UNIVERSIDAD AUTNOMA TOMAS FRIAS

FACULTAD DE CIENCIAS PURAS

CARRERA DE QUMICA

PRACTICA N 8

CROMATOGRAFA EN COLUMNA
SEPARACIN DE PIGMENTOS VEGETALES

Docente:

Lic. Rene Jess Baldivieso Saenz

Auxiliar:

Univ. Eveling Villca Guerra

Nombre:

Univ. Rubn Emilio Choque Gutirrez

Fecha:

19 de noviembre de 2014

Potos - Bolivia

CROMATOGRAFA EN COLUMNA
SEPARACIN DE PIGMENTOS VEGETALES

1.- OBJETIVOS:

 Conocer la cromatografa en columna como tcnica de separacin de mesclas de sustancias.

Separar por cromatografa en columna la mescla de pigmentos extraidos de la espinaca.
Observar la coloracin de las muestras obtenidas.
2.- FUNDAMENTO TERICO:
La fotosntesis hace que las plantas fabriquen su propia materia orgnica a partir del CO 2 del aire, utilizando como
fuente de energa la luz solar. Las hojas contienen varios pigmentos fotosintticos, capaces cada uno de ellos de
absorber luz de distinta longitud de onda, lo que permite que la fotosntesis tenga una mayor eficacia. Entre ellos
estn la clorofila A (verde azulado) y la clorofila B (verde amarillento), carotenos (amarillo anaranjado), xantofilas
(amarillo) y antocianos (rosado). En esta prctica vamos a separar y caracterizar cada uno de estos pigmentos
utilizando la tcnica de la cromatografa en papel.
Pigmentos fotosintticos
Entre todos los caracteres ms externos de los vegetales, el ms notable y caracterstico es probablemente el color.
El color no es nicamente un carcter llamativo de la vegetacin, sino que, adems, algunos de los pigmentos que lo
condicionan estn estrechamente ligados a las actividades fisiolgicas del propio vegetal. Por consiguiente, el estudio
de cmo las plantas viven y se desarrollan requieren el previo conocimiento de los pigmentos vegetales.
Qu son los pigmentos?
Si es posible encontrar en el reino vegetal todos los matices y combinaciones de colores del espectro, existe un
predominio general de los colores primarios: verde, amarillo, rojo, azul. Estos colores son conferidos a los vegetales
por determinados compuestos qumicos definidos, llamados pigmentos. El color particular que presenta un
determinado rgano vegetal depende generalmente del predominio de uno u otro o la combinacin de ellos. Se debe
tener claro que cuando un vegetal presenta un color blanco, es debido a la falta de tales pigmentos. La luz solar que
incide sobre ellas no es absorbida selectivamente como ocurre en las partes coloreadas, sino que es transmitida o
reflejada prcticamente sin sufrir modificacin.
Las Clorofilas. El color verde tan uniformemente presente en los vegetales es debido a la presencia de dos pigmentos
estrechamente emparentados llamados clorofila a y clorofila b . Se encuentran prcticamente en todas las plantas con
semilla, helechos, musgos y algas. Pueden formarse en las races, tallos, hojas y frutos a condicin de que estos
rganos estn situados por encima del suelo y queden expuestos a la luz. Tambin aunque aparentemente falten en
algunas hojas de color rojo o amarillo, cuando se extraen las otras sustancias colorantes de estas, puede comprobarse
incluso all la presencia de las clorofilas, que estaban enmascaradas por los dems pigmentos.
Dnde estn los pigmentos?
Estos pigmentos se encuentran en el interior de la clulas vegetales especficamente en una organela llamada
cloroplasto. Los cloroplastos son simplemente plstidos que contienen pigmentos cloroflicos. Los compuestos
cloroflicos estn ligados qumicamente con las estructuras internas del cloroplasto (membrana tilacoides) y se hallan
retenidos en estado coloidal. Asociados con las clorofilas, existen tambin en los cloroplastos dos clases de
pigmentos amarillos y amarillo-anaranjados que son los xantofilas y carotenides.
Cmo se dividen los solventes?
Los pigmentos cloroflicos son insolubles en el solvente universal llamado agua. Pero s son solubles (afinidad
qumica) en solventes orgnicos como por ejemplo alcohol etlico y acetona. A los solventes que extraen
simultneamente todos los pigmentos de la hoja se los suele llamar extractantes. Existen otros solventes que

presentan afinidad por algunos pigmentos y se los llama separadores, como por ejemplo el tetracloruro de carbono y
el ter de petrleo.
En el mtodo de extraccin simple, como se desarrolla ms adelante se utilizar como extractante el alcohol etlico y
como separador el tetracloruro de carbono. Estos dos solventes orgnicos responden en forma diferente a los
pigmentos cloroflicos, como as tambin a sus diferencias fsicas que hacen que sean dos lquidos no misibles y con
diferente peso especfico.
En el segundo mtodo por cromatografa se utilizar como extractante la acetona y como separador el ter de
petrleo. Este mtodo se trata de una separacin ms fina de los pigmentos, y se basa en la absorcin y solubilidad
diferenciales de varias sustancias entre las que se incluyen los pigmentos. Un soporte inerte como papel de filtro para
la corrida y unos granos de carbonato de calcio para deshidratar la muestra, son los componentes necesarios para
desarrollar la tcnica.
Clorofila
Las clorofilas (del griego , chloros, "verde", y ,
son una familia de pigmentos de color verde que se encuentran
cianobacterias y en todos aquellos organismos que contienen
en sus clulas, lo que incluye a las plantas y a los diversos grupos
crtica en la fotosntesis, proceso que permite a las plantas
energa a partir de la luz.

flon, "hoja")
en
las
cloroplastos
de protistte,
absorber

Descripcin
Las clorofilas son un grupo de pigmentos que se encuentran en diversas clulas eucariotas que poseen cloroplastos
(plantas, algas) y algunos procariotas Externos: (Vesculas, Lamelas, Cromatforos) y se encuentran en el dominio
eubacteria y eucarya.
Localizacin en las clulas
Las clorofilas aparecen insertas en la membrana, a las que se anclan por la cadena lateral constituida por un resto de
fitol, asociadas a protenas y otros pigmentos, con los que forman los fotosistemas.
Cada fotosistema contiene alrededor de 200 molculas de clorofila, adems de pigmentos auxiliares, con los que
constituye la llamada antena. La antena est formada por conjuntos ordenados de molculas de clorofila, otros
pigmentos y protenas, que se llaman complejos colectores de la luz. Slo una molcula de clorofila a en cada
fotosistema convierte propiamente la energa radiante (luz) en energa qumica, cuando recibe un fotn con energa
suficiente desde las molculas de la antena, que se la van pasando.
Xantfila
Tambin conocidas como xantfilas (del griego xantos() =
filos() = hoja) (anteriormente "filoxantinas") Son compuestos
pertenecientes al grupo de los carotenoides que poseen uno o ms
oxgeno en su estructura. Segn la Unin Europea, el cdigo
esta familia de compuestos es E-161.
Las xantfilas se encuentran tambin de forma natural en muchas
compuestos pigmentados y presentan tambin accin fotosinttica.
ms resistentes a la oxidacin que las clorofilas, proporcionan sus
y parduzcos a las hojas secas.

rubio
qumicos
tomos
alimentario

y
de
para

plantas,
son
Estos pigmentos,
tonos amarillentos

Propiedades
Las xantfilas son derivados oxigenados de los carotenoides, usualmente sin ninguna actividad como vitamina A. La
criptoxantina es una excepcin, ya que tiene una actividad como vitamina A algo superior a la mitad de la del betacaroteno.

Abundan en los vegetales, siendo responsables de sus coloraciones amarillas y anaranjadas, aunque muchas veces
stan enmascaradas por el color verde de la clorofila. Tambin se encuentran las xantfilas en el reino animal, como
pigmentos de la yema del huevo (lutena) o de la carne de salmn y en el exoesqueleto de crustceos (cantaxantina).
Esta ltima, cuando se encuentra en los crustceos, tiene a veces colores azulados o verdes, al estar unida a una
protena. El calentamiento rompe la unin, lo que explica el cambio de color que experimentan algunos crustrceos
al cocerlos. La cantaxantina utilizada como aditivo alimentario se obtiene usualmente por sntesis qumica.
Cromatografa en columna:

Se emplea para la separacin de mezclas o purificacin de sustancias a escala preparativa. Como fase estacionaria se
usa, generalmente, gel de slice o almina dentro de una columna. La eleccin del disolvente es crucial para una
buena separacin. Dicho disolvente pasa a travs de la columna por efecto de la gravedad o bien por aplicacin de
presin (cromatografa flash). La columna se prepara mezclando el soporte con disolvente y se rellena la columna
poniendo en el fondo de sta un poco de algodn o lana de vidrio, para evitar que la slica o la almina queden
retenidas en la columna y que el disolvente se engrasada hasta el nivel del soporte. A continuacin se introduce la
muestra por la parte superior de la columna y se eluye con el disolvente elegido, recogindose por lo general en
tubos de ensayo.
Una columna de cromatografa es un tubo de vidrio relleno con una sustancia slida de propiedades adsorbentes
constituida por pequeas partculas: gel de slice y almina son las ms usadas. Este relleno es lo que se conoce en
cromatografa como la fase estacionaria. A travs de la columna se har pasar una corriente de un disolvente o
mezcla de disolventes denominada eluyente y/o fase mvil.
La mezcla de compuestos a separar se disuelve en una pequea cantidad de disolvente y se coloca sobre el
adsorbente, en la parte superior de la columna, quedando adsorbida por el mismo. A continuacin se pasa un flujo de
eluyente a travs de la columna. Los compuestos constituyentes de la mezcla son arrastrados por el eluyente a su
paso, hacindoles avanzar a lo largo de la columna. Sin embargo, no todos los compuestos avanzan a la misma
velocidad, y esta es precisamente la clave de la cromatografa. Algunos compuestos se ven ms fuertemente
retenidos por el adsorbente (fase estacionaria) y por lo tanto avanzarn ms despacio. Por el contrario, otros apenas
son retenidos y avanzarn a mayor velocidad.

En general se dice que la separacin en la cromatografa se basa en la afinidad diferencial de los distintos
compuestos por la fase mvil o la fase estacionaria.
El orden aproximado de elucin de compuestos y de polaridad es aproximadamente el que se indica:

3.- MATERIALES:
Materiales
Algodn
Gotero
Matraz Erlenmeyer
Pera
Piceta
Pipeta
Soporte universal
Varilla de vidrio
Vaso de precipitado
Vidrio de reloj

Reactivos
Arena de mar
Espinaca
Hexano
Silica-gel

Equipo
Campana
Columna cromatogrfica

4.- PROCEDIMIENTO:
Se procedi de la siguiente manera:
La columna se la prepara primeramente colocando un trozo de algodn en la punta de la columna, luego una
pequea cantidad de arena de mar y al final una suspensin de silica-gel y hexano. Adems que la llave debe
estar cerrada, luego se acomoda todo.
Se habr la llave, para dejar que el hexano salga de la columna y as se asiente la misma.
Se vuelve a reutilizar y aadir ms hexeno a la columna, para asentar aun ms la columna.
Luego de que el hexeno en exceso ya haya bajado, se coloca un poco de arena y se siembra la muestra.
Por otra parte se prepara la muestra de espinaca moliendo la misma y filtrando el mismo.
Para que la muestra pase por la columna, se le aade ms hexeno, y ms cada vez que se acabe o no haya
exceso de hexeno.
Por ltimo se observa la columna y como baja el colorante.
5.- CALCULOS Y RESULTADOS:
6.- OBSERVACIONES:
Se observa que a lo largo de la prctica, la columna siempre debe de tener hexeno y mejor si es en exceso a lo
largo del mismo.
Se debe de tener cuidado al adicionar hexeno.
Se observ que no se termin totalmente la prctica.
La coloracin de la muestra, al bajar por la columna presento los colores, verde y amarillo verdoso.
7.- CONCLUSIONES:

 Sobre la columna y al decir que siempre debe de tener hexeno en su recorrido, se concluye que fue para que
no se seque y evitar as que la fase estacionaria se agriete. Adems principalmente para que as se mueva la
muestra a travs de la columna.
Se concluye que se debe de tener cuidado al adicionar la fase mvil (hexeno), para evitar que la fase
estacionaria deje de estar sedimentada o alineada.
Se dice que no se pudo terminar la prctica, ya que no se logr extraer el pigmento de espina. Solo se lleg a
observa la separacin de los colorantes dentro de la columna.
Adems otro motivo para no poder terminar la prctica, fue que la muestra se tardo mucho tiempo para
atravesar la columna. De aqu se concluye que la silica-gel es muy porosa y/o dificultosa para dejar que la
muestra atraviese por la columna.
De la columna se vio la separacin de colores verde y amarillo verdoso que son: La clorofila y las xantofilas.
8.- BIBLIOGRAFA:
http://es.wikipedia.org/wiki/Clorofila
http://es.wikipedia.org/wiki/Xantofila
http://www.botanica.cnba.uba.ar/Trabprac/Tp6/Pigmentos.htm
http://www.silicagel.com.mx/gel_de_silice.aspx
http://es.scribd.com/doc/41764305/Cromatografia-en-Columna