 9-4. C urva de precipitacin correspondiente al sistem a D N P -an-D N P, elaborada con los datos del cu a d ro 5-3.

se tiene en cuenta que cada uno de los determi


nantes puede tener una heterogeneidad distinta
con respecto a la afinidad.
Inhibicin de la precipitacin
po r haptenos
Siendo el hapteno la parte de la molcula an
tignica que le confiere la especificidad, es l
gico que el anticuerpo originado reaccione con
ambos. Si bien la interaccin directa anticuerpo-hapteno (A c-H p) no puede v isualizarse,
puede ponerse de manifiesto mediante la inhi
bicin de la precipitacin cuando es aadido el
antgeno. Durante la primera etapa, los sitios de

com binacin del anticuerpo son bloqueados


por el hapteno, imposibilitando la interaccin
posterior del antgeno.
Mediante este mtodo ha sido posible tener
m ejor informacin sobre la especificidad del
anticuerpo que cuando se emplea la precipita
cin cualitativa.
El mtodo tambin puede hacerse cuantitati
vo y generalmente se elige como punto final de
la reaccin el 50% de inhibicin.
Tiene la ventaja de permitir la medicin de
la capacidad inhibitoria de haptenos relaciona
dos y establecer comparaciones entre ambos,
en especial sus afinidades con relacin al ant
geno inmunizante (fig. 9-6).

C u ad ro 9-2. Valoracin de anticuerpos antidinitrofenol (anti-DPN)


DO
Suero
mi

A ntgeno
lg/0,2 m i

0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5

40
75
100
125
150
175
200

360

280 (a)

0,290
0,385
0,502
0,611
0,740
0,796
0,737

1.060
1,221
1.305
1.542
1,634
1.609
1,530

D O (360)
x 0 ,6 2
(b)

DO (280)
corregido
(a-b)

0,180
0,238
0,311
0,379
0,458
0,493
0,457

0,880
0,983
0,994
1,163
1,176
1,116
1,073

A c en
ppdo.
- mg
1,10
1,22
1,25
1,45
1,47
1,39
1,34

A g en
ppdo.
fg

Relacin
Ac/Ag

53
70
92
112
136
145
135

20,7
17,4
13,4
12,9
10,8'
9.5
9,9

S u ero valorado: su ero de co n e jo in m u n iz ad o con g am m a g lo b u lin a h u m a n a d in itro fen o la d a (D N P -H G G ).


A n tg en o em p lea d o : alb m in a b o v in a din itro fen o la d a (D N P -B S A ). P ara D O (3 6 0 nm ) = 1 c o rresp o n d e n 93 }Xg d e antgeno (fig . 35-1).
Inc u b aci n : 1 h o ra a 37"C y 24 h o ra s a 4 'C.
.ec tu ras: esp e ctro fo to m tric as (v o lu m en final d e lo s tu b o s 2 m i).
10/E^^i^, p ara la Ig G d e conejo: 0,625.
C lculos:
A n ticu e rp o en el p p d o .: D O (280 n m ) (a-b) x 2 x 0 ,6 2 5 : m g/ppdo.
A n tg en o en el p p d o .: D O (360 nm ) x 2 x 93: )ig/ppdo.
R elacin A c/A g: [ig A c en p p d o /|ig A g en ppdo.
T tu lo d e an ticu e rp o s anti-D P : m x im a cantidad d e A c en ppdo. x 2.
P ara el ca so de an alizado: ] ,5 x 2 = 3 m g - mi"' de suero.

182

Aspectos bsicos de la inmunidad


Fig. 9-S. C urva de precipT
tacin efectu ad a con suero
d e o v e ja in m u n iz a d a con
H G G -D N P. En los solwenad a n te s se o b s e rv a n tu b o s
c o n e x c e s o d e A g y A c.
Ello es debido a que se trata
de un sistem a m ultiespeefico, constituido por anticuer
pos anti-H G G (-------) y an
ti-DN P

|ig de Ag aadido
-Precipitacin con HGG - DNP
-Precipitacin con HGG
-Precipitacin con BSA - DNP

Reaccin de floculacin
Un hecho no bien entendido es la llam ada
reaccin de floculacin. sta se caracteriza por
no formar precipitados hasta que la cantidad de
antgeno aadido no exceda de ciertos lmites,
cosa que no ocurre con la precipitacin. Aqu
hay formacin de agregados que sedimentan con
el aadido de cantidades mnimas de antgeno.
En la floculacin, los complejos formados se
agregan y sedimentan en un rango nruy estre
cho de la relacin Ac/Ag; en la zona de exceso
de antgeno y exceso de anticuerpos slo se
forman complejos solubles. En la precipitacin
esto es bien manifiesto en la zona de exceso de
antgeno (fig. 9-7).

Parecera que es una propiedad dependiente


ms de los anticuerpos que de los antgenos.
Los sueros que dan floculacin son los que se
obtienen por inmunizacin de caballos con al
gunos tipos de protenas, en especial toxinas
m icrobianas, como la diftrica y la tetnica.
Los sueros de los mismos animales inoculados
con polisacridos se comportan como precipi
tantes y no como floculantes. Los conejos, ca
bras y ovejas dan sueros precipitantes, cual
quiera que sea el tipo de antgeno empleado.
En el hombre se ha observado que algunos
sueros provenientes de enfermos con tiroiditis
de fashimoto, enfermedad en la que aparecen
autoanticuerpos antitiroglobulina, se com por
tan como floculantes.

C u ad ro 9-3. Valoracin de anticuerpos antio


voalbmina

|iM de hapteno aadido

F ig. 9-6. G raficacin de los resultados obtenidos en la in


hibicin de la precipitacin por un hapteno. Sistem a reacti
vo: D N P-anti-D N P. A nticuerpo: 0,5 m l de suero de oveja
anti-D N P (inm unizada con D N P-H G G ). A ntgeno: 150 lig
D N P-BSA (dosis ptim a). H apteno: dinitrofenol (D NP).

Suero
ml

O voal
bm ina
llg/0,2
ml

DO
(280
nm,}

Protena
del
ppdo.
mg

0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5

50
75
100
125
150
175
200
225

0,820
1,150
1,350
1,550
1,795
1,725
1,610
1,525

1,03
1,44
1,69
1,94
2,24
2,16
2,01
1,90

Anli'sis
d el sobrenadante
Exceso
Exceso
deA g
cleA c
_
_

+
+
+
+
_

+
+
+

C lculos;
D O (280) X 0 ,625 x 2: P ro ten a del pre cip ita d o .
(P rotena del ppdo. en zo n a d e eq u iv a le n cia) - (A g a a d id o en zona
de eq u iv a le n cia) = A n ticu e rp o en ppdo. en zo n a de eq u iv a le n cia.
P ara el caso analizado: 2 ,2 4 - 0,15() = 2 ,09 m g/0,5 m l d e suero.

Reaccin antgeno-anticuerpo in vitro

183

Fig. 9-7. Curvas de


p recip itaci n y floculacin. En la p re
cip ita c i n slo hay
fo rm a c i n de c o m
p le jo s s o lu b le s en
exceso de antgeno,
en ta n to q u e en la
f lo c u la c i n
e llo
ocurre en exceso de
an tg en o y de a n ti
cuerpo.

P R E C IP IT A C I N

Los sueros con anticuerpos que dan precipi


tacin se identifican como de tipo R, y como de
tipo H los que producen floculacin.
Esta denominacin se ha adoptado teniendo
en cuenta que los sueros de conejo (rabbit) y
los de caballo (horse) son los que tienen esas
caractersticas.
Precipitacin en medios con geles
Las macromolculas pueden difundir libre
mente a travs de geles; esta difusin est limi
tada por la concentracin del gel. Empleando
soportes adecuados, en especial aquellos que
como base tienen agar disuelto en electrlitos,
es posible hacer migrar antgenos y anticuerpos
de modo que al encontrarse interaccionen. Pue
den utilizarse tambin geles con base de pectina, alginatos, poliacrilamida y aun tiras de ace
tato de celulosa gelatinizado.
Los precipitados que se originan se visuali
zan como ntidas bandas de precipitacin, que
permanecern estables mientras un mayor aflu
jo de molculas de los reactivos no provoquen
redisolucin.
Se han descrito numerosas tcnicas cualitati
vas y cuantitativas basadas en este principio,
entre las que pueden citarse la difusin simple
monodimensional, doble difusin monodimensional, doble difusin bidimensional, difusin
radial, inmunoelectroforesis.

trando, creando un gradiente de concentracin.


En la interfase gel-lquido no se form an preci
pitados, dada la alta concentracin antignica,
y aparecen con la forma de bandas cuando la
concentracin del antgeno que ha difundido es
la ptima.
Si
en el suero haba ms de un anticuerpo y
en la solucin aadida ms de un antgeno que
se correspondan, se formarn tantas bandas de
precipitacin como sistemas hayan interaccio
nado.
Esto no es exacto, pues si se tiene en cuenta
que estas separaciones dependen de las veloci
dades de difusin de las diferentes molculas
antignicas, slo ser cierto si aqullas son dis
tintas. El nmero de bandas de precipitacin
nos indica la cantidad mnima de sistem as reac
cionantes presentes. Esto tambin es relativo,
ya que es indispensable que los reactivos no es
tn a concentraciones inferiores a las necesarias
para que la reaccin ocurra.
Teniendo en cuenta que la velocidad de mi
gracin depende del coeficiente de difusin del
antgeno y de su concentracin, Oudin trat de
aplicar las leyes de la difusin con el objeto de
transform ar el m todo en cuantitativo, estu
diando los factores que influyen en la forma
cin de los precipitados. Las frmulas para la
cuantificaci n p ropuestas por l son las si
guientes:

1)
Difusin simple monodimensional
M todo conocido tambin como tcnica de
Oudin simple, por ser ste el autor que lo des
cribi; consiste en colocar en un tubo de ensa
yo pequeo agar fundido (solucin al 1% en
NaCl 0,15 M) mezclado con un volumen igual
del antisuero para analizar. Producida la solidi
ficacin, se aade la solucin de antgeno. Por
difusin a travs del gel el antgeno va pene

2)

VF
,

h =K
VT
=

y lo g

Ago

h
Ag
= a log

VF

Ago

184

Aspectos bsicos de la inmunidad

h es la distancia desde el borde del gel a la ban


da de precipitacin en un tiempo t; y y a son
constantes y Ag y Ac las concentraciones ini
ciales de antgeno y de anticuerpo. Agg y ACg
son los correspondientes valores extrapolados
para
h
= O
VT
La frmula 2 se aplica cuando el anticuerpo
es constante y el antgeno variable, y la 3, en el
caso contrario.
Posteriormente, el mismo autor pudo com
probar que hay una relacin lineal entre K y lo
garitmo de la concentracin antignica (log C)
para valores bajos de ~

y entre

Solucin
de Ag
en S.F.

Ag + agar
ai 1%

r 0,5%

Solucin
de Ac
en agar

Ac + agar
ai 1%

Difusin simple

Difusin dobie

y el mis-

h
mo logaritmo para valores altos de . En conVF
secuencia, para bajas concentraciones antignih
se aproxima a log C, mientras que a al
VT
tas concentraciones lo hace a
VT
Han sido propuestos otros mtodos de cuan
tificacin incluso el empleo de densitmetros
especialmente diseados, pero a pesar de ello
actualmente slo se utilizan como metodologa
cualitativa, ya que para la cuantificacin de Ag
y Ac existen otros mtodos ms eficientes.
Difusin simple bidimensional
En este caso, la reaccin se efecta colocan
do en la parte inferior del tubo un volumen de
agar al 1% fundido, mezclado con partes igua
les del antisuero. Producida la gelificacin, se
agrega agar al 0,5% en solucin salina, en un
volumen igual a la mitad del anterior. Despus
de la solidificacin se cubre todo con un volu
men de agar al 1% fundido, mezclado con igual
volumen de la solucin antignica.
Antgenos y anticuerpos migrarn hacia la
zona media y, cuando los que son equivalentes
se encuentren, interaccionarn desencadenn
dose la precipitacin cuando las concentracio
nes sean las ptimas. Si las cantidades de Ag y
Ac aadidas son las que corresponden a la zona
de equivalencia, la precipitacin se producir
en la parte central de la zona de reaccin y las
bandas formadas sern ntidas y estables, en
tanto que estarn desplazadas hacia los extre
mos cuando estas condiciones no se cumplan, y
en parte se redisolvern. Estando la difusin en
relacin directa con la concentracin de la sus
tancia que difunde, la banda de precipitacin
estar m s prxim a a la zona del antgeno

Ag

Ag

Ac

Ac

Precipitacin en
exceso de Ac

Precipitacin en
zona de equivalencia

Ac

Precipitacin en
exceso de Ag

F ig. 9-8. A . Esquem atizacin de la inm unodifusin sim


ple y doble. B . Los tubos indican las caractersticas de la
banda de precipitacin en la inm unodifusin doble, la que
es ntida y est ubicada en el centro cuando se form a en la
zona de equivalencia, y d ifusa y desplazada cuando io h a
ce en p resen cia d e exceso de an tgeno o an ticu erp o . La
banda se desplaza hacia la zona del antgeno, y la red iso lu
cin del precipitado (zona difusa) se produce del lado don
de est ubicad o el an ticu erp o cu ando h ay exceso d e l;
ocurre lo contrario cuando el antgeno es el que se encuen
tra en m ayor concentracin.

cuando hay exceso de anticuerpo, y ocurrir lo


inverso en caso contrario.
ste es un buen mtodo cualitativo que per
mite demostrar varios sistemas reactivos simul
tneos, cosa que no ocurre en la precipitacin
en medios lquidos (figs. 9-8 y 9-9). Pueden
detectarse hasta 10 |J,g por mi de anticuerpo.
Doble difusin bidimensional
Un mtodo interesante de doble difusin en
placas fue descrito por Ouchterlony, que luego
fue transformado en micromtodo al emplear
portaobjetos cubiertos con agar al 1,5% en so
lucin salina como base de la reaccin. Consis
te en enfrentar en pequeas perforaciones efec
tuadas en el agar, y a distancias convenientes,
las soluciones de antgeno y anticuerpo.

Reaccin antgeno-anticuerpo in vitro

185

F ig . 9 -9 . In m u n o d ifu si n d o b le en
exceso de antgeno (1), zona de equi-v alen cia (2) y ex c eso de an ticuerpo
(3). L as ban d as de p re c ip ita c i n de
los tubos 4 y 5 corresponden a ia inte^
racci n de distintos sistem as a n tg e
no--anticuerpo.

Al difundir ambos y ponerse en contacto,


producirn una banda de precipitacin cuando
estn en la relacin ptima. Si la concentracin
de Ag y Ac colocados en los reservorios es la
que corresponde a la zona de equivalencia, la
banda de precipitacin estar situada aproxima
damente en la distancia media que separa esos
reservorios. Cuando hay exceso de Ag o de Ac,
la banda de precipitacin formada estar prxi
ma al reservorio del anticuerpo o del antgeno,
respectivamente.
Con esta tcnica puede tenerse una idea de
las relaciones entre los pesos moleculares de
los antgenos y anticuerpos reaccionantes. Tra
bajando con concentraciones ptimas de Ag y
Ac, si la banda de precipitacin formada es rec
ta, indica que los pesos moleculares de ambos
son muy prximos. Si la banda es cncava con
respecto al reservorio del antgeno, seala que
el peso molecular de ste es superior al del an
ticuerpo, siendo m enor en el caso en que la
banda presente convexidad.
Todo esto es una consecuencia de las leyes
generales de la difusin, que establecen que la
distancia a la que una sustancia difunde est en
relacin directa con su concentracin y en rela
cin inversa con su peso molecular. Mediante
esta metodologa es posible identificar varios
sistemas reaccionantes simultneamente, pues
cada uno de ellos dar una banda de precipita
cin especfica y, adems, investigar reaccio
nes cruzadas, pues en estos casos habr fusin
de bandas. Teniendo en cuenta ello se han idea
do distintos modelos de matrices con las que
pueden elaborarse diferentes esquemas reacti
vos (fig. 9-10).
Este mtodo resulta muy interesante porque
permite identificar las bandas de precipitacin

m ediante el empleo simultneo, en el mismo


esquema de reaccin, de antgenos y anticuer
pos conocidos. O riginariam ente O uchterlony
describi, de acuerdo con este hecho, tres tipos
de reacciones y el esquema correspondiente a
ellas puede verse en la figura 9-11. Fueron de
nom inadas como reacciones de identidad, no
identidad e identidad parcial.
En el primer caso, los dos sistemas reactivos
se funden en una nica banda de precipitacin.
Si los sistemas no son iguales (reacciones de
no identidad), cada uno reacciona independien
tem ente originando bandas de precipitacin
que se cruzan. Cuando uno de los antgenos
analizados tiene algn com ponente capaz de
dar una reaccin cruzada con el anticuerpo ela
borado por el otro (identidad parcial), las ban-

F ig . 9-10. D istin to s esquem as para inm unoprecipitacin


en p lacas de agar (tcnica de O uchterlony).

186

Aspectos bsicos de la Inmunidad


F ig . 9-11. E squem as de rea c c iO '

das de precipitacin de ambos sistemas se unen


y funden parcialm ente en una banda, apare
ciendo una prolongacin o espoln en la co
rrespondiente al antgeno que se emple para la
obtencin del antisuero. Esto indica que en este
antgeno hay componentes antignicos no com
partidos con el restante.
Las reacciones descritas son las que respon
den a los lincamientos generales de los esque
mas expuestos y muy especialm ente cuando
Ag y Ac estn en relaciones ptimas. Variacio
nes en sus concentraciones pueden influir en
los resultados, hechos stos que deben tenerse
muy en cuenta para su interpretacin correcta.
La figura 9-12 muestra algunos de ellos.
La difusin doble en placa es un excelente
mtodo cualitativo para el estudio de la homo-

10

F ig . 9 -1 2 . In m u n o p re c ip ita c i n en p la c a (m to d o de
O uchterlony). Pueden apreciarse sistem as sim ples y m lti
ples, bandas de identidad, y de no identidad.

geneidad de antgenos y anticuerpos purifica


dos. Resulta muy til tambin para la bsqueda
de impurezas, lo cual est limitado por la con
centracin en que ellas se encuentren presentes,
ya que la precipitacin se hace visible cuando
los reactivos exceden valores mnimos. Para
obviar este inconveniente, en la prctica se em
plean generalm ente altas concentraciones de
Ag y Ac que, si bien no resultan tiles para el
sistema principal, pues deja de estar en las con
diciones ptimas, perm iten aumentar la con
centracin de la impureza y asegurar su preci
pitacin.
Difusin simple en placa o difusin radial
Es un mtodo que resulta poco til desde el
punto de vista cualitativo, ya que la doble difu
sin descrita por Ouchterlony provee mayor in
formacin. En lneas generales, consiste en la
preparacin de una placa con agar al 3% en so
lucin salina, al que previa fusin se le aade
un volumen igual del suero inmune que contie
ne los anticuerpos. Producida la soUdificacin,
se practican orificios en la placa y en cada uno
de ellos se colocan los antgenos para analizar.
Si los sistemas son equivalentes rodear